Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Динамика содержания витаминов А и Е в плазме крови больных до и после приема комплексных витаминных препаратов
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Оглавление диссертации Хашан, Имад :: 2003 :: Москва
Введение.
ГЛАВА 1. Обзор литературы.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
ГЛАВА 2. Материалы и методы.
2.1. Определение высвобождения витаминов А и Е из комплексных витаминных препаратов in vitro.
2.2. Количественное определение витаминов А и Е в плазме крови.
2.3. Характеристика испытуемых и схема исследования.
2.4. Обработка результатов.
ГЛАВА 3. Результаты исследования.
3.1. Динамика высвобождения витаминов А и Е из комплексных витаминных препаратов in vitro.
3.2. Методика количественного определения витаминов А и Е в плазме крови.
3.3.Определение концентрации витаминов А и Е в плазме крови у различных групп испытуемых.
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов.
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Хашан, Имад, автореферат
Актуальность темы. Витамин А оказывает влияние на барьерную функцию кожи, слизистых оболочек, проницаемость клеточных мембран и биосинтез их компонентов. Действие витамина А в этих случаях связывают с его причастностью к биосинтезу белка. Благодаря наличию двойных связей в молекуле витамин А может участвовать в окислительно-восстановительных реакциях (ОВР), поскольку он способен образовывать перекиси, которые в свою очередь повышают скорость окисления других соединений. Биологическая роль витамина Е заключается в предотвращении аутоокисления липидов биомембран и возможном снижении потребности в глутатионпероксидазе, необходимой для разрушения образующихся в клетке перекисей [85].
В настоящее время нет однозначных сведений о влиянии витаминов А и Е на процесс выздоровления при патологии печени и бронхолегочных болезнях. Однако очевидно, что указанные витамины влияя на процессы эпитализации должны оказывать существенное влияние на ход заживления и выздоровления при указанных патологиях [62].
Таким образом представляется актуальным изучение содержания данных витаминов при патологиях, связанных с поражением тканей органов, таких как поражения печени и бронхолегочные болезни, а также изменение их содержания на фоне курсового приема комплексных витаминных препаратов Центрум и Юникап-Ю.
Все выше изложенное определило цель и задачи настоящего исследования.
Цель исследования. Изучить содержание витаминов А и Е у больных с легочной и сердечно-сосудистой патологией до и после лечения комплексными витаминными препаратами Центрум и Юникап-Ю.
Задачи исследования:
1. Изучить динамику высвобождения витаминов А и Е из мультивитаминных препаратов (Центрум, Юникап) в тесте in vitro.
2. Разработать условия совместного количественного определения витаминов А и Е в плазме крови методом ВЭЖХ.
3. Определить содержание витаминов А и Е в плазме крови больных легочной и сердечно-сосудистой патологией после однократного приема препаратов Центрум и Юникап.
4. Определить содержание витаминов А и Е в плазме крови больных легочной и сердечно-сосудистой патологией после курсового приема препаратов Центрум и Юникап.
Научная новизна. В настоящей работе впервые изучено содержание витаминов А и Е в плазме крови у бронхолегочных больных и больных сердечно-сосудистой системы до и после приема комплексных витаминных препаратов.
Практическая значимость работы. Разработана методика для совместного хроматографического определения витаминов А и Е в плазме крови.
Изучено содержание витаминов А и Е в плазме крови больных легочной и сердечно-сосудистой патологией после однократного и курсового приема препаратов Центрум и Юникап, что позволило предложить рекомендации к проводимой лекарственной терапии данных lpynn больных.
Внедрение в практику. Методика определения витаминов А и Е в плазме крови внедрена в лаборатории фармакокинетики Института клинической фармакологии НЦ ЭГКЛС и ГШ JIC РАМН.
Апробация работы. Апробация работы проведена на научно-практической совместной конференции кафедры клинической фармакологии ММА им.И.М.Сеченова, ГШ JIC РАГ»1Н, лаборатории фармакокинетики ИКФ и ГКБ № 23.
Публикации по работе. По результатам выполненных исследований опубликовано 3 печатных работы.
На защиту выносятся:
1. Результаты высвобождения витаминов А и Е из препаратов Центрум и Юникап в тесте in vitro.
2. Методика совместного количественного определения витаминов А и Е в плазме крови.
3. Результаты по изучению содержания витаминов А и Е в плазме крови больных легочной и сердечно-сосудистой патологией после однократного и курсового приема препаратов Центрум и Юникап.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, четырех глав собственных исследований, выводов, списка литературы, приложений.
Заключение диссертационного исследования на тему "Динамика содержания витаминов А и Е в плазме крови больных до и после приема комплексных витаминных препаратов"
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. Разработана новая методика для совместного количественного определения витаминов А и Е в плазме крови, Которая является достаточно точной и воспроизводимой.
2. Изучение динамики высвобождения витаминов А и Е из препаратов Центрум и Юникап-Ю, Установлено, что через 1 час в тесте in vitro составтяет 57 (А) и 61 (Е) %.
3. Установлено, что у больных с сердечно-сосудистой патологией концентрация эндогенного витамина А значительно ниже установленной нормы. Минимальное содержание витамина А в плаше крови отмечено у лиц с недостаточностью кровообращения.
4. Проведенные исследования показали,что при приеме витамина А в дозе 5000 ME больными с сердечно-сосудистыми заболеваниями в составе препаратов Центрум и Юникап-Ю равновесная максимальная концентрация витаминов определялась через 3 часа после приема и не наблюдали статистически достоверных различий концентрации витаминов А и Е после приема препаратов Цгнтрум и Юникап-Ю.
5. Доказано,что содержание витамина Е у больных с заболеваниями сердечно-сосудистой системы находится в пределах нормы. После приема изучаемых препаратов (30 ME витамина Е) равновесная максимальная концентрация определялась через 3 часа после приема и статистически достоверно че различалась для изучаемых препарате^.
6. У больных с сердечно-сосудистыми нарушениями нарастание концентрации витамина Е после приема препарата происходит значиL тельно интенсивнее, чем у здоровых, а у бронхолегочных больных значительнее происходит нарастание концентрации витамина А.
7. У больных с легочными заболеваниями концентрация витамина А существенно ниже нормы, а концентрация витамина Е находится в её границах.
8. Установлено, что длительный прием многокомпонентных витаминных препаратов (Юникап-Ю и Центрум) с микроэлементами в составе обеспечивает достаточную терапевтическую концентрацию витаминов А и Е в плазме крови.
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2003 года, Хашан, Имад
1. Атрощенко Е.С. Влияние альфа-токоферола на микроциркуляцию у больных стабильной стенокардией. Здравоохранение - 1996 -№9.- С.9-10.
2. Березов Т Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия: Учебник/Под ред. Акад. РАМН СССР С.С.Дебова. 2-е изд., М.:. Медицина, 1990.-528 с.
3. Витамины и минеральные вещества: Полный медицинский справочник 2-изд. - СПб.: ИК "Комплект", 1996. - 503 с.
4. Горожанская Э.Г.; Свиридова С П.; Михаевич О Д. Влияние токоферола на процессы перекисного окисления липидов у онкологических больных. 2 Рос. нац. kohi р. "Человек и лекарство".-Москва,- 10-15 апр.- 1995.-С.219.
5. Диагностика и лечение внутренних болезней. Под ред.Ф.И.Комарова. М.: "Медицина", 1992 г. - Том 1-3.
6. Каркищенко Н.Н. Фармакологические основы терапии. М., IMP-Медицина, 1996. -С. 150-151; 172-177.
7. Кудряшов Б.А. Биологические основы учения о витаминах. "Советская наука". - М.: 1948 г. - 544 с.
8. Лутцева А.И., Маслов Л.Г., Евтушенко Н.С. Анализ и стандартизация жирорастворимых витаминов. //Фармация. 1999. - № 5. -С.37-39.
9. Лямина А.Л.; Кобяков И.Г.; Ткаченко Т.А. Применение ретинола пальмита в дерматологии. -Тр.Астрах, гос. мед. акад. 1996. -С. 142-144.
10. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 1997. - Том 1-2.
11. Методы оценки витаминной обеспеченности населения. /В.Б. Спиричев, В.М.Коденцова, О.А.вржесинская и др. // учебно-методическое пособие, Москва. 2001. - 68с.
12. Ноздрин В.И. Морфогенетические свойства ретиноидов основа механизма их действия. (Тез. докл.) 3 Конгр. Междунар. ассоц. морфологов, Тверь. 20-21 июня. 1996. Морфология. - С.76.
13. Паранич А.В.; Чайкина Л.А.; Трохименко А.Г. О влиянии слабого СВЧ-излучения на содержание жирорастворимых витаминов А и Е в тканях крыс. Биофизика. 1996. - Выпуск № 2. - С. 517-519.
14. Пентюк И.О.; Остапчук O.I.; Сташславчук М.А.; 1стошин В.М. Вплив недостатносп вггамшв A i Е та додаткового введения ретинолу, токоферолу, селену та дибунолу на ульцерогенну дно ор-тофену, напроксену та вдометацину. Лжи. 1998. №4. - С. 12-15.
15. Плецитый К.Д. Витамины и иммунитет: витамин Е. Вопр. питания. 1997. №4 С.9-12.
16. Погашало А.В.; Шашкина М.Я.; Горожанская Э.С. Показатели ан-тиоксидантных систем при лечении бронхиальной астмы у детей иммуномодуляторами. 4 Рос. нац. конгр. "Человек и лекарство". -Москва.-8-12 апр., 1997.-С.229.
17. Реестр лекарственных средств России. Москва 2001. Том I.
18. Руководство по гастроэнтерологии. Под ред. Ф.И.Комарова, А.Л.Гребенева. М.: "Медицина", 1996 г. - Тем 3. - 720 с.
19. Савенок В.У.; Огнерубов Н А. Значение витамина А в комплексном лечении рака слизистой оболочки полости рта. Нов. з онкол. 1995. №1.-С.59-61.
20. Тищенко A.JL; Хадад С.М.; Халаф Ф.С. Дефицит витамина А у больных псориазом, злоупотребляющих алкоголем; особенности клиники и лечения. Вестн. дерматол. и венерол. 1997. №5. С.43-45.
21. Beisel Wilian R. Hisorical overview of nutrition and immunity, with emptaminhas on vitamin A. //J.Nutr.Immunol. 1995.-№!-2.-P. 1-16.
22. Bendich A., and Langseth L. Safety of vitamin A. //Am.J.C'n.Nutr., 1989.-49:358-371.
23. Botterweck.AA; van-den-Brandt.PA; Goldbohm.RA. Vitamins, carotenoids, dietary fiber, and the risk of gastric carcinoma: results from a prospective study after 6.3 years of follow-up Cancer. - 2000. №2. -88(4).-P.737-748.
24. Brown M.L. (Ed.): Present Knowledge in Nutrition, 6th ed. Washington, DC, International Life Sciences Institute, Nutrition Foundation, 1990.
25. Bunyan I., McHale Г , Green J. The vitamin E activity of a-tocopherylquinion and a-tocopherylhydroquinone in the rat. // Brit.J.Nutr. 1963. - Vol.17.-№ 3.-P.391-398.
26. Burke J.R.; Morgenlander J.C. Update on Alzheimer's disease. Promising advances in detection and treatment. Postgrad.Med. 1999 Oct 15, 106(5). P 85-86, 89-90, 93-94.
27. Carbajal A.; Nunez C.; Moreiras O. Energy intake as a determinant factor of vitamin status in healthy young women. Int.J.Vitam.Nutr.Res. 1996; 66(3). P.227-231.
28. Carotenoids as colorants and vitamin A precursors. Technological and nutritional applications. //Edited by J.C.Bauernfeind. New York.: Academic Press, 1981 - P.883-918.
29. Clinical detlopmental plan: vitamin A. //J.Cell.Biocyem. 1996 -P.269-307.
30. Coskun Turgay. Blinding and immunocompromising malnutrition: Vitamin A deficiency. Int. Child Health. 1998. №1. -P.73-84.
31. Craft N.E., Brown E.D. Smith J.C. Effects of storage and handling conditions on concentrations of individual carotenoids, retinol, and tocopherol in plasma. Clin.Chem., 1988. 34:44-48.
32. Csalany A.s., Draper H.H., Shan S.N. Conversation of L-tocopherol-C14 to tocophery-p-quinone in vivo. //Arch.biochem. and Biophys. -1962. -Vol.98.-Xal. P. 142-147.
33. Curran FJ; Sattar N; Talwar D; Baxter JN; Imrie CW. Relationship of carotenoid and vitamins A and E with the acute inflammatory response in acute pancreatitis. Br.J.Surg. 2000. №3. - 87(3) - P.301-305.
34. Daly M.P. Diagnosis and management of Alzheimer disease. J.Am.Board.Fam.Pract. 1999 Sep-Oct; 12(5). P. 375-385.
35. De la Fuente M.; Victor V.M. Anti-oxidants as modulators of immune function. Immunol.Cell.Biol. 2000 Feb; 78(1). P.49-54.
36. Driskell W.J., Hewett J.S., Bashor M.M. Evaluation of a direct fluorometric method for determination of serum retinol. //Clin.Chem., 1986. 32:867-869.
37. Driskell W.J., Lackey A.D., Hewett J.S. Stability of vitamin A ia frozen sera. //Clin.Chem., 1985. 31:871-872.
38. Edwin E.E. Studies of Vitamin E: The determination of tocoferolos in animal tissues. //Biochem.J.-1957. Vol.75. - P.450-456.
39. Edwin E E., Diplock A.L., Bunian I. Studies of Vitamin E. The distribution of vitamin E in rat and effect of a-tocopherol and dietary celenium on ubiquinone and ubichromenol in tissues. //Ibid.-1961.-Vol. 79.-Ш.-Р.91-98.
40. Eggit P.W.R., Norris F.W. The chemical asthiation of vitamin E activity in cereal products. IV. Tocoferol. //Sci.Food.Agr. - 1956. -Vol.7.-№7.-P.493-511.
41. Emilien G.; Beyreuther K.; Masters C.L.; Maloteaux J.M. Prospects for pharmacological intervention in Alzheimer disease. Arch.Neurol. 2000 Apr; 57(4).-P.454-459.
42. Fariss M. Oxygen Toxicity: Unique Cytoprotective, Properties of Vitamin E Succinate in Hepatocytes. Free Radical. Biol. a. Med. 1990. Vol.9.-P.333-343.
43. Floreani A.; Baragiotta A. Plasma antioxidant levels in chronic cholestatic liver diseases. Aliment.Pharmacol.Ther. 2000 Mar; 14(3). -P.353-358.
44. Frei B. On the role of vitamin С and other antioxidants in atherogenesis and vascular dysfunction. Proc.Soc.Exp.Biol.Med. 1999 Dec; 222(3).-P. 196-204.
45. Gamez C.; Artacho R.; Ruiz Lopez M.D.; Puerta A.; Lopez M.C. Nutritional status of vitamin A and E in institutionalized elderly people in Granada (Spain). J.Nutr.Sci.Vitaminol. Tokyo. 1996 Oct; 42(5). -P.397-405.
46. Ha Т.К.; Sattar N,; Talwar D.; Cooney J.; Simpson K.; O'Reilly D.S.; Lean M.E. Abnormal antioxidant vitamin and carotenoid status in chronic renal failure. QJM. 1996 Oct; 89(10). P.765-769.
47. Han S.N.; Meydani S.N. Vitamin E and infectious diseases in the aged. Proc.Nutr.Soc. 1999 Aug; 58(3). P.697-705.
48. Jaarin K.; Renuvathani M.; Nafeeza M.I.; Gapor M.T. Comparative effect of palm vitamin E and ranitidine on the healing of ethanol-induced gastric lesions in rats. Int.J.Exp.Pathol. 1999 Oct; 80(5). P. -259-263.
49. Jacobson.DM; Berg.R; Wall.M; Digre.KB; Corbett.JJ; Ellefson.RD. Serum vitamin A concentration is elevated in idiopathic intracranial hypertension. Neurology. 1999. №9. - 53(5). - P. 1114-1118.
50. Kalayci O.; Besler T. Serum levels of antioxidant vitamins (alpha tocopherol, beta carotene, and ascorbic acid) in children with bronchial asthma. Turk.J.Pediatr. 2000 Jan-Mar; 42( 1). P. 17-21.
51. Katan M.B.; Zock P L. Antioxidant vitamins and cardiovascular disease editorial; comment. Pharmacol Res. 1999 Sep; 40(3): 209210. Comment on: Pharmacol Res 1999 Sep;40(3). P.227-238.
52. Keaney J.F. Jr; Simon D.I.; Freedman J.E. Vitamin E and vascular homeostasis: implications for atherosclerosis. FASEB J. 1999 Jun; 13(9). P. 965-975.
53. Keusch Gerald T. Symposium on vitamin A and immunity. Salient points and directions for future research. J. Nutr. Immunol. 1995. №12. P.133-143
54. Khokha A.; Voronov P.; Buko V. Effect of retinol acetate on testosteron concentration in health volunteers and chronic alcoholics. Abstr. 6th Congr. Eur. Soc. Biomed. Res. Alcohol., Stockholm. 28 June-1 July. 1997,-P.374.
55. Kinney J.M., Jjeejeebhoy K.N., Hill G.L. Nutrition and metabolism in patient care. Philadelphia W.B. Saunders Co., 1988.
56. Komindr S.; Thirawitayakom J. Nutritional status in chronic hemodialysis patients. Biomed.Environ.Sci. 1996 Sep; 9(2-3). P.256-262.
57. Krokha A., Voronov P., Buko V. Effect of retinol acetate on testosteron conservation n health volunteers and chronic alcoholics. //Abstr. 6th Congr. Eur. Soc. Biomed. Res., Stockholm.-1997. 28 June-1 Jule.-P.374.
58. Kurugol Z.; Egemen A. Vitamin A deficiency in healthy children aged 6-59 months in Izmir Province of Turkey. Paediatr.Perinat.Epidemiol. 2000.-14(1). - P.64.
59. Lee B.L., Chua S C., Ong H.Y. High-performance liquid chromatographic method for routine determination of vitamin A and vitamin E and (3-carotene in plasma. //J.Chromatogr., 1992. -591:4147.
60. Lechmann J., Rao D.D., Canary J.J. V'tamin E and relationships among tocopherols in human plasma, platelets, lymphocytes, red blood cells. //Am.J.Clin.Nutr., 1988.-47:470-474.
61. Lockitch G., Halstead A C., Wadsworth L. Age- and sex-specific pediatric reference intervals and correlations for zinc, copper, selenium, iron, vitamins A and E and related proteins. //Clin.Chem. 1988. 34:1625-1628.
62. MacCrehan W.A., Schonberger E. determination of retinol. a-tocopherol, and p-carotene in serum by liquid chromatography with absorbance and electrochemical detection. //Clin.Chem., 1987. -33:1585-1592.
63. Marchioli R. Antioxidant vitamins and prevention of cardiovascular disease: laboratory, epidemiological and clinical trial data see comments. Comment in: Pharmacol Res 1999 Sep;40(3). P.207-208. Comment in: Pharmacol Res 1999 Sep;40(3). P.209-210.
64. Maxwell Simon R.J.; Lip Gregory Y.H. Free radicals and antioxidants in cardiovascular disease. //Brit. J. Clin. Pharmacol. 1997. №4. P. 307317.
65. Moriguchi S.; Muraga M. Vitamin E and immunity. Vitam.Horm. 2000; 59. P. 305-336.
66. Moyad VI.A.; Brumfield S.K. Vitamin E, alpha- and gamma-tocopherol, and prostate cancer. Semin.Urol.Oncol. 1999 May; 17(2). P. 85-90.
67. Nierenberg D.W. Nann S.L. A method for determining concentrations of retinol. tocopherol, and five carotenoids in human plasma and tissue samples. //Am.J.Clin.Nutr., 1992.-56:417-426.
68. Paiva S.A.; Godoy I.; Vannucchi H. Assessment of vitamin A status in chronic obstructive pulmonary disease patients and healthy smokers. Am.J.Clin.Nutr. 1996 Dec; 64(6). P.928-934.
69. Palace VP; Khaper N; Qin Q; Singal PK. Antioxidant potentials of vitamin A and carotenoids and their relevance to heart disease. Free.Radic.Biol.Med. 1999. №3. - 26(5-6). - P. 746-761.
70. Pasquali D.; Thaller С : Eichele G. Abnormal level of retinoic acid in prostate cancer tissues. J.Clin.Endocrinol.ivietab. 1996 Jun: 81(6). -P.2186-219i
71. Pryor W.A. Vitamin E and heart disease, basic science to clinical intervention rials. Free.Radic.Biol.Med. 2000 Jan 1: 28(1). P. 141164.
72. R-cciarelli R;. Tasinato A.: Clement S.; Ozer N.K.; Boscoboinik D.; Az/i A. Alpha-Tocophcrot specifically inactivates cellular protein kinase С alpha by chang ig its phosphory lation state. Biochem.J. 1998 Aug 15; 334 ( Pt 1) P.243-249.
73. Koreani A , baragiotta A., Marlines D. Plasma antioxidant levels in chronic choleststic liver diseases. //Aliment. Pharmacol. Ther. 2000. -Mar. - 14(3). -P.353-358.
74. Satomura Y., Kimura M. Itokawa Y. Simultaneous determination of retinol and tocopherols by high-performance liquid chromatography. //J.Chromatogr., 1992.-625:372-376.
75. Semba Richard D. Linking vitamin A and childnood immunizations. // J. Nuttr. Immunol. 1995. - №1-2. - P.87-109.
76. Sethi R.: Takeda N.: Nagano M.; Dhalla N.S. Beneficial effects of vitamin E treatment in acute myocardi?' infarction. J,Cardiovasc.Pharmacol.Ther. 2000 Jan: 5(1). P. 51-58.
77. Shils M.E., Olson J.A. Modern Nutrition in health and disease, 8th ed. Philadelphia, Lea& Febiger, 1994.
78. Steiner M. Vitamin E, a modifier of platelet function: rationale and use in cardiovascular and cerebrovascular disease. Nutr.Rev. 1999 Oct; 57(10). 306-309.
79. Swain R.A.; Kaplan Machlis B. Therapeutic uses of vitamin E in prevention of atherosclerosis. Altern.Med.Rev. 1999 Dec; 4(6). 414423.
80. Traber Maret G.; Sies Helmut. Vitamin E in humans: Demand ana delivery. Annu. Rev. Nu:> Palo Alto (Calif). - 1996. - Vol.16. -P.321-347.
81. Tuitoek P.J.; Lakey J.R ; Rajotte R.V.; Basu Т.К. Strain variation ir, vitamin A (retinol) status of streptozotocin-induced diabetic rats. Int.J.Vitam.Nutr.Res. 1996; 66(2). P. 101-105.
82. Underwood B.A. Methods for assessment of vitamin A status. //J.Nutr., 1990. 120(11S):1459-1463.
83. Vatassery G.T.; Krezowski A.M. Vitamin E concentrations in human blood plasma and platelets. //Am. J. Clin.Nutr, 1983. 37:1020-1024.
84. Vatassery G.T.; Bauer Т.; Dysken M. High doses of vitamin E in the treatment of disorders of the central nervous system in the aged. Am.J.Clin.Nutr. 1999 Nov; 70(5). P.793-801.
85. Velacquez-Melendez Gustavo; Roncada Maria Josle; Toporovski Julio; Okani Eliza Т.; Wilson Donald. Relationship between acute diarrhoea and low plasma levels of vitamin A and retinol binding protein. Rev. Inst. med. trop. Sao Paulo. 1996. №5. P.365-369.
86. Williams.AW; Boileau.TW; Zhou.JR; Clmton.SK; Erdman.JW Jr. Beta-carotene modulates human prostate cancer cell growth and may undergo intracellular metabolism to retinol.- J.Nutr. 2000,- 130(4). -P.728-732.
87. Yamada K.; Nakajima Y.; Ikegami S. Elevation of plasma retinol binding protein concentration in experimental acute renal failure. Abstr. 2nd Int. Congr. Vitamins and Biofact. Life Sci., San Diego. Calif., Febr. 16-19, BioFactors. 1995. P.55-56.
88. Zima Т.; Janebova M.; Nemecek К . Bartova V. Retinol and alpha-tocopherol in hemodialysis patients. Ren. Fail 1998. - №5 - 20(3). -P.505-512.