Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Биофармацевтические аспекты создания лекарственных форм противоопухолевых препаратов

I la прапах рукописи

Оборотов« Наталии Александровна

РГБ ОД

2 7 фес гт

ПИОФЛРМАПЕВТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СОЗДАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ

15.00.01 - технология лекарств и оргпчмзацнл фармацевтического дел?. 14.00.14 - онкология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации ла соискание ученой степени ' доктора фармацевтических наук

Москпа - 2002

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте экспериме тальиой диагностики и терапии опухолей Российского онкологического на> ного центра им. Н.Н. Блохнна Российской Академии медицинских наук

Научные консультанты:

Доктор фармацевтических наук, профессор П.В. Лопатин

Доктор медицинских наук, профессор АЛО. Барышников

Официальные оппоненты:

Доктор фармацевтических наук, профессор С.А. Валевко

Доктор фармацевтических наук, профессор В.А. Ссверцев

Доктор биологических паук JI.A. Островская

Ведущая организация:

Санкт-Петербургская химико-фармацевтическая академия

Защита состоится « а » ФаhСША,_2002 г. в « /л час па

ссдании Диссертационного Совета Д 208.040.09 при Московской медицине) академии им. U.M. Сеченова по адресу: Москва, Никитский бульвар, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в Фундаментальной библпот-Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова по адресу: Москва, боиская площадь, 1.

Автореферат разослан

Ученый секретарь Диссертационного Совета Д 208.040.09,

канд. фармацевтических наук, доцент

Н.П. Садчиков;

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования. Лекарственная терапия опухолей является актуальным разделом современной медицины. В настоящее время около 100 противоопухолевых препаратов вошли в клиническую практику. Учитывая :ложный механизм взаимоотношений в системе «лекарство - организм - опу-коль», очевидно, что не может быть универсального средства, дающего лечебный эффект при всех злокачественных новообразованиях. Поэтому продолжается поиск оригинальных лекарственных средств, который базируется на проведении химических, биологических, фармацевтических и клинических иссле-1ований.

Создание противоопухолевого препарата - сложная мпогофакторная за-1,ача, требующая знания и учета особенностей фармакологического действия входного лекарственного вещества (ЛВ), его взаимодействия с физиологиче-:кими субстратами организма, тропности к отдельным тканям и органам. От-утствие достаточной избирательности действия цитостатических препаратов гриводит к серьезным осложнениям. При этом высокая неспецифическая био-¡огнческая активность ЛВ часто лимитирует его применение в клинике из-за [еобратимости побочных эффектов. Проявления токсичности способны стать ритерием отбора перспективных лекарственных соединений, если не удается одобрать безопасные композиции, способ и режимы введения готовых лекар-твенных форм (ЛФ). Поэтому разработка оптимальной ЛФ отобранного в экс-ерименте активного вещества составляет важное звено в цепи комплексных сследований по созданию противоопухолевого препарата. Изучение влияния армацевтических факторов на терапевтическую эффективность ЛФ противо-пухолевых препаратов - одно из важнейших направлений биофармацевтиче-<их исследований.

Основным направлением в развитии современной фармацевтической зуки является совершенствование избирательности действия биологически ак-1вных веществ, в том числе и противоопухолевых соединений. На службу армацевтической технологии привлекается ряд дисциплин: химия, биофизика,

микробиология и т.п. При этом технологические разработки ведутся как в о< ласти создания новых видов транспортных систем доставки препарата к тер; певтическим мишеням, так и в области совершенствования традиционных, ни роко применяемых ЛФ. Сложность проблемы обусловлена высокими требов ниями, предъявляемыми на всех этапах создания лекарства, к стандартизащ технологических процессов и качеству готовой продукции с целью произволе ва высокоэффективных и безопасных лекарственных препаратов.

Вышеизложенное подчеркивает особую важность и актуальность созд ния рациональных ЛФ, позволяющих наиболее полно реализовать возможное противоопухолевых ЛВ, как в доклинических и клинических исследованш так и в процессе широкой медицинской практики.

Цель работы. Теоретическое и экспериментальное обоснование разр ботки и стандартизации рациональных лекарственных форм на основе орш нальных отечественных противоопухолевых веществ и воспроизведенных с} станций.

Задачи исследования

1. Сформулировать методологические и методические подходы к раз] ботке, а также выбору критериев и методов оценки качества инъекционных .1 растворимых и нерастворимых в воде противоопухолевых субстанций.

2. На основании комплексных биофармацевтических, технологическ химико-фармацевтических и фармакокинетических исследований разработ рациональные ЛФ противоопухолевых препаратов из классов комплексных единений металлов, производных хлорэтиламина, производных нитрозоалк мочевины и антрацендиона.

3. Выбрать химико-фармацевтические и биологические критерии, а та1 параметры оценки качества и биодоступности противоопухолевых субстани изучить их химическую и фармакологическую совместимость со вспомогатс ными веществами в ЛФ.

4. Разработать алгоритмы создания инъекционных систем доставки в 1 веносное русло водонерастворимых противоопухолевых ЛВ в виде липосом

5. Обосновать состав и технологию созданных ЛФ и разработать нормативную документацию на их производство и контроль качества.

6. Получить фармацевтические, биологические и химико-аналитические lamibie для оценки созданных ЛФ и последовательной передачи их на докли-шческие, клинические исследования, а также для внедрения готовых препара-ов в производство.

Научная новнзил исследования

Обобщены и проанализированы результаты поиска отечественных проти-¡оопухолевых соединений; выявлены закономерности и сформулированы [ринципы создания рациональных ЛФ новых оригинальных или воспроизве-(енных противоопухолевых ЛВ из классов:

• комплексных соединений металлов (циклоплатам, сетремед, терафтал);

• ди(2-хлорэтил)амина на основе аминокислот (сарколизин, цифелин);

• ди(2-хлорэтил)амина на основе стероидных гормонов (тестифенон, корифен и цитэстрол ацетат);

• ди(2-хлорзтнл)амина на основе нитрозомочевины (бнсхлорэтилннтро-омочевина - БХНМ);

• антрацендиона (митоксантрон).

Теоретически и экспериментально обоснованы составы лиофилизирован-ых ЛФ для внутривенного введения противоопухолевых субстанций: цикло-латама, терафтала, сетремеда, сарколизина, БХНМ и митоксантрона.

По критериям, оценивающим терапевтическую эффективность и токсиче-кое действие, установлена различная биодоступность нерастворимых в воде ротивоопухолевых ЛВ производных хлорэтиламинов: тестифенона, кортифе-а, цитэстрол ацетата и цифелина в зависимости от вида и состава применяемой [Ф. Экспериментально in vivo обоснованы неэффективность применения нутрь липофильных субстанций в виде твердой ЛФ и преимущество примене-ия их в виде масляных растворов.

Определена биодоступность in vitro (тестом «Растворение» в 0,2 М рае-зоре хлористоводородной кислоты) и in vivo (на крысах по фармакокинетиче-

ским и фармакодинамическим параметрам) таблеток цифелина двух составов ( разрыхлителем - аэросилом (I) и солюбилнзатором - лаурилсульфатом натри) (II). Установлено, что при отсутствии существенной разницы в скорости эли мннации, скорость всасывания и площадь под кривой А1ГС цифелина с натри) лаурилсульфатом выше на 48 %, чем с аэросилом. Показано, что в результата увеличения биологической доступности цифелина из состава II почти в 6 ра возросла его токсичность, но противоопухолевое действие осталось равнознач ным таблеткам состава I.

Показана возможность солюбилизации гидрофобных субстанций тести фенона, кортифена, цитэстрол ацетата, БХНМ и цифелина включением их бислой липидной мембраны липосом. При этом липосомальная форма способн защитить молекулу гормоноцнтостатика кортифена от разрушения, которое нг блюдается при приеме внутрь его масляных растворов.

Впервые разработаны технологии изготовления и методы стандартизаци вышеуказанных лекарственных форм, которые включены в нормативную док; ментацию на их производство и контроль качества.

Новизна полученных результатов подтверждается 6 патентами РФ.

Практическая значимость работы

В результате проведения комплексных исследований разработаны и н ходятся на разных уровнях внедрения следующие лекарственные формы:

• «Сарколизин лиофилизат для приготовления раствора для инъекщ 0,02 г» (ФСП 42-0257-00), защищен патентом РФ (№ 2060031, 1996) и рекоме дован к медицинскому применению.

• «Циклоплатам лиофилизированный 0,05 г, 0,10 г и 0,15 г для инъекци (ВФС 42-3682-00), защищен патентом РФ (№ 21280442, 1999) и рекомендов к медицинскому применению.

• «Митоксантрон лиофилизат для приготовления раствора для инъекц 0,02 г» (ФСП 42-1261-01), защищен патентом РФ (№ 2093158, 1997) и рекоме дован к медицинскому применению.

• «Терафтал лиофилнзат для приготовления раствора для инъекций ,05 г» (ФСП 42-1681-01), проходит II фазу клинических испытаний.

• «Сетремед лиофилизированный 0,10 г для инъекций» (проект ФСП), роходит И фазу клинических испытаний.

• «БХНМ лиофилнзат для приготовления раствора для инъекций 0,02 г» фоект ФСП), защищена патентом РФ (№ 2066181, 1996), находится на докли-кческих исследованиях.

На перечисленные ЛФ разработаны технологические регламенты и фар-акопейные статьи предприятия, которые обеспечивают выпуск стандартных эепаратов.

Разработка новых инъекционных липосомальных форм водонераствори-ых субстанций тестнфенона, кортифена, цпфеляна и БХНМ позволила начать с доклинические испытания.

Апробация работы. Материалы исследований представлены на:

Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» Москва, 1996-1998); NCI-EORTC Symposium on New Drugs in Cancer Therapy imsterdam, 1996 и 1998); 1-ом съезде онкологов стран СНГ (Москва, 1996); ternational Congress on Anti-Cancer Treatment (Paris, 1996 и 1997); Central iropean Symposium on Pharmaceutical Technology (Portoroz, Slovenia, 1997 и •99); Конференции «Современные тенденции развития лекарственной терапии [ухолей», (Москва, 1997); 2-nd World Meeting on Pharmaceutics, opharmaceutics and Pharmaceutical Technology (Paris, 1998); 5-th European 'mposium on Controlled Drug Delivery (Noordwijk aan Zee, The Netherlands, 98); 4-th European Congress of Phamiaccutical Sciences (Milan, 1998); 9-th iernational Pharmaceutics Technology Symposium (Ankara, 1998); Simpozion tional "Posibilitati actuale in chimioterapia cancerului" (Chisinau, Moldova, 1998); -ой региональной конференции no фармации, фармакологии и подготовке дров, (Пятигорск, 1999); 5-th Congress of the European Federation of armaceutical Sciences (Jerusalem, 1999); World Congress of Pharmacy and armaceutical Sciences'99 (Barcelona, 1999); Международной конференции

"Фармация в XXI веке: инновации и традиции" (Санкт-Петербург, 1999); Symposium on Lipid and Surfactant Dispersed Systems Fundamentals, Design, Formulation, Production (Moscow, 1999); 3rd World Meeting on Pharmaceutics, Biopharmaceutics and Pharmaceutical Technology (Berlin, 2000); 2-ом съезде онкологов стран СНГ, с участием ученых Европы, Америки и Азии, (Киев, 2000); FIP Congress (Vienna, 2000); 10-th International Pharmaceutical Technolog) Symposium (Istambul, 2000); Symposium "New Trends in Polymers for Oral anc Parenteral Administration» (Paris, 2001); 3rd International Symposium or Pharmaceutical Chemistry (Istambul, 2001).

Работа апробирована на межлабораторной конференции Российскоп онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН и межкафедрально! конференции фармацевтического факультета Московской медицинско! академии им. И.М. Сеченова (Москва, 2001).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 145 научны; работ и получено 6 патентов.

Связь с научно-исследовательскими работами РОНЦ им. Н.Н. Бло хина РАМН и проблемным планом фармацевтических наук. Диссертацион пая работа является частью НИР РОНЦ РАМН по проблеме "Злокачественны образования" и связана с планом РАМН по теме: "Создание лекарственны форм противоопухолевых препаратов и нормативно-технической документаци на их производство", государственный регистрационный номер 01.9.60007291

Основные положения, выносимые па защиту

Комплекс критериев экспериментально-теоретического обоснован]-вида, состава, технологии и оценки качества лиофилизированнь инъекционных ЛФ противоопухолевых веществ из классов комплекснь соединений металлов, хлорэтиламинов, нитрозоалкилмочевиш антрацендионов.

Унифицированный подход к стандартизации лиофилизированнь лекарственных форм для внутривенного введения противоопухолевь препаратов.

Теоретическое и экспериментальное обоснование влияния фармацевтических факторов на реализацию биологического действия исследуемых противоопухолевых препаратов.

Методологические подходы к созданию липосомальпых лекарственных форм для внутривенного введения гидрофобных противоопухолевых препаратов.

Технология производства лнофилизированных лекарственных форм для внутривенного введения противоопухолевых препаратов: циклоплатама, герафтала, сетремеда, сарколизина, БХНМ и митоксантрона.

Объем и структура диссертации. Диссертация содержит_страниц

машинописного текста л состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 8 глав, отражающих результаты собственных жспериментальных исследований и их обсуждение, общих выводов и списка штературы, включающего 5/ß источников. Работа иллюстрирована ри-:ункамн и б / таблицами.

1. ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЪЕКТОВ И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования служили новые отечественные противоопухо-[евые соединения, отобранные в отделе экспериментальной химиотерапии ШИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей (НИИ ЭДиТО) 'ОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, а также вспомогательные фармацевтические 1ещества. Качество всех соединений соответствовало действующей норматив-юй документации. В исследовании использованы химико-аналитические, зармацевтические, химиотерапевтические, фармакокинетические и оксикологнческие методики, которые выполнялись совместно с отделом кспериментальной химиотерапии (зав.- д. м. п., проф. Т.К. Герасимова) и абораториями химико-фармацевтического анализа (зав.- к. х. н. Б.С Кикоть), )армакокннетикн (зав.- к. б. н. Н.И. Зимакова) и токсикологии (зав.- д. б. н. I.M. Михайлова) НИИ ЭДиТО РОНЦ РАМН.

Для определения активных ЛВ и продуктов их деградации разработаны спектрофотометрические и хроматографические методики, учитывающие особенности химической структуры и функциональные группы, отвечающие зг противоопухолевый эффект. Относительная ошибка разработанных методог количественного определения ЛВ в разработанных ЛФ не превышает 2 %.

Определение биодоступности ЛФ проводили следующими методами:

а) измерение зависимости между концентрацией и периодом действи: или скоростью выделения ЛВ из организма с биологическими жидкостям! (абсолютная биодоступность);

б) сравнительное измерение фармакодинамических реакций н введенный препарат (относительная биодоступность). Доступность ЛВ в мест действия, т.е. в опухолевой ткани, определяли по противоопухолевому эффект исследуемой ЛФ, который оценивали по критериям: торможение роста опухол (TPО, %); увеличение продолжительности жизни (УПЖ, %); излечение и гибел животных от токсичности.

2. РАЗРАБОТКА ИНЪЕКЦИОННЫХ РАСТВОРОВ ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ

Сложный механизм и низкая избирательность противоопухолево! действия, высокая токсичность исследуемых субстанций требовали создан! ЛФ, обеспечивающих точность дозировки, стандартную биодоступность безопасность, заданные сроки хранения и удобство применения. Д выполнения поставленной цели изучили физико-химические свойст субстанций и возможные пути их деструкции в водной среде. С учете полученных данных провели исследования по выбору оптимальных состав инъекционной ЛФ, определили теоретические и практические подходы к стабилизации; изучили химическую и биологическую совместимость активш субстанций со вспомогательными ингредиентами и провери терапевтическую эффективность при сравнении различных составов ЛФ.

2.1. СОЗДАНИЕ ИНЪЕКЦИОННЫХ РАСТВОРОВ ЦИКЛОПЛАТАМА, ТЕРАФТАЛА И СЕТРЕМЕДЛ, ПРОИЗВОДНЫХ КОМПЛЕКСНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

МЕТАЛЛОВ

Свойства комплексных соединений металлов определяются двумя факторами: пространственным расположением заместителей вокруг иона металла и характером связи отдельных заместителей с этим ионом (прочность связи, степень ее ионности или ковалентности). Большой объем современных исследований, проводимых в области комплексных соединений металлов, посвящен созданию новых противоопухолевых препаратов, отличающихся от :уществующих цитостатиков спектром и механизмом действия. Наиболее интересными отечественными препаратами платины, меди и кобальта, этобраннымн в эксперименте, являются циклоплатам, сетремед и терафтал.

Циклоплатпм

Циклоплатам, 5(-)-малатоаммин(циклопентиламин)платина(П), не явля-зтся индивидуальным комплексным соединением и представляет собой слож-1ую систему изомерных комплексов, содержащих как бидентатный (хелатный I мостиковый), так и монодентатнын анион яблочной кислоты. Следует отметить, что попытки выделения отдельных форм для изучения их биологической наивности лишены смысла, поскольку в водных растворах между всеми формами достаточно быстро устанавливается динамическое равновесие. Главной фичиной отбора при скрининге лабильного циклоплатама, а не его инертных и •ораздо более удобных для аналитического контроля аналогов, была высокая фотивоопухолевая активность циклоплатама, которая явно коррелировала с :го лабильностью. Необходимо подчеркнуть, что образование аква-комплексов, шсто рассматриваемое в литературе как "деградация", является необходимой и :корость-лнмитирующей стадией при взаимодействии комплексов платины(И) (наминового типа с молекулой-мишеныо ДНК. Следовательно, всс многочис-!енные аква-комплексы, существующие в водных растворах циклоплатама, яв-[яются именно теми реакциопиоспособиыми формами, которые непосредст-

венно реагируют с ДНК, образуя внутринитевые сшивки по И7 смежных гуат нов. Таким образом, хорошая растворимость субстанции в воде, широки спектр и высокая противоопухолевая активность, отсутствие нефротоксичност и перекрестной резистентности с известными препаратами платины и некотс рыми цитотостатиками других групп позволило считать циклоплатам перспе! тивным новым платиновым препаратом второго поколения.

Циклоплатам легко растворяется в воде. В процессе хранения ег раствора появляется увеличение интенсивности окраски и оптическс плотности в области 328 нм, что связано как с протеканием акватационнь процессов, так и с постепенным окислением препарата. Визуально это мо>к1 наблюдать по появлению на 4-е сутки в растворе мути и коричневато-чернс окраски, которая при длительном стоянии раствора приобретает интенсивнь черный цвет. При этом значение рН раствора осталось в пределах 4,00-4,1 независимо от времени и температуры хранения. Это можно объясни буферной емкостью, которой обладают водные растворы циклоплатаг вследствие присутствия комплексов с концевыми свободными протонированными карбоксильными группами малата.

Так как помимо акватационных процессов специфичной для циклоплат ма является его способность к окислению кислородом воздуха, изучили вс можность стабилизации растворов антиоксидантами, большинство из котор! оказалось неприменимо из-за химического взаимодействия с комплексами ш тины. Стабилизации циклоплатама в водных растворах способствовала сое купность следующих основных условий: отсутствие прямого яркого света, I изменность величины рН, низкая температура (5±2 °С) хранения раствора и с сутствие окислителей. Проведенные биологические эксперименты на мыша: перевиваемыми опухолями подтвердили результаты аналитических исследо] ний. При этих условиях можно готовить и (в случае производственной необ> димости) хранить 10 % водный раствор в качестве полупродукта в предел 3-х часов при комнатной и 24-х часов при температуре 5±2°С в защищенном света месте. Кроме того, предварительное изучение сублимационной суш

10 % раствора показало, что можно лиофилизпровать цнклоплатам без введения наполнителей.

Терафтял

Терафтал представляет собой натриевую соль окта-4,5-карбоксифтало-цианина кобальта, необходимым условием сохранения его каталитических свойств является возможность комплексно-связанного кобальта обратимо переходить нз двухвалентного состояния в трехвалентное, с промежуточным образованием аддукта комплексного соединения с молекулой кислорода. Способность терафтала катализировать в водных растворах окисление аскорбиновой кислоты с образованием активных форм кислорода лежит в основе бинарной каталитической терапии злокачественных новообразований. «Бинарная терапия» - новое направление в терапии опухолей - основана на способности раздельно введенных в организм нетоксичных агентов при взаимодействии в клетке-мишени генерировать цитотоксические соединения.

Терафтал (РсСо) растворяется в воде, но из-за склонности к агрегации в концентрации выше 2 % образует вязкие растворы. На хроматограммах ВЭЖХ растворов терафтала имеются два основных пика, которые относятся к восстановленной - РсСо(П) и окисленной - РсСо(Ш) формам кобальта и могут рассматриваться как единая окислительно-восстановительная система (рис. 1). Из-за высокой устойчивости комплексов РсСо(Ш) по сравнению с РсСо(П) окисление соединений идет даже под действием кислорода воздуха.

Для оптимизации технологических характеристик растворов терафтала использовали вспомогательные вещества, регулирующие рН препарата, способствующие образованию формы и ускорению лиофнлизации. Однако добавление дополнительных ингредиентов не только не увеличило, но при использовании разбавленных кислот или буферной системы, маннита, натрия гидроцпт-рата и натрия хлорида даже снизило растворимость терафтала.

А

1

1 2

I

II

III

IV

Рис. 1. Изменение хроматограммы ВЭЖХ терафтала в воде при хранении: 1 - PcCo(lII); 2 - РсСо(Н);

I - свежеприготовленный раствор; II - через сутки; III - через 7 суток; IV - через 3 недели.

Изучение противоопухолевой активности растворов терафтала разног состава также показало отсутствие преимущества сложных композицш Проведенные исследования процесса сублимационной сушки водных растворе терафтала показали, что можно готовить и, в случае производственно необходимости, хранить 2 % водный раствор препарата (в качестг полупродукта для последующей лиофилизации) в пределах 24 часов пр комнатной температуре в защищенном от света месте.

Сстрсмед

Сетремед - Ь-серинато-Ь-треонинат меди(Н), в водных растворах его у< танавливается равновесие между смешанным координационным соединением

имметричными бис-комплексами, которое сметспо в сторону смешанного со-динения:

2Си(Ь-8ег)(Ь-Тге) ^-»Си(Ь-Зег)2+ Си(Ь-Тгс)2

Учитывая хорошую растворимость сетремеда в воде, изучали его 5 % аствор в изотоническом растворе натрия хлорида, так как водные растворы ызывали гемолиз. В процессе тепловой стерилизации наблюдали изменение Н раствора и форсирование прохождения окислительно-восстановительных «акций, в результате чего выпадал красный осадок закисной меди. Поэтому % раствор сетремеда в 0,9 % растворе натрия хлорида стерилизовали мембранной фильтрацией, разливали в ампулы по 2 мл и хранили при двух темпе->атурах в защищенном от света месте. По в течение 5 месяцев хранения при .штатной температуре и ] года в холодильной камере (5±2 °С) наблюдалось нижение величины рН, появление в растворе свободных аминокислот и выпа-(ение осадка. Хотя сетремед достаточно простое и устойчивое комплексное со-динение меди, попытки получить стабильную ЛФ в виде раствора не привели : успеху. Вероятно, комплексное соединение в растворах разрушается с осво-юждеиием катиона меди, который вступает в окислительно-юсстановительную реакцию с аминокислотами. В результате было предложено шработать сублимационно высушенную ЛФ сетремеда, а в качестве «концен-рата» использовать 10 % раствор субстанции в воде.

2.2. СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ИНЪЕКЦИОННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ САРКОЛИЗИНА, ВХНМ II МИТОКСАНТРОНА

В своих исследованиях мы попытались совершенствовать имеющиеся ЛФ сорошо известных высокоактивных препаратов: отечественного сарколизина и шпортных - бисхлорэтилнитрозомочевины (БХНМ) и митоксантрона.

Сарколнзин, 4-[ди-(2-хлорэтил)амино]-ОЬ-фенилаланина гидрохлорид, трудно растворим в воде (0,1 %). Определяющей биологический эффект подоб-1ых алкилирующих соединений является реакция с нуклеиновыми кислотами, в гом числе взаимодействие с нуклеофильными центрами ДНК. При нагревании

растворимость субстанции возрастает на порядок, но происходит разрушен! препарата, как производного хлорэтиламииа, с образованием растворимых м< ногидрокси- и днгидрокси- соединений. Продукты гидролиза теряют цитото) сическуго активность и, тем самым, их присутствие может влиять на воспрои водство фармакологического эффекта препарата.

БХНМ, 1,3-бис(2-хлорэтил)-1-нитрозомочевина, очень мало растворима воде (0,09 %); являясь производным хлорэтиламииа и нитрозомочевины, леп гидролизуется с образованием диазогидроксидов и изоцианатов. Диазогидро сиды алкилируют основания и фосфатные группы нуклеиновых кислот, что с провождается разрывом ДНК, появлением внутри- и межмолекулярных сш вок. Изоцианаты карбамоилируют белки, липиды и ферменты. Высокая биол гическая и реакционная способность препарата объясняется наличием в мол куле связи «N-0», которая расщепляется по нуклеофильному механизму в щ лочной и нейтральной средах. В сильно кислой среде происходит разрыв свя: "Ы-Ы" с предварительным протонированием нитрозогруппы, с последующ! денитрознрованием и трансформированием. Продукты деградации БХНМ м гут изменять фармакодинамнку препарата, поэтому их присутствие может пр вести к непредсказуемым эффектам.

Митоксантрон, производное антрацендионов, 1,4-дигидрокси-5,8-бис{| [(2-гидроксиэтил)амино]этил]амино}-9,10-антрацендиона дигидрохлорид, тр циклические плоские кольцевые системы которого интеркалируют в ДНК, 41 обеспечивают цитостатнческий эффект субстанции. Препарат растворим в во; но при хранении и охлаждении митоксантрон кристаллизуется из 2 % раство] а также разрушается при повышении его рН.

Высокая реакционная способность, гидролитическая и термическая г стабильность, чувствительность к действию света, плохая растворимость с> станций определили необходимость создания лиофилизированных инъекцис ных ЛФ с добавками вспомогательных ингредиентов, оптимизирующих тех1 логические характеристики ЛВ. Для проведения сублимационной сушки нес ходимо было подобрать составы, подлежащие высушиванию, создать относ

тельно устойчивые водные растворы (полупродукты) - технологические «концентраты».

Большой ассортимент вспомогательных веществ, используемых в фармацевтической технологии, позволяет варьировать свойствами ЛВ в разрабатываемых ЛФ. Однако введение минимальных количеств дополнительных ингредиентов может оказать влияние не только на показатели качества лекарственного препарата, но и на его фармакотерапевтпческие свойства. Поэтому при разработке ЛФ сарколнзина, БХНМ и митоксантрона учитывали свойства как активных субстанций, так и введенных вспомогательных ингредиентов, обеспечивающих проявление фармакологических возможностей препарата, его химическую, структурно-механическую и микробиологическую устойчивость. При этом вопрос о составе ЛФ решался для каждой субстанции индивидуально с проведением физико-химических, технологических, и биофармацевтических исследований созданных композиций.

Сарколнзич

Производимая ЛФ сарколизина не соответствовала требованиям, предъявляемым к инъекционным ЛФ для внутривенного введения по ряду показателей, таких как: наличие механических включений, причиной загрязнения которыми являлись субстанции натрия хлорида и самого сарколизина; неточное дозирование сарколизина; потемнение препарата за счет его окисления кислородом воздуха. К недостаткам технологического процесса относилась высокая токсичность производства. Кроме того, было неудобно и применение этой ЛФ: необходимость нагревания при растворении порошка до 60 "С, в результате чего происходило гидролитическое разрушение сарколнзина. Все эти недостатки явились причиной снятия препарата с производства и выдвинули проблему совершенствования инъекционной ЛФ.

Для создания лиофилизированной ЛФ в первую очередь провели поиск солгобилизаторов и стабилизаторов сарколнзина, обеспечивающих получение растворов («концентратов»), пригодных для стерильной фильтрации и сублимационной сушки. Анализ проведенных ранее исследований позволил сделать

следующие выводы: растворение сарколизина необходимо проводить в кислом водно-спиртовом растворе с рН около 1,2 без нагревания; гидролиз сарколизина в растворах тормозится в присутствии натрия хлорида и хлористоводородной кислоты; скорость гидролиза зависит от концентрации хлор-ионов и рН среды; наибольший стабилизирующий эффект получен в растворах с рН 1,20-1,25, а при рН 2,0-2,1 гидролиз замедляется только при хранении растворов в холодильнике. В процессе приготовления 2 % водных растворов сарколизина в

0.1.М растворе хлористоводородной кислоты возникла проблема гелеобразова-ния. Для стабилизации растворов сарколизина и блокирования гелеобразованш изучалась возможность использования высокомолекулярных соединений. Наибольший стабилизирующий эффект проявили поливинилпирролидон < М.м. 12600 (ПВП) и твин-80. Проведенные исследования позволили сделат1 заключение, что:

1. При получении растворов сарколизина необходимо использовать водно спиртовой растворитель с добавлением хлористоводородной кислоты до р! не выше 1,5;

2. Для стабилизации полученных растворов можно использовать натрия хло рид, ПВП и твин-80;

3. Сарколизин следует добавлять в раствор мелкими частями, так как раствс рение большой массы порошка ведет к образованию геля, растворяющегос только при нагревании;

4. Для предотвращения возможного гелеобразования следует ввести специал! ный наполнитель;

5. Для предупреждения окисления препарата необходимо введение антиокс) данта.

Поэтому при создании растворов сарколизина для последующей лиоф! лизации. нами были подобраны вспомогательные соединения, которые увел! чивали растворимость сарколизина без нагрева, замедляли гидролиз, препятс1 вовали гелеобразовашпо, обеспечивали точность дозирования, а также облад ли антиоксидантными свойствами и предохраняли препарат от окисления

процессе хранения. Разработка лиофильно высушенных ЛФ определила подход к выбору вспомогательных веществ. При сублимации 2 % раствора сарколизи-на (низкая доза препарата - 20 мг в разовой упаковке) возникла проблема структурного качества лиофилнзированной массы, а для создания более концентрированных растворов потребовалось использование наполнителя, выполняющего роль формообразователя. В поиске необходимых вспомогательных веществ, обладающих солюбилизирующнми, формообразующими и стабилизирующими свойствами, остановились на ПВП (М.м. 12600). Кроме того, использовали маннит, который обеспечивает удобную для сублимации структуру ледяного блока. В результате последовательного проведения технологических операций по введению ряда вспомогательных веществ в состав водного раствора сарколизина получен технологический «концентрат», в котором растворимость субстанции в воде увеличилась в 20 раз (табл. 1).

Таблица 1

Состав 2 % "концентрата" сарколизина

Состав ингредиентов Нормативная документация

Сарколизин гидрохлорид ФСП 42-01050258-00

Кислота аскорбиновая ФС 42-2668-95 или ВР 98, Т. 1, С. 115

Кислота глютаминовая ГФ X, ст. 15 или ВР 98, Т. 1, С. 644

П-манннт ВФС 42-3421-99 или ВР 98

Полившшлпирролидон ФС 42-1194-98 и Изменение № 1 от 08.09.99 или ВР 98 Т. 1, С. 1071

Кислота хлористоводородная концентрированная ГОСТ 14261-77, х.ч. или ВР 98, Т. 2, А 48

Спирт этиловый 95 % ФС 42-3072-94 или ВР 98, Т. 1, С. 1071

Вода для инъекций ФС 42-2620-97

Оценку стабильности и химической совместимости сарколизина с используемыми ингредиентами проводили с помощью аналитических методов: ТСХ, ВЭЖХ и спектрофотометрии. С этой целью изучили электронные спектры поглощения растворов вспомогательных веществ, субстанции и их «концентрата» (рис. 2).

250 260 270 280 290 300 310 320

X, ИМ

Рис. 2. УФ-спектры поглощения (раствор сравнения - растворитель Н):

1 - 0,04 % раствор сарколизина в растворителе Н;

2 - 0,04 % раствор сарколизина в «концентрате»;

3 - раствор вспомогательных ингредиентов в растворителе Н.

Исследования, проведенные на модельных смесях и «концентрате» JM сарколизина показали, что УФ-спектр «концентрата», снятый против раствор вспомогательных веществ, по положению максимума, форме кривой и величи не поглощения идентичен спектру субстанции сарколизина в том же раствори теле. Это свидетельствует об отсутствии химического взаимодействия межд компонентами ЛФ.

Бнсхлорннтрозомочевииа (БХНМ)

В настоящее время американская фирма Bristol-Myers Squibb производи препарат Кармустин (BiCNU, БХНМ) в виде лиофилизированного без наполнг тслей порошка по 0,1 г для внутривенных инъекций. Препарат требует жестки условий хранения (морозильная камера), так как температура плавления с ра: ложением БХНМ находится в интервале 29-31 °С. Кроме того, эту ЛФ из-э

плохой растворимости перед введением последовательно растворяют в 3 мл абсолютного спирта и 27 мл воды. Инфузию проводят в течение часа капельно в 200 мл 5 % раствора декстрозы. Недостаток этой ЛФ заключается в ее нестабильности. В полученных водно-спиртовых растворах субстанция не хранится, что требует быстрого введения растворенного препарата. Кроме того, необходимо прилагать к флакону с субстанцией два флакона с растворителями, а затем при введении - третий флакон с изотоническим раствором декстрозы.

С целью оптимизации инъекционной ЛФ изучили растворимость и стабильность субстанции БХНМ. Выбор растворителей определялся необходимостью разработки лнофилизнрованной ЛФ с приготовлением промежуточного «концентрата». БХНМ мало растворима в 10 % растворе этанола и очень мало растворима в воде, при этом наблюдается выделение пузырьков газа, что свидетельствует о разложении препарата. Для создания более концентрированных растворов изучали солгобилизирующие свойства ряда вспомогательных веществ. В результате получили 0,25 % раствор БХНМ в водных растворах ПВП. Дополнительное введение этанола, в котором субстанция легко растворяется, позволило увеличить растворимость БХНМ в 20 % растворе ПВП в 2 раза. На основании проведенных исследований предложена следующая пропись концентрата БХНМ (табл. 2).

Таблица 2

Состав 0,5 % "концентрата" БХНМ

Состав ингредиентов Нормативная документация

Бнсхлорнитрозомочевина Проект ФСП

Поливинилпирролидон ФС 42-1194-78 или ВР 98 Т. 1, С. 1071

Спирт этиловый 95 % ФС 42-3072-94 или ВР 98, Т. 1, С. 1071

Вода для инъекций ФС 42-2620-97

Исследования химической совместимости БХНМ с ПВП, выполненные на модельных смесях «концентрата» лекарственной формы БХНМ, показали, что УФ-спектр 0,08 % раствора субстанции БХПМ в этаноле аналогичен спектру «концентрата» (рис. 3).

А

0,2

0,5

0,4

0,3

0,1

0,0

325

350

400

450 500 X, им

Рис. 3. УФ-спсктры поглощения (раствор сравнения -этанол):

1 - 0,08 % раствор субстанции БХНМ в этаноле;

2 - раствор «концентрата» БХНМ в этаноле (0,8 мг/мл);

3 - раствор вспомогательных ингредиентов в этаноле.

При этом основное вспомогательное вещество - низкомолекулярный медицинский ПВП не поглощает УФ-излучение в области аналитической волны БХНМ с максимумом 400±2 нм и в концентрациях, близких к составу разбавленных растворов «концентрата» ЛФ, не меняет спектральных характеристик

Митоксантрон производится и экспортируется фирмами "Wyeth- Lederle' (США) под торговой маркой "Novantrone", "АWD Arzneimittelwerk Dresden' (Германия) -"Mitoxantrone AWD 25" и "Polfa" (Польша) - "Mitoxantrone". Все эти ЛФ представляют водный раствор препарата, содержащий: митоксантрон; гидрохлорида 2 мг (в пересчете на основание); натрия хлорида 8 мг; натри? ацетата тригидрата 0,0833 мг; кислоты уксусной ледяной 0,44 мл; натрия мета-бисульфита безводного 0,1 мг/мл; воды для инъекций до 1,0 мл. Для внутри венного, внутриартериального и внутриплеврального введения раствор препа

БХНМ.

Митоксантрон

рата разводят не меньше, чем в 5 раз изотопическими растворами натрия хлорида или глюкозы.

В целях воспроизводства импортной ЛФ по приведенной выше прописи приготовили 0,2 % раствор митоксантрона, который разлили во флаконы па 10 мл или в ампулы на 5 мл, изготовленные из стекла НС-!. Полученные серии ЛФ соответствовали требованиям общей статьи на инъекционные лекарственные формы ГФ XI издания и спецификации па ЛФ Иовантрон, что позволило передать их на доклинические исследования и заложить на хранение для установления сроков годности. По после шести месяцев храпения при температуре + 20 "С на стенках ампул и флаконов появился еле заметный осадок, различимый лишь при увеличении. При микроскопическом анализе осадка после мембранной фильтрации обнаружили кристаллы разной окраски и формы, основную массу которых составляли копьевидные кристаллы светло-коричневого цвета размером около 30 мкм. Количество осадка, найденного в 5 мл ампулиро-ванного раствора, почти в 10 раз превышало его наличие во флаконах. Так как оба вида упаковки изготовлены из стекла НС-1, следует полагать, что на процесс кристаллизации повлияли не только химический состав стекла, но и его поверхность. Исследования устойчивости растворов митоксантрона во времени подтвердили предположение, что способность к пролонгированному кристаллообразованию является свойством препарата, и кристаллизация его ускоряется при снижении температуры хранения. Следует отметить, что фирмы, выпускающие вышеуказанную ЛФ, рекомендуют при внутривенном введении пропускать разведенный в физиологическом растворе препарат через специальные шприцы-насадки с одноразовыми мембранными фильтрами. Возможное присутствие механических микровклгочений в растворах ЛФ осложняет использование ее для внутривенного введения. Кроме того, эта ЛФ требует жесткого режима хранения +15°С - +25°С, который трудно соблюдать в процессе транспортировки в холодное время года. С целыо преодоления недостатков импортной ЛФ нами проведены работы по созданию новой сублимацнонно высушенной ЛФ митоксантрона. Изучение ряда составов раствора митоксантрона в воде

позволило выбрать пропись, содержащую по возможности наименьшее число ингредиентов и достаточное количество основного вещества (табл. 3).

Таблица 3

Состав 2 % "концентрата" митоксантрона

Состав ингредиентов Нормативная документация

Митоксантрон НД 42-11483-01

Поливинилпирролидон ФС 42-1194-78 или ВР 98 Т. 1, С. 1071

Кислота лимонная ФС 42-0008-00

Вода для инъекций ФС 42-2620-97

Для исследования возможности взаимодействия между компонентами ЛФ сняли электронные спектры поглощения растворов вспомогательных веществ, субстанции и «концентрата» в воде (рис. 4).

Рис 4. УФ-спектры поглощения митоксантрона (раствор сравнения - рас творитель - 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной в воде):

1 - 0,001 % раствор субстанции митоксантрона;

2 - 0,001 % раствор митоксантрона в «концентрате»;

3 - раствор вспомогательных ингредиентов.

На рис. 4 видно, что спектр поглощения раствора «концентрата» миток-сантрона идентичен поглощению субстанции, при этом присутствие вспомогательных ингредиентов не мешает его обнаружению. Убедительные результаты получены и с помощью метода ВЭЖХ. Идентичность хроматограмм образцов митоксантрона в субстанциях и в "концентратах" также свидетельствует об отсутствии посторонних примесей, полученных в результате взаимодействия вспомогательных соединений с основным активным компонентом.

ИЗУЧЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ «КОИЦЕ11ТРДТОК»

Стабильность в процессе хранения полученных «концентратов» сарколнзина, БХНМ и митоксантрона изучали при двух температурах с помощью спектрофотометрических методик количественного определения, ТСХ и ВЭЖХ. Метод ВЭЖХ использован для изучения скорости гидролиза сарколизина в воде и «концентрате», что позволило определить величину разложения препарата в процессе хранения его при комнатной температуре (рис. 5).

Время, час

• * Раствор сарколизина в воде

"■ Раствор сарколнзнна в "концентрате"

Рис. 5. Гидролиз сарколизина в воде и в «концентрате»

Сравнительный анализ гидролиза растворов сарколизина убедительно свидетельствует о стабилизирующем действии состава «концентрата».

Изучение возможности гидролитических превращений БХНМ в процессе наработки ЛФ провели с помощью спектрофотометрического метода и ТСХ (рис. 6). Полученные данные свидетельствуют о стабильности (не менее двух часов) «концентрата» БХНМ при комнатной температуре (+ 20 °С) и более суток, если растворы хранить в холодильнике (+ 8 °С).

Рис. б. Скорость гидролиза БХНМ в «концентрате»

120 ч

I 20-

0 —I—I—г—I—I—I III I I I I I I -1 I I I I I I

0 1 2 3 4 5 б 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24

Время, час

• ♦ Температура +8 ■ й'" Температура +20

«Концентрат» митоксантрона при комнатной температуре выдерживат хранение в течение 5 дней, и в отличие от импортного аналога охлаждение I холодильной камере (+ 8 °С) не вызывало его кристаллизации.

Таким образом, данные проведенных анализов показали стабильност) сарколизина, БХНМ и митоксантрона в «концентратах», позволяющую 1 течение предельно допустимого времени нахождения субстанции в раствор! провести стерилизующую фильтрацию, дозирование во флаконы замораживание и лиофилизацию.

3. БИОФЛГМЛЦЕВТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ II ОБЛАСТИ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НЕРАСТВОРИМЫХ В ВОДЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ СУБСТАНЦИЙ ПРОИЗВОДНЫХ ХЛОРЭТИЛАМННА

Синтезированные в соответствии с теорией цитотоксических алкилнрующнх антиметаболитов мелфалан и сарколнзин, содержат аминокислоту в качестве носителя хлорэтиламннной группы. Изучение биохимических аспектов их действия показало, что они способны не только алкилнровать ДНК, РНК, но и конкурировать с природными метаболитами, как за транспортные пути, так и в процессе их внутриклеточных превращений. С целью получения менее токсичных препаратов были синтезированы пептидные производные сарколизнна на основе следующих аминокислот: валина (асалин), лейцина (асалей), тирозина (астирон) и метионина (асамет). Из перечисленных алкнлирующих дипептидов только асалин (в настоящее время - цифелин) рекомендован к медицинскому применению в виде таблеток. Особенностью цифелина, как и других пептидов сарколизина, является его практическая нерастворимость ни в воде, ни в маслах. Всасывание субстанции при введении внутрь происходит в форме хлористоводородной соли, после растворения в желудочном соке. Однако полученные преимущества цифелина, состоящие в значительном снижении токсичности по сравнению с сарколизином, омрачены большим расходом препарата, так как его терапевтическая доза на порядок выше.Тропность стероидных гормонов к определенным органам и тканям позволяет использовать их как специфические проводники алкнлирующих групп в ткани-мишени и опухоли, исходящие из них. В качестве цитотоксического агента в этих веществах был использован хлорфенацил, содержащий хлорэти-ламинную группу. Синтезированные по этому принципу оригинальные отечественные гормоноцнтостатики: тестифенон, кортифен и цитэстрол ацетат обладают двойным механизмом действия - гормональным и цитотоксическим. Выявленные на I фазе клинических испытаний мсстноткаисвые реакции при подкожном введении ЛФ липндорастпоримых тестнфенона и кортифена в виде

масляных растворов лимитировали их парентеральное применение. Патомор-фологические испытания масляных растворов гормоноцитостатиков позволили отобрать безопасные ЛФ - 1 % раствор тестифенона и 0,4 % раствор кортифена в подсолнечном масле для приема внутрь. Однако, применение масляных растворов внутрь в количествах, превышающих 15-20 мл, оказалось неудобным для больных. Кроме того, клиническое изучение фармакокинетики препаратов при приеме внутрь показало, что гормоноцитостатики, как сложные эфиры, в организме разрушаются на составляющие молекулу части, в результате чего в крови больных не обнаружен нативный препарат.

В плане совершенствования ЛФ этих цитостатиков предусматривалось:

- увеличить биодоступность цифелина путем введения в состав таблеток разрыхлителя (аэросил) и солюбилизатора (лаурилсульфат натрия);

- проверить эффективность использования гормоноцитостатиков в нерастворенном виде, имитируя традиционные твердые лекарственные формы типа таблеток;

- для расширения возможностей клинического изучения тестифенона, кортифена, цитэстрол ацетата и цифелина разработать состав и технологию липосомапьной формы для внутривенного введения;

- провести сравнительные исследования относительной биодоступностг полученных ЛФ in vitro и in vivo.

3.1. ИЗУЧЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ДЛЯ ПРИЕМА ВНУТРЬ Таблетки цифелина

Первичная оценка высвобождения цифелина из таблеток разного состав; проводилась in vitro с помощью теста "Растворение". Полученные результаты i дальнейшем уточняли in vivo в сравнительных опытах на беспородных крысах самцах по фармакокинетическнм характеристикам, токсичности i противоопухолевой активности (ТРО, %). Препарат вводили однократно внутр] в виде 5 % водной суспензии таблеточной массы.

В результате фармакокинетичееких исследований установили, что биодоступность (площадь под кривой ЛиС) таблеток цифелииа (состава II) с лау-рилсульфатом натрия выше на 48 % по сравнению с таблетками, содержащими аэросил (состав I). Скорость всасывания цнфелина из состава II оказалась выше, чем из состава I, но при этом отсутствовала существенная разница в скорости элиминации ЛВ. В результате увеличения биологической доступности ци-фелина в таблетках состава II почти в б раз возросла его токсичность по сравнению с таблетками, содержащими аэросил. Однако, несмотря на увеличение биодоступности цифелииа в новом составе таблеток противоопухолевая активность его в различных дозах и режимах введения крысам с перевиваемой поли-морфноклеточной саркомой М-1 существенно не увеличилась.

Гормоноцнтостатнк»

Сравнительное изучение противоопухолевого действия -ормоноцитостатиков проводили биологическим методом на мышах-самках ВЭР| с адепокарциномой молочной железы Са-755 при введении внутрь. Противоопухолевый эффект оценивали по критериям: ТРО, УПЖ, излечение и Ч1бель животных от токсичности. Полученные результаты свидетельствуют о различной биодоступностн препаратов из масляного раствора и водной :успензии. Так суспензия субстанций кортифена и цитэстрол ацетата даже в юзах, более чем в 2-5 раз превышающих дозу препаратов в масляных эастворах, оказала лишь незначительное кратковременное противоопухолевое действие. Полученные фармакодинамические данные показывают ^рациональность разработки твердой ЛФ (таблетки, капсулы) линофильных 1ротивоопухолсвых ЛВ и еще раз подтверждают высокую эффективность их

масляных растворов.

3.2. РАЗРАБОТКА ЛИПОСОМАЛЬНЫХ ЛЕКАГСТ1ШН1МХ ФОРМ ДЛИ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ ЛИППДОРАСГВОРИМЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ

Успех лнпосом обусловлен тем, что они эффективно связывают и выспо-юждают лекарственное вещество, обеспечивая его ннтактность до взаимодей-

ствия с клетками-мишенями, пролонгируют его действие, предотвращают раз витие побочных реакций и обладают высокой биодоступностью.

Целью данной работы явилось исследование процесса включения тести фенона, кортифена и цитэстрол ацетата в липосомы, внутривенное введение кс торых позволит расширить возможность их доклинического изучения.

Исследуемые препараты включали в гидрофобный бислой липосомы. 1 результате специально проведенных исследований выбрано оптимальное коли чественное молярное соотношение препарат-фосфатидилхолин 1:20. В качеств водной среды использовали 10 % растворы маннита или сорбита. Многослой ные лецитиновые липосомы готовили водным редиспергированием тонкой ли пидной пленки, полученной упариванием в вакууме спирто-хлороформног раствора липидов с препаратом. Для получения лецитиновых малых однослоГ ных лппосом использовали модифицированный метод «обращения фаз», детер гентного диализа и метод гомогенизации на гомогенизаторе высокого давлени:

Липосомальная структура дисперсии подтверждена путем микроскопиче ского исследования. Анализ липидов, входящих в состав бислоя липосом прс водили с помощью ТСХ и ВЭЖХ. Качество лекарственных веществ определял по разработанным спектрофотометрическим методикам и ТСХ. Средний разме полученных липосом замеряли на лазерном спектрофотометре фирм СиНгошсБ. Известно, что липосомальные препараты существенно изменяк фармакодннамическне и фармакокинетические характеристики лекарственны препаратов, поэтому провели изучение их противоопухолевой эффективности распределения в организме.

Биофармацевтическое сравнительное изучение моделей липосомальнс ЛФ гормоноцитостатиков проводили на мышах-самках ВОР| с перевиваемс Са-755 при ежедневном введении препаратов в течение 5 дней.

Тестифенон

Эффективность 0,36 % липосомальной дисперсии тестифенона изучали сравнении с ЛФ: 5 % раствором в косточковом масле для подкожного введет и 1 % раствором в подсолнечном масле для перорального применения (рис. 7)

Рис. 7. Зависимость противоопухолевой активности тестифенона от состава лекарственной формы и пути введения мышам с Са-755

Примечание:

- данные статистически достоверны по отношению к контролю (р < 0,05); * - на этой дозе наблюдали излечение 14 % животных.

Установлено, что при парентеральном введении: подкожном - масляного раствора и внутривенном - липосомалыюй дисперсии тестифенона эффективность лечения по критерию УПЖ повышается параллельно с увеличением дозы. Оптимальная терапевтическая доза (без излечения животных) при подкожном и пероралыюм введениях составила 30 мг/кг. При внутривенном введении липосомального препарата в дозах 25 и 30 мг/кг наблюдали излечение 14 % мышей. Токсичность при подкожном введении обнаружена на дозе 40 мг/кг, при пероралыюм - 120, а при внутривенном - 30 чг/кг.Для определения способа хранения и стабилизации липосомалыюй дисперсии использовали метод сублимационной сушки. Свежеприготовленную омогенизированнуго 0,36 % дисперсию липосом тестифенона дозировали по ) мл во флаконы из стекла марки НС-1 вместимостью 20 мл, замораживали и шофилизировали. В результате исследования их эффективности можно за-

ключить, что липосомальный тестифенон проявил высокую противоопухолевую активность как свежеприготовленный, так и в виде водной дисперсии ре-гидрированного лиофнлизированного препарата (табл. 4).

Таблица 4

Сравнительная эффективность липосомального тестифенона

Лекарственная форма Доза, мг/кг ТРО, % (на 15 УПЖ, Гибель от

день после % токсичности,

лечения) %

Свежеприготовленный липосомальный тестифенон 17 64* 45* 0

20 75* 45* 0

25 80* 61* 0

Лиофилизированный липосомальный тестифенон 17 34 27 0

20 41* 63* 0

25 53* 42* 0

30 99* 73* 12

Примечание: * - р < 0,05 по отношению к контролю.

Так как липосомы имеют иной характер распределения в организме, чем само JIB, интересно было определить распределение и захват липосом, а с ними и их содержимого, специфическими органами и тканями. Поэтому целью данного исследования стал сравнительный фармакокинетический анализ разработанной ранее оральной ЛФ в виде масляного раствора и новой липосомальной ЛФ тестифенона. Водный раствор липосомального тестифенона вводили в рет-роорбитальный синус в дозе 16 мг/кг через 8 суток после перевивки опухоли. В качестве маркера в ЛФ добавили 3Н-тестифенон, полученный путем радиоактивного синтеза, с радиоактивной меткой в алкилирующей части молекулы препарата. Результаты исследования сравнивали с данными фармакокинетиче-ского анализа масляного раствора тестифенона, проведенного ранее на мышах-самках BDF| без опухолей.

Для всех исследуемых органов и тканей за период 0 - 268 ч рассчитали AUC (площадь под фармакокинетической кривой) и MRT (среднее время удерживания), значения которых являются критерием сродства органов к препарату. Сравнительный анализ этих параметров показывает различную тропность

3Н-тестифенона и продуктов его метаболизма после внутривенного - в липосомальной ЛФ и перорального - в растворе подсолнечного масла применения (таблица 5).

Таблица 5

Значения AUC и MRT для органов и тканей после однократного введения 3Н-тестифенона в липосомальной ЛФ или в виде раствора в масле

Орган или ткань Липосомальный 3Н-тестифенон в дозе 16 мг/кг Раствор 3Н-тестнфенона в подсолнечном масле в дозе 30 мг/кг

AUC, мкг ч/г MRT, ч AUC, мкг ч/г MRT, ч

Селезенка 11844 107 405 106

Печень 8042 102 515 107

Яичники 1986 119 467 160

Легкие 1908 56 н/и н/н

Толстая кишка 1238 55 466 85

Почки 1000 56 414 92

Тонкая кишка 879 74 690 77

Желудок 874 96 2524 45

Матка 840 95 656 148

Лимфатические узлы 771 67 71828 158

Кровь 678 98 460 67

Тимус 477 91 562 149

Опухоль (Са-755) 598 104 н/и н/и

Примечание: н/и - не исследовали.

Таким образом, при исследовании двух ЛФ тестифенона наблюдается длительное удержание препарата в крови, обусловленное в случае перорального применения постоянным поступлением 3Н-тестифенона из масляного раствора в желудке. В случае внутривенного применения липосомального препарата концентрация его в крови поддерживается поступлением из органов-депо, и объясняется высокой тропностыо липосомальной ЛФ к печени и селезенке. Накопление липосомального препарата в опухолевой ткани было низким и из-

менялось незначительно, находясь в пределах 6-2 мкг/г в течение всего периода изучения.

Кортифси

Полученную 0,38 % липосомальную дисперсию кортифена изучали в сравнении с ЛФ: 1,25 % раствором в косточковом масле для подкожного введения и 0,4 % раствором в подсолнечном масле для перорального применения. ЛФ кортифена вводили подкожно, внутрь и внутривенно в дозах, представленных в таблице 6.

Таблица 6

Противоопухолевая активность кортифена при введении мышам с Са-755

в различных лекарственных формах

Доза (мг/кг) ТРО, % (УПЖ, %)

1,25 % раствором в косточковом масле для подкожного введения 0,4 % раствором в подсолнечном масле для приема внутрь Липосомы

5 80** (27) 83** (27) 97** (54)**

7 н/и н/и 71** (109)*, **

10 94** (73)** 82** (48)** 99** (85)*,**

15 95** (65)** 95** (97)** ЛДзо

20 ЛД,о ЛДю Н/и

Примечание: * - излечение (2 мыши из 8);

и/и - доза не исследовалась. ** - данные статистически достоверны по отношению к контролю (р < 0,05).

Сравнительные исследования противоопухолевой активности на Са-755 показали, что терапевтическая доза при внутривенном введении липосомально-го кортифена ниже почти в 2 раза, чем доза масляных растворов при подкожном и пероральном введениях, и составляет 7-10 мг/кг. Кроме того, при применении липосомальной формы наблюдалось излечение 30 % мышей с Са-755, которого не наблюдали ранее при введении масляных растворов. Установлено, что противоопухолевый эффект липосомалыюго кортифена зависит от введенной дозы, наибольший эффект наблюдается в дозах 7 и 10 мг/кг, а доза 15 мг/кг является токсичной.

С целью увеличения стабильности липосомалыюго кортпфена в состав эислойной мембраны лецитиновых везикул включили холестерин и кардиоли-пин. Результаты исследования противоопухолевой активности липосом кортпфена различного состава представлены в таблице 7. Показано, что противоопухолевый эффект препарата на Са-755 не зависит от состава липосом по критерию ТРО. По критерию УПЖ композиция III уступает липосомам другого со-;тава. Выявлены различия и в терапевтических дозах: для лецитиновых липо-:ом она составляет 10 мг/кг, а для липосом другого состава - 7 мг/кг. Можно тредположить, что увеличение числа входящих в бислой липидов повышает стабильность липосомальной мембраны и, тем самым, дольше сохраняет на-гивный кортифен в крови мышей, что приводит, по-видимому, к увеличению токсичности препарата. Так композиции II (содержащая холестерин) и III (содержащая холестерин и кардиолипин) в дозе 10 мг/кг вызвали излечение жи-зотных (12 % и 43 %, соответственно), но в то же время они проявили наиболее зысокую токсичность (12,5 % и 28,6 %, соответственно).

Таблица 7

Противоопухолевая активность липосомальных форм кортпфена

Модель Доза ТРО, % УПЖ, % Излечение, Гибель от

лекарственной формы (мг/кг) % токсичности, %

I 5 89 55 0 0

7 95 58 11 0

10 99 68 30 0

II 5 99 39 0 0

7 99 60 25 0

10 99 54 12 12,5

III 5 93 ■13 0 0

7 98 34* 25 0

10 99 33 43 28,6

Примечание: 1 - лсцнтнновые липосомы;

II - композиция лецитина с холестерином;

III - композиция лецитина, холестерина и кардполшшна; * - р < 0,05 по отношению к УПЖ I и II композиций.

Для проверки этого предположения изучили стабильность полученных шпосомальных композиций в опыте in vitro. Образцы липосомальных составов

II н III выдерживали в геиаринизированной плазме человеческой крови npi температуре 37 °С. Анализ методом ТСХ на пластинках Силуфол УФ-254 про водили после экстракции этилацетатом кортнфена и продуктов его деградации Полученные результаты показали стабильность молекулы кортифена в липосо мальном составе II в течение 12 ч, а в составе III - 24 ч. При более длительнои выдерживании происходил гидролиз молекулы в плазме на гормональную и ал килирующую части.

Цнтэстрол ацетат

Эффективность внутривенного введения 0,2 % дисперсии липосомапьно го цитэстрол ацетата изучали в сравнении с подкожным и пероральным введе нием его масляного раствора и водной суспензии (рис. 8).

.= 60 с 50

40 30 20 10 0

1 г

._l. а

ii 1

1

1

1 л X X С* Ш

15

20

25

50

75

Доза, мг/кг

□ 0,5% масляный раствор с твином (внутрь)

■ 0,2% липосомальная дисперсия (внутривенно)

□ 0,5% водная суспензия (внутрь)

Рис. 8. Противоопухолевый эффект цнтэстрол ацетата в различных лекарственных формах.

Показана высокая противоопухолевая активность препарата в дозе 2: мг/кг при пероральном введении его масляного раствора, а также при внутри

венном введении липосом в дозе 20 мг/кг. Доза 50 мг/кг цитэстрол ацетата в масляном растворе при приеме внутрь приближалась к ЛД 50.

4. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ЛИОФИЛИЗИРОВАНПЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ В результате проведенных исследований мы установили, что наиболее перспективным способом стабилизации разработанных водных растворов цик-лоплатама, терафтала, сетремеда, сарколизина, БХНМ, митоксантрона и полученных липосомальных дисперсий тестифенона и кортифена является обезвоживание с помощью сублимационной сушки. С целью создания рационального процесса сушки выбранных «концентратов» и получения препаратов высокого качества определили эвтектическую температуру, обосновали режим замораживания и сублимационной сушки водных составов; изучили влияние всего технологического процесса на качество полученных лиофилизнрованных ЛФ. Технологический процесс изготовления лиофилизнрованных инъекционных ЛФ включает в себя подготовительные и основные стадии работы, а также по-стадийный контроль продукции (рис. 9). Растворы разливали во флаконы из стекла НС-1 емкостью 10-20 мл, объем и толщина слоя каждого препарата указаны в таблице 8. В наших исследованиях использовали пилотную установку EDWARDS MINIFAST DO.2, которая производит лиофилизащио небольшого количества продукта, но построена на тех же принципах и с теми же характеристиками, что и промышленные установки. Поэтому можно гарантировать надежное воспроизводство параметров цикла лиофилизации, отобранных на этой установке, в условиях широкомасштабного производства. Очень важно, что установка пригодна для работы в асептических условиях, так как механическая часть машины отделена от входа в сублимационную камеру. Замораживание растворов с датчиками проводили на полке сублимационной камеры при температуре -50 °С с автоматической записью изменений температуры. При выборе режимов сублимации в первую очередь оценивали влияние процесса сушки на качество готового препарата: его внешний вид (цвет, пористость, однород-

Гнс. 9. ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ СХЕМА ПРОИЗВОДСТВА

Потери

физико-химические характеристики (влажность, скорость растворения) и биологические свойства (специфическая активность). Особое внимание при сублимационной сушке уделяли сложным «концентратам», включающим в свой состав вспомогательные ингредиенты: ПВП, спирт и хлористоводородную кислоту. На основании проведенных исследований отобрали оптимальные режимы лиофилизации «концентратов».

Таблица 8

Основные параметры сублимационной сушки «концентратов»

Препарат Слой, мм Количество, мл Эвтектические зоны, °С Время замораживание (-50 °С),ч Среднее время сублимационной сушки, ч

Циклоплатам 7 1,5 20-24 3-4 21

10% 5 1,0 2-3 24

2,5 0,5 1-2 27

Терафтал 2% 8 2,5 9-11 3-4 22

Сетремед 10% 5 1,0 14-18 3-4 21

Сарколнзин 2% 5 1,0 34-38 3-4 31

Митоксантрон 2% 5 1,0 22-25 3-4 21

БХНМ 0,5 % 15 4,0 24-28 5-6 42

Тестифенон 10 3,0 18-22 -40 - -45 23

Кортифен 10 3,0 18-22 -40 - -45 24

Из-за способности исследуемых препаратов быстро окисляться температуру в конце процесса сублимации не поднимали выше +22 ± 3 °С, а для достижения минимума остаточной влаги в препаратах досушку проводили при этой температуре в течение 3 - 7 ч. По разработанной для каждого препарата технологии с использованием стандартных серий субстанций наработаны инъекционные ЛФ во флаконах из стекла НС-1, укупоренные бутилкаучуковыми пробками под обкатку алюминиевыми колпачками.

Стандартизацию лиофилизированных ЛФ для внутривенных инъекций проводили но основным критериям качества:

1. Внешний вид (Описание)

2. Растворимость в растворителе для инъекций

3. Подлинность

4. Средняя масса содержимого флакона и однородность по массе

5. рН; Прозрачность; Цветность раствора

6. Механические включения

7. Посторонние примеси (родственные соединения)

8. Потеря в массе при высушивании или вода, определяемая методом К. Фишера

9. Количественное содержание

10.Стерильность 11 .Пирогенность 12.Токсичность

12.Противоопухолевая активность

Установленные технологические параметры сублимационной сушки водных «концентратов» циклоплатама, терафтала, сетремеда, сарколизина БХНМ и митоксантрона позволили рационально провести процессы сушки у получить препараты высокого качества, отвечающие требованиям ГФ XI предъявляемым к ЛФ для внутривенного введения. ЛФ выдержали храненш более 2-х лет, исследования продолжаются для обоснования более длительны) сроков хранения. Полученные результаты позволили разработать технологиче ские регламенты и фармакопейные статьи предприятия на созданные ЛФ.

5. БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ СОЗДАННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ

Для безопасности введения лиофилизированных ЛФ в кровеносное русл! определили влияние их составов на кровь. С этой целью выбрали водны растворители и установили изотонические концентрации противоопухолевы: препаратов; а также оценили местно-тканевые реакции на введение выбранны; растворов. В результате для внутривенного введения рекомендован! следующие безопасные концентрации препаратов в растворах: - 0,1 % раствор циклоплатама в 5 % растворе глюкозы;

- 0,1 % раствор терафтала в 0,9 % растворе натрия хлорида;

- 1 % раствор сетремеда в 0,9 % растворе натрия хлорида;

- 0,1 % раствор сарколизина в 0,9 % растворе натрия хлорида; -0,1 % раствор БХНМ в 0,9 % растворе натрия хлорида;

- 0,1 % раствор митоксантрона в 0,9 % растворе натрия хлорида.

Сравнительное изучение противоопухолевой активности полученных лиофилизированных ЛФ показало, что созданные препараты сохраняют свою терапевтическую активность в ЛФ. Кроме того, изучили биологическую эквивалентность ЛФ воспроизведенных препаратов (мнтоксантрон и БХНМ) с импортными лекарственными формами по противоопухолевому эффекту и фар-макокинетическим показателям.

Таблица 9

Противоопухолевая активность БХНМ в разных лекарственных формах

Доза ТРО, % Гибель от

Препарат (мг/кг) (дни после окончания лече- УПЖ, % токсичности,

ния) %

1 7 15

БХНМ 30 88 75 57 44 0

35 91 76 55 41 0

40 94 90 61 26 0

30 84 62 47 21 0

БХНМ-лио 35 92 93 72' 60' 0

40 95 89 52 35 0

30 63 +11 +24 4 0

BiCNU 35 72 43 8 6 0

40 92 8 26 16 0

Примечание: * - р < 0,05 по отношению к субстанции в том же дтс.

Представленные в таблице 9 данные показывают, что противоопухолевый эффект БХНМ на перевиваемой опухоли меланоме В-16 (мыши BDF,) в разных ЛФ зависит от введенной дозы. По силе п длительности противоопухолевой активности действие БХНМ-лио в дозе 35 мг/кг статистически превосходит действие препарата в субстанции и в импортной лекарственной форме BiCNU (Bristol-Myers Squibb, Germany). Следовательно, новая композиция ЛФ не уменьшает противоопухолевый эффект активной субстанции и является

биоэквивалентной по отношению к терапевтическому действию импортной BiCNU.

Для оценки эквивалентности Митоксантрона -лио его импортному аналогу - Иовантрону (Wyeth-Lederle, USA) провели сравнительные фармакокинети-ческие исследования на мышах-самках BDFt при ретроорбитальном введении. Определение концентрации митоксантрона в экстрактах плазмы крови мышей проводили методом ВЭЖХ. Процент экстракции митоксантрона из водных растворов составил (89 ± 5) %, из плазмы крови мышей - (83,4 ± 6,2) %. Предел чувствительности определения митоксантрона нз растворов составил 1 нг/мл, а для образцов плазмы воспроизводимый результат получен при 10 нг/мл. Относительная ошибка определения равна 9,3 %. Статистически обработанные данные по определению концентрации митоксантрона в плазме крови мышей для сравниваемых составов ЛФ представлены в таблице 10.

Таблица 10

Динамика изменения концентрации митоксантрона в плазме крови мышей

Время, мин Концентрация митоксантрона, мкг/мл (п = 5, р < 0,05)

митоксантрон новантрон

1 4,683±0,213 4,886±0,188

5 1,871±0,185 1,68510,133

10 0,652+00,038 н/и

15 0,421 ±0,027 0,341+0,031

30 0,142+0,008 0,17210,073

60 0,122±0,009 0,07710,008

120 0,025+0,0028 0,03110,0026

180 0,024±0,0029 0,02210,0028

Примечание: н/и - не исследовали

Кинетические кривые изменения концентрации митоксантрона описываются уравнениями двухчастевой и трехчастевой моделей при введении обеих ЛФ. Различия в кривых зависимости концентрация - время для «концентрата): митоксантрона и Новантрона статистически недостоверны. Обе кривые описываются биэкспоненциальной зависимостью.

Таким образом, проведенные исследования показали равную или более высокую противоопухолевую эффективность созданных лиофилизированных ЛФ по сравнению с их субстанциями. Установлено, что разработанные составы ЛФ воспроизведенных митоксантрона и БХНМ эквивалентны по терапевтическому действию и основным фармакокинетическим параметрам их импортным аналогам.

ВЫВОДЫ

1. Разработан биофармацевтический подход к созданию лекарственных форм растворимых и нерастворимых в воде противоопухолевых субстанций, относящихся к классу комплексных соединений металлов, производных хлорэ-тиламина, нитрозоалкилмочевины и антрацендиопа. На основании результатов собственных исследований обоснована концепция лекарственной формы как системы доставки действующего вещества к биологической мишени и определены возможные пути ее реализации с учетом биофармацевтических факторов.

2. Установлены химико-фармацевтические и биологические критерии и параметры оценки качества противоопухолевых субстанций. Показано, что деструкция их в водной среде преимущественно протекает по гидролизно-окнелительному типу, на ее скорость наибольшее влияние оказывают повышение температуры и изменение рН. Предложены химические и биологические методики, позволяющие контролировать стабильность субстанций во время технологического процесса и последующего хранения готовых препаратов. Сочетание выбранных аналитических методик объективно оценивает качество новых лекарственных форм.

3. Получены биофармацевтнческие данные, обосновывающие вид и состав лекарственных форм противоопухолевых субстанций. Установлено, что:

- терапевтическое и токсическое действие исследуемых субстанций зависит от состава лекарственной формы;

- для всех изученных субстанций наиболее целесообразным является внутривенное введение в определенном для каждого препарата растворителе и интервале концентраций, обеспечивающем его безопасность;

- рациональными лекарственными формами комплексных соединений металлов (циклоплатам, терафтал и сетремед) являются лиофилизированные инъекционные препараты, полученные без добавления вспомогательных веществ;

- введение в состав новых лекарственных форм отечественного сарколи-зина и воспроизведенных БХНМ и митоксантрона вспомогательных веществ, увеличивает растворимость субстанций, гидролитическую стабильность, улучшает процесс сублимации и обеспечивает качество содержащих низкую дозу активного вещества лиофилизированных препаратов.

4. Разработаны технологии производства и нормативная документация на контроль качества предложенных инъекционных лиофилизированных лекарственных форм противоопухолевых соединений из класса комплексных соединений металлов, производных хлорэтиламина, нитрозоалкилмочевины и антра-цендиона:

• ВФС 42-3682-00 «Циклоплатам лиофилизированный 0,05 г, 0,10 г и 0,15 г для инъекций», препарат рекомендован к медицинскому применению;

• ФСП 42-1681-01 «Терафтал лиофилизат для приготовления раствора дл) инъекций 0,05 г», препарат проходит II фазу клинических испытаний;

• ФСП 42-0257-00 «Сарколизин лиофилизат для приготовления раствор; для инъекций 0,02 г», препарат рекомендован к медицинскому применению.

• ФСП 42-1261-01 «Митоксантрон лиофилизат для приготовления раство ра для инъекций 0,02 г», препарат рекомендован к медицинскому применению.

5. Установлено, что новые составы лекарственных форм воспроизведен ных митоксантрона и БХНМ эквивалентны по терапевтическому действию 1 основным фармакокинетическим параметрам их импортным аналогам.

6. Выявлена различная биодоступность нерастворимых в воде противо опухолевых субстанций из класса хлорэтиламина: тестифенона, кортифена, ци

тэстрол ацетата и цифелииа в зависимости от вида и состава лекарственных форм:

- фармакодинамнческие данные показывают нерациональность разработки твердой лекарственной формы липофильных тестифенона, кортифена и ци-тэстрол ацетата и подтверждают высокую эффективность их масляных растворов;

- фармакокинетические, хнмиотерапевтическне и критерии острой токсичности нового состава таблеток цифелииа с лаурилсульфатом натрия (солю-эилизатором) свидетельствуют о его нерациональности по сравнению с таблет-<ами, содержащими аэросил (разрыхлитель). В результате увеличения растворимости и биологической доступности цифелииа в новых таблетках (А1_!С вы-не на 48 %) почти в б раз возросла его токсичность по сравнению с таблетками зез солюбнлизатора, но противоопухолевая активность в различных дозах и режимах введения крысам с саркомой М-1 существенно не увеличилась.

8. Сформулированы общие требования к лнпосомальным дисперсиям, как с лекарственной форме для внутривенного введения. Показана возможность жлючения гидрофобных субстанций тестифенона, кортифена, цитэстрол ацета-а, БХНМ и цифелииа в бислой липидной мембраны липосом. При этом липо-омальная форма способна защитить молекулу гормоноцитостатика кортифена 1Т гидролитического разрушения, которое наблюдается при приеме внутрь его тсляных растворов.

9. Установлены биофармацевтичсские характеристики созданных липо-омальных препаратов. На перевиваемых опухолях мышей и крыс выявлена за-исимость терапевтического и токсического действия исследуемых противо-пухолевых препаратов от состава лекарственной формы исследуемых суб-танций. Показано, что наиболее высокая противоопухолевая активность не-астворимых в воде субстанций тестифенона, кортифена, цитэстрол ацетата, ХНМ проявляется при внутривенном, а цифелииа - при внутривенном и перо-альном введениях их липосомальных форм.

Основные работы, опубликованные по материалам диссертации:

1. Оборотова Н.А. Направленная доставка противоопухолевых препаратов // Антибиотики и химиотерапия. - 1991.- Т. 36, № 10. - С. 47-50.

2. Oborotova N.A., Lukichcva M.V. Antitumour drugs liposome forms advantages. Abstr. International seminar "Novel drug formulation systems and delivery devices". Riga, 1992. - P. 44-48.

3. Smirnova Z.S., Kulagina T.F., Oborotova N.A. et al. Hormonocytostatic liposome forms antitumour activity. Abstr. International seminar "Novel drug formulation systems and delivery devices". Riga, 1992,- P. 38-44.

4. Konovalova A.L., Oborotova N.A., Polozkova A.P. et al. Biopharmaceutical approach for platinum complex compound - cycloplatam drug formulation. Abstr. International seminar "Novel drug formulation systems and delivery devices". Riga, 1992. - P. 38-44.

5. Оборотова H.A., Клочкова Т.И., Михайлова Jl.M., Смирнова З.С. Биофармацевтические особенности разработки противоопухолевых лекарственных средств // Тезисы докладов II Российского национального конгресса «Человек и лекарство»,- Москва, 1995. - С. 30.

6. Oborolova N.A., Smirnova Z.S., Polozrova А.Р., Klochkova T.I. Study on development of dosage forms of lipophilic compounds. Abstr. 7-th International Congress on Anti-Cancer Treatment.- Paris, 1997. - P. 320.

7. Сыркин А.Б., Герасимова Г.К., Оборотова Н.А. Перспективы создания отечественных противоопухолевых препаратов. Тезисы конф. «Современные тенденции развития лекарственной терапии опухолей».- Москва, 1997,- С. 45-47.

8. Kikotj В., Chapurina L., Oborotova N. et al. Chemical and pharmaceutical study of a new anticancer preparation setremed. Abstract 2-th World Meeting Pharmaceutics Biopharmaceutics Pharmaceutical Technology.- Paris, 1998. - P. 97-98.

9. Oborotova N., Smirnova Z., Polozkova A., Oborotov A. Comparative Characteristics of Cortifcn Liposomes Development Methods. Abstract Filth European Symposium on Controlled Drug Delivery.- Noordwijk AAN ZEE, 1998,- P. 170-172.

10. Oborotova N, Polozkova A, Sercbryakova E. et al. Pharmacodynamics- pharmacokinetics of lipophilic hormonocytostatic testifenon in different formulations. Abst. of Symposium "Lipid and Surfactant Dispersed Systems".- Moscow, 1999.- P. 261-262.

11. Оборотова H.A., Кикоть B.C., Полозкова А.П. и др. Технологические и химико-фармацевтические исследования Бисантрона - новой лекарственной формы воспроизведенного противоопухолевого препарата Митоксантрон // Хим.-фарм. жури.- 1999,- Т. 33, № П.-С. 53-56.

12. Барышников Л.Ю., Оборотова H.A., Герасимова Г.К., Михайлова Л.М. Методологические аспекты создания противоопухолевых препаратов // Тезисы 11 съезда онкологов стран СНГ «Онкология - 2000».- Киев, 2000, № 248.

13. Рышкова Н., Оборотова Н.,.Шпрах 3, и др. Химико-фармацевтическое исследование новой лекарственной формы БХНМ // Хим.-фарм. журн. - 2000. - Т. 34, № 9. - С.46-48.

14. Оборотова Н., Рышкова Н., Смирнова 3., и др. Бмофармацсптичсскмс исследованиям лекарственной формы противоопухолевого препарата БХНМ // Хим.-фарм. журн,- 2001.- Т. 35, № 1,- С. 52-54.

15. Оборотова Н., Шпрах 3., Багирова В., и др. Разработка инъекционных лекарственных форм цнтостатнков с использованием растворимого полившшлпирролндона // Хим.-фарм. журн.-2001.- Т. 35, № 5,- С. 39-43.

16. Оборотова H.A. Липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов (обзор) // Хим.-фарм. журн.-2001.- Т. 35, № 4. - С. 32-38.

17. Оборотова H.A., Барышников АЛО. Липосомальные лекарственные формы в клинической онкологии // Успехи современной биологии.- 2001.- Т. 121, № 5.- С. 14-19.

18. Барышников А.Ю., Оборотова H.A. Иммунолнпосомы - новое средство доставки лекарственных препаратов // Современная онкология,- 2001,- Т 3, №2.- С. 4-5.

19. Оборотова ILA. Итоги создания отечественных лекарственных форм противоопухолевых препаратов в РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН // Вестник РАМП,- 2001, № 9.- С. 18-23.

20. Оборотова H.A., Чельцов П.А., Полонский С.А. и др. Технологические и химико-фармацевтические исследования нового противоопухолевого препарата «Цнклоплатам лиофилнзированный для внутривенного введения».- Хнм.-фарм. журн,- 2001.- Т. 35, №8. -С. 36-43.

21. Арзамасцев А.П., Валова Н.В., Оборотова H.A. Увеличение биодоступности труднорастворимого противоопухолевого препарата цифелии // Хим.-фарм. жури. -2001,- Т. 35, №8.-С. 52-53.

22. Смирнова Л.И., Оборотова H.A., Iilnpax З.С. и др. Сарколнзнп-лпо для внутривенного применения // Вестник РОНЦ РАМН,- 2001, № 4,- С. 22-27.

23. Оборотова H.A., Смирнова Л.И., Зимакова H.H. и др. Доклинические и клинические исследования нового противоопухолевого препарата - таблетки цифелина // Российский онкологический журнал.- 2001, № 5. - С. 46-48.

24. Шпрах З.С., Оборотова H.A., Смирнова Л.И., Орлола О.Л. и др. Химико-фармацевтические исследования новой лекарственной формы сарколизнна // Хим-фарм журн,- 2001.- Т. 35, №12. - С. 68-73.

Материалы диссертации защищены патентами:

1. Оборотова H.A., Полозкова А.П., Перетолчица Н.М., Герасимова Г.К., Петровски* В.Ф. "Противоопухолевое средство" Патент N 2066181, 1996, Официальный бюллетеш "Изобретения. Полезные модели" № 25.

2. Хайдуков Э.Я., Оборотова H.A., Сыркин А.Б., Смирнова Л.И., Перетолчииа Н.М. Герасимова Г.К., Знмакова Н.И., Даманская A.IO. "Способ получения сарколизина для внут ривенных инъекций" Патент N 2060031, 1996, Официальный бюллетень "Изобретения. По лезные модели" № 14.

3. Оборотова H.A., Смирнова Л.И., Круглова Г.В., Демина Е.А., Полозкова А.П., Ор лова О.Л. "Средство для лечения миеломной болезни" Патент N 2066183, 1996, Официаль ный бюллетень "Изобретения. Полезные модели" № 25.

4. Оборотова H.A., Полозкова А.П., Клочкова Т.И., Яворская Н.П., Кикоть Б.С., Иг натьева Е.В., Сыркин А.Б., Михайлова Л.М. "Противоопухолевое средство" Патент i 2093158, 1997, Официальный бюллетень "Изобретения. Полезные модели" №29.

5. Полозкова А.П., Оборотова H.A., Лопатин П.В., Чельцов-Бебугов П.А., Сыркш А.Б. "Противоопухолевое средство" Патент N 21280442, 1999, Официальный бюллетен "Изобретения. Полезные модели" № 9.

6. Орлова О.Л., ПолозковаА.П., Оборотова H.A., Смирнова Л.И. "Средство для лече ння миеломной болезни". Патент № 2127588 от 20 марта 1999, Официальный бюллетен "Изобретения. Полезные модели" № 8.