Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Анализ и стандартизация многокомпонентных лекарственных форм на основе коллагена для лечения радиационных ожогов

РГ6 од

.2 3 1335

На правах рукописи УДХ: 615. 36:616-001. 17: 621. 039. 553. 5

КУЗИНА ВЕРА НИКОЛАЕВНА

АНАЛИЗ К СТАНДАРТИЗАЦИЯ МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ ЛГ 'АРСТВЕННЫХ ФОРМ НА- ОСНОВЕ КОЛЛАГЕНА ДЛЯ ЛЕЧрШ РАДИАЦИОННЫХ ОЖОГОВ

15.00. ОН - Фармацевтическая химия и Фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ дисертаиии па соискание ученой степени кандидата Фармацевтических наук

МОСКВА - 1995

Работа выполнена в Носковской кесишшсхой академии имени И. Н. Сеченова

*

Научные руководители: доктор Фармацевтических наук.

профессор А. П. ЛРЗАНЛСЦЕВ доктор Фармацевтических наук /I. П. И-ТРАКОВ

, Официальные оппоненты:

доктор Фармацевтических наук в. Е. Чичиро доктор медицинских наук г. Я. Шварц Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт Фармашш Нинздравмедпрома Российской федерации

Зашита диссертации состоится "_^^/¿-Л__1993 . г.

в_______часов ка заседании. Диссерташюьного совета д-074. оз. 06. при

Московской медицинской академии им. И. И. Сеченова по адресу: Носква. Суворовский бульвар, д. 13

с диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Носковской медицинской академии их. И. Н. Сеченова (Носква, Зубовская плошадь, д. 1).

Автореферат разослан ________1995 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д-0Т4. 05.06. кандидат фармацевтических наук.

доцент Н. П. САД4ИК0ВА

Подписано к печати 10.06.86 г. Оамм 1.26 и.и. 0ак.2С7.Тио.1Ои типография Ш'П ям.Н.Оативва !---

ОБИАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕНЫ. Научно-технический прогресс предопределил все возрастающее применение различных источников радиации в промышленности. сельском хозяйстве, науке, практическом здравоохранении. Острые местные радиационные поражения (ОМРП), несмотря на высокий уровень защита работников, обслуживающих источники ионизирующей радиации. все же встречается нередко в клинической практике. Анализ санитарных потерь в результате аварии на Чернобыльской АЭС в 1986 г. показал, что тяжелые Формы острой лучевой болезни у пострадавших развились не столько от массивной дозы общего обличения, сколько от глубины и плошади радиационных ожогов кожи (Гуськова А. К. и др., 1988; Баранов А. Е. и др., 1993). Анализ последствий более мелких аварий в атомной энергетике и промышленности, число которых выражается трехзначной цифрой, проведенный за последние 20 лет Нежлународ-ным центром радиационной патологии (Институт им. Кюри в Париже) подтверждает мнение российских и яг. неких ученых о колоссальном значении в развитии первичной лучевой реакции человека бета-ожогов кожи. В связи с этим разработка новых, эффективных препаратов в различных лекарственных Формах, необходимых для оказания неотложной и специализированной медицинской помощи этим пострадавшим, является актуальной проблемой современности.

Сотрудниками Лаборатории по изучению и применению коллагена в медицине НИЦ ННА им. И. Н. Сеченова, на основании предварительных исследований, в эксперименте и клинике предложены новые многокомпонентные лекарственные Формы ШЛФ): губка и гели, для проведения комплексного мес.иого лечения ОМРП в зависимости от Фазности в течении раневого процесса (Абоянц Р. К. , Истранова Е. В. и пр., 1991 ; Панкратова С. В. . 1993).

- г -

Внедрение препарата в медицинскую i. актику связано, как известно, с его Фармакологическими испытаниями, разработкой методов его контроля, стандартизации, определения их стабильности при хранении и в конечном итоге составлением нормативно-технической документации.

Эффективность контроля качества лекарственных препаратов, в тон числе и многокомпонентных, проведение всестороннего их изучения определяются уровнен внедрения современных Физико-химических методов в практику фармацевтического анализа, среди которых важное место занимают хроматография и спектроскопия. Таким образом, проведение исследований по разработке методик анализа коллагеновой губки, гелей "Эмпаркол 1" и "Эмпаркол 2" с использованием хроматограФических и спектроФотометрического методов, и создание ВФС на эти лекарственные препараты является целесообразным и актуальным.

цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось изучение возможности применения современных физико-химических методов в Фармацевтическом анализе новых многокомпонентных лекарственных Форм шлф) на основе биополимера коллагена и разработка нормативно-технической документации.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить хроматограФическое поведение компонентов изучаемых НЛФ в тонком слое сор нта, определить оптимальные условия разделения, детектирования и на этой основе разработать унифицированные методики идентиФикац. . компонентов НЛФ нетодом тонкослойно^ хроматографии (ТСХ).

2. Изучить спектрофотометрические характеристики ингредиентов Н/1Ф и разработать УФ-спектроФотометрические методики их качественного и количественного анализа.

3. Определить степень высвобождения лекарственных веществ из изучаемых лекарственных Форм методом m vitro.

1. Установить хроматограФическое поведение, эпгеделить опти-

мальные условия разделения и разработать методики ВЭЖХ анализа МЛФ.

5. Исследовать стабильность изучаемых НЛФ в процессе длительного хранения. По результатам полученных данных дать рекомендации по установлению сроков хранения исследуемых МЛФ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые проведено углубленное изучение новых МЛФ на основе коллагена: губки и гелей "Эмпаркол 1" и "Эмпаркол 2" для лечения ожогов.

В процессе изучения хроматограФического поведения в тонком"слое сорбента пармидина, эмоксипина, лидокаина и нипагина в подвижных Фазах различного состава установлены величины, характеризующие хрома-тограФическую эффективность разделения (ДР и Фактору), положенные в основу опред ения подлинности-активных компонентов губки и гелей.

На основе изучения спектральных характеристик каждого из лекарственных веществ, входящих в изучаемые 1Ш>. разработаны УФ-спектроФотометрические методики анализа губки и геля "Эмпаркол 1", содержащих пармидин и эмоксипин (действующие ингредиенты).

Определена степень высвобождения пармидина и эмоксипина из губки и геля в опытах in vitro.

На основании изучения хрома ^графических свойств проведено разделение ингредиентов геля" Эмпаркол 2" (пармидин, эмоксипин, лидо-каин, нипагин, диметилсульФоксид) методом ВЭЖХ и предложена методика анализа геля данным методом.

Изучена стабильность исследуемых МЛФ в процессе длительного хранения.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Разработаны методики аналитического контроля и установлены параметры качества новых многокомпонентных лекарственных Форм на осноЕе коллагена: губки и гелей "Эмпаркол 1" и "Эмпаркол 2".

Практические результаты исследований реализованы в подготовленном проекте В1С на гель'Энпаркол 1".

' АПРОБАЦИЯ РАБОТ». Основные результаты .выполненной работы яоло-

жкны на Республиканской научно-праки. »еской конференции "Резервы совершенствования лекарственного обеспечения населения РСФСР" (Владимир, 1991) и на межкафедральной конференции Фармацевтического факультета ННА ин. И. И. Сеченова.

публикации по работе. По теме диссертации опубликовано 4 работы.

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИСС/1Е ДОР А1. К Я С ПРОБЛЕМНЫМ П/1АНОН ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Настоящая диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ мнл им.И. Н. Сеченова и проблемой "Фармация" Научного совета N 10 РАМН "Фармакология и Фармация" по специальности 15.00.02 "фармацевтическая химия и Фармакогнозия" i номер госрегистрации 01910039973.

НА ЭА1ДИТУ ВЫНОСЯТСЯ: результаты по углубленному аналитическому контролю МЛФ на основе коллагена: губки и гелей "Эмпаркол 1" и "Эн-паркол 2", а именно, результаты экспериментальных исследований:

- по разработке методик идентификации ингредиентов МЛФ с использованием тех, ВЭХХ и УФ-спектроФотометрии;

- по разработке методик определения количественного содержания компонентов изучаемых МЛФ с использованием УФ-спектроФотометрии и ВЭЖХ;

- определения высвобождения действующих веиеств (пармидин и эноксипин) в опытах m vitro из губки и геля;

- изучения стабил. .юсти исследуемых лекарственных препаратов в процессе длительного хранения.

структура и объе.. диссертации. Диссертационная работа, состоит из введения, обзора литературы, 5-ти глав экспериментальных исследований, общих выводов и списка литературы (236 ш-точников. в том числе 94 иностранных). Работа изложена на 16 ctiаниках машинописного текста, иллюстрирована 18 рисунками и 29 тас липами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Го введении отражены актуальность, научная и ви:на и практичес-

кая значимость исследований, определены их цель и задачи.

В обзоре литературы дана характеристика радиационного ожога и тактика его лечения, включая лечение лекарственными Формами на основе коллагена. Обобщены Фармакологические свойства пармидина, эноксипина и лидокаина, входящих в состав новых НЛФ на основе биополимера коллагена для лечения ожогов. Дан критически!! анализ методов определения ингредиентов, изучаемых НЛФ, в лекарственных Формах и биологическом материале.

1. ОБЪЕКТЫ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Объектами данного исследования являлись следующие лекарственные Формы: коллагеновая губка и гели "Эмпаркол 1" и "Эмпаркол 2", содержащие в каче лве лекарственных вешеств пармидин (бис-П-метилкарбами-новый эфир 2, 6-бис-оксиметилпиридина) (ФС 42-2344-65), эмоксиппн (2-этил-б-метил-З-оксипиридина гидрохлорид)(ФС 42-1607-66) и местный анестетик лидокаина гидрохлорид (2диэтиламино-г, 6 - апетксили-дида гидрохлорид) в геле "Эмпаркол 2"; в качестве вспомогательных вешеств голи "Эмпаркол 1" и "Эмпаркол 2" содержат веиества. разре-яеннн1? к применению в Фармацевтической практике - нипагин (ФС42-1450-С0) консервант и диметилсульфсксид (ЛИСО)(ВФС 42-1166-81)- солмбилизатор . з качестве основы для всех лекарственных Гурм используется коллагеновая пасса (ВСФ 42-726-78).

В процессе исследования в соответствии с поставленными задачами применены Физико-химические, Физико-механические и микробиологические метопы анализа. В данном случае использованы как разработанные и модифицированные нами, так и предложенные ранее методики

Для идентификации и установления возможного взаимодействия между компонентами лекарственных Форм, а также изучения и-: стабильности с процессе хранения били использованы методы УФ-слектроФо-тометрии.

Определение содержания компонентов лекарственных Форм проводили методами У^-сп^ктроФотометгии и вэгх.

Для определения степени высвобождеь..я пармидина и эноксипина из губки и геля, позволявшей судить о биологической доступности и влиянии вспомогательных веществ на этот процесс, использовали метод равновесного диализа через полупроницаемую мембрану, с последующим определением веществ методом Уф-спетрофотонетрии.

Испытания на микробиологическую чистоту проводили в соответствии с требованиями ГФ XI.

При установлении сроков годности кр^ме содержания действующих компонентов, исходя из специфики изучаемых лекарственных Форм и современных требований к их качеству (ГФ XI, Фармакопея США, Истра-нова Е. В. , 1977) изучали следующие показатели:

для губки - значение рН водного извлечения, влажность, температура гидротермического сокращения; для гелей - значение рН водного извлечения.

. 2. ПРИМЕНЕНИЕ ТСХ В АНАЛИЗЕ ИЗУЧАЕНЫХ Н/1Ф.

Метод ТСХ использован нами для идентификации компонентов колла-геновой губки и гелей "Эмпаркол 1" и "Эмпаркол 2".

Для выбора селективной системы, позволяющей разделить и идентифицировать активные ингредиенты МЛФ было изучено хроматографическое поведение пармидина, эноксипина, лидокаина, нипагина в тонком слое сорбента в 17 системах растворителей, с различным обьеннын соотношением подвижных Фаз.

Разделение ингредиентов НЛФ проводили на таких сорбентах как Силуфол УФ-254 и СороФил. Проявление пятен хроматографируеммх веществ (пармидина, эноксипина. лидокаина. нипагина) осуществляли УФ-светом и парами «ода. Чувствительность при проявлении УФ-светон при 254 нн для пармидина. эноксипина, лидокаина и нипагина составляет 1.5; 1,0; 4.0 и 1,0 нкг соответственно; при проявлении парами иода 1,0; 1,2; 2.0 и 1.2 мкг. В условиях серийного анализа использование УФ-света для детектирования предпочтительней.

В качестве подвижных Фаз для наших исследований наиболее подхо-

дили следующие три: С^- хлороформ:этанол:диэтиламин /13:2:0.5/; с4-этилаиетат:этанол: конц. раствор аммиака /10:1:0,25/1 С5- толуол:ацетон: конц. раствор аммиака /20: 5:0, 25/(табл. 1. ).

Таблица 1.

Изучение хроматографической подвижности компонентов, изучаемых МЛФ

Вешества Сорбент системы

с I Сг с 5

« х юо кг х юо иг X 100

Пармидин силуфол Уф-254 59 71 5

СОРбФИЛ 77 - 8

Эмоксипин СИЛУФОЛ Уф-254 33 56 21

СОРбФИЛ 62« - 29

Лидокаин Силуфол Уф-254 21 « ст 31

СорбФил 91 - 48

Нипагин Силуфол Уф-254 84« 85 41

СорбФил ЭЗ - 40

Примечание, »-наблюдается сильный "хвостоеой эффект" В качестве растворителя для нанесения проб на хроматографичрс-кие пластинки нами был выбран хлороформ. В хлороформе растворяются все разделяемые веиества, при этом коллаген (основа изучаемых МЛФ) оса.тдается, тем самым устраняется ?го влияние на подвижность компонентов лекарственных Форм.

Исслелоранн-: погээа./.и. что наиболее оптимальной для разделения пармидина и эмоксипина в губке и пагнилина, эмоксипина и нилагина в геле "Энпэрксл 1" является система зтилшетэт: этанол: кони растр".!

аммиака /10:1:0,25/, время прохождение фронта растворителем 16-ЕО мин. на пластинках Силуфол УФ-254. Для разделения пармидина. энок-сипина, лидокаина и нипагина в геле "Эмпаркол 2" оптимальна система толуол:ацетон:конц. раствор анниака /20:5:0,25/, время прохождения фронта растворителем на Силуфоле 7-ю мин. и на СорбФиле - 35 нин.

3. АНАЛИЗ КОЛЛАГЕНОВОИ ГУБКИ И ГЕЛЯ »ЭНПАРКОЛ Г МЕТОДОН Уф-СПЕКТРОФОТОНЕТРИИ.

Для изучения возможности и далее ра-^аботки методики УФ-спект-рофотометрии для изучаемых нами многокомпонентных лекарственных Форм были сняты спектры поглощения 0.00!^ растворов пармидина м эмоксипина в различных растворителях в области длин волн от 210 до збо нм. /рис. I. и 2У на спектрофотометрах СФ-26 и Зресггопхс 2000

воре кислоты хлористоводородной; 2. -О,01н растворе натрия гидроксида; 3. -этиловом спирте; 4. -воде. Из гис. I. видно, что положение наксннумов и ьеличинц оптичес-ческоП плотности раствора эмоксипина зависят офарактера среды.

Оптимальными условиями для анализа эноксипина прямым УФ-спектроФо-тометрнческим методом является среда О,01н кислота хлористоводородной /рН=Ч,0/. Максимальное значение оптической плотности наблюдается при длине волны ?.9б12нм.

Рис. 2. УФ-спектрн О, 001 и растворов пармидина: 1.-в О, 01н растворе кислоты хлористоводородной; а.-в 0.01» растворе натрия гидроксида; 3. -в этиловом спирте; ; 4. -о воде.

Анализ спектральных кривых растворов пармидина /рис. 2 . / показал, что длина волны максимумов поглощения остается постоянной /26312НМ/ во всех средах и лиоь в О, 01н растворе килоти хлористоводородной смешается в область длинных волн а:2б7*2нм. Величина оптической плотности колеблется в различных растворителях, максимальное ее значение наблюдается в среде кислота хлористоводородной /0,01н/.

Анализируя данные обзора литературы по использовании У1-спекг-роФотометрии в лндокаина /спектр лидокаинэ не имеет четких,

больной интенсивности максимумов поглояения в различных растворителях/ и сравнивая полученные спектры пармилчнз и чмоксипинэ со

<50

I

210 213 350 570 22) ыо А,им

спектрами лидокаина. приведенными I. Sunshine et S.R.Gerber (1963), мы пришли к вывод/, что анализ компонентов геля "Эмпаркол £" пряным УФ-спектрофотометрическим методой проводить нецелесообразно.

сравнение спектров поглощения раствора пармидина и эмоксипина в 0,01н растворе кислоты хлористоводородной показало, что наксимун спектра пармидина лежит в минимуме эмоксипина и наоборот, следовательно УФ-спектрометрия может быть применена для анализа пармидина и эмоксипина при совместном присутствии Изучаемые лекарственные Формы, кроме действующих компонентов, содержат в своем составе: ос-нову-коллагеновую массу, а в гель еше входит нипагин (консервант). С целью установления возможности определения пармидина и эмоксипина в присутствии вспомогательных вешеств и основы были сняты спектры поглощения растворов действующих компонентов МЛФ в тех же соотношениях концентраций как в лекарственных Формах, а также спектры извлечений из губки и геля 0.01н раствором кислоты хлористоводородной /рис. 3. /.

«Э 03 0). W. 05. 0,4 0,1. ог.

1 о

т

s4q

56 о

£80

ьоо

но А, нм

Рис. 3. Уф-спектры компонентов геля "Эмпаркол I" в 0.01Н растворе

-у

кислоты хлористоводородной:1.-эмоксипина <1. 244*10 г/мл);

•5 -Т

г.-пармидина (г. 496*10 г/мл): 3.-нипагмна(&. 250*10 г/нл);

4,-основы; 5,-извлечения из геля.

Спектры поглощения извлечений из губки и геля похожи и представляют собой простое наложение спектров поглощения парнидина и эноксипина, вспомогательные вещества не мешают определению действующих компонентов в губке и геле "Эмпаркол 1".

Идентификацию компонентов губки и геля осуществляли по наличию двух максимумов поглощения в спектре извлечения 0.01Н раствором кислоты хлористоводородной из губки и геля при X - 2б7нн (парМидин) И А'296НМ (эмоксипин).

Для разработки методики количественного определения пармидина и эмоксипина изучено подчинение закону Вера и установлено, что в пределах концентраций 6x10° - ЗхЮ"5 и Зхю"6 - 15х106 г/мл соответствен'--- наблюдается линейная зависимость между величиной оптической плотности и концентрацией анализируемых веществ.

Были определены удельные и молярные показатели поглощения пармидина и эноксипина п о,01н растворе кислоты хлористоводородной /сг. табл. 2. /.

спектральные характеристики пармидина и эмоксипина в 0,01н растсоре кислоты хлористоводородной

Таблица 2.

Вешгстго

Е.к/1 см

пармидин

26712

е073и21

31915

эмоксипин

296*2

91661134

52715

£29»1

'4167199

24012

Выбраны оптимальные условия изплечения лекарствеииих веществ из губки н геля: зг.страгент для - губки и геля О. 01 и раствор соляной кислоты, время "хтраш!.! для губки 30 мин. и для геля 15 мин., тем-

- 12 -

пература экстраадш для губки 20 °С, дл>. геля 40-60а С.

Разработанные нани методики количественного определения компонентов губки и геля "Эмпаркол 1" апробированы на нодельнах и серийных образцах лекарственных форм.

Результаты количественного определения компонентов губки и геля (модельные образцы) представлены в табл. 3.

Таблица 3.

Результаты количественного определена действующих компонентов /

губки и геля "Эмпаркол 1" (модельных образцов) методом Уф-спектрофо тометрии /п=5, р=95/; г /р. ^ = 2.78 /

Пармидин Эмоксипин

а х % метролог, а х К метрологии.

данные данные

губка

5,06 5,20 102.6 Б = 9. 236х1о'2 2,55 2,57 100,8 5.-3,647x10^

Зх=4, 130кЮ'г £)?--1, (531X10^

дЬО, 12 Л? = 0, 05

£,%'■ 2,21 <5,1-1,76

гель "Эмпаркол 1"

1.8900 1,9447 102,5 5=3,946x10** 0,9313 0,9015 96.8 £>,-г. ^Шо"*

& 1. 765X10"3 5х=1. 159x10"^

&х=о, 0491 ¿/--о. озгг

<£л=г. 52 £,¿=3,57

1,7534 1,8011 102.7 3, 19ЧК10"5 0. 65?6 0, 6668 100,0 3 = 1,627x10^ ¿Х; 1,429X10** '$(= 7, 276x10^

¿Х= 0.0397 ¿х=о,огог

£х=г.го

зз

2.0417 2,0898 102.4 5 = 1.953x10^ 0,9431 0,9378 99.4 s -- 7, B27xl0'i

¿У= 8,735X10 йУ-.О. 0243 1. 16

Si= 3, 41 lxlO"3

0095

Примечадие: х - найдено; а - введено: в губке -Л в геле -ко лнчество г на 100, On геля.

Относительная ошибка определения среднего результата при анализе модельных образцов губки: для парнидина - 2,Six и эноксипинз -1,76'/, при определении парм1<;ина наблюдается систематическая ошибка и ее относительная величина -2, 69*.

Воспроизводимость данной методики была подтверждена при анализе 3 серийных образцов губки, где относительная ошибка при определении среднего результата для парнидина не более 1.22'/ и эмоксипнна -2. 19*.

При анализе модельных образцов геля установлено, что при определении пармндина присутствует систематическая ошибка и ее относительная величина -5,0*. относительная ошибка определения среднего результата для пармидина от 1, 16я до 2,52'/. и для эноксипина от 1,01); до 3,57Х . Воспроизводимость методики была подтверждена при анализе

3 серий геля; относительные ошибки определения]среднего результата составили не более 4,53/ для пармидина и 4,61/ для эноксипина

Разработанные методики количественного определения пагмидина и эноксипина были применены нами irt?n ош■делении концентраций вещее ib при исследовании их высвобождения из ¡¡гкарственных Форм в опыта!! in vitro. высвобождение эноксипинэ и тгмидинз из МЛФ гщелглепг м>»и дон равновесного шплиг-л через пол.-прснипаемян мембрану /ги.:. ч. < в с» ii'ikrtim с гг. ■тмия пг< хождения . kip'ibphhux b(-upcii:. чер&Э полу-111 шшэсну» ' 1 ■ = ? • - г а! I из их е-слк i, г i - т l- ! )

Г*

Б

з д».

60. ев.

1——5——*—I Г

о

Рис.4. Высвобождение А-змоксипина.' Б-пармидина из: 1.-геля "Энпаркол 1", 2. -водного раствора, 3. -губки.

Из лекарственных Форм идет достаточно полное высвобождение лекарственных вешеств. Быстрее и полнее эмоксипин высвобождается из геля "Энпаркол", уже через час процент высвобождения из геля составляет 60'/., из губки 60и и из водного раствора 70'/. Максимальная концентрация эмоксипина наблюдается через в часов /95-96'// для геля, через 8 часов /92-94*/ - для водного раствора и через 5,5 часов /95-97'// для губки. Максимум концентрации пармидина из геля наблюдается через 8 часов /92-93'//, из водного раствора - через 9 часов /80-82// и из губки ■ через б часов /84-86//. За 1 час из геля высвободилось 35-36/ пармидина, из водного раствора 50-51'/ и из губки '45'/.

4. АНАЛИЗ ГЕ/1Я "ЭИПАРКОЛ-2" МЕТОДОН ВЗЯХ.

Предложена методика РЭЖХ анализа геля "Энпаркол 2", содержащего пармндин. эмоксипин, лидокаин, нипагин, и ДМСО. Используемый обращение- Фазный вариант позволил получить разделение пиков ингредиентов геля 'гис 5. /. Определение вешеств осуществляли на жидкостном хроматографе "ГСЛбоп" 302 /Франция/ с Уф-детектором "Тгасог" 970А /США/ при длине волны 2?5 нм. нн колонке размером 250x4.6мм с согбентон "Улг/га-фер С^". 5 мкм. Запись и обработка результатов осушествля-"л.ч- ),-) реги'трнрум^м компьютерном интг-ггатсге Фирмы "Уг^егг" 740 ЛЗША/

Рис. 5. Хронатограмма модельной снеси (А) и геля (Б)

1 - неидентифицированный пик. 2 - ДМСО, 3 - омоксипин, 4 -пармидин, 3 - лидокаин. 6 - нипагин Условия ВЭ1Х определены, исходя из теоретических предпосылок обращенно-Фазной хроматографии и предварительных экспериментальных данный полученных рри работе с индивидуальными веществами и их модельными смесяни. В качестве подвижной Фазы была выбрана смесь апе-тонитрил - 0,1н фосфатный буфер /рН=Э,0/ - 15:85 /по объему/. Скорость подвижной Фазы 1,25мл/мин, объем вводимой пробы 50 мкл. Предел обнаружения для пармидина, эноксипина. лидокаина, нипагина, ДНСО-8; 3; 50; 1.2;40 нкг/мл соответственно.

Идентификации компонентов геля "Энпаркол 2" в модельных смесях и серийных образцах осуществляли по основным хроматографнческим параметрам: время удержания и коэффициент емкости. Вррня удержания для пармидина, эноксипина. лидокчша, нипагина и диме-тилгульФок''ндэ составляет 5.9: 3,5: 14.3: 24.0 и 2.6 мин. состве-гс гы-ин:

Количественный анализ ингредиентов геля провопили методом абсолютной калибровки. В пределах рабочих концентраций растворов от 0.2 ло 1,0 мг/мл йля пармидина. эмоксипина, лилокаина, от 0.01 до 0.1 мг/мл для нипагипа и от 1,5 до 3,0 мг/нл для ДИСО выявлена линейная зависимость плошадей пиков от концентрации пешестп.

Оптимальныни условиями для извлечения активных ингредиентов из геля явилось экстрагирование подвижной Фазой в течение 15 мин. Степень извлечения для пармидина, эмоксипина. лидокаина. нипагина и ЦНСО составила: около 69; 68; 70; 98; и 95 процентов соответственно /табл. 4. /.

Таблица 4.

Степень извлечения /и/ инг редиентов лекарственной форни в зависимости от пгироды экстрагента и времени экстрагирования

Экстрагеит н;?ганол аиетонитрил аиетонитрил: фосфатный

буфер 15:85 РН--3, О

Время экстгак 5 15 30 5 15 30 5 15 30

НИН, НИН

Нармипин 5'- 65 65 54 66 66 50 69 69

Змоксипин 60 се 68 55 63 63 5 63 60

Лидокаин 51 64 64 51 69 6? 60 70 70

Нипагич 74 06 78 89 94 94 65 98' 90

днсэ 91 92 93 92 94 95 91 94 95

При количественном определении ингредиентов геля в качестве растворов сравнения использовали растворы, полученные при экстрагировании стандартного образца геля. Анализ модельных образное геля показал, чго разработанная нами методика не содержит систематической сшибки при определении содержания ингредиентов геля.

В.М-ПР1-'извооичссть разработанной нами методики гкха подтверждена

- n

при анализе 4 серии геля / си. таб. 5. /.

Таблица 5.

Результата количественного определения компонентов геля "Эчпар кол 2' методом вэхх /Р:95'/, t/p; f/-г, 7в. п= 5/

Серия Метрологи- найдено, г. на 100,0 г. геля

ческие ___________________________________________

данные пармидин эноксипин лидокаин нипагин днсо

12. И.93 X 2,1059 1,0119 0.9996 0.0483 10,3699

S 0,0621 0,0258 0,0235 0¡ 0349 0,1993

Sx 0,0311 0,0115 0.0105 0,0156 0,0892

ЛХ 0,0988 " 0,0320 0,0292 0,0043 0,2478

4,49 3,16 2,92 8.98 2.39

25.11.93 5 2,0358 1,0187 1,0269 0,0512 10,8636

S 0.0568 0.0195 0.0213 0.0145 0.0925

SX 0,0254 8, ТЭКЮ"1* 9, 51Х10'Ц 6,49x1o41 0,0414

0,0706 0,0243 0,0264 0,0018 0.1153

• 3.47 2.38 2,57 3,53 1,06

10.12.93 X 2.1338 1,0206 1,0125 0.0487 10,3845

£> 0,0540 0,0301 0.0178 0,0200 0,5233

0,0242 0,0135 7, 94x10"'* 8.9ЧХ1о'' 0,23'Ю

0.0671 0.3740 0.0221 0.0032 0,6*06

3.19 3,,6б 2.18 f',58 es 27

15.12.93 I 1.9679 1,0146 1. 0011: O.nq»} ОРЯ";

S 0, ОЧР2 С, -:Сб 0.0162 O.OI'Í О, МП

S* о,ois} 9. 20x1 о*" 8. i * к104* 7. 2 ■'!:■: 10^ о, о'?!

&х с, о". Г:г; 0. с ¿'г 0. Г 7 О ССЛГ с. ¿"г."

2,67

- .16 -2. 52

2,26 4,45 2,18

Относительная ошибка определения среднего результата не более 5, одля пармидина, эноксипина, 9х для нипагина; 3. 5* для лидокаина и 6,0/ для ДНСО.

5. определение стабильности изучаемых н/1» в процессе длительного хранения.

Нани изучена стабильность коллагеновой губки в процессе хранения в естественных условиях /*го°С/ и в условиях "ускоренного старения" /*50сС/, упакованной в Двойные полиэтиленовые пакеты и прос-терилизованной облучением в дозе 25 Мрад. Критерии контроля качества губки выбраны исходя из требований качества аналогичных лекарственных Форм с другими активными ингредиентами (йстранова Е. В. 1977, 1984) : органолептические свойства губки, значение РН водных извлечений из губки, влажность, температура гидротермического сокращения, количественное содержание, действующих ингредиентов. Контроль качества губки производился с периодичностью 6 мес. в течение 18 месяцев /срок наблюдения/.

В течение всего срока наблюдения губки не изменили своего цвета, запаха и'внешнего вида по всем сериям губок заложение на хранение /3 серии/. Температура гидротермического сокращения увеличилась па 2 ° С при хранении по методу "ускоренного старения" и на 1сС при хранении в естественных условиях. Пропент влажности уменьшился в естественных условиях с 15,5* до 14,0/ и в условиях' хранения при «50°С с 15, ЪУ- до е,5У-. Значения рН водных извлечений остается постоянными для губок хранившихся при »20^ и незначительно изменяются при »50°с. с 4, бз'о, 03 до 4, 90 + 0, 03.

Солегжани? пармидина и эноксипина в губке при хранении в естественных условиях и по нетоду "ускоренного старения" не изменяется в течение всего срока наблюдения. Т-?кин образом исследуенчя кол-лзгсм.'-взч гуска стабильна в процессе длительного хранения 16 неся-

цев наблюдения.

Изучена стабильность гелей "Энпаркол 1" и "Энпаркол г", на хранение $ыли заложены 5 серий геля "Энпаркол 1" и 4 серии геля "Энпаркол 2" оба геля были расфасованы в стекляные банки из светозащитного стекла /ТУ 64-2-29-79/ по 30, Ог и гель "Эмпаркол 1" был расфасован еше в алюминиовнэ тубы, покрытые внутри лаком БФ-2 /ОСТ64-7-38-72/ с пластнассовыни бушонани типа 4. 2 по 30,0 г. Периодичность контроля качества гелей - каждые б несяцев. Гели "Энпаркол 1" и "Эмпаркол 2" хранились при «4°С в течение 24 и 12 месяцев соответственно /сроки наблюдения/.

Основываясь на современных требованиях к нормативно-техническои документации /ГФ-Х1 и Фармакопея США/, критериями качества гелей при хранении были выбраны следующие показатели: органолептические свойства гелей, значение рн водных извлечений гелей, количественное содержание активных ингредиентов, микробиологическая стабильность гелей.

Результаты исследования свидетельствовали о стабильности гелей а течении всего вренени хранения: сохранялись внешний вид, запах, цвет. Значения рН водных извлечений для гелей"Эмпаркол 2" и "Энпаркол 1" изменились незначительно и оставались в пределах 6,75-6,79 и 6,75-6,84 соответственно.

Изменение содержания активных компонентов геля "Эмпаркол 2" не превышает ошибок определения предлагаемой нами ЮЖХ методики в течение 12 месяцев наблюдения. Количественное содержание ингредиентов геля "Энпаркол 1" при хранении в стеклянных банках и металлических тубах уменьшилось для пармидина.на 4,5 и б, 5* и эноксипина на 10* и 8* соответственно в течение 24 месяцев хранения.

По истечении 24 месяцев для геля "Эмпаркол 1" и 12 нес для геля "Эмпаркол 2" сохранялась их и сробиологическая стабильность

Наблюдения за стабильностью геля "Эмпаркол 2" продолжатся

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Нагсновании хроматограФических свойств пармидина, эмоксипина, лидокаина и нипагина разработаны ТСХ методики идентификации ингредиентов коллагеновой губки и геля "Энпаркол ]" при хронатогра-Фировании в системе - этилаиетат:этанол:аммиак кони. (10:1:0,25) И геля "Энпаркол 2" в системе - толуол:аиетон:аммиак коки. (20:5:0.25).

2. Показана возможность использования Уф-спектгофотонетрии в анализе.коллагеновой губки и геля "Энпаркол 1":

- определены оптимальные условия для спектрофотометрического анализа ингредиентов НЛФ (растворитель, длины волн):

- определены удельные и молярные показатели поглощения пар-мидина и эмоксипина в 0,01н растворе кислоты хлористоводородно?»

- выбраны оптимальные условия для извлечения ингредиентов из лекарственных Форм (растворитель.1 вреня и температура экстракции).

3. Разработаны УФ-спектроФотометрические методики количественного определения компонентов губки и геля "Энпаркол 1". обеспечивающие селективность определения. Относительные ошибки определения среднего результата количественного содержания компонентов губки, для париидина не более 2, 2'/ и эмоксипина - 2, 0и . - геля, ллл иарии-дина не более 4,5/ , эмоксипина - 4,6/. Относительная с тематическая погрешность П{ определении г.армигшна составляет в губке не более -2,7/ и в геле не более -5, о/.

4. Методом равновесного диализа установлено, что веиества достаточно полно шсвобождаются из лекарственны:: Форм и максимум концентрации пармидима из губки и геля наблюдается через 6 часов (8486 у.) и 8 часов (92-93'/) соответственно, эмоксипина - через 5,5 часов (95-97/) и 6 часов (95-98'/) соответственно.

5. Изучена и практически подтверждена возможность применения ЮТХ для анализа геля "Энпаркол 2". Определены оптинзльные Условия разделения пагьидина. эмоксипина. лидокаина . нипагинэ и динетил-сульФоксила при использовании обрашенно-Фазной системы: согбент УльггасФер С« и эл»ент - аиетснитрил. Фс-сФатный буфер 0.1 И г>1Г= 3. О

(15: 35).

6. Разработана ВЭЖХ методика идентификации и количественного определения пяти компонентов геля "Эмпаркол 2" на модельных и серийных образцах. Предложенная нетодика характеризуется высокой селективность», воспроизводимость», точность». Относительные ошибки определения среднего результата не превышали 9,0% для всех ингредиентов геля "Эмпаркол 2".

7. Показано на основании данных физико-химических исследований при ускоренном и естественном хранении губки в полиэтиленовых пакетах, что коллагеновая губка стабильна в течение 18 месяцев наблюдения. Остаются стабильными и гели "Эмпаркол 1" в стеклянных банках и алюминиевых тубах и гель "Эмпаркол 2" в стеклянных банках при хранении в естественных условиях в течение 24 и 12 месяцев наблюдения, соответственно.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Спектрофотометрическое определение смеси пармидина и эмокси-пина в коллагеновой губке. /С. В. Чернова. Е. В. Истранова, В. Н. Кузина, Р. К.Абояни// Резервы совершенствования лекарственного обеспечения населения РСФСР. Тез. докл. научно-практической конференции, Владимир, 1991. -с. 103.

2. Хроматографический анализ смеси пармидина и эмоксипина в коллагеновых губках /Ю.А.Полякова, В.Н.Кузина, С. В. Чернова, К. В. Ка-сунова, Е. В. Истранова // Контроль качества лекарств : Информационно-методический бюллетень N 2 ВНОФ. Москва, 1992. -с. 64.

3. Лебедева Е. В. Кузина В. Н. , Чернова C.B. Идентификация мне покомпонентной лекарственной Фцгнн на основе коллагена с цг'пользо ванием тех. //Актуэльнчр вопросы медицины: 'Геэ легл гсштк.' к студенческой конференции пэгвчгаеннеп "50 лето» АНН, H' citm, г3?п. ч. i с. ггь.

4. Сенекина К. С , Куг-шп Р H. , a шмекни Р Ч к Tin» • Un ин • • :i

ii,ip(iii:iiiH3. -i i :■ <-i;îj iiii î, нилни!;?, и ; ч<* !! i p ' • '< .

дон вэгя // Клинические и экспериментальные исследования в медицине: Тез. локл. 90-ой конференции СНО НИА и итоговой конференции Российского конкурса студенческих научных работ. Суздаль. 1993.-с. 106.