Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в контроле качества алкалоидов из группы тропана и их синтетических заменителей

На правах рукописи

СЕРЕГИНА Елена Викторовна

ПРИМЕНЕНИЕ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ В КОНТРОЛЕ КАЧЕСТВА АЛКАЛОИДОВ ИЗ ГРУППЫ ТРОПАНА И ИХ СИНТЕТИЧЕСКИХ ЗАМЕНИТЕЛЕЙ

15.00.02 — фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва — 1995

Диссертационная работа выполнена в Ярославской медицин cKoii академии и НИИ фармации.

Научные руководители:

кандидат фармацевтических наук, профессор А. X. Л a ñ nano в, доктор фармацевтических наук,

ст. научн. сотр., чл.-корр. МАИ Н. Н. Дементьева.

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, ст. научн. сотр. С а л о м а т и и Е. М., кандидат фармацевтических паук, доцент С а д ч и к о в а Н. П.

Ведущая организация: Государственный научно-исследовательский институт по стандартизации и контролю лекарственных средств мннздравмедпрома Российской Федерации.

Защита состоится «¿г» а 1995 г. в часов

на заседании специализированного Ученого совета (Д 074.28.01) при научно-исследовательском институте фармации по адресу: (118418, г. Москва, ул. Красикова, 34).

Авюреферат разослан »

Ученый секретарь специализированного совета (Д 074.28.01) канд. фармац. н.

ст. научн. сотр. Л. М. Боброва.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕШ. Наото.щий этап развития фармтцевтичес-:го анализа характеризуется повышением требований к качеству экаротвзЕпых ородста. Основпыш критериями меидународпых требо-ший оценки качества являются чиотота и отабштнооть фарыадэв-гаеских препаратов,что озясгпо'о теобходишотгп поотоянпого со-эршенотвоватга технологий и методов контроля походных я проивку-эчных продуктов синтеза,разработкой способов стандартизации ле-цхзтзенного средотва. При решении теоретических .и практических эдач но реализации этих требований вое большее опачение приобрело? селективные, виоои^чувотпиталъныэ и точные физтю-хиничеокяв зтоды анализа.

Наиболее быстро развивается различим варнаята храматогра^и-зскях иэтодоэ,и s чаатпоати выоояоэффоктиппвя нидкоотпая хро-когрсфи (Вс7Х)0 которая оугротвенпо превосходи? ионообменную, зшгсолойпуз. „а по некотории.параметрам и газоауи хроматограф®, трогай диапазон шл, .суляргтих цаоо изучает.« гегуютв, высокая ^стзнтелыюоть анаюша в пироном кптерзалэ температур , сбео-зчзшгэт иокличителышэ условия для исследовании лабильных ло-эрствэггшх средств.

К- тагам лэкеротзвнпии средствам относятся алкалоиды из груп-а уропаяа и int синтетические заменители: атрошша сульфат,го-атропкна гидроброьтд, окополаиина гидроОршияРксккяа гидрохло-;1Д,тсоппц:я1 и тропгфэн.

Вяэдрэпнэ BSiX а практику работы цептратышх заводгаетх ла-эраторпй, шгаральпо-сртлитическпх лабораторий окствш Ш" Сар-зцка" и фар^гацевпизегек производственных предприятий является эновой форшфованил ноешс подходов и разработки объективных кри-эрвоа оценка чиототц, стабальноотп, качественного п кешяеот-зпиого со^та?а лекарственных фору.Еирогаэ Еспольваваже ВЗЗХ

в практической деятельности сдерживается в •огяэа о недостатков унифицированных методик для многих групп препаратов,в тон числе и для алкалоидов из группы тропана.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Цельв «аатоящрго исследования явилось■изучение возиоанооти применения BSSX в фариацэвтичеокш анализе алкалоидов группы тропана, их оинтегагчесгсих заменителей« атротша сульфата, гоматропина гидробромида, окослпшшш гидроб-рошда, кокаина гидрохлорида, тропауиа и тропафапа в код ©ль пых амеоях и лекарственных формах.

Для достижения поставленной цели необходимо решать оледущна основные вадачи! . .. .

1. Изучить хроматографическое поведение и определить озтииальвыа условия хроматографичеакого равделения изучавши препаратов.

2. разработать методики качественного анализа препаратов из группы трепана к их синтетических заменителей о Еопогьэованиеы. основных хроматографпчеоких параметров(время удергашанкл, ко-. в4фициент емкости,'сп&ктраяьныэ отношения..

3. равработать методики количественного анализа изучаемых де- . каротвенных средств в модельных сыеоях.

4. Научить хроматографячеокоэ поведение, определить оптшаяышэ условия разделения и раареЛсгаать ушфщироввпкыэ изтодпки анализа походных и промежуточных продуктов oisiiosa атропина сульфата, гоматропина гидробрсмида, аропацина и трошфпа.

В. Установить оптимальные условия хроиатографироаания и разработать методики BSRX анализа алкалоидоь из группы тропана в многокомпонентных лекарственных формах .

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. На основании изучения хроматографичэоких свойств в обращвнно-фазной варианте хроматографии о использованием сорбента Сепаров Cíe в элвента.состоящего из омеои ацэто-

• нитрила, иатаааяа.иоа-парным реагентов,буферных раотворов о различным значением рН а ооотнозэшюи коцйонвнтоз,выявлены {акторы, штяаднэ на разделение алкалоидов па группы тропапа и их снитчти-чоогапс запените,.г~й в условиях. кзократичесгаго,тек и градиентного мыирозипл.

С. помйфз хре^гтотра&яеоких параметров :времена удерживания, коэффициента емкости,спектральных отновеняй разработан мвтедолегч-чеисий подход к идентификации алкалоидов из группы тропапа и полупродуктов синтеза, веютчгшазйоя л выявлении прямой зависимости адсорбции изучаемых ооединений от величиям рН,ион-парного рванета, концентрации оргашпесеого кодификатора, который лег в основу методик когкчеотзетшго определения их а модельных омеояк исходных,прсмэ-ясуточних и конечных продуктах производства изучаемых препаратов.

. . С копалызозспиеы метода внутреннего отандарта проанализированы Егьсгаргшпшэ лвкдротаешп» фэрмы,мази,таблоткя и многокомпонентные гогсси.в соотаз ¡юторых входят 'изучаемо ооодинепкя.Разработаны ушфшдарогалныэ нзте, ,кки юс анализа.

ПРАКШЧЕСКАЛ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. На оонозэ проведенных 1кз-огодоваякй разработали н внедрены:

. - Мэтодшса гештчеотвзтгаго определения атрошша основания изтодоя ВсГК( ате пяэдрепкл II 1 от 24.02.94г.центральной эаводогсой лаборатория завода "АкряхгаГ'г. Москвы)

- Штодгаа идепифосации и количественного определения тро-козой,атроповой ктолог и атрошша основания методом ВЭЛХ (акт внедрения ¡1 2 от 24.02.04г. центральной зазодегай лаборатории завода "Акрихкя" г.1!осг.".т)

- Методика количественного определения гоштропина гидробро-мцда методой ВЗЗХ( ага внедрения И 3 от 24.02.94г.центральной городской лаборатории завода "Акрихин" г.(Москвы)

- Методика количественного определения тропила в продукте конденсации тропина и шшдадьной кислоты методом ВЗЕХ (акт внедрения N 4 от 24.02.94г. центральной ааводокой лаборатории завода "Акрихин" г.Москвы)

- Методика качественного и количественного определения атропина сульфата ( акг внедрения N 1 от 18.02.23т. Ярославского Ооро оудеОно-кедицинокой вюопертизы)

- Учебио-иатодическоо поооОис 'Применение ВЗЭХ в контроле 1сачаства препаратов из группы тропана п их синтотичеоких заменителей" (акт внедрения МБ от 01.01.9Sr. Тшешсого медицинского института, акт внедрения ИЗ от 01.01.05г. Московской медицинской академии)

- Учебно-ыетодичеокое пособи© " Применение ВЗЕХ в ясотадий-контроле оинтэза атрошша, гоматропина, тропаципа и'тропефопа"

(акт внедрения N7 от 01.01.95г. Рязанокой медицинской академии,, акт внедрения К8 от 01.01.9бг.Пятигорокой государственной фарыа-. цавтичоокой академии)

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные результаты проведенных исследований продотавлвка на: Всеооазной копферовдш: "Щшэнениэ хроиато-гргфии в пищевой, шкроОиологичеокой и медиципокой прошплек-нооти (Гедендашк, 1990 г.), Всесоавной научной конференции "Молодежь т практическому здравоохранения (Шонва, 1990 г.),Международной научном симпозиуме. 'Методы контроля лекарственных средотв,

современное оостошше и перспективы" (АпхаЗад, 1991 г.), Мзхреопу-

о

бликанокой конференции "Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных оредств" (Ыооква, 1991 г.),научно-практической кофзренции "Фармацевтический анализ-науке и практика"(Ысхлсее, 1992г), I Российской иациоциональнол ыззгрзсое "Человек и лекарство" (Москва, 1992 г.),иеквуэовокой научно-практической конференции професоороко-

- преподавательского ооотава (Пермь, 1993г), VI симпозиума по молекулярной, яидгсоотной хроматографии (Москва, 1993г. ),научной кон$е-ренции "Решение актуальных задач фармации на современном этапе" (Москва, 1994г.)

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовало .10 научных работ .

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМНОМ ПЛАКШ САПМЦЕЗТИ-г1ШШХ НАУК. Тема исследований связана о осноитлли направлениями Кг.^эдсмстзотгаго Научного Совета по фармации к 47 АМН га.

НА ЗАЯ$1ТУ ВЫНОСЯТСЯ следуйте основные поживши:

- опт!м:з!тро2аяы условия хроматографического разделонпя нетсдоч ЗЕлХ аасзлогтдов из группы трепана л их синтетических заменителей;

- мэтодшс! качественного и количественного определения-изу-час!их препаратов з модельных смесях истсдсм ВЗЗХ;

- ул:С:здфовЕпны9 методики постадийного контроля синтеза атропгпт сульфата,гоматропина гидробромида.трспащша.и тропа^на;

- !:этад!г."1 скал за кнъогаронт« лег-рстссяшлс фсрм.мпаей, тпЗлето:: п ¡сюгрксмпопентн!« смесей, в состаз ¡сотсрда входпт игу-

ттрсц 41 [ъ СО ЭДШТСПИЛ•

01Л£М Л СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИЯ. Диссертационная работа ипло-••.?яа па 1С7 страакцзс мгппг'юпкспого текста:ссдеряит 44 таОлт?! и ■11 рлоуно;:. Работа состоит из введения, сОзо5:а литературы,четгрэк глаз Екояер^онтагьинх исследований,сСгих выводов,списка литературы, £кеэч22"9го 202 нагзленовапия.из шк С8 иностранных азтороз, и приложения.

Со введении оферту-чроззли актуальность, цель и задачи исследования, поиазаны научная новизна и практическая эначимсоть работы, осговпые положения Бынооииьге на оацнту.

В первой главе .сбсср литературы, представлены сведения о

химических и фигига-химических истодах анализа производил! грогш-на к их синтетических заменителей, показаны осношшэ бозшянуэ пути использования современник методов в анализе изучаемой грушш препаратов.

Вторая глава посвящена разработке опхшгапышх условий хрша-тографического разделения препаратов из группы яропапа.

В третьей главе изложен иэтодологичеагай подход к идоитз^иха-ции алкалоидов группы тропана,представлены рогультаты етааодовааий по разработке методик количественного определения изучаэшх прзда-ратон в модельных' снесях. , •

В четвертой главе проведены носледовация по ишашведна уоло-В5ш поотадийного контроля синтеза атропина сульфата, гоиахропшш пдроОроывда, тропацкна и тропафэиа,и .разработана штодии качео-твепиаго к количественного определения исходных и проиаяутачнчх продуктов производства изучаемых препаратов.

Пятая глава посвящена возросши оптимигацщ! условий хроиато-. графироваякя методом ВЕК и создания изход1к кодкчаогвешгаго анализа шогокстганентних лекарственных ¿ори.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Оптимизация условгЛ анализа ал^лоэдов из группы уропаяа

и их синтетических заменителей . Объектами исследования явились лекарственны? средства, производные тропана ( атропина сульфат,гоматропина гкдрсОрс;ед,оиэ-нолЕАйша гидройрсащд, кокаина гадрохлорид,троаациа и тропг&ш), отвочаиш.11э требованиям ГО X и I®. °

Длл проведения экспериментальной рзботи Сшщ приготовлена модельные с!.:&си исследуемых ооединзшй о концоктрзцодзй О, Б иг/ил: состав N 1 - атрошша сульфат, го^трошпш гидроброизад.гакзшЕа гкдрохдорид.тропацин.тропафен; соотаз К 2 - атрошша сульфат,

июпшшлка Г1^роОрой1Л11юн.1И!ха гидрохлорид,тропацин и тропа$еи. 5 ¡сачостзэ раотаорятехя использовали 0.04 М фосфатный буферный >зствор.

Лоследозешм проводили на отечественных кидкостных млкрекс.-о-гочких хрсызгографах oepini "Мпшхром" (ПО "НаучприОор", г.Орел), хзиадэшод одколучевш сканируем УЗ-споетрофотомотркческкм де- ■ :екторс!1.

Используемая хрсматогрефкческая система вкачала аналитические »гонка пэ воряазезкдей отали размером 64 х Z ш.Оорбепт-Сспарон Сю "QZ?) а диаметром частиц С ьетл. Эффективность колонок находилась в [рэделгх <iOCO-COCO теоретических тарелок.

Пси подбора подымай фаз использовали смеси метанола и аце-■опзтряла в различии соотношениях. В качестве полярного ксупонента и:стсн г.р:з;з"пгл разлитого Суфэрииэ рпотг.орн и яон-ПЕрки? репгенти: 1.0111 фсЫлтшЛ буфэр со значением рН 1,5--1,5 (С5),фосфорная глегпта, 1.05 IJ гзптагсульфопзт натрия и др.

С цггю гыяаае'-кя огнжпелерпехзтвй хромзтограЗмчеекого поее-зшя! в ряду алкалоидов группы трепана научено влияние изменения осгпза подвижной на пэлэткну параметров коэффициента емкости к*) и гс'фэктшгпостп (Н) анализируемых соединений.

На оспо;"л;"1 исслодозагглй установлена ¿звискмость хроматог-гЗячесгаэго позедггст прсиззодшх тропаяа от структуры и фпзи-о-хгсячзегах ссойстз ве:^естз:раотвсримости, полярности, нислот-ооти и основности.

В результате прозэденнсй оптгадгаацки хроиатографических злсенй анализа изучсоединений получено достаточно хоропее зэделони. модельных смесей и i,N Z- в подвижной фаза ацетоиит-!Ш-ЙВ рН 3,5 (система А) в соотнесении компонентов 25:75(рис.1). цольп сокращения врамзли анализа и улучшении формы пиков были

- е -

Хроыатограша модельной смеси состава N 1 в изократическоы рекше • злюирования

О 2 4 6 '8 10... 16 В 20 шн 1-гоматропина гидробромид,2-атропина сульфат,

3-кокаина гидрохлорид, 4-тропацнн, Б-тропафен

Рис. 1

Хроматографа модельной смеои состава N 1. ' в градиентной режиме элгаирования

0 2 4 6 8 10 мин

■ 1-скополамина гидробромид,2-атропина сульфат, 3-кокаина гидрохлорид, 4-тропацин,8-тропафен Рис.2

прозодеш дсполпптелитыо исследования по достижения разделения О применением'режима ступенчатого градиента,создаваемого путы« последовательного элвнрования пробы (системой А) о содержанием ацвтонитрила 20,30 и ВОХ(яо 600 ъкл)(рио.2).

Для всех хроматографических гагкоп величина разрешения составила от 1-до 2, что полностью удовлетворяет требованиям ВЗЗХ. Время анализа но прэвыиает 10 минут.

2. Идентификация а количественное определение препаратов из группы тропана в модельных смесях

В оонову разработки методик качественного и количественного определения нсоледуемьг' соединений были положены результаты оптимизации хроматографических условий анализа препаратов из группы тропана и их оинтетичеоких заменителей при изократическом и , градиентном ЭЛЮИрОЕЕНИИ!

- Колонка из неркавепцей стали размерен 64x2 км,сорбент Свпарон Ciat подвижная фаза -изократичеокоо влюированиэ ацетояитрил-СВ о pH 3.5 (системой А) о соои лпэнием компонентов 25:75 .

Колонка из 'нержалегзадй отали размером (34x2 мм .сорбент Сэпароя Cíe; подвижная фаза - смесь растворителей указанного еышэ состава с изменением концентраций ацетспитрила от,20 до 60S при градиентном алвироваюот.

Разработка упкфицированной методики идентификации исследуемых препаратов осуществлялась на основе определения трех хрсма-тографических и спектральных параметров: времени удерживания (tr), коэффициента емкости (к') и спектральных стнояений (D), рассчитываемых в режиме двухвалковой детекции при 210 и 220 ни о опорной длиной волны 220HU.Стандартные растворы исследуемых препаратов хроматографировали о использованием оптимальной хрсматографичес-кой сиотемы и по данным 10 параллельных опытов находили средние

i

арифметические вначенип 1Г. к* к и, а такхэ стандартные откаонаига и относительную опибку атих величин при иэократичеоида н градиентном режимах алюировании.(табл.1).

Таблица 1.

Результаты определения параметров идептв$ккаф:п иеучаешх препаратов и их метрологические характеристики (п - 10, Р - 95Х, - 1,434)

Название tr к' 0

препарата X . э е,Х X 3 X в е.,Т.

иаократическсв длюированиа

атропина 3.19 0.04 0,88 1.23 0.01 0.В5 2.86 0.03 0.74

сульфат

гоматропина 2.49 0.02 0.69 0.74 0.01 0.95 1.92 0.02 0.70

гидроОромид .

скоподаыина 2.06 0.02 0.81 0.7Б 0.01 0.77 1.71 0.02 0.62

гидробромид

кокаина 4.63 0.05 0.79 2.24 0.04 1.21 0.Б2 0.01 1.04 гидрохлорид

тропацин 0.09 0.09 0.72 5.38 0.06 0.60 1.49 0,02 0.84

тропафен 18.64 0.18 0.68 2.04 0.11 0.66 1.77 0.03 1.17 • градиентное алюироваяиа

атропина 3.20 0.05 1.03 1.24 0.02 0.83 2.85 0.03 0.83

оульфат . .

гоматропина 2.49 0.03 0.79 0.74 О.О"1 0.90 1.92 0.02 0.83 гидробромид

окополамина 2.09 0.03 1,02 0,76 0.01 0.91 1.71 0.02 0.64

гидроОромид

кокаина 4.72 0.07 1.01 2.30 0.04.1.26 0.Б2 0.01 1.12

гидрохлорид

тропацин 6.60 0.09 1.02 3.62 0.03 0,93 1.49 0.02 1.09

.тропафен

9.10 0.13 1.03 Б.37 0.10 1.26 1.77 0.02 0.96

Последующую идентификацию иоследуе^ых препаратов а модельных сиесях N 1,н 2 ооудеотвляди по разработанной методика путей сравнения перечисленных вьш. параметров оо стандартными значениями атих величин, приведенными в табл. 1.

Количественное определение алкалоидов группы тропана и их

• спптэтачегаск зшэтггелой а 'модельных смесях(I), (II) проводили миодсм епсетого стандарта.

С цэдьп поогроошя калибровочных гра$йков установлен интервал линейной эавиокмооти высот пиков изучаемых соединений от их концентрации, историй составил для всех препаратов 0,2- 1,0 мг/мл. В выбранной интервале концентраций строили калибровочные графткй производных тропана и рассчитывали их математическую модель.

Проведенные исследования позволили разработать обцув методи-и провести количественный анализ алкалоидов тропаноього ряда методом ВЗЗХ. Параллельпо проводили количоственное определенна изучаемых лекарственны?' средств официнаяьним М9тодсн(неподное титрование).Результата сравнительной оценки 2-х методик представлены з тсйз.2.

Таблица 2

СрггЕггегапая оценка результатов анализа изучаемых препаратов по рг"Г22отсжтой ВЗЗС «отодгасэ (1) и неполного тктроааяия (2) ( п- 10, Р«5 7., Ьтг-0л.«2,гЗ, N9, Гтг0л.-4.85)

Прспгрг.т Миод Б2 3 лх Е 1 ? 5,£

1 07.-12 4.7С5 2.10 4. В49 б. 03 3.72 12.02 2.58

суКёгйГ <5 и.пз о.ззэ 0.63 1.423 1.43 г.-¿о 12.02 0.44

ГС" "^ТРОР'ПП 1 сз..;з 4.473 2.11 4.730 4.ЕЗ 2.35 10.59 1.57

гггпсСрсм:^ 2 31 0. -"07 0.61 1.442 1.45 3.42 10.59 0.69

сстпзл гтгл 1 сз.со 2.334 1.53 3.453 3.50 2.43 3.40 1.?.0

"9.00 О.ОВо 0.83 1.871 1.69 3.82 3.40 1.00

1 П7.ез 4.221 2.03 4.В44 4.75 3.31 5.81 2.17

¿5 С9.13 0.723 0.85 1.021 1.94 3.23 6.84 0.57

Г" г* ту г- ТГГ^| 1 07. С4 0.173 2.49 5.616 6.76 3.13 6.10 2.40

п ГЭ.74 1.013 1.01 2.270 2.31 3.95 0.10 1.23

гропгсзя 1 53.31 2.535 1.59 3.593 3.05 2.70 5.37 1.39

2 99.12 0.472 0.69 1.553 1.57 4.05 5.37 0.88

Для кол!!чоственпсго анализа пропсратов из группы тропка и их спзготпческях заменителей з модельных смесях 1 и II 2 определены

калибровочные коэМициенты ивучаешх соединений и устанопленяа линейная зашюкыооть высоты пика от концентрации в интервале от 0,2 до 1,0 мг/цд.

В табл.3 представлены результаты определений компонентов ко-дояышх смесей N 1 и N 2 при градиентном алшроааши.

Тагаа) сОразои, использование ВЗСОч для анализа доделышх омэоей изучаемых препаратов позволяет значительно повысить сзлектшшооть, сократить продолжительность аналкгз при сохранешш высотой точности определения.

Таблица 3.

Д.»шиыз статистической обработки результатов количественного определения изучаемых препаратов в исдолышх оыесях ( п- 10, Р-05Х, N9, 1табл.»2.2В )

Название .Петрологические характеристики

препарата

X Б Лх Лх е,х

атропина 66.61 13.89 3.73 1.13 В. <13 2.66 2.67

сульфат 97.99

гоматрошша 8.64 2.94 0.93 6.04 2.10 '2.08

гидробромид

скополамина 93.08 В.05 2.84 0.60 6.42 2.03 1.99

гидроброыид

кокаина 03.12 12.92 З.БЗ 1.14 ii.ll 2.Б7 2.52

ГИДРОХЛОРИД

ТрОПГдЩШ 97.18 19.40 4.40' 1.35 9.0« 3.1Б З.СВ

тропарей 97.05 22.PS 4.73 1. £0 10,70 з.гз З.ЕЗ

3. Прт,!онещ!д БЗЛ е постадшшоы контроле скитсаа атропина оульфата, гоыатротш^ гидроброшща, тронацина и тропафзца. В работе были исследованы образцы исходных продуктов, полупродуктов и конечных продуктов синтеза коследуемых препаратов: трошш,трошшон,гроповая .атроповая кколоты,продукт конденсации

тропила а миндальной гаголоти, атропин ооноваш-1, атропин фармакопейный, гоматропип фармакопейный,дифэнллукоусная кислота (ДФУК), тропащш техничео^ий, тропацин фармакопейный, ос-фонил-8-(пара-ацетоксифеяил)- проаконозап ююлота (ФМПК), тропафвн фармагапоЛ-пый. Для проведения оптимизация храиатографических условий анализа готовили стандартам, paoiscpu уг^^лных соединений, двачг ! перэкрксталлизозшшьк из этилового спирта,а такта иоделышо смеси: состав КЗ- тропкн, тропозал кислота, атропозач кислота, атропин осио-лапио; состаа V-l- SOZ раотвор трошшз в мэтилозсч спирте; состав К5- трошя п продукт .сопдоесецот тропила и миндальной кяолот!1;со-отав КЗ- тропил и тропкноя; ссотав-Н7-тропш п тропащш технический; состав КЗ- Д О У К и тропащш технический;состав К9- Ф А 8 D X и тропс^он.

С пдз:з определен:« оптимальной длим волну детоктир вания пзучеггл сягггграхышэ харастеркотгаот п уо-гапсплепн облоохя кгмоя-•гаглыго слотопогло'^с-шгя изучавшее соединений. Установлено, что д;л ;сря{2тогрп$провш«т »юдолышх слосэ'л (ссстлпз 3-9) (полупро-лу:гл1 enaresa атрожшз.гс^атрогата.гропацина и тропафзиа) олгп-^ "гл.rc"i кшакоз длина золки 220 пч.В хро«атогр&5ячэокую око-гому c.:cc.":i;:a к?злкп:«ее:?£1 uosono размером 64 х 2 ум ссрОонг "Сшцизои (0 •;;„•!)Л'а ссказкш р^зультатои ярэдвсрптолшк опигоз для .трогодатях ояпгйгсэс'Л! Сг'та M'Spsirj подают-'э фтяу, лр'Эдстап.т.а-иССОЙ CMSC5* ПСДТШК рг.ствсроз различных солей О ОРГГЯКЧЭДПЯКД усдп5:2пгсрг"и »гэтояолеи п эдэтопитрилом. 8 результата устргоялеко, ':то оптимальной скотгмо.1 хро«'птогр^5'.!роврп::я полупродуктоз отга-тоза гс!птрошпта(?гол?л1пач омгса ссогага 4 ч о) язлтстоя система сцэтозптрпл, оодбр.ч-сц:п': 0,054 гептилсулхоната натрия -v3 рК 3,6 Гй:Б0 (В),для модельных смесей состава 3,0,3 п О-скотсма метанол, -зодерпгщий 0.03Н гептилсульфопата натрия - СБ(рН 3,б)з соотношении

-

компонентов БОхБО,40:60,60i40,e0:40 ооотвэготазетп (рхю. дал смеоп M 7-ацэтотгграа-СВ(рН 3,Б) (БО:БО).

Идвиткфикациа' иосдэдуеыы.4 водаотв проводили со разраОоге^зой раиее иэтодика.По ресультатш 10 параллель шлс опытов бшш паЗдэны с )дкие значения определяемых храматотрсфичэощ.. псрамэтроз(врз-мл удервдвашя (tr) , коэффициент оыкооти(к'),опектралышэ отношения (D Ё54/его ),стандартные отклонения и относительная оггбка определения, представление г табл. 4.

i Г i

. Таблица 4. ,

Результаты определения хроматогра' чоскпх параметров полупродукте© сютеса коолодуеыьк ирзпаратоа н œc ттрохо-гичоокиэ характеристики при kso::psïi:40o:s:j сп-прогадш (п - 10, Р - C5Â)

Название tr k* ! D

вещества X s е,Х X s c,%j X 3 s.,%

троглш

троповая

кислота

атроповал

кислота

атропин

оонованиэ

трошшзц

Д О У К

О А О П К

2.97 0.04 0,06 2.Ü5 0.02 0.71 4.23 O.Oi О.БЗ 6.01 Ö.07 0.75 3.01 0.04 0.93 7.03 0.07 0.71 4.70 0.03 0.72

1.08 0.01 0.78 О ~5 0.01 0.75 2.07 0.02 О.БЗ З.БЗ 0.04 0.S7 1.11 0.01 0.G2 3.02 0.03 О.БЗ 2.20 0.02 0.7Б

ч.вО 0.01 0.89 0.04 0.01 0.82 0.04 0.01 0.04. 0.03 0.01 0.7Ö О.1С 0.01 0.Е7 0.03 0.01 О.БЗ 0.04 0.01 0.С2

Поододукдую цденти&кгвдга полупродуктов кослоду/слс

прзпзратов в ыоделыщх сыэоях H 3-0 проводила со разработанной i «тод; .-а путем сравнения внгшшй ti к'в D со стандартная: бзлп-чинами,приведенные в табл.4. Найденные скакишя хромагогрдОачбС-ких параметров находятся г установленных пределах стандартных Уклонений, что свидетельствует о достоверности и объективности

- 15 -

Хроматографа модельной смеси N Я. .1

О 2 4 6 8 10 мин

1-траловая кислота, 2-трошш, З-атропоьзя кислота, 1-окополашта гндроОромид(в.о. ),5-атрйпин основание Рко.З

Хроматографа модельной Хроматографа модельной

■ • смеси И 5 4 смеси N б

2 Г-П 2

I

I

' 2 4 6-8 шн

1-гоиатропина гидробромид (в.о.)

2-трошш

3-продута конденсации Рис. 4

\г.....

6 ' 2 ' 4 ' 6 мин

1-тропиноз

2-тропкн

Рио.З

разработанных условий качественного анализа,

Количественное определение полупродуктов синтеза атропина, гоматропина .тропацина и тропафена проводили методом внутреннего стандарта, в качестве которого использовали гоматропина гид-бромид или скополашша гидроброшзд.в случае смеси N3. Изучен интервал линейной вавиоимооти и поотроены калибровочные графики исследуемых соединений в пределах концентраций от 0,02 до 0,10 иг/ил. На основании данных предварительных иооледований разраба-

I

таны унифицированные методики для модельных смесей N 3-9 .

Результаты количественного определения анализируемых омеоей были статиотичеоки обработаны. Метрологические характериотикк приведены в табл. 5.

Таблица Б.

Данные отатиотичаской обработки результатов количественного определения полупродуктов синтеза атропина,гоматропина, тропацина и тропафена (п-10,Р-9БХ,?-9Д-г.2б)

Название вещества Метрологические характеристики

. X 52 Б Бх АХ Лх в.*

08.32 7.63 2.76 0.87 6.24 1.97 2.01« 08.46 Б.01 2.43 0.77 5,49 1.74 1.77 07 07 9.60 3.10 0.08 7.01 2.22 2.28 . 07.34 6.01 2.45 0.78 Б.Б4 1.7Б 1.80 0.49 0.001 0.01 0.01 0.02 0.01 2.11 08.56 6.80 2.41 0.76 Б.4Б 1.72 1.7Б 08.88 6.84 2.62 0.83 Б.92 1.87 1.89 Разработанные методики качественного и количественного определения были использованы в анализе исходных и промежуточных продуктов синтеза атропина, гоматропина,тропацина и тропафена:

троповая

кислота

атроповая

кислота

основание

атропина

тропин

тропинон

Д Ф У К

Ф А Ф П К

SOX раствор трошгаа в метиловом опирто, продаст конденсации трогшна и миндальной кислоты,тропинок в тратпшв, технический тро-пацин и тропафен,фармакопейные атрошша сульфат,гоматропина гпд-роброизщ.тропацин и тропафзп хршатографироваяя в установленных ранее оптимальных уолов!шх.

В анализируемых оСрасцлг. бн*ч обнаружены олвдутшяэ примесг примеоь трошшояа в трошшэ в концентрации но болоо О.БХ,примеоь трошша в техническом тропацшш и продукте конденсации тропила я миндальной кислоты не более 10Х.

Тгапм образом разработанные методики постадийного контроля синтеза атрошша, гоматропина,тропацина я гропа-'-эна отличаются высокой чувотвитольпоотьп.точноотью и позволяют оценить различные этапы производства п*¿паратов.

i. Анализ декзрствешщх форм , содержащее иг -чаемые препарата, методой ВВЗХ.

Из известных в яаотсяцзэ врзмя лекарственных форм, оодерггл-е?пс изучаемые препараты, сшш выбрали легаротвешшэ смеси контроль качества которых , известными катодами,вызывает определенные трудности.

ЕиЗор оптшадышх условий юэн^оля качества исследуемых ле-(крствещэк форм (табл.7) проводили на основании предварительно полученных данных по изучения спектральных овойотв и хроматогра-фпчэокого поведешш соединений.

Дни количественного анализа компонентов изучаемых прописей прииопэп метод внутреннего стандарта. С целью выбора внутренних ствндартоз изучены лекарственные препараты и химические соединения, близкие к исследуемый по структуре, фиаыю-хишгческим и спектральный СЕОЙОТВЕИ.

Таблица 7

Составы лекарственных форм.содеразздк алк: -зцди из группы тропана и их синтетических заменителей

Ингокционныз лекарственные фарш и раствори

0. II раствор атрошша раствор скопа г.ша

сульфата для инъекций гидробромид"1 0.0531

тропаФен лиофиллиэиро- раствор тропафана 1 п 2Х. вавныи по 0.02 г.в

шпулах атропина сульфата 0.002г.

новокаина 1.0г. раствор гоштродшт раотвора натрия броизда

гидробромида 0.25 и 0.1% из 4.0-1е0ил. .

Лекарственные ф-эрюл.пспольз» .«¡ш офтальмологии

глазные капли о атропина глазц^л газь о атрошша оульфатоы (0.01;0.05;0.1; оудьфэтоы IX 0.2;0.3;0.Б!,«)

атрошша сульфата 0.1%-11лл атрошша сульфата 0.1г. адреналина . -0.17. 'ил • когсаппа гвдрохлорида 0.05г. гидрохлорида кисший борной 2%-10ш;.

димедрола 0.1Бг.

иовокаина , 0.251 до15мл

Таблетки и лекарственные <~"*зои

таблегк.. тропацина по 0 01г.'

атропина сульфата 0.п15г. атрошша сульфата 0.02г. анальгина : 0.-* г. папалергша гвдрохлорцда 0.02г. папаверина. 0,6 г. фоноОарбилала 0.01г.

гвдрохлорцда сахара 0.1г.

Оптимальное расселение изучазшх лэкарствешшх форм было достигнуто при использоааяш колонки х 2 ьй! и подвилошх фаз описанного вьше состава (А и Б), о различный значение рН и соотношением компонентов. Детектирование осуществлялось при длинах волн, •;^ибол->э близких к ыагсншумзи погло1гпН1Ш исследуемых щ паратоз. В качестве внутреннего стандарта использовались гоматропина гцц-робромида.отгаламина гидробромида,тропацин и амидопир;ш.

На оледующэы зтапо о целью поотроения калибровочных графиков изучали вавиоимооть отношения высот пиков исследуемых соединений к

r.l'cctq пика внутреннего стандарта от копцэнтг Определяли интервал концзптрацкй, в ¡еэторш зга зависимость линейна. В выбранной шнорвалэ строили калибровочные кривые и о помощью метода нааивпьпах квадратов рзеочитызали уразнеши калибровочных графгаспа !1шэдого препарата.

На сюповашш прегодеггнух предварительных исследований был! разработали мэтодгаа качественного и козшчэотвоиеого определения кеяюзоятаз 12 схожти догаротпешшзс с^эсеи. Установлены EKooitaa восяропэводк^ость, селективность а доотозоряеють предла^пемых -ise-тсд:п:, пезволлз^к z 5-10 мил провести одкмзмептноэ качественное п галачеотвопжю определение гсаддого компонента спаси.

В U В 0 л u

1. Изучена возможность пркизнэ! я метода ВЕГЗХ для идентп^и-!1-^"1,колгг.:остп0!Шого'спрэлаленн<1,постс?^;йпого г-лштроля синтеза аполо-гдоз пз груша тровшга и от сиптэтяческпх взиешгтелоЛ.

2.С пспольсозашюм метода В5ЛХ па иодолып.« образцах лв-кэдяаэтж сродохз пвучопег хронзгсгрс^зчсахэ поподеш» и сята-ютяроззил условия разделения атропина оульфата, гсыатрошша гидро-Срггадп, сксяаза\тага гядрейх:? sn^a, racsima гвдрехлорида, тропацш'а г» тропг *:?па(о5рг.ч5ггоо-$сзкг:Л ссстжа , сербогс? Сепг.рон С иьодоэат -р^плотпоэ спогпс"зп::э ецэтопитряда я $со*сш:ого буферного рэст-гда с pH 0.5).

3.Грг-слоио рзздалокгэ а-палаидсп группм грояляз it j« скнто-тггггепгк стазпкгвгзЛ з теояргткчэского п градиентного

г> ".:":;•.--•::• ":"гл.

4. разработка уш^пс^огаклея |;отод'"<а ¡¡зентгфнкгцин кзуча-С1лп создипезяй а гюдолышх сыгоях о доитрогезпгн оояогздх грсаатогрс^аческшс и соскгрзлышх п£рз-этроз: вреизнп удор-иаа-

нил, коэффициента емкоота, спектральных отношений. Относительная •

ошиОка значений втик параметров не превыоыла"+ 1.217. при цзокра-

тическом и + 1.261 при градиентном вляированип. ' ' •

3.Разработаны иетодики количественного определения изучаемых

г чпаратов в модельных омвоах.Относительная ошибка методики ооота-

вила от +1.08 до +1.73Х при изократичеоком з-цюированиц и от+ 1,20

до + 2.Б8Х в градиентном рэиша. Проведена сравнительная оценка

предложенных нами методик о официальными методами,, Показана ьм-1

оокая специфичность методики при со;фал;эши времени анализа. .

б .Изучено кроматографическое поведение и спектральные характеристики походных и промежуточных продуктов оиптеза атропина, гоматропина,тропацина и тропафена. Определены оптимальные уоловкя хкоиатографирования тропогой.атроповой кислот,тропика,атропина основания, тропинона,дифеннлу.-оуонйй и «-фенил- в-(пара ацетокои фенил )прош!аноЕой гагалот .тропаццрз к тропафана.

■7. Разработана унифицированная методшса КПХ поотадийного контроля синг?аа атропина, гоматрощша„тропга5гаа и тропафэпа котора; характеризуется высокой чуьотвительноотью и опецифичпоотио.В образцах были обнаружены примесь тропшона в трсштэ в концентрации ио более + О.БХ.примеоь трошша в техническом тропацнпэ и продукте конденсации тропика и ь^шдалыюй ккодоты не более + 102.

8.Разработали ь^тоднкк анализа 12 многокомпонентных лекарственных форм, содерлвдк изучаемые препараты, о использованием метода внутреннего стандарта. Относительная ошибка не прев'-лзи-ла +

9. На основе проведенных исследований разработаны и научно-обоснованы ВЭЯК методики,позволяющие ооущеотвлять контроль кл-•;чотва препаратов из группы тропана и их сштетических заменителей на различных стадиях их производства и экаротвенных формах.

По тешз диссертации опубликовали оледуащ" работы:

1. СлакшшА В.Э., Пронин В.И., Серегина Е.В. Хроматогра-фпчоокпй анализ до^рйтввяшх с!.тоей//11р1Е,?онепие хроиатогра-фш з пищевой, ншфобнсшзгнчеасой и медицшюкой прошштн-ЕваттТоэ. дога.Поессюз. ганф.-М.,1990.-С. 105-103.

2. Сшшкгй В.Э. .Велозороп А.Н. .Сорэпша Е.В. Комплексное пршшвинэ физшсо-хишгаескнх методов в анализе летаро-твеншх ' сшсей// Шлодеиь - практическому здравоохранении Тез. докл. Зсессяз.пауч.копф. шлодых ученых я споп- .• иэв.-Н.,1990.-С.б2.

3. комплексное приыенетю совреиошшх.инотрудантальшас ыэтодоп анализа для стандартизации и контроля.качеотва лэ-¡ерстваншх срэдата/к'.Х.Лайпакав, В.Э.Слаиоккй, В.И.Еогрдпг нояа ц др./Л?этоды'!соцтраяя доклротпонних срздот-;Тоз.док. . Нэгщупзроля. науч. ста.-АпхгЛад, ¿е91.-С.Е0-Б1.

4. Сзрогкна Е.В. »Назадогай А.С.Прлнзнешю ВЕЗК для анализа огетих лс-кдазхпоппк:: смосой. из группы тропапа и шзда-Пола //ИроЗлеш стандартизации и гаштролп качества лоьзро-тзонЕых срздотвмют. копф.ГНИКСКЛС.-М.,-1992г.,2Бо.

; 5. Прпнзпегою созрензгтых фйаиг-о-ммгчес'сдх иэтодоз для стаядартпзацш! я ¡сонтроля 1сачеотва лекарственных оредотв/ Л.Х.Лайияов, В.З.Слаяский, В.Н.Богрдаяова, Е.В.Серэпша // Есэроосийокпй национальный конгреоо "Человек и лекарстйо"! Тоз.дога.-Мосгаза.-1092.-С.27Б.

0. Применение Епоокозффэктизпой ^ждкостной хронатсгра-фш з контроле ¡сачеотва цногожгюнэп'тных лекарственных фср'л/А.Х.Лзйпапоз, В.Э.Слансютй, В. Н.Богданова, Е.В.Серэпша// Фариадевтпчесютй ачализ - пауга и практике:Сб.науч.

трудов НИК Фармация Ш РЙ.-Ы.,1992.-1.£0.-0.99-104.

7. Лайпаноз А.Х. .Серзгпда Е.В.Прщаивюш В32Х в фарцг,-цэйтивескоы анализе производных тропава // 1&терц&ш нэк- ■' Еуеовокой е 49-ой научно-практнч. конференции ярсф, предо- . дазат.ооотавагТеэ. доклада. - Перш.-1093.-„.6СЬ01

. 8. Серегина Е.В.,Лайпанов А.Х. Применение ВЗЗОС в контроле качеотва алкалоидов ив группы тропвна//вариации.-1994. -И 1.-С.44-4. .

9. Хроштографичеокоа разделение алкалоидов производных тропана/Серегина Е.В. .Лайпанов ',Х.»Сланокий В.З.,Воронин И. А. //Еурн.фив.химии;-1994.-Т.В8,К 10.-0.1823-1826.

Ю.Сврегина Е.В.,Лайпанов А.Х.Иопольваванш метода вы}

оокоэффективиой жадкоотной хроматографии в поотадяйном контроле производных тро,. ла//научно-практическая конф., поовя-щенная БО-летию инотитута. СХЗ. кауч. трудов НИИ йершцни Ш РЭ,-Ы.,1994.-С.220