Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Взаимодействие лимфоцитов с бактериями у здорового и больного хроническим лимфолейкозом крупного рогатого скота

ВСЕСОЮЗНАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК имени В.И. ЛЕНИНА

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ имени Я.Р. КОВАЛЕНКО

На правах рукописи

КАВАЛЯУСКАС ПЯТРАС ВИТАУТОВИЧ

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЛИМФОЦИТОВ С БАКТЕРИЯМИ У ЗДОРОВОГО И БОЛЬНОГО ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФОЛЕЙКОЗОМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА -1990

Работа выполнена в Институте биохимии и Институте иммунологии Литовской АН

Научный руководитель

Официальные оппоненты:

Ведущее учравдение

- доктор биологических наук, профессор В.И. ТАМОШШАС

- доктор ветеринарных наук, профессор Г.А. СИМОНЯН

доктор биологических наук, C.B. ЧАПЕНКО

Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского

Защита диссертации состоится "?? Ia. 1990г.

в "../Л." часов на заседании специализированного/совета Д.020.28.02 при Всесоюзном ордена Ленина научно-исследователь-скоы институте экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко (109472, Москва, Кузьминки, БИЗВ).

С диссертацией ыотао ознакомиться в библиотеке ЬИЗВ.

Автореферат разослан ". J?... " ... .Н.°.ЯРР.Я...... 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

В.В. АМЕЛИНА

ОЩЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. На поверхности мембраны лимфоцитов, как и друг:« ишунокомпетентиых клеток,- выявлены многочисленные структуры (рецэптора), с помощью которых клетки распознают и связывают антигены, иммуноглобулины, различные коулонэиты кокплецзнта и клетки. Рецепторы лимфоцитов определяют функциональные свойства клеток и вступаят в специфические реакции, взаимодействуя с веществами как экзогенного, так и эндогенного происхождения, в частности, с бактериями или с продуктам!! кх метаболизма.

В настояцзз время вдавлено, что лимфоциты человека и кнзи обладает способность» взаимодействовать с бактериями разных видов и птакыоз (П. ТвоДогеоси, 1224 ). Однахо, взаимодействие лимфоцитов крупного рогатого скота (КРС) с бактериями является неисследованной и требует изучения с учетом ввдовых особенностей, (^/шс-циональнас свойств и других характеристик лиифоидннх клеток и бактерий. Наряду с этга! нэобходюю выявить поверхностинэ структуру как лимфоцитов, тая и бактерий, опрэдвллщке процессы взаимодействия кх с бактериями.

Лейкоз КРС представляет собой лимфопролнфврагивное заболевание, этиологическим агентом которого является ретровирус. Развитие и прогрессцрованиз лимфолейкоза тесно связано с иммунной реа-ктиеностьп организма, с функциональным состоянием иымунокомпетэнт" ннх клеток. Поэтому, исследование фзномейа взаимодействия лимфоцитов с бактериями является ваянии и для изучения механизмов лей-иозноП трансформации лимфоцитов, так как при лейхозе КРС клеткой-ыипвмья являются лимфоциты (Л.И. Нагаева и др., 1988).

Нарупеиие иммунологических механизмов при хроническом лимфо-лейкозе часто бывает следствие« наблвдаешх осложнения инфекционного характера, такта кая пневмонии, сепсис и другие инфэкционно-воспалитольше процессы (Т.В. Голосова и др., 1980; Н.М, Азизов, 1980). По-видимому, ваадым фактором а инфекционном процессе яз-ляется взаимодействие лимфоцитов с бактериями.

Таким образом, исследование способности лимфоцитов взаимодействовать с бактериями при лимфолейкозе КРС заслуживает особого внимания и полученные результаты могут быть важными при изучении патогенеза лкмфолейкоэа.

Тема диссертационной работы является частью Всесоюзной научно-технической программы 0.С9.05 "Разработать и внедрить систему государственных мероприятий по эффективной профилактике, ле-

ченин и снижению заболеваемости депрессиями кроветворения и лейкозами человека, сельскохозяйственных животных и птиц" по теме Института биохимии Литовской АН "Изучить структуру и функции иммунной системы при лейкозной и опухолевой трансформации клеток си-вотных и птиц, разработать методы их диагностики" кокер Госрогкс-трации 01.87.0049910.

Цель работы - исследование взаимодействия лимфоцитов здорового и больного хроническим лимфолейкозон крупного рогатого скота с бактериями различных видов и шташоэ. Реьену.з поставленной цели включает следующие задачи:

1. Определение оптимальных услськй (концентрации клеток, температуры и времени инкубации) для исследования взаимодеЙстЕКя лимфоцитов с бактериями.

2. Исследование способности крови ziisohzx zz&i-ыодействовать с бактериям разлкс-ux задов и ützütob.

3. Сравнительный анализ вза:и,.одьйст8:ш Т- и В-димфзцктсо крови и клеток люфиднах органов гдороього и больного xpoiKK^cuiai люфлейкоэом крупного рогатого скота с ¡¿яфзедо&гшзиаыи.

4. Исследование поверхностям ст^'ктур ~v~4'3U;:ioa 11 0<и;тцрк3, участвующих во взаимодействии.

5. Определение пролкфзратксной -л'Ш-йое-i-a Т- и З-лгдф^.-'.'ез порифзрической крови здоровце и бс^,.^ pc„....:_c.i.iui .usaJo^i.U-o-оои зиеотшвс при стимуляции бактер^-л Hccl-.;. rishia ..oli ¿-.,7

п лнпополисахаридом.

5. Количественное определенна ^«гстеа и Г^хтвразд Src::..id-cliia coli И Salmonella typhiüuriuK 2 Cüi.ojü'uo hpoill гдсу.\ X 11

0олышх хроническим лкз.:$олейкозои ^-.ioiiis с ло^сцъ» л^цгис^.р-tfSHTHoro анализа.. . '•

Научная новизна. Установлено, tno лшфоцпты, веделеигь-з ¡гз лкмфоидних органов крупного рогатого скота, наряду с лнифогуг^.л периферической крови, обладают способностью взаимодействовав с бактериями различных видов и штаиаов. На основании результатов исследований установлено, что способность лимфоцитов взаимодействовать с бактериями одного и того же штакыа обусловливается фз-ютипоы трансплантационных антигенов аивотного. Выявлено, что взаимодействие лимфоцитов с бактериями происходит за счет поверхности структур лимфоцитов неимыуноглобулкновой природы и поверх-исстщх карбогидратов стенки бактериальной клетки. Установлено, ' «то в этои процессе определенную роль выполняют трансплаитацион-

Inie антигены лимфоцитов. При развитии лиыфолойкоза возрастает число лкд;|*)цитоп, вза.ч^одсйстяугчюс С б антеридии Escherichia coli KS02 (bp) il Enterobacter cloacae 130 (Тй) , однако, установлено, что й тэрыималькоП стадии лзШсоза рззко снижается количество клеток, 8заииодоВстоукц!к с бактериями данных видов.

Практическое значоннз работа. На основе полученных результатов опгаглзкрозану условия исследования сзаииодсЯствия лиыфоцитов KFC с бактвриямя разних видов и отаимов. Для определена уросня антител к бактериям о сыворотка крови здорового и больного хрони-едсютм Л1 афмейкозом крупного рогатого скота разработал мзтод кы-t^iio-yïpv'CHTHoro йлашпа. Подгото&ши глатодлчэскнэ рекоызздгщш! "Опредалсшш способности л:г..']йцитоа проси свяэцвать бактерии", которлз шсдгчсш 5 сборш'д "Опрадзлешэ ^уияциоквлышх свойств иа-ууноггазютйгтгс дозтох при лгГзгоэо" (Вшшсзс, I5Ö7) и подгртов- ' лека s печати г.'зтод;гпсккз рзяо^свдацяа "{ЬцунофврнэнишЯ анализ СНТИГЗЛ К бОЗТОрИЯМ coli В Cî,30pOTK9 згроои крупного рогатого енота" (Утвср-эдонз на ззлодгими РабочзП комксски "Биология, ккчу-колог!*я -и биотехнология о ззтеркнарноЯ гэдкцинэ" ОНКВэт ВЛСХНИЯ, 1988).

Апробация рабогн. Ocjioditys положения диссертационной работа опублтывака или до:глад1Г?аллгь из конференциях "Роль moiyisto" сис-TOîai з патогенезе лймфопролкфератившк заболеваний" (Новосибирск, 1984), "Актуальные попроси клинической и»экспериментальной аллвр^ гологии и иммунологии" (Каунас, 1986), на 21-ом Национальной симпозиуме по допросам рэтнхулоэндотелиальноП системы (Кшйда, 1984), иа Всгсовзиси coseqa:wn "Клэточныо и молекулярные «зхаиизиу канцерогенеза и антихзнцерогенеза" (Ленинград, 1988), на 1-ом йзяду-иародном симпозиума по ветеринарной иммунологии (Канада, 1986), на Всесоюзном симпозиуме "Лимфотропныэ вирусы, человека и тавотных (ktlv, stlv, BLV )" (Рига, 1987).

Публикации. По теме диссортации подготовлено и опубликовано 7 статей, б тезисов, 2 методические рекомендации.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, методической части, собственных исследований с обсуждением полученных результатов, заключений, выводов и списка литературы (?.Ь2 источников). Работа изложена на 121 странице машинописного текста, иллюстрирована II рисунками и 10 таблицами.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ,

Объект исследования - лимфоциты крови и лимфоидных органов здорового и больного XJUI крупного рогатого скота.

Для решения поставленных в работе задач использовали сыворотку и лимфоциты 67 здоровых и 129 больных ХМ коров литовской красной породы, 20 мышей линий Balb/c, СЗНА, СС57®, C57BI», 5 кроликов породы шиншилла и 6 крыс (нелинейных). Серологические и гематологические исследования КРС проводились научным сотрудником лаборатории иммунохимического анализа Института иммунологии Литовской АН к.б.н. Г.Ю. Гирюнасом.

Лимфоциты ввделяли из крови животных по методу а. ВоуивДОбо) в градиенте плотности Ц,077 г/мл) фиколла-гипака ("Pharmacia", Швеция). Лимфоциты костного мозга, селезенки и лимфоузлов изолировали из гомогенизированных тканей осавдениеи клеток в градиенте плотности фиколла-гипака. Обогащенные фракции Т- и В-лимфоци-тов получали фракционированием лимфоцитов по методу "пзннинга" ( D,L. öilliams et al., X98Ö и осаздениеи E-розеток (Н.Е. Kaplan et al.,1976). Разделенные клетки идентифицировали методами ишу-нофлуоресценции (р. Weiland, О.С. straub, 1975) и Е-розеткообра-зования.

В работе использовали бактериальные культуры Escherichia coll KI2, Escherichia coli K-37, Escherichia coli K-38, Staphylococcia aursuQ Cowan X , которые любезно нам предоставлены Институтом микробиологии им. А. Кирхечштейна Латвийской All, бактерии Escherichia coli KS02 (bp), Epchorichia coli CR-63, Enterobacter cloacao 130 (TB)Citrobacter freundli I8T9, Citrobacsor froan-dii 22T9, Citrobacter freundii 82119, Serratia marcsscems ГЬ, Staphylococcus aureus ЗА были получены из коллекции Всесоюзного научно- производственного объединения "Ферментас" (Вильнюс), бактерии Salmonella typhimurium получены из Литовского научно-исследовательского института животноводства и ветеринарии. Для идаунофэр-ментного анализа использовали салмонеллезный моновалентный антиген (Витебская биофабрика, БССР).

Бактерии для изучения взаимодействия, с лимфоцитами и для стимуляции готовили по методу 3. Eanck, A. Forogran (1971). Бактериальные культуры выращивали а жидкой питательной среда Stand. II Hutrient üroth ("Serva", ФРГ) и инактивировали нагреванием при 85°С в течение 30 мин. Фиксацию бактерий проводили Ю^-ым формальдегидом и суспендировали в.физиологическом растворе.

Исследование связывания лимфоидкмми клетками бактерий проводили по методу А, Brateоси et al. (I960). Учет пшфоцитов, связнва&цих бактерии, определяли с помощью светового микроскопа. Учитывали лимфоциты, присоединившие к кеибране более чей 3 бактерии.

Иэчэние бактерий ¡ШЩ-оы проводили по иэтоду г, Oda, H. Manda (1986). Интенсивность флуоресценции при исследовании способности лимфоцитов связывать бактерии, ыечзнниэ &ИТЦ-ом, определяли спектрофлуортт ром î'Pîm ( "Hitachi", Япония). •

Изучениз поверхностных структур лимфоцитов и бактерий, участвуй« so взанмодеЯствии, проводили по методу L. Hasanen (1981). Для блок1фовония поворхностшэс структур использоьали о-глюяозаггин-- HCl, L-рашюзу, D-лактозу, D-ксилозу, L-арабинозу, D-глюкозу, D-наинит, й-и<хлътозу, D-галактозу, D-сорбит, шннозу, антисыворотка к лимфоцитам ггрови здорового КРС (анти-НЛ), к л!йфцитам крови больного XJIJI КРС (анти-ЛЛ) и st ш,иуногдобулинам КРС (анти- Ig), а такяэ шноклоналмщэ антитела D9 (MA D9 ) к IgU КРС. Антисиворотки а моноклоналышэ антитела любезно предоставлены газ. сакторсч, к.б.il. D.K. üemtycou, ст.научн.сотр., к.б.н. U.U. îlay-рицасом, ил.н.сотр., к.б.н. И.П. Дуыалакенз 11-т биохкшш Литовской Ali.

Длл оцз1Ин про.ифзратноноЯ активности лимфоцитов проводили реакщш бласттрансформации клеток под зоздоЯствием бактерий Escherichia coll К-37 и липополисахарида,(Ш1С) (Escherichia coli 055.Ь5, "Difco", СМ) (ь. Racemea et al., 1980 ). Интенсивность пролиферации оценивали по вклвчэниа %-ишидика в de пето «штв-зируеауп ДИК.

Уровень антитол в сыворотке крови определяли методом непрямого иымунофэриентного анализа (k.M. Coot et al., 1985 )• Дяя контроля s качестве стандартной сыворотки использовали пул си-вороток 40 здоровых нлзотшяс. Уровень антител в сыворотке к^юви больных аивотикх Еира.чали процентной отношением к стандартной сыворотке, принимая его значение в стандарте за 100%.

Статистическую обработку полученных розультатов проводили по методу И.В. Полякова, Н.С. Соколовой (1976).

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ

I. Определение опткаальккх вдовий при исследовании способности лимфоцитов взаимодействовать с бактерилми. Для решения nje-тавленной задачи в начальной стадии экспериментов огредаляли ом-

тиыальнув концентрацию клеток (соотновегше лимфоцитов с бактериями), температуру и время инкубации.

При определении оптимального соотношения лимфоцитов с бактериями проведенц исследования количзстг.а льшфоцитов, взаимодействующих с бактериями, при различном соотношении лиыфоидаых и бактериальных клеток. Бшо установлено, что оптимальное соотношение лимфоцитов с бактериями в их взаимодействии является 1:200, при сравнительно« анализе их взашодействш; в соотношении от 1:50 до 1:300 (табл. I).

Для определения влияния температуры, сиесь лиифоцитов и бактерий инкубировали при теыпоратура 4°С, 20°С и 37°С. Температура инкубации в пределах от 20°С до 37°С заштного влияния на способность лимфоцитов взаимодействовать с бактериях! но оказывает. Однако, в условиях инкубации при 4°С «ксло лиифоцитов, взам:.юд«Г> ствущих с бактериями, значительно ууонываатся (табл. I).

Исследования оптимальной продолжительности инкубации показали, что количество лиифоцитов кроен, азаюиодсПствухтусс с бактериями, стабилизируется после 20-шшутаой инкубации.

Таблица I

Влияние соотношения лимфоцитов и бактерий при различной »«зав тура инкубации на способность лшфоцитоэ взаимодействовать'с бактериями

Соотношение лимфоцитов и бактерий Теипоратура среди, Количзстио лимфоцитов, згаи-:.одсйетв;д£(Их с ошст€р;,ип>л 2осНог1са1а соХ1 Е-37 .

4 ' 2,5±3,0

1:50 20 4, ,5

37 3,7±3,0

4 18,9^2,3

1:100 20 27,8^1,9

• 37 29,3^2,4

4 23,1±1,6 '

1:200 20 ' 35,5±1,9

37 36,1±2,0

4 22,3±2,0

1:ЗС0 20 36,3±1,7

37 35,4±3,5

Получзшшз нани дагешэ свидетельствуют о той, что соотноаз-ниэ клеток 1:200 и инкубация лимфоцитов и бактерий при 20°С а твчэнио 20 шш. являются оптимальными условиями да. данной реак ции.

2. Сравнительноо изучение способности лимфоцитов крови раэ-шд пидоп животных азакмодейстаовать с бактериями.- Проведены исследования способности лимфоцитов, выделенных из периферической кровн кроликов, кргс, ¡асэй и КРС, взаимодействовать с бактериями, Било установлокс, что лимфоциты разных видов íshbothhx взаи-¡:0Д5Йствуэ? с бахтсрм.-пш Eacherichli coll £-37, Enterobact«i> cloacae ХЗО (Ta), Cltrobactcr fr;undil 22T9 (табл. 2). Слсдуат отметить, что число лимфоцитов, обладающих способность» взаимодействовать, варьирует о зависимости от ззда низогшк.

СравнитсльниЯ анализ количества лимфоцитов, взаиыодеЯстау»-с бааторипки, показал, что сроди л)'дг;оц»тов периферической крови isnma обнаружено 52,3*2,2$ клеток, способных вз&инодейство-sa?b с Eocherichlr- soli £-37 , а среди лимфоцитов ярис количвет-50 tokícj клеток составляя? - 29,3—1,4?. При использовании друг ir ввдоз бактарчЯ, количество л!:::фоцитоз, взаимодействуй!;'.« с микроорганизмами, яаляотсл нзодноэиачи*?!.

Таблица 2

Взаииодейстснз лимфоцитов кровн мухэЯ, крыс и кролкиоа с; бактериями различнее видов

Лимфоциты Количество бактериями, л^'Г'фоцитоз, взаимодействующих а

Eacbsrichles coli R.-37 Enterobacter Citrobacter cloacaá I30(To) freundll 22T9

йьии ( а»5) Крысы ( п»б) Кролики ( п«5) Ь2,3*2,2 29,3*4,4 36,0—1,2 49,0-2,I 23,6*2,3 27,5*3,7 46,3*3,0

Установлено, что лимфоциты крови КРС способны взаимодейство-

вать с бактериями 7 различных атаыыов iacharlchi« coli, 3 штаммов Citrobacter-froundA , 2 штаммов Staphylo;occue aureus , а такяа Enterobacter cloacae IJO(Tu) , 3orratla marcoecena 1ъ к Salmonella typhlnuriura (табл. 3). Количество лимфоцитов периферической крови КРС, взаимодействующих с бактериями, варьирует я широких пределах от 7,3±2,0% до 65,0*3,1%. Количество лимфоцитов, взаимодействующих с микроорганизмами, зависит не только от вида

бактерий, но и от штамма отих бактерий. Нами установлено, что процент лимфоцитов, взаимодействующих с бактериями различных штаммов Eecheriohle colli CH-6J, 74Т4, К-37, К-38, К802 (bp) И KIIO, различается и составляет соответственно 55,5*4,4, 58,3*3,4, 27,7* ¿4,7, 35,£¿1,9, 33,7*2,0, 43,6*2,1 и 36,5*3,3% среди лимфоцитов периферической крови КРС.

Таблица 3

Взаимодействие лимфоцитов крови здоровых и больных лимфолей-козоы коров с бактериями разных видов и штаммов

Вид и штамм бактерий

Количество лимфоцитов, взаимодействуй^!» с бактериями,

здоровых больших ХЛЛ ш1в0тных дивотных

Escherichia coll CR-63 55,5*4,4 -

Escherichia coll 74T9 58,3*3,4 57,3*2,4 >0,05

Escherichia coll 7IT4 27,7*4,7 -

Escherichia coli K-37 35,5*1,9 33,7*1,6 •X),05

Eocherlchla coli K-38 33,7*2,0 45,3*2,0 <0,05

Escherichia coli K802 (bp) 43,6*2,1 52,7*2,0 <0,05

Escherichia coll KIIO 36,5*3,3 -

Enterobacter cloacae 130 (Tü) 25,4*3,5 34,3*2,4 <0,05

Staphylococcus aureus 3A. 37,0*4,0 41,2*1,9 >0,05

Staphylococcus aureua Cowan I"' 42,3*3,7 44,2*3,5 >0,05

Citrobacter freundii 82T2 65,0*3,1 52,6*2,3 <0,05

Citrobacter freundii I8T9 44,5*3,5 48,8*4,0 >0,05

Citrobacter freundii 22T9 7,3*2,0 -

Serratia marceacens lb 29,0*3,5 ' 56,0*3,8 <0,05

Salmonella typhimurium 23,1*2,1 32,8*3,3 <0,05

Налш. экспериментальные результаты согласуются с данными других авторов ( К.Р. ЮеВоег et а1., 1981} А. Вдовец et а!., 1983), которые при изучении лимфоцитов человека и мышей Также установили. что количество лимфоцитов, взаимодействующих с бактериями, зависит от веда и штамма бактерий. .

Таким образом, . взаимодействие лимфоцитов с бактериями зависит не только от вида животиих, но и от ввда и штамма бактерий.

Э. Сравнительное исследование взаимодействия лимфоцитов с бактериями у здоровых и больных лимфопролиферативными заболеваниями животных. Для выяснения влияния злокачественного процесса на способность лимфоцитов взаимодействовать с бактериями, мы исследовали лимфоциты крови здоровых и больных ХМ коров и интактных мышей линии Balb/o и мышей той яе линии с экспериментально индуцированной плазмоцитомой' ШПС-406.

При исследовании взаимодействия лимфоцитов КРС и бактерий нави было установлено, что количество лимфоцитов, взаимодействующих С бактериями Escherichia coli K-J8, Escherichia coli К ЕЮ 2 (bp), Enterobacter cloacae 130 (ТВ), Serratia marcea-eno Ib И Salmonella typhiauriua, значительно выше среди клеток больных ХЛЛ (р43,05). чем среди клеток здоровых коров. Тем но шноз, нами выявлено, что в отношении бактерий Citrobacter freundli S2T2 , число взаимодействующих лимфоцитов значительно ниже при ХЛЛ. Количество л^фоци-гов кроан здоровых и больных ХЛЛ, взаимодействующих с бактериями* других видов и отаимов, у обеих групп животных, было почти одинаковым (табл. 3).

В опытах использовали лимфоциты аиэотннх с различными гешто-яопическими показателями, но прямой зависимости меаду способностью янмфоцитов взаимодействовать с бактериями н лейкоцитозом (в пределах от 18 до 40 тис./гал) нэ установлено, хотя при высоких лейкоцитозах (122 н 360 тыс./икл, а лкмфоцитоэ достигает 95-9Ö&) спо-гобность лимфоцитов взаимодействовать с бактериями уменьшается и ¡оставляет для бактерий Escherichia coli К802 (bp) только 4,0-5,0%, i дяя Enterobacter cloacae IjO (ТВ) - 6,3-7,0^. Согласно результатам других авторов (а. Helaon et al., 1979 ), в'развернутой стации лейкозного процесса способность лимфоцитов крови человека взаимодействовать с бактериями также уменьшается.

Сравнительное исследование способности лимфоцитов крови ин-гактных мышей линии Halb/с и с экспериментально индуцированной тлазмоцитомой 1ЮПС-406 взаимодействовать с бактериями Becherichia coli К-)7 и Citrobacter freundii IBT9 показало, что при злокачес-гвенном поражении лимфоидной ткани резко снижается количество лим-[юцитоз, взаимодействующих с указанными бактериями (от 62,3Í2,2 ;о 2I,0±2,Ef и от 40,1±2,1 до 32,7±3,?$6 соответственно).

Возможно, что увеличение числа лимфоцитов, взаимодействующих : бактериями определенного штамма при злокачественном процессе, зависит от интенсивности пролиферации субпопуляций клеток, имеющих рецепторы для данного микроорганизма, а снижение числа таких

клеток, по-видимому, связано с подавление« пролиферации данной субпопуляции клеток. , •

Наши предположения подтвердили экспериментальные данные, полученные при изучении способности лимфоцитов функционально разных популяций взаимодействовать с бактериями различных видов и штаммов .

Установлено, что пимфоциты Т- и В-лопуляций взаимодействуют со всеми нами использованными микроорганизмами. Следует отметить, что B-лимфоциты крови здорового КРС по сравнению с Т-лимфоцитааи преимущественно ьзаимодействуют с бактериями Enterobacter cloa-сое 130 (ТВ) и Staphylococcus aureus Cowan X , а Т-лимфоциты по сравнению с В-лиифоцитами обладает более выраженной способностью взаимодействовать с бактериями Citrobacter freundii I6T9 и Salmonella typhimuriuia (табл. 4).

'Таблица 4

Взаимодействие Т- и 3-лимфоцитов здорового и больного хроническим лимфолейкозом крупного рогатого скота с бактериями разных видов и штаммов

Количество лимфоцитов, взаимодействующих с бактериями, %

Вид и штамм бшстерий

Т-лимфоциты

В-лимфоциты

здоровых животных больных ХЛЛ •кивотных здоровых животных больных XJ кивотных

Escherichia coli К-37 20,6*3,3 I6,B*I,4 20,2*2,2 32,3*1,7

Escherichia coli К802 (bp) 42,3-2,9 32,Oil,б 40,3±3,1 29,6*1,9

Enterobacter cloacae 130 (Tb) 15,Cil,9 11,6*3,2 20,6*2.1 33,8*2,0

Citrobacter freondii I8T3 29,3*4,7 ( 19,6±2,5

ütaphylococcus aureus Cowan I 38,3*4,0 30,3*2,3 46,3*3,5 52,3*2,0

Üalmonella typhimurium 23,9i2,3 10,5-0,8 _

Аналогичные исследования Т- и B-клеток крови больных ХЛЛ жи- , вотных показали, что среди B-лимфоцитов крови больного КРС отмечается повышение количества клеток, содержащих рецепторы к бактериям всех нами использованных видов, кроме Escherichia coli К002 (Ър),_Среди Т-лимфоцитов число клеток, взаимодействующих с разными микроорганизмами, при ХЛЛ остается неизмененным только при взаи-

цодействии Т-лимфоцитов с Staphylococcus aureus Cotran I , а во взаимодействии с бактериями Escherichia coli К-37, Escherichia coli к802 (bp), Enterobacter cloacae 130 (Тя) участвует значительно меньше Т-лкмфоцитов. По-видимому, это объясняется тем, что взаимодействие с бактериями Escherichia coli к802 (bp) наиболее cdo-йственно популяции Т-лимфоцитов.

Таким образом, повышенную способность лимфоцитов крови больных ХЛЛ кивотных взаимодействовать с бактериями можно объяснить наиболее интенсивной пролиферацией популяции "лейкоэных" клеток (B-типа), эхспрсссирупцей рецепторы к бактериям определенного вида и итамма.

Снижение числа клеток, способных взаимодействовать с бактериями, можно объяснить относительна!« уменьшением количества Т-лим-Лоцитоп в периферической крови больных ХЛЛ короз. По-заднему, изменение количества Т- и B-лимфоцитов, взаимодействующих с бактериями, при.ХЛЛ связано не только с изменением соотношения различных оубпопудяций лимфоцитов, но и с изменением экспрессии рецепторов к бактериям на поверхности клеток.

4. Исследование взаимодействия лимфоцитов лимфоидннх органов с бактериями при хроническом лимфолейкозе. Для более тщательной характеристики взаимодейсть :я клеток с бактериями нами проведены исследования с лимфоцитами селезенки, лг.мфоузлов, костного мозга гак .здоровых, так и больных лейкозом.коров.•

Полученные результаты показали, что лимфоциты селезенки как эдорозых, так и больных лейкозом коров обладают способностью взаимодействовать с бактериями. Установлено, что более выраженной (1,5-3 раза) способность?) взаимодействовать с бактериями Escherichia coli к-37, Enterobacter cloacae 130 (то) и Salmonelle typ-himuriun обладают лимфоциты селезенки больных ХЛЛ животных, чем клетки селезенки здоровых коров. Также было отмечено, что при исследовании взаимодействия.клеток селезенки с бактериями Staphylococcus aureus ЗА среди лимфоцитов больных ХЛЛ животных встречаются в 1,5 раза меньше клеток, содержащих рецепторы к указанным бактериям, по сравнению с клетками здоровых коров (рис. I).

Показано существенное снижение лимфоцитов лимфоузлов больных ХЛЛ коров (более чем в 2 раза), взаимодействующих с„бак^ерия-ми Escherichia coli , по сравнению с лимфоцитами здоровых коров. Однако, лимфоцитов лимфоузлов, способных взаимодействовать с бактериями других видов, больше всего обнаружено у больных ХЛЛ животных (рис. I).

Шт.

Рис. I. Способность лимфоцитов селезенки (а), лимфоузлов (б) и

костного мозга (в) здорового (1 I) и больного (Е2Э) ХМ КРС взаимодействовать о бактериями Escherichia coli К602 .(bp) (1), Escherichia coli К-37 (2), Enterobacter cloa-ca« 130 (TB) (3), Citrobacter freundii 'I8T9 (4), Salmonelle typhlauriua (5)i Staphyloooccue aureue ЗА (6).

Наряду с этим установлено, что лимфоциты костного мозга здоровых -и больных ХДД коров также способны взаимодействовать с бактериями. Следует отметить, что количество клеток, взаимодействующих с микроорганизмами, значительно вше среди лимфоцитов костного мозга больных ХЛЛ животных. Наиболее заметное повшенив отмэ- , чено при взаимодействии с бактериями Citrobacter freundli I8T9 (7 раз) и с Enterobacter eloacae 130 (1И) {более 2,5 раза).

Совокупность наших данных, полученных при количественное исследовании клеток лиыфоидннх органов здорового и больного лимфо-лейкозом КРС, взаимодействующих с микроорганизмами, указывает на то, что э основном наибольшее количество лимфоцитов, взаимодействующих с бактериями, обнаружено при исследовании лимфоцитов больных ХЛЛ коров. Однако, исключение составляет взаимодействие лимфоцитов селезенки здоровых .■животных с бахтериями Staphylococcuo aureus Cowan I и клеток лимфоузлов здоровых животных с бак-

териями Escherichia coli.

Таким образом, обобщая экспериментальные данные, полученные при исследовании взаимодействия лимфоцитов с микроорганизмами, • ьгежно заключить: I) во взаимодействии с бактериями различных видов и штаммов участвует только часть общей популяции лимфоцитов; 2) изменение соотноаения субпопуляций при развитии ХЛЛ КРС ведет к изменению количестза клеток, способных взаимодействовать с бактериями.

5. Исследование поверхностей структур лимфоцитов и бактерий, участвующих з процессах их взаимодействия. Изучение взаимодействия лимфоцитов с бактериями даьг основание предполагать, что взаимодействие является специфическим процессом. В связи с этим были проведены исследования с целью определения поверхностных структур лимфоцитов и бактерий, участвующих, во взаимодействии.

Исследования, проведенные с лимфоцитами крови ыьшей линий £alb/c, СС57>7, C57rtL и СЗЯА с различным фенотипом трансплантационных антигенов Н-2 комплекса и КРС с различным фенотипом трансплантационных антигенов uolA (от англ. - aovine lymphocyte antigène) комплекса, показали, что способность лимфоцитов взаимодействовать с бактериями одного и того же штамма обусловливается фенотипом трансплантационных антигенов животного. Нами установлено, что во взаимодействии лимфоцитов с бактериями Escherichia coli К-37 участвуют значительно больше л:п.;фоцитов, выделенных из крови мышей линий Halb/с и СЗНА (52,2*2,2 и 48,б*0,7<£ соответственно), чем у мышей линии С57йЬ (25,3*2,с$)< Полученные результаты при ис-

следовании лимфоцитов КРС с различным фанотипои трансплантационных антигенов также подтверздаат предположение, что эти антигены участвуют во взаимодействии лимфоцитов с бактериями.

С целью более детального исследования поверхностных структур лимфоцитов крови, ответственных за взаимодействие лимфоцитов с бактериями, нами проведена блокировка поверхностных структур лни-фоцитов моноклоиальньаш антителами и иммунными сыворотками.

В результате исследований установлено, что ЫА D9 к IgUКРС ¡; антисыворотка к Ig КРС незначительно ингибировали взаимодействие лимфоцитов с бактериями Kaoherichia coli &.-37 . Однако, антилимфо-цитарная сыворотка и особенно сыворотка к "лейкозным" лиыфоцитаы сникает (примерно в 2 раза) количество клеток, взаимодействующих с бшстериями, по сравнению с контролем, т.е. с лимфоциташ, необработанными иммунными сыворотками (рис. 2). Полученные данныа указывают на то, что взаимодействие лимфоцитов с Escherichia coli а-37 происходит за счет поверхностных антигенов непыауноглобули-иовой природы.

!

Рис. 2. Влияние иммунных сывороток (OEj -анти-НД, ЩИ -аитк-Ш, ESi -анти-lg КРС) и моноклональньс: антител (Е2 -MÄD9 ) на способность лимфоцитов крови здорового (I) и больного ХМ (2) КРС взаимодействовать с бактериями Eocherichla coli К-37 (CD - контроль): Наряду с этим, в наших опытах были использованы различные моносахариды для блокирования поверхностных структур бактерий. Полученные результаты показывают, что некоторые юносахариды способны ингибировать взаимодействие лимфоцитов с бактериями. Более выраженным ингибируюцим действием обладают; манноза, ь -галактоза, j)-.

-гликоза, коториа снижают более чей ка 40% способность лимфоцитов взаимодействовать с бактериями Eocherichia coli К802 (bp). Влия-ииа других коносахаридоз менее значительное по сравнению с вше упомянутыми q-галактозой, D-глюкозой и маннозой, а D-сорбит нэ оказал влияния на взаимодействие лимфоцитов с бактериями (табл.5).

Полученные данные свидетельствуют, что взаимодействие лимфоцитов с микроорганизмами происходит при участим карбогнлратоз меточной стопки бактерий.

Таблица 5

Влияние моиосахаридбз на способность ликфоцитез чровн ззаг?-модейстяовать с бактериями

Ингибиторная активности {%)

Моносахариды Sacharichia coli ЙЙ02 (bp) Enterobacter cloacae 130(г3) Escherichia coli X-37

Э -глвхозпмин-ЛС! 0,2-3,0 I4,9±3,X 18,6*2,5

D-лактоза' 9,1^2,1 0 0

О-ксилоза 0 2.1*2,0 -

1-рамноза 3.6±2,0 11,0*2,3 20,5*2,4

т,-ар£биноза 9,6±I,2 - -

D-глюкоза 41,2-1,7 10,8±2,о •;8,0-1,0

D -мчннит -.8,2^2,5 - 0 ' • ",0*0,6

T)-vp льтоза CO,5~1,3 -

D-галактоза 38,?±2,I _

D-сорбит 0 ■ 0 0

¡-?а ннооа ■'iO, 1-1,7 33,0*4,0 :Ö, 3-^,8

Таким образом, совокупность получешпос ноуи экспериментальная данных указывает ка то, что по взаимодействии участ'улт по-зсрхностгеге структуру лге-'фоцитов негкмуноглобулииовой природы, 203И0ЖН0, трансплантационные знтигаш с одной стороны и карбогид-

ратп клеточной стенки бактерий с другой сторон».

5 -Определение пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови здорового и больного хроническим лимфолейкозом крупного рогатого скота после воздействия бактериями Escherichia,.. coli К-.37 • и липополисахаридом. Известно, что многие вцды и штаммы бактерий представляют митогены лимфоцитов и, более того, связывание стимулятора, я данном случае бактерий, поверхностными рецепторами клеток является началом ячтивацки лимфоцитов. С .этой целью были проведены исследования пролиферативной активности лим-

фоцитов крови здорового и больного лейкозом КРС in vitro после воздействия бактериями Escherichia coli К-37 и липополисахари-дом (ЛПС) Escherichia coli 055.В5.

' При изучении пролиферативной интенсивности клеток исследовали синтез ДНК в культурах лимфоцитов больных ХЛЛ и здоровых животных. Результаты этих экспериментов показали, что в течение 24 часов культивирования после воздействия бактериями Escherichia coli К-37 не выявлено существенных различий в интенсивности синтеза ДНК в культурах лимфоцитов здоровых и больных ХЛЛ животных. Однако, посла 72 часов культивирования этих клеток выявлены различия в интенсивности включения ®Н-тимидина в ДНК. Максимальное включение -тиыидина в ДНК регистрировали на 96 часу культивирования. Следует отметить, что синтез ДНК в культурах лимфоцитов больных ХМ аивот-ных в отвзг на бактерии Eccherichia coli К-37 значительно превышал синтез ДНК в культурах лимфоцитов здоровых1 еиботных (р/с. 3).

Исследование синтеза ДНК лимфоцитами здоровых и больных ХЛЛ кивотных, после воздействия ЛПС, показало, что в первые 24 часа культивирования интенсивность включения ^И-тиицдина в культурах здоровых животных превышала 'интенсивность включения в культурах больных ХМ животных. В культурах лимфоцитов крови здорового КРС синтез ДНК достигал максимума к 72 часу культивирования, в то зрешз как в культурное лимфоцитов крови больных ХЯ" ливотньк синтез ДНК достигал максимума к 96 часу и индекс стимуляции (ИС) бил значительно вше, чем у лимфоцитов здоровых животных (рис. 2).

110

80

40

24

—1—

48

72

емя кул; тиви

I

96

Рис. 3. Синтез ДНК в культурах лимфо^тоа^р6ви"з^оровьос'(f,3) и больных ХЛЛ (2,4) коров после стимуляции бактериями Escherichia coli К-37 (о--о) и липополисахаридом Escherichia coli 055«В5 (®*—в ) in vitro.

Исследования стимуляции митогенами препаративно разделенных Т- и B-лимфоцитов крови здоровых и больных ХЛЛ животных показали, что этим популяциям лимфоцитов свойствен различный ответ на мито-гены. Самый высокий индекс стимуляции обнаружен в 96-часовых культурах B-лимфоцитов крови здоровых и больных ХЛЛ коров, который после стимуляции бактериями Escherichia coli К-37 и ЛПС был значительно выше (р<0,05), чем при стимуляции Т-лимфоцитов. Следует отметить, что пролиферация популяции Т-клеток как здорового, так и больного лейкозов КРС после воздействия бактериями Eocherichia coli К-37 и ЛПС была незначительной.

Из полученных нами данных видно, что лимфоциты крови как здорового, так и больного ХЛЛ КРС способны отвечать на стимуляции бактериями Escherichia coli К-37 и ЛПС. Сравнительный анализ ми-тогенного действия бактерий и ЛПС показал, что наиболее выраженным воздействием на синтез ДНК обладают бактерии Escherichia coli JC-37 по сравнению с ЛПС.

Оценивая экспериментальные данные, следует заключить: а) про-лиферативная активность ß-лимфоцитов после стимуляции митогенами значительно превышает пролифэративнув активность Т-лимфоцитов как у здоровых, так и у больных ХЛЛ коров; б) з продолжительном культивировании интенсивность пролиферации в культурах лимфоцитов здоровых животных снижается, а вольных ХЛЛ - попытается; з) 3-клетки крови больных ХЛЛ коров более инте#сн«ио иролифзрируют после стимуляции, чем В-лкнфоциты здоровых животных.

6. Определение антител я бактериям Sachorlchia ogll K8Q2 -liiSli? Saliaonell.n typhlmurima з сыворотке крови крупного рогатого скота. Известно, что изменение уровня антител к бактериям Escherichia coli и Poeudomonae anruginooa лрздшествует развитию инфекций, вызываете? данными бактериями ( 1С.:?. Coat et el., 1985). Поэтому, определение антител к бактериям молот слудить тестом для прогноза развития инфекции.

С целью определения уровня антител it бактериям Escherichia., coli К802 (bp) и Salmonella typhimuriun в сыворотке здоровых, инфицированных ВЛКРС и больных ХЛЛ животных в различной стадии заболевания был проведен иммуноферментныЛ -анализ. Стадии болезни лейкоза у КРС определены по классификации Г.А. Симоняна (1983).

Результаты исследования показали, что уровень антител к бактериям Escherichia coli К802 (bp) и Sülseaolla typhiauriuffl в сыворотке инфицированных ВЛКРС и больных в развернутой и терминаль-

Ной стадии ХЛЛ животных значительно снижен, чан ь сыворотке едо-рового КРС. Следует отметить, что только в сыворотке Оольшк животных в начальной стадии болезни уровень антител к дшна бактериям вьше по сравнению со здоровыми животнг'я ¡¡рис. 4). Возможно, вирусная инфекция на начальном этапе оказывает стимулирующее действие на состояние иммунной система, в том числе и на образование антител к бактериальным антигенах.

err

X

II

III IV

ш

120

100

ео

60

Рис. 4. Сравнительный анализ уровня антител к бактериям Escherichia' coli КВ02 (bp) ( ) К Salmonelle, typhiburiua ( 1 I } в сыворотке больных хроническим лиыфолейкозоа животных в различных стадиюс заболевания (I - инфицированные шКРС животные, II - начальная стьдия, III - развернутая стадия, IV - терминальная стадия). Easoeii;: отметка (lOOi?) соответствует уровню антител в стандартной сыворотке.

Наши результаты частично согласуются с дакнкми А.И. Васюко-ва, Л.В. СадовскоЯ (197Э), которыо установили, что титр антител к Escherichia coli в субклинической стадии лейкоза значительно ниже, чем у здоровых животных. Наряду с этим, другие исследователи (A.B. Моркунас и др., 1982; A.B. Иоркршс, 1988) указывают, что o6ii.ee количество Ig и количество - отдельных, классов Ig постепенно уменьшается с прогрессированием лейкозного процесса, что по-видимому, может служить объяснением снижения уровня антител к бактериям.

'аоКим образом, снижение общего количества Ig и в том числе антител к бактериям Eacherichia coli К8Э2 (bp) и Salmonella ty-phimurium при развитии ХЛЛ у КРС, по-видимому, является важным

фактором, предшествукции осложнениям инфекционного характера. На основе насих данных разработана тест-система для определения антител в бактериям э сыворотке крови эдорогкк я больных ХЛЛ иороз.

ВЫВОДЫ

1. Лимфоцита периферической крови, костного мозга, сслеззкаа я лимфатических узлов, как и лк?.'£ецита кроси г-изай, sirs, зроликоэ способны взаииодейстгозать с баптернтш Escherichia coli , Enterobacter cloacae , Staphylococcus aureun, Citrobacter frsur.dii.

2. Для ясследссрлпя вгшшодеЯствия лгафцзтов крупного рогатого скота и баятерпЯ разлввкэт г»щоэ и ятнягоз, оптимальном условней Л5яястся rürytfstyoi ли»$С!у1тев я бактерия з соотношении 1:200 соотгзтстяеш-о к а течешт-з 20 глянут при £0°С.

3. Взагададействка ^-•'•our/rcn -грозя чдорозсго хрупкого рогатого сгота с Заятсрштии с? .т г г*-а л ~тг_\:::а, тел ;:гл соли-"?ет."о лимфоцитов, гг^амодеЯствугонх с бактериями разлгтакх ?пдол я етн-гов, -солсблстсл з г/tpoititx пределах (от 7,3$ до 65,0$). Вза---•-опг-Пстйкэ amjerproa о' бгл-ершми Cltrofcaetsr ir?undii 8222,Ео-■*:?orictila coli 74T9 -'тляется c-se T^r.-.r.^'t.l, *'"м с Тсхтзрия-":: Citrobacter freuadii

t. ВзгцЕ.'Эдейстг:."0 .""г^-ц-г-т о - *»-:i ~ггп у'л-

тегерхнсстшгс еттуртт? г? т --ч ~-е~э т^.т-еллепта-

пнт-тснов с ---,-1 стсг-Г'ч, л ;в хтегг-гсЛ ст~ч-

•'•1 <~лтеркИ, с друг с Л .пере--«*. з г«:сглс Jyxm п-з

го ?г;с .....-st по .-•г.-.зивает

-•-.•--.того ¡»лгтякя "а л:::ггэ с ^сжугритаи.

Е>. При ярожрпсг'с»! "■'"'to.i' i'-'c^o "-г.тттг.стсд обцев ;:сличсст-г.о л~с£оцитов, з&гкглдс'Зстгуигчх с ■iRi.'r-pir'-n Scchorichir coli Х-J 8 , Enterobacter clcocae 1?0(ТЭ)И Serratia "агсевсепа Ib. В ос-

увеличение здела илетск, зг^г^сдсПсггуг^ое с бактериями Enterobacter cloacae I30(TJ3}n "triphyl^soscus aursua Сстал 1 , происходит за счет В-лху.фсцгссв, -rr.x тек т/.сло Т-лгл^юцитоз, взаимодействующих с бактериями,снижается.

6. Различная способность Т- и В-пгшуляцкй лкь:фоцитсв взаимодействовать с микроорганизмами проявляется при fix стимуляции бактериями. Поел® воздействия бактериями Escherichia coli к-37 и липополисахаридом з 96 часовых культурах лимфоцитов in vitro отмочено, что пролиферация популяции В-клеток кг-к здорового, тах и больного хроническим лимфолейкозом крупного рогатого скота наибо-

лее-выражена (более чем в два раза), по сравнении с пролифератиз-ной активностью Т-клеток при тех ке условиях исследования.

7. При развитии лейкозного процесса, особенно в терминальной стадии заболевания, снижается уровень антител к .бактериям Escherichia coli, Salaonella typhimurium , а такжо количество лимфоцитов, взаимодействующих с бактериями, что свидетельствует о наличии им-ыуносупрессии при хроническом ликфолейкозе крупного рогатого скота.

Основной материал диссертации опубликован в следупцкх работе*:

1. Цикалаускено Г.С., Ыаурнцас U.U., Каваляускас П.В., Таш-ЕЕнае В.И. Способность бакториЗ E.coli вызывать бласттраисформа-ipiB В-лимфоцитов здорового и больного лейкозом крупного рогатого скота// Роль 'юалуниой системы е патогенезе лшфопродЕфвратишшх заболеваний.- Новосибирск, I9S1,- С. 144-145.

2. Kavaliauakaa P.V., tíauricae М.М. Interactions of blood lymphocytes from different поив® inbred strains with bacteria // Journal of leukocyte biology.- 1984.-Vol.36,n3.- P.450.

3. Никалаускене Г.Ю., К&валкускас П.В.", Иаурицас Ü.M. Изучз-ние взаимодействия лимфоцитов с бактериями E.coli и S. typhir.u-riua // Ддп. в ВИНИТИ.-.1986, Р 390I-B86.- С. I-I4.

4. Шшалаускене Г.Ю., Каваляускас П.В., Маурицас. М.М., Пс^ус Í3.K. Пролиферация и ди$ференцировка различных популяций лк^оцктов крупного рогатого скота после спгцуляцки уитогешши // Сольсеохо-эяйственная биология. - 1986, 8 3.- С.. I03-II0.

5. Каваляускас П.В., Цикалпускено Г.Ю., Наурнцас LS. 11., Тьыо-газнас В.И. Способность лимфоцитов крови здорового и больного ХЛЛ крупного рогатого скота связывать различные вида и штсааа байте-рлй // Этиология, патогенез и вопросы эпизоотологии лейкоза крупного рогатого скота.- Новосибирск,- 1986.- С. 66-72.

6. Kavaliauskas P.V., llikalauakiené C.J., TanoSiunae V.J. bacterial adherence to normal and leukemic bovine lymphocytes // let International Veterinary Immunology Symposiua.- Quelph, Canada, 1996.- P.157.

7. Каваляускас П.В., Тамошюнас В.И., Ыикалаускено Г.Ю. Особенности связывания бактерий лимфоцитами крови'различных линий мышей // Актуальные вопросы клинической и экспериментальной аллергологии и иммунологии.- Каунас, 1986.- С. 17-18.

8. Каваляускас П.В., Тамошюнас В.И., Микалаускене F.D. Опре-

деление функциональных свойств иыыунонсмпетентньк клеток при лейкозе,- Вильнюс, 1987.- С. 9-12.

9. Каваляуекас П.В., Тамошюнас В.И. Экспрессия рецепторов к бактериям на поверхности лимфоцитов крови коров, инфицированных

BLV и больных лимфолейкозом // Этиология, диагностика, профилях- ( тика гемабластозов.- Рига, 1987.- С. 29-30.

10. Каваляускас П.В., Тамошюнас В.И. Исследование способности лимфоцитов крови различных видов животных связывать бактерии // Теоретические и практические вопросы ветеринарии.- Тарту, 1988.- С. 28-33.

11. Каваляускас П.В., Тамошюнас В.И. Изучение рецепторов лимфоцитов, обуславливающих связывание бактерий при опухолевом росте И Цитология.- 1988.- Т. 30, » 9.- С. II3I.

12. Тамошюнас В.И., Ыикалаускене Г.Ю., Каваляускас П.З. функциональная характеристика В-лимфоцитов крови больного лиыфолеЯко-зом крупного рогатого скота после стимуляции их in Tivo и - in vitro // Ретровирусы и их роль в патологии человека и лшвотнкх.-Рига, 1989.- С. 70-77.

13. Каваляускас П.В., Тамошюнас В.И. Сравнительный анализ способности лимфоцитов крупного рогатого скота связывать бактерии а норме и при лимфолейкозе // Сельскохозяйственная биология.- IS89,

№ 4.- С. 87-90.

ВСЕСОЮЗНАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ АКАДЕМИЯ :Ч СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК имени BJ1. ЛЕНИНА ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ имени Я.Р.КОВАЛЕНКО КАВАЛЯУСКАС ПЯТРАС ВИТАУТОВИЧ

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЛИМФОЦИТОВ С БАКТЕРИЯМИ У ЗДОРОВОГО И БОЛЬНОГО ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФОЛЕЙКОЗОМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА БУМАГА ТИПОГРАФСКАЯ 60x84 1/16. ТИРАЖ 100 ЭКЗ. ЗАКАЗ 1194. УСЛ.ПЕЧ.Л.1.00. ОТПЕЧАТАНО РОТАПРИНТОМ В ИНСТИТУТЕ ИНФОРМАЦИИ ЛИТВЫ.2320СО.ВИЛЬНЮС.ТОТОРЮ 27.