Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Патоморфология и вопросы патогенеза гемобластозов крупного рогатого скота

министерство сельского хозяйства - В ДПР 1532и продовольствия российской федерации

Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени к.и. Скрябина

На правах рукописи

сноз

Григорий Васильевич

I

патоморфология И вопросы патогенеза гемобластозов крупного рогатого скота

16.00.02-патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина

На правах рукописи

сноз

Григорий Васильевич

ПАТОМОРФОЛОГИЯ И ВОПРОСЫ ПАТОГЕНЕЗА ГЕМОБЛАСТОЗОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.02-патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Работа выполнена в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина.

Научный консультант - доктор ветеринарных наук, академик РАСХН, Заслуженный деятель науки Российской Федерации, профессор Шишков В. П.

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор Сулейманов С.М.

2. Доктор ветеринарных наук Гулюкин М.й.

3. Доктор ветеринарных наук, профессор Белоусова Р.В.

I

Ведущая организация - Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана.

Защита диссертации состоится " ¿Л " <п \д98 г.

в /О час, на заседании диссертационного совет^Д 120.36.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора и кандидата наук в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23, тел. 377-93-83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Автореферат разослан " ¿¿^" -¿{'¿уУГ^ 1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Слесаренко Н.А.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Борьба с лейкозом крупного рогатого скота имеет важное государственное значение, так как заболевание получило широкое распространение среди товарных и племенных хозяйств. Это наносит большой экономический ущерб народному хозяйству, выражающийся в недостаточном племенном использовании высокопродуктивных животных из-за преждевременной выбраковки. Кроме того, мясо и молоко больных лейкозом коров содержит более высокую по сравнению со здоровыми животными концентрацию метаболитов, способствующих канцерогенезу (триптофан и др.), что непременно отражается на здоровье населения и представляет собой социальную проблему.

Вопросы заболеваемости лейкозами у человека и животных имеют в настоящее время общебиологическое значение, так как существует частичная аналогия ВЛКРС и Т-клеточного лейкоза человека. Все вышесказанное свидетельствует о несомненной актуальности проблемы этиологии и патогенеза гемобластозов (лейкозов и гематосарком), необходимых для решения задач ранней диагностики, лечения заболевания и поисков специфических средств профилактики.

В медицине все основные успехи в выяснении этиологии, патогенеза, эпидемиологии и в экспериментальной терапии злокачественных новообразований достигнуты на лейкозных объектах. Лейкоз, как справедливо отмечают В.М.Бергольц, Н.С.Кисляк, В.С.Еремеев (1978), может быть отправной точкой в решении проблемы рака в'целом, а успехи в изучении лейкозов и борьбы с ними смогут быть распространены на другие формы злокачественных новообразований.

Наряду с изучением спонтанных опухолей, включая лейкозы животных, проводили и экспериментальные исследования. Истоком экспериментальной онкологии всего мира стала работа нашего соотечественника магистра ветеринарных наук Мстислава Александровича Новинского, который провел глубокие исследования по прививке и пассированию злокачественных опухолей. В 1876-1877 гг. им описаны методики трансплантации опухолей и перевивки круглоклеточной саркомы наружных половых органов от больной собаки здоровой.

Гемобластозы поражают все виды животных, включая птиц. В настоящее время эта болезнь представляет большую опасность для крупного рогатого скота, в меньшей степени поражаются овцы.

_ л ^

свиньи, лошади, козы и другие сельскохозяйственные .тавотные.

Большой вклад в изучение гемобластозов крупного рогатого скота внесли Е.А.Андриян, А.Д.Белов, Л.Г.Бурба, В.А.Бусол, А.Ф.Вали-хов, М.И.Гулюкин, Г.Ф.Коромыслов, В.А.Крикун, Т.П.Кудрявцева, Р.А.Кукайн, Л.И.Нагаева, В.М.Нахмансон, Э.М.Нымм, Н.В.Румянцев, Х.С.Салимов, Г.А.Симонян, В.П.Шишков, J.Ferrer, L.Gross, J.M.Miller, L.D.Miller, C.Olson, G. Rosenberger, J. Van der Maaten и др. Открытие ВЛКРС позволило по-новому взглянуть на проблему этого заболевания и организовать профилактику. Особое значение в изучении проблемы гемобластозов имело выдвижение В.П.Шишковым (1979) вирусо-иммуно-генетической теории этиологии, профилактики и патогенеза лейкозов' и ряда опухолевых заболеваний животных.

Гемобластозы отличаются большим разнообразием клеточного состава и клинического проявления. В настоящее время по-прежнему господствует унитарная теория кроветворения, основы которой заложены А.А.Максимовым в' 20-е годы. Он рассматривал малый лимфоцит как полипотентную клетку. Новое учение (И.Л.Чертков, А.И.Воробьев, 1973) о кроветворении и выделении лифоцитоподобной родона-чальной стволовой клетки позволило по-новому рассматривать механизм регуляции гемопоэза и классифицировать лейкозы. Последние экспериментальные данные не подтверждают роль ретикулярных клеток как исходных при гемопоэзе, и поэтому отпала необходимость использования термина "ретикулез" применительно к лейкозам.

Цель работы. Обобщить исследования, проведенные за последние 20 лет. Рассмотрев их в новом аспекте, дать патоморфологическую характеристику спонтанных и экспериментальных гемобластозов крупного рогатого скота, включая сравнительную патоморфологию и патогенез экспериментального лимфолейкоза у каракульских овец. Обобщение на современном этапе данных, относящихся к патологоанатоми-ческой, гистологической и цитохимической диагностике гемобластозов, будет полезно для лучшего понимания проблемы лейкозов вообще и патоморфологической диагностики, в частности.

Задачи исследования:

1. Изучить локализацию патоморфологических изменений в органах и тканях крупного рогатого скота при лейкозах и гематосарко-мах на разных стадиях развития патологического процесса.

2. Найти наиболее часто и первоначально поражаемые лимфатические узлы и органы и разработать морфологические критерии диагностики лейкозов и гематосарком на ранних стадиях патологического процесса.

3. Выяснить патоморфологическое состояние органов и тканей, используя гистоцитохимические методы исследования, у больных лейкозами коров и дать оценку этим методам при дифференциальной диагностике лейкозов.

4. Дать сравнителную характеристику распространения лейкозов и гематосарком в хозяйствах.

5. Изучить особенности развития патологических изменений у крупного рогатого скота при гематосаркомах.

6. Разработать дифференциальную диагностику лейкозов и гематосарком.

7. Изучить патоморфологию и патогенез экспериментальных ге-мобластозов у крупного рогатого скота.

8. Изучить сравнительную патоморфологию и патогенез экспериментального хронического лимфоидного лейкоза у каракульских овец.

9. Установить возможность заражения овец вирусом лейкоза при манипуляциях одной иглой, контаминированной кровью от инфицированной возбудителем коровы.

10. Воспроизвести у коз лейкоз крупного рогатого скота и овец.

11. Дать морфологическую характеристику лейкемоидных реакций.

Научная новизна. Выполнение поставленных задач позволило экспериментально доказать и подтвердить патоморфологическими исследованиями роль ВЛКРС в этиологии лейкозов крупного и мелкого рогатого скота, установить закономерности поражения различных органов кроветворной системы при лейкозах и гематосаркомах крупного рогатого скота, дать морфологическую характеристику лейкемоидных реакций и ранний стадий гемобластозов крупного рогатого скота.

В процессе работы определена также специфика морфологических изменений в органах и тканях крупного рогатого скота, больного лимфолейкозом в ранней стадии заболевания в сочетании с воспалительными процессами в органах. Получены и описаны характерные па-томорфологические показатели лейкозов и гематосарком. Разработана дифференциальная диагностика этих заболеваний на основе применение комплекса патологоанатомических, гистологических, цитологи-

ческих и гистоцитохимических особенностей. Изучена возможность заражения ВЛКРС овец посредством иглы, контаминированной кровью инфицированной вирусом лейкоза животного. Определены отличия ге-мобластозов от лейкемоидных реакций.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные результаты с использованием современных методов патоморфологического исследования позволили расширить представления о патоморфологии и патогенезе гемобластозов в зависимости от стадии развития патологического процесса.

Научное значение работы заключается в изучении сравнительной патоморфологии спонтанного .и экспериментального хронического лим-фолейкоза у крупного рогатого скота и впервые воспроизведенного названного заболевания у каракульских овец, а у коз удалось получить онковирусную инфекцию. Разработаны критерии дифференциации лейкозов и гематосарком.

Практическая значимость исследований и развиваемых в диссертационной работе теоретических предложений наши практическое выражение в следующих документах:

Информационном листке N 388-86 "Патолого-морфологическая диагностика лимфоидных гемобластозов крупного рогатого скота" (1986);

Листовке ВДНХ СССР "Патолого-морфологическая диагностика лейкозов крупного рогатого скота" (1989);

Лекции "Патолого-морфологическая диагностика гемобластозов крупного рогатого скота" (1986);

Лекции "Гемобластозы крупного рогатого скота" (1990);

Методических рекомендациях "Дифференциальная диагностика гемобластозов и онкорнавирусной инфекции у сельскохозяйственных животных" (1991);

Апробация работы. Материалы исследований доложены на Всесоюзных и Всероссийских научно-методических конференциях по патологической анатомии сельскохозяйственных животных: Львов - 1978, Витебск - 1981, Каунас - 1984, Саратов - 1987, Харьков - 1990, Воронеж - 1993, Казань 1996.

Публикации. По проблеме гемобластозов опубликовано 40 работ, из них 22 по теме диссертации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 214 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждения результатов исследований, выводы, предложения, список использованной литературы включает 366 работ (287 отечественных и 79 зарубежных) и приложения. Диссертация иллюстрирована 40 микрофотографиями, 1 диаграммой, 8 таблицами.

На защиту выносятся следующие вопроси:

1. Локализация патоморфологических изменений в органах и тканях крупного рогатого скота при лейкозах и гематосаркомах на разных стадиях развития патологического процесса.

2. Патоморфология и патогенез спонтанных и экспериментальных гемобластозов крупного рогатого скота.

3. Сравнительная патоморфология и патогенез экспериментального хронического лимфоидного лейкоза каракульских овец.

4. Дифференциальная диагностика лейкозов и гематосарком.

5. Отличия гемобластозов от лейкемоидных реакций.

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Материалы и методы исследований

Исследования проводились в 1977-1997 годах в научно-исследовательской лаборатории по изучению гемобластозов и иммуномодуля-торов сельскохозяйственных животных Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина, а также на Московском, Ногинском и Егорьевском мясокомбинатах.

Материалом исследований спонтанного лейкоза служили лимфатические узлы, висцеральные органы, скелетная мускулатура и грудная кость от 905 больных коров черно-пестрой породы, убитых на мясокомбинате или павших в возрасте 3-9 лет. Для выяснения патоморфологических особенностей костной ткани на разных стадиях развития хронического лимфоидного лейкоза у крупного рогатого скота использовали все кости скелета 35 коров холмогорской породы, убитых в возрасте 5-8 лет на мясокомбинате. Гистологически исследовали

грудную кость и шестое ребро на месте соединения кости с хрящом в продольном и поперечном сечении. При серологических исследованиях (в реакции иммунодиффузии - РИД) у этих животных выявили четкие линии преципитации с вирусспецифическим антигеном. При изучении распространения гемобластозов в хозяйствах клинико-гематологичес-кие исследования проведены совместно с А.Е.Галаткжом.

Для изучения экспериментального лейкоза крупного рогатого скота проводили опыты на четырех годовалых телятах черно-пестрой породы, полученных от здоровых коров, свободных от лейковирусной инфекции. Культурапьную жидкость (48 часовая культура крови лей-козной коровы), содержащую ВЛКРС, вводили внутрибрюшинно в дозе 100 мл на одного теленка.. Трое животных былы контрольными - им вводили в таких же дозах среду Игла (В.А.Крикун). Для проведения опытов по воспроизведению лейкоза у эстонских (аборигенная, эстонская красная, эстонская черно-пестрая) пород крупного рогатого скота 15 новорожденных телят были приобретены из хозяйств, благополучных по лейкозу. В начале опытов возраст подопытных животных составлял 5-39 дней.

Для заражения использовали очищенный онкорнавирус, цельную кровь коровы, больной лейкозом, культуру микоплазм, суспензии клеток, выделенных из молока больной лейкозом коровы. Онкорнавирус был выделен из первичных культур лейкоцитов и клеток лимфатических узлов, почки, селезенки больных лейкозом коров. Данные ви-рионы имели структуру типа С. Очищенная культура микоплазм получена из тех же первичных культур, из которых был выделен исследуемый онкорнавирус. Вирус был введен телятам в костный мозг (инт-растернально), в предлопаточный лимфатический узел, внутримышечно, подкожно, внутривенно. Кровь больной лейкозом коровы в количестве 50 мл была введена внутримышечно (М.И.Парфанович, Э.М.Нымм).

Для выяснения роли онкорнавируса в этиологии лейкоза овец в опыт взяли 22 каракульских ягненка в возрасте 3 месяцев, свободных от лейковирусной инфекции. Ягнят разделили на 4 группы по принципу аналогов. Шесть ягнят I группы заражали дважды, с интервалом 3 месяца нативными лимфоцитами крови коровы, больной хроническим лимфоидным лейкозом, дозами 625x10е клеток в объеме 1 мл внутрибрюшинно, внутривенно и внутрикожно. Восемь ягнят 11 группы заразили таким же способом краткосрочной культурой клеток крови

лейкозной коровы с содержанием онковируса в дозе 100 мл. Для аналогичного заражения восьми ягнят 111 группы использовали фильтрованный онковирус в дозе 100 мл. Четыре ягненка IV группы были контрольными - им вводили в таких же дозах среду Игла. Перед введением вируссодержащего материала, через 5 и 15 дней после заражения, а затем ежемесячно проводили клинико-гематологические, серологические исследования животных для обнаружения вирусспецифи-ческих преципитирующих и комплементсвязывающих антител в сыворотках крови. Кроме того систематически проводили вирусологические исследования (Х.С.Салимов, В.А.Крикун). Нами же проведен патомор-фологический анализ органов и тканей овец после падежа животных.

Для опыта по воспроизведению лейкоза крупного рогатого скота и больных этой же болезнью овец у коз были подобраны пять групп козлят (Е.А.Андриян). В I группу включили семь козлят, которых с 14-36 дневного возраста в течение 20-28 дней выпаивали молоком от больной хроническим лимфолейкозом коровы под кличкой Соломка, а затем через 3-10 дней козлятам в течение 130 дней спаивали молоко от другой больной хроническим лимфолейкозом коровы N 1198. У коровы под кличкой Соломка количество лейкоцитов было в пределах 154-290 тыс./мкл крови, лимфоцитов 91-99 X , у коровы N 1198 -23,2-38,6 тыс./мкл и 72-977. соответственно.

Во II (контрольную) группу включили трех козлят-аналогов, которые получали кипяченое молоко этих же доноров. Наблюдение за животными I и 11 групп продолжалось в среднем в течение 3 лет 3 месяцев, а затем был проведен диагностический убой. В III группу включили трех козлят, которым в возрасте 9 месяцев 13 дней, 7 месяцев 3 дней и 7 месяцев 25 дней однократно подкожно с гепарином вводили кровь в дозе 45-60 мл соответственно от овец N 113, 244, 113, больных хроническим лимфолейкозом. Диагностический убой этих животных был проведен через 3 года 7 месяцев. У овцы N 113 количество лейкоцитов составило 560 тыс/мкл крови, лимфоцитов 99 %, у овцы N 244 - 700 тыс/мкл и 99 % соответственно.

В IV группу включили 5 козлят, которым в возрасте от 2 дней до 1 года 3 дней однократно подкожно с гепарином вводили кровь в дозе 10-20 мл от больной хроническим лимфолейкозом коровы под кличкой Соломка. Убой животных с диагностической целью проведен через 3 года 3 месяца (4 животных) и через 5 лет (одно животное). В V группу включили трех козлят. Козленку под N 29 в 24-дневном

возрасте введена подкожно с гепарином кровь в дозе 40 мл от больной хроническим лимфолейкозом овцы N 241, козленку в 78-дневном возрасте ведена кровь в дозе 45 мл больной козы N 12. У овцы N 241 лейкоцитоз достигал 268 тыс./мкл, лимфоцитов было 99 у козы N 12 соответственно 32 тыс./мкл и 94 Козленку под N 31 в 62-дневном возрасте введена подкожно кровь в дозе 45 мл больной козы N 12. Убой с диагностической целью животного, которому ввели кровь больной овцы N 241, проведен через 3 года 12 дней, а тех, кому ввели кровь больной козы N 12 - через 1 год 11 месяцев. Следует отметить, что все доноры, кроме козы N 12, пали. На секции и при гистологическом исследовании у них подтвержден хронический лимфолейкоз. Коза N 12 была убита с диагностической целью. У нее на секции характерных для лейкоза изменений не установлено.

Кроме того, проводили сравнительный анализ гематологических и патоморфологических исследований при гемобластозах крупного рогатого скота и распределение лейкозов и гематосарком в пяти хозяйствах .

С целью изучения возможного заражения овец вирусом лейкоза при манипуляциях одной иглой, контаминированной кровью инфицированной возбудителем лейкоза коровы, использовали четырех ягнят каракульской породы в возрасте б месяцев с негативными тестами на ВЛКРС. В полость инъекционной иглы помещали немного крови донора, затем тщательно ее выдували. Далее шприцем с этой иглой набирали 10 мл физраствора и подкожно вводили по 2,5 мл каждому реципиенту (Бутаев М. К.). Контрольными были два ягненка-аналога, которым физраствор в той же дозе вводили через иглу, контаминированную кровью неинфицированного ВЛКРС животного.

При изучении отличий гемобластозов от лейкемоидных реакций у крупного рогатого скота использовали лимфатические узлы, висцеральные органы, костный мозг (грудная кость) 45 коров черно-пестрой породы, которых в возрасте 4-8 лет убили на мясокомбинате. В наших опытах до убоя животных, больных только серозным и катаральным маститом или бронхопневмонией, среднее количество лейкоцитов у них составило 17,5 тыс/мкл крови, лимфоцитов - 76%, у животных с начальной стадией хронического лимфолейкоза в сочетании с маститом или бронхопневмонией соответственно - 24 и 75 и, наконец, у животных с начальной стадией лимфоцитарной лимфосаркомы в сочетании с маститом или бронхопневмонией - 14 и 74.

Материал для гистологического исследования фиксировали 10%-ным водным нейтральным формалином и жидкостью Карнуа. Декальцинацию костной ткани проводили 5-7%-ным раствором азотной кислоты. Для гистоэнзиматических исследований применяли срезы, полученные при помощи криостата или замораживающего микротома. Гистологические срезы, изготовленные из парафиновых и целлоидиновых блоков (костная ткань) окрашивали гематоксилин-эозином.

В целях углубленного изучения гистоструктурных и гистохимических изменений применяли дополнительно: для выявления липидов -судан-3, соединений железа - метод Перлса, гликогена - метод Ша-бадаша, для идентификации плазматических клеток - метод Враие; кислую фосфатазу устанавливали по Гомори, пероксидазу - по Крей-биху и Фишелю в модификации Леле.

Препараты-отпечатки лимфатических узлов, грудной кости, селезенки после высушивания на воздухе и фиксации в парах 10%- ного нейтрального формалина в течение 3 минут окрашивали по Романовс-кому-Гимза. При идентификации клеток препараты-отпечатки обрабатывали по методу Сато и Селкия для выявления в них пероксидазы, неспецифической эстеразы - по Пирсу в модификации Леффлера, хло-рацетатэстеразы - методом одновременного азосочетания по Молони, Мак-Пирсону и Флигельману, кислой и щелочной фосфатазы - по Гомори; гликоген определяли ШИК-реакцией по Мак-Манусу и Хочкису. Цитохимические исследования выполнены совместно с П.М.Мусиенко. Для автоматизации анализа исследований использовали компьютер IBM PC с применением интегрированного пакета LOTUS 1-2-3.

2. Результата исследований

2.1. Патоморфология и патогенез спонтанных гемобластозов крупного рогатого скота

В соответствии с современной классификацией гемобластозов крупного рогатого скота, предложенной В.В.Смирновой (1992) в наших исследованиях были выявлены 2 основные формы: лимфоидные лейкозы (острый лимфобластный, хронический лимфоидный), а из гемато-сарком - лимфосаркомы (лимфоцитарная, пролимфоцитарная, лимфоб-ластная, слабодифференцированная). Из лимфоидных лейкозов чаще регистрируется хронический и реже острый. •

2.2. Хронический лимфоидный лейкоз

Многолетнее изучение лейкоза крупного рогатого скота в динамике развития инфекционного и патологического процессов с помощью комплексных диагностических исследований позволило установить особенности проявления лейкоза на различных стадиях его развития, взаимосвязь между болезнью и предшествующей инфекцией, пути передачи и распространений ВЛКРС. Под стадией мы подразумеваем ступень в развитии гемобластозов, характеризующуюся определенными морфологическими изменениями в органах и тканях, а также соответствующей клийико-гематологической картиной.

Хронический лимфоидный лейкоз у крупного рогатого скота имеет свои особенности клинического и морфологического проявлений. Инкубационный период (до появления морфологических изменений в периферической крови) при экспериментальном заражении, длится 60-750 дней, а при спонтанном - 2-6 лет.Инфекционный процесс при лейкозе у крупного рогатого скота развивается медленно и незаметно. Хронический лимфоидный лейкоз характеризуется значительной пролиферацией малых лимфоцитов. Болезнь свойственна всем породам и возрастам.

В течение хронического лимфоидного лейкоза можно выделить три стадии: I начальную (предклиническую), II - четких клинико-анатомических изменений, III - генерализованную (прогрессирование опухолевых поражений и дистрофических изменений - 50-380 тыс./мкл лейкоцитов в крови и выше). Начальная стадия характеризуется незначительным увеличением количества лейкоцитов в периферической крови (свыше 9 и до 20 тыс./мкл), стойким лимфоцитозом (в среднем до 80%), отсутствием других клинический и патологоанатомических (макроскопических) изменений в лимфатических узлах.

При гистологическом исследовании капсула лимфатических узлов головы, шеи слегка инфильтрирована клетками, которые по морфологическим признакам напоминают малые лимфоциты. У некоторых животных инфильтрацию лимфоцитами капсулы можно также наблюдать в лимфатических узлах коленной складки, печени, средостения, брыжейки. Рисунок строения лимфатических узлов слегка стерт. Светлые центры фолликулов расширены и заполнены преимущественно лимфобластами. Некоторые фолликулы, особенно заглоточных лимфатических узлов, в

результате слияния теряли четкость границ. Краевые, воротные, промежуточные корковые и мозговые синусы, а также мякотные тяжи, воротные и капсулярные трабекулы заполнены опухолевыми клетками, напоминающими малые лимфоциты. Плазматические клетки формировали в мякотных тяжах небольшие гнездные скопления.

В селезенке некоторых животных можно наблюдать лимфоидную инфильтрацию капсулы, у всех животных была инфильтрация трабекул. Большинство фолликулов расширены и без условных границ. В таких расширенных фолликулах возрастает число лимфобластов, которые расположены как в расширенных светлых центрах, так и за их пределами между зрелыми лимфоцитами. Отмечено и отсутствие светлых центров некоторых фолликулов. Просветы синусов заполнены лимфоцитами. Красная пульпа инфильтрирована клетками лимфоидного типа, среди которых преобладают малые лимфоциты.

В костном мозге наблюдали небольшие диффузно-очаговые разрастания клеток, похожих на малые лимфоциты. Некоторые бластные клетки имели атипичное строение, принимали неправильную форму. В синусоидах печени некоторых животных выявляли лимфоидные инфильтраты в виде небольших цепочек. Очаговые лимфоидно-гистиоцитарные инфильтраты обнаруживали в печеночных триадах, вокруг некоторых почечных телец и канальцев. Изменения в сердце, легких, скелетной мускулатуре и в мышечной оболочке желудочно-кишечного' тракта отсутствовали.

Следовательно, при хроническом лимфолейкозе в ранний период болезни лейкозные изменения проявляются в костном мозге, мякотных тяжах, светлых центрах фолликулов и синусах лимфатических узлов головы и шеи. Затем в патологический процесс вовлекаются все наружные и внутренние лимфатические узлы, селезенка, иногда печень. В заключение следует сказать, что мы выделяем эту стадию, обозначая ее как начальную, исходя из того, что она диагностируется морфологическими (гистологическими) методами.

Стадия четких клинико-анатомических изменений (II) характеризуется увеличением количества лейкоцитов в крови до 50 тыс./мга при стойком лимфоцитозе, а также увеличением селезенки и некоторых наружных и внутренних лимфатических узлов. Могут выявляться изменения в виде незначительных саловидных разрастаний в сердце, печени, пачках, преджелудках, кишечнике и пр.

Под микроскопам в лимфатических узлах выявляли сглаживание

рисунка строения. Сохранившиеся фолликулы расширены, а их светлые центры заполнены лимфоцитами и лимфобластами. Краевые, воротные, промежуточные корковые и мозговые синусы, а также мякотные тяжи трудно различимы, заполнены однородными клетками, напоминающими малые лимфоциты. Такими же клетками инфильтрированы капсулы и трабекулы лимфатических узлов. В селезенке наблюдали увеличение фолликулов, многие из них в результате расширения сливаются. В некоторых фолликулах светлые центры становятся незаметными. Красная пульпа,' синусы, а также участки вокруг синусов в виде муфт переполнены лимфоцитами.

В костном мозге грудной кости выявляли значительные диффузные или диффузнр-очаговые разрастания клеток, напоминающих малые лимфоциты; в печени, почках', сердце, легких - лимфоидные инфильтраты. В печени они локализовались в междольковой соединительной ткани и в синусоидах в виде цепочек, в почках - преимущественно около сосудов, телец, и между канальцами. В миокарде и скелетной мускулатуре инфильтраты располагаются между мышечными волокнами, в легких - вокруг бронхов и сосудов.

Генерализация процесса (лейкемизация, III стадия) при лейкозах явилась выражением опухолевой прогрессии на поздних стадиях болезни. При этом в процесс вовлекались все висцеральные органы, нарушалась гистологическая структура лимфатических узлов. Изменение костного мозга при лейкозах способствовало интенсивному росту клеток лимфатического ряда и увеличению их количества в периферической крови! Следовательно, в костном мозге происходило постепенное вытеснение миелоидного кроветворения, что приводило к лим-фоцитарной трансформации. Кроме того, наблюдали сильные дистрофические изменения в паренхиматозных органах и костной ткани (табл. 1).

, Гистологические изменения костной ткани в начальной стадии болезни незначительны. Исключение составляет костный мозг, в котором отмечали диффузно-очаговые разрастания лейкемических малых лимфоцитов, наличие нормобластов; в небольшом количестве встречались мегакариоциты. Для второй стадии болезни характерно истончение коркового слоя с небольшим количеством трабекул, тонких, различной формы с неровными краями. В каналах остеонов, а также в костном мозге множество сосудов, переполненных кровью. Каналы остеонов неодинакового размера. Большинство иа них сильно расширены

и превращены в лакуны, границы последних выстланы остеобластами и остеокластами. В костномозговых полостях отмечается замещение ми-елоидных клеток малыми лейкемическими лимфоцитами.

1. Локализация патологанатомических и гистологических изменений в органах и тканях крупного рогатого скота при спонтанных лейкозах и гематосаркомах на разных стадиях развития патологического процесса (%).

i-1-т-————-----1

| | Макроизменения (Гистологические изменения |

I I-;-1-:-1

I Органы | стадии |

I I-1-1-1-1-1

I | I I II I III I I I II | III |

I_i_i_i_i-i-1__i

Лимфатические

узлы 100/100 100/100 100/100 100/100 100/100

Селезенка 100/3 100/4 100/- 100/56 100/60

Печень 10/10 20/19 50/1 100/10 100/30

Почки 10/10 32/40 15/4 18/10 50/76

Сердце - 36/46 34/- 43/20 89/56

Легкие - 4/3 10/1 15/6 29/16

Преджелудки - 8/14 -/8 2/14 9/20

Сычуг - 8/13 -/12 - 8/35

Скелетная

мускулатура - -/11 - - 7/20

Матка - 1/11 - 1/- 1/11

Молочная железа - - 4/2 - 5/3 5/4

Серозные

покровы - -/14 -/12 -/17 -/60

Примечание. В числителе указаны лейкозы (п=350), а в знаменателе - гематосаркомы (п=150).

При генерализованной стадии хронического лимфолейкоза изменения в костной ткани такие же, как и во второй стадии болезни, но выражены сильнее.

2.3. Острый лимфовластный лейкоз

Острый лимфобластный лейкоз встречается у крупного рогатого скота в основном в возрасте 3 лет и старше. Заболевание характеризуется такой же стадийностью и локализацией патологического процесса, как и хронический лимфоидный лейкоз, высоким лейкоцитозом (до 360 тыс./мкл крови) и выраженным стойким лимфоцитозом (86-90%). Следует отметить, что в основе подразделения лейкозов на острые и хронические лежит строение опухолевых клеток. К острым относятся лейкозы, клеточный субстрат которых представлен бластами, а к хроническим -. зрелыми элементами.

При микроскопическом исследовании в зависимости от степени прогрессирования лейкозного процесса выявляли системную диффузную лейкозную инфильтрацию в костном мозге, селезенке, лимфатических узлах, а также пейеровых бляшках и солитарных фолликулах кишечника, в печени, почках, сердце, легких, скелетной мускулатуре. В костном мозге грудной кости возрастает число лимфобластов (10-15 %) и недифференцированных клеток с нуклеолами. К лимфобластам относили клетки размером 9-14 мкм на препаратах-отпечатках и 4-6 мкм на гистопрепаратах, с округлыми ядрами, содержащими 1-3 крупные нуклеолы и нежную сеть хроматина. Некоторые клетки имели неправильную форму ядра, более широкий ободок цитоплазмы и напоминали моноциты.

В селезенке отмечали значительное увеличение фолликулов и более частое, чем при хроническом лимфолейкозе, их слияние. Фолликулы были заполнены лимфобластами с описанными выше морфологическими признаками. Лимфобласты также преобладали и в красной пульпе, чаще вблизи фолликулов и истонченных трабекул.

В лимфатических узлах капсула инфильтрирована лимфоцитами, лимфобластами и пролимфоцитами. Синусы плохо различимы, заполнены лимфобластами и лимфоцитами. Светлые центры фолликулов, как правило, содержат много лимфобластов. Некоторые фолликулы в резуль тате расширения теряют границы. Кроме того, в лимфатических узлах, особенно около истонченных и "изъязвленных" трабекул мозгового вещества, находили поля, сплошь состоящие из лимфобластов. Эти очаги имели нечеткие границы и нередко сливались, приводя к нарушению структуры лимфатических узлов. В таких случаях лимфоб-

ласты располагались диффузно с равномерно инфильтрированными между ними зрелыми лимфоидными клетками. Сохранившиеся местами тра-бекулы так же, как и при хроническом лимфолейкозе, подвергались гиалиновому перерождению. Иногда в лимфатических узлах наблюдали пролиферацию крупных клеток неправильной формы со светлыми ядрами, морфологически напоминающими иммунобласты. В других органах и тканях лейкозные изменения во многом напоминали хронический лим-фолейкоз.

На гликоген реагировали 25,8% лимфобластов. Характерной гистохимической особенностью заболевания явилась крупногранулярная ШИК-положительная реакция. В препаратах-отпечатках лимфатических узлов она составила 12,5% . Реакция лимфобластов на кислую фосфа-тазу слабоположительная (75% клеток реагировали отрицательно). Активность неспецифической эстеразы также низкая. В большинстве лимфобластов она не проявлялась, и только 5% клеток содержали крупные единичные глыбки фермента. Реакция на пероксидазу, липи-ды, щелочную фосфатазу, хлорацетатэстеразу были отрицательными.

Таким образом, пролиферация и инвазия лейкозных клеток в организме животного приводят к различным тяжелым морфофункциональ-ным изменениям в кроветворных и некроветворных органах, нарушению обмена веществ, кахексии и смерти.

2.4. Особенности развития патологических изменений у крупного рогатого скота при гематосаркомах

У крупного рогатого скота наиболее часто из гематосарком встречаются различные варианты лимфосарком. Лимфосаркома - злокачественная опухоль с первичным поражением лимфатических узлов. В отличие от лейкоза при лимфосаркомах нет специфических изменений костного мозга и периферической крови. Лимфосаркома в отличие от лейкозов обычно характеризуется отсутствием макроскопических изменений в селезенке и в некоторых лимфатических узлах. Чаде поражаются средостенные и забрюшинные, реже паховые и подмышечные лимфатические узлы. Обладая агрессивным инфильтрирующим ростам, лимфосаркоматозные элементы прорастали капсулу лимфатических узлов, проникали в соседние ткани и органы. Пораженные лимфатические узлы резко увеличены, бугристые, нередко срастались и формировали опухолевые конгломераты.

При микроскопическом исследовании лимфатических узлов и селезенки светлые центры и очертания фолликулов становятся незаметными вследствие пролиферации в парафолликулярных зонах новообразованных клеток. В зависимости от преобладающего типа клеток лим-фосаркому подразделили на варианты: лимфоцитарный, пролимфоцитар-ный, лимфобластный, слабодифференцированный. Основанием для постановки диагноза на лимфоцитарную лимфосаркому служило выявление в опухолевом субстрате мелких лимфоидных клеток с темно-окрашенными и зазубренными ядрами. В пораженных лимфатических узлах и в новообразованиях находили множество обломков ядер и частицы цитоплазмы, которые скапливались вокруг клеток и создавали грязный фон. В отличие, от хронического лимфолейкоза при лимфоцитарной лимфосаркоме более выражен клеточный агипизм.

Преобладание больших округлых клеток типа пролимфолцитов с расщепленными ядрами и имеющих просветвленные грубые глыбки хроматина, а также равные им по величине клеточные элементы с темными ядрами и нередко отросчатой цитоплазмой (большие лимфоциты) позволили нам диагностировать пролимфоцитарную лимфосаркому. Лим-фобластная лимфосаркома более гетерогенна в цитологическом отношении. Клеточный состав представлен атипичными лимфобластами, отличающимися неровным контуром ядер. Эти лимфобласты, величиной 3-8 мкм, имели округлые, овальные угловатые ядра, часто с неглубоким вдавлением. Ядра содержали мелкоглыбчатый хроматин и отчетливые нуклеолы в количестве от 2 до 5. Ободок цитоплазмы узкий, базофильный, нередко с расширением на одном полюсе клетки; 5,6% лимфобластов содержали гликоген, они обладали низкой активностью кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы. Реакции на перокси-дазу, хлорацетатэстеразу были отрицательными. При слабодифферен-цированном варианте лимфосаркомы выявляли лимфоидные элементы различной степени анаплазии.

Таким образом, малигнизация не приводит к развитию значительных цитоморфологических и цитохимических особенностей. Тем не менее, при тщательном исследовании и при соответствующем опыте совокупность ряда признаков позволяет решить вопрос о доброкачественности или злокачественности клетки. Важным признаком злокачественности клеток является их полиморфизм, который особенно выражен при лимфосаркомах.

2.5. Сравнительный анализ распространения лейкозов и гематосарком в хозяйствах.

Распространенность лейкозов и гематосарком в хозяйствах представлена в таблице 2, из которой видно, что данный показатель в первом хозяйстве был соответственно 82,75 и 17,32 %. Такая же закономерность проявлялась и в других хозяйствах.

Для определения достоверности распределения лейкозов и гематосарком использовали метод хи-квадрат (табл.2). Во всех случаях установлена достоверность распределения общей заболеваемости и формы (Р<0,005-0,001).

2. Результаты патоморфологических исследований материала от животных, больных гематобластозами.

1 1 | Хозяйства 1 1 Количество животных 1....... | В т.ч. 1 1 установлены |

1 | лейкозы, 1 1 1 | гематосаркомы, % | ! 1

| Первое 42 82,75 17,25 |

| Второе 57 85,25 14,75 |

I Третье 114 85,65 14,35 |

| Четвертое 64 80,60 19,40 |

I Пятое 1 48 84,25 15,75 | .... 1

2.6. Дифференциальная диагностика гемобластозов

При лейкозах крупного рогатого скота наблюдали системное поражение кроветворной ткани, стойкий лимфоцитов. Причем характерным патологоанатомическим признаком, особенно во второй и третьей (генерализованной) стадиях лейкозов, является увеличение селезенки. На разрезе она зернистагя, увеличенные фолликулы серо-белого цвета. При гематосаркомах отмечают изолированное поражение отдельных или нескольких лимфатических узлов грудной и брюшной полостей, а также отсутствие макроскопических изменений в селезенке. И лишь при генерализации заболевания может значительно увели-

чиваться селезенка с неразличимыми на разрезе фолликулами.

Следует отметить, что хронический лимфоидный и острый лим-фобластный лейкозы имеют, некоторое сходство. Диагноз при указанных формах лейкоза устанавливают морфологически на основе выявления преобладающих по степени зрелости клеточных форм. Вспомага-тельным тестом могут быть гистохимические реакции на гликоген и неспецифическую эстеразу. Наличие мелких и средних гранул гликогена в клетках и слабая диффузная реакция их на неспецифическую эстеразу указывают на хронический лимфоидный лейкоз. Крупногранулярная ШИК-реакция на гликоген и присутствие в небольшом количестве клеток единичных глыбок неспецифической эстеразы характерны для острого яимфобластного лейкоза.

Гематосаркомы характеризуются наличием в части анаплазиро-ванных элементов крупногранулярной ШИК-реакции на гликоген. При гематосаркомах, б отличие от лейкозов, более выражен клеточный атипизм.

2.7. Патоморфология и патогенез экспериментальных гемобластозов

2.7.1. Патоморфология и патогенез экспериментальных гемобластозов крупного рогатого скота

После заражения культуральной жидкостью, содержащей BJIKPC, у животных через три месяца были выявлены признаки лейковирусной инфекции, а через 7-9 месяцев - изменения картины крови, характеризующиеся нарастанием количества лейкоцитов и увеличеснием процента лимфоцитов.

В результате заражения непокрытая телка N 377 пала в возрасте 66 месяцев с характерными для лейкоза изменениями. Телку N 349 через 7 лет и вола N 1314 через 59 месяцев после заражения убили в тяжелом состоянии с выраженными клинико-анатомическими изменениями, характерными для гемобластозов. Телку N 350 через 6 лет после заражения убили в здоровом состоянии.

Характеризуя экспериментальных животных следует отметить, что у животного N 377 через 4 года в крови выявили 150 тыс./мкл лейкоцитов, 90% лимфоцитов (абсолютный лимфоцитов составил 135000). В последние месяцы жизни отмечены прогрессирующее иеху-

дание, незначительное увеличение наружных лимфатических узлов (предлопаточных, околоушных, поверхностных паховых).

На секции выявили системную гиперплазию лиимфатических узлов и лимфоидной ткани, гиперплаз™ селезенки, опухолевые разрастания в стенке сычуга, в правом предсердии, эндо- и миокарде; абсцесс печени, серозную атрофию эпикардиального жира. При гистологическом исследовании у животного установили генерализованный хронический лимфолейкоз.

У телки N 349 изменения в крови, как и у животного N 377, начали проявляться через 9 месяцев после заражения, затем они постепенно нарастали, и к концу опыта количество лейкоцитов достигло 200 тыс/мкл, лимфоцитов - 97 % (абсолютное количество лимфоцитов - 194000). При послеубойном осмотре животного установлены увеличение и саловидность на разрезе подкожных шейных, почечных, тазовых, а также печеночных и лимфатических узлов рубца. В сре-достенных лимфатических узлах выявили опухолевые разрастания (35х13х8х см), саловидные на разрезе. Селезенка увеличения (90x30x10 см), на разрезе зернистая. Увеличенной была также печень. Макроскопические изменения в лимфоидной ткани и органах были характерны для хронического лимфоидного лейкоза. В патологических клетках гликоген выявили в виде единичных крупных, средних и мелких гранул.

У вола N 1314 изменения в крови обнаружены через 7 месяцев после заражения. Через 51 месяц абсолютный лимфоцитоз составлял 64 930, спустя 3 месяца резко снизился до 38500.

За месяц до гибели у животного стали резко увеличиваться предлопаточные, коленной складки, околоушные, заглоточные и поверхностные паховые лимфатические узлы и снизился лейкоцитоз. После убоя установлено также увеличение подключичного, средостен-ного, брыжеечных и лимфатических узлов преджелудков. Грудной передний и лимфатические узлы, располагающиеся по бокам грудной кости, у основания ребер, также увеличены, на разрезе саловидны со стертым рисунком. Опухолевые разрастания выявлены в стенке сычуга, сетки, книжки, мочевого пузыря, в правом предсердии, эндо-и миокарде. Селезенка слегка увеличена. Из других патологоанато-мических изменений выявлены серозно-фибринозный плеврит и перитонит, острый катаральный гастроэнтерит, серозная атрофия эпикардиального жира, компрессивный ателектаз сердечных и передних частей

диафрагмальных долей легких, узуры суставных хрящей конечностей.

При гистологическом исследовании макроскопически измененных лимфатических узлов наблюдали полную стертость рисунка строения. Их ткань была замещена крупными лимфобластоподобными клетками, которые преобладали также и в новообразованиях. Сохранившиеся в фрагментальном виде трабекулы подвергались разволокненио и гиалиновому перерождению. В корковом и мозговом веществах встречали небольшие гнездовидные скопления малых лимфоцитов, оставшиеся, по-видимому, от нормальных фолликулов.

В селезенке отмечено также нарушение гистологической структуры. Однако трудно сказать, была ли селезенка в данном случае первичным очагом заболевания или вторичным, так как исследования проводили уже на секционном материале. При спонтанных злокачественных лимфомах она, как правило, поражается вторично. В данном случае гистологические изменения проявлялись как в белой, так и в красной пульпе. Фолликулы уменьшены, что видимо связано со значительной инфильтрацией красной пульпы опухолевыми лимфобластами. Некоторые фолликулы увеличены с выраженным лимфобластозом. Патологические клетки красной пульпы имели угловатую, овальную, реже грушевидную форму и содержали большие светлые ядра с 2-3 нуклео-лами или диффузным мелкоглыбчатым хроматином. Выявлены также диф-фузно-очаговые лимфоидные инфильтраты в костном мозге грудной кости. Диффузные опухолевые инфильтраты обнаружены в мочевом пузыре; сердечном ушке и миокарде. Мышечные волокна миокарда и сердечного ушка находились в состоянии зернистой дистрофии. Инфильтрация печени и легких была слабой и носила очаговый характер. В почках установили острый серозно-фибринозный гломерулонефрит.

!ШК-реакция патологических клеток была незначительной, однако в единичных клетках она проявлялась в виде типичных для лим-фобластной лимфосаркомы крупных гранул. На основании проведенных комплексных исследований у вола диагностирована генерализованная лимфобластная лимфосаркома.

2.7.2. Результаты воспроизведения лейкоза у эстонского крупного рогатого скота

Для воспроизведения лейкоза у эстонского крупного рогатого скота был поставлен опыт продолжительностью 986-1271 день. За пе-

риод наблюдений характерных изменений для лейкоза у животных не обнаружено и поэтому их направили на диагностический убой. На основании данных патоморфологического, серологического и вирусологического исследований у 6 из 15 подопытных животных установлен лимфолейкоз. Гистологические изменения были характерны для начальной стадии хронического лимфоидного лейкоза.

Как показали результаты экспериментального воспроизведения лейкоза крупного рогатого скота, у эстонских пород это заболевание можно воспроизвести путем введения очищенного онкорнавируса и различного вируссодержащего материала больных лейкозом коров (лейкоцитарная масса, культуральная жидкость). Однако часть зараженных животных не заболевает, вероятно вследствие генетической устойчивости организма.

2.7.3. Сравнительная патоморфология и патогенез экспериментального хронического лимфолейкоза каракульских овец

Исследования на каракульских овцах показали, что из 18 животных у 10 (55,55%) через 6-92 месяца после экспериментального заражения онковирусным материалом были выявлены типичные патомор-фологические признаки хронического лимфолейкоза. У трех животных, зараженных фильтрованным онковирусом, заболевание возникло через 6-8 и 62 месяца после введения. У четырех баранов, зараженных двухсуточной культуральной жидкостью хронический лимфолейкоз развился через 21-32, 82 месяца после опыта. Из I группы овец, зараженных нативными лейкоцитами, лимфолейкоз установлен у трех через 83, 86, 92 месяца после заражения.

На секции у 10 животных установлено увеличение в 2-3 раза предлопаточных, надколенных, паховых, подчелюстных, средостенных, брыжеечных, подвздошных лимфатических узлов. На разрезе сильно увеличенных лимфатических узлов рисунок строения сглажен. На поверхности большого сальника и на серозных оболочках преджелудков у четырех овец отмечены множественные саловидные разрастания диаметром 0,5-9 см. У одного животного, павшего через 2 года после заражения, в брюшной части вдоль позвоночника обнаружены опухолевые разрастания (12x9x5 см). Средостенные лимфатические узлы, срастаясь между собой, образовывали большой конгломерат, который

у некоторых животных доходил до 16-13x3-4 см. У восьми животных отмечено увеличение селезенки.

В зависимости от тяжести заболевания обнаруживали лейкозные изменения в преджелудках, печени, почках, сердце и пр. В тяжелых случаях ; наблюдали дистрофические изменения в паренхиматозных органах. Хронический лимфолейкоз сопровождался пневмониями.

При гистологическом исследовании в костном мозге выявляли диффузно-очаговые разрастания клеток, напоминающих малые лимфоциты. Изменения лимфатических узлов, селезенки и других органов не отличались от хронического лимфоидного лейкоза крупного рогатого скота.

Наши 0ПЫТЫ1 на животных этой породы свидетельствуют о ведущей роли ВЛКРС в этиологии этого заболевания. Более того, патоморфо-логический анализ не только подтвердил экспериментально индуцированный хронический лимфоидный лейкоз у каракульских овец, но и свидетельствовал о глубоких расстройствах жизнедеятельности организма подопытных животных. Причем в экспериментальном материале по сравнению со спонтанным при летальном исходе хронический лимфолейкоз проявлялся более выраженной генерализацией поражения лимфатических узлов и других органов и тканей.

2.V.4. Результаты опыта по экспериментальному воспроизведению лейкоза коз

Опыты, проведенные на козлятах, показали, что в I группе животных, которые получали молоко от больных лейкозом коров, гематологические показатели находились в пределах физиологической нормы. Через разные сроки после заражения у четырех козлят при серологическом исследовании (РИД) выявили четкие линии преципитации с вирусспецифическим антигеном. Остальные животные I опытной и II контрольной групп при исследовании в РИД были отрицательными. У животных III группы, которых заражали подкожно кровью от больных лейкозом овец, гематологические показатели находились в пределах физиологической нормы. Однако через 36 месяцев все животные этой группы стали РИД-положительными. Все животные IV группы, которым однократно подкожно вводили кровь от больной хроническим лимфолейкозом коровы, через 3 года стали РИД-положительными. У двух козлят из пяти этой группы наблюдали сублейкемичес-

кие показатели крови: у одного (И 11) через 39 месяцев после заражения количество лейкоцитов не превышало 18 тыс/мкл при лимфо-цитозе 84%, у другого (Ы 12) через 60 месяцев после заражения лейкоцитов было 32 тыс/мкл, лимфоцитов - 94%. У животных V группы, которым подкожно введена кровь от бальной лейкозом овцы и козы N 12, гематологические показатели были в пределах нормы, однако через 18 месяцев козлята стали РИД-положительными. При пато-морфологических исследованиях животных всех групп изменений, характерных для лейкоза не установлено.

Таким образом, экспериментальное заражение коз молоком больного лейкозом крупного рогатого скота и кровью лейкозных овец, показало, что из 18 козлят лишь у двух (Ы 11 и 12), которым в возрасте 1 года 3 дней подкожно ввели кровь больной лейкозом коровы, установлена сублейкемическая картина крови без проявления клинических признаков лейкоза. Наши исследования показали, что по степени восприимчивости к ВЛКРС козы не отличаются от овец. Основная разница заключается в том, что козы более устойчивы к развитию узловатой (опухолевой) формы лейкоза.

2.7.5. Возможность заражения овец вирусом лейкоза при

манипулициях одной иглой, контаминированной кровью от инфицированной возбудителем коровы

В этом разделе приведены данные экспериметального заражения ВЛКРС овец в условиях, максимально приближенных к естественным: при манипуляциях одной и той же иглой, контаминированной кровью от инфицированной возбудителем лейкоза коровы. Спустя 1-3 месяца у всех четырех подопытных овец при описанном пути распространения болезни развилась инфекция ВЛКРС, которую тестировали;с гликопро-теидным антигеном онкорнавируса. У одной из подопытных особей (у нее развилась генерализованная стадия болезни: прогрессирование опухолевых поражений и дистрофических изменений) с 10-го месяца после инфицирования выявляли антитела к внутреннему полипептидному антигену онкорнавируса. За этим животным наблюдали в течение 46 месяцев. У животного отмечали стабильный относительный лимфоцитов (72-86%) при нормальном уровне лейкоцитов. За 6 месяцев до убоя овца резко похудела и ее в состоянии агонии убили.

На секции у нее отмечены опухолевые поражения различной ве-

личины в сердце, печени, почках. Лейкозные поражения отмечены во всех лимфатических узлах. Селезенка утолщена, ее капсула напряжена.

При гистологическом исследовании установили, что рисунок строения лимфатических узлов стерт, мякотные тяжи и светлые центры фолликулов трудноразличимы. В большинстве лимфатических узлов корковое и мозговое вещество нельзя различить, они представлены в основном скоплениями лимфоцитов, которые заполняли синусы, инфильтрировали капсулу и трабекулы. Сохранившиеся трабекулы мозгового вещества вследствие инфильтрации значительно истончены. Красная пульпа селезенки наполнена клетками, напоминающими малые лимфоциты; трабекулы истончены и инфильтрированы лимфоцитами. В печени, почках., сердце обнаруживали дистрофические изменения и значительные диффузные инфильтраты, преимущественно состоящие из клеток, напоминавших малые лимфоциты.

Таким образом, с помощью патологоанатомических и гистологических исследований у экспериментально зараженного животного выявили хронический лимфолейкоз. Значит, инфицирование овец ВЛКРС при нарушениях правил асептики во время ветеринарно-зоотехнических обработок возможно и может быть одним из путей распространения болезни.

2.8. Отличие гемобластозов от лейкемоидных реакций у крупного рогатого скота

Под лейкемоидными реакциями понимают патологические состояния крови, сходные с картинами крови при гемобластозах, в частности при лейкозах, но имеющие другое происхождение. Такие реакции часто наблюдают при мастите и бронхопневмонии, что затрудняет постановку диагноза в ранний период заболевания лейкозом.

Мы провели исследования по изучению специфики морфологических изменений в лимфатических узлах, селезенке, костном мозге коров, больных маститом или бронхопневмонией, а также при сочетании этих заболеваний с хроническим лимфоидным лейкозом или лимфоци-тарной лимфосаркомой на ранней стадии.

Проведенные исследования показали, что у больных маститом или бронхопневмонией животных патоморфологические изменения, характерные для лейкемоидных реакций, проявляются только в регионарных лимфатических узлах и, в отличие от гемобластозов, харак-

теризуются отсутствием гиперпластических процессов лимфоидной ткани в органах лимфопоэза, полиморфноклеточной (гистиоцитами, нейтрофилами, ретикулярными и плазматическими клетками) инфильтрацией последних.

При сочетании начальной стадии хронического лимфоидного лейкоза с маститом или бронхопневмонией изменения, свойственные лей-кемоидным реакциям, более выражены в регионарных лимфатических узлах, а характерные для дейкоэов четко проявляются в нерегионарных лимфатических узлах, расположенных в области головы и шеи. При сочетании начальной стадии лифоцитарной лимфосаркомы с маститом или бронхопневмонией морфологические изменения, свойственные лейкемоидным реакциям, выражены в регионарных лимфатических узлах, а картина лимфоцитарной лимфосаркомы проявляется только в местах локализации опухоли и близрасположенных лимфатических узлах.

2.9. Гемобластозы крупного рогатого скота и их осложнения

Исследования показали, что осложнения спонтанных лейкозов и лимфосарком различными патологическими процессами зависят от периода (стадии) болезни.

Пролиферация и инвазия лейкозных клеток в организме животных приводит к различным патологическим изменениям, которые сопровождаются дистрофическими процессами в паренхиматозных органах (печени, почках, сердце). Наиболее ярко такие изменения, свидетельствующие о гипоксии и интоксикации организма, проявлялись при лимфосаркомах, остром лимфобластном лейкозе и генерализованной стадии хронического лимфоидного лейкоза. Наши исследования согласуются с данными А.Е.Галатюка (1986) и других исследователей, которые подтверждают, что при хроническом лимфоидном лейкозе процессы созревания и функционирования иммунокомпетентных клеток нарушены в меньшей мере, чем при остром лимфобластном лейкозе и ге-матосаркомах.

3. Заключение

Заболевания, объединенные термином "гемобластозы", у крупного рогатого скота являются наиболее тяжелыми. В развитии данной

болезни первостепенное значение имеет вирус лейкоза крупного рогатого скота. Опыты показали, что пролиферация и инвазия лейкоз-ных клеток в организме животных приводят к различным патологическим изменениям в кроветворных и других органах. Лейкозные клетки, подобно всем опухолевым, характеризуются атипизмом и анаплазией разной степени выраженности. Однако они сохраняют основные морфологические и гистохимические особенности тех кроветворных клеток, из которых они произошли. При гематосаркомах более выражены признаки злокачественности клеток, на что указывает их полиморфизм.

Основной характерной чертой лейкозных и опухолевых клеток является неспособность к правильной дифференциации, созреванию. При нормальном 1гемопоэзе кроветворные клетки, созревая, теряют способность к делению, тем самым дифференциация является как бы физиологическим тормозом пролиферации. Лейкозные клетки могут проходить значительно большее число циклов деления, чем нормальные клетки крови, что создает огромную клеточную продукцию, характеризующую лейкоз.

Важное место в дифференциации гемобластозов имеет ШИК-реакция патологических клеток на гликоген и неспецифическую эстеразу. При хроническом лимфоидном лейкозе ШИК-положительный материал выявляется вокруг ядер некоторых лимфоцитов в виде ободка, состоящего из средних и малых, а иногда и единичных крупных гранул на неокрашенном фоне. Лимфоцитарная лимфосаркома помимо этого характеризуется наличием в части анаплазированных элементов крупногра-нулярой ШИК-реакцией на гликоген. При остром лимфобласгном лейкозе и лимфобластной лимфосаркоме наблюдается наличие в некоторых лимфобластах крупных множественных гранул гликогена на неокрашенном фоне. Иногда ШИК-положительный материал располагается на одном полюсе клеток. Процент реагирующих клеток и интенсивность ШИК-реакции при лимфосаркомах в сравнении с лимфоидными лейкозами заметно ниже. Активность неспецифической эстеразы проявляется в некоторых клетках в виде слабого диффузного окрашивания цитоплазмы (при хроническом лимфолейкозе и лимфоцитарной лимфосаркоме) или одиночных глыбок (при остром лимфобластном лейкозе и лимфобластной лимфосаркоме).

Лейкемические инфильтраты на разных стадиях хронического лимфоидного и острого лимфобластного лейкозов не давали реакцию на пероксидазу и хлорацетатзстеразу, что исключало миелолейкоз.

Следовательно, определение в клетках хлорацетатзстеразы, неспецифической эстеразы и гликогена, позволяет идентифицировать клетки, и проводить дифференциацию гемобластозов с большой точностью.

В экспериментах, проведенных на телятах и ягнятах,¡получены убедительные доказательства онкогенности и инфекционности in vivo вируса типа С крупного рогатого скота, так как осуществлена триада Генле-Коха (выделен от больного животного возбудитель, проведено заражение животного с воспроизведением клинических признаков и выделение от зараженного животного идентичного возбудителя). Экспериментально воспроизведенный у крупного рогатого скота хронический лимфоидный лейкоз по клинико-морфологическому проявлению существенно не отличается от спонтанного. Экспериментально воспроизведенная лимфобластная лимфосаркома по характеру изменений в кроветворных органах и морфологии клеточных элементов имеет признаки, сходные со спонтанной, но отличается сильно выраженной генерализацией.

III. ВЫВОДЫ

1. Хронический лимфоидный и острый лимфобластный лейкозы представляют собой опухолевые заболевания лимфоидной (иммуноком-петентной) ткани. Основным морфологическим субстратом опухоли при хроническом лимфолейкозе являются зрелые лимфоциты, а при остром лимфобластном лейкозе - лимфобласты, которые разрастаются и , накапливаются в повышенном количестве в лимфатических узлах, селезенке, печени, костном мозге, а также в других органах и тканях.

2. При спонтанном лимфоидном лейкозе в ранний период болезни лейкозные изменения вначале проявляются в костном мозге, в мякот-ных тяжах, светлых центрах фолликулов и синусах лимфатических узлов головы и шеи, в затем переходят на все наружные и внутренние лимфатические узлы с вовлечением в патологический процесс селезенки, а иногда и печени.

3. Лимфосаркома - злокачественная опухоль из клеток лимфоци-тарного ряда с первичным поражением лимфатических узлов. В отличие от лейкоза при лимфосаркомах отсутствуют специфические изменения костного мозга и периферической крови.

4. Особенностями различных вариантов лимфосарком является отсутствие системного вовлечения в патологический процесс лимфа-

тических узлов и паренхиматозных органов, формирование конгломератов и опухолевых образований. При гистологическом исследовании селезенки светлые центры и очертания фолликулов становятся незаметными вследствие пролиферации в парафолликулярных зонах новообразованных клеток.

5. Основой дифференциальной диагностики лимфосарком является выявление преобладающего типа клеток в очагах опухолевого роста, обладающих характерными Морфологическими особенностями.

6. Наиболее уязвимым местом поражения при гематосаркомах являются лимфатические узлы преджелудков и кишечника с поражением соседних тканей и органов. Кроме того, патоморфологические изменения при гематосаркомах могут начинаться с поражения лимфатических узлов периферических групп и локализоваться в любых органах и системах.

7. Генерализация процесса при гемобластозах является выражением опухолевой прогрессии на поздних стадиях заболевания.

8. Экспериментальное заражение вирусом лейкоза крупного рогатого скота приводит к развитию лейкозного процесса с проявлением клинико-гематологических и патоморфологических изменений. У телят черно-пестрой породы лейкоз удалось воспроизвести в 75% случаев, эстонской - в 40%, у каракульских овец - в 55% случаев.

9. По степени восприимчивости к вирусу лейкоза крупного рогатого скота козы не отличаются от овец, однако они более устойчивы к развитию опухолевой (узловатой) формы лейкоза.

10. При экспериментальном заражении телят вирус лейкоза крупного рогатого скота может трансформировать лимфоидные клетки в клетки, характерные для различных форм как лейкоза, так и гематосарком.

11. Лейкемоидные реакции характеризуются разной степенью поражения лимфатических узлов, отсутствием или слабой выраженностью гиперпластических процессов лимфоидной ткани в органах лимфопоз-за, полиморфноклеточной (гистиоцитами, нейтрофилами, ретикулярными и плазматическими клетками) инфильтрацией последних.

12. При сочетании хронического лимфоидного лейкоза с воспалительными заболеваниями преобладают патоморфологические изменения, свойственные лимфолейкозу. Поэтому сопутствующие заболевания могут развиваться на фоне лейкозного процесса или как его осложнения.

IV. СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

На основании проведенных исследований материалы диссертации нашли применение в учебном процессе Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина и практике, опубликованы в следующих источниках:

1. Сноз Г.В., Бывальцев A.A., Мусиенко П.М. Патолого-морфо-логическая диагностика лимфоидных гемобластозов крупного рогатого скота: Информационный листок N 388-86-М.: Моск. обл. территори-альн. центр НТИ и пропаганды, 1986.

2. Сноз Г.В. Патолого-морфологическая диагностика лейкозов крупного рогатого скота: Листовка ВДНХ СССР.- М.: Государственный агропромышленный комитет СССР, 1989.

3. Сноз Г.В. Патолого-морфологическая диагностика гемобластозов крупного рогатого скота: Лекция для слушателей факультета повышения квалификации ветеринарных врачей.-М.: Моск. вет. акад. им. К.И.Скрябина, 1986.- 28 с.

4. Сноз Г.В., Масимов H.A. Гемобластозы крупного рогатого скота: Лекция для студентов ветеринарного факультета.- М.: Моск. вет. акад. им. К.И.Скрябина, 1990.- 32 с.

5. Дифференциальная диагностика гемобластозов и онкорнави-русной инфекции у сельскохозяйственных животных/В.П.Шишков, А.Д.Белов, Б.З.Иткин, В.А.Крикун, В.Б.Бронштейн, З.Н.Меньшикова, А.Р.Слепченко, С.П.Павленко, Г.С.Петровский, Г.В.Сноз и др.// Метод. рекомендации (рассмотрены и утверждены координационным совещанием по проблеме лейкозов человека и с.-х. животных и учеб-но-метод. комиссией ветеринарного факультета Моск. вет. акад. им. К.И.Скрябина, протокол N 8 от 20 апреля 1990 г.). М.: Моск. вет. акад. им. К.И.Скрябина, 1991.- 88 с.

V. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Для постановки первичного диагноза на лейкоз крупного рогатого скота при подозрении по гематологическим показателям необходимо проводить гистологически исследования даже в том случае, если отсутствует патологоанатомические признаки.

- so -

2. Тест-органами для практической диагностики лейкозов могут служить селезенка, костный мозг, лимфатические узлы (заглоточные, подчелюстные, поверхностные шейные, средостенные), а также печень. При подозрении на лимфосаркому, кроме пораженных лимфатических узлов тест-органами могут быть селезенка, сердце, почки, сычуг.

3. При ветеринарно-санитарной оценке туш и органов необходимо учитывать изменения лимфатические узлов, селезенки, костного мозга.л печени, так как при лейкозе в начальной стадии макроскопические изменения в органах и тканях не выявляются.

4. При дифференциации гемобластозов с целью определения природы патологичёских клеток необходимо применять методы по выявлению гликогена, хлорацетатэстераэы и неспецифической эстеразы.

VI. Список научных трудов, опубликованных по теме диссертации

1. Сноз Г.В. Патоморфологическое состояние органов и тканей при начальных стадиях лимфолейкоза крупного рогатого скота// Изучение патоморфологических и биохимических изменений в организме с.-х. животных: Сб. науч. тр./ Моск. вег. акад. им. К.И.Скрябина.- 1978.- Т.100.- С. 103-104.

2. Сноз Г.В. Значение гистологических и гисто-цитохимических исследований в дифференциальной диагностике лейкозов крупного рогатого скота// Теоретические и практические вопросы лейкозов и злокачественных опухолей с.-х. животных: Сб. науч. тр. /Моск. вет. акад. им.К.И.Скрябина. - 1979.- Т. 107.- С. 53-56.

3. Сноз Г. В. Патоморфологическое состояние костной ткани на разных стадиях развития хронического лимфолейкоза у крупного рогатого скота// Теоретические и практические вопросы лейкозов и злокачественных опухолей с.-х. животных: Сб. науч. тр. /Моск. вет. акад. им.К.И.Скрябина. - 1979.- Т. 107.- С. 57-60.

4. Сноз Г.В., Мусиенко П.М. Дифференциальная диагоностика начальной стадии хронического лимфолейкоза и лейкемоидных реакций у крупного рогатого скота// Доклады ВАСХНИЛ.- 1980.- N 3.- С. 30-32.

5. Сноз Г.В., Мусиенко П.М. Патоморфологическое состояние органов и тканей при остром лмфобластном лейкозе крупного рогато-

го скота// Изучение физиологических изменений в организме с.-х. животных: Сб. науч. тр./ Моск. вет. акад. им.К.И.Скрябина. -1980.- Т. 112.- С. 104-109.

6. Сноз Г.В., Мусиенко П.М. Патоморфологическая характеристика различных вариантов лимфосаркомы крупного рогатого скота// Инфекционные болезни и лейкоз с.-х. животных: Сб. науч. тр. /Моск. вет. акад. им. К.И.Скрябина.- 1981.- Т.120.- С.75-78.

7. Сноз Г.В., Мусиенко П.М. Дифференциальная диагностика лимфобластной лимфосаркомы, хронического лимфоидного и острого лимфобластного лейкозов у крупного рогатого скота // Актуальные вопросы патологоанатомической диагностики болезней животных: Материалы VIII Всес. конф. по патолог, анатомии животных, 15-17 сентября 1981 г.- Витебск. Л.: Ленингр. вет. ин-т, 1982.-С.277-280.

8. Сноз Г.В., Мусиенко П.М. Патагого-морфологическая характеристика лейкозов и злокачествегных лимфом крупного рогатого скота в сравнительном аспекте // Актуальные вопросы этиологии, патогенеза и диагностики неоплазий с.-х. животных: Сб. науч. тр./ Моск. вет. акад. им.К.И.Скрябина.- 1984.- С.45-51.

9. Сноз Г.В., Мусиенко П.М. Патолого-морфологическая характеристика лимфоцитарной лимфосаркрмы крупного рогатого скота// Актуальные вопросы этиологии, патогенеза и диагностики неоплазий с.-х. животных: Сб. науч. тр./ Моск. вет. акад. им.К.И.Скрябина.-

1984,- С.51-55.

10. Сноз Г.В., Мусиенко П.М. Патологоморфологические особенности хронического лимфоидного и острого лимфобластного лейкоза крупного рогатого скота на ранних стадиях развития// II Всес. съезд гематологов и трансфузиологов: Тез. докл. (15-18 октября 1985 г. Львов).- М.- 1985.- С.339.

11. Экспериментальное воспроизведение лимфолейкоза у овец вирусом лейкоза крупного рогатого скота/ В.П.Шишков, Х.С.Салимов, Б.З.Иткин, В.А.Крикун, Э.Н.Меньшикова, Г.В.Сноз//Вестник с.-х. науки.- 1985,- N 12.- С.97-102.

12. Сноз Г.В. Патолого-морфологические особенности органов и тканей крупного рогатого скота при спонтанных и экспериментальных лимфолейкозе и лимфобластной лимфосаркоме// Лейкозы крупного рогатого скота: Сб. науч. тр./ Моск. вет. акад. им.К.И.Скрябина.-

1985,- С. 74-78.

13. Клинико-гематологическая и патоморфологическая характеристика экспериментальных гемобластозов у крупного рогатого скота/ В.П.Шишков, Г.В.Сноз, Г.С.Петровский, В.А.Крикун, П.М.Мусиен-ко// Проблемы патоморфологической диагностики' болезней в промышленном животноводстве: Материалы IX Всес. научно-производ. конф. по патоморфологии с.-х. животных.- Вильнюс. Мокслас, 1986.- С. 301-305.

14. Сноз Г.В. Некоторые особенности патолого-морфологических изменений в организме крупного рогатого скота при начальной стадии хронического лимфоидного лейкоза// Теоретические и практические вопросы ветеринарии: Тез. науч. конф. "Современные методы профилактики и оздоровительные мероприятия по лейкозу крупного рогатого скота". Тарту, 198?.- С.68-70.

15. Сноз Г.В. Лейкоз крупного рогатого скота и его осложнения// Проблемы лейкоза и инфекционных заболеваний с.-х. животных: Межвуз. сб. науч. тр./ Моск. вет. акад. им.К.И.Скрябина.- 1988.-С.78-79.

16. Сноз Г.В. Особенности развития патологических изменений у крупного рогатого скота при лимфосаркоме// Проблемы лейкоза и инфекционных заболеваний с.-х. животных: Межвуз. сб. науч. тр./ Моск. вет. акад. им.К.И.Скрябина.- 1988.- С.79-81.

17. Сноз Г.В. Морфологические изменения крупного рогатого скота при лимфолейкозе// Диагностика, патоморфология, патогенез и профилактика болезней в промышленном животноводстве: Межвуз. науч. сб./ Саратовский зооветинститут.- 1990.- Ч.1.- С.128-130.

18. Сноз Г.В. Отличие гемобластозов от лейкемоидных реакций у крупного рогатого скота// Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных: Сб. науч. тр./ Моск. вет. акад. им.К.И.Скрябина.- 1993.- С.83-86.

19. Шишков В.П., Сноз Г.В. Патоморфология гемобластозов крупного рогатого скота// Диагностика, патогенез, патоморфология и профилактика болезней с.-х. животных: Материалы Всерос. науч-но-метод. конф. по пат. анатомии с.-х. животных, 19-21 октября 1993 г. - Воронеж, 1993.- С. 30-31.

20. Сноз Г.В. Локализация патоморфологических изменений у крупного рогатого скота при гемобластозах на разных стадиях развития патологического процесса// Актуальные вопросы инфекц. и ин-ваз. бол. животных: Сб. науч. тр./ Моск. госуд. акад. вет. мед. и

биотехн. им. К.И.Скрябина, 1994.- С.137-139.

21. Сноз Г.В. Патогенез гемобластозов крупного рогатого скота// Актуальные проблемы экологии и зоскультуры: Сб. науч. тр./Моск. госуд. акад. вет. мед. и биотехн. им. К.И.Скрябина. 1995.- С. 155-161.

22. Белов А.Д., Рогожина Л.В., Сиоз Г.В. О патогенезе лейкозов крупного'рогатого скота// Ветеринария.- 1997.- N 12.-С.16-20.

Подписано в печать 16.03.98г. Заказ № 55

Тираж 100 экз. Формат 60x90/16

Отпечатано в ЦИДЭ АО РОСЭП 111395, г. Москва, Аллея Первой Маевки, 15/8 МСЛ-004174 тел./факс 374-66-49