Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Вопросы экологической иммунологии и диагностики лейкоза крупного рогатого скота в Якутии

РГ 6 од

1 й т й44

На правах рукописи

ПОПОВА НАДЕЖДА ВАСИЛЬЕВНА

ВОПРОСЫ ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ ИММУНОЛОГИИ И ДИАГНОСТИКИ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ЯКУТИИ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск 1998

Работа выполнена в Якутской государственной сельскохозяйственной академии

Научный руководитель: Научный консультант:

доктор ветеринарных наук В.В. ХРАМЦОВ

доктор ветеринарных наук, доцент А.И. ПАВЛОВА

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

доктор биологических наук, профессор Н.О. СУХОВА; кандидат биологических наук, доцент H.H. КОЧНЕВ

Новосибирский государственный аграрный университет

Защита диссертации состоится " " 1998 г. в часов на

заседании диссертационного совета Д.020.23.01 в Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН (633128, Новосибирская область, п. Краснообск, ИЭВСиДВ СО РАСХН)

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО РАСХН.

Автореферат разослан "_"_1998г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук

A.A. САМОЛОВОВ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Среди инфекционных заболеваний, имеющих важное экономическое значение, выделяется лейкоз крупного рогатого скота. В 1994 г. в Российской Федерации было зарегистрировано 614 новых неблагополучных пунктов по этому заболеванию, выявлено более 46 тыс. больных животных, допущен падеж 2243 голов взрослого скота, на мясокомбинатах страны утилизировано 3978 пораженных лейкозом туш ( Г.Ф. Коромыслов, 1995).

Если по туберкулезу и бруцеллезу крупного рогатого скота эпизоотическая ситуация в улусах Республики Саха Якутия относительно благополучна, то по инфекции вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) обстановка остается сложной. В отдельных улусах регистрируются и случаи клинико-гематологического проявления болезни. Практически все административно-географические зоны республики, поголовье которых было охвачено диагностическими исследованиями в тест-системе РИД, являются неблагополучными по инфекции ВЛКРС. Применительно к хозяйствам РС (Я), ситуация усугубляется тяжелым экологическим состоянием отдельных районов. Результатами предварительных исследований установлено негативное влияние на экосистему республики целого ряда факторов химического, физического и биологического происхождения, меняющих функционирование иммуно-компетентной системы крупного рогатого скота (В.П. Алексеев, 1993; А.Д. Гедеонов и др., 1993; А.Н. Журавская и др., 1993; А.Н. Чомчоев, 1993; Т.Д. Каратаева, 1995; В.Г.Кривошапкин, 1996; П.Н. Смирнов, 1995 ; А.И. Павлова, 1997;).

Кроме экономического, не менее актуален, применительно к проблеме лейкоза, общебиологический и социальный аспекты проблемы (В.М. Нахмансон, 1986; В.П. Шишков соавт., 1988; П.Н. Смирнов и со-авт., 1992).

В общей системе борьбы с гемобластозами крупного рогатого скота, организации объективной диагностики отводится приоритетное значение. В рамках действующей Инструкции по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота (М.,1989) основным тестом выявления инфицированных вирусом лейкоза животных является реакция иммунодиффузии (РИД) в агаровом геле. Однако, существующий предел чувствительности РИД с антигеном §р51 является недостаточным для своевременного выявления всех животных, инфицированных ВЛКРС, что существенно увеличивает сроки оздоровления хозяйств от лейкоза. В этой

связи изучение особенностей распространения лейкоза крупного рогатого скота в условиях Республики Саха (Якутия), в том числе с использованием тест-системы ИФА, особенностей функционирования имму-но-гематологической системы животных экологически неблагополучных территорий, с последующей разработкой дополнений в систему общепринятых методов диагностики, представляются актуальными задачами ветеринарной онкологии, решение которых имеет важное научное и практическое значение.

Данная работа выполнена в рамках Государственной программы 0.69.05 "Лейкозы человека, сельскохозяйственных животных и птиц", N госрегистрации 01.83.0057603, а также Республиканской программы по ветеринарной экологии.

С учетом изложенного была поставлена следующая цель исследований: провести ретроспективный анализ показателей инфицированное™ и заболеваемости крупного рогатого скота лейкозом, изучить особенности иммунологического статуса животных, в том числе в экологически неблагополучных территориях Якутии, и определить диагностическую значимость тест-системы ИФА в комплексе общепринятых методов диагностики болезни.

В соответствии с целью были сформулированы следующие задачи:

1. Продолжить (ретроспективно) изучение особенностей распространения инфекции ВЛКРС и клинико-гематологического проявления лейкоза на территории РС (Я).

2. Определить иммунологические показатели животных, в том числе с учетом их породной принадлежности, содержащихся в экологически неблагополучных территориях отдельных улусов РС (Я).

3. Разработать и провести производственное испытание "метода провокации" специфического иммунного ответа у крупного рогатого скота, регистрируемого с помощью РИД в геле агара.

4. Провести сравнительное изучение эффективности тест-системы ИФА в сопоставлении с другими методами прижизненной диагностики инфекции ВЛКРС в условиях Республики Саха (Якутия).

5. Разработать дополнения в систему общепринятых методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота.

Научная новизна. Результаты исследований, представленные во всех главах диссертационной работы;являются новыми для Республики Саха (Якутия).

Получены новые (ретроспективного характера) данные о распространении онкорнавирусной инфекции и лейкоза крупного рогатого

скота в Республике Саха (Якутия) за 1994-1996 гг. Выявлены стабилизация и улучшение эпизоотической ситуации по данному заболеванию в большинстве улусов республики.

Определены иммунологические показатели животных из различных (по экологической ситуации) территорий Якутии. Полученные данные характеризуют особенности функционирования иммунной системы животных в сложных экологических ( в том числе климатических) условиях РС (Я).

Установлен феномен провокации иммунного ответа у животных, латентных носителей ВЛКРС, путем внутрикожного введения ППД туберкулина.

Показана диагностическая значимость тест-системы ИФА, а также метода биопробы при диагностике лейкоза. Проведен сравнительный анализ результатов диагностических исследований на лейкоз, полученных в ИФА и РИД. Установлена возможность использования для диагностики инфекции ВЛКРС в тест-системе ИФА проб молока.

Практическое значение работы. Ветеринарной практике предложен "метод провокации" иммунного ответа у животных-латентных носителей ВЛКРС.

Определена диагностическая значимость, роль и место в системе общепринятых методов диагностики лейкоза тест-системы ИФА. В производственных условиях отработан вариант постановки ИФА с использованием молока.

Полученные материалы были использованы при разработке комплексной система борьбы с лейкозом крупного рогатого скота в Республике Саха (Якутия).

На защиту выносятся:

1. Результаты эпизоотологического анализа по онкорнавирусной инфекции и лейкозу крупного рогатого скота в РС (Я).

2. Иммунологические изменения, выявленные у животных из различных (по экологическим условиям) территорий Якутии.

3. Результаты производственных испытаний метода провокации для выявления животных-латентных носителей ВЛКРС, а также показатели эффективности и диагностической значимости ИФА в системе общепринятых методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были доложены на: Республиканских научно-производственных конференциях (Якутск, 1995-1996); На научных конференциях СО РАСХН

(Новосибирск, 1996-1997); Международном семинаре по проблемам Арктики (в рамках Академии Северного Форума. Норвегия, 1995).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 работ в сборниках научных трудов ЯГСХА, ИЭВСиДВ, материалах научных конференций.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 116 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, библиографию. Работа иллюстрирована 23 таблицами.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Диссертационная работа выполнялась в 1994 - 1997 гг. в Проблемной лаборатории ветеринарной онкологии и экологии Якутской государственной сельскохозяйственной академии.

Часть работ была выполнена в отделе лейкозов сельскохозяйственных животных Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН, (руководитель отдела - доктор ветеринарных наук, профессор П.Н. Смирнов).

Для характеристики экологического состояния отдельных административно-географических территорий PC (Я) были использованы данные, ранее опубликованные в специальной литературе, результаты двух плановых экспедиций в хозяйства Вилюйской группы улусов, а также в Усть-Алданский, Хангаласский, Намский и Якутский улусы PC (Я). В проведении экспедиционных исследований приняли непосредственное участие сотрудники Проблемной лаборатории ветеринарной онкологии и экологии ЯГСХА, в т. ч. диссертант.

Для изучения эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в разрезе отдельных улусов Республики Саха (Якутия) были использованы результаты серологического и гематологического исследований, проведенных соискателем, а также данные Департамента ветеринарии PC (Я) и Республиканской ветеринарной лаборатории.

Гематологические исследования проводили с использованием фазо-во-контрасгного устройства ( по методике С.С. Бирбина) в модификации предложенной П.Н. Смирновым и соавт. (1990).

Реакцию иммунодиффузии (РИД) в агаровом геле, ставили в соответствии с Методическими указаниями по диагностике лейкоза крупного рогатого скота (М., 1985, 1989).

Особенности распространения инфекции ВЛКРС и лейкоза крупно го рогатого скота изучали методом сравнения абсолютных данных, с обязательным учетом экологических хозяйственных и других условий конкретно изучаемых природно-экономических территорий Республики Саха (Якутия).

Динамику проявления эпизоотического процесса анализировали за 1994-1996 гг., в том числе с использованием рабочих вариантов эпизо-отологических карт территориальной приуроченности инфекции ВЛКРС и лейкоза крупного рогатого скота.

Иммунологические и биохимические показатели сыворотки крови определяли с использованием электронного анализатора Швейцарской фирмы АВХ Minos Cobax stexc, которым располагает ЯГСХА.

Белковые фракции и уровень Ig G и Ig М в сыворотке крови животных определяли по методике В.М. Чекишева(1977).

В контрольной группе исследовали крупный рогатый скот территорий с другими экологическими характеристиками.

При постановке ИФА использовали тест-систему иммунофермент-ную, разработанную в лаборатории биотехнологии (заведующий - профессор В.М. Чекишев).

Статистическая обработка, анализ и интерпретация полученных эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований проводились соискателем на базе Проблемной лаборатории ЯГСХА, а также в лаборатории ветеринарной онкологии и экологии ИЭВСиДВ СО РАСХН с использованием персонального компьютера AT 286 "Goldstar".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Распространение инфекции ВЛКРС и клинико-гематологи-ческого проявления лейкоза крупного рогатого скота в PC (Я)

На первоначальном этапе организации достоверной диагностики лейкоза крупного рогатого скота серологические исследования носили выборочный характер. Так в 1990 г. только в 12-ти из 35 улусах республики были проведены исследования скота в РИД на общем поголовье 25,9 тыс животных. Обязательное гематологическое исследование

животных на лейкоз (без учета их статуса на предмет носительства он-корнавируса) привело к тому, что общий объем гематологических исследований за 1990 г. по республике составил 12574 животных, в то время как число серопозитивных животных (в РИД) составляло всего лишь 2722 головы.

В последние 5 лет охват поголовья крупного рогатого скота диагностическими исследованиями на лейкоз существенно возрос. Так, в 1996 г. серологические (в РИД) исследования проводились уже в ветеринарных лабораториях 32-х улусов. За этот же промежуток времени существенно выросли и объемы диагностических исследований в каждой лаборатории. Общее количество серологически исследованных на лейкоз животных всех возрастов составило 309 тыс. голов, из них было выявлено 2091 инфицированных ВЛКРС, что составило 0,7 %.

Гематологически было исследовано 2765 голов. Частота клинико-гематологического проявления лейкоза составила 3,4%.

Одной из особенностей инфекции ВЛКРС в Якутии следует считать относительно равномерное распространение ее практически во всех улусах РС (Я). Вариабельность показателя инфицированное™ животных ВЛКРС в Якутии, в сопоставлении с другими административно-территориальными подразделениями РФ, не велика. Не высокий (средний по республике) показатель инфицированности крупного рогатого скота вирусом лейкоза, обусловлен, в целом, относительной изолированностью РС (Я). Не маловажен фактор ограниченности контактов, торговых операций, перемещений животных, в связи в большой отдаленностью населенных пунктов друг от друга.

Следует отметить, что интенсивность направленных широкомасштабных исследований на лейкоз возросла повсеместно, но особенно в Амгинском, Таггинском, В-Вилюйском, Верхоянском, Мирнинском и др. улусах РС (Я). Однако наиболее важным фактором стабилизации и улучшения эпизоотической ситуации следует считать принятие (по результатам выполненных диагностических исследований) конкретных оздоровительно-профилактических мероприятий специального и организационно-хозяйственного характера.

Наиболее сложная эпизоотическая ситуация по инфекции ВЛКРС имела место в Мирнинском, Нерюнгринском, Таттинском и других улусах РС (Я). Наибольший уровень инфицированности ВЛКРС (за анализируемый промежуток времени) был зарегистрирован в 1994 г. в Нерюнгринском улусе -13%.

Анализ абсолютных показателей инфицированности и заболеваемости свидетельствует об улучшении эпизоотической ситуации по данной нозологии за анализируемый период времени. Так, в 1993 г. положительно, на предмет носительства ВЛКРС, в РИД реагировали 3,4% животных, в 1994 г. - 1,7%, в 1995г. -1,0 и в 1996 г. - 0,7%.

Наблюдается тенденция снижения и показателей заболеваемости лейкозом. Так, по результатам гематологического исследования в 1994 г. в улусах республики выявили 4,7%, в 1995 г. - 4,2, а в 1996 г. -3,4%. Однако, высокие значения показателей заболеваемости, при сопоставлении с инфицированностью, свидетельствуют о том, что в некоторых улусах гематологические исследования проводятся без учета данных, полученных в РИД, что не способствует получению объективных результатов и затрудняет их последующую интерпретации. Так, в 1990 г. по данным Т.Д. Каратаевой (1995) в улусах республики было выявлено 2722 животных, инфицированных ВЛКРС, а гематологическому исследованию подвергнуто 12574. Аналогичная картина просматривается во многих улусах на протяжении последующих лет.

Хотелось бы отметить, что не во всех случаях высокая инфициро-ванность определяла высокие показатели заболеваемости, однако в нескольких улусах, и, прежде всего, в Нерюнгринском, эта закономерность имела место.

Следует отметить, что в республике есть улусы, где инфицирован-ность вирусом лейкоза, по не объяснимым пока причинам, минимальна. Так, если в Ленском улусе показатель зараженности варьировал от 5 до 7%, в Якутском - от 1,9 до 8,6%, то в Нюрбинском улусе уровень инфицированности животных ВЛКРС составил в 1994 г. - 0,6, в 1995 г. - 0,2 и в 1996 г. - 0,09%, при единичных случаях выявления животных в гематологической стадии болезни.

Своего рода уникальная ситуация складывается в Верхоянском улусе, где по результатам диагностических исследований, проводимых ветеринарной службой улуса с 1994 по 1996 г. у крупного рогатого скота не выявлено случаев носительства ВЛКРС. Не исключено, что одними из факторов, определяющих особенность эпизоотической ситуации в этом улусе, как и в некоторых других, является породный состав крупного рогатого скота, представленный, в подавляющем большинстве, помесями местного якутского и холмогорского скота, обладающего, по мнению некоторых исследователей, повышенной устойчивостью к лейкозу, а также относительная изолированность этой территории.

Правильной следует считать практику Департамента ветеринарии Республики Саха (Якутия) об официальном объявлении пунктов, неблагополучных по лейкозу. Так, за период с 1990 по 1996 г. в республике был открыт 41 пункт (данные представлены в табл. 1).

Таблица 1

Количество пунктов, неблагополучных по лейкозу крупного рогатого скота, в улусах РС (Я)

Улусы количество неблагополучных пунктов

1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996

Амгинский - 3 - 1 - - 1

Верхневил. - - 1 - - 1

Вилюйский - - 1 - 1 -

Горный - - - 2 - -

Ленский - - 4 2 - - -

Нюрбинский - - 1 - - -

Мирнинский - - 1 - - -

М-Кангаласск. 1 - 1 1 - -

Намский - - 2 5 4 - 2

Нерюнгринский - - 1 - - - 1

Олекминский - - - - - 5

Чурапчинский - - 1 - - 1

Хангаласский 1 1 1 4 - 1 -

Якутский 3 - - - - -

ИТОГО 5 4 8 18 7 2 11

Наибольшее количество неблагополучных пунктов в республике открыто в 1993 г. - 18. Из них 5 - в коллективных предприятиях Намского улуса , хотя показатели инфицированное™ и заболеваемости в этой административно-географической зоне были существенно ниже среднереспубликанских и составляли 2,9 и 1,4% соответственно.

В 1996 г. в республике зарегистрировано 11 пунктов, неблагополучных по лейкозу крупного рогатого скот, из них 5 - в Олекминском улусе. На территории этого улуса, в 1995 г, при низкой инфицированно-сти ВЛКРС (0,9%), выявили 17,7% гематологически больных. Однако, интерпретируя этот факт следует отметить, что охват поголовья крупного рогатого скота комплексными диагностическими исследованиями

был чрезвычайно неравномерен. Тем не менее, открытие неблагополучных пунктов, позволяет принимать, в том числе и на уровне администраций улусов, более радикальные специальные и организационно-хозяйственные меры по ликвидации этого заболевания. Так, в частности, за период 1994-1996 гг. было оздоровлено 12 населенных пунктов в 14 улусах.

Анализируя общую динамику показателей (в разрезе отдельных улусов республики) за 3 года по инфицированное™ ВЛКРС и заболеваемости лейкозом, нетрудно заметить, что улучшение эпизоотической ситуации за период 1994-1996 гг. произошло, в основном, за счет показателей по всем улусам республики, однако в большей степени за счет Алданского, В-Вилюйского, Горного, Нюрбинского, М-Кангаласского и Чурапчинского улусов. Существенно улучшилась ситуация в одном из наиболее неблагополучных по инфекции ВЛКРС улусе - Мирнин-ском. Так, если в 1993 г. уровень инфицированное™ достигал 4%, то уже в 1994г., в результате принятия соответствующих мер, он снизился до 1%. В отдельных улусах показатели инфицированное™ несколько стабилизировались, однако не понизились.

Относительно результатов гематологических исследований необходимо отметить, что уровень заболеваемости остается высоким в Ам-гинском, В-Вилюйском, Олекминском, Таттинском улусах (по данным 1995 г.) и в Амгинском, М-Кангаласском, Намеком и Оймяконском улусах по данным, полученным в 1996 г. Максимальный показатель заболеваемости на протяжении ряда лет регистрируется в М-Кангаласском улусе. Минимальный (по данным 1996 г.) в Олекминском - 1,1%. В 26 улусах случаи клинико-гематологического проявления лейкоза не зарегистрированы.

Таким образом, анализ полученных данных свидетельствует о стабилизации и улучшении эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в большинстве улусов РС (Я).

Оценка иммунологического статуса крупного рогатого скота в разных экологических территориях РС (Я).

Животные модельных групп были подвергнуты исследованию по оценке показателей естественной резистентности (ЕР) в марте 1996 г. Необходимо отметить, что этот сезон года является наиболее неблагоприятным для организма животных, поскольку сопряжен с предшествующей ему длительной зимовкой, воздействием целого ряда абиоти-

ческих и биотических факторов и, следовательно, с понижением защитных функций организма.

По фагоцитарной активности все подопытные животные имели относительно высокие показатели - в пределах 78-100%, при достаточно высоких значениях фагоцитарной емкости (ФЕ), фагоцитарного индекса (ФИ) и фагоцитарного числа (ФЧ). В то же время при сопоставлении показателя фагоцитарной емкости (ФЕ) мы установили, что наибольшей она была у коров ф.Малыкай (2019.0 ± 501.6 нейтр/мкл), а более низкой - у коров ф.Хорула (1086.3 ± 340.3 нейтр/мкл) (различия математически достоверны).

В порядке сопоставления необходимо указать, что средний показатель активности фагоцитоза у коров Новосибирской области, по данным, полученным Т.А.Агарковой (1996), варьирует в пределах 10-34%. Близкие к этим показателям данные были ранее получены и опубликованы в работах П.Н.Смирнова (1988). Работы, выполненные этими исследователями, позволили получить показатели относительной нормы по некоторым иммунологическим параметрам, в том числе и по активности фагоцитоза, в различных, в том числе и по экологическому состоянию, территориях Сибирского региона. Эти данные мы использовали в своей работе в качестве контрольных.

Для сопоставления имеющихся данных, рассмотрим тестируемые параметры в разрезе каждой группы животных, содержащихся в разных административно-географических территориях Республики Саха (Якутия).

При клинической диспансеризации коров модельных групп Нюр-бинского улуса мы обратили внимание на то, что практически у всех животных лимфатические узлы - поверхностные шейные, коленной складки, глубокие паховые, надвыменные, подчелюстные - были очень малой величины, в состоянии гипотрофии. Подобных изменений у коров других улусов Вилюйской группы, мы не отметили, хотя и имело место некоторое уменьшение их массы, особенно у коров Верхневи-люйского улуса.

Абсолютно иные значения фагоцитоза мы установили у коров других улусов Вилюйской группы, в особенности в хозяйствах Верхневи-люйского улуса. Так, поглотительная способность нейтрофилов у коров этого улуса была значительно (в 1.5 и более раз) ниже, чем у животных других модельных групп. Причем, обращает на себя достаточно высокий индивидуальный разброс этого показателя - по ф.Оросу - от 19 до 58%, по ф.Ергетцы - от 12 до 77% и ф.Хоро - от 10 до 52%.

Средние значения ФИ и ФЧ были также достоверно ниже (в 10-18 раз) таковых животных Нюрбинского улуса. Однако, за счет нейтро-фильной массы общий показатель фагоцитарной емкости находился в тех же пределах, что и у коров Нюрбинского улуса. Следовательно, общий,. функциональный гомеостаз фагоцитарного звена иммунной системы крупного рогатого скота и в Нюрбинском, и в Верхневилюй-ском улусах сохраняется примерно на одном уровне. Последнее есть не что иное, как проявление механизма адаптации животных в конкретных климато-экологических условиях.

Наиболее близкие к животным Верхневилюйского улуса показатели фагоцитоза выявлены у коров фермы Сыдыбыл (с.Чочу) Вилюйского улуса. Средний, по группе коров, показатель фагоцитарной активности составил 31.0 ± 10.0 %. При этом обращает на себя внимание относительно широкий индивидуальный разброс изучаемого показателя от 2.0 до 58.0 %. Фагоцитарный индекс и фагоцитарное число находились в пределах того же уровня, что и у коров Верхневилюйского улуса.

В заключение по данной группе коров следует отметить, что и показатель фагоцитарной емкости (общее число фагоцитирующих нейтро-филов в 1 мкл крови) находился на уровне средних показателей коров Верхневилюйского и Нюрбинского улусов.

Совершенно иную активность фагоцитоза (ФА, ФИ, ФЕ) выявили у коров 2-х групп Сунтарского улуса - фермы "Толстой" и "Крестях".

В частности, установлено, АФ по группе коров ф.Толстой составляла в пределах 8-18% и по ф.Крестях - 4-32%. Средний показатель фагоцитарной активности животных обеих групп находился примерно на одном уровне - 10.5 ± 4.3 и 11.4 ± 3.0 %. При этом установлен очень низкий индекс фагоцитоза. Фагоцитарная емкость у животных обеих исследуемых групп была в 3-5 раз ниже таковой коров Нюрбинского, Вилюйского и Верхневилюйского улусов (в среднем 413-524 фагоцитирующих нейтрофила в 1 мкл крови).

Все изложенное еще раз подтверждает тезис о том, что физиологическую оценку адаптационных способностей животных мы должны давать не по морфо-структурному гомеостазу, а по гомеостазу функциональных реакций организма на окружающую среду, которые могут формироваться, в каждой конкретной среде обитания той или иной популяции животных, количественной перестройкой элементов жизненно важных систем, в первую очередь иммунологической, метаболической, выделительной и гормональной.

Оценка клеточного и гуморального иммунитета крупного рогатого скота (по содержанию Т- и В-лимфоцитов в периферической крови), инфицированного ВЛКРС и с другой патологией

Для реализации поставленной цели мы использовали коров, подобранных по принципу, близкому к аналогам (животные 3-4 лактации, примерно одинаковой продуктивности и одной породной принадлежности) в КСХП "Хатассы" Якутского улуса РС(Я). Животных распределили на группы: в I вошли 36 клинически здоровых, интактных в отношении ВЛКРС, коров. Во II группу - 42 инфицированных ВЛКРС, но клинически здоровых коров, и в III группу - 18 инфицированных ВЛКРС и одновременно гинекологически больных (послеродовые осложнения - эндометриты, вульвовагиниты, маститы, задержания последа). Таким образом мы имели возможность получить сопоставимые результаты.

Сравнительные исследования животных всех трех групп, проведенные в один и тот же день, показали, что наиболее высокое содержание Е-РОК (Т-клеток) имело место в периферической крови серопозитив-ных, гинекологически больных коров (67.2 ± 5.4 % и 2.8 ± 0.5 тыс/мкл) против 57.6 ±2.1 и 1.8 ± 0.3, инфицированных ВЛКРС коров - разница достоверна, и 64.0 ± 3.6 % и 2.4 ± 0.2 тыс/мкл - коров контрольной,ин-тактной к ВЛКРС, группы.

Выявленная разница позволяет сделать некоторое заключение (с учетом тропизма ВЛКРС к В-клеткам) о том, что у гинекологически больных коров происходит стимуляция клеточного звена ИКС. При этом возможная иммуностимулирующая роль ВЛКРС исключена, поскольку достоверной разницы, в данном показателе ИКС, между инфицированными ВЛКРС (II группа) и интактными в отношении ВЛКРС -1 группа - контроль, не выявлено, хотя и отмечено некоторое снижение уровня Е-РОК у серопозитивных животных.

Таким образом, мы полагаем, что активация (достоверная) синтеза Т-лимфоцитов (суммарный показатель) у гинекологически больных коров явилась естественной, адаптационной реакцией организма на "букет" экологических (бактериально-вирусной природы) факторов.

В определенной мере это подтверждается показателями синтеза В-лимфоцитов (ЕАС-РОК). Как видно из таблицы 2, у коров, инфицированных ВЛКРС и одновременно больных послеродовыми осложнениями (III группа), уровень гуморального звена ИКС достоверно снижен в

сравнении с таковым интактных коров (I группа). При этом роль BJ1KPC в снижении продукции B-лимфоцитов мы абсолютно исключать не в праве, поскольку в данном показателе разница между животными I и II групп не достоверна, но в то же время достоверная разница в концентрации ЕАС-РОК коров I и III групп дает нам основание сделать заключение о том, что патологический процесс в гениталиях у се-ропозитивных к ВЛКРС коров ингибирует гуморальное звено ИКС.

Таблица 2

Показатели относительного и абсолютного содержания Т- и В-лимфоцитов в периферической крови коров, инфицированных ВЛКРС и интактных в отношении вируса лейкоза

Группы животных Т-лим< юциты В-лим( юциты

% тыс/мкл % тыс/мкл

I. Интактные (контроль) 64.0±3.6 2.4±0.2 31,5±2.2 1.3±0.3*

II. Инфиц. ВЛКРС (РИД+) 57.6±2.1* 1.8±0.3* 25.4±3.6 1.0±0.1

III. Гинекол. б-е (РИД+) 67.2±5.1* 2.8±0.5* 28.7±3.8 0.8±0.1*

* разница в показателях между отмеченными группами достоверна

Общее заключение по результатам проведенных исследований, в рамках проблемы адаптации животных, то есть в условиях воздействия на организм таких биологических факторов как вирусы и бактерии, а послеродовые осложнения, как правило сопровождаются развитием кокковой инфекции, иммунокомпетентная система животных (в состоянии патологии) отвечает, прежде всего, количественной перестройкой продукции Т- и В-лимфоцитов. В данном случае мы фиксируем факт стимуляции клеточного звена (за счет активации синтеза Е-РОК) и, в определенной мере, - ингибицию гуморального звена ИКС, сопровождающуюся снижением продукции ЕАС-РОК. Данную количественную перестройку в синтезе иммунокомпетентных клеток мы рассматриваем, отнюдь, не как патологию, а как адаптивную (более того, -компенсаторную) реакцию организма на восстановление функционального гомеостаза организма в конкретных экологических условиях. Поэтому, допустим, если бы в данном случае мы не обнаружили какой-то

заметной количественной перестройки продукции иммунокомпетент-ных клеток (у гинекологически больных, тем более, инфицированных ВЛКРС) животных, то это могло бы служить основанием квалифицировать данное состояние как состояние иммунодепрессии. Исследование концентрации иммуноглобулинов и вг в сыворотке крови животных отчасти это подтвердило (табл. 3).

Таким образом следует сказать, что данный опыт подтверждает относительно высокую степень динамичности ИКС животных в ответ на ВЛКРС-инфекцию и другую (воспалительного характера) патологию. Следовательно, изменения иммунокомпетентных клеток в сторону повышения или снижения, а также повышение их функциональной активности, есть реакция организма на поддержание его функционального гбмеостаза.

Таблица 3

Динамика показателей ^вх и в сыворотке крови коров 3-х подопытных групп

Дата Показатели РИД(-) РИД(+) РИД(+)

исслед. клин.здоровые клин.здоровые гинек.больные

1.02.96 ^ г/л 18.3 ±3.0 15.8 ±2.2 16.4 ±2.6

№ г/л 13.7 ± 1.7 14.0 ±2.8 14.4 ±2.3

9.02.96 ДО! г/л 14.0 ± 1.3 15.8 ±2.7 19.4 ±1.8

^вг г/л 14.2 ±2.2 15.2 ±2.1 13.6 ± 1.6

19.02.96 г/л 17.6 ±2.8 16.1 ±3.0 . 19.3 ±3.6

^вг г/л 18.6 ±0.9* 12.4 ±3.4 14.6 ±1.2

26.03.96 № г/л 15.7 ± 1.8 16.0 ±2.4 12.3 ±1.7

г/л 15.8 ± 3.1 13.3 ± 3.8 15.6 ±0.9

* Разница в показателе ^вг с другими сравниваемыми группами животных достоверна.

Анализируя полученные нами результаты по количественной оценке Т- и В - лимфоцитов, а также уровню иммуноглобулинов основных классов у животных инфицированных и интактных в отношении ВЛКРС, учитывая опубликованные ранее данные о биохимических маркерах - предшественниках, активизирующих вирус, мы провели комплексное биохимическое исследование крови и сыворотки двух названных выше групп. Оно предполагало определение таких гематологических и биохимических показателей как: щелочной резерв, липиды,

холестерин, общий белок, фосфор, кальций, калий, натрий, марганец, железо, магний, медь и цинк. Кроме того, по этой группе животных, был определен полный аминокислотный состав по основным заменимым и незаменимым аминокислотам.

По результатам гематологического исследования в группе инфицированных животных установлено незначительное понижение ( математически не достоверно) по щелочному резерву и общему белку.

Нами не установлено разницы при сопоставлении представленных выше гематологических и биохимических показателей животных, инфицированных ВЛКРС и благополучных в отношении лейкозной инфекции. Для получения наиболее объективных результатов, необходима большая математическая выборка данных, а также четкое представление понятия относительной нормы биохимических показателей для животных, имеющих разную породную принадлежность и содержащихся в различных климатогеографических и экологических территориях. Более того, результаты выполненных в последние годы исследований предполагают трактовку изменения показателей гомеостаза (в том числе и биохимических), не только как предшественников патологического состояния животных, но и как элемент адаптации к конкретным условиям существования (А.И. Павлова, 1997).

Интерпретируя результаты исследований макро-микро-элементного состава сыворотки крови и молока инфицированного ВЛКРС и интакт-ного крупного рогатого скота (табл.4), необходимо отметить, что достоверные различия ( у животных двух сопоставляемых групп) выявлены только по двум элементам - К и №. Значение этих макроэлементов в обеспечении нормальной жизнедеятельности организма чрезвычайно велико. Более того, в настоящее время доказана роль калия и в формировании иммунологических реакций. К и N3 являются сильными активаторами ферментативной системы клетки. В этой связи хотелось бы отметить, что уровень ферментативной активности клеток у животных - носителей ВЛКРС, по данным некоторых исследователей, также понижен (В.В. Храмцов, 1995). Разница по другим макромикроэлементам математически не достоверна.

Далее, мы определили показатели аминокислотного состава сыворотки крови и молока .животных-носителей ВЛКРС, дав количественную оценку по 16 незаменимым и заменимым аминокислотам.

Из группы циклических аминокислот: фенилаланин, тирозин, гис-тидин,пролин.

Таблица 4

Макро-микроэлементный состав крови и молока интактных и инфицированных ВЛКРС животных (в % натуральной влажности)

Группы жи- Кол-во М К N3 Ре Мп Си Ъп

вотных голов т

Сыворотка крови

Инфициро- 6 0,36 0,52 0,24 0,56 0,14 0,10 3,41

ванные * *

ВЛКРС 0,04 0,02 0,01 0,02 0,02 0,02 0,19

Интактные 6 0,62 0,91 0,22 0,46 0,13 0,08 3,51

(контроль) 0,05 0,03 0,01 0,05 0,01 0,01 0,17

Молоко

Инфициро- 6 0,40 0,77 0,04 0,41 0,06 0,60 2,56

ванные 0,02 0,01 0,00 0,06 0,01 0,04' 0.07

ВЛКРС

Интактные 6 0,44 0,76 0,05 0,45 0,06 0,73 2,48

(контроль) 0,01 0,01 0,00 0,04 0,00 0,03 0.04

* Разница достоверна.

Определяя возможные количественные изменения аминокислотного состава в пробах молока и сыворотки крови 15 коров, нам не удалось выявить (при незначительной вариабельности показателей) достоверной разницы у инфицированных ВЛКРС и интактных животных.

Резюмируя изложенное следует сказать, что механизм воздействия вируса лейкоза на особенности функционирования иммунной и биохимической системы пока не изучен. Возможно, что это его непосредственное влияние на геном клетки или же опосредованное действие через систему других внутриклеточных промоторов. Тем не менее, анализ тех количественных и качественных изменений, которые были определены у животных-носителей ВЛКРС, позволяет сделать вывод - развитие инфекционного процесса связано с нарушением иммунологических (в т.ч. гематологических) и биохимических процессов на клеточном уровне.

Сравнительное изучение показателей электрофоретических фракций сывороточного белка коров из разных улусов РС(Я)

Концентрация общего белка в сыворотке крови коров Вилюйской группы улусов была достоверно ниже, чем у животных контрольной группы (ПЗ "Первомайский", Новосибирской области). Исключение составили животные фермы Крестях, Сунтарского улуса. Если же сравнить животных подопытных групп между собой, по данному показателю, в разрезе только Вилюйской группы улусов, то не трудно заметить, что наиболее высокая концентрация общего белка имела место в сыворотке крови коров Сунтарского улуса (26.3±0.50 и 28.5±1.50 г/л). Разница достоверна, кроме ф.Чочу, Вилюйского улуса. На том же,примерно, уровне, что и в стадах Нюрбинского улуса, выявлены показатели общего белка у коров Верхневилюйского улуса (с.Хоро, Оросу, Ергет-цы) - разница с Сунтарским улусом достоверна.

По уровню тенденция сохраняется. Так, у коров ПЗ

"Первомайский" уровень достоверно выше, чем у коров всех улусов Вилюйской группы. В то время как между модельными группами животных Вилюйского бассейна эта разница Еыглядела совершенно иначе. Ниже 5.0 г/л концентрация ^й] установлена в 3-х стадах Верхневилюйского улуса, а выше этого показателя (> 5.0 г/л) - в стадах Сунтарского, Вилюйского и в одном стаде (ф.Хорула) Нюрбинского улуса. Достоверно наиболее низкий уровень 1§0] имел место у коров КП"Жархан" Нюрбинского улуса.

По уровню ^Сг сравнительный анализ выявил тенденцию, близкую к таковой ^вь Более низкая концентрация этого иммуноглобулина в сыворотке крови выявлена у коров большинства ферм Верхневилюйского и Нюрбинского улусов (в сравнении со средним показателем коров Сунтарского, Вилюйского улусов и ПЗ"Первомайский"). Одновременно мы отметили, что уровень данных белков в сыворотке крови ПЗ"Первомайский" был более высоким (разница со всеми изучаемыми стадами РС(Я) достоверна).

Концентрация альбуминов в сыворотке крови была более низкой (от 3.96 до 4.65 г/л) у животных Верхневилюйского улуса. У коров всех других сравниваемых ферм уровень альбуминов находился в пределах 5.01-7.2 г/л. При этом по данному показателю коровы ф.Крестях (Сунтарский улус) приближались к животным ПЗ"Первомайский".

Учитывая мнение многих отечественных и зарубежных исследователей о том, что количественный показатель иммуноглобулинов явля-

ется одним из наиболее информативных, считаем, что полученные результаты отражают особенности функционирования иммунной системы животных.

Разработка и производственное испытание "метода провокации" специфического иммунного ответа у крупного рогатого скота, регистрируемого с помощью РИД в геле агара

Некоторые исследователи допускают, что в процессе длительно сопряженной эволюции паразита и хозяина в системе создаются определенные связи, обеспечивающие возможность некоторой компенсации патологического процесса в облигатном хозяине (Ш. Николь, 1937). При этом между паразитом и хозяином формируется состояние биологического равновесия, имеющего относительный характер. В таком случае, если у животного имели место латентная инфекция или скрытое микробоносительство, стрессовое воздействие, изменяя условия для жизнедеятельности возбудителей инфекционных болезней, повышает их агрессивность и приводит к выраженному проявлению эпизоотического процесса (С.И. Джупина, 1992). Анализируя имеющиеся данные по применению феномена провокации при некоторых латентных инфекциях (как способа компенсации низкого предела чувствительности имеющихся диагностических методов), мы провели исследования по оценке возможного использования с этой целью ППД туберкулина для млекопитающих при серологической диагностике лейкоза крупного рогатого скота (табл.5).

Таблица 5

Результаты серологического (в РИД) исследования животных на лейкоз до и после обработки ППД туберкулином

Номер количество выявлено инфицированных

экспертизы исследованных

до обработки туберкулином после обработки туберкулином

246 57 8 10

284 80 6 9

310 36 3 5

Серологическому исследованию на лейкоза были подвергнуты 57 телят 6 мес возраста, показавшие (однократно) отрицательный результат при исследовании в РИД с антигеном др 51. Через две недели животные этой группы были обработаны ППД туберкулином по общепринятой методике - однократно, внутрикожно, в дозе 0,3 мл.

При повторном (через 30 дней) исследовании в РИД среди обработанных ППД туберкулином выявили два положительно реагирующих теленка (инв.номера 15-00 и 34-12). Повторное исследование телят этой группы через 14 дней подтвердило слабоположительную реакцию их на антиген ВЛКРС. С целью подтверждения предполагаемого стимулирующего эффекта ППД туберкулина, мы провели дополнительные исследования 80 телят в возрасте 6-8 мес. до и после обработки их ППД туберкулином по ранее представленной схеме. По результатам серологического исследования были дополнительно выявлены 3 теленка, инфицированных ВЛКРС (инв.номера 33-14, 31-10, 24-11.

Обработка ППД туберкулином 36 телок в возрасте 18 мес позволила дополнительно выявить в РИД двух животных, инфицированных вирусом лейкоза.

Учитывая, что эпизоотологическая роль стрессового воздействия была ранее показана в экспериментах (М. Тагидзе, 1978), мы, предварительно, можем оценить имеющую место особенность как фактор стресса в эпизоотическом процессе лейкоза крупного рогатого скота и предполагаем возможность использования метода провокации ППД туберкулином при латентной инфекции ВЛКРС.

Сравнительное изучение практической ценности разных методов диагностики инфекции ВЛКРС в условиях РС (Я)

Эффективность и сроки оздоровления стад крупного рогатого скота от лейкоза находятся в определенной зависимости от наличия чувствительных методов диагностики (А.И. Испулаев, 1983; А.Т. Левашев, 1992; П.Н. Смирнов, 1993; В.В. Храмцов, 1995). В связи с этим, разработка новых и совершенствование имеющихся методов диагностики позволили бы внести существенные коррективы в организацию проти-волейкозных мероприятий.

Предварительные производственные испытания ИФА, в сопоставлении с серологическим методом диагностики лейкоза - РИД, были выполнены на базе нескольких хозяйств с различной эпизоотической ситуацией по инфекции ВЛКРС. Так, предварительный анализ результа-

тов полученных при постановке РИД, ИФА с сывороткой крови и молоком крупного рогатого скота, неблагополучных по лейкозу хозяйств Республики Саха (Якутия) (табл.6), показал, что если в РИД из 148 исследованных (ОПХ "Нам") было вьивлено 44 (29,7%) коровы, инфицированные BJJKPC, то в ИФА - 47, что составило 31,7%.

Таблица 6

Результаты сопоставления данных, полученных при постановке РИД (gp51) и ИФА с сывороткой крови и молоком коров из хозяйств Республики Саха (Якутия)

Хозяйства Кол-во исследованных Результаты исследования

Pt с сыво щ роткой Ш с сыво Е>А роткой ИФА. с молоком

кол-во (+) % кол-во (+) % кол-во (+) %

ОПХ "Нам" КП Ленское КП Якутское КП Хатас-ское 148 420 610 558 44 29,7 40 9,5 57 9,3 43 7,7 47 31,7 45 10,7 60 9,8 43 7,7 47 31,7 43 10,2 57 9,3 43 7,7

Полное совпадение результатов получено при постановке ИФА с пробами сыворотки крови и молока, однако три коровы из ОПХ "Нам" и две из КП "Ленское", положительно реагирующие в РИД, показали отрицательный результат в ИФА. Учитывая, что одним из основных недостатков ИФА являются ограничения, связанные с фоном, который не всегда позволяет объективно дифференцировать специфическое и неспецифическое окрашивание при учете реакции, мы предполагаем, что в данном случае имело место именно явление неспецифического связывания компонентов. Следует отметить, что тест-система иммуно-ферментная разработанная профессором В.М. Чекишевым, предполагает использование моноклональных антител к р24 антигену ВЛКРС, что делает ее, в сопоставлении с имеющимися диагностическими тестами (в том числе ИФА), более чувствительной и специфичной.

Тем не менее такие случаи регистрируются, что, естественно, понижает диагностическую, прежде всего практическую, ценность данного метода. Случаи ложноположительных (в ИФА) реакций регистрировались при исследовании коров и телок нескольких улусов РС (Я). Так, при полном совпадении результатов исследований (в РИД и ИФА) 250 животных,3 пробы сыворотки,положительные в ИФА, показали отрицательный результат в РИД. Необходимо отметить, что случаи таких реакций регистрировались и у других исследователей, использующих в своей работе этот метод.

Для выяснения природы положительных реакций, нами, на базе учхоза ЯГСХА,была проведена биопроба на овцах. По результатам двукратных (через 4 и 8 недель) исследований в РИД сыворотки крови овец-реципиентов, используемых для биопробы, не удалось подтвердить инфекцию ВЛКРС).

Возможность использования в ИФА для диагностики инфекции ВЛКРС молока, делает метод доступным, экономически целесообразным и чрезвычайно удобным для ветеринарных специалистов-практиков, однако необходимы дальнейшие научные изыскания в области повышения чувствительности ИФА и ликвидации проблемы "фоновых" реакций.

Использование тест системы ИФА с пробами молока, позволило бы увеличить (без необходимости трудоемкой операции связанной с кро-вобратием), кратность диагностических исследований коров на онкор-навирусную инфекцию, что, в конечном итоге, способствовало бы выявлению животных - латентных носителей вируса лейкоза.

ВЫВОДЫ

1. В Республике Саха (Якутия) с 1990 по 1996 гг. зарегистрировано 55 неблагополучных по лейкозу пунктов. Лейкоз крупного рогатого скота диагностирован в 21 улусе, поголовье которых подвергнуто серологическому исследованию в РИД с §р 51 антигеном ВЛКРС. Средний по республике (за 1994-1996 гг.) показатель инфицированности животных всех возрастных групп составил 1,1%, заболеваемости - 4,3%.

2. Длительное негативное воздействие на животных факторов внешней среды проявляется понижением функциональной активности гуморального и клеточного звена иммунекомпетентной системы. В экологически неблагополучных условиях Вилюйской группы улусов, доминирующую функцию в формировании естественной резистентно-

сти определяет система фагоцитоза. Животные этой группы улусов характеризуются более низкими количественными показателями общего белка и иммуноглобулинов. Отмеченные изменения выходят за границы нормы, свойственной для данного вида животных и не могут считаться физиологичными.

3. Развитие инфекции ВЛКРС, у гинекологически больных животных (эндометриты и вульвовагиниты), сопровождается увеличением содержания Т-лимфоцитов периферической крови до 67,2±5,1% с одновременным понижением показателя синтеза В-лимфоцитов, тогда как носительство вируса лейкоза у клинически здоровых животных вызывает понижение количества как Т, так и В - лимфоцитов. У этих же групп животных установлено пониженное, в сопоставлении с контролем, содержание (Разница математически достоверна).

4. Феномен провокации, путем введения туберкулина для млекопитающих, позволяет повысить предел чувствительности РИД и выявить животных - латентных носителей ВЛКРС. Метод может быть использован на завершающей стадии оздоровления хозяйств (ферм) от лейкоза крупного рогатого скота.

5. Тест-система ИФА сопоставима по чувствительности (при использовании в качестве биологической жидкости молока животных) с серологическим методом РИД с антигеном ВЛКРС бр 51. Использование для постановки сыворотки крови повышает предел чувствительности ИФА и позволяет выявлять инфицированных ВЛКРС животных на 1,5-2% больше.

6. Разработанная научно обоснованная система борьбы с лейкозом крупного рогатого скота, включающая в себя комплекс специальных и организационно-хозяйственных мероприятий, позволила обеспечить качественную диагностику заболевания, и отработать ( на базе КП "Хатассы") модель оздоровления хозяйств республики.

Реализация основных положений системы позволила оздоровить и объявить благополучными 12 населенных пунктов Республики Саха (Якутия).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Научно обоснованная система борьбы с лейкозом крупного рогатого скота в Республике Саха (Якутия) на 1995 - 2000 гг. (Утверждена НТС МСХиП РС (Я). - Якутск, 1995.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Павлова А.И.„ Попова Н.В., Федорова П.Н. Результаты сравнительного биохимического анализа сыворотки крови инфицированных ВЛКРС и интактных коров //Перспективные направления интегрирования экологических, эпидемиологических и эпизоотологических проблем в республике для совершенствования ветеринарного обслуживания: Доклады республиканской научно-производственной конференции. -Якутск, 1994. - С. 94-98.

2. Попова Н.В. Сравнительное изучение тестов ИФА и РИД (в агаре) в диагностике лейкозной инфекции//Сб. материалов научной конференции преподавателей и студентов Якутского сельскохозяйственного института, посвященной 50-летию победы.: Тез. докл. - Якутск, 1995.-С. 49.

3. Каратаева Т.Д., Павлова А.И., Андреева М.В., Игнатьева М.С., Попова Н.В. и др. Особенности распространения и территориальной приуроченности лейкоза крупного рогатого скота в Якутии. Там же. -С.22.

4. Каратаева Т.Д., Васильева A.A., Легантьева Л.Г., Павлова А.И., Попова Н.В. и др. Эпизоотология лейкоза крупного рогатого скота в Республике Саха (Якутия) //Методология мероприятий по профилактике и ликвидации болезней сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. /РАСХН. - Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 1995. - С. 154163.

5. Чекишев В.М., Храмцов В.В., Файзулин Р.Ф., Попова Н.В. Возможность использования тест-системы ИФА для диагностики инфекции ВЛКРС //Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири: Под. ред. П.Н. Смирнова. - Новосибирск, 1995. - С. 39-40.

6. Павлова А.И., Агаркова Т.А., Попова Н.В., Федорова П.Н., Ерова Л.М. Сравнительное изучение биохимического состава молока инфицированных ВЛКРС и интактных коров. - Там же. С. 106-109.

7. Павлова А.И., Федорова П.Н., Попова Н.В. Сравнительное изучение биохимического статуса крупного рогатого скота разного возраста в учхозе "Намский" Якутского СХИ. Там же. - С. 119-122.

8. Попова Н.В., Дыдаева Л.Г., Иванова М.А, Показатели естественной резистентности крупного рогатого скота Вилюйской зоны улусов //Сб. тез. докл. научно-практической конференции. - Якутск, 1997. -С. 70-71.

9. Попова Н.В. Сравнительное изучение практической ценности разных методов диагностики лейкозной инфекции в условиях Республики Саха (Якутия) //Сб. тез. докл. научно-практической конференции. Там же. - С. 75-76.