Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Влияние иммунобиологического состояния организма на формирование поствакцинального иммунитета при инфекционном ларинготрахеите птиц

ГОСКОМИССИЯ СМ СССР ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ

ЛЕНИНГРАДСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи ФИСЕНКО Сергей Петрович

УДК 619:616.988-097.3:612.017.1.635.5

ВЛИЯНИЕ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА НА ФОРМИРОВАНИЕ ПОСТВАКВДНАЛЬНОГО ИШУНИША ПРИ ИНФЕКЦИОННОМ ЛАРШГОТРАШГГЕ ПТИЦ

Специальность 16.00.03 - ветеринарная микробиология.

вирусология, эпизоотология, микология и к глмук О Я О Г 7 л

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарнях наук

Ленинград - 1950

Работа выполнена в отделах вирусологии и общих методов исследований Всесоюзного научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства

Научные руководители: док.юр ветеринарных наук, профессор МАЛУИКО В.В.

доктор биологических наук КОЯАБОШ Л.С.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор ЗЕЛЕНСКИЙ В.П.

кандидат ветеринарных наук, доцент СОКОЛОВА Л.Н.

Ведущее учрендение - Украинский научно-исследовательский

институт экспериментальной ветеринарии

Защита диссертации состоится " £ " 1 г.

в 13 cao. на заседании специализированного совета Д 120.20.02 при Ленинградском ветеринарном институте. Адрес: I96C84, Ленинград, Московский пр., 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ленинградского ветеринарного инсипута.

Автореферат разослан " ^ " Як-бя р£ 1990 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доцент

Т.М.Кицдрас

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность тстлы. Современная аграрная политика,изменение ее инвестиций, принятие законов о земдо и собственности направлен« на полное обеспечение страны продовольствием. Выработаны дополнительные меры для повышения оффектмвности всех отраслей агропромышленного комплекса.

Птицеводство - одна из важнейших отраслей сельского хозяйства. Получение максимального количества якц и мяса при минимальных затратах возможно при внедрении эффективних г.етери-нарно-санитарных мероприятий:, направленных на устойчивое эпизоотическое благополучие хозяйств, а такте при комплексной механизации и автоматизации содержания и кормления птицы высококачественным сбалансированным рационом.

Индустриализация птицеводческой отрасли требует разработки и совершенствования групповых методов специфической профилактики болезней птиц.

Инфекционный ларинготрахеит является одним из заболеваний, причиняющих значительный экономический ущерб птицеводству.

В настоящее время для профилактики инфекционного ларинго-трахеита (ЮТ) в птицеводстве применяется живая вкруезакцгаа из штамма "ВНИИЙТ" (Л.А.Дмитриава, Б.В.Малушсо,19Б0: В.В.Ма-лулко, Л,П.Чэбанова,1981; Т.Е.Никифорова, В.В.Малутасо, 1984; Ю.С.Дутко и др.,1934; Я.Р.Голод и др.,1935; В.В.Мапуько и др., 1580).

Однако при аэрозольной вакцинации против ИЛТ отмечаются поствакцияальные осложнения у птиц отдельных партий и различия в уровне напряженности ш^яитета. Фундаментальные иосче-• дования показывают, что напряженность специфического иммунитета зависит не только от качества вакцины, но и от уровня естественной резистентности организма животных. Возможно,что физиологически обусловленные возрастные периоды снижения уровня неспеипф'ческоЯ резистентности птиц, а таку.е широкое применение вакцин и химиксфчрмацевтическвх средств оказывают воздействие т. процессы антителообразования и сопротивляемости ор-гзлнэш птиц к заболеваниям.

В связи с этим возникает необходимость изучить влияние иммунобиологического состояния организма птиц на форгсгрование иммунитета пущ вакцинации против ЯЛ? и разработать методы и средства повышения имцунологического ответа.

Цель и задачи исследований. Цель исследований - изучить влияние имцунобиологического состояния организма птиц на формирование напряженного иммунитета при вакцинации против инфекционного ларинготрахеита и изыскать пути повышения иммунологического ответа.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- провести анализ поствакцинальннх осложнений при иммунизации птиц вакциной ВНЖЛ пютив инфекционного ларинготрахеита;

- изучить иммунобиологическое состояние организма цыплят до и после вакцинации против инфекционного ларинготрахеита;

- определить взаимосвязь между иммунобиологической реактивностью на введение вакцины против ньюкаолской болезни и против инспекционного ларинготрахеита;

- - разработать оптималыше дозы, схемы применения имму-номодуляторов с учетом иммунобиологического состояния;

- провести сравнительную оценку различных схем вакцинаций с учетом иммунобиологического состояния и применения ш.Г/уномодуляторов.

Научная новизна работы. На основании проведенных исследований впервые получены данные, характеризующие влияние иммунобиологического состояния организма на формирование иммунитета при инфекционном ларшгготрахеите птиц. Впервые установлена взаимосвязь между иммунобиологической реактивностью организма цыплят на введение вакцины к ныокаслской болезни и формированием вируснейтрализущих антител к инфекционное/ ларинготрахеиту. Определена корреляционная связь между иммунобиологическими показателями и напряженностью иммунитета против инфекционного лагииготрахеита. Впервые установлена эффективность сочетанного применения иммуномодуляторов ти-малина, тимогемина, ганглиина, авиамина с вакциной ВНИИШ и проведена сравнительная оценка различных методов вакцинации цыплят в раннем возрасте против инфекционного ларинготрахеита.

Практическое значение работы. Прогнозирование иммунологического ответа при вакцинации против инфекционного ларинго-трахеита определяется реакцией организма на введение вакцшш против нызкаслской болезни. Предложены методы, схемы и доза применения т®.гуномояулирующих препаратов в сочетании о вакциной против инфекционного ларинготрахеита, которые сникают постяакциналыше осложнения и повышают напряженность иммунитета.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Всесоюзной конференции молодых ученых и аспирантов по птицеводству (Загорск,1989 г.); Всесоюзной научно-производственной конференции "Комплексная система ветеринарных мероприятий в птицеводстве - резерв повышения эффективности производства", посвященной 25-летию ВНИВИП (Ленинград,1989 г.); методическом и ученом советах Всесоюзного ШВИ птицеводства (1988, 1989, 1990 гг.).

Объем и структура работы.Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 14 таблицами, 13 рисунками (из них 4 фотографии). Список литературы включает 273 источника, в том числе 149 зарубешшх.

Вопросы, выносимые на защит:/':

- формирование иммунитета к инфекционному ларинготрахеи-ту с учетом иммунобиологического состояния организма;

- применение i 'г.уномодуляторов с учетом иммунобиологического состояния организма птиц;

-'профилактика поствакцинальньк осложнений в соответствии с иммунобиологическим состоянием организма птиц.

МАТЕРИАЛ И KETOIti ЯССВДОЗЛШЙ

Работа выполнена в I987-I99G гг. в отделе вирусных болезней птиц и общих методов исследований ВШШ'ЯТ, а таюгз на птицефабриках Ленинградской области.

Для исследований использовали вдпля? 5- и БО-дневного возраста кросса "Заря-Г?" о ГПЯЗ "Нагорный", благополучного по инфекционным заболеваниям птиц. В экспериментах было леполь-ао?гло 1370 гатят и 1220 куриных эмбргсяоз, в прокышлеишк

условиях - 192875 цыплят.

Опыты проводили на группах цыплят, подобранных по типу аналогов. Подопытные и контрольные группы находились в одних и тех же условиях содержания, получали одинаковые рационы, принятые в соответствии с возрастными группами птиц.

Цыплят 5- и 30-дневного возраста шялунизировали вакциной ВНИИБП против инфекционного ларинготрахеита различными методами: окулярным - вакцину закапывали глазной пипеткой на конъюнктиву глаза в дозе 1000 ЭИД5Г), энторалышм - вакцину вводили с питьевой водой в дозе 4000 ЗВД50. штранаэальным -вакцину виодили глазной пилоткой в носовую щель в дозо 1000 Э11Д5р, согласно действующим наставлениям.

Цыплят ВО-днезного возраста нмцунизировали аэрозольным методом из расчета I ш/м^ помещения, с экспозицией 20 мин с момента полного распыления вакцины аэрозолыго генератором САГ-1, расположенным на высоте I м от пола. Рабочее разведение вакцины готовили на дистиллированной вода с добавлением к нему 10$ химически чистого глицерин!.

Для усиления иммунологического ответа и резистентности организма птиц при инфекционном ларинготрахеита применяли вакциьу ВНГМБП в сочетании с различишь и кму н о гло дул я то рами: тималпком, "имогешном, ганглиином, авиамином.

Проверку напряженности поствакциналького иммунитета у подопытных цыплят проводили путем контрольного заражения полевым вирусом инфекционного ларинготрахеита из штаила 24 "А" в дозе 1000 ИД5о интраграхеально.

3 опытах титр антител в сыворотке контролировали реакцией нейтрализации с использованием 7-9-дневных куриных эмбрионов. Поверхность скорлупы куриных эмбрионов предварительно обрабатывалась спиртом и обжигалась. В аллантонсную полость эмбриона вводили десятикратное разведение вируса с помощью однограммового шприца в дозо 0.2 щ. На каждое разведение обычно использовали по 4 эмбриона. Отверстие в скорлупе заливали парафином и инкубировали в термостате при температуре 37°С. Учет титрация проводили через 120 часов после образования счегоз некроза по четырехкрестовой си- теме.

3 работе использованы ебрологичоскиэ, иммуполоппеспг.п, пптасшзчесяие и биологические методе исследсиэиий.

Реакции нейтрализапри ставили по огчцоотипят'. й м»>топт-<?

В.Н.Сюрина и З.Я.Чистовой (1962). Вируснейтралигуацую способность сывороток выражали в индексе нейтрализации. Статистическую обработку данных проводили по методу Рида'и Менча(1938).

Реакцию задержки гемагглютинации проводили по методике В.Н.Сюрина и др.(1986). Положительной реакция считалась в том случае,если в лунке наблюдалась полная задержка гемагглютинации .

Определение концентрации белков, адсорбирующихся на зимо-зане, выполняли по методу, предложенному Л.Л.Погребняком и др. (1976).

Определение уровня лизосомалыю-катионных белков (ЛКБ) у птиц проводили по методике, предложенной Л.С.Колабской и др. (1987).

Определение количества Т- и В-лимфоцитов проводили согласно методическим рекомендациям, предложенным В.Г.Морозовым и В.Х.Хавинсоном (1930), с последующей фиксацией розеткообра-зующих клеток раствором глютарового альдегида.

Количество лейкоцитов подсчитывали по И.А.Болотникову и Ю.В.Соловьеву (1980). Форменные элемента крови подсчитывали в мазках, окрашенных по Паппекгейеду.

Реакцию гипер гувствитолыюоти замедленного типа проводили по методике, предложенной Эдельманом и др.(1986).

Определение содержания Хдй в сыворотке крови птиц проводили по методу Манчини (1965) в модификации Л.С.Колабской и др.(1984).

Функциональное состояние Т-системы иммунитета определяли реакцией торможения миграции лейкоцитов по описанному И.А. Болотниковнм, Ю.В.Конопатовым (1987) методу.

Коэффициент корреляций вычисляли по формуле Д.Сепетлиева (1968). Оценку достоверности коэффициента корреляции проводили по П.Ф.Рокитскому (1967).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

I. ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ И ПРОЯВЛЕНИЕ ПОСТВАЩШЫЫХ ООЛОЗНЕШШ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ВАКЦИНЫ "ЕНИИЕП" ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА ПТИЦ АЭРОЗДОЫШ МЕТОДОМ

Для профилактики инфекционного ларвнготрахеята птиц на птицефабриках попользуется яизая. вакцина из птамма ВНЖБП в до-

зе 5 ЭИДзд/м® аэрозольным методом цыплятам в 35-дневном возрасте. Проведенный анализ на птицефабриках Ленинградской области показал, что иммунизация цыплят, как правило, сопровождается переболеванием данлят ИЛТ в легкой форме, проявле-ниаы других болезней и летальностью птипы от 0.2 до 3.0$.

В результате исследований установлено, что низкий уровень ЛКБ I.65+C.I6 ед., IgG 1.80+0.01 глг/л коррелирует с увеличением летальности птица от поствакцинальных осложнений, выбраковка птицы составила 1.4%. В последующих опытах установлено ЛКБ 1.30+0.IG ед., IgG 2.0+0.01 ю/мл, у цыплят на 5-6 день после вакцинации отмечались клинические признаки ИЛТ, увеличилась летальность птицы. У теплят этого же возраста,содержащихся б других птичниках и имеющих оптимальный уровень ЛКБ 2.20+0.16 ед. Ii IgG 3.5+0.2 мт/мл, поствакцинальные осложнения были незначительными.

Таким образом, анализ уровня кеспецифической резистентности цыплят перед вакцинацией выявил корреляционную связь между урознем иммунобиологического состояния птицу и проявлением осложнений при применении аэрозолей вакцины против ИЛТ.

2. №5,1УН0ШСЛ0ГИЧЕСКАЯ РЕАКЦИЯ ОРГАНИЗМА НА ВВЕДЕНИЕ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ НЪККАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ И ИНФЕК1ШИ0Г0 ЛАРИНГОТРАШТА

ПТИЦ

Учитывая различия иммунобиологической реактивности птицы, была проанализирована взаимосвязь между ответной реакцией организма цыпленка на вакцину к ныокаслской болезни и выработкой антител к ИЛТ. Перед вакцинацией против ИЛТ у всех цыплят 30-дневного возраста исследовали сыворотку крови на наличие антигемагглютинирующих антител к ныокаслской болезни в реакции задержки гемагглютинации. С учетом антигемагглютинирущих титров были сформированы опытные группы, первая - с высоким титром антител- 6.5+0.21 iog2, вторая - с низким- 1.75+0.32 log2, третья группа (3.25+0.30 log2 ) служила контролем.Подопытные цыплята были вакцинированы против ИЯТ аэрозольным методом. После вакцинации цыплят против ИЛТ на 6-12 день проводили всслэдование клеточной сенсибилизации посфункциональной активности лейкоцитов.

В группе цыплят с высоким содержанием антпгемагглптишшов на 6 сутки после вакцинации индекс торможения миграции лейко-6

цитов был выражен максимально и составил 0.42+0.09." У цыплят с низким содержанием антигемагглютишшоз индекс торможения миграции лейкоцитов был незначителен и составил 0.540+0.012. На 12 сутки после вакцинации у цыплят с низким и высоким содержанием антигемагглютининов индекс тормояенич миграции лейкоцитов был менее выражен и составил 0.54+0.05 н 0.57+0.08 соответственно.

Исследования сыворотки крови в реакции нейтрализации через 14 дней после вакцинации против ШГГ показали, что у дап-лят с высоким титром антигемагглютннунов индекс нейтрализации был 2.31+0.26 с низким титром - 1.53+0.14 1е.

Цыплята, имевшие высокий титр'антигемагглютининов, формировали более напряженный поствакцинальный иммунитет, и устойчивость к эпизоотическому вирусу ИЛТ у них составила 85%, а с низким титром - 47%.

Полученные данные указывают на то, что уровень антигемагглютининов к ньюкаслской болезни позволяет прогнозировать формирование поствакцинального иммунитета против ИЛТ и отражает различие иммунологической реактивности организма цыплят.

Для определения ответной реакции организма цыплят на введение аэрозолей вакцины против ИЛТ в крови цыплят определяли количество лейкоцитов, Т- и В-лимфоцитов и содержание иммуноглобулина в в сыворотке крови у цыплят с высоким титром (о.50+ 0.21 1с^2) и с низким титром (1.75+0.30 1с>£2) антигемаггля-тинирующих антител. Количественное содержание Т- и В-лимфоцитов, з^в сыворотки крови цыплят с высоким титром достоверно выше соответственно на 10«, 6% и 3 раза, чем таковые показатели у цыплят с низким титром антигемагглютининов, что подтверждает активность антителообразовагельной способности организма цыгтлят этой группы. У цыплят с низким титром знтигекагглю-тининов показатели иммунного статуса организма снижены. Различия титров антител в РЗГА к ньакаслской болезни представляют практический интерес для выявления процента цяплят с ииму-нодефицитшм состоянием в промышленном птицеводстве. Поскольку последующая плановая вакцинация цыплят против ИЛ? обычно проводится в возрасте 35-40 дней, была выяснена способность организма вырабатывать антитела к ИЛТ.

На б день после вакцинации против ШГГ при исследовакга цыплят с низким содержанием ая-Глгекагглюттнянсв абсолютист ко-

личество Т-лимфоцитов в периферической крови увеличилось по сравнению с предвакциналышм уровнем до 4946+87 или на 2.8$, В-лимфоцитов - до 2513+65 или на 2.5%, содержание Igd - до 1.94+0.07 мг/m. У цыплят о высоким содержанием антигемагглю-тшинов увеличилось абсолютное количество Т-лимфоцитов до 5543+39 или на 4%, В-лимфоцитов - до 2792+17 или на 3%, содержание IgO - до 3.43+0.41 мг/юк

На 12 день после вакцинации при исследовании цыплят с низким титром антигемагглютиiraнов происходит снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов до 4865+41, В-лимфоцитов - до 2572+64, а содержание leí увеличилось до 2.43+0.12 иг/т. В этот же период в группе цыплят с высоким титром антигемаг-глютанинов происходит снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов до 5394+38, В-лимфоцитов - до 2749+16, а содержание IgG достигает уровня 6.90+0.06 мг/мл.

При исйчедовании обеих групп на 21 день абсолютное количество Т~ и В-лимфоцитов соответствует первоначальному уровню в предвакцинальный период, а содержание иммуноглобулина IgG тоже снижается, но остается ваше, чем в предвакцинальный период.

Черев 21 день проводили серологическое исследование на наличие вируснейтрализующих антител к вирусу МТ. При этом был^ установлено, что в группе цыплят со сникекным содержанием абсолютного количества Т~ и В-лимфоцитов и иммуноглобулина G уровень вируснейтрализующих антител бил I.41+0,14 ig по сравнению о группой цыплят, имевшей более высокий уровень абсолютного количества Т- й В-лимфоцитов, где уровень вируснейтрализующих антител составил 2.11+0.27 lg.

Из проведенных исследований следует, что титр вируснейтра-лизуодях антител к ЙЛТ коррелирует о уровнем титра антигемаг-глютияирудцих антител, показателями Т- и В-лимфоцитов и содержанием IgO сыворотки крови цыплят. Уровень титра нейтрализующих антител к иьюкаслской болезни необходимо использовать практиками для Прогнозирования ответной реакции организма птиц на введение вакцинн против ИЛТ.

3. ВЛИЯНИЕ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ НА НАПРЯЖЕННОСТЬ ПОСТВАКЦКНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА И ШЛГНОШСШОГИтеСКШЗ ПОКАЗАТЕЛИ ПРИ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА ПТИЦ

Повышение эффективности профилактических мероприятий за счет разработки рациональных схем сочетанного применения вакцин и иммуномодуляторов представляет практический интерес. В работе были использованы наиболее активные препараты: тима-лин, тимогемин, ганглиин, авиамин. Все испытанные иммуномоду-ляторы усиливали процесс формирования поствакцинального иглу-нитета к ИЛ Т. Во всех опытных группах применяли вакцину в дозе 3 ЭИДзд аэрозольно. Наибольший эффект на повышение титра вируснейтрализущих антител оказали авиамин и тимогемин, применяемые в соответствующих дозах 5 т/иЪ и 250 мкг/кг живой массы. Индекс вируснейтрализущих антител в этия группах составил 2.76+0.15 и 1.80+0.02 15, что на 1.64 и 0.68 1з вше по сравнению с контрольной группой (1.12+0.8 Хе).

Результаты контрольного заражения эпизоотическим штаммом вирулентного вируса ИЛТ в дозе 1000 ИД50 отражают устойчивость организма птицы к заболеванию, вызванное ИЛТ, в зависимости от напряженности иммунитета. Более устойчивыми, к полевому вирусу ИЛТ оказалиоь цыплята, вакцинированные аэрозольно в дозе 3 ЭИД5д с авиамином б мя/м^ и тимогемином 250 гдаг/кг живой массы, Иммунных цаплят в этих группах было 100 и 59$, что в 4.5 и 2.6 раза выше уровня Контрольных даплят.

Полученные результаты указывают на возможность сочетанного применения вакцины с.авиамином для усиления антигелообра-зования при ИЛТ.

Применение иммуномодуляторов! тималина, тимогешша» ганг-лиина, авиамана в сочетании с вакциной против ИЛТ в различной степени воздействует на ш^уиобнологические показатели организма птиц. Наиболее вараяэняое действие на иммунобиологические показатели организма птиц оказывают авиамин зз дозе 5 од/м^ и тимогемин в Дозе 250 ккг/кг живой ШбсМ при аэрозальном методе иммунизация. При аналогичном метода иммунизации ганглиин и ттлт менее выражение действуют на иммунобиологические показатели организма птиц.

. 4. ОЦЕНКА ИММУННОЙ РЕАКТИВНОСТИ ОРГАНИЗМА ЦЫПЛЯТ ПРИ ВВЕДЕНИИ ИММУНОДЕПРЕССАНТА И СТИМУЛЯТОРА ВАКЦШИРОВАННЫМ ЦЫПЛЯТАМ

Из литературных данных, известно, что вирусные инфекции способствуют развитию клеточного иммунодефицита.

В условиях птицехозяйств регистрируются вторичные имцуно-дефицитные состояния организма цыплят. Влияние иммуномодуля-тора тимогемина проводилось на модели цыплят с имицунодефицнт-ным состоянием, которое было экспериментально получено введением гидрокортизона. Состояние клеточной реакции организма контролировали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) с использованием фитогемагглютинина.

Учет реакции гиперчувствительности замедленного типа на сережках после однократной инъекции фитогемагглютинина через 24 часа является малоэффективным методом выявления иммунного состояния у цыплят. При такой кратности введения раствора ФГА отмечены низкие пороги чувствительности у всех подвергшихся испытанию цыплят. Прирост толщины сережек в этой группе цыплят составлял 0,280+0.017 мм. Повторная инъекция раствора ФГА у цуплят этой же группы через 7 дней способствовала активации реакции, максимально проявляющейся на сережках. Среднее значение прироста толщины сережек к этоку времени составило 0.510+0.010 мм. Реакция ГЗТ на повторную инвекцию ФГА у цыплят более активно сенсибилизирует иммунокстетентные клетки.

При введении гидрокортизона в зояе 100 иг/кг живой массы птицы толщина сережек составила 0.150+0.012 мм, а при дозе 50 мг/кг - 0.340+0.018 мм. У шалят, не обработанных гидрокортизоном, толщина сережек составила 0.520^0.018 мм.

Результаты этих опытов позволяют сделать вывод о том, что реакция ГЗТ на инъекции фитогемагглютинина зависит от уровня вммунодефицитного состояния организма цыплят.

Вакцинация цыплят 6 дозе 3 ЭИДзд на фоне иммунодепрессии не способствует образованию иммунитета высокой напряженности. Титр вируснейтрализующих антител у цыплят был низкий -1.05+0.10 Цыплята этой группы не способна были формиро-

вать реакцию ГЗТ по сравнению с контрольными. Печатанное применение тимогемина в дозе 250 мкг/кг живой массы с вакпл-

ной восстанавливает сниженную реакцию ГЗТ и активизирует выработку антител до 2.13*0.20 lg. Эта группа цыплят оказалась более устойчивой и в контрольном заражении полевым вирусом ШГГ. Снижение иммунологического ответа при вакцинации против ИЛТ обусловлено действием иммунодепрессантов. Экспериментально подтверждено значение иммунодефицитного состояния организма цыплят в выработке специфических антител.

5. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ВАКЦИНАЦИИ ЩГОГЯТ В РАННЕМ ВОЗРАСТЕ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТ,

ПТИЦ

Разработка новых методов иммунизации цыплят является актуальной задачей в системе профилактических мероприятий, что позволит в сложной эпизоотической обстановке снизить поствакцинальный отход птицы. Учитывая особенности иммунобиологического состояния цыплят, а также работы по вакцинации птицу в ранний период, мы поставили задачу изучить возможность вакцинации цыплят против ИЛТ в раннем возрасте живой вакциной ВНИИБП различными методами. Опыт проводили на цыплятах 5-дневного возраста.

Через 14 дней был отмечен высокий уровень татра антител в группе цыплят, иммунизированных энтеральНо в дозе 4000 ЭИД50, который составил 2.40+0.14 lg*, при окулярном в дозе 1000 ЭИДвд - 2.17+0.20 lg и интраназально 1000 ЭИД^ -1.75+0.15 lg.

В ходе дальнейших исследований у цыплят этой группы в 30 дней установлено увеличение титра вируснейтрализуицих антител по сравнению с первоначальным уровнем, определенным в 14 дней. При окулярном методе иммунизации титр антител увеличился на 11%, энтеральном - на 10%, интранаэальном -на 12%.

При ежедневном клиническом осмотре в течение. 30 дней не наблюдали поствакцинальную реакцию в группе цыплят, вакцинированных окулярным, энтеральным и интраназальным методом» что свидетельствует о безвредности и безопасности проводимой иммунизации. Все опытные группы были устойчива к контрольному заражению эпизоотическим вирусом из штамма 24 "А"

инфекционного ларинготрахеита. . После вакцинации цыплят по мере развития иммунитета происходит отчетливое изменение иммунобиологических показателей организма, уменьшается индекс миграции лейкоцитов, что свидетельствует о функциональной активности Т-лимфоцитов к вирусу Ш1Т. На 5 сутки после иммунизации индекс миграции лейкоцитов бал наиболее низким - 0.41+0.01 в группе даплят, вакцинированных энтерально, а у цыплят, вакцинированных окулярно, он составил 0.46¿0.01, интрана-зально - 0.49+0.01. Через 14 дней после вакцинации отмечается увеличение содержания igg во всех опытных группах цыплят. При антеральном методе вмцунизации его количество увеличилось по сравнению с контрольной группой и составило 2.25+0.30 мг/ш1, при окулярном - 1.96+0.15 мг/мл, при инграназальном - 1.85+0.27 мг/мл.

Различный уровень концентрации IgQ в опытных группах цыплят обусловлен неодинаковой степенью имцунного ответа организма на вакцинный вирус ИЛТ. В контрольной группе прослеживается увеличение концентрации igG с возрастом птицы.

Вакцинация влияет на содержание ЖБ в гранулоцитах, их количество уменьшается во всех опытных группах по сравнению с контролем. При энтеральном методе иммунизация количество 1КБ в гранулоцитах уменьшается на 11%, при окулярном - на Ш%, при интраназальном - на lit по сравнению с контролем.

Количество белка, адсорбирующегося на зимозане, в группе вакцинированных дагошт на 14 день имеет тенденцию к увеличению по сравнению с контрольной группой. В группе вдплят, вакцинированных энтеральным методом, количество белка увеличилось по сравнению с контрольной группой на 49%, окулярным - на 45%, интралазвльным - на 40%.

Анализ проведенной работы показывает мозможность вакцинации цыплят в раннем возрасте путем введения вакцины эн~

теральннм, окулярным или интраназалыгым способом.

6. ПРОИЗВОДСТВЕННОЕ ИСПЫТАНИЕ АВИАШНА С ВАКЩНОЙ ИЗ ШТАША ВНИИБП ПРИ АЭРОЗОЛЬНОЙ ИШЛГОАЩИ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИКГОТРАХЕИТА ПТИЦ

В производственных условиях проведено испытание авиамина с вакциной против инфекционного ларинготрахеита птиц. Испытания проводили на птицефабриках яичного направлеь:»! "Красные Зори" и мясного направления "Ломоносовская", ле-благополучных по ИЛТ. На птицефабрике "Красные Зори" для проведения комиссионного опыта было выделено два птичника, в одном из которых цыплят 36-дневн;. го возраста вакцинировали аэрозольно в дозе 3 ЗИД-д в сочетании с авиамином 5 мл/м3, во втором - вакцинировали в дозе 3 ЭИДэд .

В течение 10 дней после вакцинации проводили наблюдения поствакцинальных осложнений, они отсутствовали у вакцинированных шплят. Контрольное заражение проводили вирулентным штаммом 24 "А" в виварии ВНИВИП. Через 14 дней после вакцинации в дозе 3 ЭИДдд с авиамином установлено наличие антител к вирусу ИЛТ с положительным индексом 1.83 Антитела обнаружены также у цыплят, вакцинированных в дозе 3 Э'ЛДзд, но индекс нейтрализации был отрицательный -1.0

Таблица I

Летальность цыплят при контрольном заражении эпизоотическим вирусом ИЛТ

№ Количест-Результаты контрольного зараже-

груп- Метод во зара- ния полевым вирусом ИЛТ в дозе

пы вакцинации женных__ЯД-50 ___

шалят Забо-Т забо-Вт.ч. %пав- % за-лело левпгах пало ших щиты ______________,_____пдплят__

1 Аэрозольно 3 22 ю 45 г 10 55 -ид50

2 Аэрозольно 3 м у, 5 95 ЭИЛсп ' гшиа-

млн

1И

Ланные таблицы I показывают, что при вакцинации в дозе 3 ЭИДзд с авиамином 5 кп/мР аэрозольным методом у пдплят иммунитет сформировался в 95% случаев, а у цыплят, вакцинированных в дозе 3 ЭИД^д - в 55$. В производственных условиях аэрозольная вакцинация цыплят 38-дневного возраста противгИЛТ вирус-вакциной в дозе 3 ЭИДдд с авиамином 5 шх/м^ обеспечивает формирование иммунитета у 95% птица и профилактирует поствакцинальные осложнения.

Применение вакцины в дозе 3 ЭИД^ цыплятам в условиях производства хотя и не вызывает поствакцинальных осложнений, но и не обеспечивает напряженного иммунитета.

Положительные результаты были получены при производственных испытаниях аэрозолей вакцины ВНИИЕП и авиамина при вакцинации бройлеров в трех опытах.

Таким образом, в практику птицеводства необходимо рекомендовать использование аэрозольной вакцинации против ИЛТ в сочетании с авиамином».""

вывода

1. Снижение показателей неспецифической резистентности по содержании лизосомально-катионных белков до 1.30+0.16 ед. и XgQ до 2.0+0.16 мг/мл прогнозирует проявление поствакцинальных осложнений при вакцинации против инфекционного ларинготрахеита.

2. Установлена взаимосвязь между антителообразугацей способностью организма на введение вакцины против ньюкасл-ской болезни и выработкой вируснейтрализующих антител к инфекционному ларинготрахеиту. Цыплята с высоким титром антигемагглютининов (6.50+0.21 log2) имели индекс нейтрализации 2.31+0.26 lg (положительный), а у цыплят с низким титром антигемагглютининов (1.75+0.32 locg) индекс нейтрализации был 1.53+0.13 lg (сомнительный).

3. Титр вируснейтрализувдих антител к инфекционному •ларинготрахеиту коррелирует с уровнем антигемагглюгинлнов тс ньшаслской болезни, показателя;,!:! Т- ir В-ягмфгпитов и содержанием Ig3 в сыворотке КрОЕИ цыплят.

4. Аэрозольная вакцинация против инфекционного ларинготрахеита в дозе 3 ЭИД^ в сочетании с авиамином 5 мл/м® или с тимогемином в дозе 250 жг/кг живой массы повышает уровень вируснейтрализующпх антител в момент максимального развития иммунитета до 2.76+0.15 и 1.30+0.02 lg и профилактирует поствакционачьныз осложнения.

5. Под действием иммуномодуляторов тималина, тимогемина, ганглиина и авиаглина при аэрозольном, окулярном и энтераль-ном методах-иммунизации в сочетании с вакциной ВНИИБП против инфекционного ларинготрахеита повышается количество Т- и В-лимфоцитов на 5-12$, количество лизосомальночеатионных белков в гранулоцитах - на 30-57$, содержание iga - в 2.6 раза. Наиболее выраженным имгдуномодулиругацим действием обладает тимогемин и авиаыин.

6. Реакция гиперчувствительности замедленного типа является чувствительным тестом для оценки клеточной иммунологической реакции организма при вакцинации против инфекционного ларинготрахеита птиц.

7. Вакцинация 5-дневных цыплят против инфекционного ла-рилготрахеита энтералышм, окулярным и интраназальным методами в дозе 1000-4000 ЗИД5д обеспечивает защиту на 88-95$

от эпизоотического вируса Ш1Т.

8. На основе экспериментальных и производственных испытаний иммуномодуляторов разработан новый способ профилактики птиц против инфекционного ларинготрахеита путем аэрозольной вакцинации, включающей в себя использование вакцины ВНИИШ в дозе 3 ЭИД^д в сочетании с авиамином 5 т/т . Способ позволяет формировать иммунитет у 95% птица и профилактировать поствакцинэлыше осложнения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

I. Экспериментальные исследования и производственные испытания показывают, что прогнозировать иммунологический от-т-ют при вакцинации против инфекционного ларинготрахеита возможно путем анализа ответной реакции организма на введение вакцины против ныакдолской болезни.

2. £дя снижения поствакциналышх осложнений при иммунизации против инфекционного ларинготрахеита аэрозольным методом следует применять вакцину в дозе 3 ЭВДзд в сочетании с ввиамином и тимогемином.

3, 0 цельв повышения профилактических мероприятий рекомендуется вакцинация цыплят в раннем возрасте против инфекционного ларинготрахеита окулярным, энтеральным и интрана-зальным методами.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Фисенко С.П. Формирование поствакцинального иммунитета к инфекционному ларинготрахеиту птиц // Основы профилактики болезней сельскохозяйственных птиц: Сб.науч.тр./ ВНИТШ, ВНИВШ. - Л., 1989. - С.51- .

2. Фисенко С.П. К вопросу образования'иммунитета к вирусу инфекционного ларинготрахеита птиц // Всесоюз. коиф. молодо ученых и аспирантов по птицеводству: Тез. докл./ ВНИТИП. - Загорск, 1989. - С. 92-93.

3. Ыалушко В.В., Оисенко С.П. Реакция опухания сережек на введение фэтогемагглюгинина,как мера определения иммуно-компотентности у цыплят // Комплекс противоэнизоотических

и специальных мероприятий по борьбе с болезнями птиц: Сб. науч.тр./ ВНИТШ, БНИВИП. - Л., 1990.- С.59-64.