Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Разработка и внедрение средств диагностики и специфической профилактики наиболее опасных вирусных болезней птиц

4.Выводы

1. В качестве вакцинного предложен аттенуированный штамм "ВНИИБП", который по основным генетическим маркерам (физико-химическим, антигенным и иммунобиологическим свойствам) соответствует эталонным штаммам вируса ИЛТ. Отличия штамма "ВНИИБП" от "ЦНИИПП" заключаются в низкой патогенности для эмбрионов и реакто-генности для цыплят, антигенной специфичности, отсутствии гемагтлютиногенности и цитопатогенности, и выраженной иммуногенности при индивидуальных и групповых методах иммунизации. Штамм генетически стабилен, нереверсибелен и способен к длительной персистенции в организме иммунной птицы. Обнаруживается определенная коррелятивная связь между некоторыми генетическими признаками (и, К, гс135, ТС, 11} и патогенностью (РсЪе, Рс^ь Рбр^)

2. Разработана и освоена технология изготовления вирусвакцины против ИЛТ из штамма "ВНИИБП". Предложенные методы контроля позволяют выпуск высококачественной вакцины из штамма "ВНИИБП". Вакцина менее реактогенна и более иммуноген-за по сравнению с вакциной из штамма "ЦНИИПП" при аэрозольной вакцинации и безвредна при клоачном, окулярном и энтеральном методах введения. Напряженность и гродолжительность иммунитета цыплят зависят от метода и кратности введения, дозы закцины и возраста привитой птицы. При вакцинации цыплят в возрасте 60 и более сут остойчивость их сохраняется в течение всего срока эксплуатации птицы. Для оценки >ффективности иммунизации предложен метод контрольного заражения цыплят виру-юнтным вирусом ИЛТ и определения уровня антител в РН.

3. Схемы применения вакцины необходимо корректировать для каждого птицехозяй-;тва в зависимости от конкретной эпизоотической ситуации. Наиболее эффективна дву-;ратная вакцинация птицы с интервалом 16-20 сут.

4. Изучены эпизоотологические особенности вирусного энтерита гусей, клинические :имптомы и патологоан атомические изменения у больных и павших гусят, что позволяет [редварительно ставить диагноз в хозяйстве. Окончательный диагноз подтверждается в ибораторных условиях изоляцией вируса в гусиных эмбрионах, в культурах клеток первичных или перевиваемых), идентификацией в реакции нейтрализации и РДП, с из-естной гипериммунной сывороткой к парвовирусу гусей.

5. Клонированы эпизоотические штаммы вируса энтерита, изучены их иммунобиоло-ические свойства и селекционирован алатогенный вакцинный "клон 6" штамма "П-75".

По морфологической и антигенной структуре, а также основным иммунобиологически признакам "клон 6" принадлежит к парвовирусу гусей. Вакцинный "клон 6" неревера белен, апатогенен для гусят и обладает выраженной антигенностью и иммунногеннс стью.

6. Разработана и освоена технология изготовления вирусвакцины сухой культурал! ной ВНИВИП против ВЭГ из "клона 6". Изучены оптимальные параметры культивирс вания вируса, условия хранения и лиофилизации вакцины. Благодаря выраженному ант» генному родству "клона 6" с эпизоотическими штаммами-изолятами, циркулирующим на территории РФ и СНГ, вакцина обладает высокой иммуногенной эффективностью производственных условиях на уровне с зарубежными препаратами.

7. Вирусвакцина ВНИВИП из "клона 6" предназначена для специфической профилак тики в стационарно неблагополучных хозяйствах и в хозяйствах с острой вспышкой бо лезни. Вакцина при двукратной иммунизации родительского стада перед яйцекладко! или однократной - гусят в 1-2-сут возрасте индуцирует резистентность молодняка на вес восприимчивый период. Вакцинация гусепоголовья в комплексе с ветеринарно санитарными мероприятиями обеспечивает устойчивое благополучие хозяйств по вирус ному энтериту гусей.

8. Анализ эпизоотической ситуации по реовирусному теносиновиту кур в РФ за по следнее десятилетие (1990-1999 гг.) свидетельствует о широком распространении болез ни. Методом ИФА и МФА установлена персистенция возбудителя РТ в 90-95% обследо ванных птицехозяйствах, специализирующихся на кроссе Ломан браун и мясной птице Выявлен широкий спектр патогенности вирусных изолятов, циркулирующих на террито рии страны.

9. Изучена специфичность метода ИФА при реовирусном теносиновите кур. Оптими зированы основные параметры постановки ИФА по иммуноспецифическим и неспеци фическим компонентам набора диагностикума. Разработан набор компонентов для диаг ностики РТ кур иммуноферментным методом и освоена технология его изготовления Набор предназначен для выявления в сыворотке крови и желтке яиц кур специфически? антител к вирусу РТ иммуноферментным методом и применяется для ретроспективно{ диагностики и оценки поствакцинального иммунитета против РТ.

10. Атгену'ирован вакцинный штамм "ВНИВИП-ДЕП" методом перемежаюшихо пассажей на КЭ и культуре клеток. Изучены генетические признаки штамма на разлиЧ' ных биологических моделях и антигенные взаимоотношения с полевыми изолятами Установлено его антигенное родство с эпизоотическими штаммами, выраженная имму-ногенность и отсутствие патогенности для цыплят. Отработаны оптимальные параметры культивирования вируса.

11. Предложена для серийного производства и применения в условиях птицеводства вирусвакцина ВНИВИП против РТ сухая культуральная из штамма "ВНИВИП-ДЕП" Она предназначена для специфической профилактики заболевания, является безвредной и формирует поствакцинальный иммунитет, обеспечивающий устойчивость птицы ь заражению. Отработана схема вакцинации цыплят, включающая: двукратное введение живой вакцины в 7-10- и 35-40-сут возрасте и ревакцинацию инактивированной вакциной в возрасте 105-110-сут. Серологическая оценка напряженности поствакцинального иммунитета проводится методом ИФА. При уровне антител 1:400 - 1:800 птица устойчива к заражению.

5. Практические предложения

В ветеринарную практику внедрены' вирусвакцины против ИЛТ из штамма 'ВНИИБП", ВЭГ из "клона 6" и РТ из штамма "ВНИВИП-ДЕП". Они зарегистрированы в Российской Федерации, производятся серийно на биологических предприятиях и широко трименяются в птицеводческих хозяйствах России и стран СНГ.

Для лабораторий государственной ветеринарной службы и лабораторий птицехо-¡яйств предложены методы лабораторной диагностики ИЛТ и ВЭГ, а также метод ИФА 1ля серологической оценки напряженности иммунитета и ретроспективной диагностики эеовирусного теносиновита кур.

6. Список работ, опубликованных по теме диссертации

I. Трефилов Б.Б. Культивирование вакцинных штаммов вируса инфекционного ларин-готрахеита при различной температуре.//Матер. научно-произ.конф.по профил.и ле-чен.бол.птиц и с/х ж-х. Псков, 1970,29-33. !. Трефилов Б.Б. К вопросу об иммуногенности вакцинного штамма ЦНИИПП вируса ИЛТ птиц.//Тезисы докл.научно-произ.конф.по проф.и мерам борьбы с болезнями молодняка с/х ж-х. Минск, 1970, 74-76. I. Трефилов Б.Б. Биологические свойства вакцинных штаммов вируса ИЛТ, культивируемые в культуре фибробластов куриных эмбрионов. //Матер.всесоюз.научн.совещан.и конференций. Загорск, 1972, вып.4,367-372. Трефилов Б.Б. Изучение гемадсорбирующей и гемагглютинирующей активности вакцинного и эпизоотического штаммов вируса инфекционного ларинготрахеита. // Болезни птиц (сб.трудов, вып.10/21), 1972,236-240.

Трефилов Б.Б. Изучение чувствительности вакцинных штаммов вируса ИЛТ к некоторым физико-химическим факторам. // Тезисы докладов всесоюз.межвуз.конфер.по вег.вирусол., 1, М., 1973, 5-6. . Трефилов Б.Б. Бляшкообразующая и интерфероногенная активность вакцинных штаммов вируса ИЛТ птиц. // Научн.основы промышл.произ.яиц и мяса птицы, 38, 1974,244-248.

Трефилов Б.Б. Антигенная специфичность и степень нейтрализации специфической антисывороткой вакцинных штаммов вируса ИЛТ птиц. // Научные основы про-мышл.произв. яиц и мяса птицы, 38, 1974, 248-251.

Трефилов Б.Б., Малушко В.В. Испытание экспериментальной инактивированной ЭГОА вакцины против инфекционного ларинготрахеита птиц. // Актуальные проблемы развития птицеводства (Матер.науч.конф.), 8. Загорск, 1974,98-101. Урбан В.П., Колабская Л.С., Колупаева Т.Д., Трефилов Б.Б. Влияние куриного им-муноглобулинового препарата на резистентность организма цыплят при экспериментальном ИЛТ. // Лечение и проф.болезней с/х ж-х и птиц (Матер.Ш научно-производ.конфер.), Л., 1975,2. 3. Трефилов Б.Б., Малушко В.В. Изучение некоторых генетических признаков вакцинных штаммов вируса инфекционного ларинготрахеита птиц. // Матер.научной кон-фер. К 50-летию УзНИВИ, Тайляк, 1976, 95-97

Малушко В.В., Трефилов Б.Б., Комиссаров К.П., Никитин Г.И. Генетические признаки и иммуногенная активность вакцин ЬТ-1УАХ и ЦНИИПП против инфекционного ларинготрахеита кур. // Сб.тр.Всесоюз.науч.-исслед.и технол.ин-та птицеводства, 1976, т.41,136-140.

12. Трефилов Б.Б., Малушко В.В. Методы лабораторной диагностики инфекционного ларинготрахеита.//ГОСТ 25582-83, М. 1983

13. Малушко В.В., Щеглова И.В., Комиссаров К.П., Фадин B.C., Корнеева В.И., Трефилов Б.Б. Выделение вируса энтерита гусят и изучение его антигенной активности. // Лечение и проф. болезней с/х ж-х и птиц (матер.Ш научно-производ.конф.), Л., 1975, 3.

14. Трефилов Б.Б. Антигенная активность и родство штаммов-изолятов вируса энтерита гусят. // Передовой научно-производ.опыт птицеводства, 12(60), М., 1976,26-27.

15. Трефилов Б.Б. Патогенность и терморезистентность вируса энтерита гусей. // Тезисы докл. XIX конф.молодых ученых и аспирантов по птицеводству. Загорск, 1976, 5961.

16. Малушко В.В.,КудрявцевФ.С.,КомиссаровК.П.,Пожалова Р.Г.,Трефилов Б.Б. Об антигенном различии штаммов-изолятов вируса энтерита гусей. // Актуальные вопр.вет.вирусол., 1. Владимир, 1976, 165-167.

17. Малушко В.В.,Кудрявцев Ф.С.,Пожалова Р.Г.,Курганский Т.А.,Трефилов Б.Б. Культивирование вируса энтерита гусей в перевиваемых линиях клеток. // Научные основы вет.-проф.меропр.в промышл.птицев. Кишинев, 1977,37-39.

18. Щеглова И.В., Иващенко В.Г., Трефилов Б.Б. Применение гипериммунных сывороток для профилактики вирусного энтерита гусей. // Передовой науч.-произв.опыт в птицеводстве, М., 1980,30-31.

19. Малушко В.В., Иващенко В.Г., Щеглова И.В., Трефилов Б.Б. Вирусный энтерит гусей и меры борьбы с ним. //Актуальные вопр.вет.вирусол. Казань, 1980, 15.

20. Трефилов Б.Б. Испытание формолвакцины против вирусного энтерита гусей в производственных условиях. // Передовой науч.-произв. опыт в птицеводстве, 3/Ш/, М., 1982,40-41.

21. Малушко В.В., Трефилов Б.Б., Конгримавичус Л.М, Щеглова И.В., Фадин B.C., Бон-даренко А.Ф. Эпизоотологическое состояние гусеводческих хозяйств, профилактика и меры борьбы с вирусным энтеритом гусей. //Ветеринария, 1983.

22. Малушко В.В., Трефилов Б.Б.,;, Щеглова И.В., Иващенко В.Г Предупреждение вирусного энтерита гусей. //Птицеводство, №5,1984.

23. Малушко В.В., Трефилов Б.Б. Вирусный энтерит гусей. // В кн.: "Профилактика наиболее опасных вирусных болезней птиц". Кишинев, 1985, 139-154.

24. Трефилов Б.Б., Щеглова И.В. Биологические свойства вируса энтерита гусей. //Тез. докл. к всес.н.-произ.конф."Комплексная система ветеринарных мероприятий в пти-цеводстве-резерв повышения эффективности производства", Л., 1989, 36-37.

25. Трефилов Б.Б., Клонирование вируса энтерита гусей. // Тез. докл.к всесоюз.н,-произ.конф."Комплексная система ветеринарных мероприятий в птицеводстве-резерв повышения эффективности производства", Л., 1989,37-39.

26. Трефилов Б.Б. Разработка средств профилактики вирусного энтерита гусей. // Ветеринария, №6, 1990, 6.

27. Инструкция по изготовлению и контролю вирусвакцины сухой культуральной ВНИВИП против вирусного энтерита гусей. // Утв.ГУВ, 1990, 48.

28. Малушко В.В., Трефилов Б.Б., Щеглова И.В. Вирусвакцина сухая культуральная ВНИВИП против вирусного энтерита гусей. // ТУ 10-09-40-90, 21.

29. Наставление по применению вирусвакцины сухой культуральной ВНИВИП против вирусного энтерита гусей. // Утв.ГУВ №044-3,1990,.

30. Малушко В.В., Трефилов Б.Б. Болезни гусей и их профилактика. // Птицеводство, №4, М., 1992,.

31. Трефилов Б.Б. Производственные испытания вирусвакцины ВНИВИП против вирусного энтерита гусей. // Сб.н.трудов "Система мероприятий обеспечения эпизоотического благополучия птицеводческих предприятий", СПб., 1993, 41-49

32. Малушко В.В., Трефилов Б.Б., Щеглова И.В., Пожалова Р.Г. Штамм Goosa parvovirus для приготовления вакцинных препаратов против вирусного энтерита гусей. // Патент №1499917, 1993.

33. Трефилов Б.Б. Гуморальный и клеточный иммунитет при сочетанном применении вирусвакцины ВНИВИП против ВЭГ с иммуномодуляторами. // Вирусные болезни с/х ж-х. Тез.докл.Всерос.науч.-практ.конф. Владимир, 1995,278.

34. Трефилов Б.Б. Специфическая профилактика вирусного энтерита гусей. // Вирусные болезни с/х ж-х. Тез.докл.Всерос.науч.-практ.конф. Владимир, 1995,277.

55. Трефилов Б.Б. Эпизоотологические особенности вирусного энтерита гусей. // Сб.науч.трудов "Ветеринарная профилактика в промышленном птицеводстве". СПб-Ломоносов, 1996, 48-56.

J6. Трефилов Б.Б. Профилактика вирусного энтерита гусей. // Информац.листок №1-96. СПб-Ломоносов, 1996.

S7. Трефилов Б.Б. Проблема вирусного энтерита гусей в промышленном птицеводстве. //Матер.науч.-произ.конф., посвященной 190-летию высшего вет.образования в России и 100-летию вет.науки, т.2. СПб, 1998, 99.

18. Трефилов Б.Б., Шурчилов А.Ф., Мытарова Н.В. МФА для обнаружения реовируса теносиновита кур. //Тез.докл.межрегион.науч.-произ. координац. совещания "Проблемы ветеринарной профилактики в промышленном птицеводстве". Петрозаводск-СПб, 1994,7.

19. Мытарова Н.В., Трефилов Б.Б., Королев A.M. Экспериментальный реовирусный теносиновит у цыплят. // Тез. докл. межрегион.науч.-произ. координац.совещания "Проблемы ветеринарной профилактики в промышленном птицеводстве". Петрозаводск-СПб, 1994, 7-8.

Ю. Мытарова Н.В., Трефилов Б.Б. Изучение иммунобиологических свойств вируса теносиновита кур. //Тез. докл.межрегион.науч.-произ. координац. совещания "Проблемы ветеринарной профилактики в промышленном птицеводстве". Петрозаводск-СПб, 1994,9-10.

И. Трефилов Б.Б., Никитина Н.В. Оценка иммуноферментной тест-системы для определения антител к вирусу теносиновита кур. // Вирусные болезни с/х ж-х. Тез.докл.Всерос.науч.-практ.конф. Владимир, 1995,271

2. Инструкция по изготовлению и контролю набора для диагностики реовирусного теносиновита кур иммуноферментным методом, 1998.

3. Никитина Н.В., Трефилов Б.Б. Набор для диагностики реовирусного теносиновита кур иммуноферментным методом. // ТУ 9388-009-00495674-98.

4. Временное наставление по применению набора компонентов для диагностики реовирусного теносиновита кур иммуноферментным методом. // Утв.Департаментом ветеринарии РФ № 13-7-2/1264 от 05.06.98.

45. Трефилов Б.Б., Сарбаева Н.В. Антигенная специфичность и степень нейтрализацю штаммов вируса теносиновита кур. // Вирусные болезни с/х ж-х Тез.докл.Всерос.науч.-практ.конф. Владимир, 1995, 272.

46. Трефилов Б.Б., Никитина Н.В. Реовирусная инфекция птиц. // Информационны? листок, №2-96. СПб-Ломоносов, 1996.

47. Korovin R.N., Trefilov В.В., Nikitina N.V. The problems of chickens reovirus infection ii Russia. // 10th European poultry conference ("The Poultry Industiy Towards the 21я Cen tury"). Jerusalem, Israel, June 21-26,1998,80.

48. Инструкция по изготовлению и контролю вирусвакцины ВНИВИП против реови-русного теносиновита кур сухой культуральной, 1998.

49. Трефилов Б.Б., Явдошак Л.И., Никитина Н.В. Вирусвакцина ВНИВИП против рео-вирусного теносиновита кур сухая культуральная. // ТУ 9383-008-00495674-98,15.

50. Трефилов Б.Б. Временное наставление по применению вирусвакцины ВНИВИП против реовирусного теносиновита кур сухой культуральной (в порядке широкие производственных испытаний в 1998-2000 гг.). // Утв.Департаментом ветеринарии РФ, №13-5-2/1260, 3 июня 1998.

51. Трефилов Б.Б. Штамм "ВНИВИП-ДЕП" для получения вакцины против реовирусного теносиновита кур.//"Приоритетная справка", №98108898/13 от 24.04.98.

52. Коровин Р.Н., Трефилов Б.Б., Никитина Н.В., Явдошак Л.И., Горецкая Т.И. Сухая вакцина против реовирусного теносиновита кур. Патент от 17.03.2000.