Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Ветеринарно-токсикологическое изучение Фенадека

КАЗАНСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ ИМЕНИ Н.Э.БАУМАНА

На правах рукописи

ПЛОТИНСКАЯ ЛЮБОВЬ ВАСИЛЬЕВНА

ВЕТЕРИНАРНО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ФЕНАДЕКА

16.00.04. - ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Каэаяь 1990

■ / '* л •••• А /' .»■""•

Работа выполнена в Всесоюзной Государственной научно -контрольном институте ветпрепаратов

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор

Тимофеев Б.Л. •

Научный консультант - заслуженный изобретатель УССР,доктор

технических наук Слезко Г.С.

Офишд.льные оппоненты: заслуженный деятель неучи ТАССР, доктор

ветеринарных наук, профессор Сиетов П.К.

кандидат ветеринарных наук.допент Гарипов Т.В.

Ведущая организация - Всесоюзный ордена Ленина научно- исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Ковеленко

Защита состоится " ¡0 . /х. 1990 г. / п

в / О часов на заседании специализированного совета К.120.22.02 при Казанском ордена Лёнина ветеринарном институте ииени Н.Э.Баумана (420074, Казань - 74, ветеринарный институт ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского ордена Ленина Еетеринарного института имени Н.З.Баумана.

¿Г- //

Автореферат разослан " О и К 1990 г.

Учений секретарь специализированного совета - кандидат ветеринарных наук, доиент Корнишик А.!!.

I. ОШЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Решения ХХУП съезда КПСС предусматривают резкое увеличение производства продуктов иивотноводствэ. Наряду с этим нэ:.:ечено дзльнейиее развитие овденодстЕэ е различных районах страны. Одной из причин, влияющих на развитие овцеводства, являются кипечные цестоды, вызывающие весной,летом и осенью значительные убытки, связанные с гибелью ягнят и потерши продуктивности вследствие субклинического течения болезни у животных. Поэтому лечение и профилактика указанных заболеваний постоянно требуют совершенствования методов терапии и поиска ноеых высокоэффективных антгельминтных средстЕ.

Для лечения и профилактики кониезиозов овец в настоящее время предлояены различные препараты на основе фенасала: фенэ-веры, фенасэл-2, феналидон (отечественные), сэвврмик,рэдегерм, ннклозамидатетрэнизол-З (зарубежные). Однако эти ¡лоно н комплексные препараты по-л^анему не решают проблему с цестодозэ-ь:и киеотных. Препараты из-зэ рубегса поступают в небольиих количествах, отечественные - фенаЕврм не нарабатывается вообще, фензсал-2 производится в стране не более 100 т, феналидон -1020 т в год. Для материального обеспечения дегельминтизация только овец,по подсчетам ВИГКС (1988), требуется фенаевла более 600 тонн в год.

Приведенные выше материалы свидетельствуют о явном дефиците этого антгельминтика, в связи с чем в стране ведется постоянный поиск в области совершенствования препаративных ф: и фенасала.

'Лвано-оранкоЕским заводом тонкого органического синтеза предложен препарат на основе фенэсалэ-2 - фенадек. Б состзв фенэдекэ входят микронизировапные Фенасал-2 и декст-

рин, указанное соединение получают путем диспергирования сухих веществ методом никровзршвз. В связи,с тем, что вышесказанный препарат является новым и сведения оо' его токсичности для теплокровных отсутствуют, возникла необхс яуость изучения действия этого препарате не организм животных.

. Цель и задачи исследований. Основная цель настоящей работы - изучение энтгельминтноя активности и токсических свойств фенадеча, предназначенного для лечения и профилактики цонпз-зиоза овец.

В связи о этим е задачи исследований входило:

1. Изучить физико-химические свойство фенадска.

2. Определить параметры острой токсичности препарата для лабораторных животных (белых мшией и крыс), о такие кумулятивные свойства. •

3. Изучить в динамике гематологические и некоторые биохимические показатели сыворотки крови овец, обработанных препаратом.

4. Изучить действие фенэдекэ на антитоксическую функцию печени.

5. Изучить наличие оллергизируюцих свойств.

6. Изучить влияние фенэдекэ на Еетеринэрно-сэнптэрные показатели мяса овец и гистоструктуру органов и тканей после обработки указанным препаратом.

7. Изучить наличие эыбриотоксических, тератогенных свойс и мутагенной активности.

8. Изучить действие фенэдекэ на секреторную функцию желудка .

9. Изучить антгелышнтную активность фенэдекэ и опреде лить ого лечебные дозы.

10. Определить остаточные количества ДВ фенэдекэ в оргэ нэх и тканях овец и сроки его выделения.

Научная новнзна. Впервые получены -данные об энтгельшшт ной активности, острой и субхронической токсичности фенэдекэ установлено, что препарат не обладает эллергизируюцими свойст вами, мутагенной активностью, змбриотоксическии и теротоген ныы действием; изучено его распределение е органах и тканях и выделение из организма овец, а также дана оценка качества ба рзнины после обработки препаратом. Материалы исследований по фенадеку оформлены е виде заязки !№709458Д5(86ЮЗ) на изобретение и поданы ^"'рассмотрение ео ВНИИГПЗ.

Практическая ценность. По результатам исследований раз работоны: "Методика комиссионных испытаний фенэдекэ для лече ния и профилактики мониезкозэ ОЕец"(утверяденэ ГУВ Госэгронрс ме СССР 17 июля 1989 г.;, "Методика определения остаточных кс личестЕ фенэсала-2 (ДВ) фенадека в органах и тканях овец" (ут верхденв ГУБ Госэгропрома СССР 24 января 1939 г.), "Временное нЕСтавленпе по применению <-енадеиа при цестодозэх ОЕец в по

рядке широкого производственного опыта на 1990-1592 гг." (утверждено ГУЗ Госагропрона СССР 27 декабря 1989 г.), утверждены ТУ на фенадек ГУБ Госагропрона СССР 25 декабря 1989 г.

Апробация работы. Основные результаты научных исследований доложены:

1. На заседании Ученого совета ВГНКИ ветпрепаратов ( г. Москва, Т990 г. ).

2. Па заседании Ветфармсовета Госагропрона СССР ( г.Москва, 1990 г. ).

3. На научной конференции молодых ученых ВГНКИ ветпрепаратов ( г.Москва, 1990 г. ).

На ыеклабораггорноы совещании научных сотрудников ВГНКИ ветпреларатов г.Москва, 1990 г.).

Публикации. По материала« днесортаили опубликованы две печатные работы.

По результатам исследований на защиту выносятся следующие основные положения:

1. Токсикологическая характеристика фенадека.

2. Антгельнинтная активность препарата при мониезиозе

овей.

Объем и структура работ. Диссертация изложена на 156 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литераторы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, списка использованной литературы и приложений.

Работа содержит 22 таблицы, иллюстрирована 2 рисунками к 3 фотографиями. Список литературы включает 142 источника, в той числе 35 опубликованных в иностранных изданиях.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Материалы и методы исследований

Экспериментальная часть работы выполнена в 1988-1939 гг. в лаборатории контроля и стандартизации лекарственных средетл и кормовых дсбавок ВГНКИ, ОПХ "Ьанихино", овцеводческих хозяйствах Омской области.

В работе использовали различные антгелыгантныв препарат);: фенадек и в качестве контроля фенасал - 2 и феналидск.

ферддок - пылевидный порошок от светло-серого до зеленовато-серого цвета с легкий медикаментозный запахом. Препарат представляет собой композицию, состоящую из микронизированных фенасала-2 и декстрина.

При изучении физико-химических свойств фенадека основное внимание уделялось полному извлечению ДВ из препарата и его количественному и качественному определению, а также способности препарата образовывать суспензии.

При изучении параметров токсичности препарата в опытах использовались клинически здоровые животные, находившиеся в одинаковых условиях содержания и кормления.

Для изучения острой токсичности фенадека'использовали 520 белых мышей, 40 белых крыс. Белым мышам и крысам препарат вводили внутрижелудочно в виде суспензии. Наблюдение за подопытными зшвотньши вели в течение 7 суток после введения антгельминтика. Результаты опытов обработаны статистическим методом пробит-ана-лиза ( М.Л.Беленький, 1963 ).

Для выявления кумулятивных свойств препарата использовали метод 11 субхронической " токсичности. Коэффициент кумуляции вычисляли по формуле Ю.С.Кагана с соавт. ( 1964 ). Под опытом находилось 50 белых мышей. Метод предлоаен К,£.и1т 1961 ),

Количество эритроцитов в крови овец, обработанных фенадекоц, определяли на ФЭКе; лейкоциты подсчитывали в камере Горяева.

Определение гемоглобина крови прозодили гемоглос'ин-иианид-ным методом ( аиетонииангидрином ). Содержание общего о'елка в сыворотке крови подопытных животных определяли рефрактометрическим методом. Кровь у животных брали утром до их поения и кормления.

Активность щелочной ФосФатазы в сыворотке крови овеи определяли по методу Бодакского. Активность аскартатаминотрансферазы и алаяинащшотрансферазы определяли по унифицированному методу Рьйтмана-Френкеля ( 1956 ).

Влияние фенадека нг. антитоксическую функцию печени изучали на 144 белых мышах по методу Б.К.Розина ( 1964 ) с помощью гексеналового сна.

Опыты по выявлению аллергтлзируюиих свойств у фенадека проведены с помощью гкстаминного шока по методу М.Л. Гершано-

зич (1954) но 40 морских свинках и по уровню гистэминэ в кро-еи овец по K.M. Коренмэн (1970).

Пислеубойную Еетеринарно-сэнитарную экспертизу туи и внутренних органов овец, с целыо изучения влияния фенэдека на качество мяса, проводили соглэсно ГОСТ 7269-79 и 23392-78 на 6 животных (3 - опытных и 3 - контрольных).

Оценку эмбриогропного действия препарата проводили согласно Методическим указаниям по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию (1986). Всего в эксперименте использоеэно 30 крыс и исследовано 225 плодов.

Изучение нэличия у препарата мутагенных свойств проводили методом ена-телофазного анализа на 30 белых кркезх линии WlS-tax.

Влияние фенздекэ на секреторную функция изучали на трех телятах. Все животные имели фундэлыше фистулы. Основными показателями сычуяной сс реции являлись: количество содержимого, pH, количество обцей кислотности, свободной и связанной соляной кислоты, которые определяли согласно Методическим указаниям по лабораторным методам исследования нелудочного содеряимо-го у ннвотных в ветеринарии (1984). Активность пепсина определяли соглэсно Методам анализа пииеЕэрительных йерментов (Боровск, 1987).

Антгельшштную активность препарата изучэли в сравнении с фенасэлом-2 и фенэлидоном. В опытах использовали ягнят текущего годэ рождения в возрасте 7-8 месяцев и полуторэгодовэль... овец, инвэзировашшх конкозиями з естественных условиях. Препэ-раты вводили индигидуально перорально в виде 5^-й суспензии на годе и групповым способом с концентрированным кормом.

Эффективность учитывали путем гсльминтоскопии сЕехеполу-ченных фекалий и на основанни послеубойного гельминтологического Ескрытия киаечников от подопытпых и контрольных животных через одну-две недели после дегельминтизации. Гельминтов считали по снолексэм. Всего при изучении антгел^интной активности фенэдека, при личном участии автора, обработано 7683 голое овец.

Остаточные количества Фенэдека е органах и тканях оьсц определяли по методике, утЕсряденноП Г/В Госаггопром» (ТОР января 1989 г. Принцип метода: извлечен'/е препорзтз :.з объекта

исследования ацетоном с последующим опектрофотометрическим определением иыидной тзутомерной формы в экстракте при рН 8-9 и длине волны 395 нм. Для исследований использовали органы и ткз-ни, взятые от животных, убитых через 10, 20 и 30 дней после применения препарате. Всего под опытом находилось 8 овец.

Статистическую обработку результатов исследований проводили по методу Фишера-Стьюдента.

Влияние фенадена на органолептичаские и физико-химические показатели мяса овец изучали совместно с доцентом кафедры гет-санэкспертиэы ИВА В.М. Кондратенко. Мутагенную активность препарата определяли совместно с ы.н.с. ВПШ ветпрепаратов F. Н. Цветковой.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Физико-химические свойстеэ фенадеко

Результаты исследований показали, что полное извлечение ДВ из фепздекэ осуществляется 0,01 Н спиртовым раствором соляной кислоты с последующим отделением от нерзствориЕгаегося декстрина. Электростатические свойства и смачиваемость препарата находятся в прямой зависимости от содержания составных компонентов. Суспензии всех концентраций на холодной воде неустойчивы. При подогревании до +80°С -препарат образует с еодой стойкие суспензии 3/5 и 5% концентраций, Rf фенэсала-2 в подобранно? системе растворителей - хлороформ: ацетон : метанол : 2Ь% водный аммиак равна 0,3. Ультрафиолетовый и инфракрасный спектры фенадекэ определяются спектрами ДВ-фенасвлэ-2.

2.2.2. Острая токсичность фенадека

ЛД50 йенадека при Енутрикелудочном введении для белых мышей 17300 (I28I0 * 23360) ыг/кг, максимально переносимая доза (Г.ШД) - 5000 мг/кг. Согласно ГОСТ 12Л.007-76 данный препарат следует отнести к 1У классу опасности.

Для белых крыс ЛД50 установить не удалось при оральном введении. Все проверенные дозы препарата от 5000 мг/кг до 60РР( мг/кг не вызывали гибели кивотных.

2.2.3. Влияние фечздека из общегшшические

и биохимические показатели крови о?ец

Результаты гематологических исследований овец показали, что фенадек в дозах 100'мг/кг, а тэгс.че 6СО иг/кг не вызывал, по сравнению с физиологической нормой изменения содержания гемоглобина, количества 3j .троцитов и лейкоцитов в крови подопытных животных.

У нивотных, обработанных фенадеком, при изучении ферментной индукции отмечались определенные колебания активности щелочной фосфэтазн, зспэртатаминотронсферззы и аланннзминотрано-ферэзы, однако эти изменения были статистически недостоверны. Количество общего белка у подопытных овец, квк и у контрольных, находилось в пределах физиологической нормы.

2.2.4. Аллергизпруюцие свойство фенпдеко

Сенпдек, введенный морским свинкам перо-чльно в дозе 100 мг/кг, ну только не ускоряет, а дане предотвращает гибель животных от гистзминного иока через 3 часа на 60л. через 1,5 часа - на 4Pf. Реакция у контрольных и опытных нивотных на введение гистэмина была одинаковой: беспокойство, учащение дыхания, боковое положение, судороги, заканчивающиеся смертью.

При определении уровня гистэкинз в крови овец разница в показателях у подопытных и контрольных овец недостоверна,следовательно, фенадек не оказывает влияния на уровень донного медиатора. Результаты опытов указывают на отсутствие у фена-дека аллергизирующих свойств.

2.2.5. Кумулятивные свойства фенадекэ

3 процессе исследований падежа белых мышей не наблюдали доже нэ 20-Я день опыта от суммарной дозы фенадека, по периодом введения, равной 90,60 г/кг. Исходя из имеющихся у нас донных, а также из того, что ЛДСд в остром опыте равна 17,3 (12,BI t 23,36) г/кг, согласно классификации Л.И. Т.'едведя (1964), мо;хно предпологить, что фенадек относится к веществам со слабо выраженной кумуляцией - Ккуи > 5.

2.2.6. Влияние фенадека на антитоксическую Функцию печени

Опыты по ..зучению влияния фенадека не антитоксическую функцию печени показали, что продолжительность сна подопытных белых ыыаей, обработанных препаратом в дозах 100 иг/кг и 1000 мг/кг (10-кратной терапевтической), статистически достоверно отличалась от т&ковых в контроле через 1,5; 3 и 2к часа в сторону уменьшения. Таким образом, фенадек не обладает гепэтоток-сическим действием.

2.2.7. Ветеринэрно-санитарная экспертиза мяса и других продуктов убоя овец

При проведении ветеринарно-санитэрной экспертизы установлено, что органолептические, физико-химические и биохимические показатели мяса овец, обработанных фенэдеком и контрольных, имели количественные к качественные значения, соответствующие нормам доброкачественного ынсв здорогых дивотьых.

Микроскопия показала почти абсолютную стерильность продуктов убоя овец опытных и контрольной групп.

Гистологическое исследование показало, что однократная обработка животных указанным препаратом (в терапевтических концентрациях) ке вызывает тонсигенных изменений в структуре мышц и внутренних органов овец.

2.2.8. Изучение змбрпотоксических и тератогенных свойств фенадека

Е результате исследований установлено, что при перорэль-ном применении фенадек не оказывает эмбриотоксического действия: показатели пред- и постнмплантационной смертности, масса и размеры плодов, соотношение полов, полученных от беременных самок опытных групп, статистически достоверно не отличались от таковых е контрольной.

В опытах по изучению тератогенного действия препарата при внешнем осмотре у извлеченных из мзтки плодов видимых аномалий развития (уродств) не отмечено.

При изучении состояния внутренних органов плодов по методу (1965) аномалий развития внутренних органов ке установлено; Кроме того, у экбрионоЕ от животных, обработанных

фенадеком не установлено дефектов скелете.

Это свидетельствует о том, что данный препарат но вызывает нарушения процессов оссификоции. В дву " опытных группах, по сравнению с контрольной, не отмечено достоверных различий в количестве костей го всех отделах скелетов изученных плодов.

Представленный материал свидетельствует о том, чтс при пе-рорэльном применении фенаден э^бриотоксическиии и тератогенными свойствами не обладает.

2.2.9. Исследование мутагенной активности фенадека

В результате проведенных исследований установлено,что препарат в дозах 100 мг/кг и 600 иг/кг не влияет на мит.отический индекс клеток костного мозга бедро белых крыс. Для фенадека он составляет 1,920 i- 0,03^ и 1,970 * 0,05%, что соответствует средин:.', величинам физиологической нормы (1,65-2,7^), характерным для белых крыс, и не отличается от показателей у яивотних контрольной группы. Кроме того, в дозе 100 мг/кг данный препарат не влияет на уровень хромосомных аберраций клеток костного мозга на стадиях ана- и телофззы. В дозе 600 мг/кг препарат вызывает незначительное, статистически недостоверное, по сравнению с контролем, увеличение числа хромосомных аберраций. Исходя из этого, можно предположить, что з концентрациях, применяемых для лечения мониезиозэ овец, фенэдек мутагенной активностью не обладает.

2.2.10. Влияние фенадека ка секреторную функцию желудка

В результате проведенных исследований установлено, что в дозе 100 мг/кг препарат не изменяет показатели сычунной секреции; pH, общая кислотность, количество содержимого иелудка, свободная соляная кислота, связанная соляная кислота у подопытных животных не отличались от контрольных. Пру определении активности пепсина наблюдались незначительные колебания,что можно объяснить лабильностью метода. Таким образом, фенэдек не Елияет на секреторную функцию сычуга.

2.2.11. Остаточные количества фенасала-2 в органах и тканях овей, обработанных фенадеком

Б пробах от овен, убитых через 10 дней после введения препарата, содержание фекасала-2 варьировало от 0,00 до 7,54 икг/г. Наибольшее количество его было в печени ( 7,54+0,013 ыкг/г ), и отсутствовал препарат в легких ( 0,00 шсг/г ). Через 20 дней следа препарата были найдены в печени, шишах и почках, а через 30 дней он вообще не обнаружен в органах и тканях животных.

Приведенные данные свидетельствуют о той, что продолжительность выведения фенасала-2 из органов и тканей овен равна 20 суткам.

2.2 Л2. /штгелы'.интная активность фенадека

В результате исследований установлено, что фенадек вызывает 100% гибель мониезий в дозах 80 мг/кг при индивидуальном оральном введении и 160 мг/кг - при групповом методе дегельминтизации овей, в обоих случаях однократно.Через 8 часов начиналось активное выделение иестод клубками, при изучении которых находили сколоксы. Гельминтов обнаруживали в 1-2 пробах из 100 осмотренных в течение 6 часов, в последующем на третьи сутки - лишь единичные членики. Через иесть суток после дегель-кинтиэаиии произвольное выделение иестод и их фрагметов не было обнаружено. При послеубойном вскрытии кишечников им гельминтов, ни их фрагментов также не найдено.

ВЫВОДЫ

1. Фенадек - аятгехьшнтик с нестодонидныии свойствами на основе фенассла-2 и декстрина, получаемый путем диспергирования сухих всшеств методом иикровзрыва.

Препарат представляет собой порошок от светло-серого дс зеленовато-серого ивета, с водой прогретой до +80°С образует очень тонкук и стойкую суспензию. ;

2. ЛДэд фенадека при внутрикелудочнсм введении для белых шией составляет 17300 мг/кг, для белых крыс ЛД5д установить не удалось из-за его малой токсичности. Согласно ГОСГ 12.1. 007-76 препарат следуст отнести к ТУ классу опасности.

3. Фенадек обладает слабо вырахеншми кумулятивными свойствами ( коэффициент кумуляции> 5,2 ).

Фенадек в терапевтической и иести" ратной дозах не обладает аллергизируюцими свойствам:; не угнетает антитоксическую функцию печени; не изменяет гематологических показателей у овец, но снимает количеств общего белка в сыворотке крови, не влияет на активность аланинаминотрансферазы, аспартатанинотрэн-сферазы и щелочной фосфатазы.

5. В терапевтической дозе фенадек не оказывает отрицательного влияния на качество инса и не изменяет микроструктуру внутренних органов и шпи.

6. Б терапевтической и аестикратной дозах фенадек не обладает эибристокснческим, тератогенным и мутагенным действием.

7. Фенадек в терапеткческой дозе не влияет на секреторную функикю желудка.

8. Оспадек из организма овец практически выводится через 20 суток после обработки.

9. Сенсдек обладает выракеншми цсстодоиидными свойстго?.га. Эффективная доза при оральном, индивидуальном введении 80 мг/кг, при групповой дегельминтизации 160 иг/кг массы тела.

Предложения для практики

На основании результатов выполненных исследований разработаны:

1. Методика комиссионные испытаний фенадека для лечения и профилактики ыониезиозон овей ( утверадена ГУВ Госагропроиа СССР от 17.07.89 Ш5 ).

2. Методика определения остаточных количеств фенасала-2

( ДВ фенадека ) в органах и т..анях овей ( утверждена ГУВ Госагропроиа 24.01.89 г. »32-3 ).

3. Временное наставление по изменению фенадека при иестс-

дозах овец з порядке широкого производственного опыта ка 1990-1992 гг. ( утверждено ГУВ Госагропроиа СССР 27.12.1989 г.),

4. Утверждены ТУ на фенадек ГУВ Госагропроиа СССР 25.12. 1989 г. №6-00-0205603-10-89 ).

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ опубликованных по материалам диссертации

1. Плотинская Л.В., Надыкто М.В. Изучение токсичности препарата с нестодопидшми свойствами // Р1 Ветеринария.-1990.-К?7.-С.9.

2. Плотенская Л.В., Цветкова К.Н. Изучение эмбркотоксических, тератогенных свойств и мутагенной активности нового препарата с иестодоиидныы! свойствами // РЖ Ветеринария.-№7.-С.9.

(МШого