Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.06) на тему:Усовершенствованные методы индикации санитарно-показательных микроорганизмов в продуктах животного происхождения и на поверхностях технологического оборудования

111111111111111

| 003463985

На правах рукописи

ЮДИНА АННА АЛЕКСЕЕВНА

УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫЕ МЕТОДЫ ИНДИКАЦИИ САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ В

ПРОДУКТАХ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ И НА ПОВЕРХНОСТЯХ ТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО ОБОРУДОВАНИЯ

16.00.06 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарнан экспертиза.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

1 2 ПАР 20СЭ

Москва-2009 г.

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии). Научный руководитель:

Шурдуба Николай Александрович кандидат ветеринарных наук, доцент (ГНУ ВНИИВСГЭ)

Официальные оппоненты: Светличкин Вячеслав Владимирович

доктор биологических наук, профессор (ГНУ ВНИИВГСЭ)

Бабурина Мария Ивановна кандидат биологических наук (ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова)

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии» (ГОУ ВПО МГУПБ)

Защита состоится «¿7/^» 2009 г. в часов на

заседании диссертационного совета Д 006.008.01 при ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (123022, Москва, Звенигородское шоссе, д. 5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного научного учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Россельхозакадемии.

Автореферат разослан «

2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологичеких наук \ У' '1 ~ Павлова Н.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В современных средствах массовой информации, научной литературе, деятельности правительственных организаций и опросах общественного мнения выражена повышенная озабоченность качеством и безопасностью потребляемых населением пищевых продуктов животного происхождения.

Часто факторами передачи многих инфекционных заболеваний являются продукты животного происхождения, которые содержат микроорганизмы, являющиеся возбудителями зоонозных болезней [Куликовский А.В., 2004, Черкасский Б.Л., 1997, Шевелёва С.А., 2003].

В соответствии с действующими требованиями к качеству и безопасности сырья животного происхождения, полуфабрикатов и готовой продукции на предприятии необходимо проводить санитарно-микробиологический контроль на всех критических контрольных точках технологического процесса производства.

Одним из важных путей существенного улучшения качества и безопасности продуктов животного происхождения, реализуемых на российском рынке, является применение высокоэффективных и недорогих средств и методов оперативного санитарно-микробиологического мониторинга. Традиционные методы качественного и количественного определения санитарно-показательных микроорганизмов трудоёмки, малопроизводительны и не метут быть использованы для оперативного контроля, особенно, на малых предприятиях, где отсутствуют аккредитованные на техническую компетентность бактериологические лаборатории. Отсюда возникает необходимость изыскания более простых, объективных и высокопроизводительных средств и методов санитарно-микробиологического контроля сырья, продуктов животного происхождения и поверхностей технологического оборудования.

В последние годы ведущие производители микробиологических питательных сред предлагают более экономичные и простые в использовании питательные среды нового поколения.

Фирма 11-Вюр11агт (Германия) предложила стерильные, покрытые специальными питательными средами, готовые к использованию, микробиологические тест-подложки серии 1Ш)А®СОиМТ. Эта серия рекомендуется для упрощенного проведения микробиологических исследований, что может быть применено для проведения санитарно-производственного контроля на предприятиях, производящих продукты животного происхождения по системе качества, основанной на анализе рисков и определения контрольных критических точек.

Цель н задачи исследований. Целью нашей работы являлось усовершенствование методов индикации санитарно-показательных микроорганизмов в продуктах животного происхождения и на поверхностях технологического оборудования.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить возможность практического использования микробиологических тест-подложек серии . RIDA®COUNT для оперативного санитарно-микробиологического контроля поверхностей различных технологических объектов и продуктов животного происхождения.

2. Установить групповую, родовую и видовую селективность микробиологических тест-подложек при выделении индикаторных санитарно-показательных бактерий из естественно и искусственно контаминированных мяса, молока и продуктов их переработки.

3. Определить уровень чувствительности метода микробиологических тест- подложек серии RIDA®COUNT, используемых для определения КМАФАнМ, Б1ТШ, Staureus и сальмонелл на поверхностях оборудования и в мясомолочных продуктах.

4. Провести сравнительную оценку эффективности использования микробиологических тест-подложек и стандартных плотных питательных сред для санитарно-микробиологического контроля качества проведения профилактической санации на предприятиях, перерабатывающих мясное и молочное сырьё.

5. Разработать методику использования микробиологических тест-подложек серии RIDA®COUNT для ускоренного контроля КМАФАнМ, БГКП, Salmonella и St. aureus в мясе, молоке, продуктах их переработки и на поверхностях технологического оборудования. Научная новизна.

На основании проведённых исследований впервые разработана ускоренная методика использования тест-подложек серии RIDA®COUNT для контроля санитарно-показательных микроорганизмов в продуктах животного происхождения и на поверхностях технологического оборудования.

Установлена родовая, групповая и видовая специфичность и высокая чувствительность микробиологических тест-подложек, которые по своим дифференциально-диагностическим свойствам не уступали стандартным специальным средам, но оказались более приемлемыми для оперативного санитарного контроля на предприятиях, не имеющих бактериологических лабораторий.

Практическая ценность работы.

На основании результатов исследований разработаны «Методические рекомендации по ускоренной санитарно-микробиологической индикации общего микробного числа (КМАФАнМ), E.coli, колиформ (БГКП), сальмонелл, стафилококков (S. aureus), дрожжей и плесеней в продуктах животного происхождения, кормах и объектах внешней среды с применением подложек серии Rida® Count» (утверждены Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии 12.10.2005 г.); «Методические указания по ускоренной санитарно-микробиологической индикации общего

микробного числа (КМАФАнМ), E.coli, колиформ (БГКП), сальмонелл, стафилококков (S. aureus), дрожжей и плесеней в продуктах животного происхождения, кормах и объектах внешней среды с применением подложек серии Rida® Count» (утверждены Федеральным агентством по сельскому хозяйству МСХ РФ 03.10.05 г. за №5-1-14/973).

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены

на:

- 5-ой Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (Москва, 2004 г);

- VIII Всероссийском конгрессе «Оптимальное питание - здоровье нации», Москва, 2005

- Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарской НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар, 2006 г);

- Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА «Актуальные вопросы аграрной науки и образования» (Ульяновск, 2008);

- VII Международной научной конференции студентов и молодых учёных «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2008);

- межлабораторном совещании ВНИИВСГЭ (2008 г).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных статьей, в том числе одна в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 141 стр. машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 164 источника (63 отечественных и 101 зарубежных авторов). Работа иллюстрирована 26 таблицами и 7 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Работа осуществлялась в период 2003-2008 гг в отделе технического регулирования, стандартизации и сертификации и в лаборатории санитарии молока Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии.

Объектом исследования служили мясо, молоко, различные продукты животного происхождения, а также смывы с поверхностей технологического оборудования мясомолочных предприятий.

Образцы сырья, продуктов животного происхождения и смывы отбирали на следующих предприятиях Московской области: ООО «Алгер» (г. Егорьевск), на убойном пункте совхоза «Озерецкий» Орехово-Зуевского

района, на молочной ферме ОПХ Московской сельскохозяйственной академии им. К.Л. Тимирязева, а также на рынках и в магазинах г.Москвы.

Всего в процессе работы было проведено 136 опытов, исследовано 258 различных образцов продуктов животного происхождения и 250 производственных проб смывов с поверхностей оборудования и ограждающих конструкций (пол, стены).

В работе использовали 36 штаммов различных тест-микроорганизмов (энтеротобактерии, стафилококки, бациллы) из коллекции лаборатории санитарии молока и лаборатории санитарной микробиологии ВНИИВСГЭ.

Микробиологические исследования проводили по ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов, ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов, ГОСТ 28560-90 Продукты пищевые. Метод выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia, ГОСТ 30518-97/ГОСТ Р 50474-93 Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий), ГОСТ 30519-97/ГОСТ Р50480-93 Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella, ГОСТ 30726-2001 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий вида Escherichia, ГОСТ 9225-84 Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа, ГОСТ 30347-97 Молоко и молочные продукты. Методы определения Staphylococcus aureus.

В работе использовали следующие микробиологические тест-подложки серии RIDA®COUNT: RIDA® COUNT Total, RIDA®COUNT Coliform, RIDA®COUNT Salmonella, RIDA®COUNT Staph. aureus (производство R-Biopharm Roñe Ltd, Германия, предоставленные ООО «Стайлаб»),

Статистическую обработку полученных данных, построение необходимых графиков и диаграмм проводили с использованием компьютерной программы Excel.

Результаты собственных исследований 1. Исследование степени селективности и чувствительности тест-подложек серии RIDA®COUNT , используемых для идентификации санитарно-показательных микроорганизмов.

Одной из важных характеристик выпускаемых специальных микробиологических тест-подложек является их селективность и чувствительность (степень высеваемости) к определяемым группам микроорганизмов. Нами были проведены испытания степени селективности и чувствительности тест-подложек серии RIDA®COUNT в сравнении с традиционными методами посева на обычные и специальные агаровые среды (МПА. Среда КМАФАнМ, Агар Эндо и др.).

Результаты сравнительных испытаний тест-подложек RIDA®COUNT Total при росте тест-культур из 8 родов микроорганизмов в дозе по 80-240 клеток в 1 мл представлены на рис 1. Анализ полученных результатов

позволил установить, что на тест-подложках RIDA® COUNT Total растут все испытанные нами группы микроорганизмов, которые определяются как небольшие колонии красного цвета одинаковой формы. При сравнении резуьтатов общего количества выросших колоний на различных стандартных плотных средах и тест-подложках коэффициент корреляции составил для МПА R=0,89, для среды КМАФАнМ R=0,97.

Степень селективности тест-подложек RIDA®COUNT Coliform изучали на 26 различных группах микроорганизмов в сравнении с посевом на МПА, агар Эндо и Левина. Результаты проведённых исследований представлены в таблице 1. Из них видно, что на тест-подложках RIDA®COUNT Coliform хорошо растут все культуры, относящиеся к БГКП. В то же время было отмечено отсутствие роста морганелл, йерсиний, сальмонелл, бацилл и стафилококков, которые не относятся к колиформным бактериям. Это свидетельствует о высокой селективности тест-подложек RIDA®COUNT Coliform. Но при этом в очень небольшом ряде случаев (8%) был зафиксирован рост микроорганизмов рода Proteus, имеющих заметные отличия в цвете и форме колоний. Мы установили идентифицирующие признаки определяемых колиформных микроорганизмов, растущих на тест-подложках серии R1DA®C0UNT Coliform по цвету и форме колоний (таблица 7).

Рис 1 .Рост различных видов микроорганизмов на тест-подложке RIDA® COUNT Total в сравнении с ростом на МПА и среде КМАФАнМ.

Ш g

я

о о

§

И Среда МПА □ Среда КМАФАнМ S Подложка Rida ® Count Total

Таблица 1. Результаты селективного роста колиформных бактерий на тест- подложках КГОА®С01ЖГ СоИ&>гт и стандартных питательных средах

№ Тест-культура микроорганизмов Наличие роста на питательной среде, КОЕ/мл

МПА (контроль) Агар Эндо Среда Левина RIDA®COUNT Coliform

1 E.coli Ml7 + + + +

2 E.coli 987 Р + + + +

3 E.coli 0139 ВГНКИ + + + +

4 Morganella morganii 35/84 + + + —

5 Morganella morganii 36 Кал + + + —

6 Morganella morganii 48 045 + + + —

7 Citrobacter frendii 3/85 + + + +

8 Citrobacter frendii №1 Ульян + + + +

9 Citrobacter frendii №7 Ульян + + + +

10 Klebsiella pneumonial K-40 + + + +

11 Klebsiella pneumonial K-55 + + + +

12 Yersinia enterocolitica 03 № 188 + + + —

13 Yersinia enterocolitica Ряз + + + —

14 Yersinia enterocolitica 09 Xs201 + + + —

15 Enterobacter aerogenes №3 + + + +

16 Proteus vulgaris «ЗП» + + + —1+

17 Proteus vulgaris Кузн. + 4- + —/+

18 Proteus mirabilis №14 «ЗП» + + + —/+

19 Proteus mirabilis 94/98 + + + —/+

20 Serratia marcescens M-99 + + + +

21 Salmonella enteritidis ЦВЛ + — — —

22 Salmonella dublin 42 + — — —

23 Staphylococcus aureus P209 + — — —

25 Staphylococcus aureus M + — — —

26 Bac.subtilis JP-5832 + — — —

Примечание: «—» - отсутствие роста; «+» - есть рост; «—/+» - иногда присутствовал рост, но в меньшем количестве по сравнению со стандартными средами.

Бактерии группы протея на тест-подложках ГШа®Соип1 СоНАэгт имели крупные, расплывчатые колонии светло-голубого, желтоватого или белого цвета, тогда как колонии БГКП — синий или сине-зелёный цвет. Таким образом, при учёте

результатов количества БГКП при использовании тест-подложек ШБА®СОиЫТ СоНАэгт следует подсчитывать только колонии синего или сине-зелёного цвета.

Для определения коэффициента корреляции между высеваемостыо БГКП на тест-подложки 11ЮА®С01МГ СоНГопп и МПА высевали по 1 мл разведения 18-часовых колиформенных культур, содержащих около 100 кл/мл. Результаты проведённых исследований представлены на рис 2. Коэффициент корреляции между уровнем роста различных БГКП на тест-подложках 1ШЭА®С01ЖГ СоНГогш в сравнении со стандартным посевом на МПА составлял 0,97. Полученные результату свидетельствуют о том, что используемые тест-подложки практически не замедляют рост и развитие БГКП.

Рис 2. Результаты сравнительного изучения степени высеваемости БГКП на тест-подложках 1ШЗА®С01ЖТ СоМогт и МПА.

250-1

О рост на тест-подложках RJDA& COUNT Coliform ЕЗ рост на МПА

Различные представители БГКП

Нами также проведены сравнительные испытания степени селективности тест-подложек RIDA®COUNT Salmonella в сравнении с традиционными агаровыми дифференциально-диагностическими средами, используемыми при выделении сальмонелл. Полученные результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2. Результаты селективного роста различных микроорганизмов на тест-подложках RIDA^COUNT Salmonella и специальных агаровых средах

№ Тест-культура микроорганизмов Наличие роста на питательных средах

МПА (контроль) Агар Эндо Агар Плоскирева RIDA® COUNT Salmonella

1 E.coli Ml 7 + + ± —

2 E.coli 987 Р + + ± —

3 E.coli 0139 ВГНКИ + + ± —

4 Morganella morganii 35/84 + + + —

5 Morganella morganii 48 045 + + + —

6 Citrobacter frendii 3/85 + + + +

7 Citrobacter frendii №1 Ульян + + + +

8 Citrobacter frendii №7 Ульян + + + +

9 Klebsiella pneumonial K-40 + ± —

10 Yersinia enterocolitica 03 № 188 + + ± —

11 Enterobacter aerogenus №3 + + ± —

12 Proteus vulgaris «ЗП» + + + +

13 Proteus vulgaris Кузн. + + + +

14 Proteus mirabilis №14 «ЗП» + + + +■

15 Proteus mirabilis 94/98 + + + +

16 Serratia marcescens M-99 + + ± —

17 Salmonella enteritidis ЦВЛ + + + +

18 Salmonella anatum 33/36 + + 4 +

19 Salmonella dublin 42 + + + +

20 Staphylococcus aureus P209 + — — —

21 Staphylococcus aureus M + — — —

22 Bac.subtilis JP-5832 + — — —

Примечание: «—» - отсутствие роста; «+» - есть рост, «±» - слабый рост

Анализ приведенных в таблице 2 результатов исследований позволил установить, что на исследуемых тест- подложках помимо сальмонелл растут еще и представители энтеробактерий родов Proteus и Citrobacter. При этом было отмечено, что сальмонеллы представлены мелкими черными колониями до 1 мм в диаметре. Представители рода Citrobacter росли на тест-подложках R1DA®C0UNT Salmonella в виде бледных, почти бесцветных колоний. Протей формировал на этих тест-подложках большие, расплывчатые тёмные колонии R-формы.

Таким образом, при учёте результатов роста микроорганизмов из рода Salmonella на тест-подложках RIDA®COUNT Salmonella следует учитывать только количество мелких черных колоний до 1 мм в диаметре, соответствующих росту Salmonella spp.

Следующим этапом нашей работы стало сравнительное изучение степени высеваемости сальмонелл на стандартных специальных средах и тест-подложках RTOA®COUNT Salmonella. Для этого на тест-подложку

RIDA® COUNT Salmonella и другие питательные среды мы высевали по 1 мл разведения 18-часовых культур, содержащего около 3 О2 КОЕ/ мл Salmonella enteritidis, Salmonella anatum, Salmonella dublin. Полученные данные представлены на рис 3. Коэффициент корреляции при сравнении степени высеваемости сальмонелл на тест-подложках RIDA®COUNT Salmonella с ростом на висмут-сульфит агаре составил 0,94, а в сравнении с другими средами в среднем 0,91.

Рис 3.Результаты определения степени высеваемости бактерий рода Salmonella на различных плотных специальных средах в сравнении с тест-подложками RIDA®COUNT Salmonella

400

Salmonella enteritidis Salmonella anatum Salmonella dublin Ш RIDA® COUNT □ Висмут-сульфит □ Среда Плос-

Salmonella агар кирева

□ Среда Эндо 0 Среда Левина

Затем мы провели исследования степени селективности тест-подложек RIDA®COUNT Staph, aureus в сравнении с специальными солевыми средами для выделения золотистого стафилококка. Результаты приведённых исследований представлены в таблице 3.Анализ результатов, приведённых в таблице 3, позволил установить высокую селективность тест-подложек RIDA®COUNT Staph, aureus. Результаты на тест-подложках полностью соответствовали результатам, полученным на средах Байрд-Паркера и желточно-солевом агаре. В то же время нами было отмечено, что на применяемых тест-подложках, помимо золотистого стафилококка, колонизируются еще и Staph, intermedins и Staph, epidermidis. Колонии золотистого стафилококка имели сине-зеленое окрашивание, так же как Staph, epidermidis, но при этом отличались размерами. У Staph, aureus колонии мелкие, круглые, диаметром 1 мм, а у Staph, epidermidis более

крупные, диаметром 2 мм. Колонии Staph, intermedins совсем мелкие и бледно-окрашенные, светло-голубого оттенка.

Таблица 3. Результаты селективного роста различных микроорганизмов на тест-подложках RIDA® COUNT Staph, aureus и специальных агаровых питательных средах

№ Тест-культура микроорганизмов Наличие роста на питательной среде

RIDA® COUNT Staph, aureus Байрд-Паркер агар Желточно-солевый агар

1 E.coli Ml 7 — — —

2 Morganella morganii 35/84 — — —

3 Citrobacter frendii 3/85 — — —

4 Klebsiella pneumonial K-40 — — —

5 Proteus vulgaris «ЗП» — — —

6 Proteus mirabilis №14 «ЗП» — — —

7 Salmonella dublin 42 — — —

8 Staphylococcus aureus P209 + + +

9 Staphylococcus aureus M + + +

10 Staphylococcus aureus (полевой штамм) + + +

11 Staphylococcus epidermidis 37/62 + + +

12 Staphylococcus intermedius S-4 + + +

13 Bac.subtilis JP-5832 — — —

Примечание: «—» - отсутствие роста; «+» - есть рост.

Результаты проведённых исследований по сравнительному изучению степени высеваемости 3 штаммов золотистого стафилококка на тест-подложках RIDA®COUNT Staph, представлены на рис 4. Полученные данные свидетельствуют о том, что степень высеваемости золотистого стафилококка практически такая же, как на среде Байрд-Паркера и желточно-солевом агаре. Коэффициент корреляции при этом был более 0,9.

Нами был отмечен ряд преимуществ при работе с серией тест-подложек RIDA®COUNT. Тест-подложки всегда стерильны и готовы к работе. На поверхность тест-подложки серии RIDA®COUNT высевается полноценный объем пробы или разведения в 1 мл, а не 0,1-0,2 мл, как при посеве на подсушенную поверхность классических плотных сред. Это повышает статистическую достоверность получаемых данных и позволяет быстро и экономически более выгодно, без использования стерильных питательных сред и чашек Петри проводить санитарно-микробиологические исследования.

Рис 4. Результаты определения степени высеваемости различных штаммов золотистого стафилококка на тест-подложках ШВА®С01Л\ГТ 81арЬ.аигеиз и других специальных средах

200 180 160 140 120 100 80 60 40 20

Ы тест-подложка RIDA® COUNT Staph, aureus О Байрд-Паркер 0 ЖС А

Staphylococcus aureus М Staphylococcus aureus P209 Staphylococcus aureus (полевой штамм)

2. Разработка метода использования тест-подложек серии

RIDA®COUNT для определения санитарно-гигиенического состояния поверхностей технологического оборудования перерабатывающих

предприятий.

В работе использовали следующие виды подложек: RlDA®COUNT Total, RIDA®COUNT Coliform, RIDA®COUNT Staph, aureus. Параллельно те же группы микроорганизмов определяли стандартными методами и соответствующими питательными средами. В ходе исследований санитарно-гигиенического состояния производственных поверхностей с помощью подложек серии RIDA® COUNT были исследованы несколько вариантов смывной жидкости. Объектом исследования служила стена из плитки метлахской в мясосырьевом цехе предприятия по убою скота. Был выбран участок, имеющий зрительно однородное загрязнение. В качестве сравниваемых смывных жидкостей использовали следующие варианты однокомпонентных и многокомпонентных составов:

1. Физиологический раствор;

2. 0,5%-ный раствор пептонной воды;

3. Смесь №1: 8,5 г хлорида натрия, 1,0 г пептона, 0,1 г агар-агара и до 1000 мл дистиллированной воды.

4. Смесь №2: 5,0г хлорида натрия, 10,0 г пептона, 0,3 г безводного КН2РО4, 0,6 г безводного NaH2P04, 0,6-0,8 г агар-агара и до 1000 мя дистиллированной воды, рН 7,0-7,2 (Ленченко У.М. и Довбыш B.C., 2002).

Анализ полученных результатов, представленных на рис. 5, позволил установить, что использование составов № 1 и 2 для смыва позволяет получить более высокий уровень высеваемости санитарно-показательных микроорганизмов по сравнению с однокомпонентными вариантами. Наличие пептона в данных смесях стабилизирует чувствительные к механическим повреждениям бактерии, наличие хлористого натрия нормализует осмотическое давление на клетки, фосфаты благодаря своим буферным свойствам также способствует уменьшению рН среды и осмотического давления. Так, высеваемость КМАФАнМ на агаровой среде по сравнению с контролем увеличивалась в случае использования смеси №1 и 2 на 31,2 и 34,3% соответственно. При этом в случае применения тест-подложек серии RIDA*COUNT Total высеваемость увеличивалась в среднем на 23,9%, на тест-подложках RIDA®COUNTColiform это увеличение составило 13,4%. В то же время использование смесей №1 и 2 с посевом на тест-подложки RIDA®COUNT Staph, aureus и агар Байрд-Паркера позволило увеличить высеваемость микроорганизмов на 25,0-41,2 %. Полученные результаты представлены на рис 5, 6 и 7.

Рис 5. Количество выросшего общего числа бактерий в зависимости от типа смывной жидкости при посеве на среду КМАФАнМ и тест-подложки

RIDA®COUNT Total.

3000000 -|

с; S

Ш 2500000 H О

'S s a.

и

ф y

s с о it

2000000

я 1500000-ю

1000000

500000

ш

Физ. р-р

1

f

Р-р пептона

Смесь 1

□

RIDA® COUNT Total

КМАФАнМ

Смесь 2

Рис. 6. Количество выросших колиформиых бактерий в зависимости от типа смывной жидкости при посеве на среду Эндо и тест-подложки RIDA®COUNTColi form

S 7000

Q бооо- I..п.- ^wu RIDA® COUNT

_____. _Coliform

I 50001 И— г^Л И ШЛПэндо

4000

ю зооо о

g 2000

§ 0

^ Физ. р-р Р-р пептона Смесь 1 Смесь 2

Рис 7. Количество выросших бактерий Staph, aureus в зависимости от типа смывной жидкости при посеве на Байрд-Паркера агар и тест-подложки RIDA®COUNT Staph, aureus

I 200 -

о Физ. р-р Р-р пептона Смесь 1 Смесь 2

Следующим этапом нашей работы стало сравнительное изучение различных способов отбора проб с поверхностей оборудования и ограждающих конструкций мясосырьевого цеха. Отбор проб проводили до и после проведения мойки и дезинфекции исследуемых объектов. В качестве стандартного метода использовали смыв ватным тампоном, смоченным физиологическим раствором. Смывы с использованием тест-подложек ЛЮА®С01ЖТ были исследованы в нескольких вариантах:

Нанесение 1 мл смывной жидкости на тест-подложку, отобранной по стандартному методу с использованием тампона;

1. «Влажный» способ отбора - непосредственно протиранием исследуемой поверхности тест-подложкой, на которую предварительно нанесли 1 мл физ.р-ра;

2. «Сухой» способ отбора - протирание тест-подложкой исследуемой поверхности с дальнейшим нанесением 1 мл физ. р.-ра.

Полученные данные, на примере результатов тест-подложки RIDA®COUNT Total, представлены в таблице 4. Анализ полученных данных при исследовании смывов с технологических поверхностей мясоперерабатывающего предприятия, отобранных различными способами, позволил установить, что отбор проб с помощью предварительно увлажненных тест-подложек более эффективен по сравнению с отбором "сухим" способом и имеет высокую корреляцию со стандартным методом смывов с помощью ватного тампона. Коэффициент корреляции при сравнении стандартного метода отбора при посеве на чашки Петри со средой КМАФАнМ и «сухим» способом при посеве на тест-подложки RIDA®COUNT Total составил 0,99. К сожалению, нами было установлено, что «влажный» способ отбора смыва с помощью тест подложек не подходит для поверхностей, имеющих изначально высокую бактериальную контаминацию из-за сливного роста колоний. На основании статистической обработки установлено, что у образцов смывов после санитарно-гигиенических мероприятий коэффициент корреляции при сравнении стандартного и «влажного» способов отбора составил 0,89, а при сравнении с «сухим» способом всего 0,3.

При изучении различных объектов мясоперерабатывающего предприятия коэффициент корреляции при сравнении стандартного метода отбора при посеве на чашки Петри со средой Эндо и при посеве на тест-подложки RIDA®COUNT БГКП составил 0,99 , при сравнении стандартного метода отбора с «влажным» - также 0,99, а вот при сравнении с «сухим» 0,77.

Коэффициент корреляции при сравнении стандартного метода отбора при посеве на чашки Петри со средой Байрд-Паркера и при посеве на тест-подложки RIDA®COUNT Staureus составил 0,99, при сравнении стандартного метода отбора с «влажным» - также 0,99, а вот при сравнении с «сухим» 0,45.

При дальнейших исследованиях по изучению возможности использования тест-подложек серии RIDA®COUNT для ускоренного обнаружения санитарно-показательных микроорганизмов на объектах молочно- товарной фермы «сухой» способ отбора ввиду его низкой эффективности проводить не стали. В этой связи мы сравнивали только стандартный метод смывов с «влажным» способом отбора проб с помощью тест-подложек.

Анализ результатов по выявлению КМАФАнМ, БГКП, Staureus в смывах с различных объектов молочной фермы в зависимости от метода отбора проб позволил установить, что «влажный» метод отбора на тест-подложках серии RIDA®COUNT по эффективности идентичен стандартным методам обнаружения этих микроорганизмов. Коэффициент корреляции при этом был в диапазоне 0,97-0,98.

Тест-подложки серии КША®С01ЖТ с успехом могут быть использованы, особенно на малых фермерских хозяйствах, где необходимо контролировать эффективность мойки и дезинфекции и где отсутствует микробиологическая лаборатория. При этом было отмечено, что на тест-подложках серии КГОА®СОиМТ 51ар11.аигсий учитываются не только золотистый стафилококк, но и другие стафилококки, которые имеют отличия по форме, размеру и цвету колоний. Это свойство тест-подложек Ш13АЕСОиГЧТ 81арЬ.аигсия позволяет их рекомендовать для контроля качества дезинфекции, так как согласно действующим «Правилам проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора» (2002), после проведения дезинфекции не должны выделяться любые стафилококки.

Таким образом, тест-подложки серии ЫГОА®СОиМТ могут применяться для контроля качества санитарно - гигиенических мероприятий на предприятиях, перерабатывающих сырьё животного происхождения.

3. Разработка ускоренного метода определения уровня санитарно-показатсльаых микроорганизмов с помощью тест-подложек серии ШЙА®СОи(ЧТ в продуктах животного происхождения.

Нами было прведено скриннинговое исследование различных продуктов животного происхождения с помощью применения тест-подложек серии КГОА*С01ЛЧТ для определения КМАФАнМ, колиформ и сальмонелл. В качестве контролей использовали соответствующие стандартные среды.

Полученные данные, на примере мясного сырья, приведены в таблице 5, из которой видно, что уровень микробной контаминации, определяемой на применяемых тест-подложках серии ЫГОА®СОиМТ и стандартных средах практически идентичен.

Поскольку при исследовании продуктов посторонней микрофлоры в виде БГКП, сальмоннел и стафилококков нами не было обнаружено, мы решили провести опыты с искусственной микробной контаминацией. Для этого в часть исследуемых образцов вносили суточные культуры Е.соП М17, 81аигеиз М, Ба^.егЛегШсШ из расчета 2х102-4х103 клеток на 1 г продукта. Полученные данные, на примере нескольких искусственно обсеменённых образцов (молоко и масло), представлены в таблице 6.

Таким образом, видно, что использование тест-подложек серии НГОА®СОиМТ позволяет получать практически такие же результаты, что и в случаях применения стандартных питательных сред. Коэффициент корреляции во всех случаях был 0,95. При этом получение результатов при использовании серии тест-подложек КША®СОЦМТ происходит в более короткие сроки, так как сокращается время на приготовление и стерилизацию питательных сред и чашек Петри.

Таблица 4. Результаты сравнительного изучения - влияния разных способов отбора п] подложек RIDA® COUNT Total на уровень КМАФАнМ (КОЕ/10см2), выделенных с поверхн

оборудования мясоперерабатывающего цеха.

№ Объект исследований Стандартный метод отбора «Влажный» метод а

Среда КМАФАнМ Тест-подложка RTOA® С<

До санации После санации До санации После санации До санации После санац]

1 Глазурованная плитка (стена разделочного цеха) (5,3±0,9) х103 (1,2±0,4) хЮ2 (5,1±0,4) хЮ3 (1,18±0,20) хЮ3 Сплошной рост (1Д0± хЮ2

2 Доска разделочная (3,7±0,4) х103 Не обн. (4,0±0,3) хЮ3 Не обн. Сплошной рост Не об

3 Тележка «китайка» (4,0±0,8) хЮ3 (0,9±0,1) хЮ2 (4,2±0,6) хЮ3 (1,06±0,07) хЮ2 Сплошной рост 0,21± хЮ2

4 Разделочный стол (2,8±0,4) хЮ4 Не обя. (2,91±0,32) хЮ4 Не обн. Сплошной рост Не об

5 Бункер для фарша в пельменном автомате (4,3±0,7) хЮ4 (1,1 ±0,2) хЮ2 (4,2±0,2) хЮ4 (1ДЗ±0,24) хЮ2 Сплошной рост (1,14± хЮ2

6 Платформа весов для фасованного мяса (2,4±0,7) хЮ2 Не обн. (2,37±0,И) хЮ2 Не обн. (2,2±0,1) хЮ2 Не об

7 Лоток (3,8±0Д) хЮ2 Не обн. (4,0±0,2) хЮ2 Не обн. Сплошной рост • Не об

8 Метлахская плитка (пол) (5,9±1,0) хЮ3 (0,9±0,4) хЮ2 (6,2±0,8) хЮ3 (1,00±0,05) хЮ2 Сплошной рост (1,06± хЮ2

Таблица 5. Результаты сравнительного определения санитарно-показательных микроорганизм _ помощью тест-подложек ШРА^СОПЫТ и селективных сред_

Количество микроорганизмов КОЕ/г продукта на селективных сре

№ Объект КМАФАнМ БГКГТ

исследования Агар КМАФАнМ КГОА®С01ЖГ Тога! Агар Эндо 11ГОА®С01ЖТ СоНбэгт ВР су

1 Говядина охлаждённая в полутушах (7,8±1,1)х102 (8,Ш,2)х102 Не обн. Не обн. Н

2 Свинина охлаждённая в полутушах (2,1±0,5)х103 (З,9±0,4)х103 Не обн. Не обн. Н

3 Баранина охлажденная в отрубах (1,4±0,3)х103 (1,6±0,4)х103 Не обн. Не обн. Н

4 Свинина замороженная в полутушах (2,7±0,5)х104 (3,0±0,5)х104 (6,2±1,1)х10' (бДЫ.ОхЮ1 Н

5 Говядина замороженная в отрубах (7,1±0,9)х104 (7,5±0,9)х104 (7,7±1,4)х101 (8,0±1,5)х10' Н

6 Баранина замороженная в отрубах (3,5±0,7)х104 (3,1±0,6)х104 (б.&ьМЭхЮ1 (6,3±1,2)х10' Н

7 Блоки мясные замороженные (4,1±0,8)х105 (4,4±0,8)х105 (3,6±0,4)х102 (3,1±0,5)х102 н

8 Мясная масса замороженная (6,6±1,2)х106 (6,2±1,2)х106 (7,1±0,8)х103 (7,5±0;8)х103 н

Таблица 6. Результаты сравнительного определения санитарно-показательных микро< контаминированных образцах молочных продуктов с помощью тест-подложек ШРА^С

1 Количество микроорганизмов КОЕ/г продукта на селективных с]

№ 1 1 Объект КМАФАнМ БГКП Б^аигеи:

исследования Агар КМАФАнМ ЯГОА®СОШТ ТоЫ Агар Эндо 1ШЭА®СОШ Т СоШт Агар Байрд-Паркера Я С< 81.

я Контроль (4,6±0,8)х104 (4,1±0,7)х104 (7,3±1,3)х10 (7,7±0,4)х10 Не обн. Н<

1 1 й тз 2 к о и> ¿а + Е.соН (6,7±0,1)х105 (7,1±0,4)х105 (5,1±1,0)х103 (4,6±0,9)х103 Не оба. Н<

0 о 1 § я я + Б^аигеив (7,4±0,5)х10® (7,0±0,4)х106 (б,2±0,2)х10 (6,6±0,2)х10 (4,9±0,9)х 102 (5,4±

о п> + 8а1т.ет. (5,3±0,2)х105 (5,8±0,1)х103 (8,1±0,5)х10 (8,9±0,6)х10 Не обн. Н<

Контроль (3,1±0,6)х104 (2,7±0,5)х104 (4,7±0,8)х10 (4,3±0,9)х10 Не обн. Н<

2 о и + Е.соН (8,4±0,5)х105 (8,9±0,б)х105 (З,1±0,5)х103 (З,7±0,6)х103 Не обн. Не

43 о ш !Г ге + Б^аигеиБ (5,5±0,1)х106 (5,0±0,5)х10б (3,8±0,6)х10 (4,3±0,9)х10 (7,1±0,4)х 102 (6,8±

+ Ба1т.еп1. (6,7±0,2)х105 (7,2±0,4)х105 (5,4±0,9)х10 (6,0±0,2)хЮ Не обн. Н(

4. Разработка методических указаний и рекомендаций по использованию подложек серии RIDA*COUNT.

Тест-подложки серии RIDA®COUNT состоят из нетканого полотна пропитанного средой, содержащей гидрофильный полимер и питательные вещества для роста и развития микроорганизмов. Для каждого вида определяемых микроорганизмов характерно содержание тех или иных компонентов, подавляющих рост нежелательной микрофлоры и хромогенов для окрашивания колоний. Это сухие, стерильные питательные среды в форме тест-подложек, готовые к употреблению для санитарно-микробиологического анализа воды, кормов, различных пищевых продуктов.

На основании результатов проведённых нами исследований, была установлена групповая, родовая и видовая селективность применяемых тест-подложек серии RIDA®COUNT при определении санитарно-показательных микроорганизмов в объектах ветеринарно-санитарного контроля. Полученные усреднённые идентифицирующие признаки колоний микроорганизмов по всем видам подложек приведены в таблице 7.

Так же определена высокая достоверность результатов, полученных при использовании микробиологических тест-подложек серии WDA®COUNT. Результаты, полученные при использовании тест-подложек, были близки к результатам, полученным стандартными методами выявления санитарно-показательных микроорганизмов на технологических поверхностях и в продуктах животного происхождения. Коэффициент корреляции был равен 0,97.

По результатам проведенных исследований нами совместно с B.C. Бабуновой и H.A. Шурдуба были подготовлены «Методические рекомендации по ускоренной санитарно-микробиологической индикации общего микробного числа (КМАФАнМ), E.coli, колиформ (БГКП), сальмонелл, стафилококков (S. aureus), дрожжей и плесеней в продуктах животного происхождения, кормах и объектах внешней среды с применением подложек серии Rida® Count», которые были утверждены Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии 12.10.2005 г.

Также результаты наших исследований вошли в «Методические указания по ускоренной санитарно-микробиологической индикации общего микробного числа (КМАФАнМ), E.coli, колиформ (БГКП), сальмонелл, стафилококков (S. aureus), дрожжей и плесеней в продуктах животного происхождения, кормах и объектах внешней среды с применением подложек серии Rida® Count», которые были утверждены Федеральным агентством по сельскому хозяйству МСХ РФ 03.10.05 г. за №5-1-14/973 для применения на территории Российской Федерации.

Таблица 7. Идентификационные признаки колоний разных групп микроорганизмов, выросших на тест- подложках серии RIDA® COUNT.

№ Название подложки Цвет колоний Вид колония Группа определяемых микроорганизмов

1 RIDA®COUNT Total Красные разные КМАФАнМ

2 RIDA®COUNT Coliform Голубые разные Колиформенные бактерии

Сине-зелёные разные Колиформенные бактерии с высоким метаболизмом или низкой энзимной активностью (повреждённые клетки)

другие цвета разные Не колиформенные бактерии

3 RIDA®COUNT Salmonella Черные Маленькие, круглые Salmonella

Черные тусклые или коричневые Расплывчатые, мигрирующие Proteus

Тусклые, коричневые, почти не окрашенные Большой размер колоний Citrobacter

4 RIDA®COUNT Staph, aureus Сине-зеленые Диаметр 1 мм Staph, aureus

Сине-зеленые Диаметр < 1мм Другие виды Staph.

Бледно окрашенные, другие цвета Другие виды Staph

Оценивая качество сырья на пищевых предприятиях с помощью определения уровня различных групп бактериальных контаминантов, состояние рабочих поверхностей производства и эффективность проводимых санитарно-гигиенических мероприятий, используя метод подложек серии RTOA® COUNT, можно контролировать санитарно-производственные нормативы безопасности в критических контрольных точках на предприятиях, работающих по принципам системы качества НАССР. Предложенные методики характеризуются простотой исполнения, высокой специфичностью и чувствительностью при определении патогенных микроорганизмов, а также хорошей воспроизводимостью, универсальностью применения и небольшими затратами времени для проведения анализа.

ВЫВОДЫ

1. Изучена эффективность различных составов смывных жидкостей, используемых при отборе проб с поверхностей технологического оборудования для санитарно - микробиологического контроля.' Установлено, что наиболее высокую высеваемость санитарно--показательных микроорганизмов позволяет получить использование для смывов с поверхностей смеси на основе физиологического раствора, содержащего 0,1-1% пептона, 0,01-0,08 агара и фосфатного буфера с рН 7,0-7,2.

2. Предложен простой и эффективный способ отбора проб с поверхностей технологического оборудования с помощью отпечатков предварительно увлажнённых тест-подложек серии RIDA®COUNT для контроля качества проведения санации на предприятиях по переработке животноводческого сырья. Способ отпечатков тест-подложек имеет высокую корреляцию (0,97) со стандартным методом смывов с помощью ватного тампона и позволяет быстро и просто проводить отбор проб, которые сразу готовы для инкубации.

3. Установлена высокая групповая, родовая и видовая избирательность тест-подложек серии RIDA®COUNT, используемых для определения КМАФАнМ, БГКП, золотистого стафилококка и сальмонелл в естественно и искусственно контаминированных индикаторными бактериями мясе, молоке и продуктах их переработки.

4. Уровень высеваемости санитарно-показательных микроорганизмов на тест-подложках серии RÍDA*COUNT, используемых для анализа продуктов животного происхождения и контроля качества санации технологического оборудования, оказался таким же, как при использовании таких агаровых сред, как КМАФАнМ, МПА, Эндо, Байрд-Паркера, Плоскирева и висмут-сульфит агара. Также установлено, что на тест-подложках RIDA®COUNT Total КМАФАнМ микроорганизмы можно учитывать уже через 48ч, что на 24 ч быстрее, чем на соответствующих плотных средах.

5. Установлена практическая возможность применения микробиологических тест-подложек серии RIDA®COUNT для санитарно-производственного контроля технологических поверхностей, сырья и продуктов животного происхождения. Установлена высокая корреляция при сравнительной оценке стандартных методов определения индикаторных групп микроорганизмов и метода использования тест-подложек серии RIDA®COUNT (R=0.97).

6. Разработанная методика применения микробиологических тест: подложек серии 11ША®СОиМТ для санитарно-

микробиологического мониторинга проста и экономична в использовании, так как нет необходимости в приготовлении и стерилизации питательных сред, а используемые тест-подложки легко утилизируются.

7. Разработана методика использования тест-подложек серии КГОА®С01ЖГ для оперативного санитарно-микробиологического контроля продуктов животного происхождения и поверхностей технологического оборудования.

ПРЕДЛОЖЕНИЕ ДЛЯ ПРАКТИКИ

На основании результатов исследований разработаны «Методические рекомендации по ускоренной санитарно-микробиологической индикации общего микробного числа (КМАФАнМ), E.coli, колиформ (БГКП), сальмонелл, стафилококков (S. aureus), дрожжей и плесеней в продуктах животного происхождения, кормах и объектах внешней среды с. применением подложек серии Rida® Count» (утверждены Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии 12.10.2005 г.) и «Методические указания по ускоренной санитарно-микробиологической индикации общего микробного числа (КМАФАнМ), E.coli, колиформ (БГКП), сальмонелл, стафилококков (S. aureus), дрожжей и плесеней в продуктах животного происхождения, кормах и объектах внешней среды с применением подложек серии Rida® Count» (утверждены Федеральным агентством по сельскому хозяйству МСХ РФ 03.10.05 г. за №5-1-14/973).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Юдина A.A. , Бабунова B.C., Шур дуба H.A. Упрощенные методы на основе тест-подложек для индикации санитарно-показательных микроорганизмов в продуктах животного происхождения, кормах и объектах внешней среды. // В материалах 5-ой международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины, ветеринарно-санитарного контроля и биологической безопасности сельскохозяйственной продукции», Москва, 2004, с. 81-83.

2. Юдина A.A. Совершенствование контроля за санитарно-показательными микроорганизмами в продуктах животного происхождения. // В материалах VIII Всероссийского конгресса «Оптимальное питание - здоровье нации», Москва, 2005, с. 300.

3. Юдина A.A. , Бабунова B.C., Шурдуба H.A. Использование подложек серии Rida®Count для определения санитарно-гигиенического состояния мясоперерабатывающих предприятий. // В материалах

Международной научно-практической конференции, посвященной 60-тилетию ГНУ Краснодарский НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях», Краснодар, 2006, с. 87.

4. Юдина A.A. Использование подложек серии Rida®Count для определения бактериального качества продуктов животного происхождения. // В сборнике научных трудов ВНИИВСГЭ «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии», Т. 118, 2006, с. 199-205.

5. Юдина A.A. Простой метод санитарно-микробиологического контроля сырья, продуктов животного происхождения и поверхностей технологического оборудования. // В материалах Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», посвященной 650летию Ульяновской ГСХА 20-22 мая 2008 г, T.IV, Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ, биотехнология, Ульяновск, 2008, с. 116-117.

6. Юдина A.A. Упрощенный метод санитарно-микробиологического контроля сырья, продуктов животного происхождения и поверхностей технологического оборудования предприятий. // В материалах VII Международной научной конференции студентов и молодых учёных «Живые системы и биологическая безопасность населения», Москва, 2008, с. 312-313.

ВНИИВСГЭ, 2009 г., г. Москва, Звенигородское шоссе, д.5 Заказ -306/Л Тираж 80 экз.

В средствах массовой информации, научной литературе, деятельности правительственных организаций и опросах общественного мнения выражена Г повышенная озабоченность качеством и безопасностью потребляемых пищевых продуктов животного происхождения. Очевидно, что данная проблема является одной из самых актуальных.

Известно около 200 болезней, передаваемых через пищевые продукты. В настоящее время насчитывается 18 видов бактерий, 26 видов паразитов, включая простейших, 9 групп вирусов, 4 группы биотоксинов, 9 групп химических веществ, 3 группы биологически - активных веществ, различные токсичные растения, грибы, пищевые добавки и т.д., которые могут вызывать пищевые отравления и токсикоинфекции у человека [75]. Г

В бюллетене Центра ВОЗ по пищевым инфекциям и интоксикациям в Берлине указывается, что около 30% населения развитых стран страдает от пищевых отравлений ежегодно. Ситуация в развивающихся странах еще более драматична. По оценкам экспертов в 1999 году 1,8 миллионов детей в возрасте до 5 лет умерло в этих странах от диарейных болезней, обусловленных, главном образом, потреблением контаминированной пищи и воды [161].

Главными факторами передачи этих инфекционных заболеваний являются продукты животного происхождения, которые часто содержат микроорганизмы, являющиеся возбудителями зоонозных болезней [6, 60, 66, 136].

Не говоря уже о смертности, заболеваемости и причиняемых людям страданиях, зоонозные болезни наносят большой экономический урон из-за потери продуктивности животных (мяса, молока, яиц), падежа, затрат на ветеринарное обследование осмотр, микробиологические исследования, карантин, организацию транспортировки и убоя больных животных, выбраковки мяса, дезинфекцию, защиту персонала и окружающей среды.

Согласно данным экспертного комитета Всемирной Организации здравоохранения, эти болезни у животных приводят к потере 30 млн тонн молока ежедневно, т.е. такого количества, которого было бы достаточно для обеспечения 200 млн детей двумя стаканами молока ежедневно [146].

Современные требования к качеству и безопасности сырья животного происхождения, полуфабрикатов и готовой продукции и соответственно к срокам хранения, реализации обуславливают необходимость постоянного санитарно-микробиологического контроля на всех критических точках производства. Производство безопасной пищевой продукции животного происхождения высокого качества может быть обеспечено лишь при соблюдении санитарно-гигиенических условий с использованием эффективных методов и средств санитарной обработки и профилактической дезинфекции оборудования и производственных помещений.

Один из важных путей существенного улучшения качества и безопасности пищевой продукции, реализуемой на российском рынке, является применение высокоэффективных и простых методов санитарно-микробиологического контроля.

Традиционные методы качественного и количественного анализа санитарно-показательных микроорганизмов - трудоёмки, Г малопроизводительны и не могут быть использованы для оперативного контроля, особенно, на малых предприятиях, где отсутствуют акридитованные на техническую компетентность бактериологические лаборатории. Отсюда возникла необходимость изыскания более простых, объективных, высокопроизводительных методов санитарномикробиологических исследований. Современные достижения микробиологии, биохимии и биотехнологии легли в основу для ускоренных и надёжных по своей специфичности и чувствительности методов санитарного контроля качества производства и пищевой продукции. Г

В последние годы ведущие производители микробиологических питательных сред предлогают более экономичные и простые в использовании питательные среды нового поколения. Фирма К-ВюрЬагт (Германия) предложила микробиологические подложки серии

11ГОА®СОиЫТ, покрытые готовыми специальными питательными средами. Эта серия рекомендуется для упрощенного проведения микробиологических исследований, что имеет большое значение для проведения санитарного контроля на малых предприятиях, производящих продукты животного происхождения.

Исходя из вышеизложенного, нами была поставлена цель — разработать упрощённый метод оценки ускоренного контроля санитарно-показательных микроорганизмов в продуктах животного происхождения и на поверхностях технологического оборудования.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи: I

1. Изучить возможность практического использования микробиологических тест-подложек серии КГОА®С01ЖТ для оперативного санитарно-микробиологического контроля поверхностей различных технологических объектов и продуктов животного происхождения.

2. Установить групповую, родовую и видовую селективность микробиологических тест-подложек при выделении индикаторных санитарно-показательных бактерий из естественно и искусственно контаминированных мяса, молока и продуктов их переработки.

3. Определить уровень чувствительности метода микробиологических тест - подложек серии М 0А®С01ЖТ, используемых для определения КМАФАнМ, БГКП, 81арЬ.аигеиз и сальмонелл на поверхностях оборудования и в мясомолочных продуктах.

4. Провести сравнительную оценку эффективности использования микробиологических тест-подложек и стандартных плотных питательных сред для санитарно-микробиологического контроля качества проведения профилактической санации на предприятиях, перерабатывающих мясное и молочное сырьё.

5. Разработать методику использования микробиологических тест-подложек серии RlDA®COUNT для ускоренного контроля КМАФАнМ, БГКП, Salmonella и Staph, aureus в мясе, молоке, продуктах их переработки и на поверхностях технологического оборудования. Научная новизна.

На основании проведённых исследований разработана ускоренная методика использования тест-подложек серии RIDA®COUNT для упрощенной практики контроля санитарно-показательных микроорганизмов в продуктах животного происхождения и на поверхностях технологического оборудования.

Установлена родовая, групповая и видовая специфичность и высокая чувствительность микробиологических тест-подложек, которые по своим дифференциально-диагностическим свойствам не уступали стандартным специальным средам, но оказались более приемлемыми для оперативного санитарного контроля на предприятиях, не имеющих бактериологических лабораторий.

Практическая ценность работы.

На основании результатов исследований разработаны «Методические рекомендации по ускоренной санитарно-микробиологической индикации общего микробного числа (КМАФАнМ), E.coli, колиформ (БГКП), сальмонелл, стафилококков (Staph, aureus), дрожжей и плесеней в продуктах животного происхождения, кормах и объектах внешней среды с применением подложек берии Rida® Count» (утверждены Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии 12.10.2005 г.); «Методические указания по ускоренной санитарно-микробиологической индикации общего микробного числа (КМАФАнМ), E.coli, колиформ (БГКП), сальмонелл, стафилококков (Staph, aureus), дрожжей и плесеней в продуктах животного происхождения, кормах и объектах внешней среды с применением подложек серии Rida® Count» (утверждены Федеральным агенством по сельскому хозяйству МСХ РФ 03.10.05 г. за №5-1-14/973).

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

- 5-ой Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (Москва, 2004 г);

- VIII Всероссийском конгрессе «Оптимальное питание — здоровье нации», Москва, 2005;

- Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарской НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар, 2006 г);

- Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА «Актуальные вопросы аграрной науки и образования» (Ульяновск, 2008);

- VII Международной научной конференции студентов и молодых учёных «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2008);

- Расширенном заседании лаборатории санитарии молока ВНИИВСГЭ (2008 г).

ВЫВОДЫ

1. Изучена эффективность различных составов смывных жидкостей, используемых при отборе проб с поверхностей технологического Г оборудования для санитарно - микробиологического контроля. Установлено, что наиболее высокую высеваемость санитарно-показательных микроорганизмов позволяет получить использование для смывов с поверхностей смеси на основе физиологического раствора, содержащего 0,1-1% пептона, 0,01-0,08 агара и фосфатного буфера с рН 7,0-7,2.

2. Предложен простой и эффективный способ отбора проб с поверхностей технологического оборудования с помощью отпечатков предварительно увлажнённых тест-подложек серии КГОА®СОЦ>ГГ для контроля качества проведения санации на предприятиях по переработке животноводческого сырья. Способ отпечатков тест-подложек имеет высокую корреляцию (0,97) со стандартным методом смывов с помощью ватного тампона и позволяет быстро и просто проводить отбор проб, которые сразу готовы для инкубации.

3. Установлена высокая групповая, родовая и видовая избирательность тест-подложек серии ШВА®СОиЫТ, используемых для определения КМАФАнМ, БГКП, золотистого стафилококка и сальмонелл в естественно и искусственно контаминированных индикаторными бактериями мясе, молоке и продуктах их переработки.

4. Уровень высеваемости санитарно-показательных микроорганизмов на тест-подложках серии 11ГОА®СОиНТ, используемых для анализа продуктов животного происхождения и контроля качества санации технологического оборудования, оказался таким же, как при использовании таких агаровых сред, как КМАФАнМ, МПА, Эндо, Байрд-Паркера, Плоскирева и висмут-сульфит агара. Также f установлено, что на тест-подложках RIDA®COUNT Total КМАФАнМ микроорганизмы можно учитывать уже через 48ч, что на 24 ч быстрее, чем на соответствующих плотных средах.

5.Установлена практическая возможность применения микробиологических тест-подложек серии RIDA®COUNT для санитарно-производственного контроля технологических поверхностей, сырья и продуктов животного происхождения. Установлена высокая корреляция при сравнительной оценке стандартных методов определения индикаторных групп микроорганизмов и метода использования тест-подложек серии RIDA®COUNT (R=0.97).

6. Разработанная методика применения микробиологических тест-подложек серии RIDA®COUNT для санитарно-микробиологического мониторинга проста и экономична в использовании, так как нет необходимости в приготовлении и стерилизации питательных сред, а используемые тест-подложки легко утилизируются.

7. Разработана методика использования тест-подложек серии

RJDA®COUNT для оперативного санитарно-микробиологического контроля продуктов животного происхождения и поверхностей технологического оборудования.