Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Цитогенетические и эпизоотологические аспекты лейкоза крупного рогатого скота

ВСЕСОЮЗНАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯП СТ 3 Е Н И ЫХ НАУК имени В. И. ЛЕНИНА

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ имени Я. Р. КОВАЛЕНКО

На правах рукописи

Д У и Ефим Абрамович

ЦИТОГЕНЕТЯЧЕСКНЕ И ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.02 — патология, онкология и морфология животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Москва — 1991

Работа выполнена в Центральном отделе лейкозов, сравнительной и экспериментальной онкологии Всесоюзного ордена Ленина научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии имени Я. Р. Коваленко.

Официальные оппоненты:

1. Доктор биологических наук, профессор В. И. Ташошюнас.

2. Доктор ветеринарных наук С. С. Бирбин.

3. Доктор ветеринарных наук В. Л\. Лемеш.

Ведущая организация — Институт экспериментальной ветеринарки Сибири и Дальнего Востока.

Защита диссертация состоится 18 декабря 1991 г. на заседании специализированного совета Д 020.28.02 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всесоюзном ордена Ленина научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии имени Я. Р. Коваленко по адресу: 109472, г. Москва, Кузьминки, ВИЭВ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ.

Автореферат разослан «

199! г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

В. В, Амелина

.4 - 3 -

■ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Настоящая диссертационная работа является результатом двадцатилетних исследований в области генетики и эпизоотологии лейкоза крупного рогатого скота, выполненных в соответствии с Государственным планом по решению научно-технической проблемы 0.69.125 (1970-1975 гг.) и 0.69.05 (197С-1990 гг.).

Актуальность темы. Проблема злокачественного роста - одна из важнейвих в современной биологии. С ней тесно смыкается лейкоз крупного рогатого скота, который с 60-х годов получил значительное распространение-за рубежом и в наоей страна. Болезнь наносит серьезный экономически!-- ущерб молочному и племенному скотоводству. Превращение нормальных клеток гемопоэтической системы в лейкозкые есть "молекулярная болезнь" (В.П.Шивков, Л.Г.Бурба, 1988), поэтому в настоящее время больвинство исследований по лейкозу сосредоточено в области молекулярной биологии с использованием соответствующих методов. Изучение лейкоза должно сочетать исследования различных уровней организации живой природа: молекулярный, клеточный, ор-ганизменный и популяционный- В связи с этим важное значение имеет исследования генетических и эпизоотологических аспектов лейкоза крупного рогатого скота, особенно, после выявления вируса лейкоза крупного рогатого скота (В5ШРС) как этиопатогенетического фактора лейкоза и при разработка мероприятий по йорьСз с болезнью. В гене-за болезни и эпизоотическом процессе значительная роль принадлежит генотипическим и эпизоотологическим факторам {А.С.Емельянов с со-авт., 1966; В.М.Кахыансон, 1968, 1972; А.М.Лактионов, 1972; Г.С.Петровский, Т.П.Кудрявцева, 1972; Н.М.Костромитинов с соавт., 1972, 1982; В.П.Молчанов, Н.М.Костромитинов, 1974; В.А.Бусол, 1972, 1974; Л.Г.Бурба с соав?., 1974, 1977; С.С.Вирбин, 1972,

1974; И.С.Докукин, 1972; Л.К.Эркст с соавт., 1973; Г.Ф.Коромыслов с соавг., 1972, 1976; Б.А.Крикун, 1976; Я.В.Карликов, 1976, 1980;

B.Времен с соав*., 1978, 1986; Т.М.В:шь с соавт., 1980; С.Н.Федорова с соавт., 1982; Г.А.Симонян, 1983; А.Б.Емельянов, 1990).

Исследования, проведенные на клеточном уровне, подтвердили генетическую связь лейкоза крупного рогатого скота с аномалиями хромосом ь клетках кроветворной ткани (Л.И.Мутузкин, 196?, 1979;

C.С.БирЗин, 1972, 1974; И.Л.Гольдмак с соавт., 1573, 1977 и др.).

Однако остаются недостаточно изученными генетические и зпи?о-

очэлогические аспекты лейкоза. Генетический,и эпиэоотологический факторы могут существенно влиять на инициацию и становление лейкоэ-ного процесса - его патогенез, патокинез у отдельно взятых животных, распространение болезни и проявление индивидуальной и групповой устойчивости или восприимчивости к инфекции, вызываемой ВЛКРС. Из изложенного возникает необходипость проведения многоплановых исследований лейкоэного процесса на клеточном (хроиоссшном) и орга-низменном уровнях с 'целью выяснения взаимосвязи генотип-фенотип у зараженных' ВЛКРС животных, изучения эпизоотолдтческих особенностей лейкоза. Не выяснена роль яивотных-носителей антител к ВЛКРС в эпизоотическом процесса, нет оптимальных научно обоснованных концепций по искоренению инфекции ВЛКРС в стадах и хозяйствах. Ввдви-нутая академиком В.П.Шишковым (1977, 1979) вирусо-юшуно-генетичес-кая теория этиологии, патогенеза и профилактики лейкозов и ряда опухолевых заболеваний животных ориентирует на проведение генетических и эпиэоотологических исследований лейкоза крупного рогатого скота. ; • .

Цель и задачи исследования. Работа посвящена изучению цитоге-нетических и цитологических изменений в соматических (кроветворных и некроветворных).клетках крупного рогатого скота и генетико-эпиэо-

отологическому анализу на различных стадиях лейкоза и, особенно, бессимптомной стадии инфекционного процесса в неблагополучных по лейкозу популяциях: разработке и апробации различных методических подходов (вариантов) ликвидации инфекции, вызванной ВЛКРС, в системе оздоровительных мероприятий при лейкозе.

В связи с этим в работе поставлены следующие задачи:

1. Исследовать хромосомы гемопоэтических клеток в динамике естественно протекающего лейкозного процесса.

2, Изучить у больного лейкозом крупного рогатого скота в сравнительном аспекте изменения хромосом в клетках системы крови (костный мозг, периферическая кровь, лимфатические узлы).

3; Изучить аномалии в хромосомном аппарате клеток гэмопоэзд,, обусловливающие наследование предрасположенности к заболеваний лейкозом у потомства больных лейкозом корсв-матерей.

4. Выяснить на телятах-близнецах, значимость внутриутробной передачи вируса лейкоза.

5. Исследовать возможность проявления устойчивости на уровне индивидуального макроорганизма к заражению ВЛКРС спонтанно и экспериментально, используя метод эпизоотологического и цитогенетичес- , кого а '.ализа

.6, Дать оценку эффективности различных методов ликвидации инфекции ВЛКРС в неблагополучных стадах. .

Научная невязка. Впервые изучены хромосомы гемопоэтических клеток здоровых животных некоторых пород крупного рогатого схота в СССР (черно-пестрая эстонская, путинская, голландская), установлены; аномалии хромосом, их различий и сходство в различных клетках системы крови, показано резкое снижение реакции властной трансформации и митотичесной активности лимфоиднах клеток периферичес-" кой крови у больных лейкозом животных, в сравнении с здоровыми.

В стадз, отселекц:юнированном на лейкоз, одновременным использованием цитогенетическсго и гематологического методов впервые у одной'трети потомков больных лейкозом коров-матерей установлены аномалии хромосом клотик костного мозга и изменения крови, характернее для лейкоза. Показано, что повышенная анеуплоидия и наличие клеток с избыточным (2п> 60) числом хромосом, обнаруживаемые в ранней возрасте у потомков больных коров, подтверждают дисбаланс их генотипов и наследственно еакрепленное нарушение регуляции их генетического аппарата кроветворных клеток, обусловливают генотипичес-кую предрасположенность к лейкозу. " •

Цитогенетическими исследованиями клеток культуры почки ембрио-на коровы (ПЗК) после кокультивирования их с лейкоциаами-кройи больной лейкозом коровы установлено, что '* у&ю. ВЛКРС не вызывает изменений хромосом, аналогичных обнаруживаемым в клетках системы крови при спонтанном лейкозе крупного рогатого скота. Выявленные перестройки (аберрации) в хромосомном аппарате клеток культуры ПЭК, репродуцирующей ВЛКРС, сходны с изменениями хромосом, отмечаемыми в свободных от Е/1КРС длительно субкультивируемых клетках культур ТИ (трахея эмбриона коровы), ПТ (почка теленка) и ПО (почка овцы).

Серо-элизоотологическими исследованиями . . ' неблагополуч-. ных по лейкозу популяций выявлено две категории животных устойчивых к лейкозу:

Первая категория - серонегативные аивотные, устойчивые к заражению ВЛКРС,

Вторая категория - Еивоткые, заразившиеся ВЛКРС, но в течение нескольких лет не проявляющие гематологических признаков лейкоза. .

В эксперименте установлено, что у животных, в течение нескольких лет остававшихся здоровыми и серонегативными в популяции йоров

с инфекцией ВЛКРС, после парентерального введения большого количества вируссодержащих лимфоцитов развивался инфекционный процесс, выявляемый серологическим методом.

На телятах-близнецах, родившихся от аеропозитивных коров-матерей, установлено, что внутриутробная передача вируса лейкоза является яео<1язатвдьвой. • .

Установлено, что гревалентность инфекции ВЛКРС в 6-месячном возрасте у телок и бычков практически одинакова, т.е. не зависит от пола животных.

Распространенность инфекции ВЛКРС среди быков-пгоизводителей черно-пестрых и красных пород на племпредприятиях достоверно вь'че, чем среди совместно содержащихся быков швицкой, айрширской, симментальской и ярославской пород.

Разоаботана и внедрена оптимальная' схема впав искоренения.инфекции ВЛКРС на племпредприяткях и в племенных хозяйствах, надежно обеспечивающая устойчивое благополучие их в течение трех лет (срок наблюдения).

Практическая ценность. Материалы и результаты исследований вошли 1 следующие документы:

1. Инструкция о мероприятиях по борьбе с лейкозами крупного рогатого скота. Утверждена ГУВ МСХ СССР 14 ноября 1973 г.

2. Методические указания по диагностике лейкозов крупного рогатого скота. Сдобрены ГУВ МСХ СССР 25 марта 1974 г.:

3. Рекомендации по селекции крупного рогатого скота молочных и молочно-мясных пород нг. устойчивость к лейкозам. Одобрены Главными управлениями животноводства и ветеринарии МСХ СССР 18 июля 1979 г.

Л. Методические рекомендации по исследованию хромосом клеток системы крови крупного рогатого скота в норме и при лейкозах. Одоб-

реки Отделением ветеринарки ВАСХНИЛ 22 октября 1979 г.

5. Методические рекомендации по использованию реакции бласт-трансформацаи лимфоцитов крови (РБТЛ) в комплексной диагностике лимфолейкозч коупного рогатого скота. Одобрены отделенцем ветеринарии ВАСХНИЛ, Учеными Советами ВИЖ и ВИЭВ 1980 г.

6. Стандарт СЭВ СТ СЭВ 2702-80 - Крупный рогатый скот - Методы лабораторной диагностики. Утвервден Постоянной Комиссией по сотрудничеству в области стандартизации, Ьерлин, декабрь, Г980 г.

7. Методические рекомендации по эпиэоотологическому исследованию при лейкозах крупного рогатого скота. Утверждены отделением ветеринарии ВАСХНИЛ 30 декабря 1981 г.

8. Государственный стандарт СССР-ГОСТ 25382-32 -• Крупный рогатый скот - Кетоды лабораторной диагностики лейкозов. Утвержден Государственным Комитетом СССР по стандартам II яньаря._ 1982 г., постановление № 3153.

9. Методика оценки линий и семейств крупного рогатого скота по устойчивости животных к заболеваниям. Утверядена Советом по селекции и гибридизации сельскохозяйственных животных при ВАСХНИЛ 27 апреля 1983 г.

10. Инструкция о мероприятиях по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота. Утверждена ГУВ МСХ СССР 29 декабря 1984 г.

11. Методические указания по диагностике лейкоза крупного рогатого скота. Утверждены ГУВ МСХ СССР 27 июня 1985 г.

12. Методические рекомендации "Оценка иммунологического статуса крупного рогатого скота, больного гемобластозами". Одобрены Отделением ветеринарии ВАСХНИЛ 13 апреля 1984 г.

13. Рекомендации по селекции крупного рогатого скота на устойчивость к лейкозу. Одобрены Отделением ветеринарии ВАСХНИЛ 29 октября 1985 г.

14. План основных мероприятий по оздоровлению крупного рогатого скота от лейкоза в СССР на I987--I990 годы. Утвержден Госагро-проысм СССР 19 марта 1987 г.

15. Инструкция о мероприятиях по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота. Утверждена ГУВ Госагропрома СССР 5 августа 1989 г.

16. Методические указания по диагностике лейкоза крупного рогатого скота!. Утверждены Комиссией по продовольствию и закупкам при Совете Министров СССР, 1989 г.

17. Система мероприятий по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота в СССР на 1990-1995 г.. Одобрена ветеринарной секцией НТС при Госкомиссии Совмияа СССР по продовольствию и закупкам 29 августа 1990 г.

18. План организационно-хозяйственных,, ветеринарно-санитарных и специальных мероприятий по профилактике и ликвидации лейкоза среди крупного рогатого скота в областях, краях и автономных республиках Российской Федерации на 1991-1995 и последующие года. Утвержден Главным управлением ветеринарии Минсельхозпрода РСФСР 22 февраля 1991 г. ,

Разработаны и успешно внедрены в II племенных хозяйствах различные варианты оздоровления от лейкоза неблагополучных стад с ин-фицированностью ВЛКРС от 10 до'705! коров и неодинаковой технологией -ведения сястссодства. Ликвидирована инфекция ВЛКРС в популяции из 6262 коров на 12 фермах 6-ти хозяйств.

Апробация работы. Результаты исследований обсуждены и одобрены на Всесоюзных симпозиумах, конференциях и координационных совещаниях по ревёнию научно-технической проблемы 0.69.05 (лейкозы человека, животных и птиц): Харьков, 1972; Рига, 1973; Москва, 1974-7985; Белая церковь, 1982; Самарканд, 1984; Сухуми, 1988; П Всесоюзном съезде гематологов и трансфузиологов, Львов, 1985; На-

учно-ыотодлческом совэцании по исследован;® резистентности и предрасположенности крупного рогатого скота н лейкозу, Леникг-рад-Пуикин, '1973; Региональных научно-производственных совещаниях, семинарах, конференциях: Новочеркасск, 1976; Белая Церковь, 1975; Гродно, 1982; Тарту 1933, 1987; Кинель, 1983; Кииинев, 1986; Калининград, 1989; Владимир, 1990; Ижевск, 1990; Новосибирск, 1990.

. Публикация. Основные >аучные положения, выводи и рекомендации изложены в коллективных монографиях: "Генетический аспект лейкозов крупного рогатого скота" (М., ВНИИТЭИСХ, .1975), "Лейкозы и злокачественные опухоли янвотных" (М. "Колос", 1977 под редакцией В.П.Шишкова и Л.Г.Бурсы), "Левкози по кивотните" (София, "Замиз-дат", 1980 под редакцией В.П.Власова и Л.Г.Буроы), "Эпизоотология лейкоза крупного рогатого скота и мери борьбы" СМ., Итоги науки и техники, ВИНИТИ, 1986), "Лейкозы и'злокачественные опухоли кивот-ных" (!>!., "Агропромиздат", 1988, под редакцией В.П.Шишкова и Л.Г.Бурбы), 66 научных статьях, опубликованных в периодических изданиях, в том числе б 15 работах, выполненных .сачостоктельно.

Объем п структура диссертации. Диссертация изложена на 321 страница машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Работа содержит 65 табл. и 35 рис.

Список литературы включает 728 наш., из них 351 - отечественных и 377 - иностранных авторов.

Вопросы выносимые на защиту:■

I. Результаты изучения особенностей цитогенетических и цитологических изменений в клетках системы крови здорового и больного лейкозом крупного рогатого скота и потомства пробандов.

2. Материалы зпнзоотологического подтверждения .наследственной устойчивости - предрасположенности ¡с лейкозу -.¡ли бессимптомной инфекции, вызываемой ВЛКРС,в естественных условиях и эксперименте.

3. Ликвидация бессимптомной инйекции В.дас б хозяйствах различными методическими подходами с учетом превалентности инфекции ВЛКРС б стаде и технологии япсогнсводстса. ' .

МАТЕРИАЛЫ Я МЕТОДЫ йССЛБДОЗАКИЯ

Работу проводили в течение 1970-1990 гг. в Центральном отделе лейкозов, сравнительной и экспериментальной онкологии В¡433, ка опытной базе института о.Лисин, в хозяйствах и племпредприятиях Московской, Курской, Тульской, Воронежской, Калининской, Свердловской, Закарпатской областей, Таджикской ССР и Краснодарского края.

Цитогекетическое исследование здорового крупного рогатого скота проведено на 106 кивотных II основных пород, разводим«6 стране (черно-пестрая, черно-пестрая эстонская, голландская, голатннская, айриирская, симментальская, швицкая, бурая карпатская, красная степная, красная литовская, бурая латвийская).

■Цитогекетическое' исследование выполнено на 87 яивотных больных лейкозом, в т.ч. у 27 коров исследовали хромосомы клеток костного мозга, у 12 животных - в динамике лейкозного процесса и у 19 животных такг.е изучали хро—мосомы клеток культур (или пунктата) лимфатических узлов, периферической крова, У 2 коров - лимфоциты селезенки и лимфы. Хромосомы клеток кативкой (без предварительного культивирования) крови исследовали у 12 коров с гематологической стадии болезни, у 12 серспозитивных коров с нормальными покаэтге- . жла лейкоцитов крови, у 22 г&ло»-дс«ерей от больных лейкозом ко-' ров и 14 телок-близнецов (? г.ар) от больных лейкозом, серопозитиь-ны.< пли здоровых коров.

Костный мозг для цитогенетических исследований получали из второго сегмента грудгой кости методом п/нкционной биопсии с помощью лглы ИС-2 (Симоняна-Петровского, 1964). Препараты хромосом из него готовили по методикам Н.П.Бочкова, Л.С.НемцевоЯ (1962), Л.И.Мутузкина (1966), С.С.Бирбина (1968) с некоторыми изменениями (Ё.А.Дун, 1977).

Действие ВЛКРС на хромосомы соматических клеток изучали на перевиваемой, репродуцирующей вирус лейкоза культуре клеток ПЭК (почка эмбриона коровы), полученной методом кокультивирования с лимфоцитами крови больной лейкозом коровы. Культура клеток получена А.П. Головченко.

Препараты хромосом из первичных и перевиваемых культур клеток готовили по методике А.А.Хакимова. В.П.Блюмкииа (1966), а из клеток нативной крови по методике С,С.Бирбина, Е,М.Тел.егина (1974), окрашивали препараты хромосом по методу Романовского-Гимза, по методике, применяемой в лаборатории цитогенетики ВОНЦ ЫЗ СССР, а текке предложенной ВОЗ (Кенева, 1975),

Изучение хромосом проводили с помощью микроскопа и fy " iCuiH Zeiss Jena. ) соблюдая следующие методические требования: вначале просмотр метафазных пластинок под малым увеличением, отбор из них наиболее качественных, а именно, правильно округлой формы, с хорошим распластыванием хромосом без взаимных наложений, удовлетворительно окрашенных. Затем маркировали отобранные клетки и изучали их с использованием иммерсионной системы,■подсчитывая количество хромосом исследуя их морфологию, отмечая обнаруженные аберрации или маркерные хромосомы. Нетафазы, тлеющие аномалии хромосом, фотографировали на пленку микрат-300. с негативов делали микрофотографии и проводили кариотипирование. При цитогеветияеских исследованиях изучено 13 тысяч метафазных пластинок.

Постановку рзмции бласг-трансформации лимфоцитов (РБТЛ! осу-»ествляли согласно разработанной методической рекомендации (1980), щобренной отделением ветеринарии ВАСХНИЛ. Морфологическую оценку >БТЛ проводили, подсчитывая в препаратах при иммерсионном увеличе-!ии не менее 500 клеток. Показатель РБТЛ выражали в процентах пос-[е определения количества интактных лимфоцитов, переходных клеток, ¡ластов и клеток в митозе.

Митотическую активность культивируемых 1п. ^'¡Ххо лимфоцитов грови определяли отношением числа клеток, находящихся в митозе, к >бщему количеству-ЮОО просмотренных клеток, выражая ее в промилле %о). .'

Гематологические исследования проводили по общепринятому в ■ематологии методу. Общее количество лейкоцитов определяли при под-тете их в камере Горяева. Морфологический анализ лейкоцитов проводи в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Пмза или Паппен-•ейму. Результаты гематологических исследований оценивали по "лей-:сзному ключу", принятому стандартом СЭ8-2702 (1980).

Патологоанатомическое и гистологическое исследования проводи-и совместно с доктором вет.наук Т.П.Кудрявцевой и профессором ;.Г.Бурбой.

Серологические исследования проводили методом реакции иммуно-;иффузии (РИД) согласно временному наставлению, рекомендованному 'УЗ МСХ СССР (1977).

Изучение наследования предрасположенности к лейкозу проводили

4,

:о результатам цитогенетичёких и гематологических исследований на 6 больных коровах а 22 дочерях и сыновьях на онытной базе ВИЭВ и I хозяйстве.

Изучение внутриутробной передачи ВЛКРС от серопозитавных ко-ов проводили на 35 парах близнецов в 3 неблагополучных по лейкозу

- и -

хозяйствах.

Цитогенетическое изучение устойчивости коров разных пород к заражении BJ1KPC проводили в 2 неблагополучных по лейкозу хозяйствах на 36.животных молочного (голландская и айрширская)-и комбинированного (швицкая и симментальская) направления продуктивности.

Исследование устойчивости животных к заражению ВЛКРС в эксперименте проводили в 2 нзблагополучных по лейкозу хозяйствах на 8 коровах и 6 телках, свободных от ВЛКРС- и происходивших из семейств, свободных от лейкоза. Подопытным животным вводили кровь от коров-носителей ВЛКРС.

Распространенность инфекции, вызванной ВЛКРС, у быков-производителей разных пород изучали у 1725 животных в 15 племпредприятиях несколь-ких регионов страны.

Влияние пола на частоту проявления бессимптомной инфекции ВЛКРС у. молодняка изучали путем исследования в РИД II730 телят (8758 телок и 2972 бычков) 6 пород в 36 хозяйствах 15 районов Московской области и других зонах страны. " ■

Результаты исследований обрабатывали статистическим методом (Дж. У.Снедекор, 1961, Ё.К.Меркурьева, 1964, Е.В.^'йлер, А.А.Ген-кин, 1973).

Эпиэоотологический и генетический аспекты лейкоза и бессимптомной инфекции ВЛКРС изучали, используя специальные приемы и способы: сравнительно-историческое описание, зпивоотологическое описание, эпиэоотологический эксперимент, генеалогический анализ (распределение животных по родственным группам и семействам - малые и большие, их оценка), статистический метод. Исследования проводили в 4 неблагополучных nö лейкозу племенных хозяйствах на 8280 животных голштинской, симментальской и холмогорской пород, среди которых проанализировали 782 семейства коров с учетом результатов кл;»--

¡ико-гематологического, патоморфологлческого и серологического ■вотирования.

В этих целях использовали разработанные с нашим участием "Ре-юмендации по селекции крупного рогатого скота молочных и молоч-ю-мясных пород на устойчивость к лейкозам" (1979), "Методические >екомендации по эпизоотологическому исследованию при лейкозе круп-юго рогатого скота" С1981)и "Методику оценки линий и семейств срупного рогатого сксга по устойчивости животных к заболеваниям" ! 1983).

Сравнительное изучение эффективности различных вариантов оэдо- ' ювления от инфекции,, вызванной вирусом лейкоза крупного рогатого зкота, осуществляли совместно с сотрудниками ВиЭВ (В.М.Нахмансо-«ш, Л.Г.Бурбой, Т.Г.Филатовой, Л.П.Никитинской) непосредственно в 7 племенных хозяйствах и госплетаводах Московской, Тульской, Курской областей на 17970 животных (таблицы I, 2), а также в 9 плем-1редприятиях Цосковской, Калининской, Свердловской и Северо-Казах-станской областей на 1342 быках-производителях, ремонтных и выращиваемых в элеверах бычках.

Таблица I

Характеристика структуры стад племенных хозяйств

Хозяйство Количество животных

Всего В том числе

коровы ¡молодняк старое 6 месяце^'

Совхоз "Марьино" 980 360 620

ОПХ "Тульская Нива" 1480 500 980

ГПЗ "Заря Коммунизма" 6900 3050 3850

ГПЗ "Константинове" 2950 1300 » 1650

ПЗК "Ленинский Луч" 304 0 ¡800 1240

Колхоз "Память Ильича" 1090 750 340

п/х "Непецино" 1530 730 800

Всего: 17970 8490 9480

Материал, исследованный различными методами и подвергнутый анализу, представлен в таблице 2

Таблица 2

Методы исследований ! Исследовано животных

Клинико-гематологический 10240 • '

Патологоанатомический 61

Цитогенетический 212 '

Серологический 43490

Реакция Оласттрансформации

лимфоцитов 24

Генеалогический 7620

Эпиэ оот ологичес кий 21762

РЕЗУЛЬТАТЫ ИрСЛЕДОВАНИЙ Цитогекетические и цитологические исследования

Исследования хромосом клеток системы крови у здоровых животных. Исследовали хромосомы геыопозгических клеток здоровых животных II наиболее распространенных в стране пород крупного рогатого скота.

Изучали хромосомы клеток костного мозга кор~в 2-3-й лактации черно-пестрой, черно-пестрой эстонской, голландской, голигинской, айрширской, швицкой, симментальской, бурой карпатской, краской литовской, красной степной и бурой латвийской пород.

Проанализировано от 85 коров 5363 делящихся клеток, подавляющее большинство которых имело нормальный диплоидный (2п=60) набор хромосом, модальный класс у животных исследованных пород составлял около 90Я. В метафазах с 60 хромосомами 29 пар были представлены

[кроцентрическими хромосомами и I пара - половыми хромосомами. Последние являются субметацентричесними, наиболее крупными, одинако-ыми по размеру и форме. Клетки с гиполлоидным набором хромосом от 2п-1 до 2п-4) составляли 9-11% (Р< 0,0I), Установленный нами ариологический статус здорового взрослого крупного рогатого скота количество и морфология хромосом) согласуется с результатами, поученными Л.И.}<утузкиным (1966), И.Л.Гольдманом с соавт. (1966), .С.Бирбиным (1968). У некоторых пород - черно-пестрая эстонская, олландская, голштинская нами впервые исследованы хромосомы в норме.

Числовой состав и морфология хромосом Клеток костного мозга цоровых коров, изученные с применением обычной окраски по Рома-овскому-Гимза, были-подтверждены при окрашивании хромосом клеток ультур почки эмбриона коров (ПЭК) и почки теленка (ПТ) с исполь-ованием метода дифференциального окрашивания (£-диски).

Изучение хромосом клеток костного мозга у яивотных в динамуке эйкозного процесса. Решающее значение в изучении патогенеза лейко-1 крупного рогатого скота, возникновения болезни и последующего гановления ее, роли хромосомной изменчивости клеток системы крови эи этом имеют принципы исследования лейкозного процесса в дина- • «е.

Изучали в течение 2-4 лет хромосомы клеток костного мозга у I больных лейкозом коров лейкозного изолятора на опытной базе !ЭВ о.Лисий, которые длительное время комплексно обследовались «рудниками ВИЭВ (Л.Г.Бурба, А.П.Головченко, В.А.Горбатов, М.И.Гу-жин, В.Д.Егорова, К.Н.Кондрахина, Г.Ф.Корсшыслов, Т.П.Кудрявце-I, Л.А.Кудрявцева, Г.А.Симонян). Параллельно с изучением хромосом юводили исследования белой крови у подопытных больных животных. ■ всех коров количественные показатели лейкоцитов крови не превыша-!.сублейкемического уровня.

У больных лейкозом коров отмечали постоянную 1в течение нескольких лет) анеуплоидию (гипо- и гиперплоидия). Характерным признаком было наличие метафаз с 61 хромосомой и более. В костном моз ге длительное время гиперплоидные клетки чаие были представлены ме тафазами с 61 хромосомой и реже клетками' с большим числом хромосом. У некоторых животных в отдельные периоды устанавливали 10-20% гиперплоидных метафаз, тогда как до этого момента и при последующих исследованих количество гиперплоидных клеток у этих животных было значительно меньше. В отдельных исследованиях гиперплоидные клетки в костном мозге не выявляли. При дальнейших исследованиях их обнаруживали вновь (таблица 3).

Сопоставление совокупностей гипоплоидных клеток независимых, одинаковых по объему выборок больных лейкозом и здоровых животных (nj=n2=I2) с применением непараметрического критерия (критерия знаков) подтвердило достоверность, более выраженной гипоплоидии у больных коров (Р=0,95).

Таким образом, изучение кариотипа клеток костного мозга у больных лейкозом животных в динамике выявило у них постоянную гиперплоидию, не всегда выявляемую при однократном исследовании; установленные аномалии хромосом являются характерными для лейкоза.

Сравнительное изучение хромосом клеток периферической крови, костного мозга, лимфатических узлов и лимфы. У 20'больных лейкозои коров с последующим гистологически подтвержденным диагнозом провели сравнительное исследование хромосом клеток: костного мозга, краткосрочных культур лимфоцитов крови, .'лимфоузлов, селезенки,- на-тивной крови и лимфы. Полученные результаты'сопоставили с клинико-гематологическими признаками болезни, митотической активностью и реакцией бласттрансформации лимфоидных клеток этих животных.

Во всех клетках системы крови установлено как отличие, так и

Результаты исследования в дикачике хромосом -клеток костного мозга больных лейкозом коров

4нв.

ко зов

Дата ис-¡Показатели¡Число! Распределение крови !иссле¡числа хромосом

следования

!

!----------! дован '.исследованных

!лей-!лим- !ных ! метафаэ

!ко- !фоци-!мета-!--------------

!цити!ты ¡фаз !56- ! 60 ¡61 ¡.тыс/! % ! !-59 ! !и> !мкл ! ! ! ! !

Клетки [%)

диплоидные

гипо- ¡гипер-плоид-!плоид-ные !ные . ! "г 1

I !

! 3 ! 4 ! 5 ! 6 ! 7

! 9 ! 10 ! II

Э38 10.1972 27 76 50 15 34 I 63 3 2

05.1973 26,6 91 50 17 26 7 54 32 14

01.1974 23,0 91 25 4 20 I 80 16 4

08.1974 22,6 77 50 12 35 3 70 24 6

02.1975 27,4 91 50 II 39 0 78 ' 22 0

08.1975 36,0 90 50 13 36 I 72 26 2

350 10.1972 28 77 50 14 36 0 72 ■ 28 0

05.1973 16 52 50 15 31 4 ' 62 30 ' 8

01.1974 27,6 82 48 К 30 4 62,5 29,2 8,3

08.1974 19,8 86 51 10 41 0 80 20 О

02.1975 33 90 50 13 35 2 70 26 /,

08.1975 31,4 89 44 16 25 3 56,8 36,3 7,5

927 10.1972 19 78 32 а 22 2 68,8 25 6,2

05.1973 19,4 91 51 19 29 3 56,8 38,3 5,9

01.1974 24,6 87 28 4 23 I 82,1 14,4 3|5

08.1974 22,0 89 32 II 19 2 59,4 34,4 6,2

02.1975 17,8 86 50 16 34 О 68 32 0

07.1975 16,4 76" 50 16 31 3 62 , 32 6

945 10.1972 15,8 81 50 10 37 3 74 .20 6

05.1973 20 90 25 6 14 5 56 24 20

01.1974 13,8 82 50 9 40 I • 80 ■ 18 2

08.1974 15 80 50 10 36 4 72 20 8

10.1975 24 78 50 12 35 3 70 24 • 6

1665 02.1973 16,4 76 50 22 25 3 50 44 6

05.1973 18,2 80 50 15 30 5 60 30 10

01.1974 22,6 82 50 18 26 6 52 36 12

354 02.1973 18,6 74 52 16 32 4 61,6 30,8 7,6

05.1973 16,2 78 51 20 28 3 54,9 39,2 5,9

01.1974 25,6 82 50 16 30 4 60 32 8,0

сходство аномалий хромосомного аппарата. Отличив заключалось в том, что в костном мозге отмечали меньшее количество клеток с - сверхкомплектными, хромосомами; наибольшее число гиперллоидных мета-фаз обнаруживали в лимфатических узлах. Сходство изменений хромосом заключалось в обнаружении в разных клетках системы крови кариотипически однотипных клонов. Ыитотическая активность и реакция бласттрансформации лимфоидных клеток у животных с аномалиями хромосом были резко снижены. Различный уровень хромосомной изменчивости в зависимости от локализации лимфатических узлов свидетельствует о неодинаковом вовлечении их в лейкозный процесс. Цитогене— тическое и гистологическое исследования лимфатических узлов, экс-■ тирпированных с интервалов в несколько лет у одних и тех же больных животных, показали, что аномалии хромосом обнаруживаются у них до появления морфологических изменений лейкозного характера в органах и тканях. •

Сравнительными цитогенетическими исследованиями различных ге-мопоэтических клеток"больных лейкозом животных установлен более высокий уровень хромосомной изменчивости клеток лимфопоэтической системы, первичное и более интенсивное вовлечение их в патологический процесс, чем клеток костного мозга.

Изучение реакции бластной трансформации лимфоцитов (РВТЛ) и митотической активности (НА) лимфоидных клеток периферической крови и лимфатических узлов, являющихся функциональными характеристиками клеточного генома, проводили на 28 больных лейкозом и б здоровых коровах, культивируя 1л »/Иго лимфоциты, стимулированные фитогемагглютинином (ФГА).

Показатели РБТЛ и НА лимфоидных клеток периферической крови для здоровых животных составляли, соответственно, 53-57Х и 10-12*0, для больных лейкозом 0-37,331 и 0-3,ОХо. Аналогичные пока-

эатели лимфоидных клеток лимфоузлов для здоровых животных составили, соответственно, 51,5-53% и 32-33%о. У больных лейкозом норов РБТЛ варьировала от О до 10%. Следовательно, показатели РБТЛ и МА пимфоидных клеток крови и лимфоузлов больных лейкозом коров, в сравнении с здоровыми, резко снижены. Снижение уровня РБТЛ прямо коррелировало с уменьшением уровня МА. Митотическому делению подвергаются собственно бластние клетки.

Цитогенетическое исследование и изучение РБТЛ в динамике лей-газного процесса показало существование цикличности появления в 1ериферической крови лимфоидных клеток, способных митотически деяться. Выраженность РБТЛ и МА не зависят от длительности течения 1ейкозного процесса и возраста.

Таким образом, при лейкозе крупного рогатого скота резко сни-кено число функционально полноценных лимфоидных клеток, способных с властной трансформации и митотическому делению. Показатели РБТЛ 1 МА являются дополнительными тестами, подтверждающими достовер-юсть прижизненной диагностики ле#ко.за. Так, гематологический.диаг-юз на лейкоз считается подтвержденным при показателе РБТЛ ниже $5%.

Цитогенетическое*и гематологическое исследования потомков ¡ольных лейкозов коров-матерей (изучение наследования.предраспо-юяенности к заболеванию лейкозом) проводили на 22 животных (16 телочек и 6 бычков) в возрасте от 2 месяцев до 3 лет черно-пест-юй, костромской и бурой латвийской пород, происходивших от боль-1ых'лейкозом коров-матерей.

В качестве контроля исследовали 6 потомков здоровых коров.

У 36,3% потомков от больных лейкозом коров-матерей установле-1Ы аномалии в хромосомном аппарате клеток костного мозга и гемато-югические изменения, свойственные лейкозу. У некоторых животных

значительное количество клеток с аномальным набором хромосом обнаруживали в возрасте 2-6 месяцев, тогда как изменения в крови, характерные для лейкоза, устанавливали у тех же животных в возрасте 8-13 месяцев. Волее одной трети потомков больных лейкозом коров имели генотипическую предрасположенность к лейкозу. Обнаруженная уже в раннем возрасте анеуплоидия стабильно сохранялась у них в взрослом состоянии. Выявленные при этом гиперплоидные клетки и лимфоцитов, характерные для лсЯкозного процесса, свидетельствуют о дисбалансе генотипа потомков и наследственно закрепленном нарушении нормальной регуляции их генетичесного аппарата кроветворных клеток.

Цитогенетическое исследование устойчивости к инфекции ВЛКРС животных некоторых пород крупного рогатого скота провели у 36 коров 2-й лактации голландской и айрширекой, изицкой и симментальской пород из 2 хозяйств, неблагополучных по лейкозу. По каждой породе были сформированы 3 группы по принципу аналогов., но имеюцих различные гематологические и серологические показатели. Первая группа (контроль) - здоровые животные, 2 группа - серопозитивные животные л 3 группа - серопозитивные животные с гематологическими изменениями, характерными для лейкоза.

У коров 2 группы исследованных пород изменений хромосом не отмечали. В 3 группе"~коров молочного направления при сопоставлении с коровами комбинированного направления в каждых из 100 метафазкых■ пластинок число клеток с сверхкомплектными хромосомами было статистически достоверно в 2-4 раза выше (Р=0,99). Патоиорфологическое "исследование животных 3 группы подтвердило наличие лейкоэных изменений у коров молочного направления и отсутствие таковых у коров комбинированного направления, а также у животных второй и первой групп.

Следовательно, ВЛКРС в организме инфицированного животного не • сразу вызывает морфологические изменения, обусловленные пролиферацией лейкозных клеток. Сопоставление результатов цитогенетических, серологических и патоморфологических изменений указывает, что у коров 3 группы швицкой и симментальской пород имеет место динамическое равновесие меаду инфекцией ВЛКРС, лейкозными (гиперплоидными) клетка?« и генетически обусловленной резистентностью организма. В результате патологический процесс ограничивается только гематологическими изменениями и не переходит в опухолевую стадию. Генетический потенциал молочности коров голландской и айраирсной пород значительно вьие, чем у коров комбинированного направления и в определенной степени "расшатан" молочной продуктивностью, это пагубно влияет на общую резистентность животных этих пород. Сопротивляемость у них снижается, что проявляется более тяжелым лейкозным процессом, проявляющимся высокими показателями хромосомной изменчивости и патоморфологическими изменениями в органах.

Изучение действия ВЛКРС на хромосомы соматических клеток при их культивировании /¿tío В продуцирующей ВЛКРС культуре, полученной кокультивированием клеток ПЗК (почки эмбриона коровы) от 1 . серонегативной коровы из благополучного по лейкозу хозяйства с лимфоцитами крови коровы больной лейкозом цитогенетическим исследованием клеток 7, 25, 47 пассажей установлена реорганизация хромосомного аппарата, которая проявлялась снижением до 49£ количества диплоидных клеток в ? и полном исчезновении их в 47 пассажах. Одновременно отмечали появление многочисленной популяции клеток с 50-51 хромосомами и клеток с II-I3 хромосомами метацентрического типа, несвойственными кариотипу здорового крупного рогатого скота."

В качестве контроля цитогенетическим методом исследовали представленные с.н.с. А.А.Поздняковым свободные от ВЛКРС перепивае-

мые культуры клеток: ТИ (трахея эмбриона крупного рогатого скота, прошла более 60 пассажей), ПТ (почка теленка, 44 пассаж) и ПО (почка овцы, 20 пассаж). Отсутствие ВЛКРС в культуре ПТ подтверждено в институте вирусологии им.Д.И.Ивановского, в культуре ТН старшим научным сотрудником лаборатории биофизики ВИЗВ Г.А.Надточием.

В клетках культур!/? и ПТ выявлены изменения хромосом, сходные с таковыми в клетках культуры ПЭК, репродуцирующей ВЛКРС. Отмечали преобладание клона клеток с 51 хромосомой, наличие в.клетках хромосом ыетацентрического типа, не выявляемых в норме.

В культуре клеток почки овцы (ПО) вместо свойственного карио-типу овцы наоора хромосом во всех проанализированных иетафазах выявляли 8-17 хромосом ыетацентрического и 6-1I хромосом субмета-центрического типа при обвей численности хромосом от 70 до 81.

Следовательно, сходство изменений хромосом в клетках культуры ПЭК, хронически инфицированных ВЛКРС, и клетках культур Ж , ИТ, ПО, свободных от вируаа,позволяет считать, что обнаруженная реорганизация .хромосомного'аппарата клеток во всех указанных культурах обусловлена не действием ВЛКРС, а другими факторами, не связанными с вирусом лейкоза.

Генетико-эпизоотологический анализ проявления лейкоза и бессимптомной инфекции ВЛКРС у животных в популяциях, неблагополучных по лейкозу.

' Клинико-гематологическое проявление лейкоза и бессимптомной инфекции ВЛКРС в семействах коров. Популяционно-генетический анализ клинмко-гематологического проявления лейкоза и бессимптомной инфекции ВЛКРС в семействах коров проведен в 2 племенных хозяйствах на 5540 животных голштинской и симментальской пород. В обеих породах зараженных ВЛКРС обнаруживали как в благополучных, так и в

неблагополучных по лейкозу семействах. Анализ с учетом отдельно взятых семейств показал, что в благополучных по лейкозу семействах, в сравнении с неблагополучными, количество серонегативных животных было а 1,8-2,5 раза больше. Полученные результаты подтверждены также анализом совокупных выборок, выполненным на животных голштинской породы (Р> 0,95). В парах "мать-дочь", свободных от лейкоза и пощаженных им, количество больных лейкозом дочепеи было в 2,8 раза больше в группе больных коров (26,2%), в сравнении с здоровыми (7,6£). К приведенному показатели близок таковой для взрослых дочерей, происходиваих от коров с бессимптомной инфекцией ВЛКРС (таблица 4, 5).

Анализ частоты янфицированносги телок голштинской породы в возрасте 6 месяцев показал, что число телок, зараженных вирусом, в семействах неблагополучных по лейкозу почти в три раза превышало таковое в благополучных семействах (таблица 6).

Таблица 4

Анализ частоты клинико-гематологического проявления лейкоза', в парах "мать-дочь" голитинской породы при неодинаковом статусе по лейкозу матерей

Статус матерей по лейкозу Пары ! д о ч ери

(П) ! здоровые 1 больные лейкозом

п ! К ( п ! %

Здоровые 158 142 90 ,7 16 9,3

Больные 263 194 73 8 6Э 26,2

Анализ частоты кликико-гематологического проявления лейкоза у взрослых дочеоей- в парах "мать-дочь" голштинской породы с учетом неодинакового серологического статуса матерей

Серологический статус коров- ! матерей !

Пары 'мать-дочь" (п)

дочери

здоровые п I '%

!

больные лейкозом ........%"'

п

Серонега-тивные

93

Серопози-тивные 172

86 140

92,4 80,3

7

32

7,6 19,7

Таблица б

Анализ частоты проявления инфицированности у телок в возрасте 6 месяцев в парах "мать-дочь" при неодинаковом статусе по лейкозу матерей

Статус ! Пары ! матерей по!"магь-дочб"!-лейкозу ! (п) !

I !-

! !

дочери

сероиегативные

п

!

%

серопозитивные

.......! ¡Г"

п

Здоровые Больные

378 115

353 94

93,4 81,7

25 21

6,6 18,3

' Несмотря на почти одинаковый в указанных.хозяйствах первоначальный уровень инфицированности маточного поголовья (41,6 и 39,2%) О отноиение числа семейств свободных от лейкоза к порааенным им резко разнилось и составляло в голштинской породе 3:1, а в симментальской - 6:1. Сходное положение было и по частоте инфицированности яивотных непосредственно в семействах. Так, в семействах гол-

штинской породы, свободных от лейкоза, количество серонегативных животных вдвое превышало число серопозитивных яивотных; количественное отношение серонегативных к серопозитивниу животным симментальской породы составило 3:1. В симментальской породе, в сравнении с голштинской, в парах "мать-дочь" вдвое меньшая заболеваемость лейкозом дочерей, происходящих от больных матерей. Аналогичное и неслучайное положение отмечено и среди дочерей, происходящих от здоровых матерей.

Полученные результаты указываит на то, что способность Ш5КРС заражать здоровый организм животного обусловлена не только абсолютно .свойствами вируса, но и генотипом .чивоткого, устойчивостью животного, связанной с-породой. Проявление в семействах лейкоза и инфицированности у животных голштинской и симментальской пород, сопоставление их между собой и обнаруженные при этом различия являются серьезным аргументом в пользу наследственной детерминированности клинико-гематологического проявления болезни или бессимптомной инфекции ВЛКРС и большей генетической устойчивости животных симментальской породы к Вирусу лейкоза.

Исследование устойчивости организма к инфекции ВЛКРС в естественных условиях проведено на 8580 животных айрширской, голландской, эстонской черно-пестрой, голштинской, симментальской, черно-пестрой и холмогорской пород в 4 неблагополучных по лейкозу хозяйствах. В стадах было инйицировано ВЛКРС 20,6-37% коров; из 782 семейств, составлявших их, 75,5-95,2% свободны от инфекции ВЛКРС.

В одном неблагополучном по лейкозу стаде с превалентностью инфекции ВЛКРС среди коров 20,6% в течение 7 лет осуществляли серо: логический контроль. Из 295 подконтрольных коров 203 (68,8%) животных, в течение 3-6,5 лет находясь в лейкозном очаге, не заразились

ВЛКРС (таблица 7).

Выявление устойчивых к ВЛКРС коров, содержащихся ' в лейкозноы стеде

Продолжител ьность!Обцее количест во! отрицательных в ¡коров, контро- ! РИД результатов ¡лируеыых в РИД ! (лет) ! (п^) 1 Выявлено ! серонегативных ! коров ! <п2) % п2/п1

3 67 42 .62,6

3,5 69 46 66,6 .

4 45 31 68,8

4,5 36 2Э' 80,5

5 31 27 87,0

5,5 16 8 Ьо.о

6 10 6 60,0

6,5 21 14 66,6

Всего 295 203 68,8

В анализируемой популяции, наряду с серонегативными коровами, выявлены серолозитивные животные, которые в течение 2-6,5 лет были, в состоянии бессимптомной инфекции ВЛКРС,не проявляя клинико-гематологических признаков лейкоза.

Следовательно, в неблагополучных по лейкозу стадах обнаруживали две категории животных: одна - устойчивая к заражению ВЛКРС, • другая - с бессимптомным течением инфекции ВЛКРС.

Проведенные в течение 4 лет одновременно гематологические и серологические исследования сероПозитивных животных из семейств с различным благополучием по лейкозу показали, что коровы из пораженных семейств заболели лейкозом в 8 раз чаще, чем коровы из. се-

мейств, свободных от лейкоза (Р> 0,999).

Частота зараженности ВЛКРС потомков 3 групп коров с неодинаковым гематологическим и серологическим статусом (1-я группа - се-ропозитивные с гематологическим и/или гистологическим подтверждением лейкоза; 2-я - серопозитивные без гематологических изменений в течение 2-6,5 лет; 3-я - серонегативные без гематологических изменений в течение 3-6,5 лет) была наибольшей среди потомчоз первой группы коров (¡5%). Результат статистически достоверен (Р> 0,95). Количества серопозитивных потомков 2 и 3 групп коров были минимальными и между собой достоверно не различались. Подтверждается высказанное ранее положение о том, что коровы второй и

г

третьей групп проявляют сходную наследственную устойчивость к заболеванию лейкозом. С другой стороны, потомство указанных групп коров наследует определенную резистентность к заражению ВЛКРС.

Таким образом, в неблагополучных по лейкозу популяциях имеются животные, обладающие наследственной относительной устойчивостью к заражению ВЛКРС, которая наследуется потомством.

Исследование устойчивости организма к инфекции ВЛКРС в эксперименте. Для изучения устойчивости к инфекции ВЛКРС, установленной у животных в естественных условиях, поставлен следующий опыт. 8 2 неблагополучных по лейкозу хозяйствах отобрали 8 коров (5 и 3 коровы, соответственно хозяйствам)'из семейств, свободных от лейкоза. Указанные животные несколько лет оставались серонега-тизииж, находясь в инфицированных популяциях. В одном хозяйстве 5 подопытным коровам ввели кровь коровы-донора, серопоэитивной в течение 7 лет, но имеющей нормальную картину крови; в другом хозяйстве 3 подопытным коровам ввели кровь серопоэитивной коровы-донора, больной лейкозом. Кроме того, в каждом из хозяйств 3 серонегативньм телкам 6-месячного возраста от серонегативных ко-

ров-матерсл с нормальной картиной кроаи, происходивших из семейств, свободных от лейкоза, ввели кровь заразившихся коров-реци-пиеитор. В ходе опыта подопытные коровы и телки стали серопози-тивными.

Следовательно, в эксперименте установлено, что у животных, в течение нескольких лет остававшихся здоровыми и серонегативными в популяции животных с инфекцией ВЛКРС, после парентерального введения большого количества вируссодержащих лимфоцитов развивался инфекционный процесс, выявляемый серологическим методом.

Близнецовые исследования при лейкозе.- В 8 хозяйствах, неблагополучных по инфекции ВЛКРС, с уровнем инфицированное™ коров 13-733. изучали 35 пар двойневых животных разного пола и возраста, а так;«« их коров-матерей. Кивотных-двоен условно разделили на 4 группы. В I группу вошли 1-15 пары, исследованные в РИД; 2 группу составили 16-24 пары, которых исследовали в РИД и гематологически;'• 3 группу представили собой 25-31 пары, исследованные в РИД, гематологически и цитогенетически. При этом 25-27 пары двоен происходили от коров-матерей, находившихся несколько лет в инфицированном стаде, но имевших нормальную картину крови и отрицательно реагировав®:« в РИД; 28 и 29 пары двоен, происходили от коров, которые таи1 зе, как и предыдущие коровы, длительно находились в инфицированном стаде, реагировали в РИД положительно без проявления гематологических изменений; 30 и 31 пары двоен происходили от серопозитивных норов, больных лейкозом. 4 группу составили 32-35 пары двоен, исследованных в РИД. При этом 32 и 33 пары происходили от коровы, отелившейся двазды в году; 34 и 35 пары разнополых авоен родились от коровы, соответственно, во втором и четвертом отелах. Коров-матерей двоен I, 2 и 4 групп исследовали в РИД I раз до отела, коров 3 группы 4-6 раз.

Из 35 пар двоен 25 родились от серопозитивных и 10-от сероне-гативных коров-матерей. Все 10 пар двоен в воэр.асте 6-15 месяцев были исследованы серологическим методом и реагировали отрицательно в РИД. Из 25 пар двоен от серопозитивных коров-матерей положительно реагировали в РИД только 2 пары с возрасте б и 3 месяцев. Двойни из 25-29 пар, происходившие от коров-матерей с повышенной резистентностью к лейкозу, в возрасте 8-13 были серонегативными. В 30-31 парах все телки в возрасте 6 и 10 месяцев были серонегативными, в возрасте 20 и 23 месяца у 2 телок (одна из 30-й, вторая -из 31-й пары) обнаружили в сыворотке крови антитела к ВЛКРС и изменения хромосом, свойственные лейкозу (7 и 125! гиперплоидных мета-фаз). В последующем у них гематологическим методом подтвержден лейкоз.

Таким образом, результаты исследования двоен показывают, что внутриутробная передача инфекции ВЛКРС случайна. В этом плане уникальным материалом, подтверждающим высказанное положение, являются результаты, полученные при исследовании телок-двоен 32-35 пар.

Эф$ект, наблюдаемый у двоен 25-29 пар следует расценивать как наследование потомством материнской устойчивости к инфекции ВЛКРС. Напротив, эффект отмеченный у двоен 30 и 31 пар, указывает на существование у них высокой степени предрасположенности к заболеванию лейкозом и восприимчивости к ВЛКРС.- Форма проявления инфекции в каждом конкретном случае, по-видимому, зависит от характера и амплитуды наследственной изменчивости взаимодействующих между собой ВЛКРС и макроорганизма животного.

Инфекцию ВЛКРС среди быков-производителей с учетом породы изучали на.животных черно-пестрых, красных, симментальской, айршир-ской, швицкой пород. К черно-пестрым породам были отнесены быки-производители черно-пестрых пород: немецкой, литовской, эстонской,

датской, голландской, британо-фризской, голвтинской пород; к красным породам - красной литовской, красной эстонской, бурой латвийской, красной степной; к симментальской - быки сычевской порода, Всего исследовали в РИД 1725 быков 15 племпредприятий.

Наибольшее неблагополучие по инфекции ВЛКРС отмечали среди быков черно-пестрых (17,73») и красных (18,4Х) пород. Между частотой инфицированности быков черно-пестрых и красных пород статистически достоверных различий не выявлено (X2 = 0,8 Р-< 0,95); напротив, существенные различия, подтверждены при сопоставлении уровней

о

Инфицированности красных и симментальской пород (X =4,3 Р> 0,65). Установлена незначительная зараженность ВЛКРС быков ярославской (7,6%) л холмогорской (5,8%) пород; среди быков айр-аирской и швицкой пород животных,, инфицированных ВЛКРС (серолоэи-тизных), не обнаруживали. Показатель частоты инфицированности быков черно-пестрых пород (17.7%) согласуется с таковым среди быков собственно черно-пестрой породы (20,IX).

Наименьшая зараженность или полное благополучие по инфекции ВЛКРС быков-производителей симментальской, айрширской, швицкой, ярославской и холмогорской пород,- содержаввихся в племпредприятиях совместно с быками черно-пестрых и красных пород, свидетельствуют о существовании наследственно обусловленной относительной устойчивости животных некоторых пород к заражении ВЛКРС.

Влияние половых признаков на частоту инфицированности животных изучали на II8II телятах 6-месячного возраста, из них 8783 телки и 3028 бычков. Не было выявлено между ними существенных различий в степени инфицированности как в популяциях с минимальным и максимальным уровнями инфицированности, так и с учетом пород.

Сравнительная оценка эффективности различных 'вариантов ликвидации инфекции ВЛКРС. используемых в системе оздоровительных ме-

роприятий. В производственных условиях испытывали различные варианта в 7 племенных хозяйствах и 9 племпредприятиях, неблагополучных по лейкозу и инфекции ВЛКРС, с поголовьем 21 тыс. животных, в т.ч. 8400 коров и 764 быка-производителя.

В системе оздоровительных мероприятий были апробированы 4 варианта:

Первый вариант - постоянный серологический контроль в процессе выращивания нетелей и ввод их в стадо, где содержатся животные с бессимптомной инфекцией ВЛКРС,

Второй вариант - основан на разделении популяции коров с формированием серонегативной и серопозитивноЯ групп животных,

Третий вариант - предусматривает одномоментную замену всех серопозитивных коров на ферме (скотном дворе) серонегатив.ными первотелками, выращенными на изолированной ферме под серологическим контролем,

Четвертый вариант - оздоровление от инфекции ВЛКРС быков-производителей племпредприятий. •

Оздоровление по первому варианту. Осуществлялся постоянный ввод в популяцию коров с бессимптомной-инфекцией ВЛКРС серонегатив-ных нетелей (хозяйство "Марьино"). Хозяйство неблагополучно по лейкозу с декабря 1980-года. С февраля 1981 года оздоровление проводили, используя клинико-гематологический, серологический, ватоморфологический и генеалогический методы. При этом из стада выводили только больных лейкозом коров и серопозитивный молодняк.. Ремонт стада осуществляли серонегативньши нетелями. Их вводили в популяцию, где находились серопозитивные коровы. Это было связано с отсутствием помещений для раздельного содержания животных с учетом их серологического статуса. Серопозитивных коров выводили из стада после выбраковки их по хозяйственно-полезным признакам.

Зг'2 коровы были размещены на I ферме в восьмирядном моноблоке. Ферма функционировала по типу закрытого предприятия. Содержание животных весь год было стойлово-выгульное. Отел коров и нетелей проводили в одном родильном отделении, сблокированном с профилакторием для телят. Новорожденных телят первые 10 дней содержали в индивидуальных клетках профилактория, скармливая им молозиво и молоко матерей. Затем телят переводили в обособленное помещение, размещая группами из 8-10 телят. 8 течение молочного периода выращивания им скармливали сборное молоко и обрат после пастеризации. В послемолочный период телят переводили в другое помещение, где их содержали до 6- месячного возраста без привязи. В возрасте 6 месяцев их исследовали в РИД, серопоэитивных особей удаляли, серонега-тивных телят размещали в скотных дворах с учетом возрастных групп, с самостоятельным выгульными площадками.

Животных старие 2 лет с интервалом в 6 месяцев исследовали гематологическим методом. В РИД исследовали всех телок в 6, 12 месяцев, перед их осеменением и в 6-7 месячной стельности.

Через 2,5 года в стаде не обнаруживали животных с клинико-ге-матологическим проявлением лейкоза. Инфицированность животных ВЛКРС в маточном стаде при первом серологическом исследовании составляла 20, Удалось снизить ее за это время лишь до Н.2Х (таблица 8).

■ Таким образом, апробированный в неблагополучном по лейкозу хозяйстве "Марьино" вариант ликвидации инфекции ВЛКРС оказался неэффективным .

Оздоровление по второму варианту - Разделение популяции коров ча две группы с учетом их серологического статуса в хозяйствах "Марьино", "Непецино", "Тульская Нива" - на I ферме, в хозяйствах "Память Ильича" и "Ленинский Луч", соответственно, на 2 и 3 фор-

мах. На момент разделения коров на группы уровень их инфицирован-нссти ВЛКРС и гематологического проявления лейкоза (в среднем за год) составляли, соответственно, для первых двух хозяйств II,ЭХ и 0; 12,8 и 0,9«, а для остальных 64,6 и 6,3%, 32 и 1,9%, 49,2 и 0.8%.

Таблица 8

Результаты ликвидации инфекции ВЛКРС в стаде при применении метода постоянного ввода в инфицированную популяцию серон^гативных животных

Хозяйство "Марьино1*

Дата исследования ! Исследовано ! ! коров ( п) ! Выявлено серопояитивных коров

18.2.1981 383 79 ' 20,6

17.9.1981 372 82 22,0

25.3.1982 381 58 13,3

7.9.1982 362 73 20,1

16.3.1983 368 - 67 18,2

29.8.1983 361 63 17,4

18.3.1934 ' 366 63 17,2

20.9.1984 366 61 16,6

12.3.1985 389 48 12,3

12.9.1985 . 366 43 11,7

31.3.1986 370 53 . ' 14,3

8.9.1385 ■ 367 52 14,1

•9.3.1987 364 41 II,2+

+ при этом уровне инфицированности коров стадо разделили 5.6.1987 г.

Результаты ликвидации инфекции ВЛКРС в хозяйстве "Марьино* представлены в таблице 9. Перед разделением стада (9.3. 1987 г.) выявили II.2% серопозитивных коров.

Таблица 9

Результата серологического исследования на лейкоз в хозяйстве "Марьино" "серонегативной" группы в динамике

Дата исследования ! Количество ! Выявлено серопозитивных

! коров ! Количество ! 8

6.9.1987 . 368 ' 22 5,9 21.3.1088 350 4 1.1

6.6.1988 336 5 .1,4 6.9.1988 373- .0 О

20.2.1938 382 0 0

26.8.1989 372 0 0

2.3.1990 410 О О

После разделения стадо коров серонегат-,*£ной группы исследовали в РИД с интервалом I раз в б месяцев, после каждого исследования удаляли серопозитивных коров, через 15 месяцев были получены первые отрицательные результаты по всей группе коров, подтвердившиеся в дальнейшем трижды в течение 1,5 лет. Дважды в последние 2 исследования (28.8 1989 и 22.3. 1990 г.) отрицательно реагировал также весь молодняк старше 6 месяцев.

В хозяйстве "Непецино" также эффективно ликвидировали инфекцию ВЛКРС в течение 19 месяцев. В отличие от хозяйства "Марьино стадо разделили сразу после первого серологического исследования, при котором обнаружено 12,8% коров с инфекцией ВЛКРС. На 4 дворах фермы сосредоточили серонегативных и в I - серопозитивных коров,

которых в течение 6 месяцев вывели из хозяйства. При этом очередные исследования коров проводили с интервалом в 3 месяца. После каждого серологического исследования сероиегативной группы удаляли серопозитивных коров, на замену им вводили серонегативных нетелей. В 2 дворах инфекцию ВЛКРС ликвидировали за 9 и в 2-х - за 19 месяцев.

В хозяйстве "Тульская Нива" в 2 дворах первоначальная зараженность ВЛКРС коров бала 61,4 и 64%. Провели разделение жиеотных, изолировав 265 серонегативных коров, которых исследовали в РИД че-' рез каждые 6 месяцев. Через 42 месяца инфицированность их уменьаи-ли в 20 раз (2,85!), однако, оздоровления не достигли.

Через 42 месяца ликвидировали инфекции ВЛКРС на одной ферме хозяйства "Память Ильича". Необходимо отметить, что превалентность инфекции ВЛКРС на этой ферме была 16,6%, тогда как среднем по хозяйству среди маточного поголовья было выявлено 32?! серопозитивных коров.

В хозяйстве "Ленинский Луч" одна ферма с превалентностыо 45,6* коров с инфекцией ВЛКРС была оздоровлена эа .30 месяцев (таблица 10).

Оздоровление по третьему варианту-с одномоментной полной заменой серопозитивных коров на Ферме серснегативными первотелками в хозяйствах "Заря Коммунизма" и "Константинове".

В указанных' хозяйствах 4350 коров-размещены, соответственно, на 9 и 3 фермах, зараженность коров ВЛКРС составляет 59,8 и.67,1%, При такой ситуации разделение стада не проводили и всех коров удалили с ферм. После соответствующей механической очистки и дезинфекции на фермы одномоментно ввели серонегативных первотелок, выращенных на изолированной ферме и проведших неоднократное исследование в РИД. Выполненное по этому принципу мероприятие по оздоров-

Результаты серологического исследования инфекции ВДКРС на ферме хозяйства "Ленинский Луч"

Дата исследования ! I ! Исследовано ! ! коров ! Выявлено серопозитивных ( п, > ! %

8.12.198? 600 274 45,6

22. 3.1938 372 67 18,1

7. 7. ¡953 310 22 7,0

17.10.1988 442 ■ 17 3,8

31. 1.1989 456 14 3,0

27. 4.1989 446 7 1,5

24. 8.1985 454 0 0

ЗОЛ 1.1569 450 I 0,2

2. 3.1990 428 ■ .0 0

8. 6.1990 462 0 0

декига в сочетании с четким, с интервалом в 3 месяца, серологическим контролем животных позволило в хозяйстве "Заря коммунизма" ликвидировать инфекцию ВДКРС на 7 и в хозяйстве "Константиново" на 3 фермах. При этом на большинстве ферм первые отрицательные в РИД результаты по всему поголовью получены через 5-15 месяцев. Результаты серологических исследований представлены в таблице II.

Применяя указанный методический подход при более 60% зараженности коров ВДКРС, выявляемой при первом исследовании, удалось ликвидировать инфекцию ВЛКРС и создать фермы из серонегативных коров в течение 2 лет. -

Оздоровление по четвертому варианту - ликвидацию инфекции ¿ЛКРС -на плешредприятйяХ применили при оздоровлении 764 быков -производителей 9 племпредприятий в 3 регионах страны.- Все быки ука-

Эффективность оздоровления от инфекции ВЛКРС стад методой одномоментной замены серопозитивных коров серонегативньми первотелками

Дата исследования! Исследовано!Выявлено серопозитивных¡Срок оздо-! коров ! I л > ! % ¡ровлеиия • ! ? ! ! (мес.)

I

1

2

!

4

!

7.12.1987

24. 6.1988 16.11.1988

25. 1.1989 3. 5.1989

Хозяйство "Заря Коммунизма" Ферма 111-1 Двор - 2

208 203 200

193

194

16 I 4 0 0

7,6 0.4

2.0

О

О

13

Ферма К

24. 8.1987 17.12.1987 14. 4.1988 26. 7.1988 9.12.1988

118 129 115 107 120'

0,8 6,2 0,8 0 О

II

22. 7.1988 23.II.Л 988 20. 1.1989 25. 4.1989 15. 9.1389 27.12.1989

358 358 343 312 3-26 346

Ферма Ц-2.

4 2 О

■• 1 О О

1,1 0,5 О

0,3

о о

14

5. 3.1988 2. 6.1988 7. 9.1988 4.12.1988

Хозяйство "Константинове"

Ферма Ц Двор 2

194 8 4,1

194 2 1,0'

163 О О

189 О О

Продолжение таблицы *3.....!.....4 ! 5~

18. 3.1988

20. 6.1988

22. 9.1988 17.12.1988

22. 3.1989.

16. 6.1989

17. 3.IS88 22. 6.1988

7. 9.1988

5. 1.1989

16. 3.1989

23. 9.1988 29. 3.198« 2.10.198!»

Двор 3

294 180 270 181 195 185

155 173 184 231 193

Двор 4

8

0

1 О О

Ферма H Двор I 121 О

185 О

148 О

1,7

0,5

0,3

0,5

О

О

5,1 О

0,5

О

О

15

10

Примечание. Последующими, с интервалом 6 месяцев, неоднократными исследованиями в РИД "(включая 1990 год) серопоэитивных животных не выявляли. . ■ •

занных племпредприятий, несмотря на разный уровень их инфицирован; =

ности (минимальный - 6,2«, максимальный - 53,6%), оэдоро^ёйы'от

Ч ' '

инфекции ВЛКРС в относительно неболыаие сроки - от 7 до ГО месяцев (таблица 12) путем Еывода серопоэитивных животных-.

После ликвидации инфекции ВЛКРС устойчивое благополучие быков племпредприятий сохраняется уже в течение 3 лет (срок наблюдения). Успешное искоренение инфекции ВЛКРС обеспечивалось не только удалением из племпредприятий серопозитивных быков," но и строгим серо-

I

Эффективность искоренения инфекции ВЛКРС у быков-произвозителей племпредприятий с использованием серологического (РИД) метода

«предприятия ■ и с с л е д о в а н и я

1 ! 'П..... Г И 1 ■ IV ! V

п ! с ! п ! с ! п ! с п ! с Г" п"Г с

I 208 6,2 176 2,8 175 0,5 167 0 170 0

2 59 40,6 41 9,7 43 0 46 0 61' 0

3 52 32,6 43 0 44 О 94 0 37 0

4 41 53,6 22 13,6 34 0 43 0 42 0

5 44 27,2 42 19,0 39 0 . 46' 0 40 0

6 47 25,5 42 2,3 44 0 46 0 44 0

7 ПО 10,9 108 2.7 '106 0 106 3,9 -ИЗ 0

8 156 7,6 135 О 180 0 181 0

9 47 23,4 36 0 45 0 . 48 0

Примечание, п - количество исследованных быков

с - выявлено серопозитивных быков (в %■) логическим контролем вводимых на племпредприятия быков.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ результатов собственных исследований и литературных материалов убеждает в три, что возникновение и распространение лейкоза крупного рогатого скота обусловлено ВЛКРС, характеризующимся слабой заразительностью и малой онкогенностыа. Реализация инфекционного процесса связана с наследственностью и ненаследственными - эпизоотологическями факторами.

Цитогенетические и клинико-гематологические исследования ' потомков больных лейкозом коров-матерей показали, что у более одной трети животных в возрасте от 2-6 месяцев до 3 лет обнаружи- .

Баются аномалии в хромосомном аппарате клеток костного мозга и изменения количества лимфоцитов в крови, свойственные лейкозу. Эти факты доказывают существование наследственной предрасположенности к клинико-гематологическому проявлению лейкоза. В условиях хозяйств при почти ЮОЯ-ной инфицированности коров ВЛКРС в течение 3 лет отмечали небольшое число животных с гематологическим проявлением лейкоза.

На примере голитннской и симментальской' пород крупного рогатого скота обнаружено принципиальное различие в манифестации лейкоза и носительства антител к ВЛКРС в семействах коров неблагополучных по лейкозу.хозяйств. Показано, что в семействах, скомпрометированных по лейкозу к инфекции ВЛКРС, в сравнении с семействами, альтернативными по указанным признакам, в 2 и более раз чаще отмечали лейкоз и частоту инфицирования ВЛКРС потомства.

Наряду с наследственной предрасположенностью установлена генетически обусловленная устойчивость животных к лейкозу. Это подтверждается наличием в популяции крупного рогатого скота с инфекцией ВЛКРС двух категорий животных устойчивых к лейкозу: серонега-тивные животные, которые при длительном контакте с животными инфицированной популяции ВЛКРС не заражаются; серопозитивные животные, у которых длительное время выявляют только бессимптомную инфекцию ВЛКРС,

При взаимодействии ВЛКРС с клетками культуры ГШ не отмечено в них изменений хромосом, обнаруживаемых в клетках системы крови при лейкозе крупного рогатого скота. •

Динамические цитогенетичесние и клинико-гематологические исследования больных лейкозом коров позволили установить у них характерные для лейкозного процесса изменения, хромосом, появление аномальных гиперплоидяых клеток. V потомства больных лейкозом коров

изменения в наследственной структуре гемопоэтических клеток обнаруживали в раннем возрасте, они имеют прогностическое значение в развитии лейкозного процесса. Установлена прогрессия изменений, характеризующаяся дестабилизацией клеточного генома, его функциональным разбалансированием - изменением кариотипа, резким снижением реакции бласттрансформации и митотичесной активности лимфоидных клеток. Совокупность этих аномалий в коневом итоге обуолорчивает реализацию лейкозного процесса. Поэтому указанные аномалии являются объективным показателем разрегулированности клеточного.генома и достоверным тестом прижизненной диагностики лейкоза.

Показано, что между ВЛКРС, клеткой-мишенью и животным организмом-хозяином существуют сложные взаимоотношения. ВЛКРС является инициатором инфекционного процесса, полная реализация которого в форме гематологического или опухолевого проявления /сикоза во многом зависит от клеточных систем макроорганизма. Так, у большинства серопозитивных животных не обнаруяивают персистентного лимфоцито-эа. Имеется также категория животных, которые длительно содержались совместно с животными, инфицированными ВЛКРС,-и не заразились вирусом лейкоза. Факт, обнаружения клеток с измененным кариотипоы, которые многие годы сопровождают бессимптомный инфенционный процесс, но не переводят его в гематологическую и опухолевую стадии болезни, указывает на возможность макросрганизма защищаться как от НЛКРС, так и от кариотипически измененных клеток.

Таким образом, выдвинутая В.(1 .Шишковым (1976, 1979) теория, указывающая на взаимоотношения ВЛКРС, наследственной предрасполо-' яенности, состояния иммунной системы, их кооперация, как главного звена в зтиопатогенеэе лейкоза, подтверждена нашими исследованиями.

Нами также установлено, что частота реализации лейкозного про-

цесса в значительной степени определяется такими эпизоотологичес-кими факторами как инцидентность, превалентность, которые предопределяют результативность мероприятий по искоренении инфекции ВДКРС.

Сравнительный анализ эффективности различных вариантов ликвидации инфекции ЗЛКРС показал, что результативными оказались второй и третий варианты оздоровления. Проведенные исследования показали, что второй вариант ликвидации инфекции, вызываемой ВЛКРС, в стадах с более чем ЗОН зараженных животных вирусом лейкоза является наиболее приемлемым для хозяйств с разной технологией ведения животноводства. От момента разделения коров, пораженных ВЛКРС, до вывода из популяции последнего зараженного вирусом лейкоза животного заменялось 65£ серопозитавкых особей, тем не менее в течение 30 месяцев создали популяцию, свободную от ВЛКРС,

ВЫВОДЫ

1. Ци'Г^генетическому статусу (число и морфология хромосом) здорового крупного рогатого скота II наиболее распространенных пород свойственно диплоидное число хроыосом (2. п- = 60) с одинаковой морфологией и наличие до 10% гипоплоидных клеток в кариотипе.

2. В костном мозге животных в динамике лейкозного процесса установлены аномалии хромосом в форме гиперплоидных метафаз, которые при однократном исследовании не всегда выявляются. Гиперплоидные клетки являются характерным признаком лейкоза и обнаруживаются задолго до проявления гематологической стадии болезни.

3. Органы лимфопоэза вовлекаются в лейкозный процесс раньше, чем костный мозг, цитогенетические изменения в них выражены интенсивнее и проявляются более высоким уровнем изменчивости хромосом ршфоздных клеток, коррелирующим с низкими показателям митоти-

еской активности (MA) и реакции бласттрансформации лимфоцитов РБТЛ). Диагноз на лейкоз подтверждается при РБТЛ нале 35%. Комп-екс признаков, характеризующих функциональную активность клеток, анеуплоидия, наличие гиперплоидных метафаз, резкое снижение ласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) и иитотической активности НА), является объективным показателем разрегулированности клеточ-ого генома и достоверным тес-гом прижизненной диагностики лейкоза.

4. Доказано наследование предрасположенности к лейкозу у круп-

V

это рогатого скота. Более одной трети разновозрастных потомков зльных коров имеют аномалии в кариотипе гем^поэтических клеток, арактеризующиеся появлением метофаз с избыточным (2 к? 60) набо-ju хромосом, и персистентный лимфоцитоя.

5. Реализация лейкозогенных потенций ВЛКРС с манифестацией гйкоза зависит от генотипа животного - херактера и амплитуды его юледственной изменчивости. Установлен повышенный уровень изменчи->сти хромосом у короэ молочного направления продуктивности (гол-шдская и айрширская породы).

6. Структурные перестройки хромосом в клетках культур ПЗК, >онически инфицированных ВЛКРС, и в клетках перевиваемых культур I, ПТ, ПО, свободных от контаминации &ЛКРС, однотипны. ВЛКРС не ганвает в геноме клеток культуры ПЭК изменений на уровне хромо->м, характерных для лёйкоза крупного рогатого скота.

7. 3 неблагополучных по лейкозу популяциях крупного- рогатого юта выявлены 2 категории животных:

- животные, с повышенной резистентностью к заражению ВЛКРС;

- животные, в течение нескольких лет находящиеся в состоянии юсимптомной инфекции, вызванной ВЛКРС, не проявляющие гематологи-ские'признаки болезни.

В эксперименте установлено, что у животных, в течение несноль-

ких лет остававиихся здоровыми в популяции яивотных с инфекцией ВЛКРС, после парентерального введения большого количества Еируссо-держащих лимфоцитов развивался инфекционный процесс, выявляемый серологическим методом.

8. Количество серонегативных потомков от серопозитивных коров 4-ой и последующих лактаций на 25% превышает число серонегативных потомков, полученных от серопозитивных матерей I-3-ей лактаций.

9. Эпизоотическая ситуация по инфекции, вызызаемой ВЛКРС, существенно не изменялась в течение 6 лет при ремонте серонегативны-ми первотелками собственной репродукции стада, в котором 20% яивотных заражены ВЛКРС.

10. Обособленное, по скотным дзорам, размещение коров на территории одной Фермы с учетом их серо.гтического (РИД) статуса при умеренной (12,8«; эпизоотической наполненности позволяет ликвидировать инфекцию ЗЛКРС в течение 9-19 месяцев.

11. Доказана возможность оздоровления стад с первоначальной 40-70?» зараженность» коров при разобщенном содержании серопозитив-ьых и серонегативных животных как на отдельных фермах, удаленных друг от друга, так и на обособленных скотных узорах одной фермы.

Разработаны два варианта оздоровления:

- полная одномоментная замена серопозитивных коров здоровыми (серонегативними) нетелями, выращенными в хозяйстве изолированно от взрослых животных;

- разделение стада на серопозитнвнуэ и серонегатизну» группы коров с размещением их на обособленных фермах (дворах) и последующей заменой серопозитивных животных нетелями, проведиими серологи-угский контроль на лейкоз в 6, 12 месяцев, перед осеменением, в

С-7-мес, стельности перед переводом их в маточное стадо.

12. Разработана схема ВИЭ8, позволявшая искоренять у быков-

производителей на ллемпредприятиях инфекцию, вызываемую ВЛКРС, внедрение которой обеспечило их устойчивое благополучие по лейкозу.

13. Эффективность комплексной системы противолейкозных мероприятий подтверждена результатами поголовных гематологических исследований взрослого серойзгативного крупного рогатого скота оздоровленного стада: количество лейкоцитов и лимфоцитов в единице объема крови не превышает физиологического уровня.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИКИ

1. Исключать из воспроизводства стада потомство больных лейкозом коров.

2. Обнаружение более ЗОЛ анеуплоидных клеток, появление гипе плоидных ыетафаз, обнаруживаемых у животных в 4-6-месячном возрас те, следует рассматривать как прогностический признак заболевания животного лейкозом.

3. В комплексе диагностических исследований диагноз на лейко: можно считать подтвержденным при выявлении менее 35* бласттрансфо| мированных лимфоцитов.

4. В племенных хозяйствах, неблагополучных по лейкозу, апрош использовать в селекционно-племенной работе потомство от коров„ длительное время находящихся а инфицированном ВЛКРС стаде и остающихся серонегативньши или серопозитивныыи без клинико-гематологических признаков лейкоза в течение 4-х и более лактаций.

5. В племенных хозяйствах организовывать серологическое иссле дование бычков в процессе их выращивания - в 6, 22-месячном возрас те и за 30 дней до реализации, кроме того, при поступлении на плем предприятие - дважды в период профилактического карантинирования.

6. В хозяйствах, где уровень инфицированное™ ВЛКРС коров не превывает 30%, наиболее вф$ективнам методой оздоровления от лейкоза является разделение стада коров на серонегативкую и серопозитие ную группы.

7. Результаты собственных исследований позволяют утверждать, ■что в отличие от пункта 3.6. действуюцей "Инструкции по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота", в хозяйствах с уровнем инфицированности ВЛКРС коров ...превышающий 30^, разделение стада также обеспечивает ликвидация, инфекции ВЛКРС в популяция.

СПИСОК

ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Дун Е.А., Головченко А.П. Исследование хромосом в лим-оцитах лимфы крупного рогатого скота при лейкозе //Вюл.ЕИЭВ, 374, В.17. С.32-33.

2. Дун Е.А., Головченко А.П., Лебеденко Л.А. Хромосомные зыенения в клетках лимфы у Сальных лейкозом коров //Сб.научн. э-UBa "Вопросы ветеринарной науки и практики", М., 1974, т.73, .2. С.34-37.

•3. Дун Е.А., Голоаченкф А.П., Налетова Д.В. Хромосомные набо-1 клеток кроветворных органов при лейкозе //Ветеринария, 1975, [. С.35-38.

4. Бурба Л.Г., Дун Е.А., Головченко А.П. Хромосомный аппарат морфологический состав лиифоцитов лимфы у лейкозных коров //Вест-iK с/х науки, 1975, »I. С.54-57.

• 5. Нахмансон B.U., Бурба Я.Г., Дун Е.А. Генетический аспект ¡Йкозов крупного рогатого скота //Ы., ВНИИТЭИСХ, 1975, 90 с. !онография>.

6. Головченко А.f).. Дун Е.А., Налетова J1,В. Бласгтрансфор-тия in vltic лимфоидных клеток больного лейкозои крупного рога-iro срота //Доклады ВАС ХМ, 1975, т. С.40-41.

7. Бурба Л.Г., Дун Е.А. Цитогенетические аспекта лейкозов упного рогатого скога_//Материалы научно-производственного сове-ния по проблеме лейкозов с/х животных. Новочеркасск, 1976.' 69-73.

8. Дун S.A. Цитогенегический (мвтафазный) метод исследования иатических клеток крупного рогатого скота .//В кн.: "Лейкозы и окачественные опухоли животных" под ред.Шишкова В.П. и Бурбы Г., Колос, 1977. с!203-205.

9. Бурба Л.Г., Дун Е.А., Симонян Г.А. Изменения в кариотипе клеток костного мозга молодняка от коров, больных лейкозом //Ветеринария, 1978, №3. С.43-46.

10. Дун В.А., Поздняков А .А., Филатова Т.Г. Кариологические исследования культур из линфоидной ткани //Ветеринария, 1978, №И С.41-43.

11. Дун Е.А., Бурба Л.Г. Исследование костного мозга коров 1 динамике лейкозного процесса //Ветеринария, 1979, »2. С.27-29.

12. Дун Б.А. Некоторые особенности изменчивости хромосом reí поэтических клеток при динамическом исследовании больных лейкоза коров //В кн.: "Проблемы экспериментальной онкологии и лейкозов человека и животных" под ред.Шабада ЛИ. и Шишкова В.П., tí., . Колос, 1979. С.335-336. '

13. Дун Е.А. Дифференциальное окрашивание хроиосоь крупного рогатого скоте //Зшг.ВШ, Ш9, В.36. С.54-57.

14. Дун Е.А. Цитогенетнчен (метафаэен) метод эа наследовано на соматичните влетки от говеда //В ки.: "Левкози по живоТните" под ред на акад.Шивкова В.Л. и д-р в.м.,. Бурба Л.Г., Земиздат, София, i960. С.244-246.

15. Дун Б.А. Цитогенетические исследования при гемобластоза: крупного рогатого скоте //Тр.ВИЭВ, 1981, Т.54. С.31-38.

16. Дун Е.А., Гулюкин М.И., Головченко А.П. Патогенез гемобластоза крупного рогатого слота //Ветеринария, 1982, И. С 35 3'

17. Дун Е.А. Хромосомные нарушения соматических клеток при

.геиобластозах крупного рогатого скота //Тез.докл.Всес.научн.конф "Распознавание-и меры борьбы с лейкозами человек и животных", . Белая Церковь, 1982, С.58.

18. Дун Е.А,, Гулюкин 1!.И. Прогностическое значение изменен .хромосом и пролиферативной активности лимфоидных клеток при

эиобластозах крупного рогатого скота //Тез.докл.респ.научно-произ-эдст.конф. "Современные проблемы профилактики и лечения заразных аболеваний и лейкозов", Гродно, 1982, С.218-219.

19. Дун Е.А., Сравнительная оценка альтернативных признаков в емействах стад крупного рогатого скота, неблагополучных по ейкозам //Матер.кон^. "Генетическая устойчивость сельскохозяй-твенных животных к заболеваниям", М., 1983, В.З. С.7!.

20. Нахмансон В.М.; Дун Е.А., Бурба Л.Г. Сравнительная оценка емейств животных по лейкозам и онкорнавирусной инфекции крупного огатого скота //Тр.ВИЭВ, 1983, Т.57. С.129-Ш.

21. Дун Е.А, Иммунологическая характеристика семейств коров в еблагополучном по лейкозу хозяйстве //Тез.докл. Всес.научн.конф. Иммунология и иммунотерапия лейкозов человека и животных", амарканд, 1984. С.47-48.

22. Дун Е.А., Надточей Г.А., Поздняков A.A. Цитогенетичёская арактеристика культуры клеток почки зыЗриона коровы репродуцирую-ей вирус лейкоза крупного рогатого скота //Теэ.докл И Всес.съезда ематологов и'трансфузиологов; Львов, 1985. С.334/

23. Нахмансон В.Х., Дун Е.А. Эпизоотология лейкоза крупного огатого скота и меры борьбы //Итоги науки и техники, ВИНИТИ, 986. .Т. 14, 148 с. (Монография).

24. Дун Е.А. Об устойчивости к лейкозу нгксгорых пород рупного рогатого скота. //Ветеринария,' 1988, PI. C.2S-3I.

25. Дун Е.А. Хромосомная изменчивость клеток системы крови

ри лейкозах //В кн.: "Лейкозы и злокачественные опухоли животных" од ред.Шишкова В.П. и Бурбы Л.Г., М., Агропромиздат, 1988, .194-199.

20. Дун Е.А. Властная трансформация лимфоцитов //В кн.: Лейкозы и злокачественные опухоли животных" под ред,Шишкова В.П.

и Бурбы Д.Р., М., Агропромиздат, 1988. С.199-204.

2?. Дун Б.А. Научно-обоснованные принципы профилактики и лив видации инфекции BJ1KPC на,племпредприятиях //Бюлл.ВИЭВ, 1988.

B.67. С.62-66.

28. Дун Б.А. Аспекты пренатальной передачи вируса лейкоза крупного рогатого скота (Е.ЧКРС) //Бал.ВИЭВ, 1988. В.67. С.58-60.

29. Дук Б.А. Наследственность и инфекция вируса лейкозе круп ного рогатого скота //Вестник с.-х. науки, 1989, IP7. С. 124-128.

30. Результативность лротиволейкоэных мероприятий /В.П.Шив-ков, Л.Г.Бурба, В.М.Нахманссн» Б.А.Дун //Вестник с.-х. науки, 1989, »6. С.64-68.

31. Организационные и ветеринарно-санитарные мероприятия при лейкозе крупного рогатого скота /В.Ы.Нахмансон, Л.Г.Бурба» Е.А.Дун, М.И.Гулскин, В.в.Рричка, И.И.Барабанов //Плакат, Агропромиздат, 1983, 0,37 п.л. . ,

32. Опыт борьбы с лейкозом крупного рогатого скота /В.Ы.Нахмансон, Л.Г.Бурба, Е.А.Дун и др. //Ветеринария, 1990, 1Р6.

C.6Л0.

33. Дув S.A. Влияние уровня эпиэсотичоакой напряженности на срока ликвидации ле&соза // Гез.докл. III Всео.ковф. fio sraaocroj гид, Новосибирск, I9SI» 0,80-82. .

ír>

Подшсаась-печать Ю-Г0с91г, _ За«аэ- 608 Ооршт 50x90/16 Тщвх. 120

МосвЭДе ЕА31Ш1