Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Трансплацентарная передача вируса лейкоза крупного рогатого скота

рг бод;л'

" - ^цё^зощсаай^шл^ шсяшт

ЗШЖРИМбНТАЛШОЙ ЕЖРИНАРИИ имени Я.Р.КОШИЩО РОССгЙСШ АКАДьШЙ СьЛЫЖОХОЗЯЙСТМШЫХ 1ШК

Па 'правах рукописи-

, КОЛИНА' СВЕТЛАНА ВИКТОРОВНА

КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.02- патология, онкология н морфология 2сивотных

АВТОРЕФЕРАТ

"диссертации на,соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1993

! Работа' выполнена в Центральном отделе лейкозов, срав- ' нительной и экспериментальной онкологии Всероссийского ордена Ленина.на^чно-иеследовател1>ского института экспериментальной ; ветеринарии имени Я.Р, Коваленко. 4 V.1 • ''.

Научные руководители; заслуженный деятель неуки РСФСР, ."*,;- доктор ветеринарных наук, про- ■ ■ • •/' . д фессор Л.Г. Бур£а

^ : кандидат ветеринарных наук,

ведущий научный сотрудник -■."-'-V||.'Й.Гулркйй ]'"./''

Официальные оппоненты: .

Доктор ветеринарных йау** профессор В.А. Щубин (ВЙЭВ) . ; ;;

Доктор биологически* наук, профессор'Н.И. Снежков ( Тверской СХЙ).

Ведущая организация - институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН

Задета диссертации' состоится,. ¿д' 1993г.

в "/У" . часов на ¿асёдаяии Спедиадиэйрованногс совета Д 020.2Е.02 Ьо защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском ордена Ленина научно-гисследова-тельском институте экспериментальной йетеринарии имени Я. Р. .1 Коваленко по адресу: 10947/2, Москва, Кузьминки, ВИ^В-, . -

С диссертацией можно ознакошться в научной библиотеке В&В]~ . Автореферат ■ разе слан'. "^'7" сСлфргй ¿У 1993г.» «,.;' | 'Ученый'Секретарь'Специалигированногр . ■■

сгвета, *анд(1«аг Си£логНчеоки* наук В.Амелина ' .

Отпечатано во ВНйИмеТмчшр Эян.215 Тир;100

¡.'ВВЕДЕНИЕ ' Актуальность тещ.' Лейкоз крупного рогатого скота относится к хроническим инфекционным вирусным заболеваниям опухолевой природа,'основным' признаком которого является разрастание клеток кроветворных органов с нарушением их созревания..Этиологическим фактором болезни является РНК-содеряшций онкогенннй вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), относящийся к экзогенным ре-тровирусам. Отмечено, что при лейкозе крупного рогатого скота существуют два основных споссба передачи вируса: вертикальный-от родителей потомству:в пренатальный период онтогенеза и горизонтальный '- от одного яквотного' другсад': в постнатгльшЯ период.

Установлено, чтр в неблагополучных по лейкозам хозяйствах заболевание проявляется, а основнрм, тюсле рвоэа пламенного молодняка из стад, неблагополучных по атому заболеванию (Бурба Л.Г., 1979). Однако пути естественного заражения животных BJ1KPC в неблагополучном хозяйстве остаются ещё окончательно .не изучен ными. Так представляет большой научный и практический интерес выяснение заражения плодов вирусом лейкоза в пренатальный период путем трансплацентарного проникновения ВЛКРС от'матери в плод,

В литературе имеются разноречивые сообщения о возможной внутриутробной передаче вируса лейкоза плоду {ferrerj.h*^ 1976; A/v/- (t'c </, 1979; Н&хмансон B.U. и др., 1961; l-iiius.'is м 1961; Цурватуллоев С.А. и др., 1963; Степаненко B.C., 1989).

В настоящее время остается не выясненной частота передачи вируса лейкоза от матери плоду у животных с различными стадиями гемобластоэов, а также при сочетышом заболевании животных гвмгбластозами и другими заболеваниями. Остается не выясненным механизм передачи онкорнавируса от коров и овец плодам в пренатальный период онтогенеза животного'. " • ' - ••

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы ставилось изучение трансплацентарного инфицирования ВЛКРС плодов коров и

■ -2- о . .... . ■ .•

овец, находившихся в различных.стадиях гемойльстозов, зыясне-ние частоты порглоькя оргькоо воспроизводства при лейкозе круп ного рогатого скота, а также. выявление механизм*. преодоление вйь/со;-: .лдйцзиг^рного:барьера. -.

В соответствий с'целью били' роставлеш следуй« задачи*."

I. Еыяси; .ь чкстоту инфицирования в.прен£.т£_-:ьн^й период " ВЛКРС пледов коров и овец, больннх лейкозом или только с бессимптомной инфекцией, вызванной вирусом лейкоза.

. 2; Выяснить'механизм проникновения вируса лейкоза крупного рогатого скота через плацентарная барьер и неонатальное инфицирование ИМ. < ;

3. Разработать способ .обнаружения клеток, в ток чксое лейкоцитов, содержащих ВЛКРС, в тканях и органах плода.

4. Разработать способ выявления в крови новорожденных животных н плодов 8Н"«гг!;2 вируса лейкоза и инфекционного вируса лзйкооа крупного рогатого скота.; .

; Научная новизна. Впервые разработан способ экспериментального транс1шщент«р!5ого зеражения ВЯКРС плодов от коров , и огьц с различшш стадикни аейхогного процесса. Впервые проведено комплексное исследования по.-изучению трансплацентарного пути заражений плодов коров и овец вирусом лейкоза. Установлено, что сьроябгйчссккй метод''выявления антител к-ВЯКРС в сыворотке крови, взятой до выпойки телятам молозива, с помощь» реакции икг-ф'но диффузия в селе агара, выявляет на всех гнйотш*. инфицированных внутриутробно вирусом лейкоза. -У некоторых но- . ворожденшх отмечают "ложнобтрицательную" РИД. тогда как методом краткосрочного культивирования лейкоцитов крови таких животных выявляют шлмунологическии методом пели пептидный антиген (рй4) ВЯКРС и биопробой на ягнятах подтверждается наличие в крови у новорожденных телят и ягнят"вируса лейкоза. На-

учно обоснован механизм нарушения плацентарного барьера и тралсаяацентаркгй передач'?'ЩКРС от матери п.>,о,цу, обусловленный пуьулкниеы прсницге"оо?а с~'«нок крзвенозных сосудов плаценты :» проникновением' л,'-"'.с-иу¡6в машриу содержащих'ВЛКРС, в тка--" -№1. и органы| плог?..

Установлеио, что в период беременности попадание в организм матери ляроггннцх веществ вызывает лихорадочную реакцию у »ивотиых, лрсяьляотукея нарусением обмена веществ, изменением функций органов и тканей, а также ыстиваддией нейтрофилов,. выра-Оагыйакчних собственные пирогеш. к к*к следе*;*»« - лошынхй проницаемости стенок кровеносных сосудов, В результате чего лейкоциты крови серопозитивной матери, содержащие ВЛКРС, проникают через плацентаршй барьер в ткани плода и инфицируют его виру-сон лейкоза.

Практическое значение работы. Нами разработана!: ■ ~ новый метод определения 'проницаемости стекой кровеносны-/ сосудов и нарушения плацен.арного сгрьер» путем введения беременному животному внутривенно собственных лейкадатов кропи, меченных ФШЦ, с последующим выявлсьчем их. в тканях а органах плода;

- оригинальный метод экспериментального повышения проницаемости стенки кровеносных сосудов путем парентерального введения животному пирогенных препаратов (пирогенала);

- способ определения внутриутробного заражения плода пучь.л выявления в крови плодов и новорожденных животных антигена вируса лейкоза и инфекционного вируса лейкоза крупного рогатого скота. " ""*".'*

Материалы диссертации использованы при разработке "Инструкции о мероприятиях по бсрьое с лейкозом крупного рога „го скота" (утверждена ГУБ,-Госагропрома-СССР. 9 августа 19с9г.

"Методических рекбяендлЦий по цитохимии и физико-химическим метод«! диагностики гемобластозов крупного рогатого скота"* 13., 1969; Стандарта В5 "Метода лабораторной диегностикя лай-коза крупного рогатого скота и овец" Ы., 1992г.

Сдел ано »изобретение "Способ диагностики йнфицировакност! плодов овец вирубом лейкоза крупного' рогатого скота", Автора ское свидетельство от 6.09,1991^.

Апробация работа* Материала диссертащч Доложены й о б су; дёны на. н«учнсй конфереш^й молодах ученых (ВЙЭВ, 1969), на заседании Ученого Совета ВИЗЕ (1969), Всесоюзной конференции "Теоретические и практические вопросы ветеринарки" (Тарту,Щ Всесоюзной научно-производственной конференции "Проблема оздс ровлеьия хозяйств от лейкоз* крупного рогатого скота" (Новое! бирск, 1990). . ..

Публикации, По теме диссертации опубликовано 6 научных I бот и I методическая ^комейдация.

Объем й структура работы. Диссертация йзложека на 130 С1 ницах машинописного текста. Состоит Из введения, обзора.ли®е{ туры,; материалов, К методов исследований, результатов. исследо{ ний, обсуждения ¡ио^учёншзг результатов,; выводов, практически) преддоженийР&Сота'йллвстрйроввна.6 таблицами, 13 рксункайй фотографиями;'Список литературы включает 34? наименований рас в том числе 17Ь з»рубе«фх авторов; г .

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.¡.Материалы и метода, Работа проводилась в течение 19Ь6-19Ь9г.г. в Центральном отделе лейкозов,, сравнительной и экспериментальной онкологии ВИЭВ,, в Вц'шнёволоцком, Калужском отделах ВИЭВ, на мясокомбинатах Калининской, Калужской, Московской и Кпровсградской областей, Всего был исследован материал от 107 коров, различного срока стельности и от 52 овец.

Сыворотку крови животных (корОв, овец), их плодов, околоплодные жидкости исследовали серологически (РИД) по общепринятой методике. Кровь плодов использовали для постановки биопроСн . ría 6-9 месячных ягнятах (выявление инфекционного ВЛКРС), а танке для приготовления краткосрочной культуры лейкоцитов с последующим выявлением р-24 антигена ВЛКРС, Животных исследовали гематологическими методами с выведением лейкоформулы и подсчетом 1бсилютного количества лимфоцитов крови. Для гистологического ^следования материал отбирали по общепринятой методике, допил «ительно брали матку,плаценту, от плода:печень, селезенку, лим зоузлы, тимус. Материал-фиксировали в Ъ%, 10% нейтральном фор (алине, жидкости Карцуа, 3$ глютаровом альдегиде .Ис пользовали; (елло«диновую, парафиновую проводки, заливку в смесь смол эиоп. фалдит. У некоторых животных проводили цитохимическое исследо-,ание мазков крови: определяли гликоген (по Шабадащу А.Л.,1917,

нейтрофилах и лимфоцитах, миелопероксидазу (Нарциссов 1; .¡¡., 964) в нейтрофилах, кислую неспецифическую зстеразу (fc-'jU/iki'ivú v , 197?) в лимфоцитах и бутиратэстера?у ( ^ <¡ 1977)

атериал просматривали в световом, люминесцентном и электронном икроскопах. Данные обрабатывались статистически с выведением ко

' " - • ''V ': ■■••': ' .

nf фициента корреляции.

2.2. Результаты исследований.

'2.2.1. Частота патоморфологического проявления гема-

бластсзов среди коров, инфицированных ВЛКРС. Частоту патоморфояогического прояйлейия гемобластозов : изучали на материале от 34 стельных коров, у которых были выявлены прижизненно различные стадий гемобластозов,

При исследовании материала от 13 стельных коров, по клиническим и гематологическим признакам признанных здоровыми, но серопозитивных по РВД, у трёх животных при гистологическом исследовании был подтвержден диагнбз на лимфоидный язйко$.

При исследовании материала от 21 стельнсй коровы, спонтанно инфицированный (iS) iii экспериментально зараженных ВЛКРС, у которых гематологическим и серологическим исследованиями прижизненно были диагностированы гемобластоэы; антитёла k ЕЛКРС обнаруживали в высоком титрё (1:6- 1:64). При гистологическом исследовании паткатериала от этих животных в одном случае, была диагностированы лимфосаркома матки, у 20 живбтных-лимфо'идный лейкоз, проявляющийся b двух вариантах: лимфсцитарнсм (16 случаев) и лимфобластном (4 случай). У двух животных отмечены гистологические изменения в матке лейкозного;характера.

pop ■ ' '

к..*..*., обнаружение ВЛКРС и антител к неку у плодов коров

с инфекцией, вызванной вирусом лейкоза.

. Шло проведено выявление бируся лейкоза крупного рогатого скота у 1'лод( в'коров в небнаталькнй период развития и изучение , '/мсфслогич'еских изменений взаимосвязи мать-плод обуславливающих "проникновение вируса лейкоза.через плаценту. ; : ' Объектом, исследований были. пл"о,ф. г:Т 44,цельных коров (вто . рая пблопина стельности)¿-.::34Ko'pôÊiw"по;серологическим и гематс-0 логическим показателям Сыли;-определены как Осльные или псдоэрй-

• •: . ' "v , -7- • -.',. , .-,.• '' ' ' / ' '

гельные в заболевании гемсбластозами. В качестве контроля исследовали плода от 10 клинически здоровых серснегативных в РОД «оров из благополучных по гемобластозаы хозяйств.

При исследовании сыворотки крови, плодов и ¡околоплодных

шдкостей от 13 коров, инфицированных BJ1KPC с бессимптомной ¡тадией лейхозного' процесса, а также Ю коров", неинфи1^рованных U1KPG из благополучных по лейкозам хозяйств, ни в одном случае st в сыворотке крови плодов,'нк в околоплодных жидкостях не или выявлены ни антитела к вирусу лейкоза ни сам ВЛКРС. В крат осрочных культурах крови от плодов.антигенов ВЛКРС также не. нявдзно. '':'[''V'.''* '•"'",' • - V '■'.

В сыворотке крови 21 стельной коровы серологическим и ематологическим методами признанных больными гемобластозами, ¿являли антитела я ВЛКРС в титрах 1:4-1:64, у семи коров од-dвременно выявляли антитела к <jf-€9 и к р24 антигенам ВЛКРС. эи исследовании сыворотки, крови плодов от 21 коровы в двух тучаях находили антитела к ^-69 BJ1KPC, в околоплодных жид-jcthx антитела к вирусу лейкоза отсутствовали. ÍI¿h исследо-1нии культур лейкоцитов крови плодов в четырех случаях выявит р24 антиген ВЛКРС, в том числе у двух плодов, у которых сыворотке крови выявляли антитела к ftp-69 ШКРС и при гиего гичесхом исследовании матки коров-матерей оыли отмечены из-нения лейксзного характера. При постановке биопробы в сыворич крови 4 ягнят на 45-60 день с момента введения материала щ одов .обнаруживали антитела к Ш1К]?С в Р»Щ.

2.2.3. Трансплацентарная передача ВЛКРС плодам шт .....коров,экспериментально зараженных RÍIKPC и

С целью изучения частоты и особенностей вертикальной пе 1,ачи ÜJ1KPC .потомству, наш.било проведено Z серки опытов на

крупном рогатом скоте. В первом ппыте 60 нетелей, свободных от вируса лейкоза были осеменены методом вольной случки быком, инфицированным ВЛКРС, гематологическим к серологическим методами исследований прижизненно признанным больным гемобластозом. Через 30-150 дней после случки в сыворотке крови 10 стельных коров в РОД были обнаружены антитела к gp-69 антигену ВЛКРС, гематологических изменений выявлено не .было. Впоследствии все стельные животные были вакцинированы против бруцеллёза вакциной из штамма 19 и затем.заражены Лг. ¿^¿»'¿^'(штамм 54).

Во втором опыте было исследовано 10 стельных коров, инфицированных ВЛКРС, но без гематологичёских изменений в крови. Животные за 4-2 месяца до отела были убиты, материал отбирали по стандартной методике. При гистологическом исследовании материала от коров изменений, характерных для гемобластозов не было выявлено. Из Ю плодов у трёх в краткосрочных культурах лейкоцитов крови был выявлен Р-24 антиген ВЛКРС. Биопроба на овцах от этих плодов была положительной/Тогда как серологическим исследованием сывороток крови пЛсдов в РОД антител к ВЛКРС не обнаруживали. Отрицаетльные результаты были получены и при серологическом исследовании околоплодных жидкостей в РОД. При гистологическом исследовании матки отмечали кровоизлияния, изменения структуры клеток-стенки кровеносных сосудов, деструкции соединительно-тканной основы Септ материнской плаценты, некро-'-исй и слущивание зндотелиоцитов капилляров.

2.2.4. Экспериментальное воспроизведение трансплацен-тариой передачи БЛКРС плодам.корор и олец.

2.2.4..L ТрансплаДентарная передача BJL.d'C.плодам коров, В группа п.- 6 стельных .коров > йпфшхиррвашшх BivPC и признанных больными гемобластозвми, но геыэтологлчзсшл по-1;г.:-ателям, у трёх- ж»д>отинх 'вызывали эксйвр1Ш9Итальио.наруше-

-9- ,

ние проницаемости стенок кровеносных сосудов путем внутривенного введения пирогенаяа. Пйрогенал- бактериальный ¿лпополисахарид, выделенный из клеток бактерий ¿у^А* • Препарат

фармакопейный, обладает широким спектром действия. Пйрогенал вводили в дозе 0,024-0,025 мкг/ кг живого веса. Спусти 24 часа после введения препарата животных убили. При гистологическом ип-ледовании у всех ВЛКРС-инфицированных животных.был установлен диагноз - лимфоидный лейкоз. В сыворотке крови и околоплодных жидкостях 6 плодов антител к вирусу лейкоза не выявляли. При постановке биопробы кровью плодов от коров, которым вводили пйрогенал у одного ягненка на 35 сутки с момента введения материала выявляли антитела к ВЛКРС; при исследовании культуры лейкоцитов крови плода, положительного по биопробе, находили внутренний белок р-24 ВЛКРС. .'X' ' '.'•' , - ■ ' С ' '.'х ■ ;.'•'"•. •• : ' л' 2.2.4.2. Трансплацентарная передача ВЛКРС плодам овец.

" Работа по экспериментальное воспроизведений ннкорнавирус-ной инфекции и лейкоза была проведена в двух сериях опытов на 30 овцах романовской породы в возрасте 1,5-2, года срадличными стадиями гемобластозов. Всего было сформировано 5 групп животных:

Первая- б овец, экспериментально инфицированные ВЛКРС, с нормальными гематологически».« показателями, имьюн;;з в сыворотке крови антитела к ВЛКРС, выявляемые в РВД.и содержащие вирус лейкоза ( биопроба'положительная).

Вторая группа- б овец, с экспериментальной ВЛКРС-инфекцие!., нормальными гематологическими показателями, серонегативные в Р1Щ, но содержащие в крови ВЛКРС (положительная биопроба).

Третья группа- б овец, экспериментально зараженные ШКГС

через б часов после введения им пирргенала. ,... ......

Четвертая группа- 3 ов1,ц, свободные от ВЛКРС, которым вводили только пйрогенал, служили контролем. - >/.-.

Пятая пуипа - 9 снец, с различными мадиями гемсбласто- -

зов , которым пирогенал не вводили, служили контролем.

Лее животные были суягны. С целью экспериментального нарушения плацентарного барьера овцематкам первой, второй, третьей и четвертой групп внутривенно однократно вводили бактериальный препарат - пирогенал в доза 0,024-0,025 ыкг/кг живой массы овцы. Некоторых овцематок убивали через 12-23 часа после введения препарата, остальные животные окотились»

При исследовании патматериала от 10 убитых овцематок у 6 овец был установлен лимфоидный лейкоз. Помимо изменений в селезенке и лимфоузлах у двух животных отмечали скопление клесок лимфоидного. ряда между мышечных волокн мчокарда. У одного животного в печени наблюдали пролкфераты, рвспологающиеся по ходу межбалочш-х синусоидов.

. В сыворотке крови«плодов и новорожденных ягнят от овец, экспериментально инфицированных ВДлРС, которым пирогенал не вводилиС б группа), а также от овец, свободных от ШЛРС, которым вводили пирогенал, не в одном случае не отмечали проникновения вируса лейкоза от матери плоду. - - . '

При введении пирогенала овцам первой опытной группы одна овца абортировала< В сыворотке крови плода были обнаружены антитела к^у>-69 антигену МлК! й методом биопробы был выявлен МлРС. У плодов от двух овцематок, убитых по ходу опыта, в сыворотке крови плодов выявляли антитела к ВЛлРС и обнаруживали вирус ле^оза . Три овцы из п..рвоЙ группы через 2-2,5 месяца после, введения пирогенала окотились. У двух из четырех новорожденных ягнят в сыворотке крови выявляли антитела к ВЛЛРС и методом биопробы - вирус лейкоза.. : '. ;

При гистологическом; исследовании матки'у подопктных овец отмечали кровенаполнение .сосудов материнской плацентыобширные кровоизлияния в строме.септ.карункулсв, скопление форменных эле-

■ ' -П-

аентов крови в межворсинчатом пространстве. Отмечала частотую утрату плодного эпителия. Б сосудах материнской плаценты наблюдали прилипание грэнулоцитов к стенка эндотелия сосуда, округление эвдотелилльных клеток а образование между ними" деле»!'' с выходом клеток крови в соединительную ткань септ ¿.арупкулсп а межвсрс.^чатсд прссгра^схво. Стмеча.ча цвкгрофилышя ¡.¡г^кль-гр?¡.'..л ;.'ёкроз эш'.телпя трофобласта. •■

После введения пирогенала овцам вгрой опытной гру.п;н олгл овца абортировала, сыворотка крова абортированного плода была оеронвгативна в РИД,' но в краткосрочно! культуре лейкоцитов крови выявляли р-24 антиген ВЛКРС, методом биопробы в сыворотке крови был выявлен вирус лейкоза. Две овцы были убиты спустя 24 я 48 часов после введения пирогенала. В сыворотке крови всех плодов не выявляли антител к вирусу лейкоза, но по биопроб'е у одноРо'плода был обнаружен вирус лейкоза. В краткосрочной культура клеток -крови этого плода выявляли р-24 аятигон

При гистоисследовании магки отмечали изменения, описанпкч ранез у овец первой группы. У одного из трех родившихся ягнят спустя 1,5-2 месяца после введения пирогенала, методом бигпро-бн в крови был выявлен ВАКГС.

Среди животных третьей группы, которым внутривенно вводили пирогенал а спустя 6 чцсов заражали ВДлРС, в крови плодов . трёх убитых животных не отмечали ни ЖлРС ни антител к непу. Новорожденные ягнята ст овец этой группы были свободными от вируса лейкоза весь период наблюдения. В течение 21-30 дней у них в сыворотке крови обнаруживали материнские молозивные. антителл к вирусу лейкоза.

Таким образом, пирогенал вызывал нарушение плацентарного барьера к как следствие - внутриутробное инфицирование плодов вирусом леакоза от овцематок. '' ■ -

Ks 21 овце, первая, вторая, третья ц четвертая опытные группы , быль проведена вторая серия опытов по изучению качес-тьенною и количественного изменений клеточного состава пери- . ]ерлчис1 -ci; кроьв и uwihutbJii) проницаемости стенок Лровенооннх сосудов под влияние«, дирогенала. ¿ашотных всех групп обследо-i;uj:v п.русологическш и гематологическим методами. .Сроки ис-ледовашш: через I час, 6 часов, 12 часов, затем через 1,2, 7, 15 45 дней после введения пирогеиала., ь 'крови ¡¿иис-тных определяли количество лейкоцитов, выводили ланкоформулу с подсчетом 1№йтр14илььо-^лш4ш.тарього 'соотьошеыш; При цито-х^.шхческ'Ч;: i (.'следовании неЕтро^илов ьынышли' наличие и харак-. тер распределения ьпедопероксидазц и гликогена. В лимфоцитах определяли гликоген и кислую эстеразу, и тыасе проводили диф-фвренцировку клеток на Т-, В- и 0-клетки по реакции на бутират-эстеразу. , '."• -'•.■.'/'. '

У овец четвертой группы (свободные от Ж PC) после введения пирогенала отмечали типичную двухфазную реакцию на пре-царат, Первая - проявлялась через I час после введения пирогеиала и характеризовалась полным исчезновением нейтрбфилов из крови (рис.1). при незначительной лейкопении. Вторая фаза реакции отмечалась через 6 часов, при этом отмечали выраженную нейтрофшш) с увеличением неМтрофильных гранулоцитов к 23 часам, а затем их постепенное , снижение к исходным данным к 15 диД • Через ^б часов после введения пирогенала выявляли выраженную лимфопенив, количество мононуклеаров снижалось на 50^' от исходных данных( Рис.2) . В дальнейшие; сроки найшодения'' лим-фоцитоа сохранялся на значительном уровне, .возвращаясь к: исходным показателям к 45 дню исследования. •• '.'.•' -

В третьем группе животных,; которым'вводили лейкоконцен- ; трат через .6 часов после введения пирогеиалаколичество лимф цатоь уде;).гхи::лось на ш;скв,ч уровне в течёте Всех'45, дней

исследоввнпя (рис. 2). Нейтрофилига отмечали через 24 Часа (рясЛ) , лимфоцитов удерживался на высоком уровне, количество лимфоцитов превышало исходные данные в два раза на 7 сутки исследования. "" . .

Б первой опытной группа (серопозитивнне к ШиРС овцы) ирг введении пнрогенала первая фаза характеризовалась уменьшением числа гранулоцитов яерез 1.чэс после введения препарата с максимальным подъёмом их процентного содержания чёрез 12 чаоов, к 15 дням количество нейтрофилов возвращалось к исходным данным. То/да как чараа 24 часа посла вгедапал препарата и до ковда опыта количество лимфоцитов (рис.2), а также число я&гоцитов превышало исходные да.пша.

15о второП опытней группа у животных показатели клеточного состава изменялись почти аналогично, но характеризовались более низким приростом процентного содержания нейтрофилов через 15 чзеез поело'введения препарата, в то время как лиы-{екзтоз у жавстиых этой группы сохранялся в течение всего срока и, следглгл.

• ст-,-:-ст!.«ескол обработке 1ш)ьч>вол о мзтеричла, полу-(

ЧС! рСГС но ХОДУ кссле Л!В1 , было оп^еделвио, ЧТО КОЭчфИШ'ОНТ го;р?яянкя, ьепипяя с парнях часов иесчедоврния йкл равен

в начале опыта и до .0,1? В'конце, т.е. по всем исследуй!,'ям гр7-г.1м г'П'епл^п? ¿экономерьая тесная связь. Определение кор-рвлятчг'оГ. зешю. мостя ме:кд} в.'чеиениег.' чеслй ле{-к«штов, грч» нулош'Г!.в н лшисцитов в каздоЗ отдельно!; груша в динамике га'-:'.:? в',«в::.по тес?:ую связь в четвертой и третье? группах (?-'-,О у среди-«» степзкь корреляции между и„квЕчпп«м числя лкм тсь и грвиулецкхев, при слабо]-: з2Вке>,.мо?тч гт пэмчяв-иря чгзлч ле^кигтев (г±о,3 и 0,1) в первой и второй группа;:.

20.

15

до Tu Vs4 '12ч ~*24ч т2дня " ^дней ; 15дней Ьпднгй введении

-—---контроль —;--.- 1 группа

- 2 группа з группа

Рис. 2 Илмрнение количества лимфсцитсп в крови ' овец на введений тфогеналМ х- 10^/ мл).

Цитохимическиа исследования показали» что в условиях опыта гранулоциты ив теряют высокой специфичности по реакциям на мие"опероксвдазу и глшшгеп. Однако отмечается перераспределение в содержании гликогена в первые 24 часа после введения нирсгеаала, характеризующееся наличием грубой зернистости, гранулярных форм, блокрв. ЛиЦоидные элементы характеризовав лись единичными 11АС-полокителышми клетками, и лимфоцитах проявлялась выраженная специфическая активность кислой эстера-зы. Учцтивая специфическую реакцию на бутиратэстеразу можно было четко разделить популяции лимфоцитов и их ответную реакцию в динамике на введение пирогенал.

При проведении- серологических исследований установлено, чго в первой и второй опмтных группах вшвлено проникновение вируса лейкоза крупного'рогатого скота от инфицированных матерей в плод при изменении проницаемости плацентарного барье-. рц. ,,анные серологичес; их исследовании и, результаты биопробы . п третьей и четвертой опытных группах отрицательные,

2.2.!}. Выявление матери..ских клеток крови в тканях и органах плодов овец, , Вами била .поставлена задача разработать способ обнаружения б тканях и органах плода материнских лейкоцитов.,' содержащих ШЦРС, проникших 'через'''плацентарный барьер. ■

13 оште бкяо использовалс>„9 суягных овцематок, ш.фшдаро-ваишх д^В) и 3 ягнят в возрасте 6-9 месяцев, 'свободных от, вируса лейкоза,- У каждой из, 9-ти оуягных овец из г.рови,'взятой, стерильно ,'выделяли лейкоциты крови /-метили. их-флуоресцвин-Б-изитиощюнатом С0ЛЯ1ЮНИСЛШ (1ПТЦ) и вводили внутривенно каа-днё овце собственные" лейкоциты,; меченые у.Л'ц, У шести овец '. вызывали нарушение.плацентарного.барьера введением, пирогена- , ла с последующим'выявлением'в органах и 'т^ях. мате райских . ■

клеток крови, преодолевших плацеитйрькй барьер я проьикагаж р плод и пораллзльно крот:щплои'в от этих яево.'них ставили оиопробу на 6-9 месячных ягнята.:, свободных их К* -JPC.,_

Яри просмотре мвзк^в-ол;з': • тхов иа ияутгвп:п.'х гн.^в шести плодов; мт&рям яшоркх вводила, меченые ЬмГЦ кдатк» пв фона изменен;..! прсшшеачостн стенк«! кровени::.кх со^ух/'П. г. 'ч нёсцбйтнсг,! ...кк£сз:сйпе -у ясех мстя пАодср «>*цр.чаж:

ч ,р .и-гтяаг'.хск г-?тв.«шсккх клвго-- . job' м *. ' ч-»-чёнл, л..п'.оуэла2; При постановке биопробн кроны этих плодов через Зй-ЧЮ даЗ поело звраяеняя у ягнят ¿*явакай ta.i;iij.r.a к Of-68 антигену НДлРО; .

iice пробы органов и тканей от овец и их плодов фиксировали общепринятым р.етодом с последующей проводкой и заявкой в парафин. При'просмотри в люманесцентнсм микроскопе парафя-норчх срезов отвечали наличие сйвтяайхся (меченых ЙШО лзй-" о пят се яр-ям в органах к тканях плодов от матерой, ?соторим вяодчтя пвг'эгеквл, денные бы; к ь;-ал лчири как при ИСПОЛЬЗОВАНИИ mU.4СВ-СТПОЧВТКОЗ ОТ 8ТЗХ ЯЯВОТИНХ.

3. G. ШИСШМ , Тяг.:;-л o6:;c3tw, на секове.:-:пи проведенных исследований v-дно сделать заключение о тем, что.определение s крови пле дов к новорожденных жквоткых антител к ВЛКРС в РЦД не позго-ллят выявить все случаи трачеплацентарного .заражения вирусом лейкоза'' крупнбгб рогатого скота. В то время как ннАвленне эчтигена вируса лейкоза в краткосрочных культурах кле-1ся r.u пледов п выяснен;-:* инфекционного вгфуса ( метод ¡.'ы; дат- Полое достоверные результаты. Использование ■•.егкй клеток крова у г/сивмныт, инфицированных ВЛКГС,

о последующим .¿¡¡.¡иеииод .этих меченых клеток в тканях я оргв -ня.х плодов -йоэвяляе.т'говорить- о трансплк!л"итя{ Ном проникио-

, втесте с клетке«* и вируса лесхоза.

¿.ВЫВОДЫ

1. Среди групного рогатого скота, выявленного прижизненно., ■ в различных стадиях геыо(.ласто5оа, патоморфологическим методом

у 70% животных подтверждены гемобластозы, среди которых лии£о- , мдный лейкоз составлял 95% и лиьфоспркоые, - 5$. У животных с бессимптомной Ш1КРС инфекцией патоморфологические изменения, свойственные гемобластозам, выявлены у 23$ коров. .

2. Комплексным исследованием с использованием серологичес кого, вирусологического, патофизиологического и патоморфологн-ческого методов, трансплацентарное заражение вирусом лейкоза крупного рогатого скота установлено у плодов из числа исследованных, от коров с различными стадиями лейкозного процесса.

3. Среди коров с патоморфологическим проявлением гемоблас-тозов у 10$ животных, в матке втмеуали очаго^е м диффузные разрастания клеток лимфоидного рядаВ лимфоцитах крови плодов . от этих коров обнаруживали ВДКРС и в сыворотке крови выявляли антитела к вирусу лейкоза. '•■.•.,

4. У 6? коррв серологическим, гематологическим н гистологическим методами признанных больными геыобдастозами, ко без латоморфологических изменений в матке, было, установлено вцут- ' рмутробное инфицирование плодов Ш1КРС.

5. У коров с инфицированными ЬДКРС плодами в матке отме-, чали очаги кровоизлияний, изменение клеток эндотелия и базальной мембраны стенок кровеносных сосудов. ■ ;

' V- б. Среди коров со спонтанной ', бессимптомной ВЩфС-'ийелу:-* цией внутриутробное заражение телят вирусом лейкоза не установ- ' лено. Среди псккстьь кгрс'ьУс гемагслога^ескйм ч.,сьКдёниеыге-/мооластозсв, 14,2% плодов т^ансплацентарным путём заразились -

7. Среди .сгельш^ кбрэв, •• «ессимптоыной стадии лейкоз-

иого процесса, эксперимента;.ьн?- заражениях С-ру1: ллёаом, у животных отчаян внутрцутрсонои заражб.ш.8 п&одсв ¡яруссм яък-*с-с*г. при •• лэгйчс-сяйп и*з.»':.' они* плацечтс' г-'г -•л--.-.:*»»^.-"-.

т постоянно- '-■' . •' - л

Ь. У сулгкых овец, экспериментальна инфиь.дровгнчых В»-1КГ;, в Сессий:'.", ок'вй стадия ляй-'сснпгс процесса, не устаковяекя трйксплацзг.тарная пёргда-ъ ЕЖ- .

9. Внутривенное введение стелькам корову а ».„ягкыа ов-цсп пй^сгэнала писывало у «цветных структурные ят^ене^я станок 'кровеносных сосудов матка, повышение их прокяцаемости и йак следствие - пронакнове!иё материнских лейкоцятов через плацентарный барьер, в плод.

1 10. У стельных йоров к суягных овец с ВЛКРС тфэкцией, посла введения ка' пирогенала, отвечали соответственно 16^ я •с '-'• ¡»яодоз, трг.:с.тлгщйктарюл1 пу-ем заразнвтхе? гяруссн лей-

4 оршзк&ЯВ

I. ¡;л ..*\'еи соъзктеодф и болея надежный по сравнении с РИД, способ выявления «»фишровешостм нолорождегких и плодов ЬЛКК- г.у-'.м кратхоср-чи< гсйсультивированяд клечск чргви с гсс-ледугицим выявлением а Нях р-24 антигена вируса лейке за.

Г., Ра?,.ахтан спсгсо -•прадел^ния в органа- и тканьх плодов уатеркнеках лейкоцитов, меченых флуоресцеинизотиоциои-гом (ФИТЦ).

3. Рекомендуется воздерживаться от введения беременным жи-*о"ныи, сероплзчтганшд п ВЛКРС, реаггогеииых впкцхн и пйрогекда* ргшес- слис^с» г уяздех проникновению аиру си лейгэза от ма:ери й плгд в г'. еис";--^.и.чгТ ¡ч-ряед онтогенеза.

Сделано »-:г<ф»тенч.е ''С-осрб диагностики инфицирс-ванности пледов вирусом 'лейкоза .крупного рс^атсго сксте". Авторское свидетельство В 1703120 й; Ь.09.1991 г. ''■';'

-20 го. Предложены "Методлческнэ рекомендация по цитохимии и физико-химическим методам диагностики гемрбластозов крупно: rç рогатого скота" Ы., 1969г, . ,

б. Материалы диссертации использованы при разработке : "Инструкции о мероприятиях по борьбе с лейкозом крупного роп того скота" { Утверждена ГУБ Госагропрома ссср 9.06.1969 г, » 432-3). '■ "> ' V:

Стандарта РФ " Метода лабораторной диагностики лейкоза крупного рогатого скота и овец" Ы., 1992г.

список р^от,шшикованнщ по ^ссдам^

1. Колина C.B. Особенности■карункулр-котиледонной связи у крупного рогатого скота в различные периода стельности // Бюллетень ВЮВ,' вып, 6?;rM.,; ';I9tb.- 6,53-54., V

2. Колина C.B. Мррфологические нарушения ^арункуло-котиледон-ной связи, приводящие к трансплацентарнсцу инфицированию плода // Бюллетень ВИЭВ, вып. 67.т М., 1966,- С.54-56. 1 '

3. Внутриутробная передача ÇUIKPC при экспериментальном наруи нии плацентарного барьера /, ^люкин М.И..Кблина C.B., Васин A.B., Иванова Л.А., Бурб.а Д.Г./Кудрявцева Л;А1 // Теоретичес кие и практические вопросы ветеринарии (Материалы конференции Тарту, 1990.- С.44-47.

4. Колина С,В. Трансгшацентарная передача вируса лейкоза круп ного рогатого скота // Тезисы докл. '.'Провлема оздоровления хо зяйств от лейкоза крупного рогатого скота" Всес. научно-произ конф.- Новосибирск, 1990.- С.61-62.

5. Гулюкии М.И., Васин A.B..Иванова Л.А., Колина C.B., Вурба Д.Г., Кудрявцева Л.А. : Внутриутробное инфицирование ВДКРС у о при экспериментальном нарушении плацентарного барьера//, Труда ВИЗВ, т. 70.-M., 1991.- С.120-122,

6. Бурба Л.Г.у Гулюкии М.Иv, Васин А,В. ,-Колина С.Ь,-Выявлен* 'те. л/И , заразивших^ i UIKK .j ансплацеша! ным i.yieM // '^уды ВИ :i .'/0 - а , j99i /1 t0

L ko*-^---}