Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Иммунологический контроль как основа повышения эффективности мероприятий по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота

г

ь 011

На правах рукописи

Баркова Наталья Владимировна

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ КАК ОСНОВА ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ МЕРОПРИЯТИЙ ПО БОРЬБЕ С ЛЕЙКОЗОМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Москва-1998

Работа выполнена в комплексной лаборатории по изучению лейкозов и злокачественных опухолей сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко.

Научные руководители: доктор ветеринарных наук

М.И.Гулюкин

доктор ветеринарных наук, профессор

B.М.Нахмансон

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

C.И.Джупина (РУДН) доктор биологических наук А.Ф.Валихов (МГУПБ)

Ведущая организация - Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина.

Защита диссертации состоится "23 " ^^м^-л 1998г. в " ч. на заседании диссертационного совета К 020.28.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко по адресу: 109472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ.

Автореферат разослан "21 - нДрЛал 1998 г.

Учёный секретарь диссертационного совета кандидат ветеринарных наук

Ф.Г. Терешков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время проблема ликвидации лейкоза продолжает оставаться актуальной. Успешное выполнение этой задачи невозможно без точной и своевременной постановки диагноза. Метод систематической проверки носительства вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) при помощи реакции иммунодиффузии (РИД) с антигеном вируса с последующей жёсткой выбраковкой инфицированных животных является наиболее эффективным и экономичным в программах борьбы с лейкозом крупного рогатого скота, осуществляемых в ряде стран (Еуешапп 1986; С}шп(1Ьоеск М., 1988; ВаШаг Н., 1995). При этом некоторые исследователи (вагазз О., \Vittmann 1983) отрицают возможность использования в воспроизводстве стада здорового молодняка, полученного от серопозитивных коров, однако, нельзя не принимать во внимание отмечаемый многими авторами (Москалик Р., 1986; Дун Е.А., 1988; Колчин П.Д., Симонян Г.А., 1994; КИтепиж^ Б., 1991) относительно невысокий уровень внутриутробной передачи ВЛКРС.

РИД проста в постановке, имеет относительно низкую стоимость, высокую специфичность и воспроизводимость. Однако, в ряде случаев она оказывается малоэффективной. Это касается исследований сыворотки крови коров в предродовой и послеродовой периоды, когда наблюдается значительное снижение титра антител, а иногда и полное отсутствие реакции с одновременным повышением уровня антител в предмолозивиом секрете и молозиве (Лахт Т., Марран X., 1988; Лемеш В., Шуринова С., 1990; Щеглова Н., 1990; Кигшак I, 1988). Во избежание получения "ложноотрицательных" результатов РИД, а также для снижения стрессового воздействия на глубокостельных коров, связанного со взятием крови, и предотвращения опасности передачи ВЛКРС, возникающей при несоблюдении правил гигиены во время осуществления этой манипуляции, некоторые исследователи рекомендуют в этот период использовать для

тестирования в РИД преколостральный секрет (Москалик Р., 1990; Векг И., 1985).

После приема телятами молозива инфицированных ВЛКРС коров в их организме формируется колостральный иммунитет, предохраняющий от заболевания в течение срока, продолжительность которого, обусловленная комплексом факторов, различна: от 2-х (Лемеш В.М., Черняк В В., Минасян В.Г., 1990; Шгесгка К„ Klimentowski Б., 1988) до 6 месяцев (Копо У., Бегюш М., 1983; Сандев Н., Николова М., 1988 и др.). Уточнение этих сроков необходимо для своевременного выявления и удаления из стада телят, инфицированных вирусом лейкоза.

Научное обоснование необходимости внесения ряда изменений, касающихся проведения серологической диагностики (РИД), в существующую систему борьбы с лейкозом позволит более эффективно проводить оздоровительные мероприятия.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось совершенствование системы мероприятий по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота на основе иммунологического контроля (РИД).

Для решения этой проблемы были поставлены следующие задачи:

1.Определить роль внутриутробной передачи ВЛКРС от инфицированных вирусом лейкоза коров их потомству.

2. Изучить динамику антител к ВЛКРС в сыворотке крови и секрете молочной железы коров на протяжении сухостойного периода.

3. Установить продолжительность персистенции колостральных антител к ВЛКРС в сыворотке крови телят, родившихся от инфицированных вирусом лейкоза коров.

4.Продемонстрировать эффективность "Системы ВИЭВ по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота".

Научная новизна. Изучены закономерности перехода антител к ВЛКРС из крови сухостойных коров в секрет молочной железы.

Установлена зависимость длительности колострального иммунитета у потомков серопозитивных коров от уровня антител к ВЛКРС в материнском молозиве, а также сыворотке крови коров в период лактации. Подтвержден незначительный уровень трансплацентарной передачи ВЛКРС телятам от инфицированных вирусом коров, не имеющих клинико-гематологических изменений, характерных для лейкоза.

Практическая ценность. Материалы экспериментальных исследований использованы при разработке "Правил по профилактике и ликвидации лейкоза крупного рогатого скота" и "Методических рекомендаций по диагностике лейкоза крупного рогатого скота", которые представлены в Департамент ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации для утверждения.

Установленные закономерности изменения уровня антител к ВЛКРС в организме глубокостельных коров могут быть использованы при тестировании в РИД предмолозивного секрета.

Установленное завершение элиминации колостральных антител к ВЛКРС у животных в течение 5 месяцев и предложенное в связи с этим снижение "стартового" возраста при исследовании телят в РИД позволит в более ранние сроки выявлять инфицированных ВЛКРС животных и удалять их из стада, предупреждая тем самым дальнейшую передачу вируса лейкоза.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на научно-практической конференции "Ретровирусные и прионные инфекции животных" (Москва, 1995г.); на межлабораторном научно-производственном совещании научных сотрудников ВИЭВ (Москва, 1998г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 статей.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, списка

литературы (141 отечественный и 156 зарубежных источников) и приложения. Работа содержит 16 таблиц и иллюстрирована 18 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа была выполнена в комплексной лаборатории по изучению лейкозов и злокачественных опухолей сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко, в районных ветеринарных лабораториях и хозяйствах Московской области.

Объектом исследования служил крупный рогатый скот чёрно-пёстрой, голштино-фризской, айрширской, костромской и швицкой пород.

Материалом исследования являлись: 2073 пробы сыворотки крови от 611 животных, 253 пробы секрета молочной железы от 23 коров, 158 проб цельной крови от 124 животных.

Эпизоотологическое исследование проводили в следующих хозяйствах Московской области: "Александрово"; "Ленинский Луч"; "Заря Подмосковья"; "Никоновское"; "Матвеевское"; им. Ленина; "Русь"; "Михайловское"; "Константиново"; Московская селекционная станция; "Фрязево"; "Фряновское"; Конный завод №1; "Непецино"; "Жегалово"; а также в Тульском НИИСХ и "Медведки" Костромской области.

Для ретроспективной оценки ситуации по лейкозу в данных хозяйствах были использованы исходные материалы - ведомости поголовных и выборочных серологических и гематологических исследований 33552 животных на лейкоз, проведённых в комплексной лаборатории по изучению лейкозов и злокачественных опухолей сельскохозяйственных животных ВИЭВ.

Выявление специфических антител к ВЛКРС в сыворотке крови животных и секрете молочной железы осуществляли с помощью реакции иммунодиффузии в геле агара согласно "Методическим указаниям по

диагностике лейкоза крупного рогатого скота" (1989). Для постановки РИД использовали диагностический набор, изготовленный Курской биофабрикой.

Гематологический метод заключался в количественной и качественной оценке лейкоцитов периферической крови животных, отнесённых по результатам РИД к группе инфицированных ВЛКРС. Результаты исследования оценивали по "лейкозному ключу".

Генеалогический анализ проводили на основе систематизации имевшихся в хозяйствах данных зоотехнического и ветеринарного учёта.

При проведении ретроспективного анализа взаимосвязи иммунологического статуса коров и их потомства рассчитывали показатель инфицированности животных ВЛКРС и коэффициент корреляции. Для установления репрезентативности выборочных показателей рассчитывали ошибку средней арифметической и критерий достоверности.

' Степень и направление связи между показателями устанавливали путем определения коэффициента корреляции между альтернативными признаками и его достоверности. Положительный коэффициент корреляции указывал на прямую связь между признаками, отрицательный - на обратную. При коэффициенте корреляции выше 0,7 связь считалась сильной, при 0,3-0,7 - средней, ниже 0,3 - слабой.

При установлении зависимости уровня антител к ВЛКРС в сыворотке крови и секрете вымени сухостойных коров от сроков стельности проводили регрессионный анализ. Выравнивание эмпирических рядов осуществляли с помощью персонального компьютера в системе анализа временных рядов "МЕЗОЗАВР" методом медианного сглаживания, основанным на представлении временного (эмпирического) ряда в виде суммы достаточно гладкого тренда и случайной компоненты.

В этой же системе устанавливали тенденцию (тренд) изменения показателей (титра антител к ВЛКРС в секрете молочной железы у сухостойных коров) и выводили уравнения, описывающие их динамику.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучение роли пренатальной передачи ВЛКРС

Ретроспективный анализ результатов исследования телят 6-месячного возраста в неблагополучных по лейкозу хозяйствах с разным уровнем заражённости маточного поголовья показал, что уровень инфицированное™ ВЛКРС 3202 телят 6-месячного возраста в среднем составлял 6,8% (Р>0,999) при вариациях от 1,0% до 19,1%.

При сопоставлении показателей инфицированности ВЛКРС коров, которые варьировали от 4,2% до 81,0%, составив в среднем 43,2% (Р>0,999), с уровнем изначальной зараженности 6-месячных телят выявлена средняя прямая корреляционная связь. Коэффициент корреляции (г=0,56) достоверен (Р>0,95).

Несмотря на определенную зависимость инфицированности 6-месячных телят от зараженности маточного поголовья, установлено, что большинство телят - в среднем 93,2% - рождались свободными от вируса лейкоза. Представленные материалы указывают на практическую возможность использования серопозитивных коров с целью получения от них потомства для воспроизводства стада. Вместе с тем, следует отметить, что в хозяйстве, где уровень заражённости 6-месячных телят составлял 19,1%, как ни в одном из рассматриваемых, высоким (15,0%) был уровень гематологического проявления лейкоза среди коров и нетелей, что исключает возможность использования потомков от больных лейкозом животных для воспроизводства стада.

Исследования молодняка в динамике от 6 месячного возраста до момента перевода в основное стадо, проведённые в ГПЗ "Александрово", показали отсутствие зависимости степени инфицированности ВЛКРС потомков от аналогичного показателя их матерей: 97,0% телят, которые отрицательно реагировали в РИД в возрасте 6-ти месяцев, оставались свободными от вируса на протяжении всего периода исследований. Лишь 3,0% животных оказались зараженными в течение первых месяцев жизни, что свидетельствует об одинаковой вероятности постнатального заражения телят от здоровых и от инфицированных ВЛКРС коров.

Формирование свободных от инфекции ВЛКРС стад коров собственной репродукции в оздоравливаемых от лейкоза крупного рогатого скота хозяйствах проводилось с многократным (4-10 раз) тестированием в РИД животных в динамике их выращивания, начиная с 6-месячного возраста. На рисунке 1 продемонстрирована возрастная структура серонегативных стад, сформированных из потомства ееропозитивных матерей: в среднем 35,1% (Р>0,999) составляют животные 5 лет и старше; около 25,9% (Р>0,999), 29,4% (Р>0,999) и 9,6% (Р>0,99) приходится соответственно на 4-х, 3-х и 2-х летних коров.

Таким образом, дочери ееропозитивных коров, родившиеся свободными от вируса лейкоза и прошедшие многократный серологический контроль в динамике развития, оставались серонегативными на протяжении 5 и более лет.

При использовании эпизоотологического и генеалогического методов нами были получены данные, отражающие структуру оздоровленных от лейкоза стад. Инфицированность ВЛКРС коров в неблагополучных по лейкозу хозяйствах варьировала от 20,6% до 81,0%, составив в среднем 55,2% (при высокой достоверности средней арифметической: Р>0,999).

□ 5 лет и

Рис.1. Соотношение различных возрастных групп коров в серонегативной популяции, сформированной потомками инфицированных ВЛКРС коров.

Анализ материалов показал, что удельный вес серонегативных коров, полученных от серопозитивных матерей, составлял в среднем 57,1% (Р>0,999) и находился в прямой зависимости от уровня заражённости коров, установленного перед началом проведения противолейкозных мероприятий. Между этими показателями установлена средняя прямая связь (коэфф. корреляции г=0,7; Р>0,95).

Следовательно, вклад серопозитивных коров в формирование стада существенен, т. к. большинство телят рождаются свободными от ВЛКРС, их можно использовать в воспроизводстве при условии изолированного выращивания под строгим серологическим контролем.

Изучение динамики титра антител к ВЛКРС в сыворотке крови и секрете

молочной железы коров на протяжении сухостойного периода.

Работу проводили в АОЗТ "Матвеевское" Одинцовского района Московской области на 2-х группах животных: первая (опытная) состояла из 13 стельных серопозитивных коров; вторая (контрольная) - из 10 стельных серонегативных коров.

Первое серологическое исследование в РИД проб сыворотки крови и секрета молочной железы животных было проведено за 52-22 дня до запуска. По его результатам группа серопозитивных коров была условно разделена на две подгруппы:

- первая - 5 животных с "условно низкой" первоначальной концентрацией антител к ВЛКРС в сыворотке крови, составившей 2 и 3 (1о&Т);

- вторая - 8 животных с "условно высокой" концентрацией антител, составившей 4 и 5 (^¿Т).

При параллельном исследовании в РИД секрета молочной железы ни у одной коровы антитела к вирусу не были обнаружены.

Каждое животное в дальнейшем подвергалось серологическому контролю в различные сроки стельности: при запуске; в течение всего сухостойного периода пятикратно с интервалами в 10 дней; в день отёла; через 5-7; 15 и 25 дней после отёла.

По мере приближения отёла среднее значение уровня противовирусных антител в сыворотке крови коров снижалось с 3,0 в середине сухостойного периода до 1,5 - минимального значения, отмеченного в день отёла (соответственно 1.20 и 1.75 для животных первой и второй подгрупп) (Рис.2,3).

После отёла уровень антител в сыворотке крови всех животных постепенно повышался, возвращаясь к первоначальному.

1ое2 Т

Дни

-о- Сыворотка крови -О- Секрет молочной железы

Рис.2. Изменение концентрации антител к ВЛКРС в сыворотке крови и секрете молочной железы коров 1 подгруппы в предродовой и послеродовой периоды.

т

Дни

-о- Сыворотка крови -О- Секрет молочной железы

Рис.3. Изменение концентрации антител к ВЛКРС в сыворотке крови и секрете молочной железы коров 2 подгруппы в предродовой и послеродовой периоды.

В предмолозивном секрете коров антитела к ВЛКРС были выявлены через 10 дней после запуска. Средние значения концентрации антител составили для животных первой и второй подгрупп соответственно 2,00 и 3,50. По мере приближения отёла уровень антител в секрете молочной железы нарастал, достигнув максимума непосредственно перед отёлом - в среднем 6,5, т.е. 5,80 и 6,88 соответственно для коров первой и второй подгрупп. Выявлена прямая зависимость уровня антител к ВЛКРС в секрете молочной железы от первоначальной концентрации их в сыворотке крови. Коэффициент корреляции (г=0,7 ) высоко достоверен (Р>0,99).

Сравнивая течение описанных процессов у коров первой и второй подгрупп (с "условно низким" и "условно высоким" первоначальным уровнем антител в сыворотке крови), была отмечена их различная интенсивность. У животных 1-й подгруппы в течение всего сухостойного периода количество антител к ВЛКРС в секрете молочной железы было меньше, чем у коров 2-й подгруппы. Максимальный титр ЗНТПУ^Л наблюдался у всех животных непосредственно перед отёлом, однако, уровень антител в секрете молочной железы у коров второй подгруппы (в среднем 6,88) превышал аналогичный показатель, зафиксированный у животных первой подгруппы (в среднем 5,80).

При анализе нарастания титров антител в секрете молочной железы в сухостойный период были выведены уравнения, описывающие этот процесс:

У (0= 3,0341 1п 0 + 11,952) - 7,6213 - для коров первой подгруппы;

У(0= 1,736 1п 0 + 0,25517) - 0,82421 - для коров второй подгруппы;

где С - число дней, прошедших с момента запуска, У - уровень антител к ВЛКРС (1од2Т).

Снижение концентрации антител к ВЛКРС в секрете молочной железы после отёла происходило быстрее у животных первой подгруппы: через 15 дней антитела не выявляли ни в одной пробе, в то время как у

животных второй подгруппы антитела продолжали выявляться в незначительных количествах вплоть до 25-го дня.

У серонегативных коров (контрольная группа) на протяжении всего периода эксперимента антитела к ВЛКРС не выявляли ни в секрете молочной железы, ни в сыворотке крови.

Таким образом, после запуска в секрете молочной железы серо позитивных коров появлялись антитела к ВЛКРС, титр которых нарастал по мере приближения отёла и достигал максимума непосредственно перед ним.

Изучение длительности колострального иммунитета к ВЛКРС.

Исследование продолжительности колострального иммунитета к ВЛКРС осуществляли в АОЗТ "Матвеевское" Одинцовского района Московской области. Эксперимент проводили на 12 телятах, родившихся от коров, у которых изучали динамику антител к ВЛКРС на протяжении сухостойного периода.

Непосредственно после отёла от каждой коровы были отобраны пробы молозива и проведено серологическое исследование (РИД) их с целью определения уровня антител к ВЛКРС. Одновременно осуществляли отбор проб сыворотки крови от новорожденных телят до первого приема молозива для выявления животных, заразившихся внутриутробно.

В дальнейшем пробы крови отбирали у телят через сутки после получения материнского молозива, в возрасте 1-го; 2-х; 3-х; 4-х; 5-ти; 6-ти и 7-ми месяцев. В каждом случае определяли уровень антител к ВЛКРС.

Изучение динамики концентрации колостральных антител к ВЛКРС у телят на протяжении первых семи месяцев жизни показало следующее.

У теленка с самым низким изначальным уровнем колостральных антител - 2 (log^T) - антитела к ВЛКРС не обнаруживали уже в возрасте 1

мес. У двух телят с первоначальным уровнем антител, равном 3, они сохранялись в организме только на протяжении первого месяца жизни. У семи животных с концентрацией 4-5 продолжительность выявления антител составила от 2 до 4 мес. Более высокое исходное содержание антител - 6 и 7 (у 2-х телят) обуславливало и большую продолжительность колострального иммунитета - до 4-5 месяцев.

Между первоначальной концентрацией колостральных антител к ВЛКРС в сыворотке крови новорожденных телят и продолжительностью их персистенции прослеживалась сильная прямая связь. Коэффициент корреляции (0,86) очень высоко достоверен (Р>0,999).

Заслуживает внимания изучение зависимости продолжительности колострального иммунитета у телят от концентрации антител к ВЛКРС в молозиве их матерей, инфицированных вирусом лейкоза.

Всех подопытных телят условно разделили на 2 группы по принципу близких значений уровня антител к ВЛКРС в материнском молозиве:

- группа 1 (5 животных) - телята, получившие молозиво с концентрацией антител к ВЛКРС, равной 5-6 Т);

- группа 2 (7 животных) - телята, получившие молозиво с концентрацией антител к ВЛКРС, равной 7-8 (1оцг Т).

Анализ полученных результатов показал, что у телят 1-ой группы персистенция колостральных антител продолжалась до 3-месячного возраста, в то время как у телят 2-ой группы - до 5 месячного (Рис.4).

Между концентрацией антител к ВЛКРС в молозиве и длительностью колострального иммунитета прослеживалась средняя прямая связь. Коэффициент корреляции (0,58) достоверен (Р=0,95).

2 3 4 Возраст (мес.)

Рис.4. Длительность обнаружения в РИД колостральных антител к ВЛКРС в сыворотке крови телят, получивших молозиво с различной концентрацией антител к вирусу лейкоза.

Аналогичная взаимосвязь установлена между уровнем антител к ВЛКРС в сыворотке крови коров до запуска и длительностью колострального иммунитета у потомства этих коров. У телят первой группы (за исключением одного), которые являлись потомками коров с "условно низким" (2-3 Т) исходным уровнем антител, на протяжении всего периода исследований выявляли более низкие показатели содержания антител к ВЛКРС и длительность колострального иммунитета у этих животных была меньше (до 3 мес.), в то время как телята второй группы (за исключением одного) - потомки коров с "условно высоким" (45 1о§2 Т) исходным уровнем антител имели более высокие показатели концентрации колостральных антител на протяжении всего периода эксперимента и большую продолжительность их персистенции (до 5 мес.).

В 6-месячном возрасте все телята реагировали в РИД отрицательно. Коэффициент корреляции (0,6) достоверен (Р>0,95).

Таким образом, наблюдалась последовательная прямая зависимость: чем выше уровень антител к ВЛКРС в сыворотке крови лактирующих коров, тем выше их содержание в молозиве коров в момент отёла, выше концентрация антител в сыворотке крови телят после усвоения молозива, а следовательно, дольше происходит процесс их элиминации.

Следующим фрагментом работы явилось исследование продолжительности колострального иммунитета к ВЛКРС у телят, являвшихся потомками коров, зараженных ВЛКРС (иммунологический статус матерей был установлен до отёла), которое проводили в хозяйствах Московской области: "Заря Подмосковья" - на 35 телятах (черно-пестрой породы ); ГПЗ ■ "Александрово" - на 10 телятах (швицкой породы); "Матвеевское" - на 11 телятах (черно-пестрой породы).

Контрольные группы животных - потомков здоровых коров, показавших отрицательный результат РИД до рождения телят, были подобраны в ГПЗ "Русь" - 11 голов и АО "Матвеевское" - 6 голов.

От животных обеих групп для исследования в РИД отбирали пробы крови до выпойки им первой порции молозива; через сутки после этого; далее до 7-месячного возраста с интервалом 1 месяц.

Серологическими исследованиями в РИД сывороток крови телят контрольной группы на протяжении эксперимента специфических антител к ВЛКРС не было выявлено.

С увеличением возраста телят прослеживалась четкая тенденция снижения абсолютного и относительного количества животных, положительно реагировавших в РИД с антигеном ВЛКРС. Среди 4-месячных телят свободными от антител оказались 66,1%; а к 5-месячному возрасту произошел наиболее ощутимый спад - 94,6% животных утратили антитела (Табл.1, Рис.5.).

Таблица 1.

Соотношение положительно и отрицательно реагирующих в РИД с антигеном ВЛКРС телят в первые месяцы жизни, обусловленное элиминацией из их организма колостральных антител к вирусу лейкоза.

До После Возраст телят (мес.)

выпойки выпойки

1 2 3 4 5 6 7

молозива молозива

РИД (+): п 0 56 55 54 50 19 3 2 0

% 0 100 98,2 96,4 89,3 33,9 5,4 3,6 0

РИД (-): п 56 0 1 2 6 37 53 54 56

% 100 0 1,8 3,6 10,7 66,1 94,6 96,4 100

Примечание: п - количество телят.

Разница между показателями 4-х и 5-месячных телят оказалась в высшей степени достоверной (критерий достоверности разности выборочных долей (^ =4,12) при числе степеней свободы у=110 превысил стандартные значения критерия Стьюдента для трех порогов достоверности).

В возрасте 6 месяцев антитела к ВЛКРС сохранялись только у 2-х телят (3,6%); в 7 месяцев в РИД с гликопротеидным антигеном ВЛКРС все животные реагировали отрицательно.

Таким образом, в период от 4-х до 5-ти месяцев с момента рождения происходили наиболее существенные изменения в организме телят, связанные с элиминацией колостральных антител к ВЛКРС. Подавляющее большинство животных (около 95%) к 5-месячному возрасту освобождались от них становились восприимчивыми к заражению вирусом лейкоза.

4-месячные телята 5-месячные телята

Рис.5. Наличие колостральных антител к ВЛКРС у телят в возрасте

4 и 5 месяцев.

Динамику концентрации антител к вирусу лейкоза у телят, инфицированных внутриутробно, изучали на 7 телятах черно-пестрой породы, в сыворотке крови которых до выпойки первой порции материнского молозива были обнаружены специфические антитела к ВЛКРС. После выпойки молозива уровень антител в сыворотке крови телят составил 7-9 (1о§2 Т).

Изменение титра антител происходило следующим образом: у четырех телят в течение 7-ми месяцев наблюдали его колебания на уровне 6-9 (1о^2 Т); у трех - до 2-мес. возраста происходило снижение титра с 8-9 до 5-7, затем отмечали некоторую стабильность, а после 4-х месяцев -повышение практически до первоначального уровня - 8 (^2 Т), т.е. в течение первых 7 месяцев жизни концентрация антител к ВЛКРС в сыворотке крови инфицированных внутриутробно телят не снижалась.

Эффективность системы противолейкозных мероприятий, основанной на серологической диагностике

Для анализа эффективности оздоровительных мероприятий, осуществлявшихся в неблагополучных по лейкозу крупного рогатого скота хозяйствах по системе ВИЭВ, нами были использованы данные собственных серологических и гематологических исследований, а также результаты исследований, проведенных сотрудниками комплексной лаборатории по изучению лейкозов и злокачественных опухолей сельскохозяйственных животных ВИЭВ.

Поскольку первостепенное значение при осуществлении комплекса противолейкозных мероприятий имеет работа с молодняком, представляет интерес определение доли телят, которая в связи с инфицированностью ВЛКРС не подлежит использованию для воспроизводства стада.

Эпизоотологический анализ, проведенный в хозяйстве "им.Ленина", где на момент первого обследования инфицированность маточного поголовья крупного рогатого'скота составляла 37,9%, показал следующее: на протяжении периода оздоровления, продолжавшегося 78 месяцев, изменение числа телят, выбракованных в связи с инфицированностью их вирусом лейкоза, имело тенденцию к постепенному уменьшению вплоть до полного исчезновения к окончанию периода оздоровления (Рис.6).

Рождаемость телят в хозяйстве значительно превышала выбытие их по причине инфицированности вирусом лейкоза. Так, за 6-летний период оздоровления прирост поголовья за счёт рождаемости составил 2597 голов, а выбраковка по лейкозу -115 голов.

Следовательно, потери из-за выбраковки молодняка по лейкозу были несущественными. Высокий процент ремонта стада и сохранности молодняка, а также проведение планомерных диагностических исследований на лейкоз с обязательной выбраковкой всех положительно

реагирующих в РИД телят способствовали успешному завершению оздоровительных мероприятий.

Продолжительность периода оздоровления хозяйств зависела от инфицированное™ поголовья ВЛКРС и выбранной тактики ликвидации заболевания.

В хозяйствах с уровнем заражённости коров не выше 1%, где применяли одномоментный вывод всех инфицированных животных из стада, продолжительность периода оздоровления популяции крупного рогатого скота от инфекции ВЛКРС не превышала 9 месяцев.

В хозяйствах, где выявляли до 15% инфицированных коров, применяли метод разделения на серонегативные и серопозитивные группы и изолированного их содержания с проведением в дальнейшем (каждые 3 мес.) серологических исследований животных серонегативных групп и гематологическими исследованиями серопозитивных животных. Сроки оздоровления колебались от 9 до 30 месяцев.

30-1

Ч 25

иэ

х

§ 20

к

*

2 15

н

0

1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 ■ 6-месячные телята О 12-месячные телята О телки перед осеменением

Рис 6. Снижение уровня инфицированности молодняка различного возраста в процессе оздоровления хозяйства "им Ленина".

При показателе заражённости коров, превышающем 15%, поголовье хозяйств оздоравливали путём постоянной замены серопозитивных коров серонегативными первотёлками. Всех инфицированных коров дважды в год подвергали гематологическому исследованию на лейкоз, при выявлении у животных изменений крови комплексные диагностические исследова?1ия (серологические и гематологические) повторяли через два месяца. Молодняк текущего года рождения от больных коров не допускали к племенному использованию. Оздоровление таких хозяйств продолжалось 19 до 92 месяцев.

Проведенные сотрудниками комплексной лаборатории по изучению лейкозов и злокачественных опухолей с/х животных ВИЭВ в ряде хозяйств противолейкозные мероприятия позволили оздоровить стада крупного рогатого скота от инфекции и обеспечить в дальнейшем их благополучие на протяжении нескольких лет (до 10 лет).

ВЫВОДЫ

1. С целью снижения экономических затрат при оздоровлении хозяйств от лейкоза крупного рогатого скота обосновано использование в репродуктивных целях телят, родившихся как от здоровых, так и от инфицированных ВЛКРС коров, при условии изолированного выращивания под строгим серологическим контролем и выпаивания после окончания молозивного периода молока здоровых коров.

2. Систематическое применение РИД для выявления животных, инфицированных ВЛКРС, позволяет оздоравливать хозяйства от лейкоза крупного рогатого скота и обеспечивать их благополучие.

3. Установлено, что уровень пренатальной передачи ВЛКРС у инфицированных коров составляет в среднем 6,8%, в то время как у больных лейкозом животных данный показатель достигает 19,1%.

4. В середине сухостойного периода среднее значение уровня противовирусных антител в сыворотке крови коров снижается с 3,0 (1og2T) до 1,5 (log2T) - минимального значения, отмеченного перед отёлом. При исследовании сыворотки крови коров в сухостойный период "выпадения" РИД не отмечены.

5. Уровень антител к ВЛКРС в предмолозивном секрете коров на протяжении всего сухостойного периода и в день отёла находится в прямой зависимости от концентрации антител в сыворотке крови во время лактации: у коров с уровнем антител в сыворотке крови 2-3 (log2T) его максимальное значение в молозиве в день отёла составляет 5,8 (1оёЛ"), у животных с уровнем антител в сыворотке крови 4-5 (logjT) достигает 6,88 (logzT).

6. Установлена прямая связь между концентрацией антител к ВЛКРС в молозиве и длительностью колострального иммунитета: при выпойке телятам молозива с концентрацией антител 5-6 (log2T) персистенция колостральных антител у телят продолжается до трехмесячного возраста, при концентрации антител в молозиве 7-8 (log2T) - до пятимесячного. Продолжительность колострального иммунитета у 94,6% телят, являющихся потомками инфицированных ВЛКРС коров, составляет пять месяцев.

7. У телят, положительно реагирующих в РИД до приёма молозива (инфицированных внутриутробно), не происходит полной элиминации антител к ВЛКРС из организма в течение первых месяцев жизни. В возрасте от четырех до семи месяцев уровень антител в сыворотке крови (6-9 log2T) близок к концентрации, установленной после первой выпойки молозива (7-9 log2T). Положительные результаты РИД при исследованиях сыворотки крови телят в 4-х и 5-месячном возрасте свидетельствуют об инфицированности животных вирусом лейкоза и диктуют необходимость более раннего удаления их из стада.

Список работ, опубликованных по материалам диссертации

1. Нахмансон В.М., Дун Е.А., Бурба Л.Г., Беляров В.М., Петров Н.И., Казаковцев Л.С., Никитинская Л.П., Баркова Н.В. Ведущее звено в системе профилактики и борьбы с лейкозом крупного рогатого скота // Ветеринария. - 1994. - №3. - С.9-13.

2. Нахмансон В.М., Дун Е.А., Бурба Л.Г., Беляров В.М., Петров Н.И., Баркова Н.В., Дудник М.В., Хромова И.С. Использование коров, зараженных вирусом лейкоза крупного рогатого скота, в системе противолейкозных мероприятий //Ветеринария. - 1995. - №1. - С.8-11.

3. Баркова Н.В. Изучение антителоносительства к ВЛКРС у сухостойных коров // Бюлл. ВИЭВ. - 1996. - Вып. 77. - С.65.

4. Нахмансон В.М., Беляров В.М., Дун Е.А., Баркова Н.В., Никитинская Л.П., Дудник М.В., Матошин В.П., Баранников В.М., Крылова Т.П., Васильев М.В., Стариков В.В., Староверова A.A., Милайлина Т.Н. Эффективность "Системы ВИЭВ профилактики и ликвидации лейкоза крупного рогатого скота" в хозяйствах Московской области // Бюлл. ВИЭВ. - 1996. - Вып. 77. - С.75-76.

5. Баркова Н.В. Повышение эффективности противолейкозных мероприятий с применением иммунологического контроля на лейкоз // Бюлл. ВИЭВ. - 1996. - Вып.77. - С. 98.

6. Баркова Н.В. Влияние физиологического состояния животных на динамику антител к ВЛКРС // Ретровирусные и прионные инфекции животных: труды ВИЭВ. - 1998. - Т.72. - С.174-178 (в печати).

7. Дун Е.А., Гулюкин М.И., Замараева Н.В., Баркова Н.В., Петров Н.И., Никифорова В.Л. Эпизоотологическая оценка методов прижизненной диагностики лейкоза крупного рогатого скота // Ретровирусные и прионные инфекции животных: труды ВИЭВ. - 1998. -

Т.72? - С.36-44 (в печати).