Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Токсикологическая оценка Т-2 токсина и афлатоксина В1 при сочетанном их воздействии на организм животных

РГБ ОД

О ^ ''' Р'-П

На правахрукопйск

Зинатуллин Рустам Римовнч

ТОКС И ДОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА Т-2 ТОКСИНА И АФЛА ТОКСИНА В, ПРИ С0ЧЕТА1Ш0М ИХ ВОЗДЕЙСТВИИ ПА ОРГАНИЗМ ЖИВОТНЫХ

16.00.04. - Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань -1999

Работа выполнена в отделе экотоксикологии Всероссийского науч исследовательского ветеринарного института (ВНИВИ) в 1996-1999 гг.

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

заслуженный деятель науки РТ, доктор биологических наук, профессор Тремасов М.Я. доктор ветеринарных наук, член-корр. МПА, Софронов В.Г.

кандидат биологических наук, с.н.с. Конюхов Г.В.

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский статут ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (ВНИИВСГЭ).

Защита состоится " УР " ^¿ббЬсЛи 1999 года в_часов на

седании диссертационного совета Д-120.15.01 при Всероссийском науч! исследовательском ветеринарном институте (420075, г. Казань, Научн городок-2, ВНИВИ).

'С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " 29 '' шге^и 1999г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат ветеринарных пгук^^^^^^^^у/^ В.И. Степанов.

1. Общая характеристика работы

1.1. Актуальность темы. Из природных экотоксикантов - загрязнителей сельскохозяйственного сырья и продуктов питания, наибольшую опасность для здоровья населения представляют яды микроскопических грибов - микотокси-ны. Они распространены повсеместно, загрязняют продукты и корма на всех папах их производства, транспортировки, хранения н реализации. Многочисленные исследования, проводимые зарубежными и отечественными учеными, свидетельствуют о значительной частоте и степени пораженности пищевых продуктов и кормов микотоксинами на всех континентах, включая Россию, страны СНГ и дальнего зарубежья.

В настоящее время известно более 250 видов микроскопических грибов, продуцирующих около 200 микотоксиноп, среди которых немало вызывающих алиментарные токсикозы человека и животных. Многие микотоксины обладают тератогенными, мутагенными, аллергенными и иммуноденресивными свойствами. Снижая резистентность организма они могут способствовать развитию инфекционных и незаразных болезнен. Из известных в настоящее время микроскопических грибов, интерес представляют грибы из рода Fusarium и Aspergillus. в частности F. sporotrichiella и A.ßavus, A. parasiticus, которые продуцируют опасные для человека и животных микотоксины: Т-2 токсин, афлатоксины В|, В2, О,, G2, М,.

При многообразии используемых кормов, ингредиенты которых нередко поступают из разных стран или регионов внутри страны, воможно неблагоприятное влияние одновременно нескольких микотоксинов, а также одновременное поступление в организм токсинов, вырабатываемых на различных видах кормов, входящих в рацион животных.

Имеются данные об увеличении токсического действия при одновременном поступлении в организм Т-2 токсина, афлатоксинов, дезоксиниваленола (ДОН), зеараленона причем токсический эффект достигался при наличии искомого микотоксина в дозах или незначительно превышающих, или не превышающих ПДК каждого из них (R. Schoental, 1983, Котик А.Н., 1992).

Спонтанные, сочетанные микотоксикозы сопровождающиеся массовой заболеваемостью, повышенным отходом животных, сложностью диагностики и профилактики в условиях животноводческих и птицеводческих хозяйств наблюдали Тремасов МЛ, Сергейчев А.И. и др., (1995, 1996).

Сочетанные микотоксикозы до сих пор не изучены, не разработаны критерии оценки их влияния на организм и меры борьбы с ними, пет норм, регламентирующих микотоксины при сочстанном поступлении.

Не достаточно выяснено распространение микроскопических грибов -продуцентов микотоксинов в различных регионах России, что затрудняет прогнозирование возникновения того или "иного сочетанного микотоксикоза.

Работа является частью комплексных заданий НИР 05.06. "Обосновать максимально допустимые уровни микотоксинов при сочетанием их воздействии

на организм животных и разработать методы диагностики смешанных микоток-сикозов" (№ госрегистрации 01970002415) и задания 1.8. " Контроль за отдаленными последствия действия токсических элементов, пестицидов и микотоксинов"

1.2. Цель и задачи исследований: изучение наиболее вероятных микотоксикозов животных России, токсикологическая оценка Т-2 токсина и афлатокси-на В1 при сочетанном поступлении в организм, теоретическое и экспериментальное обоснование их ориентировочных безопасных уровней. На разрешение были поставлены следующие задачи:

1. Изучить уровень загрязнения кормов микроскопическими грибами и микотоксинами в Республике Татарстан и в ряде других регионов России. Составить перечень микроскопических грибов и микотоксинов, наиболее вероятных сочетанных микотоксикозов.

2. Изучить острую и субхроническую токсичность Т-2 токсина и афлаток-сина В] при сочетанном их поступлении.

3. Провести оценку токсического действия сочетанных Т-2 токсин и афла-токсин В] - микотоксикозов. Изучить влияние Т-2 токсина и афлатоксина В1 при сочетанном поступлении в организм на клинические, гематологические показатели, симпато-адреналовую систему, перекисное окисление липидов и энергетический метаболизм животных.

4. Разработать ориентировочные безопасные уровни Т-2 токсина и афлатоксина В1 при сочетанном их поступлении в организм животных. Оценить ряд профилактических средств при этих воздействиях.

1.3. Научная новизна. Определены наиболее часто встречающиеся мико-токсины по регионам РТ, составлена карта-прогноз вероятных микотоксикозов в этих местах, изучено сочетанное влияние Т-2 токсина и афлатоксина В1 на клиническое состояние подопытных животных. Изучены гематологические и электрокардиографические показатели, состояние симпато-адреналовой системы, перекисного окисления лишщов и энергетического метаболизма животных, получавших одновременно Т-2 токсин и афлатоксин Вь На основании полученных данных доказано усиление токсического эффекта Т-2 токсина и афлатоксина В( при сочетанном поступлении, совокупность изученных параметров может служить критерием оценки тяжести воздействия микотоксинов при одновременном поступлении.

Впервые обоснованы ориентировочные безопасные уровни микотоксинов - Т-2 токсина и афлатоксина В] в кормах сельскохозяйственных животных при сочетанном их поступлении. Показана эффективность фармакологических препаратов (аминазин - ксимедон) в качестве профилактических средств при этих токсикозах.

1.4. Практическая ценность работы. Выявленные нарушения клинических, гематологических и электрокардиографических показателей, данных липидного и энергетического обменов, состояния симпато-адреналовой системы с морфологической оценкой органов, имеют важное значение при оценке токсического

действия смешанных микотоксикозов, диагностике тгих токсикозов. На основании проведенных исследований обоснованы ориентировочные безопасные уровни сочетанного микотоксикоза.

Составлена карта-прогноз микотоксикозов для некоторых регионов России. Результаты исследований вошли в "Методические рекомендации по профилактике микотоксикозов в Республике Татарстан" и "Методические рекомендации по борьбе с микотоксикозами животных в Республике Татарстан". Которые рекомендованы для внедрения в производство Главным Управлением Ветеринарии КМ РТ.

1.5. Апробация работы. Основные материалы работы доложены на Республиканской научно - производственной конференции по актуальным вопросам ветеринарии и животноводства, Казань 1997, Конференции «Актуальные проблемы Республики Татарстан», Казань 1997, Международном координационном совещании по экологическим проблемам патологии, фармакологии и терапии животных, Воронеж 1997, Международной научно-практической конференции, посвященной 40-летию ВНИИВВиМ, Москва. 1998, Международной научной конференции посвященной 125-летию Казанской Государственной академии ветеринарной медицины, Казань 1998. 4 Республиканской научно - технической конференции молодых ученых и специалистов. Казань 1998, Конференции «Проблемы инфекционных и инвазионных болезней на современном этапе», Москва, 1999.

1.6. Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 работ.

1.7. На защиту выносятся:

уровни загрязнения кормов микроскопическими грибами и мико-токсинами в Республике Татарстан и ряде других регионов России.

усиление токсического эффекта при сочетанном поступлении в организм животных Т-2 токсина и афлатоксина В1

ориентировочный безопасный уровень Т-2 токсина и афлатоксина В, в кормах при сочетанном поступлении.

1.8. Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 281 странице машинописного текста и включают: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, практические рекомендации, список литературы. Список литературы содержит 219 литературных источников, в том числе 109 на иностранных языках. Работа содержит 75 таблиц, 1 рисунок.

2. Собственные исследования 2.1. Материал и методы исследований

Работа выполнена в лаборатории природных экотоксикантов Всероссийского научно-исследовательского института.

Экспериментальные исследования проведены на лабораторных (белые крысы) и сельскохозяйственных (овцы) животных. В опытах использовано 712 животных, из них 94 овцы породы Прекос обоего пола в возрасте 12 - 24 меся-

цев. живой массой 20 - 35 кг, 618 беспородных белых крыс обоего пола в возрасте 4 - 6 месяцев, живой массой 180 - 250 г. До начала эксперимента животные проходили 15 дневную обсервацию в условиях вивария. Кормление проводили согласно принятым в зоотехнии нормам. Клинические исследования подопытных и контрольных животных проводили общепринятыми методами с определением общего состояния организма и деятельности его отдельных систем. Для экспериментальной контаминации животных использовали кристаллический Т-2 токсин и афлагоксин Bt, синтезированные в лаборатории природных экогоксикантов ВНИВИ с.н.с. Сергейчевым А.И., отвечающие требованиям ГОСТ 10-07-301-86 и не отличающихся по физико-химическим параметрам и токсическим свойствам от существующих стандартов. В качестве продуцентов использовали грибы Fusarium sporotrichiella шт. 2ш-15 предоставленный Котиком А.Н. и Aspergillus Jlaviis из коллекции ВНИВИ. Определение параметров острой токсичности проводили по Керберу и Личфилду - Уилкоксону, с определением ЛД50, ЛДи„ ЛДМ. При изучении кумулятивных свойств препаратов использовали тест на субхроническую токсичность (Lim et al., 1961). Гематологические исследования (количество эритроцитов, лейкоцитов) определяли с помощью камеры Гаряева. Содержание гемоглобина в периферической крови определяли с помощью гемометра Сали (Кудрявцев A.A. и соавт., 1969). Для определения содержания адреналина и норадреналипа в тканях в своей работе мы использовали триоксинидоловый метод основанный Euler U.S., F. Lishaino (1950 , 1961) и Carlson, Waldech (1958) в модификации Матлиной Э.Ш., Рахмановой Т. Б. (1967) и Авакяна О.М. (1977). Для оценки состояния перекисного окисления липидов использовали метод предложенный Гончаренко М.С., Латиновой A.M. (1985), основанный на реакции 2-тиобарбитуровой кислоты (ТБК). Определение активности ферментов крови проводили общепринятыми методами: активность холинэстераэы по Хестрин (1949), активность щелочной фосфатазы ло методу Юркова Б.М. (1971). При изучении изменений сердечной деятельности при влиянии микотоксинов регистрацию электрокардиограмм проводили согласно общепринятого метода. ЭКГ регистрировали до опыта и спустя I, 3, 24 часа, 5, 10, 15 и 20 суток после введения микотоксинов. Для определения теплопродукции тканей использовали калориметрический метод описанный Тиан, Кальве и Пратт. Для определения потребления кислорода тканями использовали методику предложенную Шугушевым М.М. (1977) и Губаревой Н.Г. (1982). Эм-, бриотоксические и'тераторешые свойства микотоксинов определяли согласно "Методических указаний по тестированию тератогенной и эмбриотоксической активности лекарственных веществ, принятых в ветеринарии и медицине". Выделение микроскопических грибов из кормов проводили общепринятыми методами (Курасова и соавт., 1971, МУ, 1985). Определение токсичности грибов на простейших (Paramecium caudatum) проводили по методике разработанной Спесивцевой H.A. (1963). После завершения эксперимента осуществляли контрольный убой овец (по 4 гол.) для ветеринарно-санитарной оценки мяса, кото-

рую провсшри с учетом общепринятых требований "Правил ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов".

3. Результаты исследовании 3.1. Изучение загрязнения кормов, сельскохозяйственной продукции микроскопическими грибами и микотоксинами в некоторых регионах

России

Установлено, что в Республике Татарстан все корма были контаминирова-ны микроскопическими грибами, выявлено большое количество различных видов грибов - потенциальных продуцентов высокотоксичных микотоксинов. Так например, во всех исследованных районах Республики, условно подразделенных на 5 крупных регионов: восточный, западный, северный, южный и центральный выделялись грибы Aspergillus flavus, значительная часть из чих оказалась токсичной. Наибольший процент токсичных штаммов грибов (более 40% из всех выделенных) приходилось на долю Fusarium sporotrichiella.

Наиболее часто (до 100% случаев) штаммы данного гриба выявлялись в Набережно-Челнинском, Бугульминском, Альметьевском, Азнакаевском районах. Несколько меньше (50-80%) - в образцах из Арского района. Реже по сравнению с другими грибами встречались грибы рода Fusarium gramiearum, в кормах Тукаевского, Бугульминского районов выделены токсигенные штаммы. В Арском, Кукморском, Чистопольском районах и в восточном регионе Республики часто выделялись грибы Aspergillus fiimigatus, до 30% штаммов обладали токсичностью.

В этих же районах, а также в южном - Черемшанском обнаруживались грибы Ä. flavus, А. versicolor продуцирущие стеригматоцистнн.

В восточном регионе Республики Татарстан, обнаруживались микотокенны: Т-2 токсин, НТ-2 токсин, зеараленон, стеригматоцисгин.

В северных районах Республики - зеараленон, Т-2 токсин, НТ-2 токсин, выделялись токсигенные грибы Aspergillus flavus, A. fumigatus, Pénicillium.

В западном регионе из микотоксинов обнаруживали стеригматоцистин. iia-тулин, Т-2 токсин.

В южном регионе наиболее часто обнаруживались токсигенные грибг.т А. flavus, A. fumigatus, F. graminearum. Поэтому в отдельные (влажные, теплые) годы возможно образование афлатоксинов, дезоксиниваленола.

В центральном регионе Республики возможно возникновение аспергилло-токсикозов, пенициллотоксикозов, Т-2 токсикозов.

Анализ распространенности грибов в других регионах России в зерне и кормах показывает, что наиболее часто в образцах проб встречаются грибы рода Aspergillus, Pénicillium, Fusarium. Так в Мордовской Республике среднее количество грибов рода Aspergillus в исследуемых образцах составило 88,7%, на долю грибов Pénicillium приходилось 86,7%, а грибы рода Fusarium обнаруживали в 42,7% проб. В Республике Чувашия в исследуемых образцах преобладали грибы рода Aspergillus - 60,8%, меньшей степени грибы рода Pénicillium -

s

59,4%, Fusarium - 34,4%. В Саратовской области контаминация корма и зерна микромицетами составила: грибы рода Aspergillus - 60,8%. Pénicillium - 59,4%. На долю грибов из рода Fusarium приходилось 33,6%. В . Ульяновской области, грибы рода Aspergillus встречались в 65% исследуемых проб, грибы рода Pénicillium в 60,8%, грибы из рода Fusarium в 33,6% образцов проб. В Уральском регионе в большей степени исследуемые объекты загрязнены грибами из рода Fusarium - 62,4%, меньшей степени грибами Pénicillium - 53% и Aspergillus -12,6%. В Краснодарском, и Ставропольском краях выявлено, что наиболее распространенными являются грибы рода Fusarium, а также Aspergillus. Поэтому, несмотря на возможность возникновения множества различных смешанных мн-котоксикозов, на наш взгляд одним из наиболее вероятных сочетанных мико-юксикозов может быть Т-2- афлатоксикоз.

3.2, Токсикологическая оценка сичетаиного воздействия Т-2 токсина и афлатоксина В,

Исследования показали, что для {фыс при сочетанном воздействии мико-токсинов средне смертельная доза составляла 0,8 мг/кг для Т-2 токсина и 2,5 мг/кг для афлатоксина Bt, для овец 0,93 и 3,8 мг/кг соответственно, в то время как при самостоятельном поступлении ЛД,» для овец Т-2 токсина равнялась 3,1 мг/кг, афлатоксина В] 9,75 мг/кг, т.е. отмечена четкая закономерность усиления токсического эффекта этих микотоксинов.

Коэффициент кумуляции для крыс при сочетанном поступлении Т-2 токсина составил 3,77, афлатоксина Bj - 3,76, что по принятой классификации (Медведь Л. И., 1986), соответствует умеренным кумулятивным свойствам соединений. Кумулятивные свойства Т-2 токсина и афлатоксина В| у овец по сравнению с белыми крысами были выражены сильнее и составляли 1,2, что можно связать с чувствительностью органов и систем организма, особенно лимфоидной ткани овец. ,

3:3! Динамика изменений морфологических и некоторых биохимических показателей крови и тканей у животных при воздействии Т-2 токсина и афлатоксина В!

Сочетанные Т-2- афлатоксикозы на первой стадии развития сопровождались (при дозе ЛД50), преимущественно признаками, свойственными Т-2 токсикозу: небольшое возбуждение, сменяющееся угнетением, сопорозное состояние, тремор отдельных мышц, по мере развития болезни понижение тактильной и болевой чувствительности. Температура тела при этом не изменялась, дыхание несколько учащалось, на более поздних сроках развития Т-2- афлатоксикоза отмечалось расстройство желудочно-кишечного тракта и нервные явления (характерные для острого афлатоксикоза).

Морфологические и биохимические исследования крови у крыс при сочетанном однократном воздействии микотоксинов в дозах, равных1/5 ЛДзо, показали увеличение.эритроцитов на 3 час исследования на 5,3% (Р>0,05) по сравие-

о

нию с фоновым показателем. Однако через 24 часа этот показатель уменьшился на 6,2% (Р>0,05). Уровень содержания лейкоцитов снизился на 24 час опыта по сравнению с исходом на 10,8% (Р<0,001). Содержание гемоглобина в крови на 3 час исследования увеличивалось на 3,6% (Р>0,05), а на 24 час снизилось на 11,6% (Р<0.05) от величины контроля.

У овец при однократном сочетанием поступлении микотоксинов в дозах 1/5 ЛДл) происходили следующие изменения морфологических и биохимических показателей крови: количество эритроцитов увеличилось на 4,0% выше фоновых значении, количество лейкоцитов увеличилось на 12,5% по сравнению с исходными данными (Р<0,05), содержание гемоглобина на 0.8% выше фона. К 12 часу количество лейкоцитов и гемоглобина понизилось по сравнению с предыдущими значениями на 5,3% (Р<0,05) и 1,8% (Р>0,05). эритроцитов повысилось на 2,3% (Р>0,05).

Эти изменения гематологических показателей были более значительными, чем при отравлении животных Т-2 токсином и афлатоксином В,.

Об усугублении токсического действия при сочетанном поступлении мико-токсинов показывают данные по изменению активности щелочной фосфатазы в крови. Изменение фермента в динамике сочетанного микотоксикоза носили двоякий характер. У крыс активность щелочной фосфатазы при однократном воздействии микотокешюв возрастае т, достигая максимальных значений к 6 часу - на 9,4% (Р>0,05) выше фона, с последующим понижением к 24 часам исследования на 9,3% (Р<0.05).

У овец наблюдалась другая картина, в начальной стадии отмечалось снижение активности фермента па 6,8% (Р<0,01), что свидетельствует о преимущественном влиянии Т-2 токсина в патогенезе интоксикации в данный период. В датьнейшем (24 часа) происходило увеличение активности этого фермента на 6,7%, характерное для преимущественного поражения организма афлатоксина-ми. При многократном сочеганном поступлении микотоксинов активность щелочной фосфатазы на 2 сутки исследования возросла на 27,3%. К 10 суткам опыта уменьшалась на 18,9% (Р<0,001) от фоновых значений.

При сочетанном введении микотоксинов в дозах, равных 1/10 ЛД50 каких-либо значительных и статистически достоверных изменений морфологических и биохимических показателей крови у животных обнаружено не было.

Закономерности изменения катехоламинов, по которым судили о состоянии . симпато-адреналовой системы при сочетанном поступлении Т-2 токсина и аф-латоксина В) в дозе ЛД50 наряду с общностью процесса имели свои особенности. Так при действии Т-2 токсина при самостоятельном поступлении отмечалось резкое снижение количества в начальном этапе интоксикации. При дейст-■ вии афлатоксина В1 такое не наблюдалось, то при сочетанном поступлении происходило начальное снижение содержания аминов, которое более закономерно для действия Т-2 токсина. Так у крыс через 3 часа максимальное уменьшение нейромедиатора отмечено в тканях среднего мозга и легких до следовых значений, а в тканях сердца и надпочечников количество его достоверно снижается в

41,7 и 15,0 раз (Р<0,001) соответственно. В дальнейшем при сочетанием поступлении микотоксинов происходило более резкое увеличение содержания норад-реналина в среднем мозге на 28% (Р<0,001) и снижение на 47% (Р<0,001) в надпочечниках по сравнению с предыдущим периодом.

Выражены закономерности изменения катехоламинов при сочетанном поступлении в организм Т-2 токсина и афлатоксина В, при затравке животных в дозах 1/5 ЛД50.

При сочетанном поступлении микотоксинов в организм крыс на 3 час опыта концентрация норадреналина уменьшалась в тканях среднего мозга в 1,6 раз, в тканях легких в 83,9 раза, в сердце в 4,9, в надпочечниках в 1,9 раза (Р<0,001). Через 6 часов наблюдения отмечалось повышение уровня нейромедиатора в среднем мозге, в 27,8 раза, в легких в 43,6 раза, в сердце в 3,0 раза (Р<0,001). В надпочечниках содержание амина уменьшилось в 2,0 раза. Через 24 часа уровень нейромедиатора снизился в тканях среднего мозга и в тканях легких на 8,0 и 1,9% соответственно. В тканях сердца количество норадреналина повысилось на 23,7%, в надпочечниках на 196,0% (Р<0,001).

У овец при сочетанном воздействии микотоксинов в дозах 1/5 ЛД50 количество норадреналина значительно повышалось в первые часы исследования. К 6 часу интоксикации уровень норадреналина продолжал увеличиваться в тканях среднего мозга на 30,9%. Во внутренних органах отмечается достоверное снижение количества амина, так в легких на 13,7%, в сердце на 77,8%, в надпочечниках на 36,0% (Р<0,05) соответственно по сравнению с предыдущими величинами. Через 24 часа содержание норадреналина уменьшалось в тканях среднего мозга, легких и сердца в 1,2, 10,7 и 8,1 раза (Р<0,05) соответственно, но были выше фоновых значений. Концентрация нейромедиатора в тканях надпочечников резко в 2,7раза повысилась по сравнению с 6 часами интоксикации.

Таким образом, из результатов исследований следует, что изменения содержания катехоламинов при сочетанном поступлений микотоксинов были более значительными, чем при их раздельном введении.

При сочетанном воздействии микотоксинов в дозах 1/10 ЛД50 на организм животных отмечались незначительные изменения состороны симпато-адреналовой системы, но более сильные, чем при раздельном введении токсинов.

Характер изменения процессов ПОЛ о которых судили по содержанию малонового деальдегида (МДА), как при интоксикации Т-2 токсином, афлаток-сином Вь так и при сочетанном .воздействии этих микотоксинов у обоих исследованных видов животных был примерно одинаковым. Более выражены в изменении содержания МДА при отравлении Т-2 токсином, ещё в большей степени Т-2 токсином и афлатоксином В1 при сочетанном их воздействии, по сравнению с афлатоксином В(.

Содержание МДА у крыс при сочетанном воздействии Т-2 токсина и' афлатоксина В] в дозах ЛДзо наиболее существенно изменилось через 1-3 часа наблюдения в плазме крови, когда его количество было в 6,2 и 6,8 раза (Р<0,001)

и

больше фоновых значений. Несколько меньше изменилось содержание малонового диальдегида в эритроцитах. При сочетанном введении Т-2 токсина и афла-токсина В! в первые 6 часов наблюдается резкое в 3 раза снижение показателей, к 12 часам происходит увеличение в 1,5 раза (Р<0,01).

О синергетическом действии сочетанного микотоксикоза наглядно свидетельствуют изменения МДА при поступлении Т-2 токсина и афлатоксина Bi а дозе 1/5 ЛД5о у крыс.

Если доза микотоксинов 1/5 ЛД5о не вызывала существенных сдвигов >го-го показателя, то при сочетанном воздействии выраженные нарушения в липид-ном обмене происходили уже в первые часы воздействия и они были более существенными

Содержание малонового диальдегида при отравлении животных в дозах 1/5 ЛД50 Т-2 токсином и афлатоксином В| в отдельности в плазме крови близки к фоновым значениям. При сочетанном введении Т-2 токсина и афлатоксина В| в первые 3 часа отравления содержание МДА увеличивалось в 3 раза (Р<0.01). К 24 часам происходило резкое снижение показателей в 2 раза (Р<0,05). Содержание МДА в эритроцитах при сочетанном воздействии представлено следующим образом: происходило постепенное увеличение малонового диальдегида с пиком возрастают на 48 часов на 39,5% (Р<0,01) затем происходит резкое снижение его количества к 5 суткам на 141%.

Содержание МДА у овец в дозах 1/5 ЛД50 наиболее было выражено в первые 6 часов после отравления животных в плазме крови в 2,9 раза (Р<0,001) больше фоновых значений. В остальные периоды при различных воздействиях концентрация малонового диальдегида колебалась около исходных показателей. В меньшей степени изменилось содержание малонового диальдегида в эритроцитах, в первые 6 часов наблюдалось повышение показателей на 15,1%, к 12 часам наблюдалось его снижение на 7,5%.

Содержание МДА при однократном сочетанном воздействии Т-2 токсина и афлатоксина В] в дозах 1/10 ЛД ?о изменялось не существенно.

ЗА Токсическое действие микотоксинов на некоторые другие системы организма

При анализе динамики изменений ЭКГ при однократном воздействии Т-2 токсина и афлатоксина В, в дозах 1/5 ЛД50 следует отметить, что почти у всех показателей отравленных токсинами овец отмечена тенденция к увеличению зубцов ЭКГ, особенно при сочетанном поступлении микотоксинов.

Изменение конфигурации волны Р ЭКГ у овец отравленных Т-2 токсином отмечалось на всех стадиях интоксикации, в 5 - 10% случаев проявлялось в расщеплении и в 1 - 5 % зазубренности зубца. При введении афлатоксина В] расщепление зубца Р проявлялось в 1 -5 % случаев, зазубренность в 2 - 5 %. При сочетанном поступлении Т-2 токсина и афлатоксина В, расщепление зубца Р отмечалось в более раннне сроки наблюдения в 2 - 10%, зазубренность - на 3 час опыта составляла 5%.

При сочетанном поступлении микотоксинов величина зубца Т была на 14,7% больше фоновой на 3 часа интоксикации, инверсия и двухфазность отмечались через 6 часов интоксикации в 5 - 10 % случаев.

Случаев увеличения зубца Т при сочеганном поступлении мнкотоксинов было на 14,7% больше на 3 час интоксикации, инверсии и двухфазности отмечались в 5-10% случаев через 6 часов интоксикации.

Неустойчивость сегмента БТ относительно изолинии ЭКГ у отравленных животных отмечалась довольно часто, особенно при сочетанном поступлении микотоксинов, она проявлялась в смещении этого сегмента вверх или вниз от изолинии в 20 - 30%.

Исследованиями выявлено, что при интоксикации Т-2 токсином (1/5 ЛД50), в начальной стадии развития токсикоза, повышалось парциальное давление кислорода, в тканях мозга на 51,9%, углекислоты на 6,4%, При отравлении афлатоксином В1 величина первого показателя возросла на 26,6%, второго снизилась на 6,4%. При сочетанном поступлении этих микотоксинов напряжение кислорода и углекислоты увеличилось на 83,1% на 27,6% (Р<0,01) соответственно.

Об усилении токсического эффекта Т-2 токсина и афлатоксина В1 при сочетанном воздействии свидетельствуют результаты изучения эмбриотоксиче-ской и тератогенной активности этих микотоксикозов.

Так, при действии Т-2 токсина (1/5 ЛД50) показатель гибели эмбрионов был на 31,4% выше контрольных данных, при действии афлатоксина В) на 5,7%, при сочетанном воздействии микотоксинов на 55,2%.

Таким образом подтверждено усиление токсического эффекта при соче-танных Т-2- афлатоксикозач.

3.5. Антидото-профилактические свойства фармакологических средств в

опытах на животных

Исследования показали, что применение аминазина белым крысам в дозах 3-5 мг/кг не обеспечивало должную защиту животных при отравлении мико-токашами. Ксимедон в дозе 50 мг/кг массы тела, введённый крысам при сочетанном поступлении микотоксинов способствовал снижению токсического эффекта и выживаемости - 66,7% животных (на 30 сутки). Наибольший эффект был достигнут при использовании сочетания двух средств аминазина и ксиме-дона в дозах 3 мг/кг и 50 мг /кг соответственно, после одновременного поступления крысам Т-2 токсина и афлатоксина В\ отмечался наибольший процент выживания 83,3, в опытах с овцами, обеспечило выживаемость 75% животных.

З.б. Обоснование ориентировочных безопасных уровней микотоксинов

Нами были проведены опыты по изучению ориентировочных безопасных уровней микотоксинов в кормах для животных. Необходимость таких исследо-

ваний обусловлена ещё и тем, что микотоксины Т-2 и афлатоксин В! при сочетанием поступлении в организм увеличивают тяжесть токсикоза.

Исследования показали, что пороговой дозой Т-2 и афлатоксина В, при сочетанием поступлении их в организм является доза 1/50 ЛД5Л. При введении данной дозы у овец не наблюдались клинических признаков. Происходили изменения некоторых гематологических показателей, но они не выходили за пределы физиологической нормы, наблюдались изменения содержания катехола-минов и перекисного окисления липидов (увеличение катехоламинов в среднем мозге и внутренних органах от 0,3 до 6 раз, снижение в тканях надпочечников 21,4 - 28,9%, увеличение показателей перекисного окисления липидов от фоновых на 21,9 - 68,4%). Кроме того, незначительной вариабельности подвержены ферменты холигостераза и щелочная фосфатаза. Однако они не значительно отличались от показателей биологического контроля, которые изменялись в этом же направлении, но были меньше. При патоморфологических и гистологических исследованиях специально убитых животных, видимых изменений не обнаружено, не выявлены изменения, отличающихся от контрольных животных, всё это послужило основанием считать дозу 1/50 ЛД50 как пороговую.

При обосновании ориентировочных безопасных уровней использовали формулу предложенную ВНИИВВиМ для определения концентрации токсических веществ в объектах ветнадзора, с помощью которой рассчитали ориентировочные безопасные уровни Т-2 токсина и афлатоксина В| при сочетанном поступлении,- в кормах для овец- они составили:

Корм М кг/к г

Т-2 токсин ! Афлатоксин В1

Комбикорм 6,7 27,0

Зеленая масса 0,42 1,7

Грубые корма 1,7 6,8

Силос 1,1 4,6

Корнеплоды 6,7 27,0

Вода 0,34 1,4

Доза 1/100 ЛДзо не вызывала клинических, достоверных гематологических изменений и показателей симпатоадреналовой системы, перекисного окисления липидов, холинэстеразы и щелочной фосфатазы; патоморфологические и гистологические изменения не наблюдались, поэтому дозу 1/100 ЛД5() принимали как ориентировочный безопасный уровень.

3.7. В ете р и на р но-са н и га р и an оценка качества мяса овен при сочетанием воздействии микотоксинов

Нами проведена ветерипарно - санитарная экспертиза мяса полученного от овец,отравленных Т-2 токсином и афлатоксином Bi при сочетанном их поступлении в дозах равных ориентировочному безопасному уровню.

По исследуемым показателям (бактериоскопия, амино-амиачный азог, коэффициент кислотность-окисляемость, реакция с сернокислой медью, реакция на пероксидазу) мясо животных, подвергшихся однократному сочетанному воздействию Т-2 токсина и афлатоксина В] в .дозах равных ориентировочному безопасному уровню,не отличалось от мяса здоровых животных и соответствует ветеринарно-санитарным требованиям и ГОСТам.

4. Выводы.

1. Определен видовой состав микроскопических грибов - продуцентов микотоксинов в восьми регионах России, включая Поволжско - Уральский регион, Ставропольский и Краснодарский края. Наиболее часто (50-80%) одновременно в кормах выделяются токсигенные грибы родов Aspergillus, Fusarium, Pénicillium и продуцируемые ими микотоксины (Т-2 токсин, афлатоксины, ДОН, зеараленон, патулин и др.), являющиеся потенциальной причиной мико-токсикозов животных.

2. Впервые установлено усиление токсического действия Т-2 токсина и афлатоксина В[ при сочетанном поступлении их в организм лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Острая средне смертельная доза (ЛД50) при сочетанном воздействии Т-2 токсина и афлатоксина Bi соответственно составляет для белых крыс 0,85 мг/кг и 2,75 мг/кг, овец-0,93 мг/кг и 3,8 мг/кг. В то время какпри самостоятельном поступлении микотоксинов эти дозы равнялись для крыс 2,83 и 8,9 мг/кг, для овец-3,1 и 9,75 мг/кг массы тела.

Т-2 токсин и афлатоксин Bi при сочетанном воздействии обладают умеренными кумулятивными свойствами для крыс (коэффициент кумуляции равен 3,76) и выраженными кумулятивными свойствами для овец (коэффициент кумуляции равен 1,2).

3. Гематологические показатели, состояние симпато-адреналовой системы, уровень перекисного окисления липидов, активность щелочной фосфатазы при сочетанном T-2-афлатоксикозс могут быть использованы в качестве критериев оценки токсического действия микотоксинов.

Сочетанный T-2-афлатоксикоз характеризуется усугублением тяжести токсического процесса, а именно:

а) изменением содержания катехоламинов:

- увеличением в среднем мозге до 30 раз;

-уменьшением в надпочечниках на 96%;

б) увеличением содержания малонового диальдегида до 6,8 раз;

в) уменьшением активности щелочной фосфатазы;

г) нарушением проводимости и обменных процессов в миокарде и теплопродукции тканей;

д) усилением тератогенного и эмбриотоксического действий;

4. Мясо, полученное от овец при многократном сочетанием поступлении Т-2 токсина и афлатоксина В| в дозах 9,3 и 38,0 мкг/кг корма соответственно, отвечало требованиям ГОСТов 23392-78, 7269-79 к доброкачественному мясу.

5. Аминазин (3 мг/кг массы тела) и ксимедон (50 мг/кг массы тела) при профилактическом применении обеспечивает выживаемость 83,3% крыс и 75% овец при одновременном многократном поступлении Т-2 и афлатоксина В|.

5. Практические предложения и рекомендации.

, Результаты исследований и основные положения, выдвинутые в диссертации вошли в «Методические рекомендации по профилактике микотоксико-зов животных в Республике Татарстан» и «Методические рекомендации по борьбе с микотоксикозами животных в Республике Татарстан», которые рекомендованы ГУВ КМ РТ для использования сельхозпредприятиями РТ.

6. Список опубликованных работ но теме диссертации.

1.Тремасов М.Я., Равилов А.З., Сергейчев А.И., Титова В.Ю., Зинатуллнн P.P. Карта распространения микотоксикозов в Республике Татарстан.// Мат-лы респуб. науч.-произв. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и животноводства. -Казань, -1997,- С. 145.

2.Тремасов М.Я., Равилов А.З., Сергейчев А.И., Зинатуллин P.P. Карта микотоксикозов в Республике Татарстан.// Мат-лы конф. Актуальные проблемы Республики Татарстан. -Казань, -1997. -С. 71.

3.Абдуллин А.Г., Титова В.Ю., Зинатуллин P.P. К вопросу лечения диареи токсического происхождения.// Мат-лы респуб. науч.-произв. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и животноводства. -Казань, -1997. -С. 80.

4.Тремасов М.Я., Сергейчев А.И., Беляева Л.Л., Титова В.Ю., Титов В.В., Степанов В.И., Зинатуллин P.P., Титов В.В., Абдуллин А.Г. Спонтанные мико-токсикозы, осложненные колиинфекцией.// Мат-лы международн. научи, конф., посвящен. 125-летию КГАВМ. -Казань, -1998. -С. 99.

5.Набиев Ф.Г., Сергейчев А.И., Ахмадеев Р.Н., Валиева Н.Г., Зинатуллин P.P. Противобактериальиое и противомикробное действие настоя чистотела./'/ Мат-лы международн. научн. конф., посвящен. 125-летию КГАВМ. -Казань, -1998. -С. 147.

6.Сергейчев А.И., Фадеев A.B., Садыкова В.Н., Зинатуллин P.P., Титов В.В., Матвеева Н.Л. Экспериментальный смешанный T-2-афлатоксикоз животных.// Международн. координации, совещание по эколопшеск. проблемам патологии, фармакологии и терапии жив-х.// Тез. докл. -Воронеж, -1997. -С. 107.

7.3айнутдинов В.Х., Сергейчев А. И., Зинатуллин P.P. Распространение микроскопических грибов в Башкортостане.// Мат-лы международн. научн. конф., посвящен. 125-летию КГАВМ, Казань, 1998, с. 147.

8. Зинатуллин P.P., Сергейчев А.И., Матвеева Е.Л.,Титов В.В. Патомор-фологические изменения у животных при сочетанном воздействии микотокси-нов.// Иаучно-теоретич. мед. журнал «Морфология». -№3, -1998, -т. 113. -С.Петербург.-С. 51.

9. Сергейчев А.И., Зинатуллин P.P. Изучение распространения микоток-синов в Республике Татарстан.// Реснубл. научн. конф молодых ученых и спец-тов. Тез. докл., книга 1. -Казань, -1998. -С. 73.

10. Зинатуллин P.P., Сергейчев А.И., Титов В.В. Сочетанные микотокси-козы животных.// Республ. научн. конф молодых ученых и спец-тов. Тез. докл., книга 1. -Казань, -1998. -С. 74.

11. Сергейчев А.И., Уразаева Л.А., Абдуллин А.Г., Зинатуллин P.P. Сте-ригматоцистин: источник и распространение.// Республ. научн. конф молодых ученых и спец-тов. Тез. докл., книга 1. -Казань, -1998. -С. 110.

12. Зинатуллин P.P. К механизму действия сочетанного Т-2- афлатоксико-за.// Мат-лы межнародн. научно-практич. конф., посвящен. 40-летию ВНИИВ-ВиМ. -Покров, -1998. -С. 463.

13. Зинатуллин P.P., Сергейчев А.И. Экспериментальный сочетанный Т-2-афлатоксикоз.// Мат-лы конф. «Проблемы инфекц. и инвазион. болезн. на со-времен. этапе». МГАВМиБ им. Скрябина. -Москва, -1999. -С. 127.

Заказ № 53. Подписано в печать 26.11.99 г. Формат 60 х 84 1/16 Тираж 100 экз. 1 п.л. Офсетный участок ВНИВИ (г. Казань).