Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Разработка средств профилактики микотоксикозов норок

На правах рукописи

003462Э28 САМСОНОВ АНДРЕЙ ИВАНОВИЧ

РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ПРОФИЛАКТИКИ МИКОТОКСИКОЗОВ НОРОК

16.00.04-ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

о о [.;... —1

Казань - 2009

003462928

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (г. Казань).

Научный руководитель: Доктор биологических наук, профессор

Тремасов Михаил Яковлевич

Официальные оппоненты: Доктор ветеринарных наук, профессор

Набиев Фанис Галинурович Кандидат биологических наук Ахметов Финсур Гутович

Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский

институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (ВНИИВСГЭ) г. Москва.

Защита состоится « » 2009 г. в часов на заседании

диссертационного . совета Д-220.012.01 при ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (420075, г. Казань, Научный городок - 2, ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»),

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г.Казань)

Автореферат разослан «_»_2009 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

В.Н. Степанов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1 Актуальность темы. Микотоксины - наиболее опасные

конгаминанты кормов и пищевых продуктов в естественных условиях,

отличающиеся высокой токсичностью, мутагенными, тератогенными,

канцерогенными и иммуносупрессивными свойствами (Тугельян В.А., 1985:

Иванов A.B., Тремасов М.Я., Папуниди К.Х. и др., 2008).

Микроскопические грибы распространены повсеместно и загрязнение

ими кормов, сельскохозяйственной продукции возможно на любом этапе

производства, поэтому микотоксины являются неизбежными

контаминантами продуктов питания и кормов (Иванов В.Г., 1981;Кузнецов

А.Ф., 2001; Антипов В.А., Рухляда В.В., 2008).

Микотоксикозы являются актуальной проблемой и для звероводства.

Норка - ведущий объект клеточного пушного звероводства. Ее маточное

поголовье в общей численности пушных зверей России составляет 83%. В

условиях клеточного разведения норок их отход связан главным образом с

заболеваниями неинфекционной этиологии и только около 7% погибают от

заразных болезней. Основная причина падежа зверей, а также низких

продуктивных показателей животных на фермах - использование

недоброкачественных кормов.

Описаны случаи отравления пушных зверей микотоксинами

(Перельдик Н.Ш. и др., 1965; Астраханцев В.И., 1973; Владимиров A.B.,

Гришина Л.Е., 1977; Косионина H.A., 1979; Тремасов М.Я. и др., 2001)

Пушные звери более чувствительны к микотоксинам, чем

лабораторные и сельскохозяйственные животные (Астраханцев В.И., 1973;

Ерин Т.А, Плотников В.Г., Рыминская Е.И., 1994; Christensen С., Nelson G.H.,

MirochaC., 1965).

У норок микотоксикозы сопровождаются диареей, снижением аппетита, ухудшением воспроизводительной функции: уменьшается выход потомства, массовая гибель молодняка и взрослых особей. Повышается восприимчивость к инфекционным и незаразным заболеваниям, снижается

эффективность вакцинации. Изменяется качество шкурки: шерстный покров становится тусклым, взъерошенным, появляются аллопеции.

Опасность возникновения микотоксикозов в звероводстве, согласно сведениям многих авторов, не вызывает сомнений (Дроздова Э.И., Костюнина H.A., 1979; Тутельян В.А., Кравченко Л.В., 1985). Тем более, что кормление путных зверей в звероводческих хозяйствах за последние годы сильно изменилось. Если раньше им скармливали мясо, молочные продукты, овощи, фрукты, ягоды, орехи, то в настоящее время для кормления зверей используют растительные корма (Слугин B.C., 1986; Киселев A.JL, 2000; Балакирев H.A., 2001; Данилова Т.А., 2008).

В России по распространенности наибольшее санитарное значение имеют фузариотоксины - Т-2 токсин, ДОН, зеараленон и др. (Смирнов A.M., Таланов Г.А., Кононенко Г.П., 1999; Тремасов М.Я., 2002; Кононенко Г.П., Буркин A.A., 2003).

Средства профилактики микотоксикозов пушных зверей мало разработаны.

1.2 Основной целью работы был поиск средств профилактики микотоксикозов пушных зверей.

1.3 На решение были поставлены следующие задачи:

• Определить токсичность и степень загрязнения кормов микотоксинами и микроскопическими грибами в звероводческих хозяйствах РТ;

• Провести отбор и изучить эффективность отобранных средств профилактики микотоксикозов норок, учитывая изменение клинических, гематологических и биохимических показателей организма;

• Провести производственные испытания отобранных средств профилактики микотоксикозов пушных зверей.

Исследования проводились в соответствии с планом научных исследований ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по заданию: «Экотоксикологический мониторинг» (№ гос. регистрации 01200202603).

1.4 Научная новизна. Впервые и лабораторных и производственных условиях экспериментально воспроизведен Т-2 и афлатоксикоз норок, обоснована и показана эффективность использования бентонита Тарн-Варского месторождения Республики Татарстан, энтеросорбента «Фитосорб», пробиотика «Энтероспорин» при Т-2 и афлатоксикозе норок.

Применение отобранных средств снижает тяжесть токсикозов, благоприятно влияет на клинические, гематологические и биохимические показатели животных.

1.5 Практическая ценность работы. При добавлении в рацион бентонита и «Фитосорба» в отдельности и в сочетании с пробиотиком «Энтероспорин», выявлена устойчивость животных к воздействию Т-2- и афлатоксина, что позволяет использовать их для профилактики микотоксикозов пушных зверей.

Результаты исследований использованы при составлении проектов нормативных документов: Инструкция по применению «Фитосорба»; «Методические указания по профилактике сочетанных микотоксикозов животных в РТ» для представления на регистрацию.

1.6 Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на научных сессиях ученого совета ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ» по итогам НИР за 2004-2008 гг., ежегодных республиканских, межрегиональных, международных научно - практических конференциях и симпозиумах.

1.7 Публикации. По результатам исследований опубликовано 7 работ из них 1 - в рекомендованном реферируемом ВАК РФ издании.

1.8 На защиту выносится: Эффективность бентонита Тарн-Варского месторождения РТ и органического энтеросорбента «Фитосорб» в отдельности и в сочетании с пробиотиком «Энтероспорин» для профилактики микотоксикозов норок.

1.9 Объём и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 142 страницах компьютерного текста и включают введение,

5

обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 32 таблицами. Список использованной литературы содержит 176 источников, в том числе 54- иностранных.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в 2004-2008 гг. в отделе токсикологии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань) и звероводческих хозяйствах Пестречипского (з/с «Кощаковский»), Высокогорского (з/с «Бирюли») и Лаишевского (з/с «Матюшинский») районов Республики Татарстан.

Экспериментальные исследования проводили на кроликах породы «Серый великан» и норках породы «Пастель». Перед постановкой опытов животные выдерживались на 2-х недельном карантине, кормление проводили согласно принятым в зоотехнии нормам.

Подопытные и контрольные группы животных формировали по принципу аналогов. В течение всего опыта животные находились в одинаковых условиях содержания и кормления. ~

Микроскопические грибы выделяли согласно методике Курасовой В.В. и соавт. (1971), токсичность грибов определяли по методике Спесивцевой H.A. (1964), кормов - согласно ГОСТ 13496.7-2005. Количество микотоксинов определяли методами ТСХ, биоавтографии и хроматомасспектрометрии согласно МУ и ГОСТ.

Для экспериментальных исследований использовали кристаллические Т-2 токсин и афлатоксин Bi, полученные в лаборатории микотоксинов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» с.н.с. к.в.н. ¡Сергейчевым А.И. ]и м.н.с. Садыковой В.Н. В качестве продуцентов Т-2 токсина использовали гриб Fusarium sporotrichiella, штамм 2м*15, предоставленный проф. Котиком А.Н., в качестве продуцента

афлатоксина - гриб Aspergillus flavus из коллекции штаммов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Токсиканты вводили перорально: Т-2 токсин и афлатоксин в виде - 5% водноспиртового раствора включением в корм.

Выбор профилактических средств при Т-2 и афлатоксикозе пушных зверей основывали на данных литературы относительно физико-химических и токсикологических свойств препарата. Применялись сорбент - бентонит Тарн-Варского месторождения Республики Татарстан,' органический энтеросорбент «Фитосорб», разработанный ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» совместно с ООО «Маркорм» и пробиотик «Энтероспорин», разработанный в ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ».

В экспериментах использовалось 78 кроликов, 190 норок.

В ходе экспериментов изучалось клиническое состояние животных, потребление корма и воды, паталогоанатомическая картина. После проведения необходимых процедур, определяемых целью и задачами эксперимента, брали кровь для исследований: путём декапитации - у крыс, из ушной вены - у кроликов, из хвоста - у норок.

Количество эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина в периферической крови определяли по общепринятым методикам, общий белок - рефрактометрически (Антонов Б.И. и др., 2004; Кондрахин И.П., 2004).

Биохимические показатели сыворотки крови (глюкоза, ACT, АЛТ, общий кальций, неорганический фосфор, щелочная фосфатаза) определяли на анализаторе EXPRESS PLUS.

При выполнении отдельных этапов работы принимали участие главный в/врач з/с «Кощаковский» Дервянов В.Н., с.н.с. Семёнов Э.И., с.н.с. Егоров В.И., за что автор выражает им искреннюю благодарность.

Обработку цифрового материала проводили методом вариационной статистики с применением критерия достоверности по Стьюденту на персональном компьютере с использованием программ Excel.

7

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Микотоксикологическая оценка кормов

Проведено микотоксикологическое исследование кормов звероводческих хозяйств РТ за период 2005-2007 г.г. Исследовали корма: пшеница, ячмень, овес, жмых подсолнечный, жмых соевый, шрот соевый, БМВД, сено.

Выявлялись грибы родов Fusarium, Aspergillus, Pénicillium, Altemaria, Cladosporium, Mucor, Rhizopus, наиболее часто выделяли грибы родов Fusarium - от 40 до 100%, Aspergillus - 70,2 - 100%, Pénicillium - 60 - 70,2% в зависимости от вида корма и сезона года.

Результаты свидетельствуют о высокой потенциальной опасности развития микроскопических грибов при благоприятствующих условиях, так как обнаруживались изоляты, обладающие токсигенным потенциалом. Наибольшей токсигенностью обладали изоляты грибов родов Fusarium (до 35%).

Токсичность кормов варьировала от 28,58 до 32,3%, слаботоксичными были от 22,4 до 29,5% образцов. Наибольшую токсичность выявляли у шрота соевого (100 %) и шрота подсолнечного (38,6 %).

В кормах обнаруживали микотоксины: афлатоксин В] (83,4% образцов), Т-2 токсин (66,6% образцов), зеараленон (43,7% образцов). В целом, содержание микотоксинов не превышало существующие ПДК, за исключением Т-2 токсина - 540 мкг/кг - в овсе собственного производства и афлатоксина Bj -140 мкг/кг - в импортном соевом шроте.

Корма в большинстве случаев были поражены спорами микроскопических грибов. Изучение микроскопических грибов показало высокий процент токсигенных изолятов, в основном грибов родов Fusarium и Aspergillus, что свидетельствует о высокой потенциальной опасности возникновения микотоксикозов при благоприятствующих условиях для

развития грибов (высокая влажность, самосогревание и др.) и продуцирования ими микотоксинов.

3.2 Изучение безвредности энтеросорбента «Фитосорб» для кроликов и норок

3.2.1 Острая токсичность энтеросорбента «Фитосорб» для

кроликов

Для этой цели по принципу аналогов было сформировано 3 группы животных по 6 в каждой. Первая группа служила биологическим контролем и получала обычный корм, вторая - получала однократно корм с добавлением энтеросорбента «Фитосорб» в количестве 5 г на 1 кг живой массы, третья - однократно корм с добавлением энтеросорбента «Фитосорб» в количестве 50 г на 1 кг живой массы. Вели наблюдение в течение 14 суток, в конце проводили исследования крови и сравнивали их с исходными данными. Общее состояние животных не изменилось, аппетит не снижался, они были активны. Количество эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина, общего белка, белковых фракций, глюкозы, активность ACT, AJIT, щелочной фосфатазы изменялись незначительно, и были статистически недостоверны по сравнению с контрольной группой.

3.2.2 Хроническая токсичность Фитосорба для кроликов

Для этой цели по принципу аналогов было сформировано 3 группы кроликов по б в каждой. Первая группа животных служила биологическим контролем и получала обычный корм в течение 60 суток. Вторая - получала в течение 60 сут корм с добавлением энтеросорбента «Фитосорб» в количестве 0,5% от массы рациона.

Третья группа животных получала в течение 60 сут корм с добавлением энтеросорбента «Фитосорб» в количестве 2% от рациона. До опыта и каждые 20 сут проводили гематологические и биохимические исследования сыворотки крови.

У кроликов второй группы увеличение количества эритроцитов по сравнению с контролем на 60 сут составило 4,4%; у кроликов в третьей

группе в эти сроки отмечалось снижение количества эритроцитов на 2,1% соответственно.

Содержание гемоглобина во второй группе кроликов увеличилось по сравнению с контролем на 60 сут - на 21,1% (р<0,05). В третьей группе концентрация гемоглобина относительно контроля снизилась на 60 сут на 0,7% соответственно.

СОЭ уменьшилась во второй группе к 60 сут на 40,8% (р<0,001). В третьей группе кроликов на 2,9%.

Количество лейкоцитов во второй группе увеличилось к 60 сут - на 10,5%. В третьей группе возросло на 25,5% (р<0,05).

У кроликов во второй группе содержание общего белка в сыворотке крови увеличилось к 60 сут - на 11,0%; в третьей группе - на 2,3%.

Во второй группе содержание глюкозы в крови кроликов по сравнению с контрольными показателями увеличилось на 60 сут - на 18,3% (р<0,05). При исследовании крови кроликов третьей группы отмечалось снижение содержания глюкозы на 6,4%. -

Во второй и в третьей группе кроликов содержание неорганического фосфора и общего кальция изменялось незначительно, и было статистически недостоверно. Происходило некоторое снижение активности ACT и АЛТ.

Активность щелочной фосфатазы в крови животных второй группы на 60 сут снизилась на 8,8%; третьей группы - на 7,5%.

Таким образом, результаты исследований показали, что введение энтеросорбента «Фитосорб» в рацион кроликов как однократно в больших дозах, так и многократно в течение 60 сут в дозах 0,5 и 2% от рациона не оказывает негативного действия на организм кроликов, на гематологические и биохимические показатели крови животных.

3.2.3 Острая токсичность энтеросорбента «Фитосорб» для норок

Для этой цели было сформировано 3 группы норок'по 6 животных в каждой.

Первая группа животных - биологический контроль, получала обычный рацион; вторая группа с рационом получала однократно «Фитосорб» в дозе 5 г на 1 кг живой массы; третья группа с обычным кормом получала однократно «Фитосорб» в дозе 50 г на 1 кг живой массы. Наблюдение за животными вели в течение 14 суток.

В конце опыта проводились морфологические и биохимические исследования крови. Количество эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина, общего белка, белковых фракций, глюкозы, активность ACT, AJIT, щелочной фосфатазы изменялись незначительно, и статистически недостоверно по сравнению с контрольной группой.

3.2.4 Хроническая токсичность препарата «Фитосорб» для норок

Для этой цели было сформировано 3 группы животных по 6 норок в каждой. Животные первой группы служили биологическим контролем и получали обычный рацион в течение 30 сут; вторая - с добавлением в рацион 0,5% фитосорба, третья - с добавлением в рацион 2% фитосорба. В конце опыта проводили исследование крови и сыворотки крови.

Статистически достоверной разницы в количестве эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, общего белка, белковых фракций, общего кальция, неорганического фосфора, содержания глюкозы, щелочной фосфатазы у норок второй и третьей группы не отмечалось.

Отмечалось повышение активности ACT в крови норок второй группы на 4,3%; снижение активности АЛТ на 26,1% (р<0,05). В конце опыта, у норок третьей группы активность ACT и АЛТ была снижена на 4,7 и 18,4% (р<0,05) соответственно.

Таким образом, однократное пероральное введение норкам фитосорба в дозах 5 и 60 г на 1 кг массы тела и длительное добавление в рацион в дозах 0,5 и 2% от корма не оказывает негативного воздействия на организм норок.

3.3 Профилактическая эффективность фитосорба, бентонита и

энтероспорина при Т-2 токсикозе и афлатоксикозе кроликов

Для этой цели было сформировано 7 групп кроликов по 6 животных в каждой. Первая группа - служила биологическим контролем, получала обычный корм без токсинов; вторая - получала с рационом Т-2 токсин в дозе 200 мкг/кг корма и афлатоксин В] в дозе 50 мкг/кг корма; третья - получала с рационом Т-2 токсин в дозе 200 мкг/кг корма, афлатоксин В] в дозе 50 мкг/кг корма и бентонит в дозе 2% от массы рациона; четвертая - получала с рационом Т-2 токсин в дозе 200 мкг/кг корма, афлатоксин В1 в дозе 50 мкг/кг корма и фитосорб в дозе 0,5 % от массы рациона; пятая - получала с рационом Т-2 токсин в дозе 200 мкг/кг корма, афлатоксин В1 в дозе 50 мкг/кг корма и энтероспорин в дозе 2 мл/гол; шестая - получала с рационом микотоксины в тех же дозах, бентонит в дозе 2% от массы рациона и энтероспорин 2 мл/гол; седьмая - микотоксины в тех же дозах, фитосорб 0,5% от рациона и энтероспорин 2 мл/гол.

Опыт длился в течение 30 сут, каждые 10 сут проводили гематологические и биохимические исследования крови.

У кроликов наблюдали выраженные гематологические изменения, свидетельствующие о негативном воздействии микотоксинов. Так у второй группы животных в крови на 30 сут эксперимента отмечалось снижение количества эритроцитов по сравнению с исходными значениями на 21,1%, а в профилактируемых группах снижение количества эритроцитов было менее выражено: так, в третьей группе уменьшение составило 9,6%, в четвертой -11,3%, в пятой - 13,4% (р<0,01). В шестой и седьмой группе уменьшение регистрировали, однако оно было статистически недостоверно - 6,8 и 4,3% (р>0,05) соответственно. Это свидетельствует о защитном действии средств профилактики.

Подобная тенденция наблюдалась и в изменении количества лейкоцитов - уменьшение составило во второй группе 33,1%, в третьей -

21,4%, в четвертой - 20,3%, в пятой - 22,8%, в шестой и седьмой группах -статистически недостоверно.

Наблюдалось снижение содержания гемоглобина во второй, третьей, четвертой, пятой, шестой, седьмой группах кроликов на 16,0 (р<0,05); 9,3; 13,6; 14,6; 6,4; 4,4% соответственно.

Увеличение СОЭ составило на 30 сут исследования 100 (р<0,001); 34,7 (р<0,01); 63,6 (р<0,01); 77,6 (р<0,01); 16,7 (р<0,05); 22,7% (р<0,05) соответственно.

Содержание общего белка во всех группах кроликов снижалось к 30 сут по сравнению с исходными данными на 23,5 (р<0,05); 17,3 (р<0,05); 13,5 (р<0,05); 18,7 (р<0,05); 9,3; 3,9% соответственно.

Концентрация глюкозы к аналогичным срокам исследований снизилась на 27 (р<0,01); 19,4 (р<0,05); 12,3; 23,5 (р<0,05); 7,7; 3,4% (р>0,05) соответственно.

Содержание микотоксинов в рационе негативно отражалось и на минеральном обмене животных, в частности, наблюдалось увеличение содержания фосфора неорганического во всех группах кроликов на 30 сут на 39,1 (р<0,01); 19,7 (р<0,05); 26,4 (р<0,05); 22,6 (р<0,05); 6,7; 17,4% (р<0,05) соответственно.

Концентрация кальция общего на 30 сут опыта во всех группах снижалась на 39,1 (р<0,01); 11,3; 16,6 (р<0,05); 20,5 (р<0,05); 5,2; 9,5% соответственно.

О токсическом действии микотоксинов говорит и увеличение активности гепатоспецифических ферментов в сыворотке крови, в то же время в профилактируемых группах увеличение также регистрировали, однако изменения в 2 и более раза были менее выражены, чем в непрофилактируемых грушах. Так, наблюдалось увеличение активности ACT на 30 сут на 150; 65,3; 84,3; 127,3; 38,8; 67,3% (р<0,001) соответственно, увеличение активности AJIT на 30 сут на 146,9; 78,6; 77,9; 93,6; 59,7; 63,4% (р<0,001) соответственно, прослеживалось увеличение активности щелочной

13

фосфатазы на 30 сут на 125; 78,5; 61,7; 103; 43,6; 30,1% (р<0,01) соответственно.

Таким образом, результаты исследований показывают о профилактической эффективности фитосорба, бентонита натрия и энтероспорина при Т-2 и афлатоксикозе кроликов.

Следующим этапом работы было постановка аналогичного опыта на норках.

3.4 Профилактическая эффективность фитосорба, бентонита и энтероспорина при Т-2 токсикозе и афлатоксикозе норок

Для этой цели было сформировано 7 групп норок по 6 в каждой. Первая группа служила биологическим контролем, получала обычный корм без токсинов; вторая - получала с рационом Т-2 токсин в дозе 200 мкг/кг корма и афлатоксин В] в дозе 50 мкг/кг корма; третья - получала с рационом Т-2 токсин в дозе 200 мкг/кг корма, афлатоксин В] в дозе 50 мкг/кг корма и бентонит в дозе 2% от массы рациона; четвертая - получала с рационом Т-2 токсин в дозе 200 мкг/кг корма, афлатоксин В] в дозе 50 мкг/кг корма и фитосорб в дозе 0,5 % от массы рациона; пятая - получала с рационом Т-2 токсин в дозе 200 мкг/кг корма, афлатоксин В; в дозе 50 мкг/кг корма и энтероспорин в дозе 2 мл/гол; шестая - получала с рационом микотоксины в тех же дозах, бентонит в дозе 2% от массы рациона и энтероспорин 2 мл/гол; седьмая - микотоксины в тех же дозах, фитосорб 0,5% от рациона и энтероспорин 2 мл/гол.

Опыт длился в течение 30 сут, каждые 10 сут проводили гематологические и биохимические исследования крови.

У подопытных животных произошло уменьшение количества эритроцитов на 30 суг по сравнению с контролем на 32,1 (р<0,01); 19,5 (р<0,05); 22,3(р<0,05); 17,4 (р<0,01);7,6; 11,4% соответственно.

Содержание гемоглобина в крови всех групп норок по сравнению с исходными данными уменьшилось на 30 сут на 26,6 (р<0,01); 16,6 (р<0,05); 21,6 (р<0,01); 18,5 (р<0,05); 6,3; 11,1% соответственно.

14

СОЭ в крови шорой и третьей групп порок по сравнению с исходными данными увеличилось на 30 сут на 16,7 и 14,9% (р<0,05) соответственно. В четвертой, пятой, шестой и седьмой группах произошло незначительное увеличение СОЭ.

Также отмечалось снижение количества лейкоцитов в подопытных группах норок на 30 сут на 39,3 (р<0,001); 21,3 (р<0,01); 14,3 (р<0,05); 19,1 (р<0,05); 7,6; 11,6% соответственно.

Содержание общего белка во всех шести опытных группах норок снижалось к 30 сут по сравнению с исходными данными на 27,4 (р<0,01); 18,3 (р<0,05); 13,4 (р<0,05); 17,3 (р<0,05); 9,6; 6,1% соответственно.

Концентрация глюкозы к аналогичным срокам исследований снизилась на 28,8 (р<0,01); 13,5 (р<0,05); 15,8 (р<0,05); 21,3 (р<0,01); 9,3; 8,3% соответственно.

Также отмечалось незначительное увеличение содержания фосфора неорганического во всех группах норок на 30 сут исследований.

Концентрация кальция общего на 30 сут опыта во второй группе снижалась на 12,34%. В остальных группах наблюдалось незначительное снижение концентрации кальция общего, что было статистически недостоверно (р>0,05).

Во всех шести опытных группах норок произошло достоверное увеличение активности ACT и AJIT на 30 сут - на 49,7; 22,6; 31,4; 37,6; 13,8; 21,4% и 47; 30,7; 33,6; 41,5; 17,65; 23,1% соответственно, также произошло увеличение активности щелочной фосфатазы на 30 сут - на 196,3 (р<0,001); 87,9 (р<0,001); 96,4 (р<0,001); 110,5 (р<0,001); 37,4 (р<0,01); 49,4% (р<0,01) соответственно.

3.5 Производственные испытания

Испытание средств профилактики микотоксикозов пушных зверей проводили в зверосовхозе «Кощаковский» Пестречинского района РТ. В опыте использовались самки норок породы «Пастель», массой тела 1,2 - 1,4

кг. Всего сформировано 7 групп животных по 6 норок в каждой. Первая группа с кормом получала Т-2 токсин в дозе 200 мкг/кг корма; вторая - Т-2 токсин с кормом в той же дозе и «Фитосорб» 1 % от рациона; третья - Т-2 токсин и пробиотик «Энтероспорин» 2 мл/гол; четвертая - Т-2 токсин и бентонит Тарн-Варского месторождения 2 % от сухого вещества рациона, пятая - Т-2 токсин, «Фитосорб» и «Энтероспорин»; шестая - Т-2 токсин, бентонит и энтероспорин. Седьмая - биологический контроль, получала обычный рацион. Опыт длился 15 сут, в конце опыта отбирали кровь и проводили подсчет эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, общего белка.

Введение Т-2 токсина в рацион норок негативно сказывалось на гематологических показателях, так в первой группе к концу опыта происходило достоверное уменьшение количества эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина и общего белка на 34,5 (р<0,001); 63,4 (р<0,001); 13,7 и 12,3% соответственно. Во второй - на 14,8; 28,8 (р<0,01); 6,2 и 2,33% соответственно. В третьей - 19,04 (р<0,05); 28,8 (р<0,01); 10,6 и 5,6%; в четвертой - 16,6 (р<0,05); 15,9 (р<0,05); 9,3 и 4,4% соответственно. У животных пятой и шестой группы статистической разницы в количестве эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина и общего белка не обнаружено.

Таким образом, все испытанные средства для профилактики Т-2 токсикоза и афлатоксикоза пушных зверей, обладают в той или иной степени профилактическим действием, однако, наиболее эффективными оказались сочетание сорбента («Фитосорб» и бентонит) и пробиотика «Энтероспорин».

5 ВЫВОДЫ

1. Обоснована высокая вероятность возникновения смешанных микотоксикозов пушных зверей. Токсичность кормов в исследуемых звероводческих хозяйствах варьировала от 28,5 до 32,3%; слаботоксичными были от 22,4 до 29,5% образцов кормов. Пораженность кормов грибами рода Fusarium колебалась от 40 до 100%, Aspergillus - 70,2-100%, Penicillium - 60-70,2%. Наибольшей

16

токсигенностью обладали изоляты рода Fusarium (34,6%). В кормах обнаруживали микотоксины - афлатоксин В] (от 18,0 до 83,4% образцов), Т-2 токсин (до 66,6% образцов), зеараленон (до '43,7% образцов).

2. Энтеросорбент «Фитосорб» является безвредным для норок и кроликов и при длительном (2 мес.) применении не оказывает отрицательного влияния на общее состояние, гематологические и биохимические показатели крови.

3. Воздействие Т-2 токсина и афлатоксина Bi при экспериментальном сочетанном мйкотоксикозе норок (30 сут) в дозах 200 мкг и 50 мкг на кг корма вызывает уменьшение количества лейкоцитов на 39,4%, эритроцитов - на 32,1% и гемоглобина - на 26,5%. Микотоксшсоз сопровождается снижением общего белка на 27,8%, его альбуминовой фракции - на 25,1%, повышением активности гепатоспецифических ферментов.

4. Включение в рацион животных бентонита Тарн-Варского месторождения в дозе 2%, энтеросорбента «Фитосорб» в дозе 0,5% от массы корма отдельно или в сочетании с пробиотиком «Энтероспорин» в дозе 2 мл на животное оказывает профилактическое действие при экспериментальном Т-2 и афлатоксикозе кроликов и норок с нормализацией гематологических, биохимических параметров. Наиболее эффективно сочетание энтеросорбента и пробиотика.

5. Эффективность применения бентонита Тарн-Варского месторождения, энтеросорбента «Фитосорб» - по отдельности и в сочетании с пробиотиком «Энтероспорин» при микотоксикозах норок подтверждена в производственных условиях. Использование средств профилактики у животных способствовало стабилизации гематологических и биохимических показателей крови, предотвращало возникновение диареи и ухудшения качества шкурки.

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В качестве средств профилактики микотоксикозов пушных зверей рекомендуется добавлять в рацион зверей бентонит или «Фитосорб» совместно с пробиотиком «Энтероспорин».

2. Результаты исследования использованы при составлении проектов следующей документации: инструкция по применению «Фитосорба»; «Методические указания по профилактике сочетанных микотоксикозов животных в РТ».

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Самсонов, А.И. Проблемы микотоксикозов в звероводстве / А.И. Самсонов, А.И. Сергейчев // Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний: Материалы международного симпозиума (28-30 ноября 2005 г.) Часть 1. - Казань,2005. - С. 234-236.

2. Самсонов, А.И. Сорбент для профилактики микотоксикозов животных / А.И. Самсонов, Э.И. Семенов, О.К.Ермолаева и др. // Материалы международной научной конференции «Токсикозы животных и актуальные проблемы болезней молодняка» 25-27 октября 2006 г. -Казань, 2006. - С. 172-174.

3. Самсонов, А.И. Профилактика Т-2 токсикоза норок / А.И. Самсонов, В.Н. Дервянов // Ветеринарный врач. - 2007. - №2. - С. 17-18.

4. Самсонов, А.И. Профилактика микотоксикозов пушных зверей // Материалы научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы ветеринарии» 29 июня 2007 г.Казань, 2007. - С. 65-66.

5. Самсонов, А.И. Применение пробиотика «Энтероспорин» при Т-2 токсикозе норок // Фармакологические и экотоксикологические аспекты ветеринарной медицины: Материалы научно-практической конференции фармакологов РФ. Сб. научных трудов.- Троицк: УГАВМ, 2007. - С. 266-269.

6. Самсонов, А.И. Гематологические и некоторые биохимические показатели крови норок при Т-2 токсикозе и применение сорбентов и пробиотиков / А.И. Самсонов, М.Я. Тремасов. М.Г. Нуртдинов и др. //

Современная микология в России: Материалы 2-го Съезда микологов России. - Т.2. - Москва, 2008. - С. 264.

7. Самсонов, А.И. Влияние бентонита натрия и пробиотика «Энтероспорин» на гематологические и биохимические показатели крови норок при Т- 2 токсикозе / А.И Самсонов // Достижения молодых ученых в производство: Научно-практическая конференция молодых ученых и специалистов, посвященная 100 - летию со дня рождения профессора Х.Х. Абдуллина.- Казань, 2008. - С. 87-89.

Подписано в печать 02.02.09. формат 60*84 1/16 Объем 1,0 пл. Заказ №9 Отпечатано в типографии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань) Адрес: 4200750, г. Казань, научный городок - 2. Тираж 100 экз.

Актуальность темы, Микотоксины - наиболее опасные контаминанты кормов и пищевых продуктов в естественных условиях, отличающиеся^ высокой токсичностью, мутагенными, тератогенными, канцерогенными и иммуносупрессивными свойствами (Тутельян В.А., 1985; Иванов A.B., Тремасов М.Я., Папуниди К.Х. и др., 2008).

Микроскопические грибы распространены повсеместно и загрязнение ими кормов, сельскохозяйственной продукции возможно на любом этапе производства, поэтому микотоксины являются- неизбежными контаминантами продуктов питания и, кормов,(Иванов В.Г., 1981; Кузнецов А.Ф., 2001; Антипов В:А., Рухляда В.В., 2008).

Микотоксикозы являются актуальной проблемой и для звероводства. Норка - ведущий объект клеточного пушного- звероводства. Ее маточное поголовье в общей численности пушных зверей России составляет 83%. В условиях клеточного разведения норок их отход связан главным-образом с заболеваниями неинфекционной этиологии и только около 7% погибают от заразных болезней: Основная причина падежа зверей, а также низких продуктивных показателей животных на фермах - использование недоброкачественных кормов.

Описаны случаи отравления пушных зверей микотоксинами (Перельдик Н.Ш. и др., 1965; Астраханцев В.И., 1973; Владимиров A.B., Гришина JI.E., 1977; Костюнина H.A., 1979; Тремасов М.Я: и др., 2001).

Пушные звери более чувствительны к микотоксинам, чем лабораторные и сельскохозяйственные животные (Астраханцев В:И!, 1973; Ерин Т.А, Плотников B.F., Рыминская Е.И., 1994; Christensen С., Nelson G.H., MirochaC., 1965).

У норок микотоксикозы сопровождаются ^ диареей, снижением аппетита, ухудшением воспроизводительной функции: уменьшается выход потомства, массовая гибель молодняка и взрослых особей. Повышается восприимчивость к инфекционным и незаразным заболеваниям, снижается эффективность вакцинации. Изменяется качество шкурки: шерстный покров становится тусклым, взъерошенным, появляются аллопеции.

Опасность возникновения микотоксикозов в звероводстве, согласно сведениям многих авторов, не вызывает сомнений (Дроздова Э.И., Костюнина H.A., 1979; Тутельян В.А., Кравченко J1.B., 1985). Тем более, что кормление пушных зверей в звероводческих хозяйствах за последние годы сильно изменилось. Если раньше им скармливали мясо, молочные продукты, овощи, фрукты, ягоды, орехи, то в настоящее время для кормления зверей используют растительные корма (Слугин B.C., 1986; Киселев А.Л., 2000; Балакирев H.A., 2001; Данилова Т.А., 2008).

В России по распространенности наибольшее санитарное значение имеют фузариотоксины - Т-2 токсин, ДОН, зеараленон и др. (Смирнов A.M., Таланов Г.А., Кононенко Г.П., 1999; Тремасов М.Я., 2002; Кононенко Г.П., Буркин A.A., 2003).

Средства профилактики микотоксикозов пушных зверей мало разработаны.

Основной целью работы был поиск средств профилактики микотоксикозов пушных зверей.

На решение были поставлены следующие задачи;

• Определить токсичность и степень загрязнения кормов микотоксинами и микроскопическими грибами в звероводческих хозяйствах РТ;

• Провести отбор и изучить эффективность отобранных средств профилактики микотоксикозов норок, учитывая изменение клинических, гематологических и биохимических показателей организма;

• Провести производственные испытания отобранных средств профилактики микотоксикозов пушных зверей.

Исследования проводились в соответствии с планом научных исследований ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по заданию: «Экотоксикологический мониторинг» (№ гос. регистрации 01200202603).

Научная новизна. Впервые в лабораторных и производственных условиях экспериментально воспроизведен Т-2 и афлатоксикоз норок, обоснована и показана эффективность использования бентонита Тарн-Варского месторождения Республики Татарстан, энтеросорбента «Фитосорб», пробиотика «Энтероспорин» при Т-2 и афлатоксикозе норок.

Применение отобранных средств снижает тяжесть токсикозов, благоприятно влияет на клинические, гематологические и биохимические показатели животных.

Практическая ценность работы. При добавлении в рацион бентонита и «Фитосорба» в отдельности и в сочетании с пробиотиком «Энтероспорин», выявлена устойчивость животных к воздействию Т-2- и афлатоксина, что позволяет использовать их для профилактики микотоксикозов пушных зверей.

Результаты исследований использованы при составлении проектов нормативных документов: Инструкция по применению «Фитосорба»; «Методические указания по профилактике сочетанных микотоксикозов животных в РТ» для представления на регистрацию.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на научных сессиях ученого совета ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ» по итогам НИР за 2004-2008 гг., ежегодных республиканских, межрегиональных, международных научно - практических конференциях и симпозиумах.

Публикации. По результатам исследований опубликовано 7 работ из них 1 - в рекомендованном реферируемом ВАК РФ издании.

На защиту выносится: Эффективность бентонита Тарн-Варского месторождения РТ и органического энтеросорбента «Фитосорб» в отдельности и в сочетании с пробиотиком «Энтероспорин» для профилактики микотоксикозов норок.

Объём и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 142 страницах компьютерного текста и включают введение, обзор 7 литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 32 таблицами. Список использованной литературы содержит 176 источников, в том числе 54-иностранных.

1. Обзор литературы 1.1. Распространение микроскопических грибов и продуцируемых ими микотоксинов

Микотоксины считают наиболее опасными контаминантами кормов и пищевых продуктов в естественных условиях (Тутельян В.А., 1985). Корма и пищевые продукты, содержащие микроскопические грибы и продуцируемые микотоксины, оказывают неблагоприятное влияние на здоровье сельскохозяйственных животных и человека. Доказана их реальная опасность. Установлено, что микотоксины чрезвычайно широко распространены в природе и наносят глобальный экономический ущерб. По своим токсическим свойствам и широте распространения среди микотоксинов выделяются трихотецены, зеараленон, афлатоксины, стеригматоцистин, патулин. Микроскопические грибы поражают продукцию растительного и животного происхождения на всех этапах их производства, хранения, реализации. Микотоксины поступают в организм животных главным образом с кормом, в организм человека - через пищевые цепи с продуктами растительного происхождения, с молоком и тканями животных, употребивших загрязненные корма (Петрович С.В., 1991; Жуленко В.Н. и др., 2002; 2004; Fernandes А., 1990; Pitt J., 2000).

Накапливание микотоксинов в зерне может происходить в период вегетации растений, после уборки урожая до обмолота - в валках, во время хранения. Постепенная замена «полевых плесеней» на другую группу микромицетов - «плесеней хранения» происходит в зерне, просушенном до кондиционной влажности. При нарушении правил хранения зерна, комбикормов, отрубей, которое сопровождается- вторичным увлажнением, происходит интенсивное развитие «плесеней хранения» и накопление i микотоксинов (Хмелевский Б.А. и соавт., 1985).

Микроскопические грибы из рода Fusarium и Aspergillus, являясь облигатными паразитами растений, наносят значительный вред, но наибольшую опасность представляют микотоксины (Т - 2 токсин, НТ - 2 9 f токсин, ДОН, афлатоксины), продуцируемые этими грибами, которые причиняют экономический ущерб животноводству (Папазян Т.Т., 2002; Жалиева Л.Д., 2008).

В России по распространенности наибольшее санитарное значение имеют фузариотоксины - вомитоксин (дезоксиниваленол), Т-2 токсин и зеараленон (Смирнов A.M., Таланов Г.А., 1999; Тремасов М.Я., 2002; Еремин С.А., 2008). По данным Леонова А.Н. и соавт., (1990), Львовой Л.С. и соавт., (1994) вомитоксин, продуцируемый грибом F.graminearum, чаще выявляют в зерновых кормах из юго-западного региона европейской части России (Ставропольский и Краснодарский края, юг Ростовской области).

Fusarium sporotrichioides отнесён к числу доминантных видов Fusarium в Дальневосточном регионе, Центральной России и Западной Сибири. По данным Кононенко Г.П. и Буркина A.A. (2003), в 1995 - 2001 гг. по Уральскому и Западно-Сибирском регионах контаминированность Т-2 токсином составила 36,6 и 37,7%, в Дальневосточном - 23,6%, до 22% случаев встречалась сверхнормативная контаминация.

Этот гриб в регионах Среднего Поволжья выделяют как наиболее частый контаминант пищевой продукции и кормов. Микромицеты были выделены в 70% случаев из образцов кормов, отобранных в различных регионах Республики Татарстан, при этом около 40 % изолятов обладали токсическими свойствами, 14% изолятов продуцировали трихотеценовые микотоксины (Сергейчев А.И., 1998).

Левитан М.М. и соавт. (1994) в течение 5 лет наблюдали за видовым составом Fusarium на серых хлебах ряда областей России. Было выявлено, что грибы Fusarium avenaceum, F.culmorum, F.oxysporum, F.poae, F.sporotrichiella, F.sampucinum постоянно присутствуют на семенах ячменя, овса, ржи. Обнаружили загрязненность дезоксиниваленолом пшеницы в разных регионах России.

Многочисленные данные свидетельствуют о загрязнении различных видов кормов, зерновой и другой сельскохозяйственной продукции микроскопическими грибами, имеющими токсигенный потенциал (Данилова Т.А., 2008).

Для различных злаков состав грибов может быть одинаков, и не меняться в зависимости от погодных условий. На ржи, просе, овсе обнаруживаются грибы Fusarium, Aspergillus, Pénicillium, Cladosporium, Alternaría, Mucor (Буркин A.A., 2007). Появление новых видов грибов на свежеубранном зерне и при хранении его указывает на неблагоприятные условия хранения (Подъяпольская О.П., 1954).

Исследования, проведенные в Литве (Йонаускане О., 1993), показывают, что все корма, загрязненные спорами токсинообразующих грибов, заражены грибами Fusarium, Aspergillus, Pénicillium, из комбикормов выделено 3,7 - 6,0% грибов - продуцентов афлатоксинов.

Назыповым М.Н., Титовым В.В. (1977) изучалась грибная флора в кормах Республики Татарстан. Показана высокая токсичность многих штаммов Fusarium, Aspergillus, Pénicillium в зависимости от условий уборки и хранения.

Елистратов И.С. (1973) сообщил о микологическом и£ токсикологическом исследовании кормов в ряде областей России. В Омской области из 2400 проб 724 были токсичными, в Курганской из 1896 - 518, в Свердловской из 2601 - 603, в Алтайском крае из 4243 - 652, в Иркутской из 425 -16, в Тюменской из 153 - 28. Из выделенных грибов оказались токсичными: - Alternaría: из 367 - 34 токсичны, Aspergillus: из 395 - 55, Fusarium: из 285 - 101, Pénicillium: из 378 - 74.

При исследовании недоброкачественных кормов во многих хозяйствах в Саратовской области, установлена пораженность различными видами Aspergillus (222 штамма), реже обнаруживали грибы из родов Fusarium и Stachibotrys. Особенно большой процент загрязненности грибами наблюдался при исследовании комбикормов и пшеницы. Были отмечены частые случаи микотоксикозов среди различных видов животных, причем во всех случаях в кормах выделяли грибы рода Aspergillus, реже Fusarium и Stachibotrys (Бабаяц, О.В., 2008).

О преимущественном загрязнении зерновых, хлебных злаков, особенно при хранении, грибами Fusarium sporotrichiella указывала Билай В.И. (1977).

Степень контаминации плесневыми грибами в зависимости от вида зерна наблюдали Погребняк Л.И., Бряньска A.M. (1983). Преобладающими на зернах пшеницы, овса, ячменя, кукурузы были грибы родов Aspergillus, Pénicillium. На зернах овса и ячменя было много грибов рода Cladosporium, на зернах пшеницы — Rhizopus, ячменя - Fusarium. Исследования зернофуража показали, что его микрофлора содержит 27,7% плесневых грибов - продуцентов микотоксинов, опасных для сельскохозяйственных животных.

Данные о токсичных штаммах A.flavus, выделенных с зерновых культур с 1972 г по 1982 г описали Трисвятский Л.А. (1985), Бабаяц, О.В. (2008).

Отмечена зависимость продуцирования афлатоксинов от вида зерна, года и климатических зон страны. Максимальное образование афлатоксинов - до 26% отмечено в 1979 г.

Так, при мониторинге образцов зерна, отобранных в различных регионах России, гриб Aspergillus flavus был обнаружен в 86% случаев. Из них, только у 6% штаммов в лабораторных условиях была выявлена способность к токсинообразованию (Жуленко В.Н., Рабинович М.И., Таланов Г.А., 2002; 2004).

Изучение грибной флоры и содержания афлатоксинов в 280 образцах пищевых продуктов, отобранных в Чимкентской и Джамбульской областях Казахстана, провели Югай И.С. и соавт. (1991). Было выделено 6 родов грибов, из них преобладали Aspergillus (68% образцов) и Pénicillium (85%). Среди изученных 35 штаммов Aspergillus flavus, 5 являлись продуцентами афлатоксина Вь они выделены из гороха, гречихи, сои и ячменя. В 6,4% загрязненных образцов содержание афлатоксина Bi превышало ПДК.

В условиях хозяйств Мордовской республики большинство кормов в значительной степени поражены токсигенными микроскопическими грибами, среди которых преобладают Fusarium; Aspergillus, Penicillium, Mucor, Alternaria. В кормах выделены микотоксины Т-2 токсин, зеараленон, дезоксиниваленол, афлатоксин Вь стеригматоцистин в опасных для здоровья животных количествах (Тремасов М.Я; и соавт., 1996).

При микотоксикологическом анализе кормов из различных районов Республики Марий Эл установлено, что все корма были контаминированы микроскопическими грибами, в том числе токсикогенными штаммами. Наиболее часто-обнаруживали грибы родов Fusarium 85-100%, Mucor 88-97, Alternaria-83-95, Rhizopus- 74- 96, Aspergillus-78-80, Penicillium-67-80% (Тремасов М.Я. и соавт., 1996; Иванов И.И., 2002).

Выделены микотоксины, большинство из которых являются сильнодействующими соединениями: Т-2 токсин в-количестве 0,2-1,8 мг/кг, афлатоксин В\ -0,05-1,1 мг/кг, стеригматоцистин - 0,8-1,4 мг/кг, патулин -0,6-1,5 мг/кг и другие. Около 45% из всех выделенных токсичных штаммов приходилось на долю F. sporotrichiella.

В естественных условиях наиболее многочисленны случаи афлатоксикозов, трихотеценовых токсикозов, охратоксикозов животных (Петрович С.В., 1991; Жуленко В.Н. и др., 2002; 2004; Тремасов М.Я., 2002; Pong R.S., Wogan G.N., 1970; Deshmukh А., 1990; Fernandes А., Kalal V., Pitt J., 2000).

Среди трихотеценовых микотоксинов отмечена наибольшая степень контаминирования- Т-2 токсином и дезоксиниваленолом (Хофштеттер У., 2007; Smith Т., McDonald Е., Haladi S., 2001).

Значительное внимание уделяется изучению распространения микотоксинов и их продуцентов в пищевых продуктах и кормах за рубежом.

Кравченко JI.B. (1985) дал обзор распространения микотоксинов в пищевых продуктах и кормах во многих регионах, включая США, Канаду, страны Европы и другие. Основное внимание при этом уделялось грибам продуцентам афлатоксинов и трихотеценовых микотоксинов Aspergillus и Fusarium, Pénicillium как наиболее опасных контаминантов.

Образцы кормов, отобранные в 1986 и 1987г.г. на юге и севере Вьетнама (Blaha J. et al., 1990), подвергли микологическому анализу на содержание афлатоксина Bj. Из 52 исследуемых проб, выделены представители 45 видов микроскопических грибов, среди которых преобладали Aspergillus flavus (78% проб), A. niger (76%). В пробах кормов, отобранных в 1986 г, афлатоксин Bi обнаружен в 50% случаев, в количествах 2 - 640 мкг/кг, а в пробах 1987 г - в 78% случаев, в концентрациях 5-41 мкг/кг.

Alves de Almeida Rogeria et al. (1991) сообщили, что при микологическом анализе 90 образцов риса, отобранных в южных штатах Бразилии, представители Aspergillus были обнаружены в 42,2% образцов. Среди них доминировали A. parasiticus (17,7), A. flavus (10%). Все выделенные из риса штаммы A. parasiticus при культивировании продуцировали афлатоксины Вь Gi, В2 ,G2, и 22% изолятов A. flavus в тех же условиях синтезировали афлатоксины Bf или Bj и Gj.

Микологический анализ образцов проса показал наибольшую степень поражения грибами образцов, собранных в сезон дождей и наименьшую - у отобранных зимой. Среди 22 выделенных из образцов штаммов грибов преобладали Aspergillus flavus и A. parasiticus. Из них 63,8% образцов, отобранные летом и 17% - зимой (Безгина Ю.М., 2007). Наряду с грибами рода Aspergillus часто обнаруживали представителей Pénicillium, Rhizopus, Helminthosporium (MishraN.K. et al., 1991).

При исследовании 10 разновидностей свежесобранного зерна кукурузы Nicacio Mauricio A.S. et al. (1995) установлено наибольшее загрязнение грибами рода Fusarium (100%), Pénicillium (60%) и Aspergillus (35%). Среди 20 штаммов Aspergillus, 35% отнесены к A. fumigatus, 30% - к A. flavus, 30% -A. niger, 5% - к A. ochraceus. При оценке токсигенного потенциала обнаружено, что из 6 штаммов A. flavus 3 способны продуцировать афлатоксин Bj (Буга С.Ф., 2008).

Zamani - Zadeh H.R., Khoursandi Н. (1995) проверено 99 образцов пшеницы. Доминировали Fusarium graminearum 25 - 50% и F. culmorum 10 — 30%.

1.2. Т-2 токсикоз

Т-2 токсин — один из представителей многочисленной группы трихотеценовых микотоксинов, обладающий сильнейшим токсическим действием (Тутельян В. А., Кравченко Л. В., 1985; Хмелевский Б.А., Пилипец З.И., Малиновская Л.С. и др., 1985; Котик А.Н., 1999; Кузнецов А.Ф., 2001; Тремасов М.Я., 2002; Oswald I.P., Comerá С., 1998). Основным продуцентом Т-2 токсина является Fusarium sporotrichioides, наиболее интенсивное накопление токсинов, которым наблюдается при повышенной влажности и пониженной температуре (Билай В.И., 1977).

Гриб-продуцент широко распространен в природе, особенно в средней полосе Российской Федерации, где наиболее благоприятные климатогеографические условия для его развития. В годы эпифитотии фузариоза колоса в основных зерносеющих регионах России (Северный Кавказ, Центрально - Черноземный район) поражение колоса штаммами -суперпродуцентами достигает 100% (в среднем - около 65%) (Монастырский O.A., Коган Ю.Д., 2001; Литовка Ю.А., 2008).

Алиментарные токсикозы, обусловленные поражением пищевых продуктов и кормов трихотеценами, относятся к наиболее распространённым и рано описанным микотоксикозам человека и животных (Воронин Н.С., 1990). Массовые микотоксикозы, вызываемые токсигенными грибами F. sporotrichiella, наблюдались в СССР еще в 30-50 годы, когда в пищу и в корм были использованы перезимовавшие под снегом зерновые (Саркисов А.Х., Квашнина Е.С., Корнеев Н.Е. и др., 1994)

Характерной картиной отравления являлась клиника ATA -алиментарной токсической алейкии (Саркисов А.Х., 1954). Заболевание характеризовалось явлениями общего токсикоза (слабость, недомогание), рвотой, диареей, прогрессивной лейкопенией, гранулоцитопенией и умеренным лимфоцитозом. Смертность при ATA достигала 60% (Билай В.И., Пидопличко Н.М., 1970).

Подобные отравления животных в разные годы регистрировались в Канаде, Великобритании, ФРГ, Италии, США (Тутельян В. А., Кравченко JI.B., 1985). Фузариотоксикоз лошадей наблюдали Тремасов М.Я., Титов В.В. (1998).

При рассмотрении клинической картины трихотеценовых микотоксикозов, выделяют следующие наиболее часто встречающиеся симптомы: отсутствие аппетита, отказ, от корма, рвота; развитие геморрагического синдрома; нарушение функций желудочно-кишечного тракта; дерматотоксический эффект (воспалительные изменения, некрозы, отеки); лейкопения, тромбоцитопения, анемия, в частности при подостром и хроническом течении токсикоза; выраженные деструктивные изменения кроветворных и иммунекомпетентных органов (Тутельян В. А., Кравченко-Л.В., 1985).

Для Т-2 токсина характерны дерматотоксические свойства. Например, при остром и подостром Т-2 токсикозе у свиней и овец наблюдаются эрозии и некрозы кожи губ и слизистых оболочек ротовой полости и глотки. У кур -некротические поражения слизистой ротовой полости, у крыс и мышей -экссудативные дерматиты и гиперкератоз кожи вокруг рта, некрозы слизистой оболочки ротовой полости. При гистологическом исследовании обнаруживаются некроз эпидермиса, поражение эндотелия мелких сосудов, увеличение числа и дегрануляция тучных клеток особенно в подкожном слое (Ображей А.Ф., 1997; Рухляда В.В., 1983; Yarom R., Bergman S., Yagen В., 1987).

Отмечаются признаки поражения центральной нервной системы. Так, у лабораторных животных и телят наблюдаются нарушения координации движений, парезы задних конечностей; у овец - тремор, ослабление

16 тактильной и болевой чувствительности, атаксия и частичная потеря зрения; у кур - опущенность крыльев, вытягивание головы, малоподвижность, принятие неестественных поз (Рухляда В.В., 1982; Рухляда В.В., 1983; Уразаев А.Н., Сметов П.К., 1996; Ображей А.Ф., 1997; Рухляда В.В., 2008).

Характерные признаки поражения центральной нервной системы, вероятно, связаны с избытком в мозге серотонина, синтезируемого из триптофана. Т-2 токсин может ингибировать синтез протеинов печени (Melone J., Smith Т., 1995), что приводит к гипераминоацидемии - избытку свободных аминокислот, увеличению концентрации в мозге триптофана, и в конечном итоге серотонина (McDonald Е., Cavan К., Smith Т., 1998).

Сергейчевым А.И. (1998) при интоксикации овец Т-2 токсином в дозе ЛД50 отмечено увеличение количества серотонина в тканях среднего мозга, коре мозга и сердце, при одновременном снижении его содержания в легких.

Предполагают, что Т-2 токсин стимулирует триггерные зоны продолговатого мозга, тем самым, вызывая рвоту (Тутельян В. А., Кравченко Л. В., 1985). Наряду с рвотой у крыс, мышей, кошек, кроликов, цыплят, овец и крупного рогатого скота постоянно встречается диарея (Рухляда В.В., 1985; Ueno Y., 1985; Schiefer Н., 1986).

Действие Т-2 токсина, как и некоторых других микотоксинов, в живом организме вызывает серьезные деструктивные изменения в кроветворных и иммунокомпетентных органах. Многочисленными исследованиями показано, что органами-мишенями Т-2 токсина являются костный мозг, селезенка, вилочковая железа, лимфоидная ткань, а у птиц еще и фабрициева сумка (Красников Г.А., Кленина Н.В., Антонов B.C. и др., 1992; Omar Rabea F., Gelboin Harry V., Rahimtula D., 1996).

Многие исследователи считают, что в основе биохимического механизма действия трихотеценовых микотоксинов лежит их ингибирующее действие на биосинтез белка (Тутельян В. А., Кравченко Л. В., 1985; Ueno Y., 1979; Oldham J., Akkred L., Milo G. et al., 1980; Rosenstein Y., Lafarge-Frayssient С., 1983).

Т-2 токсин относится к трихотеценовым микотоксинам, подавляющим инициацию трансляции (Ueno Y., Nakayama К., Ishii К. et al. 1983). Он вызывает неспецифическое ингибирование на 50% синтеза всех белков митохондрий (Расе J., Watts M., Canterbury W., 1988).

В опытах in vitro почти полностью подавлялся синтез ДНК и белка при инкубировании в течение 4 ч фибробластов человека и Т-2 токсина в дозе ЛД50 (Oldham J., Akkred L., Milo G. et al., 1980). Еще более значимые повреждения ДНК наблюдаются в лимфоидных клетках (Lafarge-Frayssient С., Decloitre F., Frayssient С., 1980).

При Т-2 микотоксикозе многие авторы отмечают изменение активности ферментов в сыворотке крови и микросомах печени. Так при острой интоксикации Т-2 токсином крыс (1/3 ЛД50) отмечено снижение активности аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы в микросомах печени на 66, 71 и 60% соответственно и одновременно повышение их активности в сыворотке крови (Jovanovic D., Nedeljkovic M., Killbarda V. et al., 1992). Уменьшение активности щелочной фосфатазы, а также большинства лизосомных ферментов при введении, внутрь Т-2 токсина в различных концентрациях отмечают также Авреньева Л.И. и др. (1983), Кравченко Л.В., Котик А.Н. (1983), Кравченко Л.В. и др. (1997), Aziz Nady H. et al. (1995).

Характерным симптомом Т-2 токсикоза являются гематологические изменения. Они включают в себя не только уменьшение числа эритроцитов и тромбоцитов, но также еще более заметное уменьшение белых клеток крови (Токарев C.B., 2007; Gentry Р., 1989).

По данным других авторов, гематологический анализ у крыс, мышей и кошек после воздействия однократной дозы Т-2 токсина показал быстрое повышение уровня циркулирующих белых клеток крови. Напротив, повторное введение трихотеценов несколько уменьшало число циркулирующих белых клеток крови (Ueno Y., Nakayama К., Ishii K.et al., 1983). У мышей как однократное, так и повторное введение Т-2 токсина вызывали лейкоцитоз и последующую лейкопению (Sato N., Ito Т., Kumada Н. et al., 1978):

По литературным источникам, Т-2 токсин первично воздействует на гематологические параметры и параметры коагуляции. Интоксикация птицы при скармливании кормов, загрязненных Т-2 токсином, характеризовалась коагулопатией, что обуславливалось дефицитом активности фактора VII и протромбин-зависимой активности фибриногена (Doerr J., Hamilton P., Burmeister H., 1981). Считают, что в основе геморрагического синдрома лежит вызванное Т-2 токсином снижение свертываемости крови:

Yarom R. et al. (1987) отмечают, что одной из возможных причин геморрагического синдрома является нарушение проницаемости мембран тромбоцитов и подавление реакции их агрегации:

Sato et al. (1976) сообщили, что Т-2 токсин вызывал повреждения в костном мозгу кошек и гипоплазию у мышей.

Di Ninno V. et al. .(1985) оценили in vitro действие 400 нг Т-2 токсина на лимфоидные клетки мышей. Выяснено, что клетки костного мозга были более устойчивы к токсину, чем клетки тимуса, селезенки и перитонеальные клетки.

Глашкина JI.M. и др. (1992), изучая патогенез токсина Т-2, пришли к выводу, что пусковым механизмом токсичности может быть нарушение кальциевой проницаемости. При оценке потенциальной опасности микотоксинов в целом и Т-2 токсина в частности, следует учитывать, что они могут нарушать обмен кальция и его регуляцию, а также вызывают снижение концентрации витаминов А, Е и С (Сергеев И.Н., Пилия Н.М., Кузьмина Е.Э. и др., 1990; Красников Г.А., Кленина Н.В., Антонов. B.C. и др., 1992;). Nascimento J.A.F.B. et al. (2001) отмечали этиологическую роль Т-2 токсина в нарушении эндохондриального роста костей у цыплят - бройлеров.

У Т-2 токсина обнаружены- также тератогенные свойства. При этом, чем больше была воздействующая доза токсина или кратность его введения, тем возникал более широкий и серьезный спектр аномалий.

19

Эмбриотоксическое действие токсина Т-2 у эмбриона цыпленка начиналось с доз 10"7-10"6 мг на эмбрион (Novotna В., Vesely D,. Vesela D. et al., 1994).

Имеются сведения об инфекционных, онкологических и аллергических заболеваниях, обусловленных нарушением иммунной системы при воздействии микотоксинов (Тремасов М.Я., Юсупов Р.Х., Беляева Л.Л., 1998).

Поражение микотоксинами функций иммунной системы понижает устойчивость организма к инфекционным факторам, а так же снижать иммунитет, приобретенный при вакцинации (Oswald I.P., Comerá С., 1998).

1.3. Афлатоксикоз

Афлатоксикозы - это алиментарные микотоксикозы животных, возникающие при контаминации кормов микотоксинами, продуцируемыми^ грибами рода Aspergillus.

В настоящее время идентифицировано 18 различных афлатоксинов, однако только 4 из них встречаются в естественных условиях - Вь В2, Gb и G2. Другие афлатоксины - Мь М2, Pi, Qi, афлатоксикол являются продуктами метаболизма у микроорганизмов и животных (Комаров А.А., Панин А.Н., 2003).

Действие афлатоксинов на животный организм может быть охарактеризовано с определенной степенью условности с двух позиций: оценка острого токсического действия и оценка отдаленных последствий.

Клиническая картина острого отравления характеризуется вялостью, отсутствием аппетита, нарушением координации движений, судорогами и порезами, нарушением функций желудочно-кишечного тракта, потерей живой массы и отставанием в развитии. Специфическими симптомами острого афлатоксикоза являются коагулопатия и множественные геморрагии, отеки, водянка полостей и в некоторых случаях - развитие желтухи (Тутельян В. А., Кравченко Л. В., 1985).

Все афлатоксины являются ядами с гепатотропным действием — во всех случаях органом - мишенью является печень. При этом наблюдаются

20 обширные коагуляционные и жировые некрозы гепатоцитов вплоть до массовых субтотальных некрозов паренхимы, а также жировая и белковая дистрофия в менее поврежденных клетках. О поражении печени свидетельствуют значительное возрастание на ранних сроках интоксикации активности щелочной фосфатазы, аспартатаминотрансферазы, а также снижение концентрации общего белка в сыворотке крови (Тутельян В. А., Кравченко Л. В., 1985).

Многочисленными исследованиями как in vivo на различных видах животных, так и in vitro на разных модельных системах, убедительно показано, что в основе молекулярных механизмов действия афлатоксинов лежит их взаимодействие с макромолекулами клетки — нуклеиновыми кислотами и белками (Тутельян В. А., Кравченко Л. В., 1981).

Афлатоксины значительно подавляют синтез ДНК, РНК и белка. Уже в самых ранних исследованиях было обнаружено, что введение афлатоксина Bi лабораторным животным, так же как и инкубация его со срезами печени или культурами клеток, приводит к быстрому и значительному подавлению включения предшественников в РНК и снижению активности ДНК-зависимой РНК-полимеразы (Lafarge-Frayssient С. et. al., 1980).

Интоксикация афлатоксинами сопровождается снижением содержания общего и микросомного белка в печени крыс и обезьян, а также значительным уменьшением концентрации белка в сыворотке крови различных видов животных (Tung Н.Т. et. al., 1980).

Одним из важнейших и постоянных признаков острого афлатоксикоза является геморрагический синдром. Нарушение свертываемости крови при афлатоксикозах наблюдали у крупного рогатого скота, свиней, собак, крыс, морских свинок, цыплят и приматов. Предполагают, что афлатоксин В может действовать как антивитамин К и конкурировать с витамином К за места связывания на молекулах ферментов синтеза протромбина и некоторых других факто ров свертываемости крови (Bassir О., Alozie Т.С., 1979).

Отравление афлатоксином сопровождается глубокими нарушениями функций отдельных субклеточных мембранных структур и изменением их ферментной активности (Лимаренко A.A., 2007).

При остром афлатоксикозе у крыс, вызванном однократным введением афлатоксинов В] и Gi, через 48 ч в печени и почках снижалась активность сукцинат - и малатдегидрогеназ, цитохромоксидазы, в то время как введение афлатоксина Mj приводило к активации митохондриальных ферментов этих органов. Афлатоксин Bj подавлял также активность ферментов цикла мочевины (митохондриальных карбамоилфосфатсинтазы и орнитинтранс карбамилазы) в печени крыс, но не влиял на активность аргиназы, локализованной в цитозоле (Bai N.J. et. al., 1977).

Доказано непосредственное действие афлатоксинов на рибосомный аппарат клетки, проявляющееся прежде всего в дезагрегации полисом. Полагают, что афлатоксины связываются со специфическими участками эндоплазматического ретикулума ответственными за присоединение полисом, вызывая тем самым смещение рибосом и деградацию эндоплазмического ретикулума (Garvican L., Rees K.R., 1979).

Покровский A.A., Тутельян В.А. с сотрудниками (1976) изучали влияние афлатоксинов на активность ферментов и свойства мембран лизосом клеток печени. Резко повышалась активность кислой ДНКазы (276% контрольного уровня), в 2 раза возрастала активность арилсульфатаз А и В и бета-глюкозидазы. Активность бета-глюкуронидазы и бета-галактозидазы повышалась более умеренно (123 и 162%). Начиная с 72 ч, активность ферментов постепенно снижалась. Однако к концу периода наблюдений (96 ч) активность кислой ДНКазы более чем в 2 раза превышала контрольный уровень (В. А. Тутельян, Л. В. Кравченко, 1985).

Результаты изучения влияния афлатоксинов на иммунный ответ у различных животных и птиц показали, что они являются сильными иммунодепрессантами и подавляют как клеточный иммунитет, так и факторы неспецифической защиты организма (A.C. Pier et al., 1980).

Иммунодепрессивное действие афлатоксинов может быть в определенной степени следствием нарушения функции макрофагов. Так, у цыплят наблюдали зависимое от дозы афлатоксина снижение клиренса коллоидного углерода из кровотока (D.D. Mann, G.M. Buenind, 1982). Афлатоксин Bi снижал фагоцитарную активность альвеолярных макрофагов кролика (В. А. Тутельян, JI. В. Кравченко, 1985).

2. Результаты исследования использованы при составлении проектов следующей документации: инструкция по применению «Фитосорба»; «Методические указания по профилактике сочетанных микотоксикозов животных в РТ».