Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологическая и биологическая оценка препарата "Микосубтил" и его эффективность при обезвреживании кормов от микотоксинов

ь

На правах рукописи

ИВАНОВ ЕВГЕНИЙ НИКОЛАЕВИЧ

2 О АВГ 2009

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ И БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПРЕПАРАТА «МИКОСУБТИЛ» И ЕГО ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИ ОБЕЗВРЕЖИВАНИИ КОРМОВ ОТ МИКОТОКСИНОВ

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань-2009

003475375

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (г. Казань).

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор

Тремасов Михаил Яковлевич доктор биологических наук, профессор Иванов Аркадий Васильевич Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Хисматуллина Наиля Анваровна доктор ветеринарных наук, профессор Софронов Владимир Георгиевич

Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (ВНИИВСГ), г. Москва

<О 3 2009г. в «/ Оу> часов на заседании диссертационного совета Д - 220.012.01 при ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (420075, г. Казань, Научный городок - 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ» (г. Казань)

Автореферат разослан «С&> О % 2009 г.

Ведущее учреждение:

Защита состоится «У_Ч »

Ученый секретарь диссертационного

совета, кандидат ветеринарных наук В.И. Степанов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1 Актуальность темы. Корма растительного происхождения, контаминированные плесневыми грибами, представляют реальную опасность не только для здоровья сельскохозяйственных животных, но и для здоровья человека - потребителя продуктов животноводства. Существует возможность накопления в организме микотоксинов, вторичных метаболитов плесневых грибов, кроме того, угнетается полезная микрофлора самих растений (А.Ф. Кузнецов, 2001; Г.П. Кононенко, 2003; A.B. Иванов, М.Я. Тремасов, К.Х. Папуниди и др., 2008). Наиболее часто корма загрязняются микотоксинами грибов рода Fusarium и Aspergillus (В.Г. Иванов, 1981; A.M. Смирнов, Г.П. Кононенко, Г.А. Таланов, 1999).

Растительные субстраты, обсемененные токсигенными грибами, не могут быть использованы в корм без соответствующей санитарной обработки, так как микотоксины у животных могут вызывать субхронические, хронические и острые микотоксикозы. Микотоксины даже в малых дозах вызывают значительное снижение продуктивности, прироста массы тела, ослабление резистентности организма животных, при этом создаются благоприятные условия для возникновения инфекционных и других болезней (М.Я. Тремасов, 2005; В.А. Антипов, 2005; В.И. Дорожкин, В.Г. Иванов, 2007).

В настоящее время разработаны физические, химические и биологические способы деконтаминации кормов от токсигенных, патогенных грибов и микотоксинов. Однако большинство физических и химических методов детоксикации дорогостоящие, требуют определенных производственных затрат, отрицательно влияют на показатели качества кормов и незначительно снижают количество микотоксинов (Д.В. Алеев, 2007; A.L. Patey, 1987; Е. Boutrif, 1998).

В ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" выделены изоляты микроорганизмов В. subtilis для обработки кормов, контаминированных микотоксинами. Однако оставались неизученными морфологические, физиолого-биохимические,

патогенные свойства микроорганизмов и обезвреживающее действие культуры В. subtilis в отношении микотоксинов.

1.2 Цель и задачи исследований. Целью работы явились скрининг и изучение биологических свойств микроорганизмов рода Bacillus для разработки биологических средств обезвреживания кормов от микотоксинов, сравнительная оценка их эффективности при профилактике микотоксикозов животных.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

1. Изучить морфологические, культуральные, биохимические и патогенные свойства бактерий рода Bacillus и их антагонистическое действие по отношению Aspergillus flavus и Fusarium sporotrichiella;

2. Провести скрининг и дать оценку профилактической эффективности препарата, созданного на основе отобранного изолята В. subtilis при длительном поступлении Т-2 и афлатоксина Вь учитывая изменение клинических, гематологических и биохимических показателей и факторов неспецифической резистентности организма;

3. Провести ветеринарно-санитарную оценку мяса, патологоанатомические и гистологические исследования органов и тканей получавших корм, обработанный препаратом на основе В. subtilis-2006;

4. Разработать способ профилактики микотоксикозов животных препаратом на основе В. subtilis в условиях животноводческих предприятий.

1.3 Научная новизна. Впервые экспериментально обосновано применение препарата «Микосубтил», разработанного на основе В. subtilis, для обезвреживания кормов от Т-2 токсина и афлатоксина В].

Установлена антагонистическая активность изолятов В. subtilis в отношении грибов рода Aspergillus и Fusarium - продуцентов микотоксинов и их безвредность для животных. Проведен скрининг и дана оценка профилактической эффективности препарата, созданного на основе отобранного изолята В. subtilis при длительном поступлении Т-2 и

афлатоксина В,, с учетом изменения клинических, гематологических и биохимических показателей и факторов неспецифической резистентности организма. Проведена ветеринарно-санитарная экспертиза мяса и изучена гистоструктура тканей внутренних органов животных после применения препарата «Микосубтил».

1.4 Практическая ценность работы. В качестве средств профилактики при воздействии Т-2 токсина и афлатоксина на организм животных рекомендуется применять препарат «Микосубтил» в концентрации 10,0 мл/кг корма с содержанием 2 млрд. микр. кл./мл.

По результатам проведенных исследований разработана «Инструкция по применению препарата «Микосубтил» для обезвреживания кормов от микотоксинов», утвержденная Главным управлением ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан (2009).

1.5 Основные положения, выносимые на защиту:

- антагонистические свойства изолята В. subtilis - 2006 по отношению к токсигенным грибам рода Aspergillus и Fusarium.

- эффективность препарата на основе изолята В. subtilis - 2006 для обезвреживания кормов от микотоксинов;

- клинико-гематологические, биохимические показатели и факторы неспецифической резистентности животных при воздействии Т-2 токсина и афлатоксина на фоне применения препарата «Микосубтил»

1.6 Апробация материалов диссертации. Основные материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на научных сессиях ученого совета ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" по итогам НИР за 2006-2008 г.г., Международных и Всероссийских симпозиумах (Казань, 2006, 2007, 2008, 2009; Москва, 2008, 2009; Санкт-Петербург, 2008; Екатеринбург, 2008; Ижевск 2008; Ульяновск, 2008).

1.7 Публикации. По результатам выполненных исследований опубликовано 11 научных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ: «Ветеринарный врач», «Вестник Российской

военно-медицинской академии», «Труды междисциплинарного микологического форума».

1.8 Объем и структура работы. Материалы диссертации изложены на 156 страницах компьютерного текста и включают следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 34 таблицами и 15 рисунками. Список использованной литературы содержит 210 библиографических источников, в том числе 73 зарубежных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Работа выполнена в 2007-2009 гг. в отделе токсикологии ФГУ «Федеральный Центр Токсикологической Радиационной Безопасности (г. Казань) производственные исследования проведены в условиях ООО «Новая жизнь» Кукморского района Республики Татарстан.

Опыты проводили на 71 белой мыши, 190 белых крысах, 15 овцах и 70 поросятах. В течение всего опыта животные находились в одинаковых условиях содержания и кормления.

В экспериментах использовали следующие культуры микроорганизмов: Fusarium sporotrichiella, штамм 2м-15, а также изоляты: В. subtilis - 2006; В. subtilis - F-2; В. subtilis - F-3; В. subtilis - K.M.; В. licheniformis и грибы рода Aspergillus flavus, хранящиеся в коллекции лаборатории микотоксинов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». Концентрацию микроорганизмов определяли по отраслевому стандарту-мутности (ОСО мутности), производства института им. Тарасевича.

Морфологические и кулътуральные свойства микроорганизмов изучали по характеру их роста в жидких (МПБ) и на плотных (МПА) питательных средах, тинктуральные свойства определяли световой микроскопией с использованием окулярного микрометра АМ-9-2.

Патогенные свойства изучали путем подкожного и внутрибрюшинного введения белым мышам 0,5-1 мл взвеси микроорганизмов в МПБ, с содержанием в 1 мл 100, 200, 500 млн. и 1 млрд. микробных клеток.

Морфологические исследования крови проводили по общепринятой методике. Биохимические исследования состояли из определения в сыворотке крови общего белка на рефрактометре ИРФ-22, а его фракций -турбидиметрическим методом (И.П. Кондрахин, 2004); активности аспартатаминотрансферазы (ACT), аланинаминотрансферазы (АЛТ), креатинкиназы, лактатдегидрогеназы (ЛДГ), гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ), щелочной фосфатазы, а также содержания азота мочевины, креатинина, глюкозы, пировиноградной кислоты, холестерина и концентрации общего кальция, неорганического фосфора проводили на анализаторе «Microlab 200».

Содержание Т-лимфоцитов в периферической крови определяли методом спонтанного розеткообразования с гетероциклическими эритроцитами Е-РОК и ЕАС-РОК (И.П. Кондрахин и др., 1985), лизоцимную активность по И.Ф. Храбустовскому и Ю.М. Маркову (1974). Фагоцитарную активность нейтрофилов изучали по С.А. Кост и М.И. Стенко (1974), в качестве тест - микроба использовали Staphilococcus aureus штамм 209.

Изучение антагонистических свойств штаммов рода Bacillus проводили в отношении грибов-продуцентов Т-2 токсина и афлатоксина Bi (Fusarium sporotrichiella, штамм 2м-15 и Aspergillus flavus).

Токсичность препарата «Микосубтил» оценивали в опытах на белых крысах и поросятах согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005). Общую токсичность корма определяли биотестированием на стилонихиях, кроликах и мышах согласно ГОСТу Р 52337-2005.

Ветеринарно-санитарную экспертизу мяса проводили в соответствии с ГОСТами 7269-79, 23392-78, 21237-75, «Правилами ВСЭ» (1988). Биологическую ценность мяса определяли на крысятах по приросту массы

тела и коэффициенту эффективности корма. Гистологические исследования проводили совместно с н.с. Губеевой Е.Г.

Обработку экспериментально полученного цифрового материала проводили статистическим методом с применением критерия достоверности по Стьюденту на персональном компьютере с использованием программного пакета Microsoft Excel ХР (2000).

Библиографическое описание использованных в диссертации литературных источников осуществляли в соответствии с требованиями действующего ГОСТа.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Антагонистические свойства микроорганизмов рода Bacillus

В качестве микробов-антагонистов использовали изоляты микроорганизмов рода Bacillus: В. subtilis - 2006; В. subtilis - F-2; В. subtilis -F-3; В. subtilis - К.M. и В. licheniformis. Исследования проводили с использованием культуральной массы микроорганизмов, с концентрациями 1млрд. микр. кл., 500 и 200 млн. микробных клеток. На основании проведенных опытов наиболее эффективными, обладающими выраженными антагонистическими действиями в отношении плесневых грибов Fusarium sporotrichiella, 2м-15 и Aspergillus flavus оказались изоляты В. subtilis - 2006 и F 2.

3.2 Биологические свойства изолятов В. subtilis

При микроскопировании исследуемых изолятов из агаровых или бульонных культур были выявлены следующие грамположительные удлиненной формы микроорганизмы: изолят В. subtilis-2006 длиной 0,05±0,02 мкм и шириной 0,01 ±0,001 мкм, изолят F-2 длиной 0,02±0,001 и шириной 0,01±0,001, изолят К.М. длиной 0,02±0,001 и шириной 0,01±0,001, которые в мазках располаглись поодиночке, парами и короткими цепочками.

На МПА данные микроорганизмы образовали средние, темно-коричневого цвета округлые, плоские, вязкой консистенции, непрозрачные колонии с гладкой поверхностью и ровными краями (S-формы колоний).

Рост этих колоний на МПБ сопровождался помутнением с формированием пленки легко разбивающейся при встряхивании.

Исследуемые изоляты обладали слабой сахаролитической активностью и на средах Гисса ферментировали без образования газа сахарозу и лактозу.

Исследуемые изоляты обладают амилотической активностью, протеолитической (разжижают желатин), каталазной и уреазной активностью. Не образовали сероводород, индол.

Введение подкожно и внутрибрюшинно белым мышам 0,5-1 мл взвеси микроорганизмов В. subtilis, с содержанием в 1 мл 100; 200; 500 млн. 1 млрд. микр. кл. не приводит к гибели животных, следовательно, они не обладают патогенностью. При вскрытии на 7 сут убитых животных патологоанатомические изменения во внутренних органах не наблюдались. Из тканей внутренних органов убитых животных выделяли исходную культуру.

3.3 Обезвреживающие свойства изолятов В. subtilis

В качестве объектов (кормов) использовали комбикорм, естественно загрязненный микотоксинами, уровень которых в 3-4 раза превышал ПДК.

Использование изолята В. subtilis - 2006 позволило значительно снизить содержание афлатоксина В|. Так при внесении изолята в концентрации 2 млрд. микр. кл. через 24 ч микотоксин не обнаруживался, а в концентрации 1 млрд. микр. кл. выявлялись лишь следовые количества (0,001 мг/кг). Использование данного изолята для обезвреживания в концентрациях 0,5 и 0,2 млрд. микр. кл. снизило содержание афлатоксина Bj через 48 ч на 95-92,5%. Следовые количества микотоксина (0,001мг/кг) обнаруживались спустя 72 ч после обработки. В контрольной пробе на протяжении всего периода исследования количество афлатоксина В, не изменялось.

Применение изолята В. subtilis - 2006 позволило значительно снизить содержание Т-2 токсина в корме. При внесении изолята в концентрации 2 млрд. микр. кл. через 1 ч микотоксин обезвреживался на 92,2%, а в

концентрации 1 млрд. микр. кл. - на 81,5%. При использовании изолята для обезвреживания в концентрациях 0,5 и 0,2 млрд. микр. кл. содержание Т-2 токсина снизилось на 61,1 и 43,1% соответственно. Следовые количества микотоксина обнаруживались спустя 24 ч после обработки в концентрации 1 млрд. микр. кл. В контрольной пробе на протяжении всего периода исследования количество Т-2 токсина не изменялось.

3.4 Профилактическая эффективность изолята В. яиЬШ'ю - 2006 при воздействии Т-2 и афлатоксина В, на белых крысах

Исследования были проведены на 90 белых крысах живой массой 160180 г, которые по принципу аналогов были разделены на 5 групп. Животные первой и второй групп получали с кормом Т-2 токсин и афлатоксин В1 в дозах 450- и 200 мкг/кг соответственно. Животные третьей и четвертой групп получали корм, содержащий Т-2 и афлатоксин В| в тех же дозах и обработанный изолятом 2006 В.зиЫШв в дозе 10,0мл/кг корма. Животные пятой группы служили контролем и получали обычный корм.

3.4.1 Биохимические показатели сыворотки крови белых крыс при воздействии Т-2 и афлатоксина В) на фоне применения изолята

В. виЬННв- 2006

О негативном действии Т-2 и афлатоксина В] на животных свидетельствуют результаты исследований белкового обмена. В сыворотке крови крыс, получавших микотоксины на 30 сут эксперимента, наблюдали достоверное снижение содержания общего белка - на 24,0 и 27,0% (р<0,05), содержания альбуминов - на 24,0 и 36,0% (р<0,01). Воздействие микотоксинов на фоне применения изолята В.зиЫШБ - 2006 предотвращало белковый дисбаланс в организме. Так, в сыворотке крови' крыс к концу эксперимента происходило снижение содержание общего белка относительно контроля на 9,5 и 5,4%, альбуминов - на 17,1 и 20,1% соответственно.

3.4.2 Патоморфологические изменения у белых крыс при воздействии Т-2 токсина и афлатоксина В( на фоне применения изолята

В. зиЫШз - 2006

При вскрытии крыс, получавших Т-2 токсин и афлатоксин В) с кормом, наблюдали следующие изменения: шёрстный покров был

взъерошенный и грязный, отмечались эрозии и некрозы кожи губ и слизистых оболочек ротовой полости и глотки, в подкожной клетчатке отмечены многочисленные точечные и полосчатые кровоизлияния, отсутствие жировых отложений. Сердце округлой формы, в полостях несвернувшаяся кровь темно-вишневого цвета. Легкие среднего размера, отёчны, кровенаполнены. Печень темно-красного цвета, дряблая, не эластичная с очагами некроза, увеличена в размерах. Почки неравномерно окрашены, капсула снимается легко, граница коркового и мозгового слоев выражена нечётко. Патоморфологическая картина крыс, получавших корм, содержащий Т-2 и афлатоксин Вь обработанный изолятом В. бчЫШб - 2006, характеризовалась менее значительными изменениями.

При гистологическом исследовании внутренних органов крыс, получавших с кормом в течение 30 сут Т-2 и афлатоксин В| были обнаружены признаки нарушения проницаемости сосудов в виде единичных экстравазатов в почках, печени, с кровоизлияниями в красную пульпу селезенки. В стенке кишечника имелись признаки фибриноидного некроза поверхностных слоев. В печени развивалась зернистая дистрофия, кариолизис единичных гепатоцитов, очаговые холестазы с обширными участками некроза паренхимы, нарушением балочного строения долек, в портальных трактах определялись скопления лимфоцитов, в сосудах -лимфоцитоз. В почках - зернистая дистрофия эпителия извитых канальцев с очаговой десквамацией верхушек, белковые массы в просветах канальцев. В легких определялись признаки очаговой полиэксудативной пневмонии. При введение в рацион изолята В. БиЫШз - 2006 дегениративно-дистрофические изменения в органах и тканях были менее выражены.

На основе изолята В. зиЫШз - 2006 нами был создан препарат «Микосубтил» для обезвреживания кормов от микотоксинов.

3.5 Определение безвредности препарата «Микосубтил»

3.5.1 Острая токсичность препарата «Микосубтил» на белых крысах и поросятах

Исследование проведены на 30 белых крысах массой 180-200 г, разделенных на 2 равные группы и 20 поросятах массой 20-25 кг по 10 животных в каждой.

Препарат «Микосубтил» вводили крысам в объеме 3 мл (2 млрд. микр. кл./мл), контрольные животные получали физиологический раствор в аналогичном объеме. Поросятам препарат задавали внутрь, однократно: животным первой группы - 50 мл (2 млрд. микр. кл./мл), поросята второй группы служили контролем и получали 50 мл физиологического раствора.

В результате проведенных опытов установлено, что препарат в указанных дозах не оказывает токсического действия. Клинически подопытные животные не отличались от контрольных. У животных, получавших соответствующие дозы «Микосубтила» и физиологического раствора отмечалась небольшая, быстро проходящая одышка, тяжесть в движениях, которая продолжалась в течение 30-40 минут. Других изменений со стороны клинического состояния животных не наблюдалось.

При диагностическом вскрытии белых крыс (через 5 сут) после введения препарата патологических изменений внутренних органов не выявлено.

3.5.2 Безвредность препарата «Микосубтил» на белых крысах и поросятах при многократном поступлении в организм

Безвредность препарата при многократном поступлении в организм

изучена на белых крысах массой 120-140 г и на 20 поросятах массой 25-30 кг. Для оценки длительного воздействия препарата Микосубтил на организм животных были сформированы 4 группы белых крыс и две группы поросят по 10 животных в каждой.

Крысы первой группы служили контролем и внутрижелудочно получали 2 мл физиологического раствора. Крысам второй группы вводили 2

мл, третьей - 4 мл, четвертой - 6 мл препарата. Продолжительность опыта составила 20 суток.

За исследуемый период отрицательного действия препарата на организм крыс не установлено. Состояние животных как в опытной, так и в контрольной группах было хорошее-движения активные, координированные, шерстный покров блестящий, волос плотно удерживается в волосяных луковицах. Через 20 сут после начала опыта по 2 животных из каждой группы были убиты для диагностических исследований. При вскрытии крыс видимых патологоанатомических изменений не установлено.

В результате изучения безвредности Микосубтила выявлено, что десятикратное введение препарата в дозе 50 мл (2 млрд. микр. кл./мл) не вызывало видимых изменений в организме поросят.

Морфологические показатели крови подопытных животных не отличались от показателей контрольной группы и находились в пределах физиологической нормы. Среднесуточный прирост массы тела составил на 30 сут в первой группе - 163,0±1,16г, во второй - 159,0±1,1г. 3.6 Определение общей токсичности корма

В корме, обработанном препаратом «Микосубтил», выживаемость стилонихий составила 90%, что свидетельствует об отсутствии токсичности корма, в необработанном корме выжило 25% инфузорий - корм токсичный.

На участке кожи, куда был нанесен экстракт корма, обработанный препаратом, наблюдалась незначительная гиперемия, сохранявшаяся не более 2 сут после повторного нанесения экстракта и не сопровождающаяся шелушением кожи. На участке кожи, после нанесения экстракта из необработанного препаратом корма, наблюдалось шелушение, болезненность и уплотнение.

Из группы мышей, которым вводили экстракт из необработанного корма, погибли две, при вскрытии погибших и убитых животных наблюдали геморрагическое воспаления желудочно-кишечного тракта.

В группе мышей, которым вводили экстракт из обработанного корма, все животные остались живы. При вскрытии убитых мышей патолого-анатомических изменений не установлено.

3.7 Профилактическая эффективность препарата «Микосубтил» при воздействии Т-2 и афлатоксина В1 на организм овец

Для решения данной задачи было сформировано 5 групп овец по 3 в

каждой. Овцам первой группы ежедневно задавали корм, содержащий Т-2 токсин в дозе 450 мкг/кг, второй - афлатоксин В; в дозе 200 мкг/кг. Животным третьей и четвертой групп задавали корм, содержащий Т-2 и афлатоксин Вь обработанный препаратом «Микосубтил». Пятая группа служила контролем.

3.7.1 Морфологические показатели крови овец при воздействии микотоксинов на фоне применения препарата «Микосубтил»

На 10 сут эксперимента у овец первой и второй групп, получавших

токсичный корм, отмечалось несущественное снижение количества эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина. К 30 сут уменьшение количества эритроцитов, относительно данных животных контрольной группы, составило - 16,6% (р<0,05) и 12,6%, лейкоцитов - на 20,1% (р<0,05) и 13,4%, содержания гемоглобина - на 20,3 (р<0,01) и 19,7% (р<0,05). У животных в третьей и четвертой группах снижение этих показателей было не достоверным не отличалось от показателей животных контрольной группы.

3.7.2 Биохимические показатели крови овец при воздействии микотоксинов на фоне применения препарата «Микосубтил»

У овец первой и второй групп, которым задавали Т-2 и афлатоксин В1 с

кормом, наблюдали закономерное уменьшение количества общего белка. Так, на 10 сут отмечали его снижение на 7,4 и 8,1%, на 20 сут - на 11,5 и 12,1% (р<0,05), на 30 сут - на 15,1 и 19,5% (р<0,01) соответственно. У животных третьей и четвертой групп, которым задавали корм, содержащий микотоксины и обработанный препаратом «Микосубтил», наблюдали незначительные изменения данного показателя. Процентное содержание в белке альбуминов к 30 сут исследований у овец первой группы снизилось на 10,6% (р<0,05), второй - на 12,7% (р<0,05), третьей - на 4,2%, в четвертой - на

8,5%. Результаты исследования активности ферментов представлены в табл. 1.

Таблица 1 - Активность ферментов а крови овец при воздействии

микотоксинов на фоне применения препарата «Микосубтил» (п=3)

Срок иссл., сут Группа животных

1 2 3 4 контроль

аланинаминотрансфераза, Ед/л

10 31,7±1,91 32,1±0,95 30,4±1,56 30,8±2,19 29,2±2,05

20 35,3±0,96** 36,5±0,81** 31,7±1,48 31,5±0,99 29,2± 1,48

30 37,8±1,56** 38,1±1,24** 33,9±1,95 33,4±1,76 30,9±1,31

аспартатаминотрансфераза, Ед/л

10 126,1±0,92 124,8±1,20 123,1±1,48 121,6±0,57 122,2±1,10

20 132,0±1,35 130,7±2,54 123,8±2,33 124,3±1,38 122,0±2,11

30 137,9±1,81* 138,0±2,57* 125,0±2,51 125,3±1,74 123,4±2,15

креатинкиназа, Ед/л

10 380,5±38,2 | 381,1±35,6 369,8±24,1 369,7±23,6 365,3±25,8

20 395,9±21,5 395,0±17,5 370,9±20,1 370,9±16,4 364,7±19,3

30 429,0±21,5* 429,7±23,8* 376,3±17,1 376,7±19,3 364,5±18,6

гамма-глутамилтрансфераза, Ед/л

10 15,6±0,53 15,2±0,46 14,2±0,49 14,2±0,48 14,0±0,42

20 17,3±0,92** 17,8±0,75** 14,8±0,56 15,0±0,61 13,8±0,84

30 18,1±0,83** 17,9±0,91** 15,4±0,51 15,1±0,62 14,0±0,75

лактатдегидрогеназа, Ед/л

10 1 588,0±25,9 586,0±29,7 566,8±31,6 565,5±27,5 559,1±31,4

20 ! 606,9±32,6 596,9±27,3 565,3±30,1 563,5±23,8 561,1±34,1

30 623,1±29,3* 620,3±27,8* 567,1±22,1 569,8±24,1 559,1±23,4

щелочная фосфатаза, Ед/л

10 100,0±0,9* 102,0±1,3* 89,4±1,5 90,0±1,3 88,5±1,9

20 ■■ 108,0±1,6** 107,0±2,1** 90,0± 1,24 90,8±1,84 89,7±1,1

30 123,0±1,9*** 120,0±1,5*** 91,8±1,10 92,7± 1,31 90,6±1,38

Примечание: * - р<0,05; * * - р<0,01; * * * - р<0,Ш 1.

Степень активности ферментов в сыворотке крови отражает тяжесть и поражения печёночных клеток. В наших исследованиях отмечено увеличение активности АЛТ в крови подопытных овец на всём протяжении опыта. Так, увеличение активности АЛТ в крови овец, получавших Т-2 токсин к 30 сут составило 22,3%; у овец, получавших афлатоксин В, на 30 сут - 23,3%. У животных третьей и четвертой групп регистрировали менее выраженное

увеличение активности АЛТ - к концу эксперимента оно составило 9,7 и

8,0% соответственно. Степень активности фермента ACT в сыворотке крови

овец, получавших корм, содержащий Т-2 и афлатоксин Вь увеличилась к 30

сут на 11,7 и 11,8% соответственно. Активность ACT у животных,

получавших обработанный корм, была незначительно выше контроля.

Увеличение активности ГГТ в крови овец, получавших микотоксины, к

концу исследований составило 29,2 и 27,8% соответственно. Активность ЛДГ

в сыворотке крови овец, получавших корм, контаминированный Т-2 и

афлатоксином В|, увеличилась на 36,3 и 32,8% соответственно. У

подопытных животных при интоксикации микотоксинами регистрировалось

увеличение активности креатинкиназы, которое составило 17,6 и 17,8%

соответственно. В проведенных исследованиях отмечено увеличение

активности щелочной фосфатазы сыворотки крови овец во всех группах

животных, наибольшие значения которой регистрировали в

непрофилактированных группах, так, к 30 сут в группе овец, получавших

контаминированный Т-2 и афлатоксином В] корм, увеличение активности

щелочной фосфатазы составило 36,3 и 32,8%. У профилактированных

препаратом «Микосубтил» животных активность данных ферментов (ГГТ,

ЛДГ, креатинкиназы и щелочной фосфатазы) увеличилась незначительно.

3.7.3 Влияние препарата «Микосубтил» на показатели естественной резистентности овец

Результаты исследований по изучению влияния препарата Микосубтил на клеточные факторы неспецифической резистентности овец представлены в табл. 2.

Фагоцитарная активность нейтрофилов у овец в первой и второй групп к 10 сут эксперимента снизилась относительно группы контроля на 5,6%, к 20 сут - на 11,4 и 9,6%, к 30 сут - на 20,2% (р<0,01) и 16,8% (р<0,05), соответственно. У животных третьей и четвертой групп наблюдались лишь незначительные изменения данного показателя.

Таблица 2 - Показатели неспецифической резистентности овец в динамике

интоксикации на фоне применения препарата «Микосубтил»

Группа животных Фагоцитарная активность нейтрофилов, % Фагоцитарное число Фагоцитарный индекс Фагоцитарная емкость

10 сут

1 41,5±2,35 2,80±0,12 6,73±0,38 17,8±1,23

2 41,5±2,06 2,83±0,16 6,82±0,50 18,5±1,40

3 42,5±2,56 2,86±0,13 6,73±0,19 18,5±1,22

4 43,0±2,71 2,89±0,18 6,71±0,29 19,7±1,39

Контроль 44,0±3,08 2,91±0,17 6,62±0,46 19,7±1,47

20 сут

1 38,5±2,35* 2,72±0,16 7,06±0,34 14,9± 1,17**

2 39,5±2,64 2,79±0,21 7,05±0,39 17,1 ±0,98*

3 42,0±1,71 2,80±0,25 6,67±0,23 17,2±1,14

4 42,5±2,35 2,85±0,16 6,71±0,21 18,6±1,49

Контроль 43,5±1,77 2,93±0,23 6,76±0,47 19,9±1,12

30 сут

1 35,5±2,11** 2,61±0,17* 7,36±0,16* 13,9±1,39**

2 37,0±1,71* 2,71±0,23 7,31±0,14* 16,0±1,18*

3 42,5±1,77 2,87±0,15 6,78±0,35 16,6±0,95*

4 43,0±2,41 2,87±0,28 6,68±0,26 17,6±1,42

Контроль 44,5±2,06 2,91±0,20 6,54±0,23 19,4±1,15

Примечание:* - р<0,05; * * - р<0,01.

Фагоцитарное число к 10, 20 и 30 сут снизилось у овец первой группы на 3,7; 7,1 и 10,0% (р<0,05), второй группы - на 2,7; 4,7 и 6,8%, третьей группы - на 1,7; 4,4 и 1,3%, и четвертой - на 0,6; 2,7 и 1,3% соответственно.

Увеличение значения фагоцитарного индекса наблюдалось во всех группах подопытных животных: в первой группе к 10, 20 и 30 сут - на 1,6; 4,4 и 12,5% (р<0,05), во второй группе - на 3,0; 4,2 и 11,7% (р<0,05) соответственно. У животных в третьей и четвертой группах фагоцитарный индекс в течение всего эксперимента оставался на уровне контроля.

Фагоцитарная емкость у подопытных животных относительно контроля, снижалась на 10, 20 и 30 сут исследования: первой группе на 9,6; 25,1 и 28,0% (р<0,01), во второй группе - на 6,1; 14,0 и 17,5% (р<0,05), в третьей группе - на 6,0; 13,5 и 14,4% (р<0,05) соответственно. У животных четвертой

группы величина фагоцитарной емкости на 10 сут осталась на уровне

контроля, на 20 и 30 сут снизилась - на 6,5 и 9,2% соответственно.

3.7.4 Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса овец на фоне применения препарата «Микосубтил»

Убой животных проводили на 30 сут исследования, методом обескровливания, отбирали пробы для проведения ветеринарно - санитарной экспертизы с учетом комплекса регламентируемых показателей.

Установлено, что мясо овец, подвергшихся воздействию Т-2 и афлатоксина Вь сразу после убоя и мясо, полученное от животных контрольной группы, по органолептическим, бактериологическим и физико-химическим показателям соответствует требованиям ГОСТов для доброкачественного мяса. Однако, мясо животных, получавших с кормом только Т-2 и афлатоксин В,, на 10 сут хранения относили к категории сомнительной свежести.

3.8 Профилактическая эффективность препарата «Микосубтил» в производственных условиях

Для подтверждения защитного действия препарата при микотоксикозах

животных провели исследование его профилактической эффективности на свиньях в условиях животноводческого хозяйства ООО «Новая жизнь» Кукморского района РТ.

Выбор хозяйства был обусловлен проведенным нами ранее микотоксикологическими исследованиями кормов, выявивших их загрязненность микотоксинами и токсигенными микроскопическими грибами родов Fusarium и Aspergillus. В кормах одновременно обнаруживались микотоксины в концентрациях: Т-2 - от 290 до 330 мкг/кг, афлатоксин Bi - от 60 до 80 мкг/кг. Как известно, при совместном действии Т-2 и афлатоксина В] они обладают синергетическим действием на организм.

Было сформированы 3 группы поросят крупной белой породы 2-3 месячного возраста по 10 в каждой. Животные первой группы служили контролем и получали обычный рацион, второй группы - получали основной рацион, обработанный препаратом «Микосубтил» в сухом виде, третьей

группы получала основной рацион, обработанный препаратом «Микосубтил» и его влажном виде из расчета 10,0 мл/кг корма. Продолжительность эксперимента составила 30 суток.

Установлено, что обработка корма препаратом оказало положительное влияние на динамику роста живой массы животных опытных групп. Так, к 30 сут исследования среднесуточные приросты массы в опытной группе были выше на -16,4% относительно контроля.

Уровень потребления комбикорма с препаратом практически не отличался от соответствующих значений контрольной группы, что свидетельствует о хорошей поедаемости рациона с добавлением препарата «Микосубтил».

Таким образом, в результате исследований установлено благоприятное влияние препарата «Микосубтил» на клинико-гематологические и биохимические показатели поросят.

Полученные данные являются подтверждением целесообразности использования препаратов на основе живых микроорганизмов в качестве средств обезвреживания кормов от микотоксинов для профилактики микотоксикозов животных, протекающих в субхронической и хронической форме, преобладающих в естественных условиях. 3.9 Контроль за качеством препарата «Микосубтил»

В процессе производства препарата нами проводился контроль его качества соответствующий нормам предъявляемым к лекарственным препаратам. Результаты анализа 4 серий препарата представлены в табл. 3.

Таблица 3 - Результаты анализа препарата на основе В.5иЬ1ШБ-2006

Наименование Нормы Номер серии

показателя 1 2 3 4

1 2 3 4 5 6

Внешний вид, прозрачная бесцветная соответс соответс соответс соответс

цвет жидкость твует твует твует твует

Наличие посторонних примесей не допускается соответс твует соответс твует соответс твует соответс твует

1 2 3 4 5 6

КОЕ в 1мл препарата, млрд., не менее 2,0 14,0±0,4 25,0±0,6 35,0±0,4 17,0±0,2

Бактерийная чистота контаминация посторонней микрофлоры не более 300 тыс бактерий в 1 г не обн. не обн. не обн. не обн.

Безвредность безвреден безвреден безвреден безвреден безвреден

Из таблицы следует, что все серии препарата «Микосубтил» взятых для контроля качества соответствуют разработанным требованиям и нормам технических условий.

4 ВЫВОДЫ

1. В результате скрининга из 5 изолятов рода Bacillus для обезвреживания кормов, загрязненных Т-2 токсином и афлатоксином В|, отобран изолят В. subtilis - 2006, обладающий выраженными антагонистическими свойствами к грибам рода Aspergillus flavus и Fusarium sporotrichiella - продуцентам афлатоксина Bi и Т-2 токсина.

2.Изолят В. subtilis - 2006 обладает сахаролитической, протеолитической, уреазной и каталазной активностью, не патогенен для животных.

3. На основе изолята В. subtilis - 2006 создан препарат «Микосубтил», который является малотоксичным для лабораторных (белые мыши, белые крысы) и сельскохозяйственных (свиньи) животных. Среднесмертельная доза «Микосубтила» из-за низкой токсичности для животных не установлена, что согласно ГОСТу 12.1.007-76 «Вредные вещества» позволяет отнести его к 4-му классу опасности - вещества малоопасные.

4. Внутрижелудочное введение «Микосубтила» белым крысам и подсвинкам не оказывает отрицательного влияния на общее состояние и клинический статус животных, препарат не обладает эмбриотоксическим и

тератогенным действиями, способствует повышению среднесуточного прироста массы тела животных на 30 сут до 163,0±2,34г.

5. Включение в рацион лабораторных (белые крысы) и сельскохозяйственных (овцы, свиньи) животных препарата «Микосубтил» (в оптимальной дозе 10,0 мл/кг корма при содержании в 1 мл не менее 2 млрд. м.к.) в течение 30 сут, при одновременном введении Т-2 и афлатоксина В|, способствует стабилизации гематологических, биохимических показателей и факторов неспецифической резистентности организма животных. В группах животных, получавших только микотоксины, регистрировалось снижение данных показателей.

6. Введение в рацион Т-2 и афлатоксина В, на фоне применения препарата «Микосубтил» сопровождается менее выраженнми гистологическими изменениями в органах и тканях организма, чем у контрольных животных, затравленных микотоксинами.

7. Мясо овец, опытных и контрольной групп исследованное сразу после убоя животных по органолептическим, бактериологическим и физико-химическим показателям соответствует требованиям ГОСТов для доброкачественного мяса. На 10 сут хранения мясо, полученное от овец, употреблявших корм, загрязненный Т-2 токсином и афлатоксином Вь в отличие от других групп животных, относится к категории «сомнительной» свежести.

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В качестве средства профилактики животных, от воздействия Т-2 токсина и афлатоксина на организм рекомендуется применять для обезвреживания кормов от микотоксинов препарат «Микосубтил» из расчета 10,0 мл/юг корма.

2. Основные положения диссертационной работы рекомендуется использовать на курсах по повышению квалификации в ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» и

учебном процессе в ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Иванов, E.H. Биологические методы обезвреживание кормов от микотоксинов / E.H. Иванов // Матер, науч.-практ. конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы ветеринарии». - Казань, 2007. - С. 44-46;

2. Иванов, E.H. Обезвреживающая способность Bacillus subtilis -2000 в отношении афлатоксина В: / E.H. Иванов, М.Я. Тремасов, J1.E. Матросова // Вестник Российской военно-медицинской академии. Медико-биологические проблемы токсикологии и радиологии. - С.-Петербург, 2008. - №3(23). - С. 194-195;

3. Иванов, E.H. Изучения антагонистических свойств штаммов на основе Bacillus subtilis в отношении плесневых грибов / E.H. Иванов // Матер, науч.-практ. конф.: Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики инфекционных болезней животных и птиц. - Екатеринбург, 2008. - С. 192194;

4. Иванов, E.H. Показатели неспецифической резистентности организма крыс при воздействии микотоксинов и профилактическом применении Bacillus subtilis / E.H. Иванов // Матер, науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов «Достижения молодых ученых - в производство, посвященная 100-летию со дня рождения профессора Х,Х. Абдуллина». - Казань, 2008. -С. 45-49;

5. Иванов, E.H. Сравнительное изучение биологических свойств микроорганизмов, используемых для детоксикации кормов от афлатоксина В] / E.H. Иванов // Всерос. науч.-практ. конф. «Научный потенциал -аграрному производству, посвящ. 450-летию вхождения Удмуртии в состав России 2008». - Ижевск, 2008. -Т.З. - С. 124-128;

6. Иванов, E.H. Гематологические показатели крыс при воздействии Т-2 токсина и афлатоксина на фоне применения В,subtilis / Е.Н Иванов //

«Актуальные вопросы аграрной науки и образования, посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА 2008». - Ульяновск, 2008. - С. 50-52;

7. Иванов, E.H. Использование микроорганизмов для детоксикации афлатоксина Bi / E.H. Иванов, JI.E. Матросова, A.B. Иванов // Современная микология в России. - Т.2. - М., 2008. - С. 225-226;

8. Иванов, E.H. Гематологические показатели крови и факторы неспецифической резистентности организма овец при воздействии микотоксинов и профилактическом применении препарата на основе Bacillus subtilis / E.H. Иванов, М.Я. Тремасов // Ветеринарный врач - 2009. - №1 -С.8-11;

9. Иванов, E.H. Биологическая оценка мяса овец, подвергшихся воздействию Т-2 и афлатоксина на фоне применения препарата на основе Bacillus subtilis / E.H. Иванов, JI.E. Матросова, М.Я. Тремасов // Междунар. науч.-практ. конф. «Современные средства и методы диагностики, профилактики и лечения инфекционных, протозойных и микотических болезней сельскохозяйственных и промысловых животных, рыб и пчел, посвященной 100-летию со дня рождения академика ВАСХНИЛ А. X. Саркисова». - М.; 2009.-С. 291-293;

10. Иванов, E.H. Препарат на основе Bacillus subtilis для профилактики Т-2 и афлатоксикоза животных / E.H. Иванов, М.Я. Тремасов, A.B. Иванов и др., // Труды междисциплинарного микологического форума. М., 2009. - С. 15-16;

11. Иванов, E.H. Биологический метод обезвреживания кормов от микотоксинов / A.A. Иванов, E.H. Иванов // Матер, второго съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России: Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии. - Казань, 2009. - С. 420-423;

Отпечатано в ООО «Печатный двор», г. Казань, ул. Журналиспюв, 1/16, оф.207

Тел: 272-74-59, 541-76-41, 541-76-51. Лицензия ПД№7-0215 от 01.11.2001 г. Выдана Поволжским межрегиональным территориальным управлением МПТР РФ. Подписано в печать 05.08.2009г. Усл. п.л 1,4 Заказ Ш К-6726. Тираж 100 экз. Формат 60x841/16. Бумага офсетная. Печать - ризография.

Актуальность темы. Корма растительного происхождения, контаминированные плесневыми грибами, представляют реальную опасность не только для здоровья сельскохозяйственных животных, но и для здоровья человека, потребителя продуктов животноводства. При контаминации кормов существует возможность накопления микотоксинов, вторичных метаболитов плесневых грибов, кроме того, угнетается полезная микрофлора самих растений (Г.П. Кононенко, 2003; А.В. Иванов, М.Я. Тремасов, К.Х. Папуниди и др., 2008). Наиболее часто корма загрязняются микотоксинами грибов рода Fusarium и Aspergillus (В.Г. Иванов, 1981; A.M. Смирнов, Г.П. Кононенко, Г.А. Таланов, 1999).

Растительные субстраты, обсемененные токсигенными грибами, не могут быть использованы в корм без соответствующей санитарной обработки, так как большие дозы микотоксинов у животных вызывают ярко выраженные признаки отравления, приводят часто к гибели. Микотоксины даже малых дозах вызывают значительные снижение продуктивности, прироста массы тела, ослабления резистентности организма, при этом создаются благоприятные условия для возникновения многих инфекционных болезней (М.Я. Тремасов, 2002, 2005; В.А. Антипов, 2005; В.И. Дорожкин, В.Г. Иванов, 2007).

В настоящее время разработаны физические, химические и биологические способы деконтаминации кормов токсигенными и патогенными грибами. Большинство физических и химических методов детоксикации дорогостоящие, требуют определенных производственных затрат, отрицательно влияют на показатели качества кормов и незначительно снижают количество микотоксинов (Д.В. Алеев, 2007; A.L Patey, 1987; Е Boutrif, 1998).

В ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" выделены изоляты микроорганизмов В. subtilis для обработки кормов, контаминированных микотоксинами. Однако оставались неизученными морфологические, физиолого-биохимические, патогенные свойства микроорганизма и обезвреживающее действие изолята В. subtilis - 2006 в отношении микотоксинов.

Цель и задачи исследований. Целью работы явились скрининг и изучение биологических свойств микроорганизмов рода Bacillus для разработки биологических средств обезвреживания кормов от микотоксинов, сравнительная оценка их эффективности при профилактике микотоксикозов животных.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

1. Изучить морфологические, культуральные, биохимические и патогенные свойства бактерий рода Bacillus и их антагонистическое действие по отношению Aspergillus flavus и Fusarium sporotrichiella;

2. Провести скрининг и дать оценку профилактической эффективности препарата, созданного на основе отобранного изолята В. subtilis при длительном поступлении Т-2 и афлатоксина Вь учитывая изменение клинических, гематологических и биохимических показателей и факторов неспецифической резистентности организма; •

3. Провести ветеринарно-санитарную оценку мяса, патологоанатомические и гистологические исследования органов и тканей животных получавших корм, обработанный препаратом на основе В. subtilis-2006;

4. Разработать способ профилактики микотоксикозов животных препаратом на основе В. subtilis в условиях животноводческих предприятий.

Научная новизна. Впервые экспериментально обосновано применение препарата «Микосубтил», разработанного на основе В. subtilis, для обезвреживания кормов от Т-2 токсина и афлатоксина Вь

Установлена антагонистическая активность изолятов В. subtilis в отношении грибов рода Aspergillus и Fusarium — продуцентов микотоксинов и их безвредность для животных. Проведен скрининг и дана оценка профилактической эффективности препарата, созданного на основе отобранного изолята В. subtilis при длительном поступлении Т-2 и афлатоксина Вь с учетом изменения клинических, гематологических и биохимических показателей и факторов неспецифической резистентности организма. Проведена ветеринарно-санитарная экспертиза мяса и изучена гистоструктура тканей внутренних органов животных после применения препарата «Микосубтил».

Практическая ценность работы. В качестве средств профилактики при воздействии Т-2 токсина и афлатоксина на организм животных рекомендуется применять препарат «Микосубтил» в концентрации 10,0 мл/кг корма с содержанием 2 млрд. микр. кл./мл.

По результатам проведенных исследований разработана «Инструкция по применению препарата «Микосубтил» для обезвреживания кормов от микотоксинов», утвержденная в установленном порядке.

Апробация материалов диссертации. Основные материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на научных сессиях ученого совета ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" по итогам НИР за 2006-2008 г.г., Международных и Всероссийских симпозиумах (Казань, 2006, 2007, 2008, 2009; Москва, 2008, 2009; Санкт-Петербург, 2008; Екатеринбург, 2008; Ижевск 2008; Ульяновск, 2008).

Публикации. По результатам выполненных исследований опубликовано 11 научных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в журнале «Ветеринарный врач» ( Казань, 2009), «Вестник Российской военно-медицинской академии» (Санкт-Петербург, 2008), Труды междисциплинарного микологического форума (2009).

Основные положения, выносимые на защиту:

- антагонистические свойства изолята В. subtilis - 2006 по отношению к токсигенным грибам рода Aspergillus и Fusarium.

- эффективность препарата на основе изолята В. subtilis — 2006 для обезвреживания кормов от микотоксинов;

- клинико-гематологические, биохимические показатели и факторы неспецифической резистентности животных при воздействии Т-2 токсина и афлатоксина на фоне применения препарата «Микосубтил»

Объем и структура работы. Материалы диссертации изложены на 158 страницах компьютерного текста и включают следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 34 таблицами и 15 рисунками. Список использованной литературы содержит 210 библиографических источников, в том числе 73 зарубежных авторов.

6. ВЫВОДЫ

1. В результате скрининга из 5 изолятов рода Bacillus для обезвреживания кормов, загрязненных Т-2 токсином и афлатоксином Вь отобран изолят В. subtilis - 2006, обладающий выраженными антагонистическими свойствами к грибам рода Aspergillus flavus и Fusarium sporotrichiella - продуцентам афлатоксина Bi и Т-2 токсина.

2.Изолят В. subtilis - 2006 обладает сахаролитической, протеолитической, уреазной и каталазной активностью, не патогенен для животных.

3. На основе изолята В. subtilis - 2006 создан препарат «Микосубтил», который является малотоксичным для лабораторных (белые мыши, белые крысы) и сельскохозяйственных (свиньи) животных. Среднесмертельная доза «Микосубтила» из-за низкой токсичности для животных не установлена, что согласно ГОСТу 12.1.007-76 «Вредные вещества» позволяет отнести его к 4-му классу опасности — вещества малоопасные.

4. Внутрижелудочное введение «Микосубтила» белым крысам и подсвинкам не оказывает отрицательного влияния на общее состояние и клинический статус животных, препарат не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действиями, способствует повышению среднесуточного прироста массы тела животных на 30 сут до 163,0±2,34г.

5. Включение в рацион лабораторных (белые крысы) и сельскохозяйственных (овцы, свиньи) животных препарата «Микосубтил» (в оптимальной дозе 10,0 мл/кг корма при содержании в 1 мл не менее 2 млрд. м.к.) в течение 30 сут, при одновременном введении Т-2 и афлатоксина Вь способствует стабилизации гематологических, биохимических показателей и факторов неспецифической резистентности организма животных. В группах животных, получавших только микотоксины, регистрировалось снижение данных показателей.

6. Введение в рацион Т-2 и афлатоксина Bi на фоне применения препарата «Микосубтил» сопровождается менее выраженнми гистологическими изменениями в органах и тканях организма, чем у контрольных животных, затравленных микотоксинами.

7. Мясо овец, опытных и контрольной групп исследованное сразу после убоя животных по органолептическим, бактериологическим и физико-химическим показателям соответствует требованиям ГОСТов для доброкачественного мяса. На 10 сут хранения мясо, полученное от овец, употреблявших корм, загрязненный Т-2 токсином и афлатоксином Вь в отличие от других групп животных, относится к категории «сомнительной» свежести.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В качестве средства профилактики животных, от воздействия Т-2 токсина и афлатоксина на организм рекомендуется применять для обезвреживания кормов от микотоксинов препарат «Микосубтил» из расчета 10,0 мл/кг корма.

2. Основные положения диссертационной работы рекомендуется использовать на курсах по повышению квалификации в ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» и учебном процессе в ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана».