Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Токсико-фармакологические свойства новых производных глицирризиновой кислоты

_На правах рукописи

Г. ъ Ом

КЛЗЕКИН Георгий Вячеславович

ТОКСИКО-ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ кислоты

16.00.04 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандида та биологических наук

Воронеж 20(10

Работа выполнена в Башкирском государственном аграрном уншзерсше-ге на кафедре внутренних незаразных болезней, клинической диагностики п фармакологии

Научный руководитель:

Доктор биологических наук, профессор Исмагилова А. Ф.

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук Беляев В.И.

Кандидат ветеринарных наук Василенко В.В.

Ведущий организации: Казанская государственная академия

ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана

Защита диссертации состоится « 4 » мая 2000 г. в 10 час. па заседании диссертационного совета Д 020.65.02 во Всероссийском научно-исследова-гельском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии (394087, г. Воронеж, уд. Ломоносова. 1 14-6).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Abi ореферат разослан 000 года.

Ученый секретарь диссертационного совета Аргунов М.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

ктуалыюсть проблемы:

Целью иммунофармаколоши является разработка препаратов, эффектно регулирующих иммунную систему организма. Этот интерес особенно >зрос в последние годы и связан с решением задач, выдвигаемых инфекцион->й патологией, онкологией, а также незаразными заболеваниями, в генезе ко-|рых важную роль играют нарушения иммунного статуса организма.

В прикладном аспекте это означает, что необходимо создавать препара-I, пригодные для иммунокоррекции организма. Кроме того, в настоящее вре-I стало очевидным, что многие препараты, относящиеся к различным фарма-шогическим группам, в терапевтических дозах оказывают неблагоприятное :йствие на иммунную систему оргайизМа, т.е. 'иммунотоксичность является ироко распространенным явлением.

Таким образом, потребность медицины и ветеринарии в иммунотропных ¡епаратах чрезвычайно высока. В настоящее время осуществляется широкий »иск лекарственных препаратов, оказывающих активизирующее воздействие I неспецифические и специфические защитные реакции организма.

Однако клиническое применение многих из созданных средств оказалось раниченным вследствие их слабой активности и наличия различных побоч-.¡х эффектов.

Одним из возможных путей преодоления указанных недостатков является рининг'овая работа, а также сочетание и различные комбинации антибиотиков 1 основе иммуномодуляторов.

Для повышения иммунного статуса организма перспективными соединении зарекомендовали себя производные тритерпенового гликозида - глицир-[зиновая кислота (ГК), являющаяся основным биологически активным ком-тентом экстракта корней солодки голой и уральской. Интерес к производ-

ным ГК вызван её высокой и разнообразной биологической активностью и низкой токсичностью.

Все сказанное выше и определяет актуальность проблемы, заключающейся I поиске новых препаратов, стимулирующих иммунную деятельность. Цель исследований:

Целью настоящей работы явилось изыскание соединений и комплексов эффективно регулирующих иммунную систему организма.

Для достижения поставленной цели сформулированы задачи по исследованию новых гликопептидов и комплексов глицирризиновой кислоты.

На основе скрининга и сравнительного анализа на первичный иммунный ответ среди новых производных ГК было выбрано наиболее активное комплексное соединение глицирризиновой кислоты с левомицетином (ГК+Л). В связи с этим, появилась необходимость: а определить острую токсичность;

а выявить некоторые токсико-фармакологические свойства ГК+Л; ■ а раскрыть некоторые механизмы иммунотропного действия ГК+Л; я разработать схему применения изучаемого комплексного соединения; а изучить влияние ГК+Л на организм телят и цыплят. Научная новизна: Впервые проведен скрининг 10 новых соединений гликопептидов глицирризиновой кислоты и их комплексов. Изучена связь химического строения и иммунотропной активности. Установлено, что гликопептиды и комплексы глицирризиновой кислоты являются малотоксичными соединениями. Изучен характер влияния ГК+Л на гуморальный и клеточный иммунитет, резистентность лабораторных животных к инфекции, различные модели воспаления, гепатозащитную и антиоксидантную активность, регенеративные и репаративные процессы, а также изучено иммуностимулирующее влияние ГК+Л на организм телят и цыплят.

Критерием новизны является также вся совокупность данных, получен-,1Х в результате проведенных исследований.

Научно - практическая ценность работы определяется эффективно-ъю ГК+Л при экспериментальных иммунодепрессивных состояниях, что по-юляет предложить комплексное соединение для коррекции аналогичных наущений иммунитета у сельскохозяйственных животных.

Комплексное соединение ГК+Л при введении в желудок, вместе с кор-эм телятам в возрасте 5-9 дней стимулирует образование Т и В - лимфоци->в, повышает гуморальные факторы неспецифической защиты, выживаемость, леныиает сроки болезни.

При дачи ГК+Л цыплята«! и курам отмечается стимуляция образования - лимфоцитов, повышается рост и развитие, увеличивается прирост их живой зссы тела. Эти данные позволяют рекомендовать в практику ветеринарии £+Л в качестве иммуномодулятора для телят и кур.

Внедрение

Опытно - промышленные испытания, проведенные на птицефабрике Уфимская» и совхозе «Уфимский» подтвердили иммуностимулирующий эф-:кт комплексного соединения ГК+Л.

Апробация работы:

Результаты диссертационной работы обсуждены на:

1. Научно-практической конференции молодых ученых БГАУ.

Уфа, 1999 г.

2. Международной конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии». Санкт - Петербург, 1999 г.

3. Международной конференции «Экологические аспекты эп;поот логии и патологии животных». Воронеж, 1999 г.

4. На У1-УИ Национальных конгрессах «Человек и лекарство». М сква, 1999-2000 гг.

5. Всероссийской научно - практической конференции «Лаборато ное дело: организация и методы исследований». Пенза, 1999 г.

6. Первой международной конференции «Здоровье, разведение и з щита мелких домашних животных». Уфа, 2000 г.

Настоящая работа проведена в соответствии с заданием 01 ГНТП Роса «Создание новых лекарственных средств методами химического и биологии ского синтеза», а также 0.1.90.00011555 и 0.1.90.40.009075 Российской акад мии наук «Синтез веществ, обладающих практически важной биологическс активностью» и в соответствии с тематикой научных исследований универс] тета (номер госрегистрации 01.86.0 - 07.68..78).

Объём и структура работы. Диссертация состоит из введения, 8 гла выводов, списка литературы. Работа изложена на 112 страницах, содержит рисунков, 26 таблиц.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 научнь;

работ.

На защиту выносятся следующие основные положения:

• О взаимосвязи и зависимости химического строения и иммуномодул! рующей активности новых гликопептидов глицирризиновой кислоты.

• О фаркакологическом спектре комплексного соединения ГК+Л.

• О степени безвредности нового комплекса ГК+Л.

• О возможности использования ГК+Л для повышения резистентности продуктивности животных и птиц.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В основу диссертации положены материалы результатов исследований, проведенных на 1460 неинбредных, половозрелых мышах обоего пола массой 18-20 г, 100 беспородных половозрелых крысах массой 180-220 г из питомника Чишминский, а также на 45 телятах черно-пестрой породы (совхоз «Уфимский»), 200 курах и цыплятах кросса «Родонит» (птицефабрика «Уфимская»). Опытные и контрольные лабораторные животное содержались в одинаковых условиях вивария - пластиковых клетках по 10 особей при 18-20°С, на стандартном пищевом рационе со свободным доступом к воде.

Проведен скрининг 10 соединений гликопептидов глицирризиновой кислоты и их комплексов. Изучена связь химического строения и иммунотропной активности.

Растворы изучаемых соединений на физиологическом растворе вводили животным согласно выбранным дозам и схемам в зависимости от цели исследования.

В качестве тимусзависимого антигена при изучении гуморального и клеточного иммунного ответа использовали эритроциты барана. Стерильно забирали кровь барана в раствор Олевера и до использования хранили её не более недели при температуре 4° С.

Получение клеточных суспензий

Суспензию клеток селезенки получали по общепринятой методике (Р.В. Петров, Ю.М. Зарецкая 1965). Орган целиком взвешивали на торсионных весах ВТ-500. Затем помещали его в микробиологическую пробирку, предварительно заполнив ее средой Хенкса (из расчета ра 10 мг ткани 1 мл среды). Полученную взвесь помещали в стеклянный гомогенизатор с неплотно прилегающим пестиком ц 3-4 тракциями выдавливали массу, которую затем пропускали через 4-х слойный капроновый фильтр. Полученную взвесь использовали для постановки реакций.

Выделение лимфоцитов из крови на градиентах плотности

При центрифугировании разбавленной крови на градиенте плотности, клетки крови из-за их различной плотности под действием центробежного ускорения движутся с различной скоростью, при этом, происходит их разделение: эритроциты оседают на дно пробирки, гранулоциты - над эритроцитами, а лимфоциты, как менее плотные клетки остаются на границе раздела (Кондра-хин В.П. 1985).

Изучение острой токсичности нрвыу производных глицирризиновой кислоты (ГК) проводили общепринятыми методами (Елизарова О.Н. 1971, Саноц-кий И.В. 1970). Перед началом опытов животных взвешивали и количество применяемых новых производных ГК рассчитывали для каждого вида животных индивидуально в мг на 1 кг массы животных. На каждую испытываемую дозу препарата брали не менее шести животных, подобранных по принципу аналогов. Исследуемые соединения применяли в виде раствора перорально при помощи специальной поилки. После введения соединений за опытными животными вели наблюдения в течение 7-10 дней с регистрацией времени наступления токсикоза и гибели.

На основании количества погибших животных методом интегрирования по Беренсу (1929) устанавливали: абсолютно смертельную дозу (1ЛЭюо) и максимально переносимую дозу (ЬОо). Значения ЬБ,6 и ЬОз4, найденные по характеристической кривой, построенной на основании интегрированных данных, использовали для определения коэффициентов вариабельности смертельных доз.

Дозу, вызывающую гибель половины животных 1ЛЭ50, рассчитывали по формуле Кербера (1931), среднюю ошибку ЫЭ^о определяли по формуле Гаддэ-ма (Беленький М.П. 1963).

Количество антителообразующих клеток (АОК) определяли с помощью метода локального гемолиза в жидкой фазе, предложенного Jerne и Nordin (1963) в модификации Cunningham (1965).

Из навески селезенки, используя гомогенизатор и среду 199, получали взвесь клеток. Полученную взвесь спленоцитов смешивали в равных объемах (по 0,1 мл) с 10% взвесью эритроцитов барана и комплементом. Сухой комплемент предварительно разводили в 5 мл среды 199. В работе использовали те же эритроциты, которыми проводилась иммунизация животных.

Специальные камеры, предварив, ¿ьно изготовленные из предметных и покровных стекол, заполняли смесью спленоцитов, эритроцитов барана, комплемента. Камеры герметизировали парафином, укладывали в чашки Петри, на дне которых находилась влажная фильтровальная бумага, и помещали в термостат при t = 37,0° С на 1 час. Во время инкубации секретируемые антитела фик-:ировались на эритроцитах барана, вызывая в присутствии комплемента иммунный гемолиз.

Таким образом, вокруг клеток, образующих антитела, возникали про-¡рачные зоны гемолиза, подсчет которьпс йроводйли с помощью лупы, дающей итикратное увеличение. Для оценки иммунного ответа проводили подсчет ко-шчества АОК в селезенке на 10б клеток и на весь орган.

Воздействие исследуемых соединений на функциональную способность Т - эффекторов изучали в реакции гиперчувствительности замедленного типа РГЗТ), спровоцированной динитрофторбензолом ( J. Knop et al, 1982), раство-1енным в ацетоне. При постановке реакции сенсибилизацию мышей осуществ-яли нанесением 1 капли 1% раствора динитрофторбензола на правый бок. Че-ез 10 суток после сенсибилизации животные получали разрешающую дозу -о 1 капле 0,1% - ного раствора динитрофторбензола на каждую сторону право-э уха.

Противовоспалительная активность была изучена на общепринятых моделях воспаления, вызванных формалином, каррагенином, лидокаином и яичным белком (Тринус Ф. П., Мохорт Н. А. 1975).

«Гистаминовые» и «серотониновые» язвы вызывали путём однократного внутрибрюшинного введения свежеприготовленных растворов гистамина в дозе 30 мг/кг, серотонина 0,1% в дозе 10,0 мг/кг (Аничков С.В., Заводская И.С. 1965). «Аспириновые» язвы вызывали путём двукратного введения в желудок через зонд крысам ацетилсалициловой кислоты в дозе 150 мг/кг.

Для воспроизведения лоскутной раны на боковой поверхности тела крысы удаляли шёрстный покров и участок кожи площадью 10x10 мм2. Для воспроизведения ожогов пользовались кипящей водой - время экспозиции 10 секунд, концентрированной соляной кислотой, которую по каплям втирали на выстриженный участок кожи. Спустя 5, 10, 15, 20 дней рассчитывали индекс заживления раны (ожога) по следующей формуле:

изр= ^хз,14

4

Изучение гепатопротекторного действия

Белым мышам 20,0 - 28,0 гр. эщгерадьно или парентерально вводили исследуемые соединения, а затем наркотизировали. На высоте действия исследуемых веществ животным делали бескровный разрез передней брюшной стенки живота с открытием доступа к печени. Сбор желчи вели через 1, 2, 3 часа. Количество желчи выражали в мг/мин.

Тестирование естественной резистентности телят проводили согласно методическим рекомендациям Емельяненко П.А. (1980).

Статистическую оценку полученных результатов производили определяя среднюю арифметическую (М) и средцеквадратическую ошибку (±м). Степень достоверности различия между двумя сравниваемыми рядами вариант (Р) выявляли с помощью коэфициента (Т) Стъюдента (Стрелков Р.Б. 1986).

3. СИНТЕЗ И ИССЛЕДОВАНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ

3.1. Разработан способ синтеза комплексного соединения 0-глицирризиновой кислоты с левомицетином (ГК+Л). К раствору 1,64 гр. [3-глицирризиновой кислоты (2 ммоль) прибавили 0,64 гр. ( 2 ммоль) левомицети-на и перемешивали при 20-22° С до получения прозрачного раствора (1 час). Раствор упарили при комнатной температуре и высушили до постоянного веса. Выход 1,7 гр. Чистота и строение доказаны методом ТСХ, элементным анализом , ИК, УФ, ЯМР спектрами.

3.2. Острая токсичность производных и комплексов глицирризиновой кислоты. Острая токсичность вновь синтезированных десяти соединений производных глицирризиновой кислоты (ГК) определялось на белых беспородных мышах обоего пола массой 18,0-20,0 гр. при введении в желудок определенной дозы.

Наблюдения за животными, которым вводились изучаемые соединения, проводили в течение 10-ти дней. Параметры острой токсичности вычислялись по методу Кербера. Острая токсичность изучаемых соединений колебалась в пределах от 400,0 мг/кг до 5000,0 мг/кг (таблица 1).

Изученные соединения относятся к'4-му классу мало опасных веществ (Медведь Л.И. 1978).

3.3. Острая токсичность исследуемого комплексного соединения ГК+Л.

Комплексное соединение ГК+Л вводилось в виде водного раствора в следующих дозах - от 100 мг/кг до 10000 мг/кг.

В дозах 2000—2500 мг/кг у мышей отмечалось незначительное угнетение, мыши забивались в угол, переставали двигаться, как бы «застывали» на месте. Через 2-3 часа после введения комплексного соединения ГК+Л животные приходили в нормальное состояние.

При введении внутрь белым мыЩаМ ГК+Л'в дозах 2500-7500 мг/кг признаки отравления проявлялись через 30-40 минут. Отмечалась повышенная

рефлекторная возбудимость, животные бегали по клетке. В течение судорожного периода погибало большинство мышей. Перенесшие судороги животные, как правило, выживали и в дальнейшем не погибали. Судорожные периоды чередовались с периодами покоя.

Через 5-10 минут после введения ГК+Л в желудок в дозе 10000 мг/кг животные теряли двигательную активность, а затем спустя 1-2 минуты начинались судороги. В последующем животные принимали боковое положение, часть которых, не выходя из этого состояния, погибала от остановки дыхания.

Среднесмертельная доза комплексного соединения ГК+Л составила: 5000 мг ± 2,32 мг/кг.

Таблица 1.

Острая токсичность новых гликопептндов и комплексов глицирризиновой кислоты

№ п\п Лабораторный шифр Производные ГК, содержащие фрагменты АК н эфиров LDso мг\кг

1. №413 D-GLu (ОМе)2 1050,0 ±43,55

2. № 128 L-Phe (ОМе) 400,0 ±61,30

3. № 196 L- Ala (ОМе) 950,0 ± 50,00

4. №187 L-Leu (OEt) t « 634,0 ± 55,00

5. 8-64 L-Phe (OET) 1300,0 ±91,90

6. ГК+АС P ГК+ацет. кислота 1134,0 ±20,40

7. 8-71 L-Leu (OEt) 734,0 ±61,30

8. ГК+Лев В ГК+ левомицетин 5000,0 ± 0,76

9. ГК+Син P ГК+синтомицин 3350,0 ±43,36

10. ГК+Амп P ГК+ ампиок 2950,0 ±241,40

4. ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНОТРОПНОЙ АКТИВНОСТИ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ кислоты

4.1. Влияние на гуморальный иммунитет

4.1.1. Влиние на резистентность к инфекции ,

Для создания экспериментальных инфекций у лабораторных животных были использованы патогенные микроорганизмы - золотистый стафилококк, кишечная палочка, протей, синегнойная палочка. Результатом проведенных исследований приведены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, при стафилококковой инфекции на 10 день после заражения наибольшее число выживших животных было отмечено в группе получавших ГК+Л в дозе 50 мг/кг (9 животных из 10), тогда как в группе животных получавших только ГК количество выживших животных составило 1 из 10, а в группе животных получавших только левомицетин - 3 из 10.

Средняя продолжительность жизни в группе животных получавших ГК+Л в дозе 50 мг/кг была значительно выше, чем в других группах.

Наибольшее количество выживших животных при инфекции вызванной синегнонной палочкой было отмечено в группах, где вводили ГК+Л в дозах 50 и 100 мг/кг, тогда как количество выживших животных в группе леченных ле-вомицетином составило 2 из 10, а в группе леченных только ГК погибло 9 и выжило только 1 животное.

На 10 день после заражения протеем, в группе животных получавших "К+Л в дозе 50 мг/кг выжило 80%, а групце леченных только левомицетином -10%, а леченных ГК - 20% (таблица 3). При экспериментальном заражении юзбудителями кишечной инфекции у животных, получавших ГК+Л в дозе 50 -1г/кг была не только самая высокая продолжительность жизни, но и количество вшивших животных в 2 и 3 раза больше, чем леченных только левомицети-юм.

Таким образом, комплексное соединение ГК+Л в дозе 50 мг/кг повышает ффективность лечение экспериментальных инфекций значительно выше, чем ругие комплексы ГК и антибиотики. Высокая эффективность лечения ГК+Л

экспериментальных инфекций у мышей видимо связана со стимуляцией клеточного и гуморального звеньев иммунитета.

Таблица 2.

Влияние некоторых производных ГК и антибиотиков на эффективность лечения экспериментальных ^ифекцни у животных, вызванным золотистым стафилококком и синегнойной палочкой

№ Наименование Доза Кол-во Всего выжило животных Средняя продол-

гр. соединений иг/кг животных 3 день | 7 день 10 день жительность жизни, дни

1 - серия заражение золотистым стафилококком

1 гк + л 50 10 10 | 9 9 9,6±0,1*

2 гк + с 35 10 8 6 5 7,5±0,4

3 ГК + А 30 10 8 6 6 6,8±0,4

4 ГК 50 10 8 2 1 4,8±0,8

5 Левомицетин 50 10 ,< 9 .4 3 6,1±0,7

6 Синтомицин 50 10 7 4 3 5,7±0,7

7 Ампиокс 30 10 4 3 3 4,0±0,4

8 Контроль - 10 7 - - 2,7±0,8

2- серия заражение синегнойной палочкой

1 ГК +Л 50 10 9 8 8 8,7±0,2*

2 ГК + С 35 10 8 7 5 7,3±0,4

3 ГК + А 30 10 8 6 5 6,7±0,5

4 ГК 50 10 6 1 1 2,8±0,6

5 Левомицетин 50 10 8 3 2 5,4±0,2

6 Синтомицин 50 10 7 4 2 5,1±0,6

7 Ампиокс 30 10 4 2 2 3,3±0,4

8 Контроль 10 3 1,4±0,5

*-р<0,05

Таблица 3.

Влияние некоторых производных ГК и антибиотиков на эффективность лечения экспериментальной инфекции у животных, вызванной протеей и кишечной палочкой

.V» Наименование Доза Кол-во Всего выжило животных Средняя продолжи-

гр. соединений мг/кг животных ■ -I ' 3 день 7 день 10 день тельность жизни, дни

- серия заражение протеем

1 2 3 \ 5 5 7 5 ГК +Л гк + с ГК +А ГК Левомицетин Синтомицин Ампиокс Контроль 50 35 50 50 50 50 50 10 10 10 10 10 10 10 10 9 8 8 7 9 , 6 , Г 6 6 8 5 4 3 5 ,3 2 8 2 3 2 4 2 2 7,9±0,2* 6,0±0,8 5,0±0,5 5,3±0,5 6,5±0,5 4,3±0,6 4,2±0,6 3,2±0,7

4 - серия заражение кишечной палочкой

> 1 ГК + Л ГК + С ГК + А ГК Левомицетин Синтомицин Ампиокс Контроль 50 50 100 50 50 50 50 оооооооо 9 7 6 5 г1 Г 9 7 4 7 8 6 3 4 4 3 3 1 7 4 2 2 3 3 3 8,0 ± 0,3* 6,5 ± 0,5* 4,0 ± 0,4 4,3 ± 0,3 5,2 ± 0,5 5,7 ±0,7 4,0 ±0,4 3,0 ±0,5

• -Р< 0,05-0,01

4.1.2. Влияние комплексных соединений глицирризиновой кислоты на образование антителообразующих клеток.

Регуляция иммунного ответа, в первую очередь, подразумевает действие различных модулирующих факторов на дифференцировку В-лимфоцитов, являющихся продуцентами специфических антител (Петров Р.В. 1982).

Ответственным этапом скрининга иммуномодуляторов является изучение их эффективности на модели гуморального иммунного ответа (Ковалев И.Е. 1969г., Spreafico 1985).

Известным и традиционным методом количественной оценки изменения активности В - звена иммунитета является метод определения числа антитело-образующих клеток (АОК) в селезенке по Jerne N.K., Nordin Е.А. (1963) который в 1965 году Cunningham (1968) назвал методом свободной суспензии.

Изучение возможности модуляции антителогенеза при 5-кратном введении производных ГК производилось на белых беспородных мышах-самцах массой 18-20 гр. Животных иммунизировали внутрибрюшинно в оптимальной дозе - 2x108 эритроцитов барана. Результаты проведенных исследований представлены на таблицах 4 и 5. Все вещества статистически значимо стимулировали иммунный ответ. Гликопептиды, содержащие фрагменты свободных аминокислот и эфиров D-GLu (ОМе)г, L-Phe (ОМе), вызывали иммунодепрессию. Соединения L- Ala (ОМе), L-Leu (OEt), D-, L-Phe (OEt) не отвечают на иммунный ответ.

Таблица 4

Влияние некоторых производных глицирризиновон кислоты на образова-

ние АОК

Название соединений Доза, мг/кг Количество животных Число АОК

D-GLu (ОМе)2 2,0 10 155,0±15,0

L-Phe (ОМе) 2,0 10 126,5±10,0

L-Leu (OEt) 5,0 10 231,3±21,0

D-, L-Phe (OEt) 2,0 10 237,4±21,5

Контроль - 10 235,0±16,0

Таблица 5

Влияние новых комплексных соединений глицирризиновон кислоты на гуморальное звено иммунитета у мышей

Название Доза Количество жи- Число АОК

соединения мг/кг вотных

ГК + левомицетин 25 20 592,5±40,0*

ГК + левомицетин 50 20 608,0+36,0*

ГК + левомицетин 100 20 605,3±52,5*

Левомицетин 50 20 140,0±10,0

ГК+синтомицин 35 20 539,4±49,0

ГК+синтомицин 50 20 Г 1 546,3±30,0

ГК+синтомицин 100 20 529,5±50,0

Синтомицин 50 20 210,0±21,0

ГК+Ампиокс 30 20 348,5±30,0

ГК+Ампиокс 50 20 375,5±35,5

ГК+Ампиокс 100 20 382,5±38,0

Ампиокс 30 20 300,5+20,9

Глицирризиновая кислота (ГК) 50 20 528,6 ± 27,0

Контроль - 20 235,0+16,0

□ - Р< 0,05 - 0,002

Как видно из таблицы 5. ГК+Л в дозе составляющей 1/100 от ЬБ3о более значительно стимулировал образование АОК, чем ГК.

4.2. Влияние на клеточное звено иммунитета вновь синтезированных комплексных соединений ГК изучалось на модели реакции гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ) к динитрофторбензолу с помощью капельной пробы Ведрова - Долгова и к эритроцитам барана.

Влияние комплексного соединения ГК+Л сравнивали с действием ГК. Изучаемые соединения вводились в желудок мышам в дозах составляющих 1/100 от ЬС5о с первого дня сенсибилизации в течение 5-ти суток.

Результаты проведенных исследований представлены в таблице 6.

Таблица 6.

Влияние производных глицирризиновон кислоты на клеточное звено иммунитета (в реакции гиперчувствительности замедленного типа)

Название соединения Доза мг/кг Кол-во животных Опытная лапа Контрольная лапа

ГК +■ левомицетин 50 10 4,62 ± 0,11 1,75 ±0,11

Левомицетин 50 10 4,36 ± 0,32 1,74 ±0,21

Глицирризиновая кислота (ГК) 50 10 > г 2,14 ±0,01 1,75 ±0,23

Контроль - 10 2,49 ± 0,02 1,75 ±0,29

Из таблицы 6 видно, что комплексное соединение ГК+Л в дозе 50 мг/кг оказывало стимулирующее действие на РГЗТ, тогда как ГК вызывало супрессию РГЗТ. Комплексное соединение ГК+Л показало эффект стимуляции кпе-точно-опосредованной реакции в тесте РГЗТ (в 1,8 раза по сравнению с контрольным).

Таким образом, новый синтезируемый комплекс ГК+Л представляет интерес для медицины и ветеринарии в качестве иммуномодуляторов. Среди производных ГК обнаружены вещества стимулирующие первичный иммунный ответ (выработка антителообразующих клеток) и клеточный иммунитет (тест реакции гиперчувствительности замедленного типа).

5. ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЕ ДЕЙСТВИЕ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ГК

Как показали исследования, на модели воспалений вызванного формалином, каррагенином, лидокаином и яичном белком комплексное соединение ГК+Л в дозе 50 мг/кг достоверно задерживает развитие отека по сравнению с контролем. Исследуемые соединения сравнивали с известным противовоспалительным препаратом ортофеном (вольтареном).

Так ГК+Л в дозе 50 мг/кг достоверно угнетал каррагениновое воспаление на 26,67% (р<0,05), лидокаиновое воспаление на 33,02% (р<0,05), белковое - на 36,48% (р<0,02), по сравнению с контрольйыми животными.

Противовоспалительное действие ГК+Л на различных моделях воспаления было аналогично действию ортофена, а при белковом, формалиновом воспалении противовоспалительное действие ГК+Л даже превышало действие ортофена (Табл. 7).

Таким образом новое комплексное соединение ГК+Л обладает выраженным противовоспалительным действием в дозе 50 мг/кг.

6. ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЕ И АНТИОКСИДАНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ ПРОИЗ-

ВОДНЫХ ГЛИЦИРРЙЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ Исследования проводили на белых беспородных мышах - самцах массой 25-28 гр. Экспериментальный гепатит у животных вызывали подкожным введением 50% маслянного раствора С-СЬ4 в объёме 0,4 мл на 100 гр. массой в течении 4 -х дней. Изучаемые соединения с лечебно-профилактической целью вводили в желудок в дозах 50 мг/кг в течении 7-ми дней. Влияние соединений на функциональное состояние печени оценивали по желчесекреторной и желчевыделительной функции печени. Секрецию желчи выражали в мг/мин на 100 гр. массы тела за каждый час и общему количеству желчи за 4 часа наблюдения. В качестве препарата ср&внёния использовали карсил в дозе 50 мг/кг. Об антиоксидантной активности судили по конечному продукту перекисного окисления липидов (ПОЛ) - малоновому диальдегиду (МДА) по известной методике (Стальная И. Д., Гарешвшш Т.Г. 1977).

Таблица 7

Противовоспалительная активность комплексного соединения ГК+Л на различных моделях воспаления

№ п/п Название соединений Доза мг/кг Кол-во жив-ных Процент увеличения отёка лап мышей Р<

Белковое восп-ние Формалинов. восп-ние Карраген, восп-ние Лндокаин. восп-ние

1. ГК+Л 50 6 41,6 ±4,1 36,3 ±3,0 38,20 ±3,8 36,5 ±3,6 0,05

2. ГК 50 6 45,2 ±2,1 38,5 ±3,8 39,30 ±5,0 38,5 ±3,8 0,05

3... Левоми-цетин 50 6 55,2 ±3,8 40,6 ±3,9 38,72 ±3,7 42,0 ± 0,4 0,02

4." Ортофен 8 б 40,9 ±2,0 33,9 ±3,3 36,40± 1,Г6 33,1 ±2,5 0,05

5.. Контроль - 6 65,5 ±6,5 54,5 ±4,5 52,10± 4,48 54,5 ± 5,0 -

го

о

О поражении печени судили по увеличению МДА, нарушению желчеоб-разовательной функции печени. Результаты исследований представлены в таблице 8.

Таблица 8.

Общее количество выделившейся желчи в мг\10 г. массы животного (экспериментальный гепатит)

п\п Название соединений Доза мг/кг Кол-во жив. Количество желчи, мг Среднее кол-во желчи (в мг на Югр/мнн) МДА Ммоль/г

через 1 час через 2,час4 через Зчаса

1 ГКч-Л 50 6 61,53 ±2,72 48,00 ±1,87 60,16 ±2.21 1,41 0,115 ±0,01*

1 ГК 50 6 42,50 ±1,53 33,50 ±0,68 38,83 ± 1,36 1,14 0,118 ±0,06*

3 Левомнце-тин 50 6 45,34 «1,19 39,17 ±2,21 42,00 ±1,19 1,05 0,124 ±0,01*

4 Карсил 50 6 61,67 ±¡,19 50,83 ±1.87 59,83 ± 0,68 1,43 0,085 I 0,02*

5 | Контроль I 6 27,16 ±1,20 22.66 ±1,36 26,16 ±2,55 0,76 0,179 ±0,03

* - Р< 0,05-0,01

Как видно из таблицы 8 комплексное соединение ГК+Л в дозе 50 мг/кг усиливало секрецию желчи гепатоцитами подобно карсилу в течении 4-х часов, т.е. во все сроки наблюдения, также увеличивало желчеобразование (общее количество желчи) по сравнению с контролем (С-СЦ). Тогда как сама ГК оказывала меньшую секрецию желчи и желчеобразования по сравнению с карсилом. При этом более выраженный эффект наблюдался при введении животным комплексного соединения ГК+Л в дозе 50 мг/кг (р<0,05).

Таким образом проведенные исследования показали, что при С-СЦ- гепатите ГК+Л наряду с противовоспалительной и противоязвенной активностью обладает выраженным гепатозгчцитным и антиоксидантным действием, выраженном в ингибировании ПОЛ. При использовании ГК+Л в дозе 50 мг/кг на-

блюдается увеличение интенсивности секреции желчи аналогично карсилу, что приводит к уменьшению проявлений интоксикации.

7. ВЛИЯНИЕ ГК+Л НА РЕГЕНЕРАТИВНЫЕ И РЕПАРАТИВНЫЕ ПРОЦЕССЫ

Язвы у крыс вызывали введением ацетилсалициловой кислоты, гистами-на. Опыты выполнены на 60 белых беспородных крысах, массой 180-200 гр. В качестве препаратов сравнения использовались ГК, левомицетин, а также известное применяемое в медицине противоязвенное средство - карбеноксолон.

Все соединения в этих сериях опытов вводили животным внутрижелу-дочно в дозе 50 мг/кг, а карбеноксолон в дозе 100 мг/кг (ЕД50). Результаты проведенного исследования представлены в таблице 9.

Таблица 9.

Влияние ГК+Л на СОЖ, измененную ацетилсалициловой кислотой и гис-

тамином при лечебном введении

№ п/п Наименование Количест- Доза мг/кг Среднее кол-во Индекс Проти-

соединений во деструкции Изъязв- воязвен-

Животных СОЖ ления ная активность

1 - серия аспириновая язва

1 ГК+Л 6 50 3,16 ±0,34 3,16 1,95

2 ГК 6 50 3,83 ± 0,5 3,83 1,61

3 Левомицетин 6 50 5,50 ±0,51 5,50 1,12

4 Карбеноксолон 6 100 4,83 ± 0,34 4,83 1,27

5 Контроль 6 - 6,16 ±0,34 6,16 -

2 - серия гистаминовая язва

1 ГК+Л 6 50 3,6 ±0,35 3,6 3,34*

2 ГК 6 50 5,5 ±0,4 5,5 2,18*

3 Левомицетин 6 50 9,2 ± 0,5 9,2 1,30*

4 Карбеноксолон 6 100 3,7 ±0,1 3,7 3,24*

5 Контроль 6 - }2,0 ± 1,2 12,0 -

Из таблицы 9 видно, что под влиянием комплексного соединения происходит уменьшение количества деструкции, по сравнению с контрольной группой (Р<0,01), а также в сравнении с карбеноксолоном (Р<0,05) и глицирризи-новой кислотой.

8. ВЛИЯНИЕ ГК+Л НА ОРГАНИЗМ ЖИВОТНЫХ И ПТИЦ.

Важной задачей работников сельского хозяйства является увеличение поголовья животных и их продуктивности. Большой экономический ущерб животноводству наносят незаразные заболевания молодняка, особенно диспепсия новорожденных.

Дефицит естественной резистентности и иммунологической реактивности, обусловленной недостаточным развитием и ослаблением функциональной активности органов и тканей, формирующих защитные системы, является одной из главных причин распространения болезней молодняка. По данным Денисенко В.П. (1999) 90% новорожденных телят находятся в состоянии иммунодефицита. Заболеваемость приплода, полученного от коров с признаками иммунодефицита, достигает 100%, а отход- 33% (Петров Ю.Ф., Иванов В.И. 1994).

У телят больных диспепсией измеряли клинические показатели: температуру тела, пульс и количество дыхательных движений. Кровь для исследований брали в !-ый день наблюдения. У подопытных животных отмечали следующие симптомы заболеваний: учащенная дефекация с выделением разжи-

I 1

женного кала жидкой консистенции желто-оранжевого цвета. Температура тела находилась в пределах нормы. У некоторых животных отмечались исхудание и незначительная взъерошенность шерстного покрова. Аппетит у всех животных сохранялся.

При исследовании сердечно-сосудистой системы были обнаружены следующие признаки: пульс нитевидный, учащенный, тоны сердца глухие. Дыхание больных телят было в пределах физиологических колебаний. Видимые слизистые оболочки имели бледно-розовый цвет, иногда отмечали анемичность.

Данные отражающие общие защитные механизмы телят больных диспепсией приведены в таблице 10.

Таблица 10.

Показатели естественной резистентности телят больных диспепсией в совхозе «Уфимский»

№ п/п Показатели Здоровые жииотные Больные животные

1. Процент фагоцитоза, % 64,00±2,64 62,3±4,2'

2. Фагоцитарный индекс 1,13±0,13 0,9±0,Г

3. Индекс завершенности фагоцитоза 0,41 ±0,02 0,35±0,Г

4. Лизоцим, ед./мл 315,18±19,57 257,3±19,5*

5. Гемолитический комплемент, ед./мл ' 204,00±10,00 180,10,5*

6. Пропердин, ед. 5,78±0,22 5,35±0,48'

7. Бактерицидная активность, % 39,76±3,59 37,56±0,28\

*-р<0,05

Из таблицы 10 видно, что у больных диспепсией телят в сыворотке крови снижена концентрация лизоцима, комплемента, бактерицидной активности, в то время как содержание пропердина % сыворотке крови больных телят было близко к пределам физиологической нормы здоровых телят (по Емельяненко П.А. 1980).

Захватывающая способность фагоцитов была незначительно снижена, тогда как переваривающая способность в 1,5 раза снижалась. Анализируя табличные данные можно отметить, что диспепсия новорожденных телят сопровождается супрессией системных защитных механизмов. Она характеризуется снижением уровня неспецифических гуморальных факторов, незавершенным фа-

гоцитозом, угнетением В- лимфоцитов. Снижение концентрации

неспецифических гуморальных факторов в сыворотке крови вызывает ослабление её бактерицидных свойств. При незавершенном фагоцитозе не происходит дезинтеграции бактерий, что приводит к генерализации болезни. Уменьшение относительного содержания Т и В лимфоцитов приводит к ослаблению клеточного и гуморального иммунитета, который по мнению отечественных ученых играет ведущую роль в подавление различных бактериальных и вирусных инфекций. '

Ослабление защитных механизмов у больных телят осложняет течение болезни условно-патогенными микроорганизмами. Патогенез супрессии системных защитных механизмов вероятно связан с интоксикацией организма продуктами воспаления и токсинами микроорганизмов.

В наших исследованиях было изучено влияние различных доз исследуемого комплексного соединения ГК+Л на показатели естественной резистентности телят, больных диспепсией.

Опыты по изучению влияния ГК+Л на организм больных телят были проведены на 6 группах животных черно-пестрой породы 5-9 дневного возраста.

Животным первой группы задавали комплексное соединение ГК+Л внутрь за 1 час до кормления в дозе 25 мг/кг, животным 2 и 3 группы задавали ГК+Л в той же схеме , но в дозах соответственно 50 и 75 мг/кг. Комплексное соединение ГК+Л сравнивали с ПС и левомицетином. Телят контрольной группы лечили по методике применяемой в данном хозяйстве. Пробы крови для исследования брали на 5, 10 и 15 день после лечения. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 11.

Исследования показали, что комплексное соединение ГК+Л не оказывало достоверного влияния на эритроциты и лейкоциты в крови. Установлено стимулирующее влияние ГК+Л в дозе 50 мг/кг. Так, ГК+Л в дозе 50 мг/кг стимулировал заглатывающую и переваривающую активность нейтрофилов; причем переваривающая способность увеличилась настолько, что тест- микроб разрушался на стадии поглощения.

У животных, которым ГК+Л задавали в дозе 50 мг/кг, по сравнению с контролем достоверно увеличилось содержание лизоцима, комплемента и бактерицидной активности сыворотки крови. Эта достоверность присутствовала по сравнению с группой животных получавших ГК+Л в дозе 25 мг/кг. Стимулирующее влияние ГК+Л в дозе 75 мг/кг было аналогично дозе 50 мг/кг.

Таблица 11.

Влияние различных доз исследуемого комплекса ГК+Л на показатели естественной резистентности телят

№ п/ п Соединения Доза мг\кг Показатели естественной резистентности

Лизо-цнм едЛмл Комп лемент ед\мл Пропер ДИН ,ед Бак.акт -сть,% %фа-Г0Щ1-тоза Фаг. индекс

1. ГК+Л 25 306,2 ±19,5 200,0 ±5,2 5,43 ±0,2 39,7 ±3,5 64,0 ±3,0 1,18 ±0,13

2. ГК+Л 50 318,5* ±10,0 207,0' ±5Д 5,81' , ±0,1 42,5' , ±2,5 67,0' ±1,0 1,25' ±0,2

3. ГК+Л 75 316,3 ±25,0 206,8 ±5,0 5,78 ±0,3 42,3 ±0,3 66,5 ±4,5 1,22 ±0,1

4. гк 50 304 ±22,0 200,0 ±19,0 5,41 ±0,2 39,5 ±3,0 64,5 ±6,0 1,13 ±0,13

5. Левомице-тин 50 300,0 ±30,0 204,0 ±20,0 5,39 ±0,48 39,3 ±2,0 63,9 ±6,0 1,07 ±0,1

6. Контроль 285,0 ±8,0 183,0 ±9,0 5,37 ±0,08 38,9 ±3,5 62,3 ±5,0 1,05 ±0,9

*- Р<0,05

9. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ГК+Л НА ОРГАНИЗМ ПТИЦ.

Нами проведено испытание ГК+Л при добавке в корм в дозе 50 мг/кг живой массы тела цыплят кросса «Родонит» суточного возраста, с целью стимуляции прироста цыплят и предохранение их от заболеваний при выращивании.

Суточные цыплята были распределены на 2 группы. Первая группа в количестве 50 голов получала стандартный комбикорм с добавлением витаминоЕ и микроэлементов, а также ГК+Л в дозе 50 мг/кг живой массы тела цыплят

Вторая группа цыплят в количестве 50 голов получала стандартный комбикорм и служила контролем. Живая масса цыплят составляла в опытной группе 40,5 ±0,4 гр. и 39.9 ±0.3 гр. в контрольной группе.

Известно, что получение высокой массы цыплят в первую неделю откорма может оказывать влияние и на степень повышения массы тела и в последующие недели (табл.12)

Таблица 12.

Влияние ГК+Л на среднесуточный прирост массы тела цыплят

Возраст, Кол-во Получавшие ГК+Л Контрольные

в пед цыплят в Живая средн.сут. живая масса, г. средн.сут.

группе масса, г. прирост, г. прирост, г.

Суточ 50 40,5±0,4 39,9±0,3

1 50 135,3+8,5 11,9 123,4+8,0 10,5

2 50 379,1+10,0 29,5 300,0+12,0 19,6

3 50 525,5+20,0 35,2 438,6+15,9 22,9

4 50 830,8±21,0 34,5 700,9+20,0 25,4

5 50 1050,0+15,0 36,30 ' 850,5+35,0 29,5

6 50 1095,5±17,0 70,4 996,2+26,8 49,6

7 50 1290,9+20,0 89,3 1040,7+15,8 85,3

8 50 1510,5+30,0 55,5 1269,1+19,9 38,6

9 50 2180,0+50,0 70,1 1850,5+27,5 61,1

Из таблицы 12 видно, что в первую Неделю жизни прирост живой массы цыплят, получавших ГК+Л, был выше на 9,1% , чем у контрольных цыплят. Через 3 недели средняя живая масса цыплят получавшая ГК+Л была на 86,9 гр. больше, чем в контрольной группе, а уже через 5 недель средняя живая масса цыплят, получавших ГК+Л составила 1050,0 ±15,0 гр. , а контрольных - 850,5

±15,0 гр.. Цыплята опытной группы весили на 199,5 гр. больше, чем контрольные.

В конце исследования, то есть в 9 недельном возрасте, средняя живая масса тела одного цыпленка, получавшего ГК+Л в течении 10 дней, составила 2180,0 ±50,0 гр., а у контрольных 1850,5 ±48,5 гр..

Таким образом, каждый цыпленок который получал ГК+Л весил на 329,5 гр. больше контрольного.

В группе цыплят, получавших ГК+Л в первые 2 недели пало 4 птицы, в контрольной за данный промежуток времени пало 7 цыплят. Сохранность поголовья в группе получавших ГК+Л на 6% больше, чем в контрольной группе. К концу исследований то есть через 9 недель в группе получавшей ГК+Л погибло 6 цыплят из 50, то есть 12%, а в контрольной группе пало 14 цыплят из 50 то есть 28%.

В результате введения в желудок с кормом ГК+Л в дозе 50мг/кг, отмечается повышение сохранности цыплят и увеличение их прироста живой массы.

ВЫВОДЫ

1. Проведен скрининг 10 новых соединений и комплексов гликопептидов ГК. Установлено, что гликопептиды ГК и их комплексы - новый класс иммуномодуляторов, обладающих малой токсичностью усиливают гуморальное и клеточные звенья иммунитета.

2. Исследования на белых мышах показали, что комплексное соединение ГК+Л является малотоксичным соединением. Среднесмертельная доза при введении внутрь составляет для белых мышей 5000±2,32 мг/кг.

3. Исследуемое комплексное соединение обладает следующими тсксико-фармакологическими свойствами:

• Усиливает гуморальный иммунный ответ у белых мышей, прими-рованных тимус зависимым антигеном. Для стимуляции первичного иммунного ответа ГК+Л нужно вводить внутрь в течении 5 дней в дозе 50 мг/кг.

• Усиливает клеточное звено иммунитета

• Обладает выраженным противовоспалительным, ульцерогенным свойствами

• Обладает гепатопротекторным и антиоксидантным свойствами.

1. Комплексное соединение ГК+Л, вводимое вместе с кормом цыплятам в дозе 50 мг/кг с первых дней жизни не изменяет гематологические показатели крови, повышает рост и развитие, увеличивает массу тела цыплят.

. Комплексное соединение ГК+Л в дозе 50 мг/кг стимулирует образование Т- и В- лимфоцитов в крови у больных телят, а также значительно повышает клеточные и гуморальные факторы неспецифической защиты при вторичных иммунодефицитных срстояниях.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Ветеринарной практике и животноводстьу рекомендуется новый отечественный комплексный препарат ГК+Л в качестве иммуностимулятора и рос-тостимулирующего средства для телят и цыплят.

л

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Базекин Г.В., Исмагилова А.Ф. Применение глицирризиновой кислоты в ветеринарии \\ Первая научно-практическая конференция молодых учёных БГАУ на иностранном языке. Тез. докл. БГАУ, 1998, -С.35.

2. Базекин Г.В., Исмагилова А.Ф., Балтина Л.А. и др. Иммунологические свойства новых комплексов глицирризиновой кислоты \\ Всероссийская научная конференция «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии». Тез. докл. С.-Петербург, 1999, -С.20. Базекин Г.В., Исмагилова А.Ф., Балтина Л.А. и др. Влияние комплексов глицирризиновой кислоты на иммунитет \\ Всероссийская научная конференция «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии». Тез. докл. С.-Петербург, 1999, -С.20.

L Базекин Г.В., Исмагилова А.Ф., Балтина Л.А. и др. Глицирризиновая кислота и ее комплексы как новые иммуномодуляторы \\ Международная научно-практическая конференция, посвященная 100-летию со дня рождения члена-корреспондента ВАСХНИЛ В.Т. Котова «Экологические аспекты эпизоотологии и патологии животных». Воронеж, 1999, -С. 194195.

. Базекин Г.В., Исмагилова А.Ф., Балтина Л.А. и др. Влияние глицирризиновой кислоты+левомицетин на резистентность к инфекции \\ Всероссийская научно-практическая конференция «Лабораторное дело: организация и методы исследований», Пенза, 1999,-С.32-33.

. Базекин Г.В., Исмагилова А.Ф., Кузнецов C.B. и др. Клинико-иммунологический статус телят больных диспепсией \\ Международная научно-практическая конференция «Хозяйственно-питьевая вода и сточные воды: проблемы очистки и использования» Пенза, 2000 -С. 44-45.

, Базекин Г.В., Исмагилова А.Ф., Анасова А.Р.. и др Фармакологическая коррекция иммунитета новыми производными глицирризиновой кислоты \\ Международная научно-практическая конференция «Хозяйственно-

3Z

питьевая вода и сточные воды: проблемы очистки и использования» Пенза, 2000 -С. 48-50.

8. Базекин Г.В., Анасова А.Р., Исмагилова А.Ф. и др. Коррекция иммуно-дефицитов новыми производными глицирризиновой кислоты \\ Первая международная конференция «Здоровье, разведение и защита мелких домашних животных» Уфа, 2000, -С. 17-18.

9. Базекин Г.В., Исмагилова А.Ф., Балтика Л.А.и др. Токсико-фармэкологические свойства новых производных глицирризиновой кислоты \\ 7 Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» Тез. докл. -М, 2000.

10. Базекин Г.В., Исмагилова А.Ф., Балтина Л.А.и др. Противоязвенная активность некоторых производных глицирризиновой и глицирретовой кислот \\ 7 Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» Тез. докл. -М, 2000.

11. Базекин Г.В., Исмагилова А.Ф., Балтина Л.А.и др. Противовоспалительный эффект новых производных глицирризиновой кислоты \\ 7 Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» Тез. докл. -М, 2000.

12.Базекин Г.В., Исмагилова А.Ф., Балтина Л.А.и др. Производные глицирризиновой кислоты - как новые гепатопротекторы \\ 7 Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» Тез. докл. -М, 2000.

Актуальность проблемы:

Целью иммунофармакологии является разработка препаратов, эффективно регулирующих иммунную систему организма. Этот интерес особенно возрос в последние годы и связан с решением задач, выдвигаемых инфекционной патологией, онкологией, а также незаразными заболеваниями, в генезе которых важную роль играют нарушения иммунного статуса организма.

В прикладном аспекте это означает, что необходимо создавать препараты, пригодные для иммунокоррекции организма. Кроме того, в настоящее время стало очевидным, что многие препараты, относящиеся к различным фармакологическим группам, в терапевтических дозах оказывают неблагоприятное действие на иммунную систему организма, т.е. иммунотоксичность является широко распространенным явлением (Исмагилова А.Ф. 1996).

Таким образом, потребность медицины и ветеринарии в иммунотропных препаратах чрезвычайно высока. В настоящее время осуществляется широкий поиск лекарственных препаратов, оказывающих активизирующее воздействие на неспецифические и специфические защитные реакции организма.

Однако клиническое применение многих из созданных средств оказалось ограниченным вследствие их слабой активности и наличия различных побочных эффектов (Земсков A.M. 1995).

Одним из возможных путей преодоления указанных недостатков является скрининговая работа, а также сочетание и различные комбинации антибиотиков на основе иммуномодуляторов.

Для повышения иммунного статуса организма перспективными соединениями зарекомендовали себя производные тритерпенового гликозида - глицир-ризиновая кислота (ГК), являющаяся основным биологически активным компонентом экстракта корней солодки голой и уральской.

Интерес к производным ГК вызван её высокой и разнообразной биологической активностью и низкой токсичностью (Балтина Л.А., Толстиков Г.А 1998).

Все сказанное выше и определяет актуальность проблемы, заключающейся в поиске новых препаратов, стимулирующих иммунную деятельность. Цель исследований:

Целью настоящей работы явилось изыскание соединений и комплексов эффективно регулирующих иммунную систему организма.

Для достижения поставленной цели сформулированы задачи по исследованию новых гликопептидов и комплексов глицирризиновой кислоты.

На основе скрининга и сравнительного анализа на первичный иммунный ответ среди новых производных ГК было выбрано наиболее активное комплексное соединение глицирризиновой кислоты с левомицетином (ГК+Л). В связи с этим, появилась необходимость: ш определить острую токсичность; выявить некоторые токсико-фармакологические свойства ГК+Л; а раскрыть некоторые механизмы иммунотропного действия ГК+Л; ш разработать схему применеия изучаемого комплексного соединения; ш изучить влияние ГК+Л на организм телят и цыплят. Научная новизна:

Впервые проведен скрининг 10 новых соединений гликопептидов глицирризиновой кислоты и их комплексов. Изучена связь химического строения и иммунотропной активности. Установлено, что гликопептиды и комплексы глицирризиновой кислоты являются малотоксичными соединениями. Изучен характер влияния ГК+Л на гуморальный и клеточный иммунитет, резистентность лабораторных животных к инфекции, различные модели воспаления, ге-патозащитную и антиоксидантную активность, регенеративные и репаративные процессы, а также изучено иммуностимулирующее влияние ГК+Л на организм телят и цыплят. Критерием новизны является также вся совокупность данных, полученных в результате проведенных исследований.

Научно - практическая ценность работы определяется эффективностью ГК+Л при экспериментальных иммунодепрессивных состояниях, что позволяет предложить комплексный препарат для коррекции аналогичных нарушений иммунитета у сельскохозяйственных животных.

Комплексное соединение ГК+Л при введении в желудок, вместе с кормом, телятам в возрасте 5-9 дней стимулирует образование Т- и В- лимфоцитов, повышает гуморальные факторы неспецифической защиты, выживаемость, сокращает сроки болезни.

При дачи ГК+Л цыплятам и курам отмечается стимуляция образования В -лимфоцитов, повышается рост и развитие, увеличивается прирост их живой массы тела. Эти данные позволяют рекомендовать в практику ветеринарии комплексное соединение ГК+Л в качестве иммуномодулятора для телят и кур.

Внедрение

Опытно - промышленные испытания, проведенные на птицефабрике «Уфимская» и совхозе «Уфимский» подтвердили иммуностимулирующий эффект комплексного соединения ГК+Л.

Апробация работы:

Результаты диссертационной работы обсуждены на:

1 .Научно-практической конференции молодых ученых БГАУ. Уфа, 1999 г.

2. Международной конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии». Санкт - Петербург, 1999 г.

3. Международной конференции «Экологические аспекты эпизоотологии и патологии животных». Воронеж, 1999 г. 7

4. На VI-VII Национальных конгрессах «Человек и лекарство». Москва, 1999-2000 гг.

5. Всероссийской научно - практической конференции «Лабораторное дело: организация и методы исследований». Пенза, 1999 г.

6. Первой международной конференции «Здоровье, разведение и защита мелких домашних животных». Уфа, 2000 г.

Настоящая работа проведена в соответствии с заданием 01 ГНТП России «Создание новых лекарственных средств методами химического и биологического синтеза», а также 0.1.90.00011555 и 0.1.90.40.009075 Российской академии наук «Синтез веществ, обладающих практически важной биологической активностью» и в соответствии с тематикой научных исследований университета (номер госрегистрации 01.86.0 - 07.68.78).

ВЫВОДЫ

1. Проведен скрининг 10 новых соединений и комплексов гликопептидов ГК. Установлено, что гликопептиды ГК и их комплексы - новый класс иммуномодуляторов, обладающих малой токсичностью усиливают гуморальное и клеточные звенья иммунитета.

2. Исследования на белых мышах показали, что комплексное соединение ГК+Л является малотоксичным соединением. Среднесмертельная доза при введении внутрь составляет для белых мышей 5000±2,32 мг/кг.

3. Исследуемое комплексное соединение обладает следующими токсико-фармакологическими свойствами:

• Усиливает гуморальный иммунный ответ у белых мышей, прими-рованных тимус зависимым антигеном. Для стимуляции первичного иммунного ответа ГК+Л нужно вводить внутрь в течении 5 дней в дозе 50 мг/кг.

• Усиливает клеточное звено иммунитета

• Обладает выраженным противовоспалительным, ульцерогенным свойствами

• Обладает гепатопротекторным и антиоксидантным свойствами.

4. Комплексное соединение ГК+Л, вводимое вместе с кормом цыплятам в дозе 50 мг/кг с первых дней жизни не изменяет гематологические показатели крови, повышает рост и развитие, увеличивает массу тела цыплят.

5. Комплексное соединение ГК+Л в дозе 50 мг/кг стимулирует образование Т- и В- лимфоцитов в крови у больных телят, а также значительно повышает клеточные и гуморальные факторы неспецифической защиты при вторичных иммунодефицитных состояниях.

93

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Ветеринарной практике и животноводству рекомендуется новый отечественный комплексный препарат ГК+Л в качестве иммуностимулятора и рос-тостимулирующего средства для телят и цыплят.