Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Токсико-фармакологические свойства новой композиции полизон+ретинола ацетат и ее применение при бронхопневмонии поросят

На правах рукописи

-г

ФАИЗУЛЛИНА ЛАРИСА РАДИКОВНА

ТОКСИКО-ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НОВОЙ КОМПОЗИЦИИ ПОЛИЗОН+РЕТИНСША АЦЕТАТ И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ БРОНХОПНЕВМОНИИ ПОРОСЯТ

16.00.04 — ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань

-2006

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Исмагилова Асия Фахретдиновна

доктор биологических наук, Асланов Рашид Михайлович;

доктор ветеринарных наук, профессор Софронов Владимир Георгиевич

Ведущая организация:

ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита диссертации состоится «¿^года в ¿Р часов на заседании диссертационного совета Д-22и!о12Л)1 при ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» по адресу: 420075, Республика Татарстан, г. Казань, Научный городок - 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных»

Автореферат разослан « ноября 2006 года.

Ученый секретарь диссертационного совета IВ.И. Степанов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. В России ведутся многочисленные исследования с целью всестороннего изучения наиболее часто встречающихся заболеваний органов дыхания. Патология респираторного тракта разнообразна, и включает большое количество неодинаковых по происхождению, клинико-морфологическому проявлению и эпизоотологическим особенностям заболеваний. Несомненно, что в этом направлении достигнуты определенные успехи.

Возникновение и развитие патологического процесса в респираторном : тракте обусловлено воздействием комплекса различных причин. При этом ведущая роль может принадлежать одному этиологическому фактору, вызвавшему нарушение обменных процессов, к которому впоследствии присоединяются и другие факторы.

С развитием промышленного животноводства основными причинами снижения продуктивности, увеличения заболеваемости и падежа животных является дисбаланс питательных веществ в рационе, низкое качество кормов, нарушение технологии кормления и содержания животных.

Недостаток отдельных элементов питания, приводит к нарушению процесса обмена веществ, которые ответственны за формирование белков, • выработку гормонов, снижению воспроизводительности и иммуноглобулинов. Это ведет к снижению продуктивности, нарушению иммунного статуса организма и защитных сил, активизации патогенной и условно-патогенной ; микрофлоры и развитию целого спеюра респираторных заболеваний. (Шахов А.Г., 1990; Бузлама B.C., 1991; Аргунов M.R, 1994; Рахматуллин Э.К., 2000; Папуниди К.Х., 2001; Тремасов МЛ., 2001; Лодяной М.С., Великанов В .И, Ярушин А.Д., 2003; Набиев Ф.Г., 2003; Самородова, И.М., Рабинович М.И., 2004;).

Особенно вредно действуют на организм поросят колебания температуры воздуха, сквозняки, насыщенности воздуха свинарников аммиаком и углекислым газом, содержанию свиней на цементных полах, в сырых и v холодных свинарниках, авитаминозы, минеральное голодание. От общей заболеваемости на долю респираторных болезней приходится 30-32%. (Антипов В .А., 1989; Ноздрин Г.А., 1996; Зухрабов М.Г., Софронов В.Г., 2001; Донник И.М., Шкурагова И.А., 2003; Дорожкин В.И., 2003; Жаров A.B., 2003;). .

В связи с вышеизложенным в ООО «Поливит» под руководством доктора - . технических наук Струнина Б.П. проведен синтез препарата «Полизон». Фосфорнокислая соль 2-амино-4-метилтио-(8-оксо-8-имино)-масляной кислоты, зарегистрированная нами в федеральном институте промышленной собственности под торговым названием «Полизон». На основе доступного , крупнотоннажного производства метионина разработан четырехстадийный способ получения препарата «Полизон» с выходом 62-63%. Получено наставление, утвержденное Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ от

26 июня 2002г. (протокол №2). Ретинола ацетат применяют с профилактической и лечебной целью при бронхопневмонии поросят. На основе «Полизон» и витамина Ретинола ацетат получена композиция «Полизон+Ретинсша ацетат», сочетающий несколько видов фармакологической активности.

1.2. Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение токсико-фармакологических свойств новой композиции «Полизон+Ретинола ацетат» и его применение при бронхопневмонии поросят.

Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи: -определить острую токсичность для белых мышей и крыс, -изучить иммунологические показатели (влияние на активность антигенспецифических Т - супрессоров в первичном иммунном ответе; на фагоцитоз; на реакцию бласттрансформации лимфоцитов; на реакцию трансплантат против хозяина; на функциональную активность перитонеальных макрофагов; на реакцию клеточного иммунитета; на антителообразующие и розеткообразующие клетки)

-изучить противовоспалительную активность, —изучить влияние на массу внутренних органов крыс, —изучить гематологические и биохимические показатели крови, прирост массы тела и сохранность поросят.

-определить концентрацию гистамина и серотонина в крови больных бронхопневмонией поросят.

-провести гистологические исследования внутренних органов поросят.

1.3. Научная новизна. Впервые изучены отдельные механизмы иммунотропного действия новой композиции «Полизон+Ретинола ацетат». Выявлены противовоспалительные свойства. Изучено влияние на массу тела и внутренних органов крыс. Проведены комплексные исследования по изучению гематологических и биохимических показателей крови поросят. Определена концентрация гистамина и серотонина в крови больных бронхопневмонией. Впервые проведены гистологические исследования легких поросят, при применении новой композиции Полизон+Ретинола ацетат.

1.4. Теоретическая и практическая значимость. Выполненные исследования и полученные результаты позволили предложить композицию как конкурентоспособный препарат для повышения резистентности организма и лечения бронхопневмонии. По результатам исследований оформлена заявка на изобретение № 2005137095/13(041387) от 06.02.2006 (Способ применения композиции Полизон+Ретинола ацетат при бронхопневмонии). Утверждено наставление от 26 июня 2002 г. Департаментом ветеринарии МСХ РФ; получен сертификат соответствия РОСС 1Ш. П096. В10347.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту:

- фармакологический спектр и механизм иммуномодулирующего действия композиции «Полизон+Ретинола ацетат»;

- параметры безвредности композиции «Полизон+Ретинола ацетат»; -обоснование использования композиции «Полизон+Ретинола ацетат»

для лечения бронхопневмонии поросят.

1.6. Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и получили положительную оценку на:

— Международной научно-практической конференции «Наука -сельскохозяйственному производству и образованию» (Смоленск, 2004);

— XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2005);

— Всероссийской научно-практической конференции «Современное развитие АПК: региональный опьгг, проблемы, перспективы» (Ульяновск, 2005);

— ХУП Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2005);

— Международной научно-практической конференции «Проблемы и перспективы ветеринарии в XXI веке» (Улан-Удэ, 2005);

— Международной конференции «Средства и методы обеспечения экологической безопасности» (Астрахань, 2005);

— Всероссийской конференции «Перспективные направления научных исследований молодых ученых и студентов Урала и Сибири» (Троицк, 2005);

— 17-й международной научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2006);

— Всероссийской научно—практической конференции «Перспективы агропромышленного производства регионов России в условиях реализации приоритетного национального проекта «Развитие АПК» (в рамках XVI Международной специализированной выставки «АгроКомплекс-2006») (Уфа, 2006).

Опубликованы в рецензируемом журнале:

— Экологические системы и приборы № 9 - 2005. - С.56-57.

Настоящая работа выполнена в соответствии с тематикой научных

исследований ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» (номер государственной регистрации 01.86.0-07.68.78).

1.7. Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ.

... 1.8. Внедрение результатов исследований: опытно-производственные испытания проведены в СПК «Колхоз Октябрь» Кугарчинского района, в ИП «Ханафина Ф.З.» Уфимского района Республики Башкортостан.

1.9. Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения, включающего 155 источников, из них 122 отечественных и 33 зарубежных авторов. Работа изложена на 116 страницах машинописного текста, содержит 28 таблиц и 10 рисунков.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Экспериментальная часть исследования проведена на 212 неинбредных, половозрелых мышах обоего пола массой 18-20 г, 116 мышах линии CS7 В1, и 116 мышах линии СВА, на 248 беспородных половозрелых крысах массой 160— 180 г, 20 кроликах, полученных из питомника и на 5 баранах. В опытах использованы 120 поросят крупной белой породы больных неспецифической катаральной бронхопневмонией массой 40-50 кг в возрасте 4-6 месяцев.

Лабораторные животные содержались в одинаковых зоогигиенических условиях вивария. Белые мыши содержались по 30-40 голов, белые крысы по 20-25 голов в специальных клетках. Кормление животных проводили согласно суточной потребности с использованием индивидуальных особенностей согласно видовому и половозрастному составу групп (Ковалевский К.Л., 1968).

В качестве препарата сравнения испольпозовали МАОП.

Изучение острой токсичности композиции Полизон+Ретинола ацетат проводили по общепринятым методам (Саноцкий И.В., 1970; Елизарова О.Н., 1971) на белых беспородных мышах и крысах.

Действие изучаемых соединений на активность антигенспецифических Т- супрессоров определяли по методу Whisler R., Stobo I., (1975).

Для определения фагоцитарной активности нейтрофилов крыс, использовали метод Coleman D., Culver К., Ryan J., 1985; Malaise M.C., Mahieu P.R.1985.

Реакция бласттрансформации лимфоцитов: с помощью реакции бласттрансформации лимфоцитов изучаются in vitro функциональные показатели лимфоцитов. Реакцию бласттрансформации осуществляли с лимфоцитами периферической крови крыс микрометодом по Хоробрых В.В. (1983).

Реакцию трансплантат против хозяина (РТПХ) для оценки влияния композиции Полизон+Ретинола ацетат на звено клеточного иммунитета использовали метод количественной оценки РТПХ.

Функциональную активность перитонеальныхмакрофагов оценивали по способности восстанавливать нитросиний тетразолий в формазан под действием продуктов оксидазной реакции при активации макрофагов («дыхательный взрыв») (Schopf R.F., Mattar J., Meyenburg W. et al., 1984).

Воздействие препаратов на функциональную способность Т-эффекторов изучали в реакции гиперчувствительности замедленного типа, спровоцированной динитрофторбензолом, растворенным в ацетоне (J. Knop et al., 1982). Интенсивность реакции гиперчувствительности замедленного типа определяли как разницу в массах опытного и контрольного уха, выраженную в процентах (J.P. Тагауге, К. Sauresserques, 1980).

Противовоспалительная активность была изучена на общепринятых моделях воспаления, вызванного дрожжами, формалином, яичным белком, нитратом серебра (Тринус Ф.П., Мохорт H.A., Клебанов Б.М., 1975; Саратиков A.C., Прищеп Т.П., Яворовская В.Е., 1975).

Влияние композиции Полизон+Ретинола ацетат на изменение массы тепа и внутренних органов изучали на беспородных белых крысах с живой массой 160-180 г. Массу тела и внутренних органов определяли путем взвешивания на электронных весах марки AND HL-200. ~ >

Гематологические показатели крови: число эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина определяли в стабилизированной гепарином крови по общепринятым методикам с помощью камеры Горяева и гемометра Сали. (Кудрявцев A.A., Кудрявцева JI.A.,1974). В сыворотке определяли резервную щелочность по Неводову, СОЭ по Панченкову и общий белок на рефрактометре ИФР—22.

Гистологические исследования проводили для изучения микроструктуры органов и тканей. Кусочки органов и тканей животных фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. После формалиновой фиксации препараты промывали в проточной воде в течение суток. Проводку и заливку осуществляли по общепринятым методикам (Меркулов Г.А., 1969). Уплотнение материала осуществляли путем заливки в парафин. После этого готовили серийные парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм. Срезы готовили на микротоме LEICA RM 2145, окраску проводили гематоксилином и эозином (Кононский А.И., 1976).

Микроскопические исследования проводились с использованием светового микроскопа JENAVAL фирмы «CARL ZEISS» (Германия).

Статистическую обработку цифровых данных проводили с использованием прикладной программы MS Excel©, включающей подсчет средних величин (М), средней ошибки (ш), среднеквадратичных отклонений выборки (8), определение степени достоверности по Стьюденту (Стрелков Р.Б., 1996).

2.2. Результаты собственных исследований

2.2.1. Изучение острой токсичности композиции Полизон+Ретинола ацетат

Композицию Полизон+Ретинола ацетат вводили в разных дозах от 1000 мг/кг до 4000 мг/кг.

Результаты данной серии опытов представлены в таблице 1.

Среднесмертельная доза композиции Полизон+Ретинола ацетат для белых мышей составила: 2028,5±58,53 мг/кг, для крыс 2677,5±84,46 мг/кг.

Среднесмертельная доза Полизона для белых мышей составила: !070,0±89,40 мг/кг, для крыс 1454,17±79,32 мг/кг.

Таким образом, в результате проведенных исследований нами установлено, что Полизон и композициия Полизон+Ретинола ацетат согласно ГОСТа 12.1.00.7-76 относится к III классу опасности (малоопасные вещества). Таблица 1 - Острая токсичность композиции Полизон+Ретинола ацетат и Полизона

Вид животного Кол-во животных в группе 1Л)1б Шзо Коэф фициент вариабель ности смертель ныхдоз

Композиция Полизон+Ретинола ацетат

Мыши 24 1840,0 2028,5±5 8,53 2326,0 1,26

Крысы 24 2443,0 2677,5184,46 2906,0 1,18

Полизон

Мыши 24 760,0 1070,0±89,40 1440,0 1,89

Крысы 24 1130,0 1454,17±79,32 1760,0 1,56

2.2.2. Иммунологические показатели композиции Полизон + Ретинола ацетат

Актуальной задачей современной фармакологии является поиск путей регуляции иммунитета лекарственными средствами. Большой интерес она приобрела в связи с детальным изучением биохимических процессов, лежащих в основе иммунных реакций.

Важным аспектом поддержания иммунного гомеостаза организма является фагоцитарная активность нейтрофилов. При иммунодефицитах может нарушаться фагоцитарная функция нейтрофилов, в результате чего наблюдается повышение концентрации циркулирующих иммунных комплексов (Маянский А.Н., Маянский Д.Н.,1981), расстройство захвата микробов, что может быть следствием ослабленного метаболизма при активации нейтрофилов (Ри1ор Т е1.а1.,1985). При применении композиции Полизон+Ретинола ацетат в дозе 2мг/кг+3000МЕ/кг повышение фагоцитарного индекса достигается за счет увеличения числа активных фагоцитов (88,1+3,00; в контроле 73,1+4,22), и фагоцитарного индекса за счет работающих клеток и их индивидуальной активности (4,83+0,72; в контроле 2,49+0,22)., а также способствует повышению фагоцитарной активности нейтрофилов, за счет увеличения среднего числа активных фагоцитов (58,3+4,2; в контроле 24,2+3,2), и интенсивности фагоцитоза (1,33+0,08; в контроле 1,02+0,06). Усиление фагоцитарной активности нейтрофилов при применении композиции Полизон+Ретинола

ацетат, по нашему мнению, связано с анаболическим эффектом Полизона. Композиция Полизон+Ретинола ацетат усиливала наработку кислородных радикалов в фагоцитах, независимо от характера индуктора. Композиция Полизон+Ретинола ацетат аналогично МАОП, стимулирует поглотительную способность фагоцитов.

Процесс превращения лимфоцитов на искусственной питательной среде в различные промежуточные формы называют - бластгрансформацией (РБТ).

Индекс стимуляции составил при применении композиции Полизон+Ретинола ацетат в дозе 2 мг/кг+3000 МЕ/кг - 4,3+1,5, а в контроле 3,2+1,4. ,,

Композиция Полизон + Ретинола ацетат не изменяет реакцию «Трансплантат против хозяина» РТПХ.

Средний индекс реакции по массе у композиции Полизон + Ретинола ацетат равен 4,91+0,49, а у Полизона 4,99+0,53.

Нами изучено влияние композиции Полизон+Ретинола ацетат на некоторые функции макрофагов: способность к фагоцитозу частиц латекса, восстановление нитросинового тетразолия (НСТ) в диформазан, а так же лизосомальную активность этих клеток. Композиция Полизон+Ретинола ацетат в дозе 2мг/кг+ЗОООМЕ/кг стимулировала не только активность, но и интенсивность фагоцитоза, что нашло отражение в повышении фагоцитарного числа (4,59+0,39; контроль - 3,91+0,32).

Нами отмечено регулирующее влияние на мононуклеарные фагоциты композиции Полизон+Ретинола ацетат при введении в дозе 2 мг/кг+3000 МЕ/ кг, при этом отмечалось увеличение процентного количества макрофагов, фагоцитирующих частиц латекса, при неизменном показателе фагоцитарного числа (72,3+3,3; в контроле - 50,1+1,6).

Композиция Полизон+Ретинола ацетат увеличивала содержание клеток с отложением диформазана в цитоплазме и повышал индекс активации макрофагов в НСТ-тесте (0,44+0,39; в контроле 0,29+0,01).

Действие композиции Полизон+Ретинола ацетат на клеточный иммунный ответ оценивали в реакциях гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана и динитрофторбензола на мышах линии С„ВЦ СВА.

Композиция Полизон+Ретинола ацетат угнетает РГЗТ у мышей линии С57ВЬ, как при профилактическом введении (13,8+1,7, в контроле - 20,1+2,1), так и при лечебном применении (12,2+1,22, в контроле - 16,2+1,29). Аналогичное изменения отмечаются и мышей линии СВА. Композиция Полизон+Ретинола ацетат, угнетает РГЗТ, как при профилактическом введении (15,0+1,22,в контроле - 17,8+1,52) так и при лечебном применении (15,2+1,39, в контроле - 16,2+1,85).При оптимальной антигенной нагрузке иммунностимулирующий эффект композиция Полизон + Ретинола ацетат оказывал при применении в дозе 3 мг/кг +3000 МЕ/кг (34065,0+3012,0;

в контроле - 13592,0±2000,0). На фоне антигенной стимуляции меньшим количеством эритроцитов барана (5х107клеток) усиление антителообразования достигалось в дозах 2мг/кг + 3000МЕ, при этом число антителообразующих клеток в селезенке увеличивалось в среднем в 1,5 раза (88695,0±10255,0; в контроле - 56000,0+4822,0).

Композиция Полизон + Ретинола ацетат и Полизон повышают уровень сенсибилизированных лимфоцитов, что выражается в увеличении количества розеткообразующих клеток. По сравнению с контрольной композиция Полизон + Ретинола ацетат значительно увеличивает количество розеткообразующих клеток (60,3±5,32; в контроле - 26,7±2,11).

2.2.3. Противовоспалительные свойства композиции Полизон+Ретинола ацетат

Сравнительная противовоспалительная активность композиции Полизон+Ретинола ацетат и известных антифлогистиков зависит от модели воспаления. Композиция Полизон+Ретинола ацетат, обладающая противовоспалительными свойствами, выгодно отличается от основных групп нестероидных противовоспалительных средств (НПВС) своей способностью стимулировать регенерацию и репаративные процессы, а также обладает антиульцерогенными свойствами. Противовоспалительная активность, вызванная дрожжами, при применении композиции Полизон + Ретинола ацетат в дозе 2 мг/кг + 3000 МЕ составила — 36,28 %; при применении Полизона в дозе 2 мг/кг - 33,60 %; в дозе 3 мг/кг - 29,93 %; в дозе 5 мг/кг - 27,14 %; при введении ортофена — 26,80%. На фоне воспаления, вызванного дрожжами, действие композиции Полизон + Ретинола ацетат превосходило действие ортофена. При применении в качестве флагогена раствора формалина противовоспалительная активность композиции Полизон + Ретинола ацетат составила в дозе 2 мг/кг + 3000 МЕ — 34,11%; противовоспалительная активность Полизона составила в дозе 2 мг/кг—33,13%; в дозе 3 мг/кг—25,73%; в дозе 5 мг/кг — 13,79%; при введении ортофена 20,67%. При применении в качестве флагогена яичный белок противовоспалительная активность композиции Полизон + Ретинола ацетат составила в дозе 2мг/кг+3000 МЕ -31,25%; противовоспалительная активность Полизона в дозе 2 мг/кг —28,92%; в дозе 3 мг/кг - 24,67%; в дозе 5мг/кг-13,25%; при введении ортофена 20,18%. При применении в качестве флагогена нитрата серебра противовоспалительная активность композиции Полизон + Ретинола ацетат составила в дозе 2мг/кг + 3000 МЕ— 29,38%; противовоспалительная активность Полизона составила в дозе 2 мг/кг -26,33%; в дозе 3 мг/кг - 23,31%; в дозе 5мг/кг -17,13%; а ортофена - 18,65%.

Установлено, что при увеличении дозы Полизона до 5 мг/кг отмечается наименьший противовоспалительный эффект.

В результате исследований установлено, что при применении в качестве флагогена раствора дрожжей композиция Полизон + Ретинола ацетат проявляет наибольшую противовоспалительную активность в дозе 2 мг/кг+3000 МЕ/кг. При использовании в качестве флагогена нитрата серебра, яичного белка, формалина, композиция Полизон + Ретинола ацетат проявляет слабую противоспалительную активность, однако противовоспалительная активность ортофена ниже, чем у исследуемой композиции.

Видимо, способность композиции Полизон + Ретинола ацетат активировать регенерацию связана с разными механизмами. Влияние на пролиферацию и противовоспалительный эффект является следствием стимуляции надпочечников.

2.2.4. Влияние композиции Полизон+Ретинола ацетат на гематологические показатели поросят

Объективную оценку уровня и направления обмена веществ, интерьерных качеств животных, состояния их здоровья и течение патологического процесса в организме дает исследование гематологических показателей крови. Периферическая кровь является одним из важных связующих звеньев всего организма, обеспечивающих питание и дыхание всех органов и систем и снабжающих органы и ткани необходимыми ферментами, гормонами, медиаторами, витаминами, антителами и другими гуморальными веществами, без которых нормальное функционирование организма невозможно. (Кудрявцев A.A., Кудрявцева Л.А., 1969).

Животным I группы задавали Полизон в дозе 5мг/кг, II группе — композицию Полизон+Ретинола ацетат в дозе 5мг/кг + 550 ME/кг, Ш группе Ретинола ацетат в дозе 550МЕ, а IV бензил пенициллин в дозе 600000 ЕД, V группа служила контролем.

На пятнадцатый день лечения, после применения композиции Полизон + Ретинола ацетат процентное количество эозинофилов снизилось до 10,3+0,64%, моноцитов до 2,3+0,22%, лимфоцитов увеличилось до 48,2+3,04%. Необходимо отметить, что лимфоциты имеют непосредственное отношение к иммунобиологической защите организма и отражают степень ее развития.

Количество общего белка повысилось до 8,1+0,74г%, альбуминов до 47,8+3,24%, резервная щелочность до 49,6+3,25% об С02, количество глобулинов снизилось: а — глобулины до 16,6+1,52%, ß — глобулины до 17,6+1,23%, у - глобулины до 20,5+1,23%. СОЭ снизилось до 6,3+0,58 мин. (таблица 2).

Таким образом, применение композиции Полизон + Ретинола ацетат приводит к стабилизации гематологических, биохимических показателей и оказывает положительное влияние на метаболические процессы в организме больных поросят.

/

Таблица 2 - Влияние композиции Полизон+Ретинола ацетат на биохимические показатели крови поросят

(15 день лечения) • 1

Название соединения №груп пы Кол-во жив-х, пи Доза, Мг/кг, МЕ/кг' Показатели крови на гопнадцатыйдень лечения

Общий белок Альбумины, % опюбулины, % (3-пюбулины, % ^-глобулины, % Щелочной . резерв, 0В%С02 СОЭ, мин.

1 Полиэон I 8 • 5 : 8,0+0,76 41,7±3,56 17,5±1,42 20,5±1,56 22,4± 1,25 46,4±3,44 7,4+0,56

Полюои*-Решнола ацетат П 8 5+550 8,1 ±0,74 47,8±3,24 16,б±1,52 17,б±1,23 20,5+1,23 49,6+3,25 6,3+0,58

Решнсыв ацешг Ш 8 550 7,9+0,75 40,5+3,46 18,7+1,23 19,2±1,22 23,2±1,24 45,5+3,21 8,2±0,66

Бензилпениц иллина натриевая соль IV 8 600000ЦД 8,1 ±0,73 41,4±3,42 17,8±1,78 20,8±1,75 22,2±1,32 46,6+3,21 7,8+0,51

{Сотрешь V 8 - 7,6±0,72 30,6±3,48 22,4+1,21 23,4+1,11 25,1+1,35 38,2+3,26 11,1+0,87

2.2.5. Применение композиции Полизон +Ретинола ацетат для повышения продуктивности и сохранности поросят

Одной из проблем с которой встречаются свиноводческие хозяйства являются низкая жизнеспособность и снижение прироста массы тела. Учитывая вышеизложенное, нами были проведены исследования, направленные на установление влияния композиции Полизон +Ретинола ацетат на увеличение прироста массы тела и сохранности поросят.

Животные были распределены на 3 группы поросят в возрасте 4 месяцев, со средней живой массой 40-50 кг по принципу аналогов по 20 голов в каждой. Наблюдение за животными вели в течение 30 дней. Взвешивание поросят проводили в начале и в конце опыта. Животным первой группы задавали Полизон в дозе 5мг/кг, второй группе - композицию Полизон+Ретинола ацетат в дозе 5мг/кг + 550 МЕ, третья группа служила контролем.

Таблица 3 - Показатели среднесуточного прироста массы и сохранности поросят

е §• с и во я § <D Ш & « l й f иО В о § в О, t о о 5 0 в 1 2 f 0 1 Ь *г & I vO о] С « ¿2 В" а 5 6 я er

8- D S Я а> О W в «в о g св о о 2 о § С < о о • ' § 4J (X и

Полизон 20 48,2+4,22 60,3+2,04 2 12,1 25,10 0,365+0,13

ПагаиааН-

Ретинола 20 47,9+4,25 61,5+2,14 1 13,5 28,18 0,450+0,12

ацетат

Контроль 20 47,8+4,21 54,1+2,5 4 6,3 13,70 0,210+0,10

Анализ таблицы 3 показывает, что поросята опытных групп имели различную интенсивность роста. Так у поросят первой группы получавших Полизон в дозе 5 мг/кг среднесуточный прирост составил 0,365+0,13 кг, а у поросят второй опытной группы 0,450+0,12 кг. Следует отметить, что из первой опытной группы пало 2 поросенка, во второй — 1, а в контрольной группе пали 4 заболевших бронхопневмонией поросят.

Таким образом, введение в рацион композиции Полизон+Ретинола ацетат в дозе 5 мг/кг+550 МЕ/кг оказывает положительное влияние на обменные процессы о чем свидетельствуют прирост массы и сохранность поросят.

2.2.6. Концентрация гистамина и серотонина в крови животных, больных бронхопневмонией

В патогенезе бронхопневмонии активно участвуют биологически активные вещества. Среди них важная роль принадлежит гистамину и серотонину. В этой связи большой интерес представляет их содержание у поросят, больных бронхопневмонией в различные стадии воспалительного процесса.

Высокое содержание гистамина в крови регистрировали во время осложнений и приступов болезни (повышение температуры тела, кашель, одышка, лейкоцитоз, увеличение скорости оседания эритроцитов и носовые истечения.) В этот период в крови поросят концентрация гистамина превышала допустимые нормы в 4,5 раз. По-видимому, гистамин в крови в момент выраженных клинических симптомов увеличивается за счет их выброса тучными клетками. В отношении серотонина в крови аналогичную закономерность не выявили.

Содержание серотонина в крови клинически здоровых поросят колебалось от 3,6 до 14,4мкг/мл. Отношение серотонина и гистамина составляло 1:0,50. В крови больных поросят - 3,6-7,9мкг/мл. Отношение серотонина и гистамина составляло 1:1,28. Выявленные изменения в обмене гистамина и серотонина и в их соотношении свидетельствуют о том, что организм животных отвечает совокупностью приспособительных реакций, предотвращающих возможный сдвиг в составе внутренней среды.

Для изучения изменения содержания серотонина и гистамина в тканях животных в опыте использовали 20 кроликов. Бронхопневмонию у них вызывали интрахеальным введением 0,5 мл 2,5 %-ного раствора медного купороса. В тканях легких здоровых кроликов содержалось 2,26+0,35 мкг/мл гистамина, печени - 4,52+0,13, желудка - 1,12+0,05, двеннадцатиперстной кишки - 1,14+0,02, тощей кишки - 1,34+0,12, ободочной кишки - 1,42+0,33,и скелетной мыщцы — 5,12+0,34мкг/г. В исследуемых тканях больных кроликов нами отмечено незначительное повышение концентрации гистамина (от 1,24 до 2,35%). В скелетных мышцах, наоборот, отмечено уменьшение его на 9,34%. Уровень серотонина в тканях легких здоровых кроликов составлял 5,66+0,15мкг/г, печени -12,12+0,98, желудка - 7,40+0,38, двеннадцатиперстной кишки - 5,39+0,79, тощей кишки - 5,56+0,43, ободочной кишки — 5,48+0,25 и скелетной мышцы - 7,83+0,86 мкг/г.

В тканях легких больных животных содержание серотонина снижено на 52,9 %, а в печени, желудке, двеннадцатиперстной, тощей, ободочной кишок и

скелетной мышцы количество его резко повышено — соответственно на 60,9; 86,6; 185; 187; 121 и 130 %. Нами установлены противоположно направленные сдвиги при определении соотношения между содержанием гистамина и серотонина в легких и скелетной мышце больных животных - 1:0,94 и 1:0,27, в печени -1:0,34, желудке -1:0,12, двеннадцатиперстной кишки -1:0,12, тощей кишки — 1:0,12 и ободочной кишки — 1:0,23.

Следовательно, складывающиеся соотношения гистамина и серотонина в органах могут служить показателем участия их в регуляции гомеостатических функций организма при патологии. Композиция Полизон+Ретинола ацетат относится к средствам, препятствующим освобождению из сенсибилизированных тучных клеток и базофилов - гистамина. Соотношение серотонина и гистамина в крови после лечения поросят композицией Полизон+Ретинола ацетат составило 1:0,50.

Изменение обмена веществ биологически активных веществ у животных при бронхопневмонии свидетельствуют о понижении иммунобиологической реактивности и его адаптационных возможностей, а сравнительное их определение дает возможность прогнозировать течение патологического процесса и управлять гомеостатическими функциями.

2.2.7. Влияние новой композиции Полизон +Ретинола ацетат на структуру легких поросят, больных бронхопневмонией

При вскрытии у погибших животных в легких был отмечен геморрагический отек с характерными сосудистыми расстройствами: сосуды микроциркуляторного русла сильно кровенаполнены, отмечена дилятация и парез их стенок, диссеминированный тромбоз сосудов, особенно капилляров стенок альвеол, пери- и посткапилляров, а также плазматическое пропитывание и фибриноидный некроз стенки сосудов, отек, очаговые диффузные кровоизлияния в периваскулярной, перибронхиальной и интерстициальной соединительной ткани, выход эритроцитов в альвеолы, бронхиолы и бронхи. В некоторых альвеолах имелось незначительное количество серозного экссудата. Просветы бронхов заполнены экссудатом, содержащим в различных соотношениях лимфоциты и эритроциты. Эпителий слизистой оболочки в состоянии пролиферации и десквамации. Собственная пластинка слизистой оболочки бронхов, перибронхиальная и интерстициональная соединительная ткань инфильтрирована серозно-фибринозным экссудатом и лимфоидными клетками. Их много в перибронхиальной и мало в интерстициальной соединительной ткани, которая пронизана очагами кровоизлияний.

С целью изучения влияния новой композиции «Полизон+Ретинола ацетат» нами были сформированы группы поросят, больных катаральной бронхопневмонией. У животных 1 группы, больных катаральной бронхопневмонией, получавших для сравнительной характеристики бензилпенициллина'натриевую соль в дозе 600000 ЕД в течение первых шести

дней, при макроскопических исследованиях выявлено, что в легких обнаруживаются мелкие пневмонические очаги, которые в некоторых участках образуют слияния, в результате чего очаги становятся больших размеров с инфильтрированными участками и располагаются вблизи нижнего и переднего края легких. При гистологическом исследовании легких выявлено, что форма пневмонии, установленная в результате клинических, патоморфологических и лабораторных исследований, соответствует данным катаральной бронхопневмонии и имеет ряд существенных признаков. Слизистая оболочка респираторного тракта гиперемирована, имеются стазы, кровоизлияния, диффузный отек. Отмечаются пролиферативные и инфильтративные процессы такие как гиперемия эпителия, диффузная лимфоидногистиоцитарная инфильтрация слизистой оболочки. В легком свиньи в отдельных сосудах выявлен застой крови, в перибронхиальных участках некоторых бронхов определяется небольшое количество клеточных инфильтратов. В некоторых крупных сосудах выявлен незначительных застой крови и отек сосудистой стенки.

При гистологическом исследовании легких, свиней, больных катаральной бронхопневмонией, на 8-ые сутки применения композиции Полизон+Ретинсша ацетат в дозе 5 мг/кг + 550 ME/кг, гистологическая картина в легких больных поросят произошли следующие изменения: выявлено, что легкие имеют плотную консистенцию, при разрезе структура зернистая. В пневмонических очагах, в просвете альвеол содержатся преимущественно мононуклеарный экссудат, состоящий из незначительно крупных макрофагов, мелких лимфоцитов и с небольшим количеством лейкоцитов и многочисленных эритроцитов. В некоторых местах альвеолы густо заполнены клеточным экссудатом, здесь же наряду с одноядерными элементами содержится повышенное количество полиморфноядерных лейкоцитов. Вокруг бронхов и сосудов наблюдается значительная лимфогистиоцитарная инфильтрация. Клеточные скопления опоясывают бронхи в сплошные кольца, в результате чего бронхи имеют звездчатый вид. Внутри бронхов отмечено скопление обильного лейкоцитарного экссудата, в некоторых более выраженных пневмонических участках экссудат закрывает просвет бронхов. Также наблюдается расширение и инфильтрация соединительно-тканными клетками междольковых перегородок легких поросят. В просвете альвеол жидкого экссудата сравнительно мало, преобладают клетки респираторного эпителия, лимфоциты, молодые фибробласты, лейкоциты. Легочная ткань заметно уплотнена с подвержением гиалинизации. Лейкоцитарный экссудат, закрывающий просвет бронхов и бронхиол, уменьшается, а эпителий бронхов находится на стадии восстановления. Уменьшается расширение и инфильтрация соединительно-тканными клетками междольковых перегородок легких. Сжатие бронхов уменьшается, в результате чего отмечено очищение от вязкого экссудата дыхательной поверхности бронхов.

На 15-ые сутки после начала лечения пневмонические очаги

рассасываются, отмечается незначительное количество экссудата в просвете альвеол. Просвет бронхов расправляется, эпителий значительно очищен от экссудата, признаки перибронхита исчезают, лимфоидные пролифераты вокруг бронхов уменьшаются. Альвеолярная структура легких ярко выражена. Междольковые перегородки в легких истончаются, в результате чего это свидетельствует о морфофункциональном восстановлении легких свиней, а также значительном снижении воспалительной реакции.

Применение композиции Полизон+Ретинола ацетат с лечебной целью в дозе 5мг/кг+550 МЕ/кг приводит к морфофункциональному восстановлению структуры легких поросят, а также значительному снижению воспалительной реакции.

3. ВЫВОДЫ

1. Применение композиции Полизон+Ретинола ацетат с лечебной целью в дозе 5мг/кг+550 МЕ/кг приводит к морфофункциональному восстановлению структуры легких поросят, а также значительным снижением воспалительной реакции. ^

2. Введение в рацион поросят композиции Полизон+Ретинола ацетат оказывает положительное влияние на пророст массы тела и сохранность поросят.

3. Композиция Полизон+Ретинола ацетат относится к средствам, препятствующим освобождению из сенсибилизированных тучных клеток и базофилов — гистамина. Соотношение серотонина и гистамина в крови после лечения поросят композицией Полизон+Ретинола ацетат составило 1:0,50.

4. Введение в рацион композиции Полизон+Ретинола ацетат в дозе 5мг/кг+550 МЕ/кг оказывает положительное влияние гематологические и биохимические показатели крови больных бронхопневмонией поросят о чем свидетельствует незначительная эозинофилия, моноцитопения сопровождающаяся лимфоцитозом, увеличением общего белка, альбуминов,. резервной щелочности, снижением глобулинов и СОЭ

5. При использовании в качестве флагогена дрожжей, нитрата серебра, яичного белка, формалина композиция Полизон+Ретинола ацетат проявляет большую противовоспалительную активность, чем ортофен широко применяемый и в медицине и в ветеринарии.

6. Реализация иммуностимулирующего действия композиции Полизон+Ретинола ацетат осуществляется путем усиления активности антигенспецифичекских Т — супрессоров в первичном иммунном ответе, л активизирующего влияния на процесс фагоцитоза нейтрофилов, стимуляции бласттрансформации лимфоцитов, стимуляции прироста числа антителопродуцентов на фоне субоптимальной иммунизации мышей и повышения уровня сенсибилизированных лимфоцитов, что выражалось в

увеличении количества розетюообразующих клеток.

7. Среднесмертельная доза композиций Полизон+Ретинола ацетат составила: для белых мышей — 2028,5+ 58,53 мг/кг; для белых крыс - 2677,5+84,46 мг/кг, согласно ГОСТа 12.1.00.7-76 композиция Полизон+Ретинола ацетат относится к Ш классу токсичности (малоопасные вещества).

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Композиция Полизон+Ретинола ацетат рекомендуется для применения в свиноводстве в качестве препарата, повышающего резистентность организма, для лечения бронхопневмонии поросят и ростостимулирующего средства.

Препарат рекомендуется применять в дозе 5мг/кг + 550 МЕ в течение 5-15 дней с лечебной целью в зависимости от тяжести заболевания.

Композиция Полизон+Ретинола ацетат применяется для улучшения и поддержания продуктивного здоровья животных.

5. СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ

. 1. Сафина, Л.Р. Противовоспалительные свойства Полизона/Л.Р. Сафина, А.Ф. Исмагилова, Б.П. Струнин.//Международная научно-практическая конференция «Наука - сельскохозяйственному производству и образованию», Смоленск, 2004. - С.295-298.

2. Сафина, Л.Р. Влияние Полизона на массу тела и внутренних органов/ Л.Р. Сафина, А.Ф. Исмагилова //Материалы ХП Российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва, 2005. — 793с.

3. Сафина, Л.Р. Влияние Полизона на активность антигенспецифйческих Т-супрессоров в первичном иммунном ответе/Л.Р. Сафина, А.Ф. Исмагилова, Р.Ф. Халимов //Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Современное развитие АПК: региональный опыт, проблемы, перспективы», Ульяновск, 2005. - С.344-346.

4. Исмагилова, А.Ф. Влияние Полизона на фагоцитоз/А.Ф.Исмагилова, Л.Р. Сафина //Материалы XVII Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии», Санкт-Петербург, 2005. - С. 113.

5. Исмагилова, А.Ф. Влияние Полизона на реакцию бласттрансформации/А.Ф. Исмагилова, Р.Ф. Халимов, Л.Р. Сафина // Международная научно-практическая конференция «Проблемы и перспективы ветеринарии в XXI веке», Улан-Удэ, 2005. - С.83-84.

6. Сафина, Л.Р. Влияние Полизона, композиции Полизон + Ретинола ацетат на иммунную систему лабораторных животных/Л.Р. Сафина, А.Ф. Исмагилова //Международная конференция «Средства и методы

обеспечения экологической безопасности», Астрахань, 2005. - С.56-57.

7. Сафина, Л.Р. Влияние композиции Полизон+Ретинола ацетат на гематологические показатели свиней/Л.Р. Сафина //Конференция СМУ «Перспективные направления научных исследований молодых ученых и студентов Урала и Сибири», Троицк, 2005. - С.134-136.

8. Сафина, Л.Р. Влияние композиции Полизон+Ретинола ацетат на биохимические показатели крови поросят/Л.Р. Сафина//Конференция СМУ «Перспективные направления научных исследований молодых ученых и студентов Урала и Сибири», Троицк, 2005. - С.136-138.

9. Сафина, Л.Р. Концентрация гистамина и серотонина в крови животных, больных бронхопневмонией/Л.Р. Сафина // Всероссийская научно-практическая конференция «Перспективы агропромышленного производства регионов России в условиях реализации приоритетного национального проекта «РАЗВИТИЕ АПК»(в рамках XVI Международной специализированной выставки «АгроКомплеко-2006») Уфа, 2006.- С.94-96.

10. Файзуллина, Л.Р. Биохимические показатели крови поросят при использовании композиции Полизон+Ретинола ацетат/Л.Р. Файзуллина// Материалы 17-й научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии». - Санкт-Петербург, 2006. - С.66.

На правах рукописи

ФАЙЗУЛЛИНА ЛАРИСА РАДИКОВНА

ТОКСИКО-ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НОВОЙ КОМПОЗИЦИИ ПОЛИЗОН+РЕТИНОЛА АЦЕТАТ И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ БРОНХОПНЕВМОНИИ ПОРОСЯТ

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань - 2006

Подписано в печать 14.11.06. Заказ 30 Формат А5. Тираж 100 экз. Отпечатало в типографии ФГУ "ФЦТРБ" (г. Казань) Адрес: 420075, г. Казань, Научный городок-2

НЬ^л — <140

Актучиышсть темы. В России ведутся многочисленные исследования с целью всестороннею изучения наиболее часто встречающихся заболеваний органов дыхания. Патология респираторного тракта разнообразна, и включает большое количество неодинаковых по происхождению, клинико-морфологическому проявлению и эпизоотологическим особенностям заболеваний. Несомненно, что в этом направлении достигнуты определенные успехи.

Возникновение и развитие патологического процесса в респираторном тракте обусловлено воздействием комплекса различных причин. При этом ведущая роль может принадлежать одному этиологическому фактору, вызвавшему нарушение обменных процессов, к которому впоследствии присоединяются и другие факторы.

С развитием промышленного животноводства основными причинами снижения продуктивности, увеличения заболеваемости и падежа животных является дисбаланс питательных веществ в рационе, низкое качество кормов, нарушение технологии кормления и содержания животных.

Недостаток отдельных элементов питания, приводит к нарушению процесса обмена веществ, которые ответственны за формирование белков, выработку гормонов, снижению воспроизводительное™ и иммуноглобулинов. Это ведет к снижению продуктивности, нарушению иммунного статуса организма и защитных сил, активизации патогенной и условно-патогенной микрофлоры и развитию целог о спектра респираторных заболеваний. (Шахов А.Г., 1990; Бузлама B.C., 1991; Аргунов М.Н., 1994; Рахматуллин Э.К., 2000; Папупиди К.Х., 2001; Тремасов М.Я., 2001; Лодяной М.С., Великанов В.И, Ярушин А.Д., 2003; Набиев Ф.Г., 2003; Самородова, И.М., Рабинович М.И., 2004;).

Особенно вредно действуют на организм поросят колебания температуры воздуха, сквозняки, насыщенности воздуха свинарников аммиаком и углекислым газом, содержанию свиней на цементных полах, в сырых и холодных свинарниках, авитаминозы, минеральное голодание. От общей заболеваемости на долю респираторных болезней приходится 30-32%. (Антипов В.А., 1989; Ноздрин Г.А., 1996; Зухрабов М.Г., Софронов В.Г., 2001; Донник И.М., Шкуратова И.Л., 2003; Дорожкин В.И., 2003; Жаров А.В., 2003;).

В связи с вышеизложенным в ООО «Поливит» под руководством доктора технических наук Струнина Б.П. проведен синтез препарата «Полизон». Фосфорнокислая соль 2-амино-4-метилтио-(8-оксо-8-имино)-масляной кислоты, зарегистрированная нами в федеральном институте промышленной собственности под торювым названием «Полизон». На основе доступного крупнотоннажного производства метионина разработан четырехстадийный способ получения препарата «Полизон» с выходом 6263%. Получено наставление, утвержденное Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ от 26 июня 2002г. (протокол №2). Ретинола ацегат применяют с профилактической и лечебной целью при бронхопневмонии поросят. На основе «Полизон» и витамина Ретинола ацетат получена композиция «Полизон+Ретинола ацетат», сочетающий несколько видов фармакологической активности.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение токсико-фармакологических свойств новой композиции «Полизон+Ретинола ацетат» и его применение при бронхопневмонии поросят.

Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:

-определить острую токсичность для белых мышей и крыс.

-изучить иммунологические показатели (влияние на активность антигенспегщфических Т - супрессоров в первичном иммунном ответе; на фагоцитоз; на реакцию бласттрансформации лимфоцитов; на реакцию трансплантат против хозяина; на функциональную активность иеритонеальных макрофагов; на реакцию клеточного иммунитета; на антителообразующие и розеткообразующие клетки) -изучить противовоспалительную активность, -изучить влияние на массу внутренних органов крыс, -изучить гематологические и биохимические показатели крови, прирост массы тела и сохранность поросят.

-определить концентрацию гистамина и серотонина в крови больных бронхопневмонией поросят.

-провести гистологические исследования внутренних органов поросят. Научная повита. Впервые изучены отдельные механизмы иммунотропною действия новой композиции «Полизон+Ретинола ацетат». Выявлены противовоспалительные свойства. Изучено влияние на массу тела и внутренних органов крыс. Проведены комплексные исследования по изучению гематологических и биохимических показателей крови поросят. Определена концентрация гистамина и серотонина в крови больных бронхопневмонией. Впервые проведены гистологические исследования легких поросят, при применении новой композиции Полизон+Ретинола ацетат.

Теоретическая и практическая значимость. Выполненные исследования и полученные результаты позволили предложить композицию как конкурентоспособный препарат для повышения резистентности организма и лечения бронхопневмонии. По результатам исследований оформлена заявка на изобретение № 2005137095/13(041387) от 06.02.2006 (Способ применения композиции Полизон+Ретинола ацетат при бронхопневмонии). Получено наставление от 26 июня 2002 г. Департамент ветеринарии, сертификат соответствия РОСС RU. 11096. В10347.

Основные положении, выносимые ни защиту:

-о фармакологическом спектре и механизме иммуномодулирующего действия композиции «Полизон+Ретинола ацетат».

-о степени безвредности композиции «Полизон+Ретинола ацетат».

-о возможности использования композиции «Полизон+Ретинола ацетат» для лечения бронхопневмонии поросят.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и получили положительную оценку на:

- Международной научно-практической конференции «Наука -сельскохозяйственному производству и образованию» (Смоленск, 2004);

- XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2005);

- Всероссийской научно-практической конференции «Современное развитие ЛПК: региональный опыт, проблемы, перспективы» (Ульяновск, 2005);

- XVII Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2005);

- Международной научно-практической конференции «Проблемы и перспективы ветеринарии в XXI веке» (Улан-Удэ, 2005);

- Международной конференции «Средства и методы обеспечения экологической безопасности» (Астрахань, 2005);

- Всероссийской конференции «Перспективные направления научных исследований молодых ученых и студентов Урала и Сибири» (Троицк, 2005);

- 17-й международной научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2006);

- Всероссийской научно-практической конференции «Перспективы агропромышленного производства регионов России в условиях реализации приоритетною национальною проекта «Развитие АПК» (в рамках XVI

Международной специализированной выставки «АгроКомнлекс-2006») (Уфа, 2006). опубликована в рецензируемом журнале: - Экологические системы и приборы № 9 - 2005. - С.56-57. Настоящая работа выполнена в соответствии с тематикой научных исследований ФГОУ BIIO «Башкирский государственный аграрный университет» (номер государственной регистрации 01.86.0-07.68.78).

Публикация результатов чередований. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Внедрение результатов исследований: опытно-производственные испытания проведены в СПК «Колхоз Октябрь» Кугарчинскою района, в ИИ «Ханафина Ф.З.» Уфимского района Республики Башкортостан.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения, включающего 155 источников, из них 122 отечественных и 33 зарубежных авторов. Работа изложена на 116 страницах машинописною текста, содержит 28 таблиц и 10 рисунков.

5. ВЫВОДЫ

1. Применение композиции Полизон+Ретинола ацетат с лечебной целью в дозе 5мг/кг+550 МЕ/кг приводит к морфофункциональному восстановлению структуры легких поросят, а также значительному снижению воспалительной реакции.

2. Введение в рацион поросят композиции Полизон+Ретинола ацетат оказывает положительное влияние на пророст массы тела и сохранность поросят.

3. Композиция Полизон+Ретинола ацетат относится к средствам, препятствующим освобождению из сенсибилизированных тучных клеток и базофилов - гистамина. Соотношение серотонина и г истамина в крови после лечения поросят композицией Полизон+Ретинола ацетат составило 1:0,50.

4. Введение в рацион композиции Полизон+Ретинола ацетат в дозе 5мг/кг+550 МЕ/кг оказывает положительное влияние гематологические и биохимические показатели крови больных бронхопневмонией поросят о чем свидетельствует незначительная эозинофилия, моноцитопения сопровождающаяся лимфоцигозом, увеличением общею белка, альбуминов, резервной щелочности, снижением глобулинов и СОЭ.

5. При использовании в качестве флагогена дрожжей, нитрата серебра, яичного белка, формалина композиция Полизон+Ретинола ацетат проявляет большую противовоспалительную активность, чем ортофен широко применяемый и в медицине и в ветеринарии.

6. Реализация иммуностимулирующею действия композиции Полизон+Ретинола ацетат осуществляется путем усиления активизирующего влияния на процесс фагоцитоза нейтрофилов, стимуляции бласттрансформации лимфоцитов, стимуляции прироста числа антителопродуцентов на фоне субоптимальной иммунизации мышей и повышения уровня сенсибилизированных лимфоцитов, чго выражалось в увеличении количества розеткообразующих клеток при этом не оказывая существенного влияния на активность клона антигенспецифических Т - супрессоров.

7. Среднесмертельная доза композиции Полизон+Ретинола ацетат составила: для белых мышей - 2028,5+ 58,53 мг/кг; для белых крыс -2677,5+84,46 мг/кг, согласно ГОСГа 12.1.00.7-76 композиция Полизон+Ретинола ацетат относится к III классу токсичности (малоопасные вещества).

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Композиция Полизон+Ретинола ацетат рекомендуется для применения в свиноводстве в качестве препарата, повышающею резистентность организма, для лечения бронхопневмонии поросят и ростостимулирующего средства.

Препарат рекомендуется применять в дозе 5мг/кг + 550 ME в течение 5-15 дней с лечебной целью в зависимости от тяжести заболевания.

Композиция Полизон+Ретинола ацетат применяется для улучшения и поддержания продуктивного здоровья животных.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ данных ветеринарной статистики и многочисленных литературных источников свидетельствуют о том, что респираторные болезни, в структуре заболеваемости молодняка занимают второе место после болезней желудочно-кишечного тракта (Кондрахин И.П. и др., 2000).

Болезни дыхательной системы являются причиной падежа, ослабления и торможения роста и развития молодняка, увеличения расхода кормов, уменьшения ценности животных в продуктивном периоде (Бобиев Г.М с соавт., 2000).

Особенно большой экономический ущерб наносит бронхопневмония молодняка. Значительную роль в развитии болезни играет неполноценное и несбалансированное кормление молодняка. Особенно важна обеспеченность животных каротином или витамином А, при недостатке которого реснитчатый эпителий дыхательных путей заменяется на плоский многослойный. (Абрамов С.С. и др., 1990).

В результате проведенных исследований установлено, что композиция Полизон+Ретинола ацетат относится к III классу опасности (малотопасные вещества) согласно ГОСТа 12.1.00.7-76.

В процессе заболевания бронхопневмонией подавляется митогениндуцированная лимфокинпродуцирующая активность Т-лимфоцитов крови больных поросят.

Снижение в процессе заболевания уровня миграции лейкоцитов в реакции торможения миграции лейкоцитов с антигеном из легочной ткани свидетельствуют о нарастании сенсибилизации Т- клеток по отношению к ткани легких, а также о развитии аутоиммунных процессов в организме больных животных. При этом имеет место у1нетение рецепторов Т-лимфоцитов, что выражается в подавлении розеткообразующей функции этих клеток in vitro (Крячко О.В.,1999).

Влияние композиции Полизон+Ретинола ацетат на активность антигенспецифических Т - супрессоров изучали в первичном иммунном ответе. Количество антителопродуцентов во всей селезенке у гипериммунизированных доноров при применении композиции Полизон+Ретинола ацетат составили 66950,0+5483,6 у реципиентов от 1ипериммунизированных доноров (контроль супрессии 52928,0+4136,3), у реципиентов от неиммунизированных доноров 93929,0+ 4426,5, соответственно индекс супрессии в I группе - 0,29, во II - 0,47, а в III -0,42.

Композиция Полизон+Ретинола ацетат не оказывает сущеегвенного влияния на активность клона антигенспецифических Т- супрессоров, так как перенос спленоцитов от гипериммунизированных доноров не изменял уровень АОК.

Важным аспектом поддержания иммунного гомеостаза организма является фагоцитарная активность нейтрофилов. При иммунодефицитах может нарушаться фагоцитарная функция нейтрофилов, в результате чего наблюдается повышение концентрации циркулирующих иммунных комплексов (Маянский А. П., Маянский Д.Н., 1981), расстройство захвата микробов, это может быть следствием ослабленного метаболизма при активации нейтрофилов (Fulop Т et.al.,1985).

Повышение фагоцитарною индекса достигается за счет увеличения числа активных фаюцитов, а фаюцитарного индекса за счет работающих клеток и их индивидуальной активности, а также способствует повышению фагоцитарной активности нейтрофилов, за счет увеличения среднего числа активных фагоцитов и интенсивности фагоцитоза. Усиление фагоцитарной активности нейтрофилов при применении композиции Полизон+Ретинола ацетат, по нашему мнению, связано с анаболическим эффектом Полизона.

Процесс превращения лимфоцитов на искусственной питательной среде в различные промежуточные формы называют - бласттрансформацией (РБГ). Морфологическая трансформация лимфоцитов может быт г» индуцирована специфическими и неспецифическими стимуляторами. К последним относят фитогемагппотинин (ФГА), представляющий белок растительною происхождения. При индукции иммунною ответа лимфоидные клетки, отвечая бласттрансформацией, обуславливают развитие специфической иммунологической реакции организма на антиген.

Таким образом, иод влиянием композиции Полизон+Ретинола ацетат происходит активация субиопуляции Т - клеток с хелперной активностью, а также повышение функциональной активности Т- лимфоцитов, проявляющаяся усиленным бластогенезом тимоцитов. Индекс стимуляции составил при применении композиции в дозе 2 мг/кг+3000 МЕ/кг - 4,3± 1,5, а в контроле 3,2+1,4.

Оценку действия композиции Полизон+Ретинола ацетат на эффекторную способность Т- лимфоцитов в реакцию трансплантационного иммунитета осуществляем воспроизведением феномена «Трансплантат против хозяина» (РТПХ). Эта реакция происходит за счет включения двух субпопуляций лимфоцитов, предшественников Т-эффекторов РГГГХ, и Т -амплификаторов, как результат реакции происходит накопление зрелых Т -клеток. Увеличение количества клеток в лимфоидных органах (в селезенке или лимфатических узлах) происходит не только вследствие пролиферации введенных лимфоцитов, но и в результате размножения собственных клеток реципиента (Маянский А.И., Маянский Д.И.,1981)

Композиция Полизон+Ретинола ацетат не изменяет реакцию «Трансплантат против хозяина» Р ПIX. Средний индекс реакции по массе у композиции Полизон+Ретинола ацетат равен 4,91+0,49, а у Полизона 4,99+0,53. Нами изучено влияние композиции Полизон+Ретинола ацетат на некоторые функции макрофагов: способность к фагоцитозу частиц латекса, восстановление нитросинового тетразолия (НСТ) в диформазан, а так же лизосомальную активность этих клеток.

Композиция Полизон+Ретинола ацетат в дозе 2мг/кгКЗОООМЕ/кг стимулировала не только активность, но и интенсивность фагоцитоза, что нашло отражение в повышении фагоцитарного числа (4,59+0,39 композиция Полизон+Ретинола ацетат; контроль - 3,91+0,32);

Нами отмечено регулирующее влияние на мононуклеарные фагоциты композиции Полизон+Ретинола ацетат при введении в дозе 2 мг/кг+3000 МП/кг. При этом композиция Полизон+Ретинола ацетат повышала количество макрофагов, фагоцитирующих частиц латекса, не изменяя фагоцитарного числа. Композиция Полизон+Ретинола ацетат увеличивала содержание клеток с отложением диформазана в цитоплазме и повышала индекс активизации макрофагов в НС Г - тесте.

Направленность действия композиции Полизон+Ретинола ацетат на перитонеальные макрофаги в системах in vitro и in vivo совпадала.

Действие композиции Полизон+Ретинола ацетат на клеточный иммунный ответ оценивали в реакциях гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана и динитрофторбензол на мышах линии C57BL, СБА.

Соединение вводили внутрь одновременно с сенсибилизирующей дозой динитрофторбензол. Композиция Полизон+Ретинола ацетат не оказывает влияния на развитие реакции гиперчувствителыюсги замедленного типа к ДНФБ у .мышей.

Актуальной задачей современной фармакологии является поиск путей регуляции иммунитета лекарственными средствами. Большой интерес она приобрела в связи с детальным изучением биохимических процессов, лежащих в основе иммунных реакций. Перспективным в этом отношении является изучение иммуннотропной активности комггозиции 11олизон+Ретинола ацетат.

Интенсивность гуморального иммунного ответа оценивали по содержанию антителообразующих (АОК) и розеткообразующих (РОК) клеток в селезенке мышей, а также антител-агглютининов в сыворотке крови после иммунизации животных эритроцитами барана.Введение композиции Полизон+Ретинола ацетат мышам линии СВЛ проводили в индуктивную фазу иммунного ответа, начиная со дня иммунизации и в дальнейшем в течение 5-ти последующих дней. При оптимальной антигенной нагрузке иммунностимулирующий эффект композиция Полизон+Ретинола ацетат оказывала при применении в дозах 3 мг/кг +3000 МЕ/кг (34065,0+3012,0 в контроле 13592,0+2000,0). На фоне антигенной стимуляции меньшим т количеством эритроцитов барана (5x10 клеток) усиление антителообразования достигалось в дозах 2мг/кг + ЗОООМЕ/кг, при этом число антителообразующих клеток в селезенке увеличивалось в среднем 1,5 раза (88695,0+10255,0 в контроле 56000,0+4822,0). Композиция Полизон+Ретинола ацетат и Полизон повышают уровень сенсибилизированных лимфоцитов, что выражается в увеличении количества розеткообразующих клеток. По сравнению с контрольной группой композиция Полизон+Ретинола ацетат значительно увеличивает количество розеткообразующих клеток. (60,3+5,32, в контроле 26,7+2,11). В результате исследований установлено, при использовании в качестве флагогена дрожжей, нитрата серебра, яичного белка, формалина, композиция Полизон+Ретинола ацетат проявляет противовоспалительную активность, выше чем у ортофена широко применяемого и в медицине и в ветеринарии.

Видимо, способность композиции Полизон+Ретинола ацетат активизировать регенерацию связана с разными механизмами. Влияние на пролиферацию обусловлено анаболизирующим действием Полизона, а противовоспалительный эффект является следствием стимуляцией надпочечников. Сотрудниками Всесоюзною научно-исследовательского института незаразных болезней сельскохозяйственных животных (Шахов А.Г., с соавт.1990, 1991) предложены антибактериальные препараты для лечения бронхопневмонии свиней путем пероральною их применения (фрадизин, роватизин, динамутилин, фуракрилин, сульфален).

Определеиыми бактериостатическими действиями обладает фрадизин. Авторы рекомендуют ею применение (Фрадизина-5 в дозе 2 г/кг, Фрадизина-10 — 1 г/кг) поросятам, больным бронхопневмонией, с кормом в течение 10-15 дней способствует выздоровлению 91,1% животных.

Высокий терапевтический эффект достигается при применении комплексною препарата роватезина , назначаемого в дозе 100 мг/кг один раз в день в течение 10 дней. Выздоравливает 66,7-85,7% животных. Фуракрилин по своей антибактериальной активности превосходит фармазин. При применении ею в дозе ЗОмг/кг живой массы в течение 10 дней по 20 мг/кг. Терапевтическая эффективность составляет около 80%.

Должанов II.Б. (2001),Соколов В.Д. (2002), в опытах на лабораторных животных, собаках и молодняке сельскохозяйственных животных, установил, что после 5-кратною введения пневмонина в оптимальных дозах, в крови достоверно увеличивается содержание общею белка, эритроцитов, лизоцима, фагоцитарная активность нейтрофилов и бактерицидная активность сыворотки крови, что способствует выработке защитных сил организма и повышения его устойчивости к воздействию патогенной и условно-патогенной микрофлоры и вирусов.

В начале опыта в группе животных, где применяли композицию Полизон+Ретинола ацетат были следующие показатели: эритроциты-5,2+0,34 млн/мкл, лейкоциты - 17,4+1,23 тыс/млн, гемоглобин - 73,4+3,15 г/%, базофилы 2,1+0,21%, эозинофилы 12,1+1,10%, юные нейтрофилы 3,1+0,31%), палочкоядерные 6,5+0,51%), сег ментоядерные 34,1+2,25%), лимфоциты 39,6+3,12%, моноциты 4,0+0,31%). После лечения композицией Полизон+Ретинола ацетат (5мг/кН-550МЕ) на восьмой день произошло уменьшение процентного содержания эозинофилов с 12,1+1,10%) до 11,1+0,65%), и увеличение процентного содержания сегментоядерных нейтрофилов с 34,1+2,25% до 35,3+2,14%, лимфоцитов с 39,6+3,12%) до 43,6+3,41%, моноцитов с 4,0+0,31% до 4,3+0,32%.

На пятнадцатый день, после применения композиции Полизон+Ретинола ацетат процентное количество эозинофилов снизилось до 10,3+0,64%, моноцитов до 2,3+0,22%, а лимфоцитов увеличилось до 48,2+3,04%. Необходимо отметить, что лимфоциты имеют непосредственное отношение к иммунобиологической защите ор1анизма и отражают степень ее развития. Обобщая результаты наших исследований можно заключить, что применение композиции Полизон+Ретинола ацетат в дозе 5 мг/кг + 550 МП/кг, оказывает положительное влияние на метаболические процессы, а это в конечном итоге отражается на состоянии больных животных.

Анти1 истаминные вещества входят в группу средств, объединенных по принципу противоаллергическою действия. Аллергические состояния распространены очень широко. К ним относятся крапивница, экзема сенная лихорадка, сывороточная болезнь, аутоиммунные заболевания и другие.

Считают, что в развитии многих аллергических реакций немедленною типа большую роль играет освобождение из тучных клеток и базофилов I истамина, брадикинина, серотонина, простагландина и других биологически активных веществ. При аллергиях замедленного типа обнаружены иные медиаторы аллергии: фактор, угнетающий миграцию макрофагов или лимфоцитов, лимфотоксины, бластогенный (митоюнный ) фактор и др. В развитии аллергии немедленного типа важное значение имеет гуморальный иммунитет, в частности антитела, которые являются продуктами В -лимфоцитов. Основная роль в развитии аллер!ии замедленною типа отводится клеточному иммунитету за счет 'Г - лимфоцитов.

Высокое содержание гистамина в крови регистрировали во время осложнений и приступов болезни (повышение температуры тела, кашель, одышка, лейкоцитоз, увеличение скорости оседания эритроцитов и носовые истечения.) По-видимому, гистамин в крови в момент выраженных клинических симптомов увеличивается за счет их выброса тучными клетками. В отношении серотонина в крови аналог ичную закономерность не выявили. Отношение серотонина и гистамина равно 1:1,28. выявленные изменения в обмене гистамина и серотонина свидетельствуют о том, что организм животных отвечает совокупностью приспособительных реакций, предотвращающих возможный сдвиг в составе внутренней среды. В ткани лег ких здоровых кроликов содержалось 2,26±0,35 мкг/мл i истамина, печени - 4,52±0,13, желудка - 1,12±0,05, двеннадцатиперстной кишки - 1,14±0,02, тощей кишки - 1,34*0,12, ободочной кишки-1,42±0,33, и скелетной мышцы -5,12±0,34 мкг/г. В исследуемых тканях больных кроликов отметили незначительное повышение концентрации гистамина (от 1,24 до 2,35%). В скелетной мышце, наоборот, выявили уменьшение его на 9,34%. Уровень серотонина в тканях ле[ких здоровых кроликов равнялся 5,66±0,15мкг/г, печени - 12,12±0,98, желудка - 7,40±0,38, двеннадцатиперстной кишки -5,39±0,79, тощей кишки - 5,56±0,43, ободочной кишки - 5,48±0,25 и скелетной мышцы - 7,83±0,86 мкг/г.

Катаральная бронхопневмония (неспецифическая, очаговая, катаральная пневмония) - это наиболее часто встречающееся заболевание, характеризующееся восполнением отдельных легочных долек или их групп с наполнением альвеол не свертывающимся экссудатом, состоящим из отслоившихся эпителиальных клеток, плазмы и кровяных телец. Болезненный процесс развивается обычно вследствие распространения катара бронхов на соответствующие легочные дольки или одновременно с бронхиолитом, поэтому и называется бронхопневмонией (Данилевский В.М., 1967., 1983., Абрамов С.С.,1986.,Кориков П.Н., 1990.)

Бронхопневмония характеризуется воспалением бронхов и паренхимы легких, расстройством кровообращения и газообмена с нарастающей дыхательной недостаточностью и интоксикацией организма. Ню болеет молодняк всех видов животных в возрасте от 20 суток до 3-х месяцев преимущественно ранней весной и поздней осенью (Матюшев П.С., Самарина М.Н., 2001). А в условиях жаркого климата наиболее часто в июне-августе (Кондрахин И.П. и др., 2000).

По данным Сухова Н.М.(2003) имунокорректирующая сыворотка влияет на общую резистентность организма, профилактируег респираторные и желудочно-кишечные заболевания поросят, повышает прирост их живой массы.

Поросята от А-витаминозных свиноматок рождаются нежизнеспособными, малоподвижными, с пониженным аппетитом. Впервые дни жизни поросят у них наступает расстройство функции желудочно-кишечного тракта (понос), а позже они заболевают бронхопневмонией. Душейко А.А.(1989).