Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГЕННЫХ СВОЙСТВ ГЕРПЕСВИРУСОВ ПЕРВОГО ТИПА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И ЛОШАДЕЙ

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО» ВЕТЕРИНАРИИ имени Я. Р. КОВАЛЕНКО (ВИЭВ)

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ АКАДЕМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ИМЕНИ ЛЕНИНА (ВАСХНИЛ)

На правах рукописи Для служебного пользования

Экз. № 000031

ОСМАЕВ Аута Лечиевнч

УДК 619:616.98:578.825.15-085.371:636.22/28

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГЕННЫХ СВОЙСТВ ГЕРПЕСВИРУСОВ ПЕРВОГО ТИПА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И ЛОШАДЕЙ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология и микология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва— 1986

Работа выполнена в отделе вирусологии Всесоюзного ордена Ленина научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии имени Я. Р. Коваленко.

Научные руководители — кандидат ветеринарных наук Н. Н. Крюков, доктор ветеринарных наук К. П. Юров.

Официальные оппоненты — доктор ветеринарных наук, профессор Лактионов А. М.

кандидат ветеринарных наук, старшей научный сотрудник Иванов В. С.

Ведущее учреждение — Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии.

Защита состоится « » 1986 г. в часов

на заседании специализироваиного совета Д 020.28.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всесоюзном ордена Ленина научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии имени Я- Р. Коваленко (109472, Москва, Кузьминки, ВИЭБ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ.

Автореферат разослан с » 1986 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат ветеринарных наук

Ф. Г. Терешков

І. ОВШ.ХШКГЕРЇЇСїИКА РАБОТЫ

Актуальность теми. В'основнюс направленнях экономического а социального развития СССР на 1986-1990 гг. и на период до 2000 года, принятых на ОТ съезде КПСС, указано, что основной задачей агропромышленного комплекса является достижение устойчивого роста сельскохозяйственного производства, надежное обеспечение страны продуктами питания и сельскохозяйственным сырьем, объединение усилий всех отраслей комплекса для получения ; высоких конечных результатов в соответствии р Иродовольствен-ной программой СССР.. Осуществить меры ускорения дидашческого развития и роста эффективности отраслей животноводства создани-■ . ем крупных животноводческих комплексов. Однако, несмотря на ' значительные технические и экономические'преимущества крупных* , комплексов до производству мяса, высокая концентрация животных в таких хозяйствах при нарушении технологии содержания может .приводить к отрицательным последствиям, одним из которых является распространение вирусных респираторных инфекций телят.

Во всех странах с*, индустриальным .выращиванием и откормом крупного рогатого скота заболевания респираторного тракта пред. ставлгаит значительную экономическую проблему ( Hamdy a.b., 1966; Pierson VaiT С.А., 1965; Thomas L.fl., 1973).

' Наиболее часто-этиологическими агентами яв л, потея: вирус ; . ' инфекционного ринотрахепта - пустулезного вульвоиагиігата (ИРТ-ШВ), парагряппа-3 (ПГ-3), даарог (ВД-БС) я аденовирусы ( Daw-'"/■ son P.S., ÜTiriiy-Shire J.H., 1973; Bosenauist B.D., Dobson A.W,, /1974).' ■' : /'■.: V. • ; ' '.; . ; ' ■; .

Для профилактики респираторных заболеваний телят широко

используют вакцинацию .животных различными вакцинами (Сюрин В.Н., у. 'к Ott. ■ ./ ■

РГАУМСХА ны<ян К.А. Тнмирмем ЦНБ ныени H.H. Ж«лмном

2 ' ' 1976ï Сукатоэ И., 1977; Андреев S.B., Г978; Крюков H.H., Зуди-лина 3,<$,, Ярных Е.В., Ветеркия A.C., 1980; Ludovic В., 1979; Zvsreich і:-, Vascobüinic S., Iluggeien С., 1975).

Для профилактики респираторной формы ИРТ-ЩВ - инфекцаон-ного ринотрэхеита крупного рогатого скота (ИРГ) в нашей стране разработаны живая в инажтивированная вакцины (Крюков H.H., Бел-ккна Н.М., Семегошін А.Л,, 1972; Сюрин В.Н. и др.,,1976).

При этом во всем мира, яе прекращаются исследования по совершенствованию методов и средств профилактики ИРГ крупного рогатого скота. Одним из перспективних направлений в этой области: может быть применение гетерогенных вакцин. Обоснованность исследований по гетерогенной иммунизации определяется наличием антигенных и ишуногенных связей у ряда представителей герпетических вирусов. Гетерогенные вакцины в ряде случаев нашли широкое применение в ветеринарии и медицине (вирус оспы коров - для иммунизации против оспы человека, герпесвирус индеек - для вакди-нопрофилактакя болезни Ьїарека у гшпляг).

По мнению Майера А* Сi960), гетерологичние (гетерогенные) вавдины вызывают, в.отличие от гомологичных вакцин,-более сла-бцй иммунитет, однако, оял же имеют значительные достоинства. Презде всего, отсутствует опасность восстановления вирулентное^ ти, устраняется возмосшость поствакпянальныэс инфекций и эмбрзо-ггатий. Гетерологичннй вакцинный иташ может вытеснить вирулентные штаммы и, благодаря этому, даде в стойко пораженных регио-. нах достигается состояние благополучия по данному заболевании, Йце одно преимущество гегерологичных вакцин заключается в том, что не происходит затруднений в серологическом диагнозе и контролировании эпизоотического процесса, тогда как после вак-гзааізш.гоиологичшіми ваэданвми иногда невозможно бывает провес-

та различие меяду поствакцпналытпп антитела:.® я антпт&л&ми, оброзовавшимпся после заражения.

Цель работы. Установить возможность профилактика ХІРТ крупного рогатого скота путем применения гетерогенно;; вакцини.

- Задачи по сіл едован :тя. Для достижения указанной цели нообхо-,®шо йыло решить слеяущшэ задачи :

изыскать гетерологичпий вирус, п еэсдективлый для лспользования его в качестве тт/упогеиа при инфекционном ринотрахеи-те крупного рогатого скота ;

. ' - изучить динамику образования антител и форжровапие иммунитета к* вирусу ІГРІ у телят ара г око- л. гетерологпчной ¡типизации;

- изучить реактогенность п стабильность готерологичного вируса дои телят.

Научная ^ овизна. Впервые установлена перекрестная ш.эдн о-генная связь шаду "вирусами ЕРТ и ршюшіевмонии лошадей (ИШ). Доказано, что прививка телятам вакцшшйго вируса ринопнашо-ппи лоїзадей создает у них состояние павосприикгсивостн к инфекционному рииотрахеиту крупного рогатого скота. Получены экспо' римантальные .доказательства формирования гетерологичного (видового) иммунитета,к ннфеяцзокному ринотрахежгу при различных методах прививки (интраназально, парентерально) ъагаршиого вируса ринопновданш лошадей.

Практическая цшность, Разрс*5отан кетод гетерогенной вак-дпнации.крупного рогатого скота.против инфекционного ринотра-хеита вирусвакцнной ринопневмошш лошадей из шташа СВ/69, обаспечиваквдій 'со'здаиие устойчивости к ІІРТ независимо от состояния пассивного иэдкитвта. ., . ■. . - ■■' і >\ П^даояенная :длягетервлогпчной Ешунизацпи вакцина аре-

актогеяна я безопасна для телят при различных методах приїде нения. . ■.■'..' ■ '■'■..

На "Способ про<5алактіші инфекционного рішотрахвита крупного рогатого око-га" получено авторское свидетельство за № ІІ87303 от 22 июня 1985 г.

На занзіту выносятся следующие положения: .'■'--■'

- экспериментальные доказательства наличия перекрестных . шлкуногенных связей ы&жду вирусами инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота а ринопневмокии лошадей; ' ■

- разработка метода гетерологичной (видовой) иммунизации,

«

крупного рогатого скота протлв инфекционного ринотрахеита вакциной против ринопневмонии лошадей; '

- доказательство эффективности и безопасности гетерологич- ' ной вакцины для профилактики инфекционного ринотрахеита іфупно-го рогатого скота; '

- обоснование применения гетерологичной вакцаны против ринопневмонии лошадей для шлиуниэации молодняка крупного рогатого ' скота против ИРГ с учетом их возраста, иммунного статуса» способа и кратности вакцинации,' ,

Апробаїстя работа. Материала диссертации доложены иобоужде-ни на заседаниях Ученого соиета ЕйЭВ в 1984 и 1965 гг. На' "Способ профилактика инфекционного ринотрахеита крупного рогатого • , скота" подучено авторское свидетельство за & ІЇ87303 от 22 июня 1985 г.

Обт-ем и структура диссертации. Диссертация изложена на 107 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследования, обсуждения, выводов,, практических предложений, приложения. Работа иллюстрирована 14 таблицами. Список литературы вклвчаег 260 источника, в том числе

75 отечественных и 185 зарубежных райот.

' 2; СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ■

■ ' Материалы и методы

Вирусы. В работе использовали вакцинные шгачмы вируса ; ШЛ СВ/Б9 (Юров К.П., Криков H.H., Надточей Г.А., 1982), вируса ИРТ "ТХ-А ВДЭЗ В-2" (Крюков H.H., Белхяна Н.М., 1978) в ви: " де лиофально высушенных промышленных серий препаратов по иэго- ' ■ ' товленаю и контролю сузсой культуральной аттенуированкой вакцины против рияопяевионии лошадей" и "Временное инструкцией по изготовлению и контролю сухой аттеяуироваяной вакцины против j, \ инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота". ' ; - Вирулентные штаммы вирусов: штамм ТНЛ-2 ИРГ крупного рогатого скота с титромЮ5'5 - ICp'^ ЩИ^о/ілл; этот же штамм, I адаптированный к сирийским хомяка» и белым мшам; штамм вируса ранопнвшошш лошадей, пвхогешшй для сирийских хомяков.

Культури клеток. В исследованиях использовали первично тршюинязировакяые, культуры клеток почек змОриовов: свиньи (ПЭС), коров <ПЭК), телят (ПТ) н их субкультуры. I*;. Подопытные животные. Опыты проводились, на 80 телятах 3-6-

месячного возраста дарно^пестрой породы, у которых отсутствова-'"ли специфические гуморальные антитела к вирусу ИРТ (серонега-■:.■■'■• тивнне) и.57 сирийских хомяках I-2-недельвого возраста. . ' Реакгогенные свойства вакшш против инфекционного ршо-

: ■ трахеита крупного рогатого скота и рмнопиевмонии лошадей оггре-;; - -Двляли введением препаратов в различных дозах внутримышечно, і подкояшо и'аппликацией аа.слизистую оболочку^носовых ходов. . -;;-.-. ' Учитывали кліцгическуЕ:;'реакции на введение ^препарата .'в течение .■ л;7 ^ 30 дней..путемгежедневного,-,иамерёвия ^температуры тола подопыт-

-••У: ; .. .,■: ■'■.-..¿к.

є

яых животных утром и вечером» осмотром видалых слизистых оболочек веруллх днхэтольных путей, конъюнктивы и влагалища, налн-*сш виделониД из носовой полости и их характера, кашля, а текла проводила подсчет количества лейкоцитов в крови.

Для оценка клинической реакцій телят на контрольное зара-■ кете в вирулентным вирусом :їРТ щиалзляли 20-бальную шкалу (Бел- ; цша H.U., Крйков Н.Н:, 1374).

Антигенные свойства вакцинных штажов против РПЛ и ИРТ при различных дозах и способах инокуляции оценивали по динамике ан-титолообразоваккя. Титры антител г. вирусам ИМ и ШТ'в сиворотках крови определяли в реакции нейтрализации (РН). : ''

Напряженность кмг,:ушітета проверяли путем контрольного заражения телят эшгзоотлчосіаїм эвдусои ИРТ после ижунлэацип. ;

3 опытах на лабораторных животных (сирийских хомяках) для контрольного заражения использовали адаптированные к этим/ япвотным штаїяш вирусов рлиопнэвуонкн лошадей и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. _

Ста тле тете окая обработка результатов. Статистячаскуга обработку результатов проводам по методу,описанному Лаишш Г.Ф.

РЕЗШ,ТЛТЫ 1ЮСШ0ЕАНЙ

Доказательства э&тюктквностк гатерологлчной :. ткунпзедш в опитах на золотистих сдрпЛскта '. ■ ." хомяках

Для получения предварительных данных о зацитком эффекте гстэролсггчной ш.2.^низаі2х провели опыты на сирийских золотистых хомяках 2-недельного возраста.В первом опыта 5 хомяков ім-з провали вирусвакцдноИ против риноянввглоНЕи лосадой подкожно в доза O.SxIO5 ТЦДдрАїл, 6 хокяков вилуяизировали вирус-

вакциной против инфекционного рппотрахоита крупного рогатого скота аналогично в такой лз дозе, 9 холмков оставались в контрольной группе,которым вводили надосадочную жидкость неэара-леиной культуры клеток. На 12-й день опитних и контрольних животных заразили адаптированна к ним вирусом инфекционного

с

ринотрахеита путам подкожного введения 0,5 мл с титром 10

тцд5С/ш,

Во втором опыте использовали 37 хомяков. ІЗ животник пглму-ниэировали вйрусваїщиной против инфекционного ринотрахеита крупного. рогатого скота в дозе 0,5x10® ИИд^Ли подкожно. Вторую группу хомяков из 13 животных иммунизировали внрусвакцкноії против ринопневмонии лошадей в такой кэ дозе. IX ходиков елуапли контролем. На 12-й день ответных обеих групп заразили адаптиро-ваннш к ним вирусом ринопнввмонии лозіадей в дозе 0,5 х 10^ ТЦП^о/ь'Л подкояно. Перед контрольным заражением все хомяки обеих опытов были трехкратно 'обработаны иммуно.цеиресантом по методике Семенчеяко О.Г.СІ385). Защитный эффект по заболеваемости составил 60 и 66,7$. ■

. Бол за выраженный защитный эффект полутон во втором опите. Так,из 13 хомяков, иммунизированных вакциной против ИШ и зараженных гомологичный, адаптированным к ним вдрусо:л ряиопневмо-нии ло'ладеП, нп один хомяк не заболэл. Защитный эффект гомологичной иммунизации составил ІСС^. Из 13 хомяков, іи>;лу;інзпрован-ных вакциной против ПРТ п заразашшх гвтерологичнщі, адаптированным л ним вирусом ринопневмонии, 2 хомяка забодали и выздоровели на 5 сутки. Все IX контрольних хомяков заболели п 9 пз юзе пали. .

Полученные результати дополщип ношогочнелекные сообща- ; '

"."■•-, ' ч /**■' ^ *

' ** '/Г^ * * V'

пил за до 6 (шних авторов о наличии шшог шіш оЗцах •

• ' . - \ - * • В . ' • л ■ ' - . V <' - >

Экспериментальное изучеіпіе гетврологичной •

иммунизации телят против ИРГ

В последующих опытах выясняли возмо.тлость гатерологичной , иммунизации крупного рогатого скота против инфекционного рино-трахеата путей вакцинации животных аттенуированным вирусом ри-нопневмонии лошадей, '

Опыт X. Девять телят в возрасте 4-6 месяцев раздалилп яа три группы. Трех телят (группа I) иммунизировали внутримышечно. вирусвакциной против РПЯ'в дозе 2 х І05 ТЦД5д/ыл за две недели до заражения вирусом ИЇТ. Четырем телятам второй группы вакцину инокуляровалл в той же дозе за двое суток, до заратения (двум ■ телятам - интр&назально, двум - внутршлышечно). Двух телят третьей, контрольной, группы не иммунизировали. У телят посла введеная вирусвакцина отсутствовала как местная» так и общая реакции. " ' '■ ■ .

Для определения зажгного эффекта всех телят заразили ин-траназально вирулентны?.! штаммом ТНЛ-2 вируса ИРТ крупного рогатого скота в дозе по 2 х іФ ТЦДдоМЛ.

У телят первой группы, инфицированных через 14:суток .после шялунизащш, наблюдали слабую реакцию на э кспериментальнов за-' ракепае в виде кратковременного повшения температуры тела до . 40,6°С, в течение 4-5 суток слабую гиперемий слизистых оболочек носовых ходов, незначительное сюгеение аппетита при общем ... удоьлетворительном состоянии (табл. I).

, У телят второй группы, заратчных через двое суток после инокуляции вакцинного вируса НІЛ, отмечали умеренную реакцию с повышенном температуры тела в течение 3-5 суток до 40,6°С, га-переікв к мелкие эрозии на слизистых оболочках носовых ходов,.

Таблица І

Результаты контрольного заражения телят вирусом ПРГ, иилушгзироЕагашх вакциной против ИІЯ

Кол-во Доза вакцины Реакция Д;:и Рааісц:ія Кликиче-

JWS телят ~ на еш:- лм,;ушізацк- на кон- спая ре-

групп 4ЦА50 цану ей с зяра- трольноз акщія в

кешіем зараліе- баллах пае

1 3 2хЮ5 нет 14 слабая 4

2 4 2x10®' нет 2 умерен- 8

пая

3 2 контроль - - тязелая 17

снижение аппетита, учащенное дыхание к редкий кашаль прп удовлетворительном общем состоянии. Эта реакция бьиа оценена как-умеренная в G-9 баллов.

У 11 еижу ннзпр ова иных телят третьей, (контрольной) группы отм?чали тялелую рзаяцшо (17 баллов) с вцра-коиншж клиническими -признаками инфекционного ршотрахэлта: повшенсе температуры . тела в течение 8-9 cytoic до 41,0°С, пшералию слизистой оболочки носовых ходов; "саливацию, угнетенно, отказ от корма в течение 1-2 дней,'Одышку, кашель, некротические налояения на сли-: зистой оболочка noca, эрозии.

При серологическом исследование, результата которого представлен» в табл. 2, ввдно, что у всех телят (за исключением од. ного аз группы І) после прививіс 'им а тт еиунр ованного вируса ри-нолпеамонгл в течениз.дюух недель не обнаружено антител к вирусу : ЕКіТокдаоїшого рішотрахепта. В проба сиворотки крови одного .. теленка группы X обнаружены нейтрализующие антитела в титра 1:2 :С0 ЇЦГлг/ми апруса-ЯРТ.. , Бкрус ршопк егглонпи - лошадей

против ICO ТЦГ.5(/іаі апруса-ЯРТ. Вирус р-диопиоатлонгог- лоаадеа

■■■/.-•■■■.■л.'

Таблица 2

Динамика нейтрализующее антител к вирусу 137 после вакцинации телят аттенуярованнш вирусом РМ я контрольного заражения вирулентным в:трусои КРТ

ГГ Кол-во 1 'Ул ¿и* Т Титр^ антител в 'Лог^ после

за^ш вгкцлгшда (дни) заражения (дни)

2 - 4 7 14 : 4 7 10 18 +{Лог2)

I 3 г/и н/и 0 0 1:2х* 0 1:4 1:32 1:106,67 +0,33

ё 1 в/п 0 в/а н/и н/и 0 * 0 1:12 1:60 +0,25

0 ' 2 0 0- 0 о 0 0 1:4 1:6 +0,5

зкрозан-ниэ

Примечание : в/м н/и 'О

X)

внутримышечно ; не кссладовали ; антитела не обнаруженц ;. титр адтктел.1:2 у одного теленка.

вызвал образование гомологичных нейтрализугадах антител 7 трех телят в титре 1:2 - 1:4 (в среднем 1:2,7) на 14 день после иммунизации, что указывает на активное действие вируса КІЛ на иммунную систему телят.

Как видно из таблицы 2, заражение иммунизировании* геторо-логичноЯ вакциной телят вирулентным вирусом ИРГ вызвало у них выраженный гуморальный ответ. Наиболее высокий уровень антител обнаружен у телят первой грушш, иммунизированных внутримышечно за 2 недели до збфажения их вирусом ИРТ - составил в среднем по группе 1:106,67 или 6,67 Iog + 0,33 и Р < 0,005. У телят, иммунизированных ивтраназально и внутримышечно за 2 дня ' до заражения вирусом ИРТ (группа 2) также обнаружены гаруснейт-рапизующіе антитела, но в более низком титре 1:56 и 1:64 или 5,75 loe + 0,25 и 6¿0 I06+ 0,06 я Р < 0,05 соответственной У контрольных неишунизярованных телят после заражения их вирулентным вирусом ИРТ обнаружены антитела в низком титре на 10 день, к 18 дню титр их составил 1:6 или 2,5 loe ± 0,5 Р<0,01. Следовательно, гетерологячный вакцинный вирус ГОЛ, введенный телятам, обеспечивает выраженную защиту их от заболевания после заражения вигіулентнігл;вирусом ИРТ и не вызывает у телят нежелательных местных и обшдх реакций.

. Опыт 2. Во втором опыте изучали защитный аффект при ИРТ в зависимости от кратности иммунизации телят вирусом РПЛ в срока контрольного заражения. Вакцину вводили в дозе 2 х ТЦДдц. Исследования провели на J"-ти серонегативных к вирусу ИРТ телятах, которых разделили на 5 групп. Четырех телят первой группы иішунизировали внугрлшшечно двукратно с интервалом : в 14 дней вакшной РПЛ. Заракение проводили вирусом ИРТ через • 14 *суток июле второй прививки агтенуированіюго штамма; пятерых

кивотпшс 2-й группы им^/нпздрозалн внутримышечно той не дозой - внрусваюушц однократно и зараяали через 28 дней; четырем телятам 3-й группы валюшу шіокулцровалн внутрямшечно за 5 суток до контрольного зарсжзігаї; двум телятам 4-Й группы через 15 часов после зараженій вз:рулеитнку вирусом ІІРТ ннокуллровали внуг-рпглсізчно пр::в;ів очную дозу аттеиупроаашого штаагла вируса РИК; , три таїепка пятой группы были контрольными.

После за рад ошм вирулентным вирусом КРГ у н евакцшшрован-них телят (группа 5) через 2 суток паявшись клинические признали экслерпцэптального рдлотрахента: повішенке тендера туры тала на 3-4 суті«:, которая удоршгеалась до еосьізі дней, гиперемия слизистой оболочки носа, учащенное дішшиз. Телята были угнете--ни, плохо поедали корм, у них наблюдался кашель. 7 двух жав от- ..■ них па третьи сутки пояс:ошсь накротпчасіше иалояеяпя в пред-' двери;: носа* Па 9-Л день общее состояние аквотиых стало еохя.й-лпзоватьсл. Реакция йа контрольное заражение оценена в 18 баллов (тяжелая).

Телята первой и второй і*руші» иыцукпзкрованпые двукратно и однократно, и заразенкые через 14 и 28 дней после однократного п повторного введениявакцины,реагировали кратковременным повше ниєм температури тела, слабой гиперешей слизистой оболочки но- ' са при хорозем обдам состоянии. -

Сильную реакцию, незначительно отличающуюся от реакции у нез&кцднированкнх телят пятой (контрольной) группы, проявили телята чэтвдртой группы, которым вакцину ввели через 15 часов после зяргіжокдя вирулентным вирусом ІІРТ. ' ■ 1

В этом опыте, как и в предыдущем, было показано, что яа-рэптеральпое введение готэрологгчной вагапшы не вызывает у животин отрицательных реаіішй. Засттный эффект примэнешш вакци- "

ІЗ

ни выраяен при одно- и двукратном введешщ за 14 и 28, и в малой степени за 5 дней до контрольного заражения вирулентным вирусом ИРГ.

Одним из факторов зашиты при гетерологичной иммунизации является иммуномодулирушдао действие гаруса НІЛ. Иммунизация этим вирусом стимулирует икмунокомплшзнтную систему телят, в результате этого гуморальные антитела'после заражения вирусом ИРТ появляются в более ранние сроки а в повышенном титре.

Опыт 3. Цель третьего опыта заключалась в сравнительном изучении защитного действия, реактогенкых и иммуногешшх свойств взкцин против РОЛ а НЕТ, эффективности комбинированной вакцинации,' а также. влияния пассивного иммунитета против ИРТ на последующую иммунизацию гетерологичной вакциной.

В опыта использовали 27 сероаегативных к ИРТ телят в возрасте 5-6 месяцев, которых разделила на 9 групп по 3 животных в каждой. Животных первой группы иммунизировали вакцаноЯ против РПЛ внутримышечно в дозе Й х ХСг'-ТЦДэд за 17 суток до контрольного заражения; животным второй группы через 7 суток после иммунизации вакциной протяв НШ аналогичным способом привили вакцин? против ИРТ в дозе. 2 х 10? ТЦДэд внутримышечно. Контрольное заражение телят провали через 10 дней; телят третьей.группы вакцинировали вакциной против ИРТ в дозе 2 х І03 ТЛДдд с последующи заражением вирулентным вирусом ИРТ через 17 дней; телят четвертой группы иммунизировали аналогично вакциной против ИРТ. Через 7 дней ввела вакцину против НШ в дозе 2x10т5 ТОДдр внутримышечно с последующи контрольным заражением через 10 дней;' яивотншс пятой груши вакцинировали' вакциной против ИРТ в' дозе' 2 х id? TiyT-Q д заразили через 17 дней; телятам шестой группы ввели по 50 мл специфической сызоротки против '/?Т с

14 '.■ .V .

титром 1:64, подошло. Через 3 суток их иммунизировали вакциной против ШД в дозе 2 х 1С? ТЦ%о внутримшпечно о последую. шил контрольным заражением через 14 дней; телятам седьмой группы ъзели такую яе дозу специфической сыворотки. Через 3 суток им поивили вакцину против ИРГ в дозе. 2 х 10? ТЦДд0 и через 14 дней заразили вирулентным вирусом ИРГ; телятам восьмой группы . ввели специфическую с'їворотку и через 17 дней заразили вирулентным вирусом ИРГ; телята девятой группы служила контролем."

На введение гетерологичной вакхщга против ПІД и специфл-, ческой сыворотки у телят Я0 наблюдали видимих изменений общего состог^ия. Животные, иммунизированные гомологичной вакциной против "ДРТ реагировали кратковременным повышением температуры тела до 40,5°С при- удовлетворительном общем состоянии.

После заражешія вирулентным вирусом ИРТ;ко1ггрольные, не-иммунизированныеживотные проявили типичную клиническую картину экспериментального ринотрахеита. У телят, иммунизированных гетерологичной (группа. X) и гомологичной (группа 5) вакциной после контрольного заражения вирулентным вирусом ІІРТ отмечали слабую или умеренную реакщю.

Вакцинация телят гетеролоатиадой и гадолопічной вакцинами о последующей перекрестной реиммунпзацией через 7 дней оказалась менее эффективной по сравнению с иммунизацией моновакхшна-ки.. У телят после введения сыворотки к вирусу І1РІ' и.'заражения вирулентным вирусом (группа 8);.такясе отмечали относительную устойчивость к заболеванию.. Телята, обработанное специфической сывороткой и через 3 дня иммунизированное гете-юлогичнойвакци-. ной перенесли контрольное заражение легче, гто указывает-'на от*

сугстшв нейтрализации вируса: РШІ. Более тяжелое заболевание; регистрировала у телят после.введения.спепи^нчеохой сыворотки,

■" .. ■ -У - ' ■■ У'

о последующей пакцинацлей гомологичной вакциной, что объясняется взаимной нейтрализацией вируса п антител к нему.

Серологические исследования:(табл. 3) свидетельствуют, что сыворотка крови телят первоЗ группы, иммунизированных однократно гетерологлческой вакциной, гапет низкую нейтрализую- ■ цую активность. Титр'антител составил 1:2,и 1:4 на 7-й и Х7-и дни.После контрольного заражения титр антител к десятому дню составил 1„;26,6, достигнув уровня, создаваемого гомологичной вакциной с последующим контрольнымзаражением. Телята I и 5 ■ групп проявили слабую юш умеренную клиническую реакцию на контрольное заражение (Р < О.С05 и Р< 0,025 соответственно).

Сочзтанная перекрестная нгллунизация гетер©логичной и малых доз гомологичной вакцин (группы 2 и 4)не- вызывала отклонений от нормального физиологического состояния и не обеспечила заметного повышения титров антител к вирусу ИРТ. Однако глвот-ние отих групп перенесли сравнительно легко контрольное зараяэ-ние вирулентном вирусом образованием антител в довольно высоком татро на 10-й день (Р< 0,025 и Р < 0,01 соответственно).^

Малая доза гокологичко!! закэрнк (группа 3)» по сравнению с оптимальной дозой (группа 5) не обеспечила надежной защиты животных от-.зауакенин вирулентным вирусом, уровень антител при этом был ниже (Р< 0,005 и Р< 0,025 соответственно).

Спетафпчоская сыворотка, введенная тигсятм за 17 дкзй до контрольного заражения (группа 8), обладала заметным защитным эффектом (Р < 0.0С.5) по сравнению с контрольными гСЭОТННМК 9-й группы (Р < 0,01). Дополнительное введение гетерологичной вакцины теляг?м, обработантгл сывороткой (группа 6),пргшоло к стимуляции ¡¡кого ответа посла контрольного заражения. Эти ;k:;eoti!L9 легчг: г: о з он если эар«он1:е (Р ^ 0,01).

-.::.'--у-за результатов ] :с с." ел о эал; г;"?, г: 0.47 чоу.шЫ в

' < г

і'. г.. - ^ • ¡* -V ,-С ■•І-"

2л:

- Ї

їС.Х л - А '

Й^'-'.' 8

Тайлииа

Титры антител в сітороткз крови телят к вирусу ИГР после шкунизацпи и контрольного зарэизяия

Титры антител после ( дни) :

иьотнизаіпга

заражения 7 10

1;26,6

1:3,3 1:18,7

1:2 1:3,0

1:3,3. 1:13,3

Г:2,0 1:24,0

+(Лог2)

о

Примечание : В ошіте использовано 27 телят по три животных в каждой группе,■

J7

предыдущих опнтах, четко прослеживается закономерность, отражающая стимуляцию кминного ответа организма с помощью гетэ-рологпчного вируса при последующем заражении телят вирусом КРТ.

В связи с'.этим провели опит на 13 телятах, которых разделили на S групп. Трех телят первой группы иммунизпровали гете-рологичной вагацшой против ЩИ подко&ко двукратно с интервалом * 37 дней; трех' телят второй группы иммунизировали той же дозой вакцины однократно, подкожно; трех толят третьей группы иммунизировала гетерологычноЗ ваявдшой аналогично,череэ 37 дней их вакцинировали гомологичной' ваюршой против КРТ в дозе 2x10® двух телят четвертой группы иммунизировали вакциной против ИРГ в дозе по 2 х ICp TUH^q; два теленка пятой группы были контрольными, .

Через 15 дней после вакцинации или ревакцинации всех теплят Заразила вирулентным вирусом КРТ в дозе по 2 х Ic£iU%q интраназально.

• Вакцинированные гомологичной вакциной телята на заражение их вирусом ИРТ реагировали кратковременным поамсешем температуры тела, признаками слабо выраженного ринита при удовлетворительном общем состоянии. В пробах сыворотки крови, полученных на 15 дс^іь, антитела к вирусу ИРТ не обнаружены у телят первой группы или обнаружены в очень низком титре (2 и 3 групп), за исключением телят четвертой группы, вакцшшрованных оптимальной, дозой гомологсчзой вакцины, титр, антител у них составил 1:6, У 3-х толят первой;группы, ионизированных гетерологич-ной вакциной на 37-й день обнаружены антитела в титра 1:2.Пос-ле ревадакиавдп на 15-й день (52-й день 'после первой им,ty низа- , ции) титр антител у них составил 1:4. Г телят третьей группы титр антител ^составил 1:2,7, а после регагтуниэацил гомологяч-'

ной вакциной он повысился до 1:24.

У иммунизированных и ретлмушзпровашшх телят гетероло-гичной и гомологичной вакцинами реакция на контрольное зараяе-ние была слабой иди умеренной.

Результаты опыта свидетельствуют о том, ■ что гетеродагич-ная иммунизация телят в указанные сроки обеспечивает зааситу их от заболевания ИРТ. Ревакцинация таких телят гомологичной 1 вакциной (интервал в 5 недель? или заражение вирулентным вирусом ИРТ приводит к повышению'титра антител.

Изучение стабильности гетерологичной вакцзны против HIS при пассировании на телятах

Отсутствие реверсии или возврата к исходному состоянию. приобретенных аттенуировавным вирусом свойств ослабленной вирулентности характеризует ег? стабильность, что достигается серией пассажей на естественно восп^пмчивьсс или невосприимчивых животных по отношении к гомологичному или гетерологичному штаммам соответственно. Согласно требованиям для ветеринарных, биологических препаратов (Селиванов А,3. с соавт., 1980) предусмотрено проведение 6 пассажей.

Стабильность аттенуированного штамма вируса РПЛ изучена ранее сотрудниками лаборатории вирусологии ВйЭВ на естественно восприимчивых животных жеребятах я, о учетом этих данных,' . разработана и утверждена нормативно-техническая документация на производство и применение вкрусвакгошы против ринопневмонии лошадей. . ; ;.-.:'.

Для изучения стабильности: этого , штадана: l.^n пассировании , : на естественно невосприимчивых животных провели его испытание на 12 телятах 3-4-месячного возраста', - серонегативных к вирусу ■' ■ ■■■■ -„'•vif '-г ••.. ' •• . --. . ■■' .■ ■■'■

ИРГ по следующей схеме:

. 1-Й пассах. Двум теляїам инокулировали вирусвакцкну НІЛ в дозе 2 х іФ ТЦДдо/мл иятраяазально и подкожно в дозе 5 х'иР ТЦ^о/ш каждому телешу.

. . 2-й пассаж. На вторые сутки в tío:tc к этим телятам перевеля двух новых телят и содержали их совместно в течение трех суток, затем удаляли и содержали изолированно. За время совместного содержания от телят, инокулированных вирусом 1-го пассажа ежесуточно собирали носовую слизь и вводили ее в носовые ходы телятам для второго пассажа. На 2-е сутки от телят, инокулированных вирусом 1-го пассажа, получили кровь по 5 ил и ввела подкожно телятам дая 2-го пассаяса.

По этой схеме провели 6 последовательных пассадеЙ, при этом установлено, что вакцинный вирус НІЛ при пассажах на теля-,-гах не повышает вирулентных свойств для нах, остается стабильным. Вирус реизолируется из секретов носовой полости, но не из крови, только до второго пассажа, затем элиминируется. Несмотря на то, что вирус РЇЇЛ реизолировали от телят до 2-го пассажа, репликации его в организме не происходит, что подтверждается отсутствием специфических антител в сыворотке крови.

Таким образок, проведенными исследованиями установлена возможность стимулировать образование у крупного рогатого скота устойчивости к инфекционному рикотрахеиту путем прививки вируса, рикопневмонии лошадей (гетерологичная иммунизация).

Вакцинный штамм вируса ринопневмонии СВ/69 апатогенен для телят 3-6-месячного возраста к потенциально не опасен для них.

Гетерологичная вакцина из вируса ринопневмонии не мсжет полностью затенять собой вакцинные препараты гомологичного вз-

І 20

руса, которые стимулируют формирование наиболее продол*птел£г ного и полноценного (гуморального, клеточного) иммунитета, однако в определенной эпизоотической ситуации гетерологичиая вакцинация имеет свои преимущества, из которых основными, іхо нашему мнению, являются следующие:

- иммунизация сборного поголовья телят в промышленных комплексах мясного направления .с разнообразным иммунным статусом к ИРТ, и при наличии напряженного пассивного щолунпт&та;

- вынужденная иммунизация при возникновении вспышки инфекционного ринотрахепта; иммунизация условно благополучного поголовья ** угрожаемой зоне; ;;■"'■

- проведение радикальных ■ оздоровительных мероприятий, целью которых является полное освобождение животных данной популяции от возбудителя ИРТ. . ■

> 4. В Ы В О Д Ы -

1. Вирусы ринопневмоняи лошадей к инфекционного ринотра- . хеита крупного рогатого скота идают иммуяогеинуи связь, вияв- : лязмую перекрестной віздунизацией животных. . '

2. Иммунизация теляг хквоЯ вакшшоЯ против рияошешонии ' лошадей создает у них защиту от заболевания инфекционным рано- : трахеитом. ■:;.}. '''".-■■-'■".■.' '■'■

3. Защтний эф|вкт при однократнойгетвралогичной антракт ^ назальной шлцунизацяи отшчали в тачвяиа 2-23 дней, прндвук-. ратной иммунизации - до 52 суток {срок наблюдения). Напряженность иммунитетов указанные сроки аналогична иммунитету," соз-; і даваемому тшутазавдей *ивой вагаіиной прогив к«'|екциояного, ри-

вакцинамз- (против рино-

і .,

> .:

пневмонии лошадей и инфекционного рішотрахеита крушого рога-*того скота) иена о эффективна в сравнении о прививкой одной из

НИХ. '

5."Наличие у талят пассивноприобретешшх антител к вирусу инфекционного ринотрахента не оказывает существенного влияния на формирование иммунитета после ввздания вакцины против рино-пневмонии лошадей.

6, Устойчивость-телят к инфекционному ринотрахепту обеспечивается, по-видимому, меточным иммунитетом. У телят; иммунизированная: гетерологичиой вакциной, гуморальные антитела к ви-ЕГсу инфекционного рийотрахеита отсутствуют или выявляются в

' низком титре. '

.. . ?. Вакцина против ринопневмонии лошадей является.модулятором иммунитета при инфекционном ринотрахеит«. У имиунизирован-. днт телят гетеродогачной вакциной после иммунизации кх гомологичной вакциной или заражения вирулентным вирусом инфекционного ринотрахаита существенно (в 8-Ю раз) повышается титр гуморальных антител в сравнении с нешлмушэированнымя животными.

8. Вакцинный штамм СВ/69 вируса ринопневмонии лошадей апа-тогенен для телят 4-6-месячного возраста. .

1 1 <ПРЛКТ»ГСЕСККЕ ПРВДКСЕІІКЯ .

Разработан мзтод гетерологичиой вакцинации крупного рогатого скота против инфекционного ринотрахеита вирусвакциной ■ против ринопневшнші лошадей из штамла СВ/69; обеспечиващий создание устойчивости к ИРТ независимо от состояния пассивного иммунитета. .

На "Способ профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота" получено авторское свидетельство за

№ 1187303 от 22 июня 1985 года.

Список работ, опубликованных . "

по теме диссертация

1. Иммунизация телят против ИРТ гетерологичнш вирусов Новые средства профилактики инфекционных болезней7 с.-х. животных, 1384, вш. 55; с; 14-19. .

2. Образование гетерогенного иммунитета у телят,иммунизированных против инфекционного ринотрахеюта вакцинным вирусом' Ш^/Новне средства профилактики инфекционных полезней с.-х. животных, 1985» вып. 55, *шсть П; с. 76-79.

3. На "Способ профилактики инфекционного ринотрахеита. крупного рогатого скота".* Авторское свидетельство * ІІ87303 от 22 июня 1985 г. (в соавторстве:.Крюков Н.Н,', ЮрсвК.П;). .