Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Сравнительная характеристика микобактерий туберкулеза маралов и крупного рогатого скота, схема дифференциации туберкулиновых реакций

На правахрукописи

ЕМЕЛЬЯНОВ Игорь Викторович

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКОБАКТЕРИИ ТУБЕРКУЛЕЗА МАРАЛОВ И КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, СХЕМА ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ТУБЕРКУЛИНОВЫХ РЕАКЦИЙ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Барнаул 2005

Работа выполнена в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства СО РАСХН и ИВМ Алтайского государственного аграрного университета.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных

Защита диссертации состоится «13» мая 2005 г. в 10:00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.002.02 в Алтайском государственном аграрном университете по адресу: 656922, Алтайский край, г. Барнаул, ул. Попова 276, ИВМ АГАУ.

Факс: (385-2) 31-30-48.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИВМ АГАУ.

Автореферат разослан «8»04 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор ветеринарных наук,

Луницын Василий Герасимович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Никифоров Иван Порфирьевич;

кандидат ветеринарных наук Бокова Татьяна Владимировна

профессор

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В Алтайском крае, несмотря на низкий уровень поражения крупного рогатого скота туберкулезом (в среднем регистрируется по 2-3 неблагополучных по туберкулезу пункта), парааллергические туберкулиновые реакции широко распространены и отмечаются в 44 (73,3%) административных районах. При кратности диагностических исследований 2 раза в год выявляется 0,2-6,8 реагирующих на туберкулин животных, что в цифровом выражении составляет 1,3 тыс. в год.

Рядом исследователей проводился поиск методик и схем по выяснению причин туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах (Харитонов В.М.,1983; Кассич Ю.Я., Кочмарский В.А., Тихонов П.М., 1985; Донченко А.С. с со-авт., 1985, 1987). Разработаны мероприятия по дифференциации па-рааллергических и специфических туберкулиновых реакций, эффективные не только в эпизоотологическом отношении, но и позволяющие получить высокий экономический эффект (Сысоев В.А., 1985; Донченко А.С, 1988; Борисов В.А. с соавт., 1990; Кассал Б.Ю. с соавт., 1991; Максимцов О.Л. с соавт., 1991). Однако до настоящего времени нет единой системы мероприятий по выяснению причин парааллергии крупного рогатого скота и маралов к туберкулину как в регламентированном «Сборнике санитарных и ветеринарных правил» (1996), так и в других предложенных ветеринарной практике рекомендациях (1987, 2002). В регламентированном «Наставлении по диагностике туберкулеза животных» (2002) недостаточно полно представлены критерии, по которым отбирают реагирующих на ППД-туберкулин животных для диагностического убоя. В схемах определенную неясность вызывает использование симультанной пробы с КАМ без учета показателей ее производственного испытания. В связи с этим возникает трудность в достоверной оценке эпизоотической ситуации по туберкулезу в стадах крупного рогатого скота.

Следует отметить, что во многом не разрешены аспекты использования пороговых доз туберкулина (10; 5; 2,5; 1 тыс. М.Е.) в хозяйствах, где выделяют реагирующий на туберкулин крупный рогатый скот, у которого при патологоанатомическом и бактериологическом исследовании туберкулез не подтверждается. Недостаточно изучена возможность изоляция L-форм микобактерий из биоматериала от маралов и крупного рогатого скота, а также роль объек-

тов внешней среды в неспецифической сенсибилизации этих видов животных к туберкулину. Отсутствует сравнительная характеристика микобактерий, изолированных от маралов и крупного рогатого скота, и не обсуждался вопрос о последовательности применения внутривенной и глазной туберкулиновых проб с целью дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций. Также в доступной нам литературе нет данных об изучении в сравнительном аспекте сред Финн-2, Левенштейна-Йенсена и ФАСТ-ЗЛ при изоляции микобактерий из биоматериала маралов и объектов внешней среды.

Цель исследований - изучить в сравнительном аспекте мико-бактерий туберкулеза крупного рогатого скота и маралов с разработкой схемы дифференциации туберкулиновых реакций.

Для выполнения цели решались следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по туберкулезу маралов и крупного рогатого скота в Алтайском крае.

2. Выявить и сравнить видовой состав микобактерий маралов и крупного рогатого скота.

3. Определить этиологию неспецифических реакций с разработкой схе-мы их дифференциации.

Научная новизна. Выделены и изучены в сравнительном аспекте микобактерий маралов и крупного рогатого скота. Исследованы объекты внешней среды и определена их роль в неспецифической сенсибилизации маралов к туберкулину. Впервые проведена сравнительная оценка информативности специальных питательных сред (Левенштейна-Йенсена, Финн-2, ФАСТ-ЗЛ) при изоляции ми-кобактерий из биоматериала маралов и объектов внешней среды. В экспериментальных и производственных условиях апробирована и внедрена эффективная схема дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота и пантовых оленей (маралов), дана ее экономическая эффективность.

Практическая значимость. На основании полученных результатов исследований разработаны и внедрены рекомендации «Дифференциация аллергических реакций в скомпрометированных по туберкулезу пунктах» (2004), утвержденные ученым советом ВНИИПО (протокол № 7 от 26 декабря 2004 г.) и научно-техническим советом управления ветеринарии администрации Алтайского края (протокол № 2 от 18 марта 2005 г.). По материалам проведенных исследований получена приоритетная справка на патент № 2004120531 от 5 июля 2004 г.

Апробация работы. Результаты исследований доложены, обсуждены и одобрены на научно-практической конференции «Проблемы инновационного развития АПК Алтайского края в переходных условиях» (г. Барнаул, 2002); региональной научной конференции, посвященной 60-летию АГАУ «Актуальные вопросы ветеринарной медицины и их решение в современных условиях» (г. Барнаул, 2003); научно-практической конференции молодых ученых «Вопросы пантового оленеводства и болезней сельскохозяйственных животных» (г. Барнаул, 2003); региональной научной студенческой конференции «Достижения и перспективы студенческой науки в АПК» (г. Барнаул, 2003); Международной научно-практической конференции молодых ученных СО РАСХН «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученных» (Новосибирская область, п. Краснообск, 2004); ученых советах ВНИИ пантового оленеводства (2001-2004).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ.

Выносится на защиту. Характеристика эпизоотической ситуации по туберкулезу маралов и крупного рогатого скота в Алтайском крае. Данные по видовому составу микобактерий в Алтайском крае. Система ветеринарных мероприятий по дифференциальной диагностике туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота и маралов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 140 страницах и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, библиографический список, приложения. Библиографический список включает 198 источников, в том числе 42 зарубежных. Работа иллюстрирована 3 рисунками и 12 таблицами.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследования

Работа выполнена в 2001-2005 гг. во Всероссийском научно-исследовательском институте пантового оленеводства, на кафедре эпизоотологии и ВСЭ ИВМ АГАУ, в производственных условиях на фермах крупного рогатого скота и в мараловодческих хозяйствах Алтайского края. Распространение туберкулеза и парааллергиче-

ских туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота и маралов изучали аллергическими, клиническими, патологоанатомическими и лабораторными методами исследований, а также по отчетным данным Алтайской краевой ветеринарной станции по борьбе с заразными болезнями животных.

Внутрикожной туберкулиновой пробой исследовано 8510 голов крупного рогатого скота, из них 624 молодняка; 3750 маралов, из них 2361 рогач, 1251 маралуха, 138 сайков и саюшек.

Критерии проявления туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота (болезненность, местная температура, консистенция, величина утолщения кожной складки, длительность сохранения в часах) изучили на 223 животных и с целью выяснения их специфичности диагностическому убою подвергли 25 реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих животных.

Глазной пробой согласно «Наставлению по диагностике туберкулеза животных» (2002) исследовано 97 реагирующих на туберкулин животных.

В соответствии с «Наставлением по проведению симультанной аллергической пробы с применением туберкулина и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ) при диагностике туберкулеза животных» (1986-2002 гг.) и согласно санитарным и ветеринарным правилам СП 3.1.093-96 «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных» (1996) в целях первичной постановки диагноза исследовано 14 стад (5295 коров).

Градуированной туберкулиновой пробой в дозах 10 тыс. М.Е. исследовали 2862 животных, 5 тыс. М.Е. - 528,2,5 тыс. М.Е. - 160 и 1 тыс. М.Е. - 1951 животное. Аллерген водили внутрикожно, в области средней трети шеи, с правой стороны, в объеме 0,2 мл, в отдаленных друг от друга точках на расстоянии 10 см, в убывающих дозах 10; 5; 2,5; 1 тыс. М.Е. Учет реакции проводили через 72 ч.

Внутривенной туберкулиновой пробой исследовано 24 коровы из благополучных по туберкулезу хозяйств и 97 животных из неблагополучного по туберкулезу пункта непосредственно после проведения читки реакции на внутрикожное введение туберкулина. Пробу проводили по следующей методике: у животных измеряли исходную температуру тела утром и вечером, затем в яремную вену вводили туберкулин в дозе 3-5 мл в зависимости от массы тела. Температуру тела измеряли в различные интервалы в течение 24-48 ч.

При выяснении дифференциальной диагностической ценности используемых нами прижизненных методов диагностики туберкулеза (внутрикожная, глазная, внутривенная, градуированная пробы и симультанная проба с КАМ) диагностическому убою подвергли 237 голов крупного рогатого скота, и с целью выяснения эпизоотической ситуации на маралофермах постмортально исследовали 62 реагирующих на туберкулин и 43 выбракованных марала.

Для сравнительной оценки используемых в ветеринарной лабораторной практике методов индикации микобактерий согласно «Наставлению по диагностике туберкулеза животных» (2002) провели посев 86 проб биоматериала от маралов, 50 - от крупного рогатого скота и 67 - от объектов внешней среды в 2187 пробирок со средами Левенштейна-Йенсена, Финн-2 и ФАСТ-ЗЛ. Учитывали скорость, характер роста, количество колоний и показатель пророста банальной микрофлоры, результативность роста культур на средах. По методу Циль-Нильсена окрасили 784 мазка с последующей световой микроскопией.

Видовой состав микобактерий в Алтайском крае определяли у 40 культур: 17 изолированных из биоматериала от маралов, 8 от крупного рогатого скота; по 1 от овцы, дикого марала и морской свинки, 12 из объектов внешней среды (навоз, солома, пшеница фуражная, силос, грунт, трава, голубиный помет, вода из поилок). Для накопления бактериальной массы каждый штамм высевали на 5 пробирок со средами Левенштейна-Йенсена, Финн-2, ФАСТ-ЗЛ. При идентификации микобактерий использовали бактериологический метод, включающий в себя определение цвета и формы колоний, скорости роста в днях и разных температурных режимах (25, 37, 45°С) на среде Левенштейна-Йенсена, рост на мясо-пептоном агаре и бульоне. Из биохимических методов применяли тесты на определение толерантности к 5%-ному №С1, амидазной (в качестве амида служила мочевина), каталазной активности и роста на среде Левенштейна-Йенсена, содержащей 0,1%-ного натрия салицилата. Оценку бактериологических и биохимических способов идентификации проводили согласно «Наставлению по диагностике туберкулеза животных» (2002) и шире с использованием тестов, описанных в регламентированном для ветеринарии справочнике «Микробиологические и вирусологические методы исследований» (1982).

С целью изучения в сравнительном аспекте микобактерий маралов и крупного рогатого скота 136 проб от этих животных высе-

вали в одинаковое число пробирок со средами Левенштейна-Йенсена, Финн-2 и ФАСТ-ЗЛ с последующим культуральным, микроскопическим, морфологическим и биологическим тестированием.

Исследование 39 проб на наличие L-форм проводили в соответствии с «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» (2002). Материал высевали на элективную среду Школьниковой в модификации Дорожковой и среду Финн-2 с последующей световой (х 950 раз) и фазово-контрастной (х 1350 раз) микроскопией 136 мазков. Изучение L-трансформирующего действия препарата «По-пулин», проходящего производственную фтизиатрическую оценку, проводили путем высева культур микобактерий бычьего вида, изолированных от маралов и крупного рогатого скота, а также атипичных микобактерий, выделенных из объектов внешней среды и биоматериала животных, в 160 пробирках со средой Левенштейна-Йенсена, содержащей препарат в разведениях 1:10; 1:20; 1:40 и в контрольных пробирках без добавления указанного препарата.

При постановке биологической пробы использовали 154 морских свинки и 49 кроликов.

Схему диагностических мероприятий по выяснению причин туберкулиновых реакций в благополучных по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйствах разрабатывали с учетом регламентированных санитарных и ветеринарных правил (1996), «Наставления по диагностике туберкулеза животных» (2002) и результатов собственных исследований с учетом региональных особенностей парааллер-гии животных к туберкулину.

Расчет экономической эффективности предложенной нами схемы дифференциации туберкулиновых реакций в скомпрометированных по туберкулезу крупного рогатого скота пунктах проводили согласно «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (1997).

Достоверность результатов подтверждали путем статистической обработки и определения различий средних значений с помощью критерия Стьюдента. Результат считали достоверным при Р < 0,05.

Полученный цифровой материал подвергался стандартной статистической обработке в операционной системе Windows 2000 ХР на PC Pentium 4 с помощью программы Microsoft Excel 2000.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Распространение туберкулеза и парааллергических туберкулиновых реакций у маралов и крупного рогатого скота

В период 1996-2004 гг. в Алтайском крае зарегистрировано 5 неблагополучных пунктов по туберкулезу крупного рогатого скота. При этом из 700 животноводческих хозяйств различной формы собственности туберкулез ежегодно выявляют только в 1-2 фермах (до 0,2%). По результатам аллергических исследований животных внут-рикожной туберкулиновой пробой установлен высокий количественный показатель реагирования животных на туберкулин в таких неблагополучных пунктах, как «Страна советов», «Заря», «Оскол-ковский» - 15,8; 18,2 и 37,5%. Незначительный уровень (до 3,3%) реагирующих животных выявлен в индивидуальном секторе с. Уржум и ОАО «Рубцовский».

Вместе с тем на фоне единичных случаев проявления туберкулеза крупного рогатого скота все острее становится проблема парааллергических туберкулиновых реакций. По краю с 1996 по 2001 гг. в 44 (73,3%) районах выявлено 7953 реагирующих животных, в том числе по годам: 1996 - 1681 (21,2%), 1997 - 1643 (20,7%), 1998 - 995 (12,5%), 1999 - 1286 (16,2%), 2000 - 1245 (15,6%), 2001-1103 (13,9%). Удельный вес неспецифической сенсибилизации животных к туберкулину по территориальной приуроченности неоднозначен, наиболее высок в 8 районах (41,1%), расположенных в степной зоне: Рубцовском, Славгородском, Локтевском, Баевском, Табунском, Панкрушихинском, Шипуновском, Бурлинском. Остальной процент реагирующих животных (58,9%) приходится на 52 района нашего края.

На 2002 г. в Алтайском крае зарегистрировано 9 неблагополучных пунктов по туберкулезу маралов, расположенных в Алтайском, Чарышском, Солонешенском и Усть-Пристанском районах. В целом внутрикожной туберкулиновой пробой с 1996 по 2002 гг. исследовано 45344 марала. Выявлено 1399 (3,0%) туберкулин позитивных животных, из них 938 (67,1%) рогачей и 461 (32,9%) мара-луха. По годам этот показатель был следующим: 1996 - 2,4%; 1997 -4,2; 1998 - 2,5; 1999 - 1,08; 2000 - 2,4; 2001 - 0,16; 2002 - 11,1%. Пораженность животных этой хронической инфекцией за указанный промежуток времени вырос в 4,6 раза. Число маралоферм, где

установлен туберкулез, возросло с 30 (1996 г.) до 56% (2003 г.). Это произошло в связи с тем, что увеличилось количество хозяйств, где удалось, провести эпизоотологическое обследование на туберкулез всего поголовья маралов.

На маралофермах Алтайского края проблемы неспецифической сенсибилизации маралов к туберкулину не существует. Однако в части пунктов имеют место случаи реагирования животных на ППД-туберкулин для млекопитающих, у которых свойственных для туберкулеза изменений не обнаруживают, а при бактериологическом исследовании возбудитель не выделен.

Для выяснения этиологии парааллергических туберкулиновых реакций биоматериал от 28 реагирующих на туберкулин коров из хозяйств СПК «Приозерный», СПК «Новочемровский», колхоза им. «Кирова» и от 86 маралов подвергли ветеринарно-санитарной экспертизе и лабораторному исследованию на туберкулез.

На 5-22-й день из биоматериала от крупного рогатого скота изолировано 13 (46,5%) культур атипичных микобактерий, представленных следующими видами: М. капзази, М. рЫе1, М. Йауе8сеш. При этом туберкулез лабораторными методами исключен. Кроме того, у одной (3,5%) из коров, убитой с диагностической целью, на вскрытии констатировали травматический ретикулопери-кардит.

Таким образом, в 46,5% случаев этиологическим фактором, обуславливающим сенсибилизацию крупного рогатого скота к туберкулину, является персистирование атипичных и сапрофитных микобактерий в организме животных. Причиной проявления неспецифических туберкулиновых реакций также могут быть факторы немикобактериальной этиологии (травматический ретикулопери-кардит).

У маралов в 20,5% случаев источником парааллергии к туберкулину служили сапрофитные микобактерий. Их видовой состав был представлен следующими сапрофитами: М. уассае, М. Пауесзеш, М. сЬе1опе1. В отдельных случаях (5,1%) аллергические реакции у этого вида животных отмечены при переломах ребер.

Определенную роль в проявление туберкулиновых реакций у животных играют Ь-формы микобактерий. Из 18 проб биоматериала от реагирующих на туберкулин маралов изолировано 6 (33,3%) Ь-форм микобакритерий, из которых 4 (66,7%) обладали свойствами нестабильных, а остальные 2 (33,3%) представляли стабильную фор-

форму. При проведении пассажей на морских свинках 1 культура реверсировала в исходный вид на третьем, 3 культура - на четвертом пассаже.

При лабораторном исследовании 10 проб биоматериала от реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота, у которого туберкулез на секции исключен, в 3 (33,0%) случаях изолированы Ь-формы. На основании 5 пассажей на морских свинках 2 (66,7%) культуры отнесены к стабильным Ь-формам и 1 (33,3%) - к нестабильным. Последняя в организме морской свинки вызвала развитие туберкулезного процесса.

Из 11 проб объектов внешней среды, доставленных из хозяйств, где ежегодно регистрируются аллергические реакции у крупного рогатого скота, в 4 (36,4%) случаях выделены стабильные Ь-формы.

Немаловажным фактором сенсибилизации животных к туберкулину, являются объекты внешней среды, обсемененные атипичными микобактериями. При исследовании 67 проб объектов внешней среды, доставленных из 7 благополучных по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйств, в 37,3% случаев из кормов, воды, навоза, голубиного помета изолированы атипичные микобактерии.

В одном из мараловодческих хозяйств также была изучена эпизоотологическая роль объектов внешней среды в парааллергии животных к туберкулину. С территории парка для лабораторного исследования отобрали пробы почвы, сена, воды из ручья, а также соскобы с кормушек и в 25% случаев изолировали атипичных мико-бактерии.

3.2. Характеристика микобактерии, изолированных в Алтайском крас

В результате бактериологического исследования 50 проб биоматериала от реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота выделено 5 (10,0%) культур микобактерии бычьего вида и 15 (30,0%) атипичных микобактерии. Частота изоляции вирулентных микобактерии от 86 реагирующих и выбракованных маралов составила 47 (54,6%), а атипичных 8 (9,3%). Данные первичного роста, интенсивности, величины, количества колоний и пророста банальной микрофлоры изолированных культур на средах Левенштейна-Йенсена, Финн-2 и ФАСТ-ЗЛ отражены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1 Показатели культуральных свойств атипичных микобактерий на разных питательных средах

Показатели Биоматериал от крупного рогатого скота Биоматериал от маралов Объекты внешней среды

Левен-штейна-Йенсена Финн-2 ФАСТ-ЗЛ Левен-штейна-Йенсена Финн-2 ФАСТ-ЗЛ Левенштей-ка-Йенсена Финн-2

Первичный рост, суток 14,0±0,9 14,0±1,3 12,0±1,2 8,0±1,2 8,0±1,2 5,0±0,5 14,0±0,8 14,0±0,8

Рост, % 18,0±2,4 38,0±1,7 30,0±2,1 31,0±1,8 40,0±2,4 6,7±1,6 36,2±1,3 31,8±1,6

Количество колоний, шт. 1,4±0,4 2,6±0,4 X 3,8±0,8 2,4±0,7 X 2,9±0,4 1,5±0,2

Величина колоний, мм 3,0±1,7 2,1±0,7 X 1,6±0,4 1,1±0,5 X 2,2±0,3 1,8±0,4

Пророст банальной микрофлоры, % 24,3±2,8 27,2±1,7 7,6±0,8 18,2±2,4 18,2±1,9 8,5±1,5 21,1±1,4 32,2±2,0

Примечание: х - сплошной рост.

Таблица 2 Характеристика культуральных свойств патогенных микобактерий на элективных средах

Показатели Биоматериал от крупного рогатого скота Биоматериал от маралов

Левенштейна-Йенсена Финн-2 ФАСТ-ЗЛ Левенштейна-Йенсена Финн-2 ФАСТ-ЗЛ

Первичный рост, суток 27,0±3,9 27,0±3,6 16,0±4,0 39,0±1,5 36,0±1,5 22,0±1,1

Рост, % 56,6±5,4 84,0±4,6 25,0±4,7 61,0±2,6 67,9±3,3 68,7±1,3

Количество колоний 2,8±1,3 1,5±1,2 X 7,1 ±0,6 4,1±0,4 X

Величина колоний, мм 0,6±0,3 1,1 ±0.5 X 0,8±0,2 0,6±0,1 X

Пророст банальной микрофлоры, % 20,04,0 10,0±2,1 7,6±3,1 20,0±2,0 46,7±2,3 8,5±0,9

Примечание: х - сплошной рост.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что для изоляции атипичных микобактерий из биоматериала от крупного рогатого скота и маралов наиболее информативной является среда Финн-2. Показатель роста микобактерий на этой среде превосходил соответствующий на 9-20% в сравнении со средой Ле-венштейна-Йенсена и на 8-33,3% с ФАСТ-ЗЛ. При индикации ави-рулентных микобактерий из объектов внешней среды по всем изучаемым критериям эффективней оказалась среда Левенштейна-Йенсена. Рост атипичных микобактерий на этой среде отмечен в 36,2% случаев, а на среде Финн-2 - 31,8%, на среде ФАСТ-ЗЛ рост отсутствовал.

Более высокую результативность среды Финн-2 отмечали при изоляции патогенных микобактерий из биоматериала от крупного рогатого скота и ФАСТ-ЗЛ при индикации М. bovis из биоматериала от маралов. Рост вирулентных культур, выделенных из биоматериала от маралов и крупного рогатого скота на среде ФАСТ-ЗЛ, обнаруживали на 11-18 дней раньше по сравнению с Левенштейна-Йенсена и Финн-2. Вместе с тем по показателю интенсивности роста (биоматериал от крупного рогатого скота) эта среда в 3,4 раза менее эффективна в сравнении с Финн-2 и в 2,3 раза среды Левен-штейна-Йенсена. При изучении этого критерия (биоматериал от маралов) существенной разницы не обнаружено, и он колебался в пределах 61-68,7%.

По данным биологических, бактериологических и биохимических методов идентификации микобактерий из 40 отобранных для типизации культур 19 (47,5%) отнесены к возбудителю туберкулеза бычьего вида, 2 (5%) - к I группе по классификации Раньона, 1 (2,5%) - ко II группе, 2 (5%) - к III группе и 16 (40%) - к IV группе.

Культуры возбудителя туберкулеза бычьего вида изолированы из биоматериала от маралов в 16 (84,3%) случаях, от крупного рогатого скота, овцы и морской свинки - в 1 (15,7%) случае.

К I группе по Раньону отнесена М. Kansasii, изолированая из пробы навоза и биоматериала от крупного рогатого скота.

Из пробы голубиного помета выделили М. gordonae - Нгруппа.

Комплекс микобактерий avium-intracellulare - представители III группы по Раньону, изолированы из голубиного помета и силоса, отобранного с отделения молочной фермы, где отмечались неспецифические туберкулиновые реакции у крупного рогатого скота на ППД-туберкулин для млекопитающих.

Самой многочисленной в количественном отношении, обуславливающей сенсибилизацию животных к туберкулину, оказалась IV группа по Раньону. Из 16 культур сапрофитных микобактерий 7 (43,8%) отнесены к М. phlei, 3 (18,8%) - к М. flavescens и столько же -кМ. vaccae, 2 (12,5%)-к М. smegmatis, 1 (6,2%)-кМ. chelonei.

Из пробы голубиного помета и навоза выделили М- smegmatis.

Из навоза, грунта, травы, воды из поилок и 3 проб биоматериала от крупного рогатого скота изолирована М. phlei.

М. vaccae выделена из пшеницы фуражной, биоматериала маралов и крупного рогатого скота.

М. flavescens изолирована из соломы, биоматериала маралов и крупного рогатого скота.

Микобактерий М. chelonei выделены из биоматериала от маралов.

Анализируя вышеизложенное, необходимо отметить, что в сенсибилизации крупного рогатого скота к туберкулину на молоч-но-товарных фермах Алтайского края ведущую роль играют мико-бактерий IV группы по Раньону. Удельный вес этой группы сапрофитных микобактерий в парааллергии достигает 40%. Изолированные из биоматериала от маралов М. vaccae, M. flavescens, М. chelonei самостоятельного значения не имеют, так как в 33,3% случаев их рост на яичных питательных средах обнаружен вместе с возбудителем туберкулеза бычьего вида.

Проведенные исследования по изучению в сравнительном аспекте патогенных микобактерий, изолированных от маралов и крупного рогатого скота, свидетельствует о незначительном их различии по культуральным, морфологическим, тинкториальным и биологическим свойствам. Так, М. bovis, выделенные от маралов на плотных питательных средах, образуют первичный рост в среднем на 6-12 дней позже в сравнении с изолятами от крупного рогатого скота. Гибель морских свинок и кроликов, зараженных биоматериалом от крупного рогатого скота наступает на 54-61-е сутки, а инфицированных материалом от маралов - на 29-47-е сутки. Изоляты от маралов в мазках представлены палочковидными (тонкие и изящные), овоидными и кокковидными формами микобактерий, а в отдельных случаях полярно и биполярно расположенными зернами Муха. При микроскопии культур от крупного рогатого скота обнаруживали также широкую морфологическую вариабельность с небольшим числом длинных палочек с включениями зерен Муха.

Сравнительная оценка непатогенных микобактерий, изолированных от маралов и крупного рогатого скота, дает основание сделать заключение о том, что значимых различий между ними нет.

3.3. Разработка схемы дифференциации туберкулиновых реакций и ее экономическая эффективность

Результаты испытаний градуированной туберкулиновой пробы показывают, что инфицированные М. bovis животные реагировали на внутрикожное введение туберкулина в дозе 10,0; 5,0; 2,5 и 1,0 тыс. М.Е. в 100% случаев (в одинаковой степени). В благополучных по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйствах при использовании уменьшенных доз (5,0; 2,5 и 1,0 тыс. М.Е.) сухого очищенного ППД-туберкулина для млекопитающих на неспецифический фоне сенсибилизации животных атипичными М. phlei, М. kansasii, M. gordonae, M. smegmatis, М. vaccae, M. flavescens и комплексом М. avium-intracellulare отмечено снижение количества реагирующих коров от 7,5% до полного отсутствия туберкулин позитивных животных.

При изучении внутривенного введения туберкулина как диагностического теста определили, что у животных с неспецифическим фоном сенсибилизации повышение температуры тела выше границ физиологической нормы не происходило. У 19 реагирующих на внутривенную пробу животных из неблагополучного пункта количественный показатель чувствительности к этому тесту во временной период был неодинаков. На 2,4,6,8,10,12,24 и 36-м часу опыта животные реагировали в 14,4; 18,6; 19,5; 18,6; 17,5; 17,5; 15,5 и 14,4% случаев. Повышение температуры тела у зараженных М. bovis животных через 2,4, 6, 8, 10, 12, 24 и 36 часов происходило, соответственно, на 0,4±0,3; 1,2±0,2; 0,9±0,4; 1,2±0,3; 1,6±0Д; 1,0±0,2;0,3±0,3; 0,2±0,3°С.

Данные убоя 28 животных и последующего бактериологического исследования биоматериала подтвердили 100%-ную специфичность внутривенной туберкулиновой пробы.

В трех благополучных по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйствах эффективность глазного метода туберкулинизации изучили на 97 коровах, реагирующих на внутрикожную пробу. После первого введения туберкулина реагирующих животных не вы-

явили. Повторная туберкулинизация через 5 дней с учетом реакции через 3,6,9 и 12 часов дала отрицательный результат.

Бактериологическое исследование биоматериала от 11 убитых коров показало, что внутрикожные аллергические реакции были обусловлены сенсибилизацией организма животных к туберкулину за счет М. рЫе1, М. smegmatis, М, каша88И, М. £1ауе8ееп8.

Проведенные исследования свидетельствуют, что применение глазной туберкулиновой пробы с целью выяснения причин туберкулиновых реакций и исключения туберкулеза возможно. Однако значительный интервал между первой и второй туберкулинизацией в 56 дней затягивает сроки отбора животных для диагностического убоя и постановки окончательного диагноза.

В ходе апробации симультанной пробы с КАМ, используемой при первичной постановке диагноза на туберкулез, нами получены следующие результаты. В 3 (21,5%) заведомо благополучных пунктах она указывала на туберкулез, в 7 (50%) фермах дала неопределенный результат и только в 4 (28,5%) пунктах указывала на благополучие.

Таким образом, использование симультанной пробы с КАМ в Алтайском крае, где сенсибилизация животных обусловлена атипичными микобактериями М. рИЫ, М. уассае, М. аушт-т1:гасе11и1аге, М. f1avescens, М. smegmatis, М. kansasii, неприемлемо. Она не вносит ясность об истинной ситуации по туберкулезу, а только запутывает ситуацию в 71,5% случаев.

Учитывая противоречивые литературные данные о характере проявления специфических и неспецифических туберкулиновых реакций в семи предприятиях, где причиной неспецифической сенсибилизации крупного рогатого скота к туберкулину явились атипичные микобактерии, а также в благополучном по туберкулезу хозяйстве «Страна советов» (где в последующем установлен туберкулез), были изучены следующие критерии проявления туберкулиновых реакций: величина утолщения кожной складки, консистенция, болезненность, местная температура, длительность проявления в часах.

Полученные данные свидетельствуют о том, что аллергические реакции у животных при внутрикожных инокуляциях ППД-туберкулина для млекопитающих, вызванные атипичными микобак-териями кратковременны по длительности проявления (от 144 до 168 часов) по сравнению со специфическими (240 часов) и несколько отличаются от них по консистенции. У животных с неспецифи-

ческой сенсибилизацией к туберкулину, реакции в основном тесто-ватые (73,3%) и плотные (26,7%), а у крупного рогатого скота зараженного возбудителем туберкулеза, преобладают плотные (80%) и реже отмечаются в форме твердых с некрозом в центре (20%).

Из изученных нами критериев проявления аллергических проб для дифференциации туберкулиновых реакций субъективно интерпретироваться исследователями могут болезненность, местная температура и в определенной степени консистенция. Наиболее достоверным и практически объективно фиксируемым показателем является период длительности проявления туберкулиновых реакций в часах. Специфичность этого показателя по приведенным данным достигает 100%. При этом для контрольного диагностического убоя целесообразно отбирать животных, у которых аллергические реакции проявляются в форме максимально выраженного отека с длительностью сохранения 240 часов и более.

По результатам проведенных исследований разработана и апробирована в производственных условиях схема дифференциации туберкулиновых реакций.

При выяснении причин реагирования крупного рогатого скота на туберкулин в благополучных по туберкулезу пунктах в первую очередь учитывают эпизоотическое и эпидемическое состояние территории фермы, хозяйства, района.

Животных исследуют на туберкулез 2 раза в год ППД-туберкулином для млекопитающих в дозе 10 тыс. М.Е, объеме 0,2 мл. При выделении реагирующих на туберкулин коров (утолщение кожной складки до 3 мм и более) проводят внутривенную туберкулиновую пробу всем реагирующим в дозе 100 тыс. М.Е, объеме 2 мл. Реагирующий на эту пробу крупный рогатый скот с температурой тела выше границ физиологической нормы на 0,9°С и более подвергают диагностическому убою с последующей ветеринарно-санитарной экспертизой внутренних органов, лимфатических узлов и обязательным проведением комплекса лабораторных исследований. При установлении на секции у животных характерных для туберкулеза изменений оздоровление проводят, руководствуясь санитарными и ветеринарными правилами (1996) и «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» (2002).

Если реагирующих на внутривенную пробу не выявлено, то диагностическому убою подвергают коров с длительностью сохранения аллергических реакций 240 часов и более.

Если результаты патологоанатомических данных свидетельствуют об отсутствии туберкулеза, в этом случае проводят параллельное лабораторное исследование биоматериала на предмет выявления L-индуцированых форм микобактерий, вплоть до определения показателя стабильности или нестабильности. Если в 3-5-м пассаже на морских свинках L-трасформированные микобактерий реверсируют в исходную форму, туберкулез считается установленным.

При выяснении эпизоотической ситуации по туберкулезу на отдельно взятой маралоферме учитывают характер комплектования стад, закуп животных, межхозяйственный обмен, аренду рогачей-производителей, а также анализируют обстановку по данной инфекции за прошлые годы в граничащих хозяйствах и прилегающих районах. Кроме того, принимаются во внимание данные фтизиатрического исследования мараловодов.

В благополучных по туберкулезу маралофермах при постановке на зимнее стойловое содержание взрослое поголовье, а также сайков и саюшек аллергически исследуют на туберкулез. ППД-туберкулин для млекопитающих вводят внутрикожно, в область средней трети лопатки, в дозе 10 тыс. М.Е., объеме 0,2 мл. Читку реакции проводят через 72 часа, реагирующими признают животных с утолщением кожной складки на 3 мм и более. В случае выделения реагирующих на туберкулин животных с наиболее выраженными реакциями подвергают диагностическому убою с последующей ветеринарно-санитарной экспертизой лимфатических узлов и паренхиматозных органов. При установке туберкулеза проводят мероприятия согласно методическим рекомендациям «Туберкулез маралов и меры борьбы с ним» (1991). Кроме того, ежегодно проводят клинический осмотр всего поголовья маралов. При этом подозрительных по заболеванию и истощенных животных подвергают обязательному убою и секционному осмотру.

Если при постмортальном исследовании характерных для туберкулеза изменений не обнаруживают, то материал исследуют одновременно лабораторными методами на туберкулез и L-формы. В случае отрицательных результатов бактериологического и биологического методов исследований, но выделения нестабильных культур L-форм микобактерий на полужидкой среде Школьниковой-Дорожковой, которые при пассировании на морских свинках реверсируют в исходную вирулентную форму, туберкулез на маралофер-ме считают установленным.

Результаты внедрения в семи хозяйствах разработанной схемы дифференциации туберкулиновых реакций показали, что в расчете на один вложенный рубль затрат получено 21,5 руб. прибыли.

ВЫВОДЫ

1. В Алтайском крае парааллергические туберкулиновые реакции у крупного рогатого скота в 46,5% случаев обусловлены атипичными микобактериями I, III и IV групп по Раньону, у маралов -соответственно в 20,5% случаев IV группы по Раньону. Псевдоаллергические реакции в 3,5 и 5,1% случаев обусловлены воспалительными процессами. При различных сочетаниях указанных этиологических факторов симультанная проба с ППД-туберкулином для млекопитающих и комплексом атипичных микобактерий (КАМ) дает эпизоотологические неадекватные результаты: так, в 28,5% пунктов эта проба указывает на благополучие, в 50% дает неопределенный результат и в 21,5% пунктов указывает на туберкулез.

2. Животные, сенсибилизированные атипичными микобактериями, не чувствительны к офтальмопробе и внутривенной туберкулиновой пробе, больные туберкулезом реагируют на внутривенное введение туберкулина повышением температуры тела выше границ физиологической нормы на 0,9°С и более на 4-12-м часу.

3. Градуированная туберкулиновая проба на специфическом фоне сенсибилизации выявляет среди крупного рогатого скота всех больных туберкулезом животных, на неспецифическом фоне наблюдается уменьшение количества реагирующих животных. Достоверный критерий дифференциации туберкулиновых проб - длительность их проявления в часах: на неспецифическом фоне - 144168 часов, специфическом - 240 часов и более.

4. У крупного рогатого скота и маралов в 30-33,3% случаев туберкулез протекает в латентной форме. Ь-формы микобактерий в объектах внешней среды обуславливают значимый (36,4%) фон неспецифической сенсибилизации крупного рогатого скота к туберкулину.

5. Атипичные микобактерий широко распространены в почве, воде и травянистой растительности (12,5-100%), объектах внешней среды животноводческих помещений (33-100%), территорий животноводческих ферм (67%) и переносятся с популяциями голубей, обитающих на фермах (42,8%).

6. Возбудитель туберкулеза крупного рогатого скота и маралов не имеет значимых тинкториально-морфологических различий. По культуральным и биологическим показателям возбудитель туберкулеза маралов растет на специальных питательных средах в более поздние сроки (на 6-12 дней), и гибель лабораторных животные наступает в более ранний период (на 14-25 дней).

7. Для индикации патогенных микобактерий из биоматериала крупного рогатого скота и маралов наиболее информативными являются среды ФАСТ-ЗЛ и Финн-2, для атипичных микобактерий из объектов внешней среды и биоматериала животных - соответственно среда Левенштейна-Йенсена в сочетании с Финн-2.

8. Разработанная система дифференциально-диагностических тестов (критерий длительности проявления внутрикожных туберкулиновых проб, внутривенная проба, исследование биоматериала на наличие Ь-форм) позволяет констатировать истинную эпизоотическую обстановку по туберкулезу. Экономическая эффективность предложенных мероприятий составила 21,5 руб. в расчете на один рубль затрат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В хозяйствах с неясной эпизоотической ситуацией по туберкулезу крупного рогатого скота применять систему диагностических мероприятий, состоящую из следующих дифференциально-диагностических тестов: внутривенная туберкулиновая проба, длительность проявления внутрикожных туберкулиновых проб в часах, исследование биоматериала на наличие нестабильных Ь-форм микобактерий.

2. При индикации патогенных микобактерий из биоматериала от крупного рогатого скота и маралов рекомендуем использовать среды ФАСТ-ЗЛ и Финн-2. Изоляцию атипичных микобактерий из объектов внешней среды и биоматериала животных проводить на средах Левенштейна-Йенсена и Финн-2.

3. Выяснение причин туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота проводить согласно разработанным рекомендациям «Дифференциация аллергических реакций в скомпрометированных по туберкулезу пунктах», утвержденных ученым советом ВНИИПО СО РАСХН (протокол № 7 от 26 октября 2004 г.) и научно-техническим советом управления ветеринарии администрации Алтайского края (протокол № 2 от 18 марта 2005 г.).

20

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Емельянов И.В., Сысоев ВА, Луницын В.Г., Емельянова Н.А. Сравнительная характеристика специальных питательных сред при изоляции микобактерий // Проблемы пантового оленеводства и пути их решения: Сб. науч. трудов / ВНИИПО. - Барнаул, 2002. - Т. 1. -С. 360-363.

2. Сысоев В.А., Емельянов И.В., Луницын В.Г. Результаты производственной проверки симультанной туберкулиновой пробы // Проблемы пантового оленеводства и пути их решения: Сб. науч. трудов / ВНИИПО. - Барнаул, 2002. - Т. 1. - С. 330-334.

3. Сысоев В.А., Емельянов И.В., Луницын В.Г. Критерии проявления туберкулиновых реакций // Проблемы пантового оленеводства и пути их решения: Сб. науч. трудов / ВНИИПО. - Барнаул, 2002.-Т. 1.-С. 319-322.

4. Емельянов И.В., Луницын В.Г. Характеристика культур ми-кобактерий изолированных от маралов // Проблемы пантового оленеводства и пути их решения: Сб. науч. трудов / ВНИИПО. - Барнаул, 2002. - Т. 1.-С. 296-300.

5. Емельянов И.В., Луницын В.Г., Сысоев В.А. Бактериологическая диагностика туберкулеза маралов // Вестник АГАУ. - Барнаул, 2003 . -№ 1.- С. 203-206.

6. Емельянов И.В. Дифференциально-диагностическая ценность внутривенной туберкулиновой пробы // Достижения и перспективы студенческой науки в АПК: Сб. тр. межрегион, науч. студенческой конф., посвящ. 60-летию Алтайского государственного аграрного университета. - Барнаул, 2004. - Ч. 2. - С. 31-32.

7. Луницын В.Г., Сысоев В.А., Емельянов И.В., Шевнин В.М. Дифференциация аллергических реакций в скомпрометированных по туберкулезу пунктах: Методические рекомендации / РАСХН, Сиб. отд-ние. - Барнаул, 2004. -17 с.

8. Емельянов И.В. Результативность туберкулиновых проб с применением различных доз аллергена // Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых: Сб. тр. между-нар. науч.-практ. конф. молодых ученых СО РАСХН. - Новосибирск, 2004.-С. 133-136.

ЛР № 020648 от 16 декабря 1997 г. Подписано в печать 30.03.2005 г. Формат 60x84/16. Бумага для множительных аппаратов. Печать ризографная. Гарнитура «Times New Roman». Усл. печ. л. 1,0. Уч.-изд. л. 0,8. Тираж 100 экз. Заказ № / .

Издательство АГАУ 656099, г. Барнаул, пр. Красноармейский, 98 62-84-26

281

22АЛРЖ

Актуальность темы. В последние десятилетия диагностика туберкулеза во многом затрудняется проявлением парааллергических реакций у крупного рогатого скота, вследствие сенсибилизации их организма главным образом атипичными микобактериями. Отсутствие совершенных и эффективных методов дифференциации туберкулиновых реакций является причиной выбраковки среди скомпрометированного поголовья значительного количества животных, у которых на секции свойственных для туберкулеза изменений не обнаруживают и лабораторными методами диагноз не подтверждается.

Проблема парааллергических туберкулиновых реакций в отечественном животноводстве ежегодно возрастает. Так, в благополучных хозяйствах в 1994 г. выявлено в 2,5, а 2002 г. в 5,3 раза больше реагирующих на туберкулин животных, чем в неблагополучных пунктах (Найманов А.Х., 2002).

В Алтайском крае, несмотря на низкий уровень поражения крупного рогатого скота туберкулезом (в среднем регистрируется по 2-3 неблагополучных пункта), парааллергические туберкулиновые реакции широко распространены и отмечаются в 44 (73,3%) административных районах. При кратности диагностических исследований 2 раза в год выявляется 0,2-6,8% реагирующих на туберкулин животных, что в цифровом выражении составляет 1,3 тыс. в год.

Рядом исследователей проводился поиск методик и схем по выяснению причин туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах (Харитонов В.М., 1983; Кассич Ю.Я., Кочмарский В.А., Тихонов П.М., 1985; Донченко А.С. с соавт., 1985, 1987). Разработаны мероприятия по дифференциации парааллергических и специфических туберкулиновых реакций, эффективные не только в эпизоотологическом отношении, но и позволяющие получить высокий экономический эффект (Сысоев В.А., 1985; Донченко А.С., 1988; Борисов В.А. с соавт., 1990; Кассал Б.Ю. с соавт., 1991; Максим-цов O.JI. с соавт., 1991). Однако до настоящего времени нет единой системы мероприятий по выяснению причин парааллергии крупного рогатого скота и маралов к туберкулину, как в регламентированном «Сборнике санитарных и ветеринарных правил» (1996), так и в других, предложенных ветеринарной практике рекомендациях (1987, 2002). В регламентированном «Наставлении по диагностике туберкулеза животных» (2002) недостаточно полно представлены критерии, по которым отбирают реагирующих на ППД-туберкулин животных для диагностического убоя. В схемах определенную неясность вызывает использование симультанной пробы с КАМ без учета показателей ее производственного испытания. В связи с этим возникает трудность в достоверной оценке эпизоотической ситуации по туберкулезу в стадах крупного рогатого скота.

Следует отметить, что во многом не разрешены аспекты использования пороговых доз туберкулина (10; 5; 2,5; 1 тыс. М.Е.) в хозяйствах (фермах), где выделяют реагирующий на туберкулин крупный рогатый скот, у которого при патологоанатомическом и бактериологическом исследовании туберкулез не подтверждается. Недостаточно изучена возможность изоляции L-форм мико-бактерий из биоматериала от маралов и крупного рогатого скота, а также роль объектов внешней среды в неспецифической сенсибилизации этих видов животных к туберкулину. Отсутствует сравнительная характеристика микобакте-рий, изолированных от маралов и крупного рогатого скота, и не обсуждался вопрос о последовательности применения внутривенной и глазной туберкулиновых проб с целью дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций.

От эффективности использования той или иной питательной среды в процессе культивирования зависят сроки индикации микобактерий и качество диагностики туберкулеза. В настоящее время имеются различные варианты сред, как себя зарекомендовавшие (Финн-2, Левенштейна-Иенсена), так и новые (ФАСТ-ЗЛ). В доступной нам литературе нет данных, об изучении в сравнительном аспекте вышеупомянутых сред при изоляции микобактерий из материала маралов и объектов внешней среды.

Из изложенного следует, что проблема дифференциации парааллергиче-ских и специфических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота в регионе не решена еще полностью, что и явилось основанием для наших исследований. Кроме этого представлялось важным провести сравнительную оценку различных питательных сред и микобактерий изолированных от маралов и крупного рогатого скота.

Цель исследований — изучить в сравнительном аспекте микобактерии туберкулеза крупного рогатого скота и маралов с разработкой схемы дифференциации туберкулиновых реакций.

На разрешение этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по туберкулезу маралов и крупного рогатого скота в Алтайском крае.

2. Выявить и сравнить видовой состав микобактерий маралов и крупного рогатого скота.

3. Определить этиологию неспецифических реакций с разработкой схемы их дифференциации.

Научная новизна. Определена эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота и маралов в Алтайском крае. Выделены и изучены в сравнительном аспекте микобактерии маралов и крупного рогатого скота. Исследованы объекты внешней среды и определена их роль в неспецифической сенсибилизации маралов к туберкулину. Впервые проведена сравнительная оценка информативности специальных питательных сред (Левенштейна-Йенсена, Финн-2, ФАСТ-ЗЛ) при изоляции микобактерий из биоматериала маралов и объектов внешней среды. В экспериментальных и производственных условиях апробирована и внедрена эффективная схема дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота и пантовых оленей (маралов), дана ее экономическая эффективность.

Практическая значимость. На основании полученных результатов исследований разработаны и внедрены рекомендации «Дифференциация аллергических реакций в скомпрометированных по туберкулезу пунктах» (2004) утвержденные ученым советом ВНИИПО (протокол № 7 от 26 декабря 2004 г.) и научно-техническим советом управления ветеринарии администрации Алтайского края (протокол № 2 от 18 марта 2005 г.). По материалам проведенных исследований получена приоритетная справка на патент № 2004120531 от 5 июля 2004 года.

Апробация работы. Результаты исследований доложены, обсуждены и одобрены на научно-практической конференции «Проблемы инновационного развития АПК Алтайского края в переходных условиях» (г. Барнаул, 2002); региональной научной конференции, посвященной 60-летию АГАУ «Актуальные вопросы ветеринарной медицины и их решение в современных условиях» (г. Барнаул, 2003); научно-практической конференции молодых ученых «Вопросы пантового оленеводства и болезней сельскохозяйственных животных» (г. Барнаул, 2003); региональной научной студенческой конференции «Достижения и перспективы студенческой науки в АПК» (г. Барнаул, 2003); Международной научно-практической конференции молодых ученых СО РАСХН «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых» (Новосибирская область, п. Краснообск, 2004), а также на ученых советах ВНИИ пантового оленеводства (2001-2004).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации отражены в 8 научных работах. Научные исследования, изложенные в диссертации, являются составной частью научных проблем Всероссийского научно-исследовательского института пантового оленеводства, тема № 02.01.02.

Выносятся на защиту:

1. Характеристика эпизоотической ситуации по туберкулезу маралов и крупного рогатого скота в Алтайском крае.

2. Данные по видовому составу микобактерий в Алтайском крае.

3. Система ветеринарных мероприятий по дифференциальной диагностике туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота и маралов.

114 Выводы

1. В Алтайском крае парааллергические туберкулиновые реакции у крупного рогатого скота в 46,5% случаев обусловлены атипичными микобактериями I, III и IV групп по Раньону, у маралов - соответственно в 20,5% случаев IV группы по Раньону. Псевдоаллергические реакции в 3,5 и 5,1% случаев обусловлены воспалительными процессами. При различных сочетаниях указанных этиологических факторов симультанная проба с ППД-туберкулином для млекопитающих и комплексом атипичных микобактерий (КАМ) дает эпизоотоло-гические неадекватные результаты: так, в 28,5% пунктов эта проба указывает на благополучие, в 50% дает неопределенный результат и в 21,5% пунктов указывает на туберкулез.

2. Животные, сенсибилизированные атипичными микобактериями, не чувствительны к офтальмопробе и внутривенной туберкулиновой пробе, больные туберкулезом реагируют на внутривенное введение туберкулина повышением температуры тела выше границ физиологической нормы на 0,9°С и более на 4-12-м часу.

3. Градуированная туберкулиновая проба на специфическом фоне сенсибилизации выявляет среди крупного рогатого скота всех больных туберкулезом животных, на неспецифическом фоне наблюдается уменьшение количества реагирующих животных. Достоверный критерий дифференциации туберкулиновых проб - длительность их проявления в часах: на неспецифическом фоне -144-168 часов, специфическом - 240 часов и более.

4. У крупного рогатого скота и маралов в 30-33,3% случаев туберкулез протекает в латентной форме. L-формы микобактерий в объектах внешней среды обуславливают значимый (36,4%) фон неспецифической сенсибилизации крупного рогатого скота к туберкулину.

5. Атипичные микобактерии широко распространены в почве, воде и травянистой растительности (12,5-100%), объектах внешней среды животноводческих помещений (33-100%), территориях животноводческих ферм (67%) и переносятся с популяциями голубей, обитающих на фермах (42,8%).

6. Возбудитель туберкулеза крупного рогатого скота и маралов не имеет значимых тинкториально-морфологических различий. По культуральным и биологическим показателям возбудитель туберкулеза маралов растет на специальных питательных средах в более поздние сроки (на 6-12 дней), и гибель лабораторных животных наступает в более ранний период (на 14-25 дней).

7. Для индикации патогенных микобактерий из биоматериала крупного рогатого скота и маралов наиболее информативными являются среды ФАСТ-ЗЛ и Финн-2, для атипичных микобактерий из объектов внешней среды и биоматериала животных - соответственно среда Левенштейна-Йенсена в сочетании с Финн-2.

8. Разработанная система дифференциально-диагностических тестов (критерий длительности проявления внутрикожных туберкулиновых проб, внутривенная проба, исследование биоматериала на наличие L-форм) позволяет констатировать истинную эпизоотическую обстановку по туберкулезу. Экономическая эффективность предложенных мероприятий составила 21,5 рублей в расчете на один рубль затрат.

Практические предложения

1. В хозяйствах с неясной эпизоотической ситуацией по туберкулезу крупного рогатого скота применять систему диагностических мероприятий, состоящую из следующих дифференциально-диагностических тестов: внутривенная туберкулиновая проба, длительность проявления внутрикожных туберкулиновых проб в часах, исследование биоматериала на наличие нестабильных L-форм микобактерий.

2. При индикации патогенных микобактерий из биоматериала от крупного рогатого скота и маралов рекомендуем использовать среды ФАСТ-ЗЛ и Финн-2. Изоляцию атипичных микобактерий из объектов внешней среды и биоматериала животных проводить на средах Левенштейна-Йенсена и Финн-2.

3. Выяснение причин туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота проводить согласно разработанным нами рекомендацииям «Дифференциация аллергических реакций в скомпрометированных по туберкулезу пунктах», утвержденных ученым советом ВНИИПО СО РАСХН (протокол № 7 от 26 октября 2004 г.) и научно-техническим советом управления ветеринарии администрации Алтайского края (протокол № 2 от 18 марта 2005 г.).

117