Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Сочетанное применение пробиотика бифиндуибактерий и иммуномодулятора тикалина для профилактики колибактериоза у цыплят

г01,сйкиклн академия сельсзохозяпстееншх ¡¡у.Уг.

_ л . тот-ионлльнш научко-технйческйи цент »ялоитшл*

о " " санкт-петербургская государственная академия

4

, ВЕТЕРИНАРНОЙ ПКДЯДШЫ

СЕН 19П!.<

на права:; рукописи

Д2АНОВА ЗЛНИРА ФЕОДОСЬЕВНА

УДК 019:616. 9. -085. 37-004. 961.48:636. 5

СОЧЕТЛШОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ПРОЕНОТЙКА БКФИД'уНБЛКТЕРНП!-. И ¡ШНУКОИОЛУЛЯТОРЛ ТН11А/1ИНА ДЛЯ ПРО«НЛАКТИ<и1 КОЛЙБАКТЕРИОЗА V ШЛМИТ

Ю. оо. 03 - ветеринарная микробиология, вирусология.

ЭПИЗООТОЛОГИЯ. МИКОЛОГИЯ н иннунологиа

автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наго

Санкт-Петербург. 1993 г.

Работа выполнена во всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте птицеводства

научные руководители - доктор ветеринарных наук

Н. Д. ПРидыбайло; доктор ветеринарних наук, профессор л. Н. Борисенкова

официальные оппонента: доктор ветеринарных наук.

профессор А. я. Батраков; кандидат ветеринарных наук, доиент Г. И. Громов

Вгuyma.ii организация - Петрозаводский государственны» университет

зашита состоится •5л.» г. в ссгГчасов

на заседании диссертационного совета д. 120.20.02 при ианкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины во адресу: 198084, Санкт-Петербург. Черниговская ул. . 5.

с диссертацией Можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Автореферат разослан 'А-"1995 г. Ученый секрстакь диссертационного

совета, кандидат ветеринарных наук о. в. Узюиова

- 3 -

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы, в условиях проявленного ведения птицеводства птица почти полностью изолирована от естественных источников полезной микрофлоры пишееарнтельиого тракта, это приводит к замедленному Формирование нормальной микрофлоры и изменению присущего птице микробного биоценоза желудочно-кияечно-го тракта, часто действующие стресс-Факторы. столь многочисленные в птицеводстве (И. А. Болотников, 1963), вызывают снижение неспецифической резистентности организма птицы, нарушение Функции иммунной системы и усиление роли условно-патогенной микрофлор:;, в результате чего птица заболевает, к числу заболеваний, предопределенных нарушением микробного биоценоза, в первую очередь относится колибактериоз, который наносит значительный экономический ушерб птицехозяяствам (С. А. Артемьева, 1977; Н. А. Радчук, 1990).

Исследованию проблеиы колибактериоза посвяшены работы многих отечественных и зарубежных авторов, тем не менее практика не имеет надежных средств профилактики этого заболевания.

метод медикаментозной профилактики, традиционно используе-ноя в птицеводстве для профилактики бактериальных болезней и, в частности, колибактериоза, по данным ряда авторов (В. п. урбан. Н. л. Радчук. 1975) приводит к селекции штаммов кишечной палочки, обладающих устойчивостью ко многим антибактериальный препаратам, кроме того, длительное и бесконтрольное применение антибиотиков вызывает серьезные сдвиги в естественном биоценозе организма птицы. Поэтому требуется применение средств, восстанавливающих естественный биоценоз и повышающих иимуннйй статус организма птиц.

Многие авторы для профилактики колибактериоза рекомендуют применять препараты, приготовленные на основе нормальной микроФлоры кишечника - пробиотики (Б. Ф. Бессарабов. в. с. кузнецов, в. п. Редьков и др. , 1975; Е.Н.Колесова, 1961; А.Тихомирова, г.Ермакова, о. Рязанцева. 1993). механизм защитного действия г.робиотиков связывают с их колонизацией эпителия кишечника и созданием барьера против внутриклеточного проникновения патогенных бактерий, а такге с непосредственной антагонистической активностью против

кп:с в просвете кишки, некоторые авторы указывают на имнуностиму-лируюшее влияние представителей норнальноя микрофлоры (н. н. Мальцева, 1968: 1992; м. м. икарупета. Б. в. пинегин. в. Н. Коршунов. 1992). следовательно, эти микроорганизмы можно рассматривать как естественные безвредные иммуностимуляторы, селекционированные самой природой.

Б свою очередь, иммунной системе, в особенности тимусу принадлежит важная роль в регуляции качественного и количественного состава микрофлоры кишечника, так. удаление тимуса наряду с дефиците.: Т- и в-лимфоцитов, приводит к резким нарушениям микробио-целоза кишечника (Ф. ю. гариб. И. к. Адылов. И.Э.Соколова, 1991).

Для корр&каии иннунодеФшштлого состояния применяют имнуно-кодулятогы. Арсенал инмуномодуляторов очень широк. Однако, наиболее перспективными являются препараты, полученные из тимуса, они ухе дали положительный результат при Ш'именении в птидевод-стзе (Н. д. придыбаяло, 1991; н. Придыбайло. а. Иванов. 1992).

цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований явилось изучение влияния сочетанного применения про-би0тнка бпмщукбактерина сухого ветеринарного (БСВ) и иммуномо-д/лятора такглина для повышения иммунного статуса и профилактики колибактериоза у цыплят раннего возраста.

В связи с этим необходимо было решать следующие.задачи:

- определить количественный и видовой состав <>и.Фидобактерип в килечном тракте интакткых цыплят;

- изучить в экспериментальных условиях влияние БСВ и тима-лииа при раздельном и сочетзнном применении на степень колонизации сиФидобактерий в кишечном тракте цыплят и эмбрионов и на их иммунный статус:

- изучить колонизирующие свойства е. coll и испытать влияние Раздельного и сочетанного применения бсв и тималина при экспериментальном заражении цыплят раннего возраста;

- провести испытание в производственных условиях раздельного и сочетанного применения БСВ и тималина и разработать рекомендации по профилактике колибактериоза у цыплят раннего возраста.

К а у ч н а я новизна, в результате выполненных экспериментов впервые получены данные по количественному и видовому составу биоидобактерий у цыплят раннего возраста и изучено взаимовлияние пробиотика Без и иммунсмодулятора тииадпка на степень колонизации бифидобактерий в слизистой оболочке кишечника и иммунный статус организма аыплят.

Доказана эффективность введения бсв и тииалина в 17-1г-днев-ные эмбрионы с цель» более раннего заселения кишечника цыплят би-фидобактериями и повышения иммунного статуса птиц.

Исследованы колонизирушие свойства Е. сон при эксперинен-тальном колибактериозе и определено влияние как раздельного, так и сочетанного введения НОВ и тималина на эти свойства.

предложен метод сочетанного применения БСВ и тималина для профилактики колибактериоза у цыплят раннего возраста.

практические результаты и предложения по использованию материалов диссертации.

S. схема сочетанного применения БСВ и тииалина с цель» профилактики колибактериоза у аыплят раннего возраста и повышения их иммунного статуса, которая апробирована и Енедрена на лозт пл> "Воисковины" ленинградской области.

2. Рекомендовано введение БСВ и тииалина в эмбрионы 17-18-суточного возраста для более раннего заселения кишечника кыплят би-Фидобактериями и повышения их иммунного статуса.

3. рекомендации по профилактике колибактериоза у цыплят раннего возраста с использованием пробиотика"биФидумбактерина сухо-

ч

го ветеринарного - БСВ и иммунокодулятора тималина (одобрены ученым советом БКИВИП от 26. Об. 95. ).

Апробация работы, основные положения диссертации доложены ка 5 - оа межгосударственной межвузовской научко-практическои конференции "Новые Фармакологические средства в ветеринарии" (Саккт-Петербург. 1993): на научно-практической копео-реншш "Современные ветеринарные проблемы" (Каяшядорис. 1993); на методических и ученых советах Всероссийского НИВИ птицеводства (1991.1992, 1993).

Публикация. По теме диссертации опубликованы г

- б -

статьи, в которых изложено ее основное содержание и подана заяв ка на патент н 9^031387 (029780)• с положительным решением о 08. и. 94.

Объем и структура работы, диссертация из ложена на 115 страницах машинописного текста и состоит из введе н;:я, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения по лученных результатов, выводов, рекомендаций производству. Работ иллюстрирована 1б таблицами. 1 рисунком, список литературы вклю чает 173 источников, в том числе 62 источника зарубежных иссле дователей.

- г. ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ г. 1. материалы и методы исследовавания экспериментальная часть работы по теме диссертации выполни л-1сь в течение 1990-1993 года в лаборатории Фармакологии и ток сикологии и в отделе микроОиологии Всероссийского научно-иссле «¿атеяьского ветеринарного института птицеводства. В опытах ис пользовали цыплят яичного кросса 288 в количестве 1050 голов. н< л-^.-еккы:: в суточном возрасте из ГППЗ "Нагорный" и эибшоны 17-1< суточного возраста в количестве 330.

для экспериментальных исследовании подбирали цыплят в груп пы ао принципу аналогов (одинаковый возраст, пол. живая масса, условия кормления и содержания), и перед постановкой опыта дели ли их на подопытные и контрольную группы.

Б качестве пробиотика использовали "биФидумбактерин cy::oi Еегеринарный - БСВ", согласно наставлению по применению, разра бетонному в вгнки ветеринарных препаратов, утвержденному ГУВ кс; от га июля 1991. одна доза препарата содержит 100 нлн. живых би 'Н'добактерий, которые выд°лены от сельскохозяйственных животных, в условиях эксперимента бсв вьодили цыплятам в суточном возраст! через полиэтиленовый зонд в зоб, в количестве о. 05 дозы на голо ьу, растворенного в о, 5 мл водной суспензии обезжиренного сухог<

«ОЛЛКа. .

ймнуиомодулятор тималии, изготовленный заводом медипински: препаратов /'енинграяского мясокомбината им. С.Н.Кирова, назнача

ли согласно временному наставлений, утвержденному ГУБ CCCF- от 25. : 0. 90 г.

Для определения степени колонизации бифндобактеиш р кишечнике проводили выделение культуры биФидоозктегий из слизистой оболочки тонкого с толстого отдела кишечника. с этой ц°лш кусочки слизистой прополаскивали 6 раз в стерильком Физиологическом растворе, отмывали, отмытую слизистую оболочку взвешивали, гомогенизировали в стерильной ступке со стерильным песком в Ю кл ти-огликолевого буфера ipH-6.8) и готовили и? них десятикратные разведения в этом же оуфере. который способствует лучяея сохранности биФидобактерий. Из серийных разведений производили посев на среду Бпаурокка. в модификации г. и. Гончаровой (1968). посевы инкубировали в течение 46-9S часов при температуре 37°с . после соответствующей инкубации проводили подсчет выросших колоний, характерных для данного вида бактерия, пересчет их количества соответственно количеству исследуемого материала. Результата выражали в десятичных логарифмах (le кое/г).

v культур биФидобактерий, выросших на питательной среде Бла-урокка изучили культурально-морфологические и биохимические свойства по общепринятым методикам. На основании проведенных исследований выделенные чистые культуры биФидобактерий идентифицировали по классификационной схеме Митсуока (1964).

влияние раздельного и сочетанного применения Бее и тималина на иммунный статус определяли по активности T-лимФоиитов в реакции спонтанного розеткообразования с эритроцитами барака (Е-РОК) (А.С.Алиев с с о авт. , 1991). также по показателю относительной массы селезенки, который представляет" соотношение массы селезенки (мг) к массе цыпленка. Значение относительной массы селезенки в опь/е к таковому в контроле позволило вычислить селезеночный индекс. Его значение выше 1.3 является достоверным ( М. SJmonsen. 19бг).

уровень кеспеаифическои резистентности у цыплят оценивали по проценту Фагоцитоза с моноцитами крови по метолшсе, описанной Ví cal, К. R. Dietert (1989).

для исследования влияния всв и тималина. введенного как раз-

•• в -

дельно, так и в сочетании, эибрионы овоскопировали. определяли центр воздушной камеры, это место дезинфицировали, прокалывали скорлупу и в отверстие инъецировали бсв посредством иглы гг калибра. длиной г, 51 сн. затем отверстие заклеивали расплавленный парафином с фуранилинои. тииалин вводили на хорио-аллантоисную оболочку эмбриона.

для изучения колонизирующих свойств е. coll. использовали энтеропатогешшй штанм Е. coli серовара . из коллекции микроорганизмов отдела микробиологии внивип, который обладал специфическим адгезивным антигеном К99.

предварительно вирулентность культуры повилгли путем двойного пассажа на 9-суточных куриных эмбрионах (В. д. соколов с соавг.. 1980). Расчет летальной дозы проводили по нетоку кербера в модификации и. п. Асмдрина и А. А. Воробьева <19бй).

от зараженных птиц культур?, е. coli выделялась из различных локусов слизистой оболочки кишечника. Готовили десятикратное разведение на стерильном Физиологическом растворе, посев производили из серияныг. разведений по о. 1 нл на среду эндо. инкубировали в термостате при тенпературе 37° с в течение 24-46 часоЕ. У изолированных колоний были изучены морфологические, культуральные и биохимические свойства, идентификация выдепеных культур килечной палочки проводилась по классиФккадгш Ф. Кауфмана (1953).

Для определения серогрупповой принадлежности использовали агглютинирующие "6-коли сыворотки", производства Армавирской био-Фабрнкн. согласно наставлению по их применению, утвержденному губ НСХ СССР 7 января 1974 года, наличие специфического адгезивного антигена к 99 устанавливали с поношью реакции агглютинации на стекле, согласно "Временному наставлению по применению агглютинирующих сывороток к адгезивным антигенам эшерихии Кбв, К99. 9Ô7P, Г'И. ASO* , разработанному вдки прикладной микробиологии (1969).

Производственные испытания метода сочетанного применения пробиотика БСВ и иммуномодулятора тималина провели на птиаефабри-ке АОЗТ "Еойсковиды" ленинградской области на поголовье из тысяч цыплят, кросс "Бройлер -б".

Бее полученные результата экспериментальных исследований

подвергали статистической обработке. При обработке результатов использовали критерий стьюдеита. придерживаясь правил вгриаиион-иоя статистики (В. н. Еремин. 1975).

г. г. колонизирующие свойства БСВ и его влияние

на степень колонизации нативных бифидобактерий при раздельном и сочетаннок применении БСВ и тамалкна

Первым этапом наших исследований было определенна количественного и видового состава биФидобактерия в кишечном тракте ин-тактннх пмплят.

В результате исследований у 7-суточных интактнчх цыплят из ели?истых оболочек тонкого и толстого отделов кишечника биФидо-бактерий не удалось выделить. Из содержимого тонкого отдела на питательной среде высевались единичный колонии, а в содержимом толстого отдела кишечника количество бифидобактерий составило б.о 18 КОЕ/Г.

Количественный урозеиь биФидобактерип в слизистой оболочке тонкого отдела кишечника с возрастом увеличивается, так. на ii-e и г1-е сутки исследований он составил соответственно 3,0*_0, ч и 5. 0*_0, Ч 18 КОЕ/Г.

выделенные культуры бифидобактерий представляют собой неспо-рообгазтгие, гранположительные палочки по Форме прямые кги ветвящиеся (ветвление на одном или двух концах, иногда с боковым ветвлением). В питательной среде Блаурокка в модификации г. и. Гончаровой они дают рост через 48-96 часов в виде "кометы".

Изучение культурально-морфологичееккх и биохимических свойств выделенных культур показало, что в кишечном тракте цыплят встречаются разные виды бифидобактерий: в. bifidum, В. infan-tis, в. adolescent 1з. в. thermoftlum. причем в питательной среде они растут как в виде монокультуры, так и в ассоциации друг с

ДРУГОМ.

Назначение БСВ, растворенного в 0.5 м водной суспензии сбезжш-енного сухого молока цыплятам подопытной группы из расчета о. 5 нлн. ед. бифшобактерий на цыпленка в суточном возрасте и j ,—1ь!«йшен ?-и, 5-е. 7-е и 9-е сутки опыта приводило к коло-

кизации бифидовактерий к слизистой оболочке кишечника цыплят на 7-е сутки, их количество составило 2,0-3,0 о, 2 18 КОЕ/г.

после прекращения дачи препарата коли- ество выделяемых би-Фидобактегий из слизистой оболочки кишечника цыплят подопытной группы продолжало увеличиваться во все исследуемые сроки. Пик увеличения приходился на 16-е и £1-е сутки опыта (на 2, в и 3,7 ts кое/г соответственно больше, чей в контрольной группе).

Применение тималина цыплятам подопытной группы в дозе 40 мк г/к г внутримышечно в суточном и в 7-дневном возрасте не оказывало достоверного влияния на степень колонизации бифидобактерий в слизистой оболочке тонкого отдела кишечника на 11-е сутки исследования. а на 16-е и 21-е сутки исследования этот показатель был на 1,б и 1,2'1с кое/г выше, чем в контроле, сочетанное применение боб и тималина приводило к достоверному увеличению этого показателя (р<о,05), так. ка 11-е сутки исследования он составил 6, 6+..0, ^ н кое/г, т.е. на 3 1в КОЕ/г выше, чем в контроле. Наибольшее увеличение интенсивности колонизации слизистой оболочки кишечного тракта происходит на 16-е и 21-е сутки исследования. В этой группе оно было на в и 4,6 18 КОЕ/г выше по сравнению с .аналогичными показателями у пыплят контрольной группы,

таким образом, в результате проведенгых исследований установлено, что при применении БСВ в организме цыплят происходит усиление колонизирующей способности биФидобактерий. Кроме того. бсв способствует увеличению количества биФидэбактерий, поступающих с организм цыплят естественным путем, применение тималина оказывает положительное влияние на колонизирующую способность би-фидобактрии. а его сочетанное назначение с бсв значительно увеличивает степень колонизации бифидобактерий в слизистой оболочке тонкого отдела ккдечника по сравнению с применением одного БСВ. ■

2.з. влияние раздельного и сочетанного применения бсв и

тималина на иммунный статус цыплят Иммуностимулирующее влияние SCB и тималина. примененных как раздельно, так и в сочетании определяли после окончания курса ик • назначения в динамике на 11-е. 16-е, 21-е и 2б-е сутки опыта. В

- н

результата исследования установлено» что один пробиотик не дает достоверного увеличения процента розеткообрэ.зуюпшх клеток iЕ-РОК), по сравнению с их содержанием у цыплят контрольной группы, но при применении в сочетании с тииалннон он увеличивает активность розеткообразования: процент Е-РОК в этой группе на li-е сутки исследования был иа 20* выше, чгч в контроле. Применение одного тималина также увеличивает процент Е-РОК, но в значительно меньшем количестве (на 9.3'/.).

Было установлено, что максимальное увеличение количества E-fok происходит на 21-е сутки исследования. Так. в группе, где применяли всв, показатель Е-РОК составил 40. о-/., с тималином -48. ех. а в группе, где сочетанно применяли оса препарата - 72, зх, 4в ю время как в контроле он сыл равен 39, б*. на 2б-е сутки исследования показатель Е-РОК несколько снижается, но сохраняет ту же направленность.

в результате исследования относительной кассы селезенки, селезеночного индекса установлено, что на 11-е сутки исследования в группе, где применяли БСВ эти показатели увеличиваются незначительно по сравнению с таковыми в контроле (0. е+_0,2 и о, Т+_о, 1), а селезеночный индекс в этой группе составил 1>14. наибольшего увеличения они достигают при сочетаннон применении обоих препаратов (1, Н >_0, 2! I а селезеяочны» индекс при этом составил 1,71. К концу исследования т. е. на 2б-е сутки происходит наибольшее увеличение этих показателей: в группе, где применяли всв, относительная масса селезенки составила 1,9»_о.1> а селезеночный индекс - Ь-73; в группе, где сочетанно применял!- оба препарата этот показатель составил 2, 1 + _0. 3 и 1,91, соответственно; в группе, где применяли тималин. он снизился и был на уровне контрольной группы (1,1 + _0, 1).

В результате определения уровня Фагоцитоза с моноцитами крови было установлено, что во все исследуемые сроки зтот показатель был выше в опытных группах по сравнению с контролем, но его наибольшее увеличение отмечали при сочетаннон применении обоих препаратов.

таким образом, применение бсв и всв в сочетаний с тииалннон

- 1г -

повышает функциональную активность т-лимфоцитов. стимулирует им-мунс гропаую активность селезенки, что указывает на усиление напряженности клеточного звена иммунитета (Е-РОК). Увеличение Фагоцитарной активности нонопитов свидетельствует об активации в организме неспецифической резистентности, все это благоприятно влияет на организм цыплят.

2.4. Влияние раздельного и соче^анного введения БСВ и тинаюша в эмбрион на показатель степени колонизации бифидобактерии в кишечном тракте и на иммунный статус у пьшлкт

опыты проводили на эмбрионах 17-18-суточ;/ого возраста, средняя масса эмбриона составила 55 г.

В Результате проведенных исследований установлено, что ЕСв и тималин, введенные как раздельно так и в сочетанном виде не оказывают отрицательного влияния ка выводимость и выживаемость цыплят. V ник ке отмечено отклонений в анатомическом строении органов. Результаты исследования по влиянию введения одного БСВ на степень колонизации бифидобактерии в кишечном тракте выведенных цыплят показали, что процесс заселения кишечника имеет дозо-зависимкй характер, так. при введении БСВ в дозе 0. 5 млн. ед. степень колонизации бифидобактерии достигает il,2+_0. е lg KOE/r: в дозе о. 375 млн. ед. - 7.6 le КОЕ/г и в дозе 0,250 млн. ед. - г. з ls КОЕ/Г.

Сочетанное введение в эмбрион разных доз БСВ (0.5; 0.375 к о. 250 илн. ед. ) и тиналина значительно увеличивает степень колонизации бифидобактерии ü2, о; ю. 7 и а, с is koe/d по сравнению со степенью колонизации этих бактерий при иньекчш одного проби-отика.

при изучении влияния раздельного и сочетанного введения БСВ и тиналина на показатели иммунного статуса выведенных гшплят было установлено, что разде..оное введение БСВ и тималина цриводит к увеличению относительной массы селезенки в 0. б и 1.2 раза, а селезеночный индекс в этик группах составил 1.24 и 1.46 по отношен!«) к таковому у -.шляят контрольной группы, наибольшее увепа-

чение показателя относительной массы селезенки достигнуто при сочетакном введении тиналина и бсв з количестве о 37^ млн. ед. (в 1.7 раза), а селезеночный индекс в этой группе составил 1.58.

Результата исследования влияния раздельного и сочетанного знедеиия этих препаратов на относительную массу бурсы и бурсаль-ныя индекс показали, что эти показатели во всех подопытные группах были достоверно вше по сравнению с таковыми в контрольной группе.

в результате исследования влияния инъекции Бсв и тиналина в змбриоа на показатель Е-РОК установлено, что количество Е-РОК в тимоиитах дри введении как бсв. так и тиналина было вше на б. 4 и ia.4 х, соответственно (Р<0.05). по сравнению с таковын контрольной группы, в то же время их сочетанное введение приводило к аддитивнону эффекту - го,

При определении количества в-рок с лимфоцитами крови у выведенных цыплят было установлено, что раздельная иньекдия БСВ и тиналина увеличивала этот показатель на S. б и ю. О'/, соответственно, по сравнению с показателем в контрольной группе, а га сочетанное введение приводило к аддитивному эффекту (15,3).

Такки образом, изучение раздельного к сочетанного введения бсб и тиналина показало, что эти препараты увеличивают относительную массу селезенки и бурсы, селезеночный и бурсальныя индекс, что свидетельствует о стимуляции линФоидной системы га плят после внлупления. также увеличивается показатель Е-РОК с тимоди-тами и линФонитаии kpcjh у цыплят, что указывает на усиление напряженности клеточного звена иммунитета.

г. 5. Изучение колонизирующие свойств Б. coll и т-розетко-образуших лимфоцитов и влияние раздельного и сочетанного применения бсв и тималина при экспериментально и заражении цыплят Е. coll колонизирующие свойства штамма Е. colt серовара , облагающего адгезивным антигеном К99. изучали через гч- часа после гксперияенталыюг'о заражения дшыят io-суточного возраста в дозе 10 млгд. микробных тел (м. т. ) ив дальнейшей через каждые сут-

- 14 -

ни. всего проведено 5 исследования.

В результате изучения колонизирующих свойств' Е. сои было установлено, что уже через гч часа после заражения этерихии приживляются в слизистой оболочке как тонкого, так и толстого отделов кишечника цыплят, количество колоний в двенадцатиперстной кишке через гч часа после заражения составило г. 0-3.о lg кое/г. в тошей кишке - 3.0 1в КОЕ/г и в подвздошной кишке - 5.5-6.0 is КОЕ/г. Через гч часа в тонком отделе кишечника возникает катаральный энтерит и спустя 46 часов после заражения из двенадцатиперстной кишки уже не удалось изолировать колонии, а в тошей и подвздошной кишке на среде Эндо высевались только единичные колонии.

при исследовании влияния экспериментального заражения на функциональную активность т-розеткообразуших лимфоцитов установлено. что у цыплят, зараженных £. coll количество e-fok в крови составило 9.4+-0. б'Л а у незараженкых - £0.6+_0, 9V-, т.е. в г. г раза больше, полученный результат имеет важное значение при кор-регкружея терапии,

I

Результаты изучения влияния раздельного и сочетанного применения бсв и тималина на колонизирующие свойства Е. coll после экспериментального заражения показали, что назначение бсв с профилактической «елью снижало уровень колонизации е. coli в слизистой оболочке кишечника через чв-1£о часов на 2.0-3,0 lg КОЕ/г. применение тималина также способствует снижению уровня колонизации через to-тг часа на 1.0 lg КОЕ/г. лучший результат изучаемого показателя получен при сочетанном применении бсв н тималина. Колонизация бактерий в слизистой оболочке кишечника уменьшалась через 48-96 часов на г. 5-4.б 1е КОЕ/г. следовательно, при сочетанном применении бсв и тималина снижается колонизирующая способность е. coll в слизистои оболочке кишечника цыплят и тем самым такоз применение оказывает профилактическое действие при их заражении патогенными шганмами е.coli.

2.6. произбодстбгккыо испытания эффективности раздельного и сочетзнного применения БСВ и тималина с целью профилактики колисактериоэа у цыплят раннего возраста в опытах кспользосали оыплят суточного возраста из одной партии инкубационных яиа. с созданием сравнительно одинаковых условии кормления и содержания

Было сформировано 4 группы цыплят, первой группе в количестве 16000 цыплят назначали бсв из расчета о, 05 дозы на 1 голову с ""тъечой волой до лачала первого чормчения и в дальнейшей черед сутки, т. е. на 3-й. 5-е, 7-е и 9-е сутки опыта, второй группе в ".ояичестзе ¿0100 цыплят применяли тималин первый раз аэрозольно я количестве 1,5 нг/м3 в выводном инкубаторе за 14-16 часов до ркбогки и второй Раз в суточной возрасте вкутриишйчко из расчета 40 мкгукг. одновременно с вакциной против болезни Нарека. третьей группе в количестве зюоо цыплят назначали сочетанное пгинйиекий обоих препартоз по вышеописанной схеме, цыплят конт-• •^лт.тг'г; группы не обрабатывали.

Результаты опыта оценивали по динамике отхода го. за гьл-дго мекаду в течение дпух месяцев. Павших имплят подвергали . - -■¿«гоанатоиическоку исследованию, при котором а группах учита-■"ли сроки проявления и количество цыплят, павших- от кодибактэ-:-ио а диагноз подтверждали бактериологическими иссяедозани-;-;:и патологического материала по обгаепринятой методике.

За весь период опыта в группе, где применял!! БСВ, сохранность пыплят была на 2,4* выше, а в группе,- где применяли тималин - на 3,7я по сравнению с сохранностью в контрольной группе. Сочетанное применение сбочк препаргов было значительно эффективнее. так как позволило снизисть отход по сравнению с таковым и контрольной группе на 5. 1*. Проведенное патологоанатоничв с кое вскрытие павших цыплят, кг дальнейшее лабораторное исследование показало, что а контрольной группе от кояибактерноэд -л л о и, )у., в то время как в группах, где применяли БСВ и тикалич раздельно и в сочетании, колкбактериоэ или вообше не регистрировался, или он составлял незначительный процент (1, 0).

Таким образом, применение БСВ, -италика и кг сочгтзнпя по

- te -

предлагаемой нами схеме в значительной мере улучшало показатель сохранности у цыплят раннего возраста и способствовало снижению заболеваемости и падежа цыплят от колибактериоза.

При определении экономической эффективности применения БСВ и тималина как раздельно, так и в сочетанием виде было установле «о, что применение БСВ позволило получить экономический эффект на каждый затраченный рубль 1,96. применение тималина -5,7, а при сочетанном применении обоих препаратов -7,3 рубля ( в ценах на 01.01.94)

ВЫВОДЫ

1. из кишечного тракта цыплят выделены штаммы биФидобактерий, изучены их культурально-норфологические и биохимические свойства, на основании чего проведена их идентификация до вида, определены наиболее часто встречающиеся в кишечном тракте птип енфидобактерш - В. bifidm в. adoiescentis. в, Infantis, в. termo-film

г. Применение биФидумбактерина сухого ветеринарного (ECB) i дозе 0,5 млн. ед. пероралько на 1-е, 3-е, 5-е. 7-е и 9-е craa вызывает колонизацию биФидобактерий в кишечном тракте у цыплят, пик увеличения количества биФидобактерий приходится на lb-e i ei-e сутки от начала применения БСВ й составляет в слизисто! оболочке тонкого отдела кишечника на 2.в и 3,7 ig кое/г, соотве1 ственно, больше по сравнению с таковыми показателями при естест венном заселении биФидобактерий у интактных цыплят.

3. Инмуномодулятор тималия. назначенный цыплятам в I- и : 7-суточном возрасте в дозе 40 мкг/кг внутримышечно, способствуе увеличению количества биФидобактерий в слизистой оболочке тонко го отдела кишечника на 16-е и 21-е сутки на 1,6 и 1,2 le КОЕ/г а при сочетанном применении бсв и тималина в эти же сроки отме чен аддитивный эффект увеличения количества биФидобактерий соот ветственно на 4, в и 4.б ig КОЕ/Т.

4. БСВ вызывает у цыплят имкунотропное действие, повышая о носительную массу селезенки и селезеночный индекс, усиливает Фа тор неспедиФическоЯ резистентности - Фагоцитоз. Применение тина

лина. особенно в сочетании с БСВ, в еше большей мере улучшает эти показатели, а также повышает показатель клеточного иммунитета по определению т-лимфоцитов в реакции спонтанного розеткообра-зования (Е-рок).

5. Введение БСВ и тималина в 17- и 18-суточные эмбрионы как раздельно, так и в сочетаньи не вызывает патологических из-ленений в их развитии, не оказывает отрицательного влияния на выводимость и выживаемость пыпдят.

при однократном введении ЕС»; в дозе 0. s нлн. ед. в эмбрион происходит заселение кишечника цыплят бифидобактериями на том же уровне, что и при 3-кратном пероральном введении профилактической дозы, сочетанное введение БСВ в дозе 0. ^75 млн. ед. и тимали-*да в дозе 40 мкг/кг обеспечивает максимальный уровень колонизации бифидобактсрии в кишечном тракте цыплят суточного возраста (12,0 le КОЕ/г), что указывает на аддитивное действие препаратов.

сочетанное введение БСВ и тималина в эмбрион оказывает бо-пее эффективное воздействие на иммунную систему суточных цыплят, увеличивая относительную массу селезенки и бурен и количество Е-чж,

6. высоко вирулентный штамм Е. сон серовара ■ обладающий •сраженными адгезивными свойствами, при алиментарном заражении

"мплят ю-лневного возраста уже через 24 часа вызывггт его колонизацию в слизистой оболочке тонкого и толстого отделов кишечни-;ii. При этом происходит нарушение клеточного иммунитета (снижение количества Е-РОК в 2. 2 раза).

назначение БСВ с профилактической целью снижает уровень колонизации е. coll cePOBai a через чо-120 часов на г-3 18 <ОЕ/г. сочетанно;* принененине БСВ и тнм<.лина уменьшает кол о низ а -ито -е. coll к слизистой оболочке кишечника цыплят в разные сроки исследования на г. 5-4. е 18 кое/г. что указывает на аддитивное гействие препаратов, и тем самым такое применение оказы. ает uf?-«■клактическог дейсгако при зграг.еши-. цыплят патогенными ппчнкл».(! :. сои.

О тималина в производственных условиях во svt -

in пывода в виде аэрозоля (1,5 мг/ м3 > и повторно пнплятан cv-

- lf. -

точного возраста внутримышечно Cto мкг/кп увеличивает их сохранность до бо-суточного возраста на 3.7'/., а при курсовом назначении Без на 1-е. 3-и: 5-е. 7-е и 9-е сутки - на г.1х по сравнение с аналогичными показателями в контрольной группе. Сочеганное применение обоих препаратов является более эффективным, увеличивает сохранность цыплят на 5.i*. при этом падеж цыплят от колибактери-оза снижается на е.\х. экономическая эффективность от использования БСБ. тималина и их сочегакного применения на каждый затраченный рубль составила 1.96; 5.7 и 7.3 рубля соответственно ( в ценах на Ol. Ol. 94 г. ).

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ На основании проведенных исследований предложены: 1. Схема сочетанного применения БСВ и тималина с целью профилактики колибактериоза у цыплят раннего возраста и повышения их инкуниого статгса. которая апробирована и внедрена ка АОЗТ п/<8 "Войсковшш" ленинградской области.

г. Рекомендовано введение БСВ и тиналина в энбрионы 17-1в-с> 1 точного возраста для более раннего заселения кишечника цыплят би-Фидобактериями и повышения их иииункого статуса.

3. Рекомендации по профилактике колибактериоза у цыплят раннего возраста с использованием пробиотика"бифидумбактерина сухого ветеринарного - БСВ и иммуноиодулятора тиналина (одобрены ученый советом ВНИВИП от 26. Об. 95.;).

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Придыбайяо н. Д. > Джакова з. ф.. ягаева л. я.. Борисенко-ва А. Н. Сочеганное применение бифидумбактерина и тималина у цыплят раннего возраста // современные ветеринарные проблемы. - Кай-иядорис. 1993. - с. 101-102. - (Сб. науч. тр. /Литовс. вет. ин-т).

г. придыбайло Н. Д.. Джаноьа , Борисенкова а. Н. сочетан-ное применение тималина и бифидумбактерина при экспериментальной заражении цыплят Е. coli // Новые фармакологические средства в ве теринарии: тез. докл. 5-оа Межгосударственной, межвузовской науч. практ. конф.. с-Петербург. 1993. - С. 46-17.

3. пршшеапло н. п.. дяалова э. ф., еорюжов в. в. способ повышения кинпшогс статгса у гшпляг пгг^н сочетанного применения пробиоттса а юкткоиодулятора // заявка на патент н 940313S7 <029760», положительное решение от oe.ii. 94.

Подписано к печати 1.08.95.-

Формат 60x90 i/16. Печать офсетная. '

Печ.л.1,0. Тирах 100 окз. Заказ S> 2G9.

PTi'i 0Н6ГЙ0А. lülCOtó, С.-Петербург, ул.Уерата,П1 .