Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Селекция ацидофильных бактерий, устойчивых к антибиотикам

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСПЮВ СССР ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ

Алма-Атинский грдена Грудоиого 1фаоного Знамзли зооветеринарный петиту г

!1а празох рукописи

ПЗРдаНКО ОЛЬГА МИХАЙЛОВНА

СЕЛЕКЦИЯ АЦИДОФИЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ, УСТОЙЧИВЫХ К АНТИБИОТИКАМ

Спбциальнооть 15.00.05 ~ ввтерягтарная микуоблолэгия, вируоология, мгизоотолегчя, микология тому полог пя

АВТОРЗФЕРАТ

диссертации яа соязквнив учвяой отепаяя кандидата ветеринар™* наук

Алип-Атп, ТРЭО

Работе Еьполненс на ка^ядре микробиологии и вкрусологии Ал:ла-Атинского ордена Трудового Красного Знамени зооветеринарного института и в Каскеленеком ордена Октябрьской Г;всдюции зерносовхозе "Каскеленикиййлийокого района, Алма-Лтккской области.

Еаучкай руководитель: доктор биологических наук, профессор Г.М.Иванова

Официальное оппонента:доктор медицинских наук, ' профессор Мартиневский И.Л.

кандидат ветерин&рнвх наук,

. доцент Рооляков А.А.

Вед$тое учреждение - Казахский научно-исслэдовятелмхиИ-ветерикзрннй институт

Защита состоится " ” 1990 г. я ' ' чао,

па заседании специализированного сонете К.І20.41.01. по защите диссертаций па соискание учено!? степени кандидата яеїеринарньїх наук лрк Ллма-Атинском ордена Трудового Кряоного Знамени зооветеринарной институте. .

Адрес института; 480013, г. Алмз-Атя, пр. Абая, 28

О диссертацией можно ознакомиться в библиотвте института

Автореферат разослан " " 1990 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат ветерппггргых на/к»

доцент К.Б.Бкяиев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Влиянии антибиотики на патогенные микробы придается огромное значение в ветеринарии и медицине. Особое вни-тние уделяется приобретение множественной лекаротвенной устойчивости, в связи о широкий распространением возбудителей резистентных к большому набору антибиотиков, который прежде считались высокоэффективными терапевтическими препаратами. Особое значение эта проблема приобрела после открытия ягюнскиии исследователями,. коИБОгативнык плазмид (К - факторов), детермичируощих трансмиссивную (инфекдаоннуо) резистентность возбудителей дизентерии (ЯаіапаЬе ,1963). ...

Но почти не уделяется внимания ие менее вакнвцу вопросу ~ изу~ Ченив влияния химиотерапевтических препаратов па нормальную резидентную микрофлору организма.

В настоящее время установлен механизм резистентности к антибактериальный средствам, генетичеокие основы резистентности, разра~ ботано управление реаистентностьо к актибиотикаи у стафилококков, стрептококков, затеробактерий, возбудителей гонорчй, дизентерии, сальмонеллезов, бруцеллеза и других патогейкиг' ыикробвм, .

Известно такие, что применение антибиотиков вызывав* гибель полезных микробов (молочнокислых, целлюлозолатаческнх), вгравянх а!*** роикуо роль в жизни шкроорганизмл, которые,являясь рпзидечтаоЛ . иикрофлорой^выполяяот функции иммунитета, участвуя* в пиеш&ареваи, синтезирует необходише для организма вйталияы, іїуинокиолоїм, фер~ центы» Применение антибиотиков о лечгбнвй » яра {илактнч? скай цель?), напряженное против патогенен* бактерий, в первув очередь привода? К гибели полезных бакперий, развитии дисбактериоза, селей!!;':і й пре?<~ пуща отвей я ому развития, розбудителей кзадзлйияйяэой. пялегячччпя инфекции, иратеозов. . . . ' ‘

По иашвцу тен?ю, со*раяить ойлнгйїнуя микрофлору, пЬлвз<?уг>

для организма не менее важно, чем уничтожить возбудителя болезии.

Несмотря на то, что практической медицине и ветеринарии в настоящее время известно о возможности возникновения дисбакте-ртза пооле актибиогикотсрапии и о других отрицательных сторонах действия антибиотиков, отменить антибиотики нельзя, поэтому наиболее остро встает проблема сохранения полезной облигатной микрофлора в организма при антибиотикотерапии или вс лед от-вии гибели полезной микрофлоры, ее искусственное внесение в организм, особенно тех особей, которые способны отать постоянными обитателями организма. .

В этом еопекте наиболее перспективными будут те исследования, на основе которых планируется получить штаммы полезных бактерий, устойчивые к антибиотикам, .

В первув очередь дм организма, особенно яоворогделного, . необходимо сохранить лактобактерии, которые служит и для обмена кальция, и для антагонистического действия против многих гиилоотных, гноеродных и некоторых патогенних бактерий.

Создание штампов молочнокислых бактерий, устойчивых к антибиотикам, особенно ацидофильных, которне хорошо ярияиваотоя в организма, било бы очень перспективным для терапии и .профилактики дисбактериозов. Такие антибиотикорезистентные ацидофильные шташн.мокко было бы использовать в совместно с антпбиоти-котералией* '

.Противопоказаний к применение молочнокислые бактерии не имев*.

:,Создание штаммов молочнокислых бактерий, особенно ацидо-Ильных, которые хорошо приживается в организме, имело <5а большое значение, поли йн под влиянием антибиотиков не изме-

иялись полезный свойства ацидофильных бактерий и они не потерялй бы опоообности образовать сгусток ( о такой возмокноста указывает Г.М.Иванова и Шафика Заки Абдель Хамид, 1575).

, Наин получен штамм ацидофильных бактерий, обладавший множественной лекарственной устойчивость» к антибиотикам, не поте-рявиий активности э образовании сгустка и других полезных свойств, хорошо приживающийся в организме животных. Перед другими штаммами полученный итамм обладает преимуществом в том, что имеет генетическую метку, противодействует развитии синегнойной палочки и обладет больной устойчивость»» во внесшей среде. Мы не претендуем на полное совершенство созданного нами штамма, но считаем проблему, поднятую нами, - изучение действия химиотерапевтических средств на полезнуп микрофлору ореди резидентной грамположитольной микрофлоры оргаьизма вполне своевременной, аизненнонеобходимой и актуальной.

ЦЕЛЬ РАБОМ. Получение штаммов ацидофильных бактерий, устойчивых к антибиотикам и изучение свойств полученных итаммсв,

ЗАДАЧИ РАБОТЫ. I.Собрать коллекция молочнокислых бактерий.

2.Идентиф1цйровать культуры до вида, изучить свойства, определить чувствительность к антибиотикам, антагонистическую актив-' нооть, изучить биохимические свойства. Исключить ТОКСИЧНОСТЬ Й вирулентность в опытах на лабораторных иивотнмх.

3.Выбрать наиболее перспективный итамм ацидофильных бактерий, провести селекции о цель» получения штаммов ацидофильных бактерий, обладателях множественной лекарственной уотойчипоотм?.

4.Изучить возможность использования полученного ВТЯММЧ, обладавшего множественной лекярственной уотоИчявостьч о пельп леч»чия Г! профилактики диареи и дисбактериоза ничотимх.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. ЦІтамм'ІлсгоЬасіІІив асіборНИиз 2585, уотойчишй к антибиотикам, ранее в специальной литературе не описан. На штамм получено авторское свидетельство. Штамм депонирован в коллекции музея Всесоюзного научно-исследовательского института генэтики и селекции промышленных микроорганизмов, коллекционный номер В - 2585.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Штамм Ьас1;оЬасШия осійорпііиа 2585, устойчивый к антибиотикам, использован для лечения и профилактики диареи и дисбактериоза сельскохозяйственных животных в хозяйствах республики: совхозе-комплексе "Волынский”, Карагандинской облаоти; в'Каекеленском ордена Октябрьской Револо-ции зерносовхозе "Кэскеленский", Илийского района, Алма-Атинской области; на бройлерной птицефабрике и». К. Меркс а Карагандинского производственного объединения по мясному птицеводству; на свиноводческом комплексе им. "ХХУП партомзда КПСС", Таягарско-го района, Алма-Атинской области.

НА ЗАЩИТУ ШН0СЙІСЯ: Штамм ЬасиЬасШлш асіаоріШиз 2585, устойчивый к антибиотикам, с цзльи профілактики и лечения диарея и дисбактериоза животных..

АПРОБАЦИЯ: Результаты работы быг-и доложены на научных коп?№-ренциях профессорско-преподавательского состава, аспирантов и соискателей Алма-Атинского зооветеринарного института в 1984, 1989 гг., на рповиренном заседании кафедр: микробиологии и вирусологии, эпизоотологии с клиникой и проблемной лаборатории ветеринарной вирусологий, 1969 г., на заседании Еетфармоовгта СССР, 1969, 1990 гг., на .Всесоюзном заседаний по пробиотикам в Москве, 1990 г.

ПУБЛИКАЦИИ. По тече диссертации опубликованы 3 научные работа,

ОБЬЕМ И СТРУКТУРА. Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста: состоит из введения (6 страниц), обзора литературы (22 страницы), собственных исследований (92 страницы), заключения (9 страниц), выводов и практических преложений (I отраница).Она содержит 29 таблиц, 7 рисунков и I диаграмму. Список использованной литературы вклочает 163 источника, в том числе 51 иностранных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТУ .

I.Материалы и методы исследования.

Работа выполнялась в Алма-Атинском ордена Трудового Красного Знамени зооветеринарном институте, на кафедре микробиологи» и вирусологии. Производственные опыта проведены в Каскелечском ордена Октябрьской Революции зерносовхозе "Каскеленский", Илий-ского района, Алма-Атинской области, на бройлерной птицефабрике им.К.Маркса Карагандинского производственного объединения по

мясному птицеводотву.

Для получения отаммов ацидофилънях бактерий, устойчивых к

антибиотикам, использовали следующие источники: молоко корода,

содержимое рубца корода, кал различии* оельакохозпйствечпнх

яивотннх, содержимое зоба кур, силоо,

Из указанных источников был и выделены молочнокисла бактерии

п количестве 127 культур. Для дпльнеПиеП работы были отобраны

только.культуры ппило^ильнят бактерий (Т'О, у которых изучили:

Т,морфологические орэРотчо (фориЗ, расположение, величина, под-

т<*нп!'ть, тппктэрнальнче ороііетпч), Р,биологически» овоЯетт:

характер роста на твергнх и *ид*:чх питательных ср»ячх, Чиохпин-

ч»окг«* активное ?% гпчолитич«п»уп активность, а^тярпооть кктло-

Тлп'іс:>',оп‘>і<!іч, *пличлст*>'» »м»'іччо!* кислот»»,*:»!*»»®им pH митч.тель-

кой среды, термьрезистентиосгь, устойчивость к щелочной реакции среды, к желчи, к метиленовому голубому, к поваренной соли, к фенолу, к спирту, образозание углекислого газа, образование аммиака из аргинина, чувствительность к антибиотикам. Б результате ое-лекции был получен штамм ацидофильных бактерий, устойчивый к антибиотикам.

У полученного штамма, уотойчивого к антибиотикам, изучали иорфологичеокив, хультуральные, биологические свойства, влияние антибиотиков на изменение pH питательной среды, сроки хранения, антагониотическуо активнооть, проведены эксперимента на лабораторных животных,установлено отсутствие вирулентности и токсичности.

На основе штамма ацидофильных бактерий 13С (2585),обладавшего множественной лекарственной УСТОЙЧИВОСТЬЮ, приготовлен 'ЧТИВНЫЙ препарат,определена его активность и проведены производственные испытания на сельскохозяйственных животных.

Нативный препарат из штамма 2585-максилкн утвержден Ветеринарным фармакологическим Советом СССР для широкого производственного испытания. Составлены ’’Технические условия”, "Временная инструкция по изготовлению и контроле юкоилина". На основании решения Ветеринарного фармакологического совета г на основании распоряжения Главного управления ветеринарии была составлена методика комиссионного нопытания максилина. Комиссионное испытание проведено на базе совхоза-комплекса "Волынский" рабочей комиссией |г авторами, Преппрпт рекомендован для внедрения в серийное производство.

Иэучелпоь нормальная микрофлора организма животных до и после пр’.шйирния грепйрпта, Для чего исследовано 140 проб материала из содержимого толстого отдела кияечника, 25 проб со слизистой

носовой полости.

Кроме того, пгсведено бактериологическое исследование пат-

материала:кровь, »оэг,оердцв, печень, желчь, селезенка, лимфатические узли, почки от 100 поросят я 50 цыплят, погибмх от диареи.

При бактериологическом исследовании выделено: киаечной палочки 46 культур, протея 50 культур, оинегнойной палочки 30 культур, сальмонелл 5 культур, энтерококков 10 культур,Поставлены леборатор-?ша эксперименты на 50 кроликах, 40 морских овинках и 500 белых мышах.

2.Результаты наследований.

2,1. Изучение чувствительности ацидофильных бактерий к энти~ биотикам.

Для получения штаммов ацидофильных бактерий, обладающих множественной уотойчивостьо к антибиотика прежде воего необходимо было определить чувствительность к антибиотикам у культур молочнокислых бактерий, составляющих собранную нами коллекцио, отобрать яриболее уотойчивыо и путем селекции создать птаммы, не погибавшие в присутствии больших коицвнтеций антибиотиков не только на питательных среда/, но и в организме животных. С этой цельо наиболее типичные, обладавшие активность») в образовании полочной киолотн штамма ацидофильных бактерий, последовали на чувствительность к антибиотикам (стрептомицин, мономицнн, неомицин, генсашпши, ле%о-мицетин, тетрациклин, пенициллин) о цельв Сботавления их антибиоти-кограмм.Определзнче чувствительности к антибиотикам проводили методом последовательных разведений антибиотиков в стерильном обезжиренном молоке по разработанной нами охечз. В ряд Последовательны»: разведений антибиотиков вносили по 0*1 мл суточной наследуемой культ урн ацидофильных бактерий (воего 1*0, пробирки помечали >

термостат при Т*.37°С на ?Л чаоа. Результат определяли по наличии образовавшегося в пробирках о обратом в различимы количеством

антибиотиков сгустка. Результат представлен з пв^икв I.

Клг зледует из таблицы I из I'» культур наиболее угто!ия*мык к стрептомицину били две культуры, иаяоолоя устоГчквчии к тетга»

циклину - одни культура. Устойчивость к стрептомицину у 1л--Лг,Ьпс'ииЛ «морщив 50 составила - 2,1 ЧГг/чл, у

Тіабгаца I.

ЧУЗСТВИТЗЛБНОСТЬ ШДО'ЇШІЬШХ БАКТЕРИЙ К АНТИБЮТИШ . -

ВД Культура к'апилоСйлшіх !Оактего їй

ая гнйаотнки (икг/мл)

стрепт<шц;т ! ионаиятіин

fiSQSmtJEH

. иевомицетинігантацицкн І'гетрьцик.тен 0,4! О, б і 1,2! 2,1' 12,210,3 10,5 !0,3!2,0'!02Ю,3 i0»4 !І,4!2,0 ЮІЮ.210,3 !004 !032!Ст !304І00ІЇ034

1*2 АБК +■

2,/ад ч-

3* 7В* 4*

4, 56/VV - - * - — +■ - - - - - - — - - ■ — - - - * + . -

■з* с +■ — +■ А. «■» ■Г 4* +■ *- +• + - +- +■ ^ " ~ -

6.Г*Вг ■*- . +• +

Ср +■

* - > -

І0;і“ат

11* <fKA

I2,W1C •*»

>3. а V •і* * +■ -І- -ь * +• + * + + — + > — - - ~

ї'к т - - - - м - - — - - ----- +■ +

і

сп

і

Пргіечз:квї +• -надячая ггустка з иодскг - -отзухгтзм огустка з молокг

ІасіоЬасШиб зсійорЬііиа ізсоооташиа 2,2 іаг/ил, уотоЯиивооть к тетрациклину ооатйит 0,34 икг/іія, Две наиболее устойчивые культуры мы приняли для .селекции стаммов .устойчивых к ак тії биот якам.

2.2.Селекция атаииов ацидофильных бактерий,- устойчивых к стрептомицину. •'

Селзкцио иташов, узтойчивых к отрептоиищіпу;прохіодйли пз методике Г»Ы;-Иваиовой (таблица 2.) на оперильнои обсзшрепном молоке, к которому з качестве селективного агента добавляли отрептомчцин. II годаы-И! культурен;! олуяиля культури ацидофильных бактеркП, обладавшие уо-тойчивввтьо к стрептомицину. С этой цельо устойчивые культуры 5С и ІЗС засевали в отернльнос абезкнреиное мололо в колічвпгвв I% к гыдерки-зали в тгрцоотата при температура 37°С' до неполного образования сгустка, ’Появлясцегоол на дла пробирки, где иьходидиоь наиболее активные клетки ацидофильных бактерий, которио оо дна пробирка набирали стерильной паотеройохоП пппаткоЯ Я'переэеаали в пробирку со дтерилыяш сбра-Том, Поело зторего пе$зеяа грввгряли устойчивость ацидофильных бактерий, подвергавяихся воздеЯотвао стрептомицина а качеотяе овлпктишпго агента к стрептомицину» нонсшщшіу, неомицішу, гентамиципу» лввоипце-тину. Установили, что у пташа ЬаегоЬасШиа аоІйорНИиа 13с устойчивость к оірептошіцину оаотовила 20 ООО икг/ыя, к цоноыицяну 250 ихг/ш, к яеоияцииу 250 ют/ил, к Гїтітсиицину 140 шег/ил, к лезонянетіпіу 40 мхг/мл (таблица Э). . : ,

Іши образом, путем селекют баі .-отобран вташ, ебдадасяий ето-леотвенной лекарственной уотойччвост&а* Для эакреплаакя приобретения овоЯотэ получешшЗ нтаим перебаяаля «а отеряльнон обрате бо отрепто-мнцкном сеє-35 раз, а для контроля • йїаігі переоавалоя в омряняоц обрате, пе оодеряеае» отрептомяіш» Длл культур воздавались 2йадпг»>ра'; условия храп«*»3. Пасла каждого первовм проверяла чумгзятельпоегь к стрептомицину, иономпшшу, неоияпяну, гентаїтіину, лввоиаивтляу,

Оба итаївд не потеряла устойчивость к укдЗаяпчм яіпабиотпкаи.

Т&бЛїца 2

СХ2МА СЕЛЕКЦІЙ ШТШОВ АШОШіЯІХ ВЖ'ЕРШ, УСЗЭЙЧЯШХ К СТРаіТ0іЄЩЙїї7

УУУиииииииииииииии. ; . ’

ииииииииииииииииии ииииииишиииииииии уииииииииии ииии.ии и

иууу УУУУУУ У У У УУУ У У

ииииииииииииииииии ууииииииииииииииии у ииииииииии и и и и и и и У у и ииииииии ии и и и ии

иии ииииииииииии и ии ииииииииииииииииии ииииииииииииииии ии

УУУУУУУУУУУУУУУ У УЬ*7 ииииииииииииииииии

п

серессз 0,1 ли суточной культуры, устойчивой к сторптоиицину в дозе 2,2 икг/мд

100000 икг/ш ,

стрептомицина і йизпологическоу растворе

2000 жг/ха

стерильное

обезкиренное

молоко

степядьяае

обезяиленное

молоко

Термосіатарозание при 37 до неполного образования сгустка *

Шта;.рі ацядог-ильных бактерий, обгадатаїй множественной лекарственной устойчивости

Таблица З

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К АШБИОТИШ ШТАММ ІЗС (2585), . ОЕЛАДАШЕГО МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТЬ»

Л*! Наюекомнае { доза антибиотика (шт/иг)

пп! антибветяк» ! 2о I 40 ! 6С ! 100! 140! 200 ! 250!.300!50011000!5000• ГССОО115000!20000130000

I.Стреп тома щи + *■ > > *- + + * *- * * * ІГ _ +■ -

2»M*acu2u»g ' * ' -К + . ■к - «Э «• - - «•

З.Нзвциіян +• ‘ + . + +■ + + „ * •* •» 4В *•

♦.Гентамюди 1 ♦ _ " ♦ ^ * +• .. - - - * W* «9» - - Я»

5*Леввштетга - * , ♦ - *» «к , ***V *** - ** «* _

Примечание: _*• «аалиадв ггусц-ка э молоке

««с;фтвае ..сгустка а молоке.

Соответственно проверялась константность и других свойств итамма, отклонений не било отмечено. ГОтаум стойко оохранял вое

исходные признаки, '

Штамм Lactobaolliuo acidophilus 5С • устойчивый К стрептомицину, потерял через 5 переоевов без стрептомицина устойчивость к данном;' антибиотику и для дальнейшей работа мн сочли его не пригодным,

У полученного путем селекции штамма 130 проверял:; морфологические, биологические свойства и чувствительность к антибиогикач,

2.3.Морфологические и биологические свойства штамма 130(2531)}.

« Морфология Lactobacillus acidophilus ізо типична для ацидо-фяльных бактерий -крупные, не одинаковой величины палочки, расположенные в цепочки по две, три и больше. Грамположятельниз, ЙЄП0Д-йижше,онор и капсул не образует. Окрашенные оинькой Леффдера па-ійчки имеют метахр омгл'иновые зерна,не имеит сплошной окраски» аеряисте.

Биологические свойства -культивирование штампа ацидофильных бактерий 13С осуществляли на стерильном обрате, на котором бактерии образует ровный сгусток слизистой тяиущейоя консистенция, без иалилия газа. На гидролизованлом молоке (агар по Богданову) образует характерные R - формы колонии, мелкие,непрозрачные, матовые.

.В виде локонов, непигментнне.

Необходимо было проверить и биологические свойстпа полученного

итамма: устойчивость к щелочной реакции среды, к яелчи, к поваренной ооли, к метиленовому голубому, к (фенолу, к спирту, образование углокислого газа, терморезистентность, гвмолитическуо активность. Как следует из таблицы **, штамму присуди коиотантнно при*

H8KtS И отрептомицин не вызывает изменение биологических СЗОЙЗТЯ I./ncWophiluB Пг,,обладавшего множественной лекарственной уотой-

ЧИ500ТЬ<8.

Особоо значение для полученного шт;пма L.acidophiiuo ізс, сбла-даоівего множественной лекарственной устойчивости?,пчела и актив-

Табляиа Ч

ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКИХ ОЮИСТВ ШТАММА Мв^ЬасШиз дсИорЬИио 13С,

СЕЛ ЛДА'ВЩГО МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИЬОСТЬО

Свойства ацидофильных !иоходгшй!Шташ ацидофильных бактерий 13С (256?) бактерий (штамм Г

1 130 !

вырапешмй б;3' стрептомицина

'вырашлчний * прчеуот-1зии стрептомицина

Рост при pH

0.0 В.2

Рост на среде о Жгдчьп % 20

<Ю

Рост о позареннвй оодьв % 2

и б

Рост о метиле по вчи

' °д1

0,01

голубым %

Роет о фенолом

0,1

о,г

* Й'?

, 0,4

Рост 09 спиртом

% 0*2 о,“ 0,6 0,8

Образование углекислого газа

Терморезкстентнооть при Т<-, 60 „ 30 №,„уТ

60 мнут 90 ЦИНуТ Т« 65°С д0 №нут

60 ианут 90 минут

Гецолитичсзкая актирное тъ

+

+

+-

+

+

4*

♦

+

♦

*

♦

+

4*

*

4*

+

л

+■

+

А-

+

Примечание:

♦ ~нал№?ие роста вташя ЮС

- «отоут^твие рэота штампа 130

*•

**

ниоть в образован»» сгустил. С стой цальэ иеоОходиио биго проворить сроки появления сгустка и определить влияние стрептомицина на киолотсобразивание и pH питотелыюй среды в присуотвии стрелто-мицича и без антибиотика. Как вняонилосьэг.тинность в образовании сгустка не изменялась,а присутствие отрептомицина незначительно снижало киол'отнооть и pH пите тельной среди, кчк вто отражено в таблице 5.

Э»Срочи храпения ацидофильних бактерий, устойчивых к антибиотикам.

Ососов значение имели ороки хранения штамма в присутствии

стрептомицина, так как маточные рпсплодки хранятся на питательных

средах оо отроптодадином, При этом необходимо знать количество жизнзояоообиих клеток, оотавдцихся при различных способах хранения,

пто имаат такжц значение и для определения титра препарата в производственных условиях, я а том случае, воли будет приготовлен сухой препарат о применением лиофильной или ряопнлительной оуики.

Это будет основой для установления лечебной и профилактической до*-зы препарата. Но определить количество хианеспоообкнх клеток мы практически ив могли, так как не могли подобрать пригоднуо методику. Поэтому мн разработали овоо методику (на "Способ определения хбличеотва бактерий;уотойчивнх к антибиотикам" подана заявка на ИЕобретоние и получена приоритетная оправка), по которой проводится титрация ка основе метода вариационной отатистики о использованием таблицы }.»ак-Креди, П таблице б приведены данные о сроках нения ютр.мш а!1!д0($илы1ых бактерий 1ЭС (2505), обладавшего множественной лекарственной уотойчивоотьч в присутствии стрептомицина и бея него, Из таблицы б оледует, что втамм сохраняет достаточную акткънмть при хранении в уоловиях холодильника в точение 120 дней, а 'ори хранении в присутствии стрептомицина нсокольхо снижается, но дпу.е в атом случае он выгодно отличается от бактерий,не уотоДчи-№х х пнтиЗяотчхам, у которых врок хранения не более месяца.

ВЛИЯНИЕ СТЯНШШЩА НА ИЗ'СШШ КЖУЮ'ЮОЕР-ЯЗОЗАБШ К р! ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЦ щцюжьнции БАКТЕРИЯМИ, ПОЛУЧЕННЬВИ! ПУТИ! СЕЛЕКЦИИ

! Брзмя образования сгустка

Культуры ашсдофильншс бактерий ‘" ! через 2% часа ! через 46 часов ! через 72 часа

pH ! Т3 ! pH ! Т° ! pH Г Т°

IX, обладавший изсгесгаеяной лекарственной ус~ «оачзассгглс, выращенный без стрептоыншга 4.Г 156 3,80 195 3,65 245

I3C; об-адаваиЯ множественной лекарственной устойчивостью, зыращекшй со стрептоахцаноц (5CG гсот/ид) . 43 па 3,85 . 185 ... 3,65 244 t Ц-* VJ» г

13 if cx."J обладающий «Ейгесгчевкой лекарственной устойчивое ты), вырацвяаыа без стрсптогадана . чл. 14Э 3*75 190 3,60 250

13 исх.;, обладавший даогестзенной лекарственной устойчивостью,, варацевныЛ со стептошвдшоа <500 И5Г/1Я) 4,25 по 3,80 185 3,60 249

Тсйапг

s

СЯ

*** < , *-•

і Ж

м

е

Щ Н

к

in

ІЛ

о

►Ч

ч

О*

'І

ІЛ

«

N

VH

>4

Пі

о

р

м

*1

CJ

O’*

я

6

<м

г\

“Ь

•а

tn

<Sj

Й

о

М

►«

ІП

*

(и

со

•й

ІА

►і

in

*ь

*а

м

Ч£>

о

я

*1

Лі

а

и

tn

ft

eu

«з,

Я

ІЛ

N

"I

•a

rvj

в

о

и

IT*

л?

°o

я

OJ

*o

V.

m

«I

m

“Ъ

*Й

ІЛ

c\?

ъ

tl

»f%

№

c\l

Все изложенное убеждает, что полученный шташі ацидо^илъ-ннх бактерий, обладающий множественной лекарственной устойчивостью не потерял своих полезных признаков, прноущих ацидофильным бактериям.

Известно, что ацидофильные бактерии обладая? цепными опой-стпаті кок представители нормальной микрофлоры, участвующей в зчгдате организма • ~ инфекций, обладает антагонистической активностью против гнилостных, гноеродных и некоторых патопеншх бактерий, поэтому ш исследовали антагониотические отношения полученного наш штата в отношении стафілокока 209, вульгарного протея, оиненгойиой палочки и сальмонелл. Результате пред-отавленн п таблице 7, Из таблиц» следует, что полученный нами штамм не потерял янтагониотичеокой активности.

Ацидофильные бактерии давно применяется в медицине и ветеринарии как лечебные и профилактические препарата и противопоказаний к применению не пмепт. Об отоуотвии токоичнайтн к патогенности ацидофильных бактерий ык провели.ооответотвуадиа эксперименты, которые подтверждены оправкой, выданной Каазахсклу , филиалом института питания АМН СОСР о том, что исследоьанннй в лаборатории санитарно-пияевой ш( к о логин и микробиологии итатл ?5&5 не обладает патогежюоты» и токоичяооир.

На ооново пташа ацидофильных бактерий 1ЭС приготовлен нативный препарат, который предотаяляет собой ялвуп культуру ацидофильных бактерий, устойчивых к антибиотикам, полученную путем внрэпшвания в стерильном обезжиренном молоке я виде слизистого,. платного, ровного сгустка йреиоватого цвете, без пузчрько* газа.

Препарат использован для лечения и профилактики диареи и дисбактериоза сельскохозяйственных животных.

Таблица 7

АНТАГОНИСТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ШТА1ША АЩЦЮШЬШХ БЛКТШЙ 130, устойчивого К АНТИБИОТИКАМ И V»-ИГОЛЬНЫХ ШТАММОВ В ОТНОШЕНИИ ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ

*#1 Наииянвмние культур

I Результат моева ка иПА пволе I сввмеатнвгв кзг.итквирвванн*'

, I 13С ! 2АБК 1 5СТ ! 14ДУ

1,Я4арЬу1осоОоив йигвиэ 209 . ** ♦ + * ♦ .. 1

«?,Рго1;виа уиЛ-в®*1*6 ' «• 4 т + _

З.Рвеийототм {1иог*вевпв «• ' . 4 4- ♦

Д|Ва1.топ(<11а йиЬ11п + 4 ♦

5.3а1топв11а »ур1И«иг1ит ' «0 + + ■ 4 ■

С.ЗаХтопоИв е.Ьо1Чиво*1в - ■' М + 4

7»йа1.вюЯ(»11а аивгЧирвди! - " 4* ♦ 4-

Пглн»чаннв( * *чил«чие рвота (и МПА п*пле тпева

- ~*тсутотмв р*ста не МИД паолв иыо-м

*».[Тр*из»*дстлеяный »ПМТ.

Прмэявдствекный опыт был праведен на пврвсятах в оівхвзе "Кас-келеяокий”, Кяскеленского зерносввхоэа^Млийского района,Ллиа-Лтиноквй области сввмеотно с мтеринаркнм врачом хозяйства Гестпялии А.М.

Была изучена иикрофлора келудочно-кишечкоге тракта б*лькых диареей и здервпых поросят. В результате изучения лнделекннх л чистом виде культур пн убедились, чт» на питательных средах от здоровых поросят выделялась я основной ’■чэнообраэная микрофлора, среди которой превалировали культуры кишечной палочки. От больных диареей порося? высевались л основном культуры протея, лактозанегатилчые кишечные палочки, синегнойпая пал»чка. Как устаноллено, культуры киаечной палочки, выделенные как от здоровых, так я от бильних диареей перооят, не Ублажали чувствительностью к широко применяемым антибиотикам.

После лечения препаратом из штамма 130 (2585) микрофлора келудвч-но—килечного тракта поросят здоровых и перебвлевшх диареей изменялась. Основные культури, выделенные от экспериментальных поросят, с#оталляля кяшечкие палочки. Протей и энтерококки миелнлкоь реяе» Пооле применения препарата ацидофильное бактерии, устойчивые к антибиотиках,при~ живалиоь а организме кіл здоровых, твк в переболевших диареей поросят. На ебезжнренном иолоке выделялись молочнокиолне бактерии гвмофермен-тативного брожения, которые образовали тянзпцийоя огуотак, При микроскопии наблюдали ацидофильные палочки, расположенные длиипнми цепочками.

Результат изучения микробного пейзька пвэмллог заклочить, что применение препарата из апидо^илышх бактерий, устойчивых к антибиотикам, дает возможность заселять желудочно-кишечный гракт животных яу&* иой, полезно!) микрофлорой, которая является мояньгц фактором, противо-деі;ствурцим ряэвитно нежелательней иикрофлорн, вызылатееЯ диарея: проте'!, грибы рода кандида, стафилококки.

Таблица В

п?аснгзиз еактерил ьша гьб5, гсюлчизого х

ЛН^ГБйОТИКАМ ЛЯ ЛЕЧЕНИЯ й ПРОФИЛАКТИКИ ШАР2И ПОРОСЯТ

.*£ ,количество Гп .сгелняй вес ,воз?аст в ка- гдлительностьг лога и метод ггоиыгчгннг. -

гттаа ’псрооят .порода.Прй р0ХдеЯйИ‘чалс обпаботха'тешлягная ‘

' > ! I ! !йЬгпарата !

1 184 =ф.бел. 0,5 кт Е дня *5 3 ваза в тень пс

. чайкой ложке

ГО

2 Г65 г^-Зел. 0,5 гст ГО дней 35 3 раза в денз по °

чайной ложк* I

1! 163 от.Оел. 0,3 кт 35 днгй - 25 на Ю кг. ког.-а 200 граны

препарата

•*■ 155 :а.йел. 0,5 кт контроль

РЕЗУЛЬТАТЫ ІЗЧЕЕН04ШОШАКТЙЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ ПОРОСЯТ ІШЕПАРАТШ ІЗ АВДДОЗШЬШХ ЕАХТЕЕйй ЇЇШІА 2585, УСТОЙЧИВОГО К АЕИБИОТШСАМ

•¥-й 'Количестза пооосят! заболело! пало ! осталось группы I Сгорав) ' Ідиармй |(гмД)|. (го-ов)

Средний зео I поросенка

з 60 днезком возрасте (;-.г)

184*

165

т

165

ІВгол, Вгал.

9% Т%

Zkvax, 15год.

Ш S£

38год. 18гвл.

19% 11,9*

50гол. 26roi.

'ІЬ% - КЙ

Г70

150

150

137

21,2

17,780

14,9

11,7

I

2

3

Изучение ЭффеГТИВНООТИ ПОДуЧСННОГО препарат* из аУ!ДО,«ЛЬН1!Х бактерий 130 (2585), ус тол ч*ш, х к антабившкаи^выполнялйоь на четырех группах поросят, трем из которых проводилось выпаиваний ацидофильных бактгрий в дозе 10 мл ежедневно . три раза в день. При этом кизотние

I группы (ІВ4 поросенка) получали препарат о 2-х до 16-ти дне.вного возраста. ї.ивотние 2 группы (165 поросят) получали препарат о 10-дневного ьозрас-га не протяжении М дней» Кивотние 3 группы получали препарат п 35 до 50 дневного возраста. Животные 4 группа служили в качестве контроля. Данное представлены в таблице 8. К&к следует из таблицы 9, опыт показывает целесообразность применения препарата из штамма ацидо-дофильных бактвркй ІЗС (25Є5), устойчивого к антибиотикам, для проплат, тяки и лечений диареи, начиная о первых дней жизни, при втом привесы у поросят почти удваиваетея по сравнении о контролем. Количество, заболевших поросят бнлв в первой группе ІЄ по оравненив с контролем, где заболело диареей 50 поросят н пало 28, в то время как в первой группе пало В голов, *.е. в два раза маньие;

Препарат в настоящее время приценяется для лечения келудочно-кяиечннх заболеваний и профилактики диареи и дисбактериоза животннх в рдае хозяйств-реопубликк, ■,

. . . . ' . ШЕОДЫ . .

•I .Собран». коллекция ацидофильных бактерий чз нолокп коровы, каля тувстаах и зоба кур в количестве 127 культур.

<’ (Изучены ьдр Оология и биологические свойства. Все культуры кденткфицировапч до вида.

"5.Получен ічнмм яиидо?ильяых бактерий, облчдавдий ‘.тожественной уотоКчивоатьс к антибиотикам; Штвкм депонирован во Всесоюзной научноисследовательском институте генетики и оплекцип промншленных микроорганизмов, ” юзллекцяонннй неиер 2585. Нч ятамм получено авторское свидетельство * ГОг5<№/ .* .

V. Стамм ( ПС ) сохранил вое полеэнке свойства ациг.с^иль-

тх й актер: г хорошо приживается в орган гама, устойчив к яелчи< является антагонистом гнилостных, гноеродных я некоторых патогенных бактерий (стафилококка.209, протея, синегнойной палочка, сальмонелл), образует нолочнуи» кислоту в достаточном количества (1,368).

5,ПолученинЙ штамм выгодно отличается от вспх других ацидофильных бактерий тем, что имеет.генетическую кг тку, по кого-1ой он ножст бнть идентифицирован, устоЙчив-К стрептомицину в дозе 20 ООО мкг/мЛф шконицину - 250 мкг/шг, неомяцину - 250 мкг/мя, гентамипияу - 140 мкг/un, левомицетииу 40 mr/m. .

б»Разработав способ количественного учета ацидофильных . бактерий на основе метода вариационной статистики о использованием таблицы Мак-Креди, . . •

7.Штамм прошел коммосионнуя проверку н предложен для рнедрения в практику.

. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ , . .

I.Предложен для лечения и профилактики Диареи и дисбактериоза штамм T.actbbaoillua acldopbAlus DO (25В5), уотайЧИВНЯ к антибиотикам, '

По диссертации опубликованы следующие работу;

I.Авторское свидетельство М 1132542 на втамм бактерий I.nctobaoillus aoidoohlluo 130 № В—2585, иоПоАьэуйинЙ ДЛЙ лечения и профилактики диареи и дисбактериоза с^лбокохозяйог-вешшх животных, 25.МЛ98ЭГ. .

2.Заявка На предполагаемое изобретение "Способ определения количества Йактерий, устойчивых к антибиотикам".

3.Технические условия на макоилин - 2589 (17 10.07,130*89),