Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Роль аутоиммунных процессов в генезе пневмоний у кур

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

На пралах рукописи

ПИШВАНОВ Станислаз Юрьевич

РОЛЬ АУТОИММУННЫХ ПРОЦЕССОВ В ГЕНЕЗЕ ПНЕВМОНИЙ У КУР

Специальность - 16.00.02 - патология, онкология и

морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой стелени кандидата ветеринарных наук

Санкт-Петербург-1996

Работа выполнена в Санкт-Петербургской государственной акацем ветеринаркой медицины на кафедре патологической физиологии селъскох зяйственных животных.

Научные руководители: академик ААО. заслуженный деятель науки Р

лауреат премии СМ СССР, доктор ветеринарн наук, профессор йотикский С.И., доктор медицинских наук ЧеОоткевич В.Н.

Официальные оппсленга: доктор ветеринарных наук,

профессор Буянов А. А'. У кандидат ветеринарных наук, доцент Крячко О.В.

Ведущая организация: Российский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства

Защита состоится "7/ 1996 года в часов • на

заседании диссертационного совета Д 120.20.01 в Санкт-Петербургской государственной академии ветеринаркой медицины

Адрес академии: 196084, Санкт-Петербург, Черниговская ул., 5

Автореферат разослан » 1996 Г.

С диссертацией могао ознакомиться в библиотеке Саккт-Петербу£ окон государственной академии Ветеринарной медицины.

Ученый секретарь диссертационного совета, доцент

Никисина ИЛ

1.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1.Актуальность теш. Условия крупных птицеводческих хозяйств юзволяют использовать современную технолог»®) содержания, кормления и юспроизводства птиц. В то же ьремя в условиях соЕремешого птицеводства, проблема профилактики инфекций становится одной из ведущих ;В.П.Урбан, Н.А.Ргцчук, 1975; И.А.Болотников, Ю.В.Конопатов, 1987; 'адчук, 1990, О.В.Колгбская и др., 1994; Н.В.Садовников, CJi.JLornac-:ий, Г.П.Грачеза, 1994; Л.С.Колабская и др., 1995 к мн. др.). Инфекци->нные болезни наносят значительный экономический ущерб.

Хотя промышленное содержание птицы имеет явные преимущества, од-;ако повышенная скученность, шум технологического оборудования, высо-:зя бакгериагьная загрязненность и другие неблагоприятные факторы от->ажаются на естественной резистентности птиц и их иммунологической ак-ивности (К.А.Болотников и др., 1933; В.В.Рудаков, 1986). Для предуп-«ждения инфекционных болезней, как известно, разработаны и широко кс-ользуюгся различные схемы профилактической вакцинации. Однако возник-овениа случаез заболеваний в условиях, промышленного производства свя-акы в основном не со слабой биологической активностью вакцин, а со нииением иммунологической реактивности птиц под влиянием различных тресс-факторов. В последние годы выполнена значительная серум иссле-озаний по научному обоснованию методов содержания, кормления, прове-ения различных ветеринарных мероприятий, направленных на профилактику нфекций в ветеринарии (В.Д.Соколов и др., 1972; В. В.Рудаков и др., 985; И.М.Карпуть и др., 1990; А.А.Буянов и др., 1991; Н.Д.Првдыбайло, 331; М.С.Жаков, В.С.Прудников, 1992; П.Ф.Сомин и др., 1992; А.А.Еико-окоз и чр., 1994). Проведены фундаментальные исследования,по изучению «луколсгических аспектов инфекционных заболеваний (Дд.Дил, 1982; .Ксекаидр., 1983; И.А.Болотников, Ю.В.Конопатов, 1993). В то кг ремя слабо изученным остается вопрос об иммунологических механизмах и эли аутоиммунитета в патогенезе респираторных инфеглда у птиц в усло-лях промышленного птицеводства. В свете вышеизложенного представляет-з актуальным как в теоретическом, так и в практическом аспекте прове-гние исследований в этом направлении.

1.2.Пали и задачи исследования. Цель исследования - у.зучнтъ воз-эхнуя роль аутоиммунного компонента а патофизиологических механизмах л экспериментальных моделях пневмонии у кур и при естественней респи-аторяой инфекции у птиц, содержащихся в условия); крупного птиаевод-;ского хозяйства. Для достижения этой цели были поставлены следующие

• •' •.• ; ; '■' ' -л - : '". ''

задачи: - ■"''■,'■-,..■■•

- ['.¿работать методы получения и стандартизацию аутоиммунных антигенов и противоорг&чньк аллогенных и ксеногенных сывороток для моделирования аутоиммунных процессов у кур;

• - провести патофизиологическую характеристику аутоиммунных процессов ; при введении тканеьых антигенов;

■ - исследовать аутоиммунные процессы у кур при введении антиорганных сывороток; ■

- установить-этиологию пневмоний у кур, содержащихся в условиях пги-; цефабрики;.

- провести патофизиологическую характеристику аутоиммунных процессов - " У кур при спонтанных пневмониях различной степени т$1жести.

1-3. Основные положения, выносимые на защиту. ./

1. Приготовление и стандарткгация тканевых куриных антигенов у противсорганных аллогенных и ксеногекных антисывсроток для изучена

- процессов аутоиммунитета,у кур. "".:.'

2. Данные о механизмах аутош^мунитета при пневмониях у кур, связанных с введением аутологичных антигеноз и противоорганных сывороток.-

3. Данные об этиологии пневмоний, патофизиологических и аутоиммунных механизмах их у кур, содержащихся в условшх, крупного птицеводческого хозяйства. ■ ; " : .... -

1.4.Научная новизна работы. Разработаны методы получения и стандартизации аутолог»гчных антигенов и противоорганных-сывороток, пригодных для изучен;« механизмов аутоиммукитета у кур.

Проведена иммунологическая,. морфологическая .и патофизиологическая характеристика воспаления легких .у кур в моделыкх опытах при воздействии,на организм аллогенных и ксеногенкых антиорганкых сывороток, < тачке при естественных респираторных заболеваниях. ? - .

Установлена этиология пневмоний у кур, содержащихся на-птицефабрике "Лагслово", показан высокий удельный весмикоплазменно-бактери-альной. инфекции при изученных ^респираторных, инфекциях / ■

Показано,.что повышение титра;комплементсвяэываюцих противоорганных аутсантител . коррелирует . с тяжестью пневмоний.: Наиболее высоки! титр выявлен у кур при диффузной пневмонии,; несколько.7 меньше.. ■ пр] , очаговой пневмонии.

1.5. ■■■ Теоретическое и практическое значение работы. Результат] исследования позволили выявить роль аутоиммунного-компонента в патоге-

езе пневмоний у кур. Разработана модель, пригодная для изучения* ауто-ммунных реакций у птиц. • .

Установлено, что развитие аутоиммунных процессов сопровождается начительными изменениями системы крови, факторов неспецифической ре-истенткости, достоверным снижением активности цидиарного эпителия рахеи кур, появлением признаков воспаления у птиц-реципиентов.

Показано, что использование бронхоальвеолярного лавада у кур в ачестве материала для микробиологического исследования позволяет поучить достоверную характеристику микрофлоры нижних дыхательных путей легких.

1.6. Внедрение. Материалы результатов работы оо изучения аутоим-унного компонента при пневмониях у кур используются при чтении лекций

проведении лабораторных занятий в Санкт-Петербургской государствен-ой академии ветеринарной медицины на кафедрах патологической физиоло-ии; гистологии; микробиологии, вирусологии и иммунологии. Результаты сследований автора использованы в научно-исследовательской работе оссийского НИИ гематологии и трансфузиологии.-/ ' *

1.7. Апробация работы,. Материалы диссертации доложены и обсуждены а научной, конференции профессорско-преподавательского составанауч-ых сотрудникоз й аспирантоз СПбГАШ "Актуальные -проблемы' ветеринарии"

1994) ; на научных конференциях молодых ученых, аспирантов- и студентов ЯбГАВМ (1995, 1996); на межвузовской научной конференции молодых уче~ кх в Санкт'ийетербургском медицинском университете им. акзд.И.П.Павлова1

1995);. на Всероссийском конгрессе патофизиологов (Москва, -1996)- на аседаниях.кафедры .'патофизиологии СЛ6ГАВМ<'1995> 1996).- . -

1.8. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных абот'.-'., . - ' .■•'_'„ ' ' '''•• .S,.';';'-.

- Ï.9. Объем и структура работы. Диссертация изложена на 130 стра-ицах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, ме-оды исследований, результаты собственных исследований айтора. Енводы, ¡екомендащш производству, список использованной литературы в : коли-:естве 185 источников, из них - 52 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 21 таблицей, 3 рисунками и 12

" 'Ч--'.J : 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВА?{КЯ^ i

. 2.1. Материалы.^ методы V"-,:"'".'■

Исследования были проведены в 19S3-1S95 ггГ нз.базе кафедры пато-гогической физиологии С&лкт-Петербургской академии ветертшарной меди-

цику, лаборатории бактериологии Российского НИИ гематологии и трансфу-зислагки, птицефабрики "Лаголово" и экспериментального хозяйства НИИ генетики сельскохозяйственных квотных (г.Пушкин).

Для отработки методики и в опытах по моделированию аутоиммунных процессов у птиц было использовано 158 кур в возрасте 48 дней и 13 петухов породы "русская белат" в возрасте 1 года. С целью изучения патогенеза пневмоний, возниканада у кур в производственных условиях прице-фабрики, обследовано поголовье 1600 кур породы -"леггорн". Птицы были подвергнуты общему клиническому осмотру и обследованию общепринятыми методами. Из указанного количества птиц для проведения комплекса лабораторных исследований было отобрано 25 голов кур в возрасте 100 дней с естественно возникши пневмонией. Для получения ксеногенных яротивоор-гакных сывороток использовали б кроликов породы "белый великан".

В качестве тканевых антигенов были применены гомогенаты тканей легкого, сердца, печени, почек и стенки киаечника от здоровых кур.. Указанные гомогенаты использовали для введения птицам при моделировании зу/тою,<мукных процессоз и получении антисрг&нных ачлогенкыч и ксеногенных сывороток, для получения аллогекных сывороток гомогенаты тканей легких вводили петуха;/, для получения ксеногенных сызореток этим материала.! иммунизировали кроликов. Цикл иммунизации в обеих случаях состоял из 3 еженедельных подкокных инъекций 1 мл антигена с равным объемом неполного адьюванта Фрейнда, приготовленного по методу Л.А.Зильбера (1S63). Полученные противооргакные сыворотки исследовали в реакция связывания комплемента (РСК). Указанную реакцию ставили в микротитраторе Такачи по методу А.А.Селиванова (1959). В полученных антисыворотках определяли такке уровень цитотоксических антител, ге-магглютининов и гемолизинов по метолу В.Н.Еабалика (1974).

Аллог&кные и ксеногенные гипериммунные противолегочные сыворотки вводили подопытным курам внутримышечно в количестве 0,2. мл на 1 кг живой массы 3-х кратно с семидневным интервалом. Иммунологические и гематологические анализы выполняли спустя 21 день после последнего введения препарата. В качестве контроля были взять: сыворотки от здоровых, не иммунизированных кроликов и кур, а также были подвергнуты исследование контрольные птицы, кстэрым вводили только физиологически! раствор.

Исследование патофизиологических механизмов аутоиммунных процессов потребовало использования широкого набора физиологических, гематологических, иммунологических и морфологических методик.

Для характеристики местной неспецифической защиты у птиц получали ¡нхоальвеолярный лаваж (БАЛЖ) по методу, предложенному Г.М.Николае-\ (1988).

Определение'активности мерцательного эпителия ттрахеи прооводили :'ем подсчета числа колебаний ресничек з одну минуту в кольцевых агментах трахеи птиц, инкубированных в среде 199. Кольца трахеи поили по методике М.С.БаГскомартова (1988).

■В.периферической крови определяли количество эритроцитов и лейко-гов, уровень гемоглобина и лейкограмыу в ыазках, окрааеяных по Рома-5скому-Гимза общепринятыми методами.

Для подсчета числа и определения клеточного состава ВАШ такхе юльзовали стандартную методику подсчета лейкоцитов (Г. А.Эйсымонт, £) и окраску по Романовскому-Гимза.

Функциональную активность фагоцитов крови и БАЛЖ изучали с по-аъю Теста восстановления красителя нитрослнего тетразолия (ИСТ) irk et al, 1968), лизосомально-катеонного теста (ЛКТ) (В.Е.Пигаревс-'), 1981) и оценки'фагоцитоза по методу В.М.Бергман и Е.М.Славской 259) с культурой убитого золотистого стафилококка.

На основами полученных данных определяли фагоцитарную а. гибкость \) - процент фагоцитоз, 'содержащих стафилококки, от общего числа считанных клеток и фагоцитарное число (СЧ) - среднее число фагоцкти-sэнных клеток стафилококка на 1 фагоцит. • . '

Титр сывороточного лизоцима определяли по методу В.Г.Дорофейчук 558). . ' '

В качестве материала для бактериологического исследования исполь-зали БАЛЖ. Культивирование и идентификацию выделенных бактериальных яьтур прозод1Ш1 общепр:гаятыми методами (М.О.Биргер, 1973) Для диаг-: :тики микоплазмы использовали посев НАМ на кидкие питательные среды для серологической диагностики, сызороточно-капельhvio реакцию агг-гинащга (СКРА) (Я.Р.Коваленко, 1976).

Изменения в легких изучали на фиксированных гистологических пре-. ратах при окраске гематоксилин-эозином (О.В.Волкова, Ю.В.Елицкий, 32). . ; '-Г:

Препараты для зклектронной микроскопии готовили методом негатив-го контрастирования 1%-ным раствором натриевой соли фосфорно-воль-амовой кислоты и просматривали под электронным микроскопом JEM-100S рмы JE0L (Япония).

. Достоверность результатов устанавливали критерием Стьюдентз. Все

математические расчеты выполнены' на персональном компьютере РС-3 П( программе БТАТегАРНКБ. "

3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ '-'..,."' ,3.1.Моделирование аутоиммунных процессов"у птиц.

- На первом этапе исследований были получены серии тканевых автпге-. нов и антиорганных-кроличьих (ксеногенных) и куриных (аллогенных) ан. тисывороток к различным тканям кур. Установлено, что титр комплемент-

.-связывающих (КС) антител в кроличьей и куриной антисыворотках составлял, соответственно, 1:64 и 1:128. Титр цитотоксических антител сас-. тавлял, соответственно, 1:32 и 1:64. В обоих сериях сывороток выявлен! гемагглктикины и гемолизины в низком титре 1:2-1:4.

В антисыворотках не выявлялись КС-антитела к антигенам легких ут-: - кк. Это указывало на вид©специфичность полученных■антисызороток.

Полученные антисыворотки были использованы, для изучения аутоиммунного процесса у кур. В качестве контрольных были применены нормальные сыворотки кролика и специально отобранные сыворотки от интачт-' ных кур, в'которых-не выявлялись КС- и цитотоксические протиБоорганны*

- антитела. Контрольной группе здоровых птиц" вводили: физиологически раствор в равной1дозе.

. Полученные противоорганные и контрольные антисыворотки были при-■ мекены нами также для изучения свойств антигенных препаратов из органов птиц (ткани сердца, легких, печени и почек), и для обоснования возможности их использования в"экспериментальной части-работа. . .-•■..- - Титр антигенов^в :РСК'с срответствукедаи противоорганнымя. антисы: вороткали, составлял в среднем '!:64-1:328. ; О-, .

■ " 3.2. Характеристика. аутоиммуных " процессов. у; птиц после", введешь '" тканевых .аллоантигенов,полученных' из' различных органов :: Разработка методов получения и стандартизация антигенов, получен ных из тканей различных.органов птиц, позволили приступить к анализ1 , их влияния на организм птиц-реципиентов "в 'гюмезыш' опытах.• • .

Морфологическими исследованиями нами,была установлена;' определенная органная специфичность - 'поражений-, при введений исследованных ткале-., вых. антигенов..Введение-птицам легочного"антигена приводило-к'перивас-куляркым кровоизлияниям, деструкции?коллагена и гзежклеточкого веществ, в стенках кровеносных.сосудовпоявлению г просвете■ параброкхов■% альвеол. экссудата с примесью ферменных' элементов, крови. Введение печекоч

юго антигена сопровождалось расширением пространства Диссе, что, :редпояолительно, модно рассматривать как признак начальной стадии ге-татитз; введение почечного антигена вкзь ;ало отложение в межклеточном тространстве гликопротеидкыч масс. Эти изменения могут указывать на юразкение фильтрационной мембраны и на возможнее развитие гломеруло-аефрита. Введение антигена сердца сопровождалось гиперемией гемокапил-зяроз, в их стенках обнаруживались лимфоидные инфильтраты, что указывает на наличие иммуноморфологкческих изменений в сердце.

Установлено, что введение аллоантигеков из ткани легкого, сердца, течени, почек и кишечника приводило к повышению количества лейкоцитоз з периферической крови и БАЛЖ в среднем на 120%. Это, очевидно, связано с реакцией орагнизма на аллоантигены, начразленной на их' удаление.

Вачно отметить, что наибольшее и достоверное (р<0,05) по сравне-liso с контролем "интачтные птицы" позышени« числа моноцитов в крови {аблщалось в группе птиц, подвергнутых введен!«) антигенов легких (с 1,4+0,5х103 кл/л до 3,2+0,2хЮ9 кл/л). Аналогичная закономерность выявлена и в отношении числа моноцитов з БАЛЖ (с 3,04),09x103 кл/л до I,5+0,02x10" кл/л). Возрастание количества моноцитов при развитии вос-1алительного процесса указывает на возможность его ' хронизации [В.Д.Кравцов, 1981). Это дает основание предположить, что выраженность аутоиммунного компонента при естественном воспалении легких, у птиц мо-se т способствовать "хронизации процесса.

Введение аллсантигенов приводило к понижению числа эритроцитов и ,'ровня гемоглобина. В то же врем СОЭ достоверно (р<0,05) повышалась [от 3,2 мм/час ; j 3,8-4,3 мм/час) при введении различных аялоаятиге-' юз. ТТовыаеиме 003 мы рассматриваем как признак развития воспаления на »ведение аутологичкых тканевых антигенов.

Функциональная активность клеток крсви у кур после введения им ухлоантигекоз изменялась незначительно. Если ке эти изменения наблюдались, то они были направлены в сторону уменьшения. Так, активность :ейкоцитов в НСТ умоншилась от 63,3%. у интачтных птиц до 8,0-14,7% у ттиц после введения аллоачтигенов, а титр лизоцима, соответственно, с 55,3 усл.ед. до 60,0-64,7 усл.ед. -

В то хе время активность клеток ВЛЛЖ после введения аллоанткгеноэ гкани легких имела противоположную направленность. Фагоцитарное числ и ЮТ достоверно повышались, (с 5,07+0,12 до б,4+0,23 и с 5,7+0,3% до ',3+0,<"-<%, соответственно), а активность фагоцитов, оцененная с помощь» ЖТ, понижалас& (с 2,03_0,03% до 1,5+0,5?»). Эти даннич указывают на

различия в общей и местной реакции у цыплят на введение тканевых алло-ангигетв.

3.3. Характеристика аутоиммунных процессов у кур после введения . аллогеннкх и ксеногенных противолегочных сывороток

Была изучена реакция организма на введение противолегочных алло-генных и ксеногенных сывороток. Методы получения, стандартизации их активности и применения были описаны выше.

Проведенньа • исследованиями было установлено, что введение гипе-риммукной противолегочной ''кроличьей" сыворотки вызвало у кур резко вьрахекную гиперемию легких, особенно в артериальных сосудах с венозной кровью, что, возможно, связано с гиперемией капилляров параброн-хов, то есть капилляров, в которых происходит газообмен. Капилляры были переполнены кровью, что приводило к сдавливанию, уменьшению просвета воздухоносных капилляров. В просвете параброкхоз обнаруживалась слизь, в некоторых участках в значительном количестве. В просвете бронхов второго порядка и некоторых параброкхоз выявлялась кровь (геморрагия), кроме того в них находилось большое количество слизи. Бокаловидные клетки эпителия слизистой были в состоянии пшерсекреши.

У птиц группы N3 - "нормальная кроличья" гиперемия былз выражена слабее. В стенках бронхов второго порядка по сравнению с контролем в собственной пластинке слизистой оболочки имелись обильные лимфоидныо скопления.

В просвете бронхов второго порядка выявляются эритроциты - геморрагия. Б парабронхах и бронхах второго порядка имелась слизь, но меньше выражена., чем в группе N2, которой езодшш протизол^гочкую кроличью "сыворотку.

Введение гипер:<амунной лротиеолегочной куриной сызоротки сопровождаюсь расшрекием парабронхов, в их просвете обнаруживалась слизь с примесью форменных элементов крови.

В группе N5 - "нормальная куриная" выявлено только некоторое расширение параброкхоз при отсутствии каких-либо других изменений.

У контрольных интактных птиц макроскопически не было выявлено ка-кихтлибо изменений в легких и других внутренних органах. Гистологически з некоторых парабренхах обнаруживается слизь, однако форменных элементов крови (геморрагии) не обнаружено ни в одном случае."

Введение противолегочных сывороток сопровождалось достоверным (р<0,С5) повышением числа лейкоцитоз в периферической крови на 20-25%

сравнению с контрольными группами, лейкограмма характеризовалась зинофшшей и моноцитозом. Показатели красной крови характеризовались гмией, гипогемоглобинекией и позкшением СОЭ (скорости оседания итроцитов). В то же время, введение протнзслегочннх сывороток не вводило к существенным изменениям в функциональной активности клеток ози. Количество клеток в ВАЛЖ возрастаю (р<0,С5) у птиц, получавших ъекцки как нормальных, так и прстиьолегочных сывсроток аллогенкого и еногенного происхождения, в сопоставлении с контрольными интактными рами. Клеточный состав Б.ДЛЯ существенно не менялся у все: групп, почавших гипериммунные противолегочкые и нормальные аллогекные и ксе-тенные сыворотки.

Варной особенностыз разработанной нами модели является устанозле-¡е влияния аутоиммунного процесса на эвакуаторную функции мерцательно эпителия трахеи. В эксперименте было выявлзно, что введение про-шолегочкой сыворотки сопровождалось достоверным и ' значительным х0,05) понижением активности мерцательного эпителия трахеи. Так, гедение протизолегочной ксеногекной и аллогенной сывсроток приводило уменьшении активности мерцательного эпителия трахеи ¿¡о 109,8+4,11 и 17,8+5,16 колебаний ресничек з минуту, тогда как у 'нормальных, ин-ектных птвд это число равнялось 207,3+10,9.

. Результаты исследования титра ксмплементсвязывахлцкх противоорган-вх антител у кур после введения противолегочных сывороток предстазле-ы на рис.1. Установлено, что введение кроличьей прстлволегочкой сыво-отки приводило к понижения, а куриной противолегочной сыворотки - наборе? к повышению уровня КС-антител ко всем обследованным органам. В о же время введение нормальной ксеногенной сыворотки приводило к по-ышекко, а аллогенкей - к понижен® уровня протмвоерганкых антител. .

Эти результаты позволяют-полагать, что определенный уровень ауто-йтител наблюдается и у здоровых птиц, способствующий поддержанию го-■.еостаза, как показано & отношении млекопитающих и человека (Грабарь, .663, 1975; А.М.Позеречный, 1968; Кеппэбу Ызаг, 1Э79). Введение ксе-¡сгекной противолегочной сыворотки вызывало, по-видимому, блокирование антигенных детерминант на клетках-мишенях. что и приводило к наблюдае-лому снижению титра противоорганных антител, наиболее выракеным именно з отношении противолегочных.антител.

Нормальная ксеногенная сыворотка, являясь антигенным стимулом при парентеральном введении, может адсорбироваться на тканях многих органов, что и приводило к наблюдаемому нами повышению титра противоорган-

титр антител

150 140 130 120 110 100 90 80 ' 70 50 50 40 СО 20

ю Ь

анткгеиы: сердца.

1 2

1

легкого печени а

1

почки

сердца легкого печени почки б

^ введение противо^егочннх аитнсывороток ^ введение нормальных сывороток т "интактные птицы"

Ряс. 1. Среднегеометрический глтр протавооргадшх антител у кур после введения ,протизолегочных кроличьих (а) я куриных (0) ОЙТИСЫБОрОТОК.

х антител.

Обнаруженный нами факт снижения уровня ко}лплементсвязызачз;цих про-воорганных антител при введении нормальной аллогешой сыворотки мох-объяснить тем, что она является слабым антигенным стимулом для кур. лоантигены, адсорбируясь на клетках различных ткан m затрудняют их опознавание антителами и не элиминируются иммунологическими механиз-ми, что и отражает выявленный качи факт снижения в этой группе лтиу отизоорганных ко"тементсвязыва<ощйх антител по сравнению с интактны-курами.

Косвенным указанием на правомерность выдвинутого объяснения явля-ся хорошо известный клинической трансплантологии" факт о лучшей при-вляемости трансплантатов оргакоз у реципиентов, имевших до" пересадки реливание крови, т.е. введение.аллоантигенов.(Opels et al1973; ff, Kalff et al, 1976; Jestenstein, Sachs et si, 197S). Е.Л.Зотиков,

82). - ■ , .'.,,;'/ > : - ; '-L'-. ;C'"

3.4/-Патофизиологическая и иммунологическая" характеристика ; ... естественной респираторной инфекции у кур

Нами быля, поставлена' задача изучить возможную роль аутоиммунных юцессов в генезе естественно возникающих пневмоний у кур в; условиях ¡скынлекного птицеводства. - ..'

" Из 15СЮ ; подвергнуты V осмотру кур бьшо. взято для. всестороннего ^следования'25 голов. Путем бактериологического, 'и..серологического., шлиза было-установлено, что причинными факторами легочной" патологии, ¡ляются галкбакт0риа©ная инфегаиш (E.coli), ассоциированная с микоп-1змой (M.galliséplicàrn). Это согласуется .с.-литературными данными, сазшашими на превалирование смешанной коли-микоплазменной .'инфекции-тл респираторной патологии у кур (ЯЛ'есароа.и др. / 1SS7). Причиной юокой частоты-смешанных инфекций, кроме широкого распространения, «азанных.. возбудителей, мсгут /лзлять.ся я особенности биологии" хжкоп-азы. Simberkcff и Elsbach (1971) показали, что предварительная танку'-, зция микоплазм с лейкоцитами уменьшает активность последних, в отноше-ш килечной пало ws, которая в нормальных- условиях является . легким Зъектой для фагоцитоза. Г "-,. -v . • ; " • .:";

Для идентификации микоплагмекнсй ; "^¡фекцкй .выведанные. втаммы от эльньос кур были •полЕсргпу.та 'злекгронной, микроскопии. Анализом, злёлгг энограчм" были выявлены характерные ддяМ. gallisepticum черты: органи-' ация внутриклеточных оргаяелл, почкующиеся структуры"'и отсутствие- ne-

регородск мевду дочерними клетками.

. Количество лейкоцитов в периферической крови и БАМ при пневмониях повышалось. Причем степень этого повышения зависела от тяжести процесса в легких. Так, при очаговой пневмонии число лейкоцитов крови повышалось на 51%., а при диффузной - на 77Х по сравнению с контрольными здоровыми курами.

Клеточность БАМ возрастала (р<0, 5) на 15% при очаговой пневмонии и на 18% при диффузной. Клеточный состав БАЛй, по сравнению с таковым у здоровых кур, существенно менялся: на 727. снижалось количество моноцитов, число лимфоцитов повышалось на 15%, незначительно возрастало в БАЛК содержание псездоэозинофилов.

Фагоцитарная активность лейкоцитов и клеток ВАЛЖ у кур при смешанных колк-мккоплазменных пневмониях была достоверно (р<0,05) сниженной. Эти дачные подтверждают наблюдения (В.Н.Чебсткевич и др., 1681), указывающее на то, что микоплазмы подавляют антибактериальную актив-. ность фагоцитов. ■

Эта же закономерность наблюдалась и в .отношении, активности мерцательного эпителия трахеи. Бри очаговой пневмонии активность мерцательного эпителия, оцениваемая по числу колебаний в минуту, снизилась (р<0,05) в 3,7 раза, а при диффузной - в 5,8 раза.

Особого внимания заслуживает обнаруженный нами, факт корреляции уровня протизоорганнкх ком^лементсвязкваощих антител и тяжести пневмонии. Установлено, что антитела ко всем исследованным антигенам органов (легких, сердца, печени, почек) выявлялись в более высоком титре при диффузной пневмонии, чем при очаговой (рис. 2). Учитывав, что у здоровых интактных кур уровень этих антител был ниже, чем у больных, можно констатирсзать, что увеличение титра противоорганных антител указывает ■ на включение механизмов аутоиммунитета при естественной респираторной инфекции у. птиц. Причем титр этих антител является чувствительным показателем тяжести инфекционного процесса. ■--.'...

Таким образом, . представленные результаты доказывают значительную роль аутоиммунного компонента, при пневмониях у кур. Тяхестъ процесса макет оказывать определенное влияние на удельный вес этого компонента в патогенезе инфекций различной природы, что подтверждено'нашими мор-функциональными исследованиями В то же время общие закономерности развития аутоиммунитета остаются сходными. 5то положение дикт/ет, ь частности, необходимость исследования аутоиммунных процессов и их контроля для практического птицеводства.

.50 .40 .30 .20 .10 .00 90 30 70 60 50 40 30 20 10

печени

почки

антигены: сердца легкого

1 | очаговая пневмония

2 диффузная пневмония

3 |—| в целом по группе (очаговая и диффузная пневмонии) •1 р-1 контроль "

Рис.2. Титр противоорганных антител у,кур хозяйства "Лзголово"..

ЙШОДЙ: ' ■

1. Разработана модель для изучения аутоиммунихета у кур, которая :а использована для оце.:ки аутоиммунного компонента респираторной •ологии.

2. Парентеральное введение курам аллогенных тканевых антигенов ¡ровождаюсь морфологическими изменениями, характерными для различ-

; уровней дистрофии, что, в свою очередь, можно рассматривать как ¡ачьные стадии воспалите-льнкх реакций з соответствуют« органах, введение печеночного антигена сопровождалось расширением прост-

3

1

4

V 1 , : ' :'." - . . 16 - •• ... ... ■- ." ".". '■•. . -

ранства Лкссе, что рассматривают как признак мукоидкого набухания; , ьведе.нт почгчисгс антигена вызывало отложение в межклеточном прост. ранстье гликопротеидных масс, указывающих на дистрофические изменения: введение антигена сердца сопровождалось гиперемией капилляров, ъ их . стенках обнаруживались лимфоидные инфильтраты. Введение птице легочного антигена' приводило к периваскулярным кровоизлияниям, деструкции коллагена и межклеточного вещества в стенках кровеносных сосудов, появлению в просвете парабронхов и альвеол экссудата с примесь» форменных элементов крови. / ' ;

• 3. У кур-реципиектоя гилеришункой противолегочной "кроличьей" и "куриной" сыворотки выявлялась гиперемия капилляров парабронхов, в их просвете .обнаруживайся. слизистый-экссудат с примесью форменных элементов кроьи. -

4. Установлено, что после применения гипер^[унных аллогенньи и ксеясгенных противслегочных сывороток у кур изменяется активность клеточного' эвена местной защиты легких: повышается на 40-60% клеточность БАЛЖ , б основном за счет моноцитов и лимфоцитов. Фагоцитарная же. Активность клеток БАЛЖ у подопытных кур была сниженной.

5. У кур-реципиентов введение противолэгочных сывороток сопровождалось существенными сдвигами системы красной (анемия, гипогемоглоби-немия, повышенная СОЭ) и белой (лейкоцитоз, зозинофилия) крови. .

6. Путем микробиологического анализа БАЛЖ показано, что обсеме-ненность нижних отделов дыхательных путей Proteus ; vulgaris достигала 83% от количества птиц которым вводили противолегочную аплогенную-сыворотку, тогда как у контрольной птицы протей не.высевался. Кроме того, у подопытных кур была более интенсивной обсемененность чихклх'ды-

: нательных путей и'киаечной палочкой. Это свидетельствует об ингибиции местной защиты дыхательных путей у подопытных птиц. л

' .7. Установлено,- : что ксекогенные и аллогенные протиаоорганкые;сыворотки оказывают . неодинаковое влияние на титр комплементсЕязывгюпшх противотканевых; антител. Так, введение гипериммучяой -кроличьей антисыворотки против; ткани легких- вызывало снижение титра.противолегочных 'антител'.'на £5Ху ■ а; гйдерюд^наЬй куржой п^тго "тнаней легкж .-/ наобог

' ,v.jf« В. ^к^йо^огичиммунологедескими методами 'было установлено, '®0;-;';хновНым^ патологии у '■кур\апщрфабрййи- "Лаголово',' является.ассоциация т" Е.coli , м. gäilisep-ticuiri.. При диффуаной пнрмонш в вш обнаруживался и Pr. vulgaris.

9. У кур с очаговой и диффузной спонтанной пневмонией установлено эезкое повышение титров сывороточных анттаел к тканевым антигенам лег-таго, сердца, почек, печени в сравнении с титрами аналогичных антител г интакткых птиц.

10. Функциональная активность мерцательного эпителия слизистой оболочки трахеи у кур после введения ксеногенкой и аллогенной противо-1егочной сыворотки и у больных спонтанной пневмонией была ингибирова-ia. Так, у интактных кур контрольной группы частота сокращений ресни-шк мерцательного эпителия в среднем была равной 207,3+10,9 в минуту, г чур же после введения противолегочной антисызоротки - 109,8+4,1 в жнуту. У кур, больных пневмонией, число сокращений ресничек составляю 48,8+2,5 в минуту, у контрольных здоровых кур - 210,5+2,5.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДйОЖННЯ

1. Определение титра противоорганкых антител у кур по кашей мето-twte может быть использовано как чувствительный тест для выявления их гммунологической реактивности при проведении' профилактических меропри-1тий и разработке-графш«ов плановой вакцинации.:

2. Для'выявления бактериального, фактора в этиологии пневмоний ре-¡омендуется использовать бронхоальвеолярннй лаваж в качестве материала 1ля бактериологического исследования. Такой материал позволяет полу-шть достоверную характеристику микрофлоры' низших дыхательных ' путей

ур. ;■'■'".". : -V'■'•■'.""■■-':,- ' •

-'"' 3: Материалы диссертации могут быть использованы в учебном про-[ессе при чтении лекций, проведении лабораторных занятой по патологи-[еской физиологии, гистологии, иммунологии, и другим дисциплинам, а ■гуле при натасачин учебников и учебных пособий.

СПИСОК РАБОТ 0ПУВЖК0ВА1ПШ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Пишванов С.Ю. Методика подготовки материала брохоальвеолярного ¡аважа для цитохимического и цитологического исследования // Материалы :аучной конференции профессорско-преподавательского состава, научных этрудникоз и аспирантов. СПВИ "Актуальные проблемы "ветеринарии". Г-.

-Петербург,.,1094. - С. 63. ; .

2. Баринова C.B., . Пишванов С.Ю. .К патогенезу экспериментального невмонита у птиц // Актуальные проблемы' патофизиологии. Материалы ежвузовской научной конференции. - С.-Петербург, 1895. - С. 7-9: ..

3. Пишваков С.Ю. Методика получения цитотсксических сывороток //

Актуальные проблемы ветеринарной медицины. Сборник научных трудов К 12?. - С.-Петербург, 1995. - С. 64-65..

Пи!ВВ£ноз С.Ю. Аутсиммункзация при заболеваниях легких у кур // Тезисы докладов 50-й научной конференции молодых ученых и студентов СПбГАВМ;- СПб., 1995, С.23-24.

5. С.Й.Латинский, Б.Н.Чеботкевич, Лшванов С.Ю. Роль аутоиммунных процессов в патогенезе пневмонита у кур // Первый Российский конгресс по патофизиологии с международным участием. Тезисы докладов. М., 1996, С. 335. .....