Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Пути совершенствования диагностики и профилактики бруцеллеза у животных

На правах рукописи

УДК 619:616.961.42-07.84

БЕЛОБАБ ВИКТОР ИВАНОВИЧ

ПУТИ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ДИАГНОСТИКИ И ПРОФИЛАКТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА У ЖИВОТНЫХ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Республика Казахстан Алматы 1998

Работа выполнена в лаборатории бруцеллеза Казахского научно исследовательского ветеринарного института Национального академнчес кого центра аграрных исследований Министерства науки - Академии нау( Республики Казахстан.

Научный консультант - доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент АН РК Н. П. Иванов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук Ю. М. Горелов;

доктор ветеринарных наук, профессор, С. М. Димов;

доктор ветеринарных наук, профессор, член-кор респондент АН РК Т. С. Сайдулдин.

Ведущая организация - Кыргызский государственный научно-исследовательский контрольный институт ветеринарии

Защита диссертации состоится « /у » 1998 г. в _

часов на заседании диссертационного совета Д 55.40.01 при Казахско» научно-исследовательском ветеринарном институте по адресу: 48001) г.Алматы, проспект Райымбека. 223.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан « 3О» ЛЛС)&. 1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук,

профессор ¿-V Б. Ф. Керимжанова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Бруцеллез - зоонозное инфекционно-хроническое заболевание животных и людей. Однако, эта болезнь может проявляться как типичная, острая инфекция с быстрым перезараженнсм поголовья и ярко выраженной клинической картиной в форме массовых выкидышей или рождения нежизнеспособного молодняка.

Актуальность проблемы. Интересы развития народного хозяйства и охраны здоровья населения требуют от ученых разработки путей быстрейшей ликвидации инфекционных болезней и, в первую очередь, особо опасных и общих для человека и сельскохозяйственных животных. В настоящее время одной из главных проблем в области борьбы с инфекционными заболеваниями является ликвидация бруцеллеза, так как эта инфекция получила значительное распространение не только среди животных, но н среди людей.

В изучение бруцеллеза большой вклад внесли исследователи разных стран, что привело к резкому сокращению заболеваемости, а в некоторых государствах и полной ликвидации этой инфекции (П.А.Вершилоза, 1961; П.Н.Жованик, 1975; И.А.Коснлов, 1975,1976; П.А.Триленко,1976; Т.С.Сайдулдин, 1981; Н.П.Иванов, 1986; А.А.Новицкий, 1988, 1989 и т.д.). В республике Казахстан бруцеллез до сих пор имеет значительное распространение. Из общего числа имеющегося поголовья 20% являются неблагополучными по этому заболеванию.

Борьба с бруцеллезом слагается из выявления и ликвидации источника возбудителя инфекции, факторов передачи заразного начала и недопущения заболевания здоровых животных.

В этой связи важное место в комплексе протнвобруцеллезных мероприятий отводится диагностике. Существующие средства и методы обнаружения болезни не позволяют выявлять всех бруцеллоносителей, что

сдерживает оздоровление стада. Кроме того, в разные периоды развития заболевания отмечены свои особенности его проявления, так как нередко происходит изменение антигенной структуры микроба при парази-тиросанин его в макроорганизме, что ведет к соответствующим сдвигам иммунного ответа. В таких случаях антитела могут приобретать иную специфичность. С учетом изложенного, совершенстпонание методов диагностики бруцеллеза остается актуальной проблемой.

Опыт борьбы с бруцеллезом показывает, что в зоне со значительным распространением инфекции..оздоровление животноводческих хозяйств, без применения средств специфической профилактики весьма затруднительно. В этой связи, при оздо-ровленни хозяйств в комплексе противо-бруцеллезных мероприятий для иммунизации животных применяют живые вакцины из штаммов бруцелл, в частности B.abortus 19 и 82, B.melitensis Rev-i (П.С.Уадсевкч, 1966; К.П. Студенцов, 1975; K.M. Салмаков, 1977, ¡981;О.Ю.Юсупов,1986; А.Л.Султанов, 1992 и т.д.). Следует отметить, что применяемые вакцинные штаммы являются несовершенными, так как они, наряду с относительной нммуногснностыо, обладают выраженными антигенными и патогенными свойствами и несут долго опасности реверсии их в полевые культуры, способные вызвать заболевание животных.

Ряд исследователей предлагают неживые иммуногенные препараты, полученные путем выделения протективных фракций из бруцелл химическим путем (П.Л.Вершнлова с ссазт., 1974, 1982; В.М. Нифантьев, 1975; П.Е. Игнатов, 1981; Е.Л. Драновская и др., 1981, 1982). Но они не нашли практического применения в связи с недостаточными иммуно-reiiHMMii свойствами. В этой связи актуальными являются иссле-дования, направленные на конструирование неживых вакцин, .изыскание средств, усиливающих действие выделенных из бруцелл протективных антигенов,

а также способов их применения. В условиях передерж::*.! больного поголовья представляет большой интерес и изыскание антибактериальных препарзтоз и хнмиотерапевтнческнх средств для применения с целью санации инфицированного организма и купирования инфекции.

Все вышеизложенное побудило пас провести исследования по разработке и внедрению более совершенных методов диагностики, средств профилактики, эффек-тивных биологических и хнмиотерапев-тических препаратов. Работа проводилась с 1970 по 1997 гг., согласно плановым заданиям (0.51.426.С, 1971-75 гг.; 01.05.Н-2, Н-3, 1976-80 гг.; О.СХ.97.01.02.05.М2,1980-85 гг.; О.СХ.61.02.01.5Д, 1986-90 гг.; 18.01.1.6,1991 -95 гг.; 02.01 .М, 1996-2000 гг.).

Цель н задачи исследований. Целью настоящих исследований являлось изыскание путей совершенствования диагностики и профилактики бруцеллеза животных. При этом на разрешение поставлены следующие задачи:

- оптимизировать методику постановки серологических реакции (РЛ, 1'СК, РДСК) в микрообъемах при диагностике бруцеллеза;

- разработать способ приготовления фаговых и цветных антигенов для постановки РЛ, РСК, РБП при выявлении больных бруцеллезом животных;

- изучить диагностическую ценность антигенов из культур бруцелл с различной степенью диссоциации для выявления скрытых форм бруцеллеза у животных;

- установить сравнительную эффективность методов дифференциации животных, иммунизированных вакциной из шт. 19 и спонтанно больных бруцеллезом;

- разработать метод выявления латентных форм бруцеллеза у крупного рогатого скота с помощью вакцины из штамма 82;

- разработать рецепты питательной среды для выращивания различных биоваров бруцелл;

- изучить антигенную структуру различных биоваров бруцелл н возможность их индикации;

- изучить нммуногепность вакцины из штамма Рев-1 на овцах;

- определить антигенные и нмунногенные свойства клеточных структур бруцелл;

- изыскать и испытать иммуностимуляторы для изготовления противобруцеллезных вакцин и изучить эффективность их применения;

- изучить чувствительность бруцелл зс различным антибактериальным препаратам при бруцеллезе;

- определить влияние некоторых стимуляторов на антибактериальную 'активность препаратов при бруцеллезе;

- изучить эффективность применения антибактериального препарата с целью купирования заболевания и санации организма животных.

Научная иотппа работы. Изысканы пути совершенствования диагностики и специфической профилактики бруцеллеза животных на основе изучения биологических свойств бруцелл, определения антигенности и гашуногснности отдельных клеточных стругстур бактерий, изыскания наиболее приемлемых иммуностимуляторов и антимик-робных препаратов, установления оптимальных условий проявления действия биоло-гически активных дериватов бруцелл.

В результате проведенных исследований разработан цветной корпускулярный антиген для РЛ н РБП при исследовании сывороток крови на бруцеллез. Изучена диагностическая ценность препаратов, приготовленных из различных по степени диссоциации культур бруцелл.

Предложен оригинальный метод получения антигена для серологической диагностики бруцеллеза, который содержит бактериофаг,

способный выявляй, противобруцеллезные и антифаговые субстанции (A.c. № 1713652, 1991; патент№ 162, 1993).

Разработан препарат для аллергической диагностики бруцеллеза (предварительный патент Кч 4573, 1997).

Изучены оптимальные условия сорбции окрашенных раствором конго-рот стафилококковых культур иммуноглобулина (Jg G) кролика, что позволило разработать способ получения антительного днапюстикума для обнаружения бруцелл и нх антигенов в исследуемом материале ( свидетельство Васкомнзобретений № 0039810, ¡992).

Разработан оригинальный рецепт питательной средь:, применение которой увеличивает число бактериологических находок и количество бактериальной массы (А. с. № 523932, 1976).

Определена целесообразность применения вакцины из штамма 82 п ' сниженной дозе с целью выявления латентных форм бруцеллеза и создания иммунитета, предотвращающего поствакцинальные аборты (свидетельство Васкомнзобретений № 0020115, 1991).

Изучены биологические свойства выделенных от животных на территории Казахстана культур бруцелл, чувствительность их к антибактериальным препаратам и на основе этого, создана антибактериальная композиция для купирования заболевания и санации инфицированного организма (A.c. № 1506659, 1986; свидетельство Васкомнзобретений № 0027611, 1991; патент № 38, 1993; предварительный патент № 4564, 1997; Kyojiix 45S, 1997).

Определена специфическая устойчивость овец к заболеванию бруцеллезом в отдаленные сроки после иммунизации их вакциной из штамма Рев-1, что позволило определить возможность повышения эффективности применения данного препарата с целью профилактики заболевания.

Изучены протективные свойства композиций, включающих антигенные комплексы бруцелл, иммуномодуляторы и пролоигаторы. В результате создана неживая противобруцеллезная вакцина, индуцирующая достаточно напряженный иммунитет у крупного и мелкого рогатого скота, верблюдов, свиней (свидетельство Васкомизобретенин № 0027612, 1991; № 0039815, 1992; предварительный патент № 4571, 1997).

Работа по совершенствованию средств специфической профилактики позволила изыскать, с целью усиления профилактического эффекта^ряд иммуностимулирующих средств (предварительный патент Кг 4565,1997).

Результаты научных изысканий легли в основу более совершенной системы мероприятий по борьбе с бруцеллезной инфекцией с.-х. «квотных (Кузжк № 254, 1995), пяти рекомендаций, двух НТД на различные препараты.

Теоретическая и практическая значимость работы. В результате проведенных исследований выявлены пути совершенствования диагностики н профилактики бруцеллеза па основе знаний биологических свойств возбудителя болезни при пгразитирооании с организме восприимчивых животных (накопление бноваров, имеющих 5-, Б11-, 11-, КЬ-, Ь-детерминактные группы), антигенной н протективнон активности отдельных клеточных структур бруцелл с учетом их изменчивости, изучения возможной иммунной стимуляции макроорганнзма и пролонгации раздражающего эффекта, роли фаговых частиц в развитии пато - и иммуногенеза. Полученные нами данные предусматривают:

- с целью экономии дорогостоящих компонентов, повышения производительности труда и сокращения времени постановки диагноза на бруцеллез серологическими методами, использовать микротитраторы (типа «Тите'ртек»), аппараты для проведения пластинчатой реакции и применять

цветной антиген, а также антигены,содержащие фаг, приготовленные кшя согласно А.с. 1713592, 1991; патент № 162,1993 г.;

- для одновременного выявления в организме больного проткво-бруцеллезных и антифаговых субстанций, индуцированных соответствующими сенслтинами, применять антигены, содержащие фаговые частицы и корпускулы возбудителя заболевания;

выявление латентно больных и бруцеллоносителей среда иммунизированных животных путем обнаружения в РА я РСК микроглобулннов (¡¿3) или провокации малой дозой вакцины из штамма 82;

- использование предложенных нами питательных сред, значительно повышающих число бактериологических находок, увеличивающих накопление бакмассы при изготовлении микробных антигенов (диагностических и вакцинных препаратов);

- применение диагиостикумов, приготовленных из различных по степени диссоциации форм бруцелл, содержащих детермннантпые группы, позволяющие выявлять больных животных, пораженных возбудителем болезни с Б-, БЯ-, Я- антигенным набором, что значительно (до 15%) увеличивает эффективность диагностики;

иммунизацию животных осуществлять разработанным нами протективным антигеном (неживой вакциной), состоящим из дериватов бруцелл, адаованта и иммуностимулятора;

- с целью санации организма больных бруцеллезом животных н снижения остроты течения болезни использовать-антибактериальный препарат;

- оздоровление от бруцеллезной инфекции поголовья с.-х. гекзотиых проводить путем проведения комплекса мероприятий, включающего предложенные нами новые диагностические и профилактические средства и методы их применения.

Инедреине результатов исследований. На основании результатов исследований практике предложены:

- наставление по применению вакцины живой сухой из шт.Рев-1 Б.мелитензис. для иммунизации овец, коз против бруцеллеза и баранов против инфекционного эпндидимита (Утверждено ГУВ Госафопрома СССР, 1986);

• методические указания по постановке и применению диагностических реакций при исследовании крупного рогатого скота после иммунизации вакциной га шт. 19 в целях дифференциации поствакцинальных реакций от реакций у больных бруцеллезом животных (Утверждены ГУВ МСХ СССР, 1975 г.);

- рекомендации по профилактике и оздоровлению от туберкулеза н бруцеллеза крупного рогатого скота Торгайской области, 1982;

- методические рекомендации «Иммунизация против бруцеллеза нетелей и половозрелых телок» (Утверждены 1ТГС Госагропрома КазССР, 1989 г.);

- рекомендации «Профилактике бруцеллеза у крупного рогатого скота и выявление толсрантнь:;: животных и бруцеллоносителей» (Утверждены НТС Госагропрома КазССР, 1991 г.);

- комплексный план основных мероприятий по оздоровлению животноводческих хозяйств Казахской ССР от заболеваний животных бруцеллезом и туберкулезом на 1981-1985 гг.; 1985-1990 гг.; 1991-1995 гт.

Предложенные диагностические и профилактические препараты внедрялись в хозяйствах Алматннской, Акпобинсхой, Восточно-Казахстанской, Жамбылской, Карагандинской, Костанайской, Талдыкорганской и Торгайской областей.

Апяойация рпботь;. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практической конференции молодых ученых и специалистов КазНИВИ

и АЗВИ (Алма-Ата, 1984); на заседании сотрудников лаборатории

эпизоотологии, диагностики и профилактики бруцеллеза ВИЭВ им. Я.Р.Коваленко (1985); республиканских семинарах-совещаниях и конференциях по проблемам бруцеллеза н туберкулеза животных (Акмолинск, 1971; Алма-Ата, 1980, 1983, 1985, 1986, 1988, 1989, J993; Петропавловск, 1989, 1992); на заседаниях секции ветеринарии Ш'С Госагропрома Казахской CCPf 1989, 1991); ученых Советов Казахского НИВ И (ежегодно при заслушивании отчетов).

Антибактериальный препарат демонстрировался -на республиканской выставке народного хозяйства КазССР г: авторы были удостоены диплома I степенн,2.12.1991 г.

Основные положения, которые выносятся на защиту. Результаты изучения антигенной и протекгнвной активности отдельных клеточных структур бруцелл. Способы получения антигенов для иммунологических реакций.

Результаты изучения диагностической ценности препаратов, приготовленных из различных по степени диссоциации культур бруцелл. Способ приготовления аллергена н данные определения его диагностической ценности. Результаты изысканий возможности предотвращения поствакцннальных абортов и выявления лагентных форм бруцеллеза с помощью сниженных доз вакцины из штамма 82. Данные по конструированию и испытанию неживой противобруцеллезнон вакцины, включающей антигенные комплексы бруцелл, пммуномодуляторы и пролонгаторы. Результаты изыскания питательных сред, использование которых увеличивает число бактериологических неходок и количество микробной массы при изготовлении бруцеллезных биопрепаратов: Условия сорбции противобруцеллезных (Jg G) глобулинов окрашенными раствором конго-рот стафилококковыми культурами с целью приготовления антительного диагиостикума для индикации бруцелл и их дериватов.

%

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 50 работ, где изложены основные положения и выводы, содержащиеся з материалах Всесоюзных и республиканских научных конференций, сборников трудов ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко, ИЭВСнДВ, Казахского КИВИ, журнала «Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана» и других научно-производственных изданиях.

Обтьем и струю-ура работы. Диссертация изложена на 426 страницах машииопнсн, содержит 35 таблиц и 2 рисунка. Она состоит га введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, заключения, выводоз, практических предложений, списка использованной литературы, включающего 300 наименований источников отечественных и зарубежных автороз и приложений.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы ¡а методы исследований При выполнении работ по совершенствованию микрометода постановки серологических реакций нами использованы общепринятые методики (М.1970; М.1977; М. 1982) и способы, в которые мы вносили определенные тменеиия, изложенные в соответствующей глав-; представленной диссертации. При этом было исследовано 237 сывороток крови крупного рогатого скота различных по эпизоотической ситуации групп животных.

Изготовление антигена для ПРА осуществляли путем окрашивания убитых нагреванием бруцелл, находящихся в виде Юн 100 млрд. взвесей. Для окрашивания микробных тел использовали растворы бриллиантового "зеленого и розового бенгальского. Классические РА и РСК ставили согласно методическим указаниям (М. 1977).

Кроме того, в качестве контроля применяли роз бенгап антигены, представленные французской фирмой «Оберлан», германской «Дессау» и

ВИЭВом, а также антиген для кольцевой реакция с молоком, нзготовташыЯ Щелковским бкохомбинатом.

При определении диагностической ценности РБП исследовано 422 сыворотки крови крупного рогатого скота, 51- овец и 67-морских спинок.

Антиген фаговый готовили путем сорбции фаговых частиц бруцеляами штамма 19, нз расчета 10 фаговых корпускул на 1 микробную клетку и использовали в PA, РСК (РДСК), а после окраски роз бенгальским красителем - в РБП. Исследовано 1446 сывороток крови крупного и 550 мелкого рогатого скота нз неблагополучных по бруцеллезу хозяйств.

При изучении диагностической ценности антигенов нз различных по степени диссоциации форм бруцелл, изготовление диагностнкумов осуществляли путем разрушения взвеси бруцелл ультразвуком с последующим дифференциальным центрфугированием дсзиитеграта.' Дезинтеграцию бруцелл проводили с помощью низкочастотного (22 кгц) ультразвукового аппарата УЗДН-1, мощностью 100 пат\см2 в течение 20-25 минут. Температуру бактериальной взвеси регулировали водопроводной водой, хоторую пропускали между стенкам» специально смонтированных для этой цели стеклянных колб.

Для приготовления антигенов взяты культуры бруцелл вида абортус штаммы 19 (S),52 и 82 (SR), вида овис 10/1,424/1,873 (II) и 17/4,726 (L).

Исследовано 1550 сывороток крови крупного и 897 мелкого рогатого скота нз неблагополучных по бруцеллезу хозяйств Алматинской области.

При определении диагностической ценности методоз дифференциации поствакцинальных реакций у животных, иммунизированных вакциной из штамма 19, проводили исследования сывороток крови в- РСК с прогреванием, РА с прогреванием, РА и РНГА с предварительной обработкой цистеином. Молоко исследовали з KP и РСК, сыворотку молока в РА и РНГА. Молоко коров подвергали бактериологическим исследованиям

с постановкой биопробы на морских свннках. Мнкроглобулиновые антитела в сыворотке крови определяли после предварительного разрушения макроглобулинов соляно-кислым цистеином по методу Е.В.Чернохвостовой (1965) в нашей модификации, а также путем постановки РСК с инактивиро-ванными при 70° С б течение 30 минут сыворотками крови. При этом исследовано 3206 проб сыворотки крови коров хозяйств Алматннской и Торгайской областей.

При разработке методов выявления латентных форм бруцеллеза у крупного рогатого скота использован слабоагшотнногенный штамм бруцеллеза абортус 82. В экспериментальных условиях определена минимальная доза штамма 82 (1 млрд. м.т.), которая не вызывала длительную ссропозитивность (30-45 дней) и способствовала максимальному подъему антител в сыворотке крови больных животных.

Кроме того, эта концентрация вакцины применялась для предотвращения абортов и более эффективной иммунизации животных. Метод провокации 1/100 дозой вакцины из штамма 82 с последующим диагностическим исследованием и введением полной дозы вакцины испытан на 62785 животных хозяйств Новороссийского, Карабутакского, Ленинского, Мартукского, Актюбннского районов Актюбинской области.

При разработке рецептов питательной среды для выращивания бруцелл испытано пять прописей сред к изучено влияние 18 аминокислот, добавленных в среду, на рост различных штаммов бруцелл. Определена возможность использования панкреатических гидролизатов казеина, семенников с придатками и предложен рецепт приготовления питательной средь;, увеличивающей выход микробной массы. Качество сред определялось по биохимическим показателям, содержанию общего и шинного азота, пептона, триптофана, цистина, глюкозы, глицерина,

показаний рН и интенсивности роста различных культур бруцелл, с последующим определением их количества.

Изучение иммуногенности вакцины из штамма Рсв-l на овцах проводили в экспериментальных условиях путем заражения иммунизированных животных в отдаленные сроки (3 и 4 года) после вакцинации с последующим убоем и бактериологаческнм исследованием органов животных, а также в производственных условиях путем эпнзоотологнческого и клинического наблюдений, диагностических исследований и сравнительного анализа на поголовье более 20 тыс.голов, с последующей ревакцинацией 892,6 тыс. овец в Республике Казахстан.

Биологические (478 культур), а также антигенные и иммунногепные свойства клеточных структур бруцелл определяли по методикам, рекомендованным Подкомитетом по таксономии бруцелл Международного комитета экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу (Дж. Альтоп с соавторами, 1967). Наличие преципктирующих комплексов антиген-антитело с культурами бруцелл вида абортус 544, 45/20, мелитензпе 498, 16 М, суис 1330, 1024, овис 10,424, 873, 277 и 18 свежсвыделенных культур определяли по общепринятой методике. Иммупогениые свойства культур, находящихся в различной степени диссоциации (от S - до L - форм) изучали путем введения их морским свинкам, с последующим заражением оттитрованной дозой вирулентной культуры бруцелл, убоем и бактериологическим исследованием органов. С этой целью использовали штаммы B.abortus 19, 82, 70, 52, 6, 54; B.melitensis Rev-!, 565; B.ovis 227, а также глубоко диссоциированные культуры бруцелл 726, 734,17/4.

Определение иммуностимулирующих свойств препаратов (адъюпантов, полимеров, биологических и растительных экстрактов, химических соединений) проводили путем сопоставления результатов, полученных при изучении иммуногенных, лечебно-профилактических и реактогенных

свойств, приготовленных препаратов, композиций вакцин. При этом реакции (РА, РСК. РБП и др.), бактериологические и гистологические исследования проводили по общепринятым методикам (П.А.Трнленко, 1976). В экспериментальных условиях использовано 310 морских свинок, 90овец, а в производственных- подвергнуто иммунизации 17,1 тыс.гол. крупного рогатого скота и 1215 свиней неживой противобруцеллезной вакциной.

Чувствительность бруцелл к различным антибиотикам и антибактериальным препаратам зарубежного и отечественного производства (к 25) определяли у штаммов В.аЬопш 54, 544; В.теШегшБ 565, 16 М, 498; В.бшз 1330; В.оуЬ 10/2, 424/2, 873, 227. Концентрацию препаратов в растворе готовили методом серийных разведений в пробирках, содержащих полужидкий агар в объеме 5 см3 с рН = 6,9, с последующим внесением по " 200 млн микробных клеток бруцелл.

Резработанкая композиция испытывалась на морских свинках, овцах (экспериментально) к крупном рогатом скота (более 6 тыс. гол), верблюдах (41 гол.) и свиньях (1100 гол).

Результаты опытов обрабатывались методами вариационной статистики, описанными Е.В. Манцевичюге-Эрингете, 1964; Н.В. Садовским, 1975.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Совершенствование микрометода постановки серологических реакций на бруцеллез.

Важным вопросом при диагностике бруцеллеза является необходимость совершенствования технического исполнения постановки "иммунологических реакций, облегчения и повышения производительности труда лабораторных работников, а также снижения экономических затрат.

С этой целью для постановки реакции агглютинации (РА), реакции связывания и длительного связывания комплемента (РСК и РДСК) микрометод с сыворотками крови животных, использован новый полу-

автоматический мшф-стлтратор марки «Тнтертек» производства Франции. Методические ухазакиг по постановке реакций с помощью этого аппарата разработаны сотрудниками ВИЭВ в 1977 году.

Перед нами была поставлена задача провести сравнительные диагностические исследования на бруцеллез сывороток крови различных животных микрометодом е помощью аппарата-мнкротнтраторс и общепринятых диагностических методов. Анализ результатов исследований показал, что животные, имевшие по общеприняты?.; методам (РА и РСК) негативные показания, при постановке РА микрометодом с цветным антигеном для кольцевой реакции з 10 и более процентах случаев п разведения сыворотки 5:59 имели агглютинацию на 1-2 креста. При исследовании заведомо положительных н отрицательных сьгзороток крозн крупного рогатого скота а РСК микрометодом отмечалась задержка гемзжап ' эритроцитов в безантигенном ряду.

Нами проведен ряд опытов по выявлению причин, способствующих задержке гемолиза эритроцитов и появлению сомнительных показаний РА при постановке ее микромегодом.

Результаты исследований показали, что активность комплемента не изменялась в присутствии растворимых одной ¡гз солей (хлорида кальция или магния) или их сочетаний при pH 7,5 - 8,0.

При изготовлении разбавителя с желатином имеются определенные неудобства, так как последний при подогреве и постоянном помешивании растворителя адсорбируется стенками сосуда. Мы провели опыты по замене желатина в растворителе на нейтральное вязкое вещество, хорошо растворимое в воде - глицерин. Аналогичные результаты получены при использовании растворителя с глицерином в концентрации 1:300 - 1:350.

%

Затем, параллельно с рекомендованной ВИЭВом методикой разведения сыаороток, мы испытали сыворотки в разведении 1:6. как в антигенном, гак и безантигенном ряду.

Результаты исследований показали, что внесение сывороток в дозе 0,006 см3 и разведение их 1:6 и 1:11 оказалось более приемлемым для постановки РСК и РДСК микрометодом.

Кроме того, исследованиями установлено, что для полного гемолиза эритроцитов в контрольном ряду исследуемых сывороток необходимо увеличить коэффициент поправки дозы комплемента до 1,40.

Технология приготовления антигена для кольцевой реакции с молоком сравнительно сложна, а сам препарат недостаточно специфичен (НЛИванов, 1968,1985).

В связи с этим, нами были испытаны антигены: роз бенгал (цельный и разведенный 1/15 М фосфатном буфере рН 7,0), предложенный для пластинчатой РА; единый бруцеллезный диагностикум, применяемый в меднцинехой практике при постановке РА на стекле, в также цветной антиген для кольцевой реакции с молоком в разведении 1:13.

Исследования показал», что четко выраженные результаты были получены только с единым бруцеллезным диагностикумом в разведении 1:2. Поэтому, единый бруцеллезный диагаостикум в разведении 1:2 оказался более приемлемым для постановки РА микрометодом.

Затем нами проведены исследования по изысканию более простого способа приготовления цветного антигена для реакции агглютинации в "микрообъеме и определения диагностической ценности его.

Установлено, что для этих целей приемлем краситель - бриллиантовая зелень в разведении 1:3000.

В сравнительном плане исследовано 149 сывороток крови телок случного возраста благополучного По бруцеллезу молочного комплекса

учхоза «Джанашарский» Энбекши-казахского района Алматинской области и 88 сыворотох крови неблагополучного по данному заболеванию поголовья крупного рогатого скота.

Результаты опыта показали, что приготовленный нами цветной аятнпгп сохранял исходные агглютинабельные свойства и выявлял равное (по числу показания классической РА) количество (62 или 70,4%) больных животных. Этот антиген прост в изготовлении и в 8 раз дешевле коммерческого препарата (антигена для кольцевой реакции с молоком).

Модификации способа приготовления бруцеллезного антигена для РБП, РА и PCX P. Nicoletti « соавт. 1967 предложен для пластинчатой реакции агглютинации антиген окрашенный бенгальским розовым, суспензированный а буфере рН = 3,65. В нашей стране методика изготовления антигена для этой реакции разработана (1974-1976 гг.) ВИЭВом, ВГНКИ совместно с научно-исследовательским институтом прививочных средств «Дессау» (ГДР). Нами проведены исследования по изучению пластинчатой РА с роз бенгал антигеном при постановке ее с сыворотками крови крупного рогатого скота (422), овец (51), морских свинок (67) в сравнении с РА, РСК. Для постановки РБП использовали роз бенгал антиген, приготовленный а нашей стране (бывшем Союзе) ВИЭВ и Франции.

Полученные данные показали, что пластинчатая реакция с роз бенгал антигеном при диагностике бруцеллеза у животных является более чувствительной, так как выявляет положительно реагирующих на 6,5% больше, чем пробирочная РА. Указанная реакция проста по технике постановки. Однако чувствительность роз бенгал пробы зависит,.наряду с другими факторами, от активности антигена, его дозы и условий, s которых она проходит. Антиген, в основном, взаимодействует с ..агглютининами, поэтому РБП целесообразно использовать в качестве дополнительного

и

метода для серологической диагностики бруцеллеза и начальном периоде болезни.

Известно, что у животных с хроническим течением инфекции часто не обнаруживаются антитела, выявляемые в РА и РБП бнофабричнычи антигенами (Д.С.Мардасакяи с соавт., 1987; В.К. Студенцова с соавт., 1939; О.Г.Меликян с соавт., 1987). Нами поставлена задача повысить чувствительность изготовляемого бруцеллезного антигена для серологических реакций. Анализ данных литературы показал, что культуры бруцелл поражены бактериофагами. Фаги являются клеточными паразитами, размножаются из бактериальных клетках, имеют, различную литическую агтивность и представляют родственную в антигенном отношении группу. Установлена связь тяжести заболевания от свойства культур и бактериофага, выделенных ' при бруцеллезной инфекции (М.С.Дрожевкина с соавт., 1960). Одновременно у животных повышается титр антител к специфическому фагу в сыворотках кровк. В с.аязи чем, мы предположили, что антиген, имеющий в своем составе бруцеллезные и фаговые клетки, будет способен вступать в реакцию с антибруцеллезпыми и антифаговыми антителами, что приведет к повышению его чувствительности и будет выявлять животных, больных острой и хронической формами бруцеллеза. С этой целью использовали Тбилисский фаг - ТБ, который адсорбировали на бруцеллы штамма 19 из расчета 10 и более фаговых корпускул на 1 микробную клетку.

Роз бенгал антиген готовили путем орашивания бенгальским красителем 100-миллиардной суспензии бруцелл с адсорбированным фагом.

При испытании бруцеллезных антигенов, содержащих фаг, установили следующее. При исследовании 1446 сывороток крови крупного рогатого скота из неблагополучных по бруцеллезу хозяйств с различной эпизоотической ситуацией с фабричными антигенами в РА+РДСК+РБП

вступило в реакцию 86 сывороток, с антигеном, содержащим фаг, получили 127 положительных результатов.

Совпадающие результаты в различных реакциях с бнофабричными антигенами и диагностикумамн, содержащими фаг, наблюдали во зсех случаях, где отмечены позитивные показания с первым. Наибольшее число реагирующих выявлено антигеном, содержащим фаг в РБП - 96 и в РДСК -63 животных, тогда как с бнофабричными антигенами в соответствующих реакциях обнаружено позитивных показаний соответственно 69 и 49.

Для подтверждения специфичности и чувствительности' антигенов, содержащих фаг, провели убой 4 коров, реагирующих на данные диаг-ностнкумы, с последующим бактериологическим исследованием. 3 результате, от двух животных изолировали эпизоотические культуры бруцелл вида збортус.

При исследовании 550 сывороток крови овец, неблагополучного по бруцеллезу совхоза «Кендерлыкский» Зайсанского района (где из абортированных плодов выделили 3 культуры бруцелл вида мелнтензис) антигенами, содержащими специфический фаг, выявлено в РБП -222 положительно реагирующих животных, в РА - 52 и РДСК - 154. С биофабричными антигенами, в соответствующих реакциях, положительные реакции зарегистрированы с сыворотками от 162, 35 и 108 животных. Прн убое трех овцематок, реагирующих только с антигенами, содержащими фаг, бактериологическими исследованиями изолировали две эпизоотические культуры бруцелл вида мелнтензис.

Так как бактериофаг способен размножаться только на живых микробных клетках, то сыворотки крови животных,' реагирующих положительно с антигеном, содержащим фаг и отрицательно с антигеном, в состав которого он не входит, свидетельствует о том, что животное, от которого получена данная сыворотка, является бруцеллоноентелем.

В результате проведенных исследований разработан оригинальный метод получения антигена для серологической диагностики бруцеллеза, который содержит микробные клетки и бактериальный фаг (А.с. № 1713592, 1991; патент 162,1993).

Диагностическая ценность антигенов нз культур бруцелл с различной степенью диссоциации.

И.А.Косшюв (1974); Б.Н.Афанасьев (1984); Р.Г.Битгер с соавт.(1984) пришли к выводу, что вид бруцелл не имеет существенного значения при изготовлении антигенов для РСК. Основную роль играют антигенные свойства бруцелл, претерпевшие различные изменения при диссоциации. Поэтому, мы поставили перед собой задачу определить и сопоставить диагностическую ценность антнгеноз, изготовленных нз культур бруцелл, ■ содержащих различные популяционные группы.

С этой целью был к изготовлены антигены путем воздействия ультразвука на взвеси различных по антигенной структуре штаммов бруцелл. В качестве исходных культур взяты бруцеллы вида абортус штаммы 19 (Б -форма, биофабричный антиген для РА и РСК); 52 и 82, содержащие значительное число образцов мутаций (от Б - до Я - форм) бактериальных клеток указанного вида; бруцеллы вида овне 10/1,424/1, 873 (стабильная Я -форма) и культуры из диссоциированных штаммов 17/4 и 726 (содержащие Я и Ь - формы).

Приготовленные антигены были строго специфичны по отношению к Б-, БЛ- и III,- протнвобруцеллезным сывороткам имели достаточно высокую -активность в РСК (РДСК).

Проведенные исследования показали, что приготовленный антиген из бруцелл штамма 52 (БЯ - форм) в РСК оказался более чувствительным при диагностике заболевания. При общей относительно, небольшой пора-

женности стада (388 голов) опытным антигеном дополнительно выявлено 7 больных животных, т.е. 1,5%.

При обследовании двух гуртов (399 и 425 голоз) т стационарно неблагополучных хозяйств в РДСК выделено с биофабричным антигеном соответственно 48 и 70, а с SR - антигеном из штамма 52 - 149 н 91. С целью проверки специфичности показаний РДСК с опытным антигеном и определении эпизоотической роли реагирующих при этом животных, проведен убой 5 коров. При бактериологическом исследовании материала из органов 4 коров, которые реагировали только на антиген из штамма 52, выделены культуры бруцелл.

При исследовании сывороток крози животных неблагополучных по бру-целлоовисной инфекции групп из 509 голов наибольшее число положительно реагирующих отмечено при постановке РДСК с SR - антигеном ' (15,9%), на втором месте по чувствительности антиген опненый, изготовленный по способу Казахского НИВИ (9,9%), на третьем - биофабричный -овиснын антиген (6,7%). От 5 животных (4 барана реагировали на псе антигены и один только на SR. - антиген) выделены культуры бруцелл.

В настоящее время доказана возможность L - трансформации различных видов микроорганизмов путем воздействия ультрафиолетовыми лучами, бактериофагом и при выращивании на средах, содержащих пенициллин и продукты метаболизма бруцелл (А.А. Клочков, 1965; Т.А.Толмачева, 1976, 1980; И.А.Бакулов с соавт., 1980; А.Л.Воробьев, 1986).

С целью выявления животных с наличием L - форм бруцелл нами были приготовлены антигены из штаммов: 17/4 (L - форма штамма 19); 726 (L -форма культуры, выделенная нами от больного животного)' и L - антиген ЛенНИВИ (полученный из штамма К-24) и единый бруцеллезный антиген. Более активным оказался при гитрации антиген из штамма 726 (1:1280 в РДСК).

№ 66 исследованных сывороток баранов-производителей Ал матине ко и госнлемстанцнн 2 пробы имели положительные показания со стандартным овисным антигеном, 5-е антигеном из штамма 52 и 10-е препаратом из штамма 726 н имевших клинические признаки зпидиднмита, были убиты и от них выделена культура бруцелл вида овис.

В совхозе «Комсомольский» исследовано 647 проб сывороток крови крупного рогатого скота, из которых 40 имели позитивные показания в РДСК со стандартным единым антигеном, в том числе 11 - по РБП; с препаратом из штамма 726 - 67. Совпадающие результаты при исследовании в РДСК со стандартным единым антигеном и из штамма 726 получены в 30% случаев.

Анализируя приведенные данные можно заключить, что наибольшей диагностической ценностью обладают антигены, изготовленные из культур бруцелл, имеющие различные популяции микроба с многообразием детермн-нантных групп (в частность форма нз штамма 52). Приготовленный нами антиген из Ь - форм бруцелл обладает достаточной активностью и можно его использовать для диагностирования Ь - бактериоза у животных с помощью РДСК.

Кроме того: нами определены оптимальные условия сорбции на окрашенных раствором конго-рот стафиллококковых культурах иммуноглобулина (кролика, что позволило разработать способ получения антительного днагностикума для индикации бруцелл и их дериватов в исследуемом материале (свидетельство Васкомизобретений № 0039810, 1992). - Совершенствование и сраяшп сльнаи оценка диагностической ценности методов дифференциации поствакцнкальных реакций у животных, иммунизированных накипной нз штамма 19.

Известно, что при использовании вакцины из штамма 19 для иммунизации взрослого поголовья скота в организме возникают антитела, препят-

а

ствуюшие последующей дифференциации больных и здоровых животных (К.П.Студенцов, 1975; Ф.П.Локтева, 1967 и многие другие).

Контрольные исследования коров, ранее нммуннзированных вакциной из штамма 19, проведенные в отдаленные сроки после последней ревакцинации (через 3-4 года), выявили среди них высокий процент реагирующих на бруцеллез. Поэтому возникла необходимость выявления эффективности ранее предложенных методов и методов, рекомендованных совещанием научных и практических зетерннарных специалистов по вопросу дифференциации больных бруцеллезом животных от сохраняющих в крови антитела в связи с иммунизацией их вакциной из штамма 19.

Для проведения этой работы в Алматинской области нами подобрано 3 хозяйства с различной эпизоотической ситуацией (совхозы «Пригородный», им. Ленина и колхоз «Ильича»).

Все поголовье этих хозяйств на протяжении 12-13 лет вакцинировали вакциной из штамма 19. В первых двух-имели место выявления положительно реагирующих коров, а в колхозе «Ильича» наблюдались аборты бруцеллезной этиологии.

Сыворотки крови животных указанных хозяйств исследовали общепринятыми методами диагностики (РА и РСК), а также дифференцирующими тестами: РА по обнаружению антител с

предварительным прогреванием сыворотки при 65° С в течение одного часа, РСК с инактивацией сыворотки при 70° С в течение 30 минут, РЛ с сывороткой молока (по Ф.П. Локтевой, 1964).

В процессе проведения работ по обнаружению микроглобулиновых антител нами, совместно с В.А. Клименко, была модифицирована обработка сывороток в уленгутовских пробирках (технология контроля нейтрализации 0,2 М солянокислого цистеина путем внесения в общий объем реактива

Ташира, который позволил полностью избежать получение неспецифических показании).

Наша модификация была одобрена ветсекцней НТС МСХ Казахской ССР и полностью вошла и указания но применению серологических рспкциП при исследовании на бруцеллез коров, ранее привитых сухой жигой вакциной из штамма бруцелла абортус 19, утвержденные Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйств;! СССР 10 января 1975 г. и рекомендованы для широкого применения на практике.

Кроме того, при проведении исследований, с целыэ сравнительно!'! оценки, мы применяли РНГА обычную и с предварительной обработкой сыворотки крови солянокислым цистенном, РНГА с сывороткой мочока, РСК с молоком, кольцевую реакцию с молоком и бнопробу на морских ' свинках путем инъекции им смеси осадка молока со сливками.

В результате проведенных исследований выявлено, что наиболее чувствительным и достоверными методами оказались: РА с сывороткой кроан, обработанной цистенном (100% и 61,6%) и РСК с сывороткой прогретой при 70°С в течение 30 минут (100% и 44,4%). Анализ полученных данных показал, что имеется прямая зависимость титров микроглобулановых антител (^в 1:200 и выше) и наличием бактериальных находок бруцелл в молоке. Другие методы значительно уступают по чувствительности и являются как бы дублирующими по отношению двух? выше указанных реакций.

Реакция агглютинации с сывороткой крови, прогретой при 65° С в течение часа, показавшая неплохие результаты в опытах на кроликах, оказалась малопригодной при исследовании крови крупного рогатого скота. При указанном режиме происходит частичное или полное разрушение не только М,-но и ^ С антител. Эти методы были проверены в производственных условиях на большом поголовье крупного рогатого скота в хозяйствах

Алматинской и Торгайской областей. Так, в хозяйствах, с хроническим течением бруцеллеза, где выявлялись реагирующие на бруцеллез быкн-пронзводнтели и телки} перед вакцинацией из 3206 коров в РА и РСК реагировало 648 голов, а микроглобулиновые антитела (1,0) обнаружены у 137 (21%) животных. Таким образом, практике рекомендовано применение РА с солянокислым цнетеином и РСК с прогреванием для дифференциации поствакциналышх реакций у коров.

Разработка методов выявления латентных форм бруцеллеза среди крупного рогатого скота.

С 1975 года в нашей стране (бывшем СССР) начали внедрять слабоагтлютиногенную вакцину из штамма 82 для иммунизации крупного рогатого скота. При этом вакцинация животных неблагополучного поголовья не всегда способствовала стабильному оздоровлению стад от бруцеллеза. При каждом исследовании имели место выявления животных с положительными реакциями, а в некоторых случаях, в конечном итоге ^ подлежал сдаче на убой весь оздоравливаемый гурт.

Известно, что часто в стаде остаются животные в состоянии бруцелло-носительства, которые не реагируют по общепринятым серологическим реакциям и они остаются источником инфекции,

Применение метода провокации латентных форм бруцеллеза обеспечивает своевременное выявление таких животных из стада. Неслучайно ряд исследователей (П.А.Триленко, 1976 и другие) для оздоровления неблагополучных стад и профилактики бруцеллеза в благополучных стадах предлагали нсагглютнногенные вакцины, которые наряду с формированием иммунитета, даже невысокой напряженности, провоцируют скрытые формы болезни и, таким образом, добиваются оздоровления хозяйства. Однако, провокация неагппотиногенным штаммом 16/4 (ЛенНИВИ) не всегда дает ж-маемый результат (хозяйства Алматинской и Костананской областей).

Такое положение послужило основанием дли проведения исследований в этом направлении.

Нами (совместно с К.И. Минжасовым) в экспериментальных условиях определена доза вакцины из штамма 82 (1 млрд. м.к.), которая не вызывала длительной серопозитивности (более 30 суток).

Затем на 40 головах телок 16-18- месячного возраста определили сроки угасания позитивных показаний серологических реакций при ревакцинации разными дозами вакцин из штамма 82. Установлено, что агглютинирующие н комнпементсвязываюшне антитела не обнаруживаются у животных, ревакцинированных 5 млрд. м.т. на 60 сутки, а 1 млрд.м.т. - на 45 сутки.

Затем работа была проведена в совхозе нм.Н.Г.Коилова Наурзумского района Костакайской области, где длительно передерживаются больные бруцеллезом животные.

Анализируя полученные дгушые можно заключить, что введение взвеси бруцелл штамма 82 в различных концентрация:: (1,5, 10 млрд.м.т.) вызывает резкое увеличение у хронических больных животных комолеметсвязы-вающих антител (в 3-5 раз) в сыворотке крови на 45 день после инъекции препарата (рис.1). Для провокации латентных форм бруцеллеза у крупного рогатого скота достаточно 1 млрд. взвеси вакцинного штамма 82.

На данный способ получено свидетельство Васкомизобретеннй № 0020115 от 8 мая 1991 года.

Метод провокации латентных форм бруцеллеза крупного рогатого скота с помощью вакцины из штамма 82 был испытан в хозяйствах Новороссийского, Карабутакского и Акпобинского районов Актюбинской области. В совхозе «Кудуксай.ский» Новороссийского района проводили оздоровление поголовья (7 тыс. голов) крупного рогатого скота от бруцеллеза, используя метод провокации 1/100 дозы вакцины из штамма 82.

Динамика содержания комплементсвязывающих антител в сыворотке крови Реагирующих коров, после введения нм I; 5 и Ю млрд. брутелл шт.82

Сролси ксслисыняя (сут.)

Рисунок I.

Аналогичная работа проведена в неблагополучных по бруцеллезу совхозах «Новороссийский» (1244 животных), «Новотронцкий» (2426 коров), колхозах «Искра» (845 животных) и им.Кнрова - (1270 голов).

В начале (1975-76 гт.) применение вакцины из штамма 82 на животных, немеющих иммунного фона, вызывало аборты у беременных особей. С этой целью испытывались различные варианты и сочетания при иммунизации коров (И - форма, прогретая вакцина из штамма 82 и т.д. с последующим введением живой вакцины из штамма 82).

В совхозе «Кайракты» Торгайской области был проведен опыт по иммунизации 204 телок и нетелей, завезенных из Белоруссии, вначале 1/100 дозой вакцин из штамма 82, затем, через 30 суток, полной дозой этого препарата. При этом получен положительный эффект. Все нетели (40% гурта) растелились нормально.

Таким же способом были иммунизированы нетели и телки 15-18-месячного возраста в количестве 1200 голов в Торгайском совхозе-техникуме Аркалыкского района.

Известно, что повышению уровня иммунитета способствует феномен иммунологической памяти на повторное введение препарата. При этом организм реагирует по вторичному типу, т.е. ускоренно при повторном введении этого же антигена, которым индивидуум был иммунизирован ранее. Поэтому,этбт метод был использован для оздоровления совхозов «Терсокан-скин» (1000 голов) Кийминского района и совхоз «Заречный» Есильского района с поголовьем 1820 голов.

Положительные результаты по применению дробных доз для предотвращения абортов и более эффективной иммунизации животных обобщены и предложены практике (Рекомендации по профилактике и оздоровлению от туберкулеза и бруцеллеза кр/пного рогатого скота Торгайской области, 1982; Рекомендации по иммунизации против бруцеллеза нетелей полово-

и

зрелых телок, 1989; Рекомендации по профилактике бруцел-леза у крупного рогатого скота и выявлению толерантных бруцеллоносителей, 1991 г.)

В настоящее время вышеуказанный способ иммунизации н выявления бруцеллоноснтелей применяется в хозяйствах Талдыкорганской, Алматннской, Актюбинской, Костанайской областей.

Разработка рецептов питательной среды для выращивания бруцслл.

При диагностике бруцеллеза наиболее достоверным, в случаях получения положительного результата, является бактериологический метод. С целью выращивания бруцелл и дальнейшего изучения их свойств важное значение имеет качество питательных сред, их состав и условия культивирования микроба. Поэтому, хотя изготовление питательных сред осуществляется строго по рецептам, в диагностических лабораториях предусмотрен дополнительный контроль качества среды путем выращивания референтных штаммов бруцелл.

Кроме того, в очагах инфекции встречаются бруцсллы с различной степенью дис-социацин, для их изоляции требуются более обогащенные и качественные питательные среды.

Мы испытали 5 прописей сред с добавлением отдельно сыворотки и аминопептнда, и одновременно обоих названных компонентов и без них. Наибольший выход бактериальной массы получен при выращивании бруцелл на МППГТА и агаре Д с добавлением 10% овечьей сыворотки.

Затем в следующем опыте изучали влияние 18 аминокислот, добавленных в МППГТА из расчета 0,3 мг на 1 см3 среды, на рост различных штаммов бруцелл. Наибольшее количество бактериальной массы было получено на среде с добавлением только цнстеина или цнстина.

Известно, что возбудитель инфекционного эпидндимита баранов локализуется главным образом в семенниках, где находит наиболее благоприятные условия для развития. Поэтому,мы поставили задачу провести исследования

и разработать, по возможности, элективную питательную среду для культивирования бруцелл вида овис с учетом их биологических особенностей.

В результате проведенных экспериментов выявлены компоненты, необходимые для роста бруцелл вида овис, в частности, ферментативные гидро-лизаты казеина, семенников с придатками, цнетин, глюкоза и глицерин. Для ее приготовления используется отработанная нами технология получения неполных панкреатических шдролизатов. В результате предложен оригинальный рецепт питательной среды, на которую получено A.c. № 523932, 1976 г.

Использование предлагаемой среды для выращивания бруцелл вида овис исключает необходимость добавления сыворотки крови в среду, снижает трудоемкость и время ее приготовления. Себестоимость предлагаемой среды в 3-5 раза дешевле в сравнении с общепринятой средой - МГ1ПГГА + аминопептнд + сыворотка. При выращивании на этой среде бруцелл увеличивается выход микробной массы в 1,5-3 раза.

Изучение нммуногенноетн вакцины из штамма Рев-1 на овцах.

В последние годы внимание исследователей различных стран было обращено на возможность получения вакцинных штаммов путем воздействия на

бруцелл биологическими, химическими факторами. ил Яма

Так, амсриканскиу'исследовате'ЛуОСерцбергом и Эльбергом (1955) был

предложен в качестве вакцинного штамма В. melitensis Рев-1.

Е.С. Орлов с соавт. (1962, 1965), в итоге сравнительной проверки на овцах иммуногенных свойств 7 вакцин, в том числе и вакцины из штамма Рев-1, установили, что наиболее иммуногенной оказалась вакцина из штамма Рев-1, предохранявшая от заражения через 6 месяцев после вакцинации 100% овец.

С 1974 года в республике начали применять вакцину из штамма Рев-1 для иммунизации молодняка овец, а имеющееся к этому времени взрослое поголовье продолжали'ежегодно иммунизировать вакциной из штамма 19 с

последующей сдачей его па мясо (Е.С. Орлов с соавт., 1965; П.С. Уласевнч, 1961, 1965, 1966; К.П. Студенцов, 1975 и т.д.).

Наблюдения показывают, что данная вакцина не оказывает отрицательного влияния на организм здоровых овцематок, выращенных нз иммунизированных ярок.

Однако существенного улучшения эпизоотической обстановки не наступало. С 1977 года заболеваемость бруцеллезом мелкого рогатого скота стала возрастать, а количество выявленных неблагополучных пунхтов увеличилось с 6 до 30. С 1979-80 гг. иммунизация взрослого поголовья вакциной из

г

штамма 19 была прекращена. Вследствие этого иммунная прослойка среди овец уменьшилась, что вызвало резкое повышение заболеваемости ( з два раза), увеличилось количество случаев обнаружения бруцелл в абортированных плодах, а число заболевших люде Л возросло на 40%'.

Дополнительно нами проводились зпизоотологическне наблюдения за вакцинированными ярками в числящимся благополучном совхозе «Илий-скии» Ал маги некой области, где отмечались случаи выделения серопозн-тнвных овец от 3 до 6 голов с отары.

Эпизоотологнческие наблюдения и показания серологических реакций, свидетельствующие о недостаточной напряженности иммунитета у вакцинированных животных, побудили нас изучить устойчивость организма к заражению возбудителем бруцеллеза через 3 и 4 года после иммунизации овец вакциной нз штамма Рев-1.

Установлено, что число устойчивых к 3-кратной заражающей дозе бру-пелл вирулентного штамма в группе овец, иммунизированных в 1974 г. (через 4 года после вакцинации), составило 50% (5 из 10), а среди овцематок, вакцинированных в 1975 г. (в 4-6-месячном возрасте), невосприимчивых было 70% (7 нз 10). Животные контрольной группы были заражены в 100% случаев (10 из 10).

Приведенные данные свидетельствует о наличии относительного иммунитета у иммунизированных овец к 3-кратной минимально заражающей дозе. Поэтому возникает необходимость повторно прививать овцематок через 2-3 года, после вакцинации их в 4-6 месячном возрасте.

. Учитывая трудность с созданием отар овец по возрастному признаку и наличие значительного распространения бруцеллеза среди овец в Казахстане, нами была поставлена задача изучить возможность и целесообразность ревакцинации овец вакциной из штамма Рев-1.

В благополучном совхозе «Илийскнй» Алматинской области одна отара овцематок после третьего окота подвергнута ревакцинации штаммом Рев-1. В 1980 году окот всех животных прошел без видимых отклонений от нормы.

С целью изучения безвредности и реактогенности вакцины из штамма Рев-1 при ревакцинации овцематок мы провели патоморфологическне исследования органов 8 реиммунизированных овцематок в сравнении с 8 вакцинированными ярками. При этом отмечены однотипные доброкачественно протекающие патоиммуноморфологическне изменения, преимущественно в лимфоидных органах и тканях.

Ревакцинация овец в неблагополучном совхозе «Володаровский» Акмолинской области способствовала снижению выявления положительно реагирующих в 6 раз.

На основании полученных положительных результатов исследований, по инициативе Казахского НИВИ, было дано разрешение на реиммунизацию взрослого поголовья овцематок. В различных областях Казахстана в 1980 году ревакцинировано 892,6 тыс. овец,

Комиссиями в составе представителей ГУВ МСХ СССР и специалистов на местах^с нашим непосредственным участием в 1981 году после окончания расплодного периода в овцеЬодстве, проведена проверка результатов ревакцинации овцематок вакциной из штамма Рев-1 в Восточно-

Казахстанской, Семипалатинской, Павлодарской и Тапдыкорганской областях. Установлено положительное влияние ревакцинации на снижение заболеваемости овец бруцеллезом в республике при применении вакцины из штамма Рев-1.

Затем, в 1984 году комиссионно (нами) проведено заражение овцематок 5-летнего возраста однократно и двукратно иммунизированных вакциной из штамма Рев-1 пятикратной инфицирующей дозой Б. мелнтензис 565. При этом у вакцинированных (по истечении 3-х лет) иммунитет сохранялся только у 50% животных, а у ревакцнннрованных - у 90%.

)

Полученные данные представлены в ВИЭВ, где были обобщены с результатами исследований других научно-исследовательских учреждений страны и послужили основанием для разработки нового «Наставления по применению вакцины живой сухой из штамма Рев-1 бруцелла мелнтензис для иммунизации овец и коз против бруцеллеза и баранов против инфекционного эпидидимита, вызываемого возбудителем бруцелла овис», утвержденного 1 октября 1986 г.

Однако после ревакцинации овец возникла трудность проведения дифференциации больных животных от здоровых (иммунизированных).

В этой связи;в 1985 году нами (совместно с А. А. Султановым) была испытана в производственных условиях эффективность малой дозы вакцины из штамма Реч-1 при ревакцинации овцепоголовья а племовцезаводе «Сулукольсхий» Семиозерного района Костанайской области.

Однако, введение живой вакцины из штамма Рев-1 бруцеллоносителям и хронически больным животным может вызвать обострение инфекционного процесса и аборты у овцематок. Поэтому, все поголовье овцематок (20 тыс. голов) перед ревакцинацией исследовали сероаллергическим методом. При этом использован аллерген КазНИВИ (на способ его получения выдан предварительный патент № 4573, . 1997), инъекция которого провоцировала

скрытое течение болезни и в крови вышеуказанных животных обнаруживались агглютинирующие, комплементсвязывающне антитела в высоких титрах. В последующем получены отрицательные результаты исследований и с хозяйства сняты ограничения, что стало основанием рекомендовать данный способ оздоровления хозяйств по всей республике.

Антигенные п лммуногенные свойства клеточных структур бруцелл.

Ученые проявляют большой интерес к антигенам микробной клетки, с последующим использованием их для диагностики и профилактики заразных болезней. Зффеетивность того или иного препарата зависит от способа его получения, биологических свойств микроба, реактивности организма, его гено- и фенотипическнх особенностей.

Исследуя культурально-биохимнческне свойства 478 культур бруцелл, выделенных от 252 абортированных плодов крупного рогатого скота, 212 овец, 8 верблюдов, 3 свиней и 3 собак, нами установлено, что 23% (110) из них в первой генерации были диссоциантами и 34% (162) - атипичными.

Кроме того, в природе встречаются стойкие биовары Я - форм, одни из которых вызывает эпидидимнт у баранов, впервые выделенный в 1969 г. в Акмолинской области.

В этой связи представляет интерес изучить антнгенные связи возбудителя инфекционного эпидидимита баранов с другими видами бруцелл. С этой целью использовали РП в агаровом геле и антигенные комплексы культур В.о\чб 227, В-асюти 544, 45/20, В.те1кепБ15 498, 16М, В/бшэ 1330, 1024 и 18 свежевыделенных ультур бруцелл вида овис. Выявлено, что антигены из культур бруцелл вида овне образуют в реакции преципитации в агаровом геле с гипериммунными сыворотками к вышеуказанным видам от 3 до 6 линий преципитации (т.е. комплексов «антиген-антитело»). Антигены различных овисных культур не однородны и имеют разное количество

родственных (общих) преципнтиногенов ( с бруцеллами вида абортус, мелнтеизнс и сунс).

В последующие годы работы нами выделены бруцеллы от барэнов-пронзводителен, абортированных плодов овцематок, крупного рогатого скота, которые находились как в II -, так и I - формах.

Нами изучались морфологические, биохимические я. серологические свойства Ь - культур. Также были приготовлены антигены для диагностирования животных-носителей Ь - форм бруцеллеза.

Затем были проведены опыты по выделешпо отдельных морфолоп;-ческих частей бруцелл (на ультрапрепаративной центрифуге УЦП-60) и изучению их антигенных и иммуногенных свойств, а затем иммукогенные свойства культур, находящих в различной степени диссоциации (Б, БК, К, ЛЬ -форме).

Анализируя полученные данные можно заключить, что бруцеллы имеют между видами родственные антигены и диссоциация культур сопровождается частичной или полной утратой их и снижением иммуногенных свойств. Клеточные стенки бруцелл в сравнении с другими морфологическими структурами их обладают большей иммуногенностъю. Результаты опытов свидетельствовали о возможности получения равноценного иммунного ответа при введении живой культуры и клеточных стенок ультразвукового дезннтеграта. Эти данные послужили основанием для конструирования неживой протнвобруцеллезной вакцины.

Изыскание иммуностимуляторов для приготовления неживой протнвобруцеллезной вакцины и эффективность ее применения.

Прогресс в области иммунологии, химического синтеза антигенов и иммуностимуляторов, техническая возможность получения определенных белковых веществ и антигенов, открывает новые возможности в получении убитых и синтетических вакцин. Из имеющегося арсенала средств иммуно-

профилактики наибольший интерес представляют молекулярные вакцины, которые готовят из очищенных антигенов, извлеченных из микробных клеток тем или иным способом или полученных из растворимых дериватов микробной клетки.

Нами проведены исследования по испытанию наиболее эффективных иммуности-муляторов, из числа имеющихся в нашем распоряжении, которые в сочетании с протектнвным антигеном могли быть использованы для создания специфического иммуногеиного противобруцеллезного препарата.

С этой целыо в опыте испытали гидрат окиси алюминия (гидроксал), легкое минеральное масло с ланолином, парафиновое масло с ланолином, минеральное масло с лецитином и иммуностимуляторы - полнвиннл-пирролидон, дрожжевая РНК, левамизол, убитая культура штамма БЦЖ, тимол ин, Т-активин.

В первом опыте на 140 свинках определено, что наиболее эффективными были препараты, состоящие из клеточных стенок бруцелл штамма 70, гидрата окиси алюминия или минерально-масляного адъюванта с дрожжевой РНК, которые создали невосприимчивость у 80% животных.

Во-втором опыте на 90 морских свинках установлено, что наиболее высокий иммунитет был создан у животных (80%), которым вводился препарат, содержащий клеточные стенки шт. 70 и Рев-1 и их смеси в сочетании с дрожжевой РНК и адыовантом.

Затем в двух опытах на 90 овцах, которых иммунизировали препаратами, содержащими различные концентрации клеточных структур бруцелл и иммуностимуляторов, проследили динамику накопления и угасания антител и напряженность иммунитета.

Проведенные исследования показали, что для создания достаточно напряженного иммунитета (100% у овец) необходимо в иммунизирующей композиции иметь клеточные структуры бруцелл штамма Рев-1, извлекаемые

»

из 15 млрд. взвеси в смеси с дрожжевой РНК или тимолином (полученным нами согласно предварительному патенту № 4565, 1997), минерально-масляным адъювантом или гидроксалом.

Новизна препаратов подтверждена свидетельствами ВаскомизобретеннЯ № 0027611, 1991; № 0039815, 1992 н предварительным патентом № 4571, 1997 г.

Предложенная неживая протнвобруцеллезная вакцина была испытана в неблагополучном по бруцеллезу крупного рогатого скота (640 голов) ОПХ нм.50-лешя Казахстана Кегенского района Алматинской области.

»

В результате отделение, где применили препарат, было оздоровлено от бруцеллеза.

С разрешения Главного управления ветеринарии неживая вакцина нспы-тывалась в хозяйствах Аксуского и Каратальского районов Талдыкорганской области.

При этом было иммунизировано неживой противобруцеллезной вакциной 3005 голов крупного рогатого скота в общественном и 4170 животных в индивидуальном секторах.

Сравнивая результаты проверки эпизоотического состояния по бруцеллезу до и после иммунизации неживой вакцины против бруцеллеза сельскохозяйственных животных, установлено, что количество реагирующих животных снизилось более чем в два раза, а затем два хозяйства были оздоровлены от бруцеллеза.

Кроме того, нами впервые с положительным результатом применена усовершенствованная неживая вакцина против бруцеллеза свиней.

Таким образом, нами предложена неживая протнвобруцеллезная вакцина, которая оказалась эффективной в борьбе с бруцеллезом крупного и мелкого рогатого скота и свиней.

Изыскание гфотнвобруцеллсзных терапевтических и профилактических препаратов.

В связк с выявлением культур бруцелл вида овис на территории Казахстана зозннх интерес по определению чувствительности возбудителя болезни к различным антибиотикам.

В этой связи было взято 18 культур бруцелл вида овис и определена их чувствительность к стрептомицину а пенициллину, окситстрациклину, тетрацнклшгу гидрохлориду, пентриксилу, тетраолеану, олеандомицину, снгмамицшгу, метациклину, ристомицину. При этом культуры бруцелл вида овис проявляли большую чувствительность к стрептомицину - 0,05 -0,5 ЕД/см'' среды; тетрациклину гндрохлорнду и тетраолеану - 0,2-1 ЕД/см3 среды; олсЕНДОмицииу и ристомицину - 0,5-1 ЕД/см3 среды.

В предотвращении заболсван:1я животных большое значение может иметь химипрофнлактика. Этот вопрос не потерял своей актуальности и до настоящего времени. Поэтому мы провели исследования по изучению чувствительности бруцелл к некоторым антибактериальным препаратам: гентамнцину, левомнцину, неоветину, эритромицину, фармазину (Болгарский), иеомнцину, канамицину, карфециллину, фосфолемцину (Сирийский), линкомицику, тетрахлориду, доксициклину гидрохлориду, метонидазону, фурадонииу, сизомицину сульфату (Английский), байтрилу (Немецский), г цнфрану (Турецкий), цифалезину (Японский).

Кроме того, испытали чувствительность бруцелл к поверхностно активным препаратам: этонию, катамину, хлоргекседину, а также к 10 препаратам, полученным из трав, применяемых для лечения людей (МЭС-паск, РС-3, препарат солодкового корня и др.)

Более активными оказались: тетрахлорид, иеомицин, канамицин, бай-трил, цифран. Затем продолжали исследования с целью определения воз-

можностн применения их для профилактики и санации организма от возбудителя бруцеллеза.

Однако, антибиотики, хупнруя процесс в периоде токсикосептичесхого состояния, не предотвращают возникновения рецидивов и возможен переход заболевашш в хроническую форму, что, возможно, связано с внутриклеточным параэнтнрованием возбудителя. Поэтому для стимулирования защитных сил организма, в комбинации с антибиотиками, применяют гормональные препараты, стимуляторы, вакцины, лнпиды и т.д. (Н.Д. Беклемишев, 1955; П.А. Вершилова, 1971).

Учитывая вышеизложенное, мы испытали иммуностимуляторы, дрожжевую РНК, поливинилпирролидои, левамизол, проднгиозан, а также клеточные облочкн шт.Рев-1 с эктерицндом на 70 морских свинках, которых предварительно заразили 500 млн. м.к. штамма В.аЬогШз 54.

Положительный эффект получен при введении тетрахлорида в смеси с эктерицидом, дрожжевой РНК и адъювантом, новизна и полезность использования препарата подтверждена авторсхнм свидетельством № 1506659, 1986 г. и патентом №38, 1993 г.

В последующих опытах изыскивали адыованты, которые бы не обладали сильными раздражающими свойствами (как минеральное масло). Испытано легхое парафиновое масло, лецитин, ПЭС-3, полнэтиленгликоль и 5 адъювантов, представленных Владимирским научно-исследовательским ящурным институтом. При этом установлено, что ПЭЯ-3 и полиэтилен-гликоль не обладали раздражающим эффектом и в течение 10 дней на месте инъекции препарата не обнаруживались какие-либо клинические изменения.

При заболевании бруцеллезом у животных и человека отмечаются нарушения обменных процессов за счет продуктов метаболизма бруцелл и отмечается иммунная депрессия за счет эндотоксина. Поэтому мы испытали препараты (в частности экстракты элеутерококка, левзеи, золотого корня,

«о

настойки лимонника, гидролизина), которые повышают неспецнфическую резистентность организма и нормализуют обменные процессы. При этом получены положительные результаты. Новизна этих исследований также подтверждена свидетельством Васкомизобретеннй (№ 0020115, 1991 г.); предварительный патент (№ 4564,1997 г.); Кушпк ( № 458, 1997 г.).

При изучении действия антибактериального препарата было установлено, что он оказывает губительное действие на бруцелл и обеспечивает снижение титров антител у больных (80%) животных.

Полученные результаты 'экспериментальных исследований явились основанием для определения эффективности антибактериального препарата при профилактике и санации организма сельскохозяйственных животных от возбудителя болезни.

С этой целыо антибактериальный препарат испытан в 10 хозяйствах различных областей республики.

В результате установлено, что применение антибактериального препарата при остром течении бруцеллеза среди животных позволяет снизить остроту течения инфекции, профилаетировать животных от вероятного заражения бруцеллезом и освободить организм от возбудителя болезни (до 70-80%).Используя антибактериальный препарат с последующим дробным введением вахцины из штамма 82 или иммунизацией неживой вакциной против бруцеллеза представляется возможность сохранить маточное поголовье и ускорить оздоровление поголовья животных от бруцеллезной инфекции. Эгот Метод оздоровления защищен охранным документом (КуЭЛ1К № 254,1995 г.).

Все наши разработки вошли в комплексный план основных мероприятий по оздоровлению животноводческих хозяйств Республики Казахстан от заболеваний бруцеллезом на периоды 1981-1985 гг.; 1985-1990 гг. и 1991-1995 гг.

ВЫВОД ы

1. В благополучных по бруцеллезу хозяйствах при контрольных диагностических исследованиях наиболее приемлемой и эффективной является роз бенгал проба.

2. В качестве антигена для РА при постановке ее в микрообъемах лучшим!! оказались цветной единый бруцеллезный диагностикум и предварительно окрашенная бриллиантовой зеленью 1:3000 убитая нагреванием взвесь бруцелл.

3. Глицерин в разведении 1:300 - 1:350 является достаточно хорошим

1

стабилизатором при постановке РСК (РДСК) в микрообъемах.

4. Применение антигенов, содержащих фаговые частицы, при диагностике бруцеллеза повышает выявление больных животных от 3 до 20%.

5. Наибольшей диагностической ценностью обладают антигены, изготовленные из культур бруцелл, имеющих различные популяции микроба с многообразием детермннантных групп (штамм 52) и выявляют большее количество больных животных (до 15,9%).

6. РА с сывороткой крови, обработанной солянокислым цистеином, и РСК с предварительно прогретой сывороткой крови при 70° С в течение 30 минут, позволяют выявлять больных бруцеллезом животных в стадах крупного рогатого скота, ранее иммунизированного вакциной из штамма 19.

7. Для провокации латентных форм бруцеллеза и обострения хронического течения инфекции у крупного рогатого скота оказалась пригодной 1 млрд. взвесь бруцелл вакцинного штамма 82. Ее инъекция увеличивает в сыворотке крови больных животных количество комплементсвязывающих антител (в 3-5 раз) на 45 сутки, а у здоровых животных они не обнаруживаются.

8. Последовательное введение 1/100 дозы вакцины из штамма 82, затем, через 30-45 дней полной дозы указанного препарата профилактирует

поствакцннальные аборты, выявляет животных с латентным течением

. болезни и создает более напряженный противобруцеллезный иммунитет.

9. Использование питательной среды, содержащей гидролизат семенников барана, казеина, цистина, глюкозу и глицерин, повышает эффективность

. бактериологической диагностики бруцеллеза и в 1,5-3 раза увеличивает выход бактериальной массы.

10. Иммунитет к бруцеллезу у овцематок через 3-4 года после однократного введения им вакцины из штамма Рев-1 в 3-4 мессячном возрасте, имеет недостаточную напряженность на период 5-6 лет, что требует в сложной

' эпизоотической ситуации проведения ревакцинации взрослого поголовья овец.

11. Бруцеллы имеют общие видовые антигены, частичная или полная утрата которых отмечается при диссоциации культур, сопровождающейся снижением иммуногейных свойств микроба.

12. Клеточные стснки бруцрлл обладают выраженными нммуногенными свойствами. Однако, быстрое выведение их из организма не обеспечивает выработку напряженного иммунитета. Смесь, содержащая клеточные стенки бруцелл, иммуномодуляторы (дрожжевую РНК, тимолин) и пролонгаторы (гндроксал или минеральное масло), будучи в организме животного?индуцируют выработку достаточно напряженного иммунитета. «

13. Тетрахлорид, канамицин, байтрил и цнфран обладают по отношению к бруцеллам выраженным антибактериальным действием.

14. Сочетанное применение тстрахлорида или байтрила с иммуностимуляторами (дрожжевой РНК или тимолином при добавлении адъювинта и настойки элеутерококка) повышает эффективность их антибактериального действия, снижает остроту течение инфекции, санирует организм и профилактирует заболевание животных.

15. Сочетанное применение антибактериального препарата и протиЬобру-целлезных вакцин при остром течении бруцеллеза позволяет сохранить поголовье животных от заболевания и сократить сроки оздоровления стад от бруцеллезной инфекции. . •■ •

16. Выполнение мероприятий, отраженных в разработанных совместно с практической ветеринарной службой комплексных плацах, где предусмотрены предложенные нами средства и методы борьбы с бруцеллезной инфекцией, позволяет снизить заболеваемость животных, ускорить оздоровление хозяйств от бруцеллезной инфекции.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Диагностику бруцеллеза в хозяйствах с хроническим и острым течением болезни с целью более полного выявления больных, осуществлять с помощью антигенов, содержащих фаговые частицы или приготовленных из культур, имеющих наиболее полный набор детерминантных групп (а.с. № 1713592,1991; патент№ 162,1993 г.).

2. Выявление больных животных среди скота, иммунизированного вакциной in штамма 19, проводить путем исследования сыворотки крови в РА, после обработки ее солянокислым цистеином и РСК с предварительным прогреванием при 70° С - 30 минут, согласно соответствующему «Наставлению...», М., 1975 г.

3. Доя бактернаологаческой диагностики бруцеллеза и при накоплении бактериальной массы использовать питательные среды предложенные Казахским НИВИ. A.c. № 523932, 1976 г.

4. С целью провокации латентных форм бруцеллеза и повышения профилактической эффективности вакцины из штамма 82, применять ее путем последовательного введения, в начале 1/100 дозы, затем, через 30-45 дней, после проведения диагностических исследований, животных реимму-

ннзировать полной дозой этого препарата (Свидетельство Васкомизобре-тений № 0020П5,1991 г. и соответствующие Рекомендации, 1991 г.).

5. В борьбе с бруцеллезом мелкого рогатого скота применять вакцину из штамма Рсв-1 с последующей ревакцинацией и диагностическими Исследованиями, используя для этих целей предложенный нами аллерген (предварительный патент № 4573, 1997 и Наставление по применению сухой живой вакцины из штамма В. теШег^э Рев-1).

6. Для борьбы с бруцеллезной инфекцией сельскохозяйственных животных шире использовать неживую противобруцеллезную вакцину (Свидетельство Васкомизобретсний № 0027612, 1991; № 0039815, 1992; предварительный патент К» 4571, 1997 г.).

7. В очагах с острым течением бруцеллеза с целью санации организма животных й купирования инфекции вначале применять антибактериальный препарат, затем средства специфической профилактики (А.с. № 1506659, 1989; № 0027611, 1991; патеггг № 38, 1993; предварительный патент № 4564, 1997; Куэлж 254, 1995 и 458, 1997 г.).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАШГЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Иванов Н.П., Белобаб В.И., Махамбетов К. Стандартизация бруцеллезных аллергенов.//Тезиеы докладов П Всесоюзной конференции молодых ученых по ветеринарии.-Москва, 1971.

2. Софронов Н.В., Студенцов К.П., Белобаб В.И. Изменчивость бруцелл п иммунном организме. //Меры борьбы с туберкулезом н бруцеллезом животных в Казахстане.- Алма-Ата, 1973. -С.71-73.

3. Клименко В.А., Белобаб В.И., Софроноа Н.В. Сравнительная оценка некоторых методов дифференциации поствакцинальных и псспшфек-ционных антител при бруцеллезе. //Вестник с.-х. науки Казахстана. - 1973.- № 3. -С.53-56.

4. Еедарева З.М., Белобаб В.И., Студенцов К.П. Рост культур бруцелл вида овис на различных питательных средах. // Вестник с.-х. науки Казахстана.-

1974. -С.75-7б!

5. Бедарева З.М., Белобаб В.И. Изучение чувствительности бруцелл вида овис к различным антибиотнкамУИнформационный листок КазИИИНТИ.-

1975.-№0126.

6. Бедарева З.М., Белобаб В.И. Изучение родства Бр.овис с другими видами бруцелл реакцией преципитации в агаровом геле. //Информационный листок КазНИИНТИ. -1975. - № 445.

7. Бедарева З.М., Белобаб В.И., Ивершина Е.М. Питательная среда для выращивания бруцелл вида овис. (Авторское свидетельство. -1976. - № 523932).

8. Софронов Н.В., Сарсенов М.С., Белобаб В.И. Культуралыю-биологические свойства вакцинного штамма Бруцелла абортус 82. //Вестник с.-х. науки Казахстана,-1977.-№ 8.-С67-69.

9. Третьяков Ю.К., Иванов Н.П., Белобаб В.И. Пластинчатая РА с роз бенгал антигеном при диагностике бруцеллеза. //Профилактика и меры борьбы с янфекионными болезнями с.-х. животных Казахстана. -1979.-Т.18.-С.43-46.

10. Белобаб В.И.Ю Иванов Н.П., Третьяков IO.K. О постановке . серологических реакций РА. РСК и РДСК микрометодом на бруцеллез. //Труды КазНИВИ,- 1979. -T.18.-C.46-50.

И.Кпименко В.А., Белобаб В.И., Софронов Н.В. Роль микро- и макроглобулинов в инфекционной защите при бруцеллезе. //Инфекционные и незаразные болезни с.-х. животных в Казахстане. - 1979. -С. 18-20.

12. Белобаб В.И., Сарсенов М.С., Третьяков Ю.К. и др. О контактной передаче бруцелл вакцинного штамма 82. //Сборник научных трудов КазНИВИ. -1979. -С. 13-16.

13. Белобаб В.И., Иванов Н.П., Ушаков В.Т. и др. Реактивность организма животных после иммунизации его вакциной из шт.82. //Инфекционные и инвазионные болезни с.-х. животных в Казахстане. -1980. -С.7-10.

14. Иванов Н.П., Белобаб В.И., Сарсенов М.С. и др. Сравнительная оценка показания РСК (РДСК) при исследовании сывороток крови животных с применением антигенов, приготовленных го культур бруцелл, с различными по степени диссоциации популяциями. //Совершенствование ветеринарных мероприятий в борьбе с инфекционными болезнями с.-х. животных в Казахстане. -1981. -С.78-86.

15. Федченко В.А., Белобаб В.И., Кенжетаев С.А. и др. Рекомендации по профилактике и оздоровлению от туберкулеза и бруцеллеза крупного рогатого скота Торгайской области. - Аркалык, 1982.

16. Белобаб В.И., Сарсенов М.С., Мукаева X. Биологические свойства и антигенная активность Л-форм бруцелл, выделенных от животных. //Инфекционные и незаразный болезни с.-х. животных в Казахстане. -1983. -С.33-40.

17. И&шоз Н.П., Белобаб В.И. Способ приготовления цветного антигена для реакции агглютинации в мнкрообъеме прн днагностике бруцеллеза. //Профилактика и меры борьбы с инфекционными и незаразными болезнями с.-х. животных в Казахстане. - 1984. -С.10-13.

18. Белобаб В.И., Кашкннбаев К.А., Тен В.Б. Влияние некоторых стимуляторов на иммуногенность бруцеллезных препаратов н на морфоструктурные изменения органов. //Меры борьбы с инфекционными, паразитарными и незаразными болезнями с.-х. животных в Казахстане. -1985.-С.10-16.

»

19. Белобаб В.И., Иванов Н.П., Задорожный И.Ф. и др. Результаты изучения нммуногенных свойств вакцины из • штамма Рев-1. //Проблемы ветеринарной иммунологин.-Москва, 1985. -С.76-78.

20. Белобаб В.И, Иванов Н.П., Тен В.Б. Способ профилактики бруцеллеза с,-х. животных (Авторское свидетельство. - 1986. - № 1506659).

М.Иванов Н.П., Белобаб В.И., Тен В.Б. Изучение антигенных свойств клеточных структур бруцелл. //Меры борьбы с туберкулезом и бруцеллезом с.-х. животных в Казахстане. - 1986. -С.бб-72.

!2. Иванов Н.П., Султанов А.А., Белобаб В.И. и др. Опыт оздоровления племовцезавода «Сулукольский» от бруцеллеза мелкого рогатого скота. //Совершенствование мер борьбы с бруцеллезом и туберкулезом с.-х. животных. -Алма-Ата. - 1988. -С.21-25.

13. Мннжасов К.И., Белобаб В.И., Тен В.Б. Изучение антигенности вакцин из шт. 19, 104М и 82 Бр.абортус прн помощи Б-, БЯ-, К-, Л-вариантов. //Бруцеллез с.-х. животных. -Омск, 1989. -С. 16-20.

4. Белобаб В.И., Тен В.Б., Кашкннбаев К. А. Эффективность и реактогенность компонентной вакцины КазНИВИ против бруцеллеза животных в экспериментальных условиях. //Профилактика и ликвидация

заболеваний бруцеллеза и туберкулеза с.-х животных в Казахстане. - 1989. -С.10-15.

25. Белобаб В.И., Мннжасов К.И., Иванов Н.П. и др. Ускоренный метод оздоровления хозяйств от бруцеллеза. //Вестник с.-х. науки Казахстана. -

. 1990. -№ 9. -С.75-77.

26. Белобаб В.И., Тен В.Б., Воробьев АЛ. и др. Влияние антибактериального препарата КазНИВИ на наличие противобруцеллезных антител у больных животных и иммунизированных вакциной из шт. 19. //Вестник с.-х. науки Казахстана. -1991. -№ 3. -С.77-79.

27. Белобаб В.И., Тен В.Б., Шаблов B.C. и др. Эффективность антибактериального препарата в борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота. //Проблема развития хшвотноводства и кормопроизводства Северного Казахстана в современных условиях. Труды Петропавловск. -1992. -С.60-61.

28.Иванов Н.П., Белобаб В.И., Минжасов К.И. и др. Профилактика бруцеллеза у крупного рогатого скота и выявление толерантных бруцеллоносителей. Рекомендации. -Кайнар, 1991.

29. Белобаб В.И., Иванов Н.П., Тен В.Б. и др. Способ получения убитой вакцины против бруцеллеза. (Свидетельство Васкомизобрстеннй «Привилегия». - 1991. - № 0027612).

30.Иванов Н.П., Белобаб В.И., Мннжасов К.И. и др. Способ выявления бруцеллоносителей у крупного рогатого скота. (Свидетельство Васкомизобрстеннй «Привилегия». -1991. 2 N° 0020115).

31. Белобаб В.И., Иванов Н.П., Тен В.Б. и/(р. Препарат для профилактики и снижения остроты течения бруцеллеза с.-х. животных (Свидетельство Васкомизобрстеннй «Привилегия». -1991. - № 0027611).

32. Минжасов К.И., Белобаб В.И., Антюхоз В.М. и др. Иммунологическая толерантность при бруцеллезе крупного рогатого скота. //Сб. Научных

трудов «Научное обеспечение мероприятий по профилактике н ликвидации туберкулеза и бруцеллеза с.-х. животных. - Новосибирск. -1991. -С.127-129.

33. Воробьев А.Л., Белобаб В.И., Иванов Н.П. и др. Способ получения антигена для серологической диагностики бруцеллеза. (Азторское свидетельство.-1992.-№ 1713592).'

34. Иванов Н.П., Тен В.Б., Белобаб В.И. и др. Способ получения неживой вакцины против бруцеллеза животных. • (Свидетельство Взскомизобретений «Привилегия». - 1992. 0039815).

35. Жапнн P.P., Иванов Н.П., Белобаб В.И. Способ получения антнтельного диагностикума для индикации бруцелл. (Свидетельство Ассоциативный комитет изобретений «Привилегия». - 1992. -№ 0039810).

36. Иванов Н.П., Белобаб В.И., Мшокгсов К.И. идр. Эффективность применения вакцины из шт. 82 для выявления латентных форм бруцеллеза среди крупного рогатого скота в производственных условиях. //Инфекционные болезни с-х. животных. -1993. -С.3-7.

37. Белобаб В.И., Тен В.Б., Иванов Н.П. Способ профилактики бруцеллеза с.-х. животных. (Патент. - № 38, - 1993).

S8. Воробьев А.Л., Белобаб В.И, Иванов Н.П. и др. Способ получения антигена для серологической диагностики бруцеллеза. (Патент. - № 162. -1993).

19. Белобаб В.И., Иванов Н.П., Тен В.Б. Иммуногенные свойства клеточных, структур бруцелл я культур, находящихся в различной степени диссоциации. //Заразные болезни с.-х. животных в Казахстане. -Алматы, 1994. -С.17-21.

0. Белобаб В.И. Эффективность антибактериального препарата при бруцеллезе животных. //Заразные болезни с.-х. животных в Казахстане. -Алматы, 1994. -С.21-24.

so

41. Иванов Н.П., Мннжасов К.И., Белобаб В.И. Состояние иммунитета к бруцеллезу коров, привитых вакцинами из штаммов Бр.абортус 19, 104 М и 82. //Инфекционные болезни с.-х. животных. -Алматы, 1994. -С.77-84.

42. Белобаб Б.И. Приготовление питательной среды для выращивания и ..выделения из патологического материала измененных форм бруцелл.

//Инфекционные болезни с.-х. животных. -Алматы, 1994. -С. 143-149.

43. Белобаб В.И., Тен В.Б., Шигамбаев Д.Б. Меры борьбы с бруцеллезной инфекцией с.-х. животных. Кусшк (Свидетельство). -1995. -№ 254.

44. Тен В.Б., Белобаб В.И., Иванов Н.П. Лечебно-профилактическое средство • против бруцеллеза животных. (Предварительный патент.- 1997.- № 4564).

45. Тси В.Б., Белобаб В.И., Косиченко Л.Г. и др. Способ получения иммуностимулятора. (Предварительный патент. - 1997. -№ 4564).

46. Ten В.Б., Иванов Н.П., Белобаб В.И. и др. Способ получения неживой вакцины против бруцеллеза с.-х. животных. (Предварительный патент.-1997.-№4571).

47. Тен В.Б., Белобаб В.И., Иванов Н.П. и др. Способ получения аллергене для выявления бруцеллеза у с.-х. животных. (Предварительный патент. ■ 1997.4573).

48. Белобаб В.И. Метод профипактировання бруцеллеза у свиней. Куолю (Свидетельство).- 1997. - № 458.

49. Белобаб В.И., Тен В.Б., Баймурат Д.Б. Эффективность применения анти бактериального препарата при бруцеллезе крупного рогатого скота. //Эпн зоотология и профилактика заразных болезней с.-х животных. -Алматы. 1997. -С.27.-35.

50. Иванов' Н.П., Белобаб В.И., Баймурат Д.Б. Эффективность противо бруцеллезных мероприятий при использовании новых профилактически: средств. //Эпизоотология и профилактика заразных болезней с.-х животных. -Алматы.'-1997. -С.97-102.

Белобаб Виктор Иванович Жануарларлыц бруцеллез ауруын балау жэие алдын алу жолдарын жег1вд1ру.

Ветеринария гылымыныц докторы дорсжесш коргауга арналган 16.00.03 - ветерннарлык, микробиология, вирусология, шдеттану, микология жене иммунология.

Зертгеудщ багыты мен максаты жануарлардагы бруцеллездщ алдын алу мен балау жолдарын жсгпдщру болды.

Жоспарлангаи тапсырмаларды орындау нэтижесшде АР жене ПБР ушш тусп корпускуларлы антиген альшды, диссоциациалану дорежеа ор турл! бруцслла осшдертен оз!рленген препаратгардьщ балау каснеттер1 зертгелиш. Бруцеллезге вдрсы жопе аитифагты субстанцняларымен реакцияга тусетш бруцеллезд} серолопшлык, балау ушш антиген усынылды.

Бруцсллсзд! балау максатында нспзп бактсриалды жопе аллсргецгц болатын антидснет диашостикум жасау од]с1 табылды.

82 штамм вакщшасыныц темендсп молшерде колданылуы тшмдд сксвдшп анык,талды. Бактерия массасы мен бактериалогияльпс жнынтыгыныц санын кебейтстш коректж орта усынылды. Бруцеллездщ жт оту! кезещнде колданылатын антабактериалык жнынтык, жасалынды.

Рев-1 - штамынан oзipлeнreн вакцинаны колданудыц ец. Колайлы ксстса курылды.

Бруцеллдердщ антнгендж косындыларына иммуномодулятор мен пролонга-торларды араластыргандыш протективтгк касиеттер! зерттелдд жэне бруцеллезге карсы олпршген вакцина жасалды.

К,орыта келгендс ауыл шаруашылык малдарыньщ бруцеллезге к;арсы куресу шараларын жетщщру жолдары жасалынды.

BELOBAB VICTOR IVANOVICH «IMPROVEMENT OF APPROACHES TO DIAGNOSIS AND PREVENTION OF BRUCELLOSIS IN ANIMALS».

to the search of a scientific degree of doctor of veterinary 16.00.03 - veterinary microbiology, virology, cpizootology, micology and immunology.

The object and the aim of study were improvement of approaches to diagnosis and prevension of brucellosis in animals.

The result of the planned study was the receiving of a coloured corpuscular antigen for RA and RBP, preparations based on brucellas cultures dissociation of different degree were studied for their diagnosis properties. An antigen capable to reveal antibrucellosis and antiphage substances was suggested for serologis diagnosis of brucellosis.

A method for receiving of antibody diagnosticum on bacterial and allergen basis was wosked out.

It was shown reasonable to use low doses of vaccine prepared from the strain 82. A feeding medium enlarging a numer of bacteriologis discoveries and a bacterial mass was worked out. An antibacterial composition for acute brucellosis was proposed.

There was defined an optimal theatment scheme by the Rev-1 vaceine.

The profective characteristics of brucellas antigen complexes in combination with immunomodulators and prolongators was studies and a lifeless , antibrucellosis vaccine was proposed.

As a result of the study some proposals for improvement of brucellosis control in domestic animals were made.