Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Профилактика иммунодефицитов с использованием иммуномодуляторов

На правах рукописи

Рябов

Дмитрий Александрович

ПРОФ]-1ЛАКТИКА ИММУНОДЕФИЦИТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

ООЗ166453

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой р р

кандидата ветеринарных наук

Н Новгород-2008

003166453

Работа выполнена на кафедре эпизоотологии и инфекционных болезней ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия»

Научный руководитель:

кандидат ветеринарных наук, доцент Пашкин Александр Васильевич

Научный консультант:

заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАСХН

Сочнев Василий Васильевич

Официальные оппоненты:

заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор

Даугалиева Эмма Хасановна

заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор

Шумилов Константин Васильевич

Ведущая организации - ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Защита состоится «17» апреля 2008 г в 1300 на заседании диссертационного совета Д 220 047.02 при ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» (603107, г Н Новгород, пр Гагарина,

Автореферат опубликован на официальном сайте ФГОУ ВПО НГСХА www agri sci-nnov ru «1?» марта 2008 г.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НГСХА (603107, г Н Новгород, пр Гагарина, д 97)

Автореферат разослан марта 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат ветеринарных наук А В Пашкин

Д 97)

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы Современное ведение животноводства неизбежно сопровождается антропогенными вмешательствами в эволюционно сложившиеся цепи обитания, питания, биологического цикла развития, отношений с сообществом вирусов и бактерий, что приводит к значительному снижению естественной сопротивляемости животных к инфекциям (Berenbaum М , 1969, Коляков Я Е , 19i6, Квитков В П , 1992) Расширение круга патологических состояний со-провожд!ется нарушением иммунных функций, и не всегда эффективная их терапия побуждает к поиску новых методов иммунопрофилактики и иммунотерапии (Drews 1, 1980, Глинский О Б , 1992) В этом направлении важно не только создание новых фармакологических иммунокорригируюших средств, но и оптимизация лечебно-профилактических схем их использования в частности путей введения в организм, обеспечивающих максимальную биодоступьость препаратов для клеток-мишеней и специфически направленные эффекты (Чередеев А Н, 1995, Воронин Е С , Петров Р В , Шишков В П , 2000, Федоров Ю А , Верховский О А, 2000)

Проблема регуляции иммунного ответа высокозначима как в теоретических, так и практических значениях (Чередеев АН, 1981, Фель В Я, 1988) Поиск новых имм уноактивных препаратов является одной из актуальных проблем современной медицины и ветеринарии Особое место в регуляции иммунного ответа занимает с: имуляция иммунитета (Lewis A J, Carlson R.P., Change J , 1982, Арион ВЛ , 1989, Хаи говРМ, 2000)

Ар:ал использования иммуностимуляторов в ветеринарии постоянно расширяется, поскольку иммунодефицитные состояния организма животных стали практически неотъемлемой частью жизнедеятельности животных (Чернецова ЛФ и др, 19991 В последние годы значительное количество исследований посвящено изучению влияния фармакочогических средств на состояние иммунной системы (Урбан В П и др , 1992, Кондратенко И Я и др , 1991, Воронин ЕС и др , 1991, Ноздрин ГА и др , 1989, 1991, Ульянов М И , 1985, Корнякова Е А и др 1994, Даугалиела Э X , Филиппов В В , 1991, и др , Щедрин В Л и др 1993) В практике животноводства известны различные способы иммуностимуляции с помощью

кормовых средств, лекарственных препаратов, биологически активных и других веществ (Наумова Е Н . 1988)

По-иному стали рассматриваться возможности использования экологически чистых препаратов, и прежде всего из растений (Петров Р В с соавт 1987, Соколов В Д, 2000) В настоящее время разработка иммуностимуляторов природного или синтетического происхождения - одно из интенсивно развивающихся направлений современной иммунологии Особую ценность представляют препараты биологического происхождения, неоспоримым превосходством которых является их физиологичность для организма и экологическая безвредность (Ноздрин Г А 1996)

Несомненный практический интерес для ветеринарной практики представляет препарат иммуномакс, разработанный фирмой «Иммафарма» (г Москва)

Для получения лекарственной основы препарата были использованы продукты метаболизма корней растений Однако свойства этого препарата оставались неизученными В связи с этим важной задачей явилось изучение свойств этого препарата и испытание его в целях лечения больных животных и профилактики их болезней

Цель работы в сравнительном аспекте и в динамике изучить иммуномо-дулируюшее действие на организм животных нового отечественного ветеринарного препарата иммуномакс и определить его влияние ча организм животных разных видов при вторичных иммунодефицитных состояниях

Задачи исследований

— изучить уровень токсикогенного воздействия препарата иммуномакс на организм теплокровных животных,

— изучить уровень его влияния на показатечи гомеостаза и иммунных реакций организма животных,

- изучить отдаленные постедствия воздействия препарата на организм животных;

- изучить влияние препарата иммуномакс на организм больных животных разных видов при вторичных иммунодефицитных состояниях

Научная новизна В сравнительном аспекте и динамике изучено фарма-котоксикологическое воздействие препарата иммуномакс на организм тепло-

кровных животных, установлено влияние препарата на гомеостатические и иммунологические показатели и определены отдаленные последствия его воздействия на организм животных Установлено и экспериментально подтверждено им-муномодулирующее действие препарата иммуномакс на организм животных, в т ч и при различных их иммунодефицитных состояниях

Практическая значимость работы Теоретически обосновано и практически доказано, что новый отечественный ветеринарный препарат иммуномакс обладает выраже^ым иммуномодулирующим действием при пониженной естественной резистс1 тности организма животных Разработаны схемы-модели его применения животным в различных условиях и при различной степени риска инфекционных и инвазионных болезней животных

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту

1 Новый отечественный препарат иммуномакс является малотоксичным, не оказывающим отдаленных последствий на сочленов популяции животных и отрицательных воздействий на гомеостатические показатели их организма

2 Препарат иммуномакс - высокоэффективный иммуномодулятор, повышающий функциональную активность клеточной и гуморальной систем иммунитета животных и факторов неспецифической резистентности их организма

3 Применение препарата иммуномакс является важной компонентой лечения больных животных и профилактики их болезней

Пути реализации результатов исследований Результаты исследований могут быть использованы при совершенствовании системы противоэпизоотических и лечебно-реабилитационных мероприятий при патологиях животных, сопровождаемых иммунодефицитами и снижением уровня естественной резистентности их организма а также в организации учебно-педагогического процесса при подготовке специ.шистов ветеринарной профессии

Апробация работы Тема, методические подходы, направления и результаты исследований обсуждены и одобрены на заседании совета ветеринарного факультета ФГОУ ВПО «НГСХА» (2004-2007гг ), на заседании издательского совета журнала «Ветеринарная Патотогия», на межкафедральном заседании профессорско-преподавательского состава ветеринарного факультета НГСХА (Н Новгород 2006-200 5 гг)

Результаты исследований опубликованы в 7 научных статьях, в т ч в центральных изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций, в монографиях «Экологическая и противо-эпизоотическая защита современного животноводства», «Совершенствование организации и экономики ветеринарного дела» рекомендованных МСХ РФ в качестве учебных пособий для студентов вузов по специальности «Ветеринария» 2007 г

Внедрение Результаты исследований под авторским надзором с положительным эффектом внедрены в животноводческих хозяйствах и ветучреждениях Волгоградской и Нижегородской областей

По материалам исследований подготовлены и рекомендованы на федеральном уровне нормативно-технические документы на изготовление препарата иммуномакс, в т ч «Инструкция по применению препарата иммуномакс для лечения и профилактики иммуно дефицитных состояний у собак, кошек и пушных зверей» (утверждено Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору МСХ РФ, 2007г, регистрационный № ПВР-1-3 7/01994), учебное пособие «Совершенствование организации и экономики ветеринарного дела» (рекомендовано МСХ РФ в качестве учебно-методического пособия для студентов вузов по специальности 111201 «Ветеринария» и утверждено УМО МСХ РФ № 06-91 от 25 01 07г)

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 182 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований обсуждения результатов, выводов и рекомендаций производству иллюстрирована 45 таблицами и 36 рисунками

Список использованной литературы содержит 216 источников, из них 60 иностранных авторов

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Работа выполнялась в условиях кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ФГОУ ВПО НГСХА с 2004 по 2008 годы НИР проводили в 2 этапа определение фармакотоксикологических свойств препарата иммуномакс на теплокровных лабораторных животных, экспериментальное и производственное испытание препарата с лечебно-реабилитационной и профилактической целью на животных при различных иммунодефицитных состояниях

Материалом исследований являлся препарат иммуномакс, любезно представленный оирчой «Иммафарма» (г Москва), объектом исследований - лабораторные (белые мыши, крысы, морские свинки, кролики из питомника «Столбовое), домашние (собаки, i ошки) и сельскохозяйственные (телята) животные, и птицы (цыплята)

В работе использован комплексный эпизоотологический подход (клинико-эпизоото югические, гематологические, биохимические, патоморфологические, токсикологические, фармакологические, биологические, иммунологические и статистические методы исследований), а также методы современной прогностики и статистического контроля качества Экспериментальные исследования, в тч с использованием принципе «Placebo», проводили в лабораторных и производственных условиях в соответствии : требованиями Фармкомитета МЗ РФ

Осгрую токсичность препарата изучали в сравнительном аспекте на 36 мышах-самцах (СВА) с исходной массой 18-20 г разделенных на 6 групп путем подкожного однократного введения им 2,8%-ного раствора препарата в дозах 400, 600, 800, 1000 мг/кг, с последующим наблюдением за ними (2 недели) и контролем массы их тела, потребления корма и воды а также поведения выживших животных

Определяли котичество эритроцитов и лейкоцитов в их крови (в камере Горяе-ва), уровня гемоглобина (на фотоэаектрогемоглобинометре ГФ-ЗЮ), гематокритный индекс (в гематокритных капиллярах), исчисляли лейкограмму поспе окончания курса и через 3 недели после отмены препарата Биохимические исследования сыворотки крови проводили на анализаторе ФП-901 (Финляндия) и диагностическими наборами «Биолате! с» (Чехия), «Синтеко» (Россия), «Лахема» (Чехия)

Фу 1кцию почек изучали определением суточного диуреза и его скоростью (в минуту) исследованием клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции

Ал [ергизирующие свойства препарата оценивали в реакции гиперчувствительности немедленного и замедленного типа

Патоморфологические исследования проводили на крысах-самцах линии Вис-

тар

Хроническую токсичность иммуиомакса изучали на 8 беспородных собаках (самки, первоначальная масса тела 15,0-19,0 кг), разделенных на контрольную и подопытную группы Препарат подопытным собакам задавали в течение месяца в дозе 30 мкг/кг, в 10 раз превышающей среднесуточную терапевтическую дозу (3 мкг/кг), рекомендованную для четовека.

До начала эксперимента и через 1 месяц у них исследовали гематологические и биохимические показатели и активность ферментов в сыворотке крови (общий белок холестерин, мочевина, креатинин, триглицериды, глюкоза, активность аспартат- и ала-нинаминотрансфераз, щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы)

Постоянно учитывали у них объективные показатели состояния здоровья и поведения

Патоморфологические исследования проводили сразу же после гибели животных по полной патологоанатомической схеме, с обязательным протоколированием и сравнением с аналогичными показателями у интактных животных

Оценку мутагенных свойств препарата проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке мутагенности новых лекарственных средств», одобренных Фармкомитетом МЗ РФ (1994 г ), путем анализа доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках мышей, хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей, а эмбриотоксическое действие оценивалось в пред- и постнатальном периодах развития

Оценку мутагенной активности иммуномакса проводили путем учета способности индуцировать генные мутации у индикаторых микроорганизмов в системе метаболической активации in vitro (Ames et al, 1972, 1984) в модификации рекомендуемой Методическими указаниями Фармгоскома МЗ и МП России (2000 г )

Иммунный статус животных определяли по Новиковой В И , 1995 В специальных экспериментах изучали влияние иммуномакса на продукцию антител у животных (Методические рекомендации 1992)

Опыты по определению профилактических и лечебных свойств иммуномакса проводили на собаках, кошках, телятах и цыплятах Полученные результаты подвергали статистической обработке на ЭВМ методом вариационной статистики (Г Ф Лакин, 1980)

В эпизоотологических экспериментах по изучению эффективности лечебно-реабилитационных мероприятий при спорадических инфекциях собак, по обеззараживанию окружающей природной среды, организации противоэпизоотических мероприятий участвовали О Н Панина, И Г Ирьянов, кандидаты ветеринарных наук Е В Медова и Д А Мамлеева, которым автор выражает искреннюю признательность и благодарность за сотрудничество Их участие в работе подтверждается совместно опубликованными научными статьями

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Изучение уровня токсического воздействия препарата иммуномакс на орга низм теплокровных животных

Изучение острой токсичности иммуномакса Все подопытные животные на 1-3-и сутки посте введения препарата независимо от дозы становились малоподвижными, с взъерошенным шерстным покровом Мыши, получившие 1000 мг/кг иммуномакса, пали в 1 -2-е сутки На 3-й сутки у 4-х выживших мышей, получивших 800 мг/кг препарата (при других дозах позже), отмечалась ограниченность движет я задних конечностей, задняя часть тела уменьшена в объеме, «прижатая» задние юнечности согнуты и малоподвижны Потребление корма и воды у под-опытны;. мышей в первые 3 суток значительно снижено в сравнении с контрольными Через неделю потребление воды животными (особенно при большой дозе препара" а) значительно выше, чем у контрольных мышей LD50 по Керберу равно 800 мг/кг. 1 е препарат относится к малотоксичным соединениям (4-й класс токсичности по ГОСТ 12 1 007-76)

Изучение подострой токсичности иммуномакса Эксперимент проведен на 60 белых крысах-самцах популяции Вистар с исходной массой тела 240-253гг 20 крысам первой подопытной группы в течение 10 дней подкожно вводили иммуномакс в дозе по 50 мкг/кг. в объеме 0 5 мл (25-кратная максимально-терапевтическая доза) Второй подопытной группе иммуномакс аналогично вводи чи в дозе 500 мкг/кг (t 250 раз превышающей терапевтическую дозу) Животным контрольной группы £ эти же сроки вводили физиологический раствор Обследование и диагностический убой животных проводи™ сразу после курса введения иммуномакса и через 3 недели восстановительного периода

Токсичность препарата оценивали по показателям, отражающим состояние и функции основных жизненно важных органов и систем

ЯЛ нкциональное состояние ЦНС и нервно-мышечного аппарата оценивали после 10 дневного курса введения иммуномакса Установили, что в этот период у подопытных крыс значительных отклонений от контрочьных ни в одном из тестов, характер оующих состояние центральной нервной системы не отмечалось, препарат не 01 азывает значимого воздействия на функциональное состояние ЦНС и нервно-мышечного аппарата подопытных животных В этот период у крыс под-

опытных групп установлено статистически значимое в пределах физиологической нормы увеличение количества лейкоцитов

У крыс подопытных групп установлено уменьшение клиренса мочевины (на 21%) и увеличение ее содержания в сыворотке крови Через 3 недели восстановительного периода у этих животных содержание мочевины в крови оставалось повышенным, но за счет увеличения выведения ее с мочой клиренс мочевины подопытных животных почти не отличался от контрольных животных Массовый коэффициент почек подопытных и контрольных крыс был примерно одинаков во все сроки обследования

При патоморфологическом исследовании у крыс сразу после завершения курса введения иммуномакса в местах введения (подкожная клетчатка и мышца) установлены гиперемия и точечные гематомы Через 3 недели после отмены введения иммуномакса местные реакции на препарат отсутствовали у крыс в обеих экспериментальных группах

При гистологическом исследовании подкожной клетчатки и мышцы бедра в местах введения иммуномакса в период завершения эксперимента установтсны очаги некротизированной ткани, окруженные поли- и мононуклеарами Через 3 недели посте отмены введения иммуномакса у этих же групп регистрировались мелкие немногочис пенные скопления мононуклеаров в подкожной клетчатке

Во всех остальных органах (сердце, почки, печень, поджелудочная железа, пищевод и желудок тонкий и толстый кишечник, головной мозг, гипофиз, щитовидная железа, семенники, тимус, селезенка, брыжеечные и паховые лимфатические узлы, надпочечники) как у контрольных, так и подопытных животных нарушений в системе кровообращения, дистрофических некробиотических изменений клеток и воспалительных реакций не установлено

Изучение токсичности иммуномакса в хроническом эксперименте на мышах и кроликах. Местное раздражающее действие иммуномакса изучали на двух кроликах породы шиншилла путем однократного закапывания в правый глаз 6,3%-го раствора иммуномакса, для контроля им в левый глаз закапывали физиологический раствор У обоих кроликов через 1,5 часа после введения препарата появилась слабо выраженная гиперемия конъюнктивы правого глаза, которая через 2,5 ч усилилась, появилось обильное отделяемое бе того цвета Через сутки

указанные симптомы стихли, а через 2 суток различия в состоянии правого и левого глаз > обоих животных отсутствовали

В двухмесячном эксперименте на мышах, самцах и самках, изучали хроническую токсичность иммуномакса Препарат вводили мышам в дозах 10 и 50 мкг/кг

В течение всего срока наблюдения поведение и внешний вид опытных животных не отличались от контрольных признаков интоксикации у них не отмечалось 1оедаемость корма также была одинаковой Ежедневное введение иммуномакса не оказало влияния и на прирост массы тела мышей, не вызвало достоверных измгнений в формуле крови Однако у мышей-самцов этой группы установлено снижение уровня эритроцитов в крови, но значение цветового показателя крови у них не отличалось от контрольных

Длительное введение иммуномакса мышам в дозе 50 мкг/кг вызывало увеличение белка в плазме их крови (у самцов - на 8,1%, у самок - на 10,3%, р<0,05) И [учение аллергизирующего действия иммуномакса. Индукцию аллергических реакций немедленного типа, в ответ на введение иммуномакса, изучали на морских свинках в системной анафилактической реакции

Морских свинок массой тела 250-300 г сенсибилизировали путем 3-кратного через день введения препарата одной группе по 10 и второй по ЮОмкг на инъекцию На 21-е сутки от начала сенсибилизации внутрисердечно вводили разрешающую доз / препарата первой группе - по 100 и второй — по 300 мкг Оценку реакции проводили на основании принятой 4-балльной системы

В тервые 5-10 минут после разрешающей инъекции ни у одной морской свинки в обеих подопытных группах признаков анафилактического шока не установили Остановленные редкие почесывания мордочки и «жевание» у отдельных животных не поддаются оценке по 4-балльной системе Подтвердили, что препарат иммуномакс анафилактогенными свойствами не обладает

Изучение токсичности иммуномакса на домашних животных. В условиях 30-дневного чронического эксперимента на собаках путем введения в го'овой лекарственной форме препарата в дозе 30 мкг/кг не выявлено его втаяния на общее состояние и поведение животных Статистически достоверных

различий динамики массы тела у подопытных и контрольных групп собак не установлено

Не отмечено у подопытных собак и статистически достоверных изменений количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, уровня содержания гемоглобина, общего белка, мочевины и креатинина, активности ферментов в сыворотке крови, не выявлено изменений и в показателях липидного обмена

Патоморфологическими исследованиями подопытных собак, получавших в течение 1 месяца Иммуномакс, токсического и токсико-аллергического действия препарата не установлено

Изучение отдаленных последствий воздействия иммуномакса на организм животных

Изучение мутагенной активности иммуномакса проводили на мышах по уровню постимплантационных потерь и достоверных различий постимплантаци-онной смертности у подопытных и контрольных животных не установили

Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия иммуномакса Установили, что при введении иммуномакса с 1 по 20-й день беременности крыс в дозе 0,075 мг/кг показатели пред- и постимплантадионной смертности (3,1 и 3,1%) оказались близкими к этим показателям в контрольной группе (4,4 и 3,2%) Масса плодов (2,57±0,04 г) практически не отличалась от массы плодов контрольной группы (2,50±0,05 г) Прирост массы подопытных самок к окончанию беременности (46%) был практически одинаков с приростом массы в контрольной группе (40%)

При обследовании плодов крыс подопытной группы внешних аномалий развития не обнаружено, а показатели выживаемости потомства у крыс подопытной группы были близки к контрольным Параметры развития, динамика массы тела, показатели двигательной активности крысят подопытной группы оставались на контрольном уровне

Подтвердили, что иммуномакс не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием, не оказывает отрицатечьного влияния на постнатальное развитие потомства

Изучение иммуномодулирующих свойств иммуномакса

Активация синтеза антител Установлено, что инъекция мышам иммуномакса вместе с субоптимальной иммуногенной дозой эритроцитов барана (БЭ) приводит к 10-кратному усилению продукции антителопродуцентов, специфичных к БЭ

По:ле иммунизации БСА в сочетании с иммуномаксом уровень (ИФА-титр) специфг ческих к БСА антител в сыворотке крови мышей достигал 1 20000 что было значительно выше уровня специфических антител при иммунизации только БСА (ИФА-титр не более 1 500) При введении иммуномакса существенно увеличивалась не только интенсивность, но и продолжительность вторичной иммунной реакции на БСА При этом доминировали изотипы антител IgGl, IgG2a и IgG3 Продукция IgM и IgG2b, специфичных к БСА, повышалась под влиянием иммуномакса в иеньшей степени Адъювантный эффект отчетливо зависел от дозы иммуномакса При вторичной реакции на БСА оптимальной иммуностимулирующей дозой оказался 1 мкг иммуномакса, при первичной иммунной реакции на гетероло-гичные эритроциты - дозы 10 мкг иммуномакса или более

Полученные данные свидетельствуют, что иммуномакс активирует образование антител против чужеродных антигенов и усиливает неспецифическую иммунную ¡ащиту против инфекций

Влияние иммуномакса на организм больных животных разных видов при вторичных иммунодефицитных состояниях

Эксперименты проведены на животных разчичных видов мышах, собаках, крупном рогатом скоте и курах

Защита мышей от инфекции Е coli На модели бактериального сепсиса у мышей изучали возможность стимуляции противоинфекционной защиты иммуномаксом II работе использовались беспородные мьтии массой 16-18 г

Мышей заражали внутрибрюшинно вирулентной культурой Е coli 17 Инфицирующие дозы Е coli вводили в дозах 75 мзн 100 млн или 200 млн КОЕ В контроле заражения у всех животных развивался сепсис, и они погибали в среднем в течение 10 дней после заражения

Пр1 колибациллярном сепсисе защитное действие иммуномакса в большей степени зависело от дозы инфекции Достоверное повышение выживаемости мышей по сравнению с контролем отмечалось при инфицирующей дозе Е coli 75 млн КОЕ При дозах заражения 100 и 200 млн КОЕ защитное действие иммуномакса составляло 25% (с учетом выживаемости в контроле), но различия были недостоверными I р > 0,05)

Лечение диоксидином в дозе 6,25 мг/кг было более эффективным в группе мышей, которым профилактически вводили иммуномакс Так, в контроле заражения Е coli выживало 40% животных Лечение диоксидином повышало выживаемость до 75%, а сочетание диоксидина с иммуномаксом спасало 100% инфицированных животных

Лечение цыплят с применением иммуномакса при экспериментальной стафилококковой инфекции В работе были использованы цыплята яичного направления Иммуномакс вводили per os в дозе 10 мкг (на цыпленка) дважды с интервалом 96 ч, в контрольных группах цыплятам вводили физиологический раствор NaCl или препарат сравнения - иммуномодулятор полиоксидоний

Через 5 дней после второго введения препарата цыплят заражали внутримышечным введением Staphylococcus aureus 209R в дозе 0,75x109 или 2x109 микробных тел После заражения у цыплят развивалась острая септицемия, они погибали в течение 10 дней Так, через 10 дней после заражения дозой 2x109 микробных тел погибало 95% инфицированных цыплят Гибель цыплят в группах, получивших иммуномакс, была существенно меньше, она составила 45 и 55% соответственно При использовании суб детальных инфицирующих доз S aureus иммуномакс защищал 100% инфицированных цыплят, в то время как в контроле заражения погибало от 40 до 60% цыплят

В химиотерапевтических опытах применяли антибактериальный препарат нифулин, который вводили в дозе 10 мг/кг per os через 20 минут после заражения цыплят 1,5x109 S aureus Лечение нифулином позволило увеличить выживаемость цыплят до 70% по сравнению с 40% в контроле заражения Сочетание иммуномакса с нифулином защищало всех инфицированных цыплят на 100% Подтвердили, что иммуномакс значительно повышает устойчивость цыплят к заражению различными дозами Staphylococcus aureus 209R

Лечение телят, больных бронхопневмонией, с испотьзованием иммуномакса В производственных условиях из 22 телят в возрасте от 5 дней до 1 5 месяца сформировали 2 группы 14 телят, больных бронхопневмонией, и 8 - диспепсией Возбудители болезней не были идентифицированы Уровень смертности телят от данных заболеваний в этом хозяйстве составлял от 20 до 30%

Иммуномакс больным телятам вводили в дозе 100 мкг внутримышечно в 1, 2, 3, 8, 9 и 10-й дни жизни Контрольную группу телят лечили по принятой в хозяйстве схеме антибиотики бициллин и ветрин, витамины Телятам в группе сравнения вводили иммуномодулятор иммунофан в дозе 50 мг внутримышечно двукратно с интерв алом 24-36 ч Результаты лечения оценивали по выживаемости телят, продолжите тьности болезни и быстроте клинического выздоровления Период наблюдения - 1 месяц после окончания лечения

В контрольной группе (п=5) через 12 дней выздоровели 4 теленка (80%), один паг В группе телят, подвергнутых лечению иммуномагсом (п=7), через 3-4 дня пос I з начала лечения выздоровели 7 (100%), в группе сравнения (больные животные (i=10), подвергнутые лечению полиоксидонием), через 3-6 дней выздоровели 10 (100%) Подтвердили, что применение иммуномакса телятам, больным бронхопневмонией, позволяет добиваться 100%-ного терапевтического лечения

Испытание иммуномакса для профилактики диспепсии новорожденных телят Работа проводилась на одной из ферм колхоза им Ленина Ковернинского района Нижегородской области В течение ряда лет на этой ферме диагностировались случаи забоаевания и гибели новорожденных телят от желудочно-кишечных инфекций ( признаками острого гастроэнтерита (диспепсии) Заболеваемость телят в первые дни жизни достигала 100%, летальность - от 25 до 30%

В опыте использовано 20 новорожденных телят, 10 из них получали иммму-номакс путем подкожного введения в 1, 2, 3, 8, 9 и 10-й дни жизни по 100 мкг (5 телят) и '00 мкг (5 телят) Телятам контрольной группы (п=10) вводили гипериммунную с ыворотку против паратифа и ринотрахеита, а также антибиотики и витамины

Bei телята контрольной группы заболели диспепсией в первые дни жизни, 3 (30%) теленка через 3-4 дня пали У 4 телят подопытной группы, получивших инъекции иммуномакса, также отмечались расстройства пищеварения, но симптомы болезненного состояния были слабовыраженными и гибели не отмечалось Все телята были практически здоровыми и в течение последующего месяца жизни не заболевали

Испытание иммуномакса с целью профилактики диспепсии новорожденных щенков Работу проводили в клубе заводчиков породы Шелти (г Москва) где в

течение ряда лет наблюдались спорадические инфекционные заболевания новорожденных щенят в виде острого гастроэнтерита с высоким (до 20%) уровнем летальности

Исследования по изучению эффективности неспецифической профилактики заболеваний новорожденных щенят с помощью иммуномакса провели на 15 новорожденных щенках, из них иммуномакс получали 10 путем двукратного подкожного введения в дозах 100 (5 щенков) и 200 мкг (5 щенков) Щенкам контрольной группы (п=5) инъецировали гипериммунную сыворотку против парвовирусного энтерита собак, кортикостероиды, а также антибиотики и витамины

Из пяти три щенка контрольной группы заболели диспепсией в первые дни жизни, один из них через 4 дня пал Щенки подопытных групп, получившие инъекции иммуномакса, оказались значительно более устойчивыми к кишечной инфекции, симптомы отклонений у отдельных особей были стертыми и гибели животных в этих группах не отмечалось, в последующие 3-4 недели ни один щенок не заболел

Испытание иммуномакса для лечения собак при бронхопневмонии проведено на 18 щенках в возрасте от 25 дн до 1,5-месячного возраста, больных бронхопневмонией Возбудители заболеваний не были идентифицированы

Больным щенкам подопытной группы (п=7) двукратно с интервалом 36 ч внутримышечно вводили иммуномакс в дозе 100 мкг Контрольную группу щенков (п=5) лечили по принятой в клубе схеме (антибиотик бициллин и витамины) Щенкам в группе сравнения (п=6) внутримышечно двукратно с интервалом 24-36 часов вводили иммуномодулятор иммунофан в дозе 50 мг

Из пяти щенков контрольной группы один пал (20%), а остальные выздоровели через 10-12 дней Все 7 (100%) щенков подопытной группы выздоровели через 3-4 дня после начала лечения В группе сравнения также было сохранено 100% животных, но выздоровление наступило через 5-6 дней после начала лечения

Подтвердили, что введение иммуномодуляторов предотвращало гибель щенков, больных бронхопневмонией, и способствовало их быстрому выздоровлению

Испытание иммуномакса для лечения собак при спорадических инфекциях проводилось на базе ветеринарной клиники «Миран-Вет» В опыте находилось 60 собак разчичных возрастов и пород (немецкая овчарка ротвейчер, боксер, ризенш-

науцер, фокстерьер, чау-чау кокер-спаниель), больных различными инфекционными заболеваниями (чума плотоядных, парвовирусный энтерит и др )

Сс'бак по принципу аналогов распределили на 6 групп, рандомизировав по нозофорчам Две группы (1-я и 4-я) были составлены из животных в начальной стадии контагиозных инфекционных заболеваний, 2-я и 5-я группы - из больных собак на пике развития контагиозных инфекционных заболеваний, 3-я и 6-я - из больных неконтагиозными инфекционно-воспалительными процессами

Животным всех шести групп проводилось симптоматическое, общеукрепляющее и специфическое (гипериммунные поливалентные сыворотки против чумы плотоядных и парвовирусного энтерита) лечение Собакам 4-й, 5- й и 6-й групп дополнительно к обычному лечению ежедневно подкожно вводили иммуномакс в дозе по 5 м)<г/кг в течение 5 дней

В 1-й группе из 8 собак (в начальной стадии инфекционного заболевания) погибли 1 (50%), во 2-й из 10 собак 6 (60%) погибчи, а в 3-й группе 6 (60%) собак выздоровело Эффективность лечения в данных группах составляча 40-60% (М=53=2 7%)

При использовании иммуномакса в комплексе с обычным лечением процент выживших животных возрастал до 90-100% (М=93±4,6%), выздоровление наступало быстрее, остаточные симптомы ботсзни проявились в гораздо меньшей степени

Испытание иммуномакса при лечении собак с послеродовыми эндометритами проведено на 8 собаках больных эндометритом Собакам контрольной группы (п=4) проводился обычный курс лечения Собакам подопытной группы (п=4) вводили по 230 мкг иммуномакса в 1, 2, 3, 8, 9 и 10-й дни лечения

У (обак контрольной группы, которым вводили антибиотики промывали полость матки антисептиками внутриматочно вводили антибактериальные средства а так» е препараты стимулирующие сократительную функцию матки Выздоровление л инволюция матки наступала через 4-6 недель

У собак подопытной группы через 3 дня после последней инъекции иммуномакса катаральные и катарально-гнойные выделения заметно уменьшились через неделю прекратились совсем Полное выздоровление наступало к 20-21-му дню после нач.ша лечения, к этому времени завершалась и инволюция матки

Аналогичные исследования провели по испытанию лечебно - профилактического действия иммуномакса при инфекционных болезнях норок и подтвердили, что введение в комплекс мероприятий иммуномодулятора иммуномакса способствует более быстрому выздоровлению больных норок с проявлением диареи

Изучили влияние препарата иммуномакс на иммунологическую реактивность и продуктивность цыплят-бройлеров и подтвердили, что выпаивание иммуномакса цыплятам в критические периоды их жизни трехкратно первый раз - с 1-х по 7-е, второй - с 15-х по 21-е, третий - с 44-х по 50-е сутки оказало стимулирующее влияние на дыхательную функцию крови, обеспечивая более интенсивный энергетический обмен

В крови подопытных цыплят увеличивалось на 19-24% количество эритроцитов, повышалась концентрация гемоглобина, нормализовалась лейкограмма их крови, повышался уровень иммунобиологической реактивности и достоверно увеличивались показатели естественной резистентности

У цыплят 2-й группы получавших препарат, активность лизоцима в возрасте 60 суток выше на 1,8, в 90 суток - на 1,8, а в возрасте 120 суток - на 1,4%

При выпаивании препарата иммуномакс цыплятам 3-й группы в дозе 0,25 мл/кг активность лизоцима повышается, по сравнению с контролем, соответственно по возрастным периодам на 2,7, 2,2 и 3,2%

Одновременно с этим у цыплят 2-й группы с возрастом повышается бактерицидная активность сыворотки крови на 5,0, 6 8 и 9,6%, а у цыплят 3-й группы -на 8,2, 8,6 и 9,3%

Аналогичную тенденцию изменения претерпевает возрастная динамика фагоцитарной активности псевдоэозинофилов птицы При выпаивании иммуномакса она достоверно увеличивается на 3 9 и 5% на 60-е сутки, на 5 и 6, на 3,5 и 6,3%, достигая максимального значения в возрасте 90 суток и несколько снижаясь к 120-суточному возрасту

Полученные результаты исследований свидетельствуют о мощном потенциале иммуномодулятора иммуномакс в активации неспецифического противоин-фекционного иммунитета

19

Выводы

1 Наиболее часто и тяжело болезни животных протекают на фоне вторичных иммунодефицитов, а лечение больных животных без применения иммуномо-дуляторов оказывается недостаточно эффективным и высокозатратным

2 Разработанный отечественный препарат иммуномакс, в качестве действующего вещества содержащий кислый пептидогликан иммуномакс - 100 БД или 200 ЕД и вспомогательное вещество натрия хлорид, является малотоксическим веществом IV класса соединения, не обладает общетоксическим действием ЛД50 для белых мышей при пероральном введении составила 8000 мг/кг живой массы

Пр( парат не оказывает эмбриотоксического, тератогенного, юнадоток-сического, мутагенного и канцерогенного действия, при введении в рацион крыс в дезе 0,25 мл/кг не оказал неблагоприятного влияния на постнатальное развитие пот омства 1 и 2-го поколений

3 Ежедневное в течение 2 месяцев скармливание иммуномакса мышам в дозе 10 и 50 мкг/кг не оказывает отрицательного влияния на их рост и развитие, на динамику массы тела, относительную массу внутренних органов, общее содержание белкг в сыворотке крови, активность ферментов сыворотки крови и печени крыс, содержание креатинина в моче, морфологические показатели периферической крови и внутренних органов иммунныи статус их организма

4 Применение иммуномакса не оказывает местного раздражающего действия и не вызывает сенсибилизацию организма, но повышает функциональную активность Г- и В-лимфоцитов, активирует образование антител против чужеродных антигеноЕ, > силивает защиту от инфекций, вызванных бактериями или вирусами

5 Двукратное с интервалом в 2-4 суток подкожное или внутрикожное введение иммуномакса новорожденным щенкам в дозе 100 мкг профилактирует у них диспепсию, а применение иммуномакса в тех же дозах и тем же способом щенкам, больным бронхопневмонией, оказывает выраженный лечебно-реабилитационный эффект.

Шестикратное (1, 2, 3, 8 9, 10-й дни лечения) использование иммуномакса в дозе 200 мкг на животное в комплексном лечении собак при эндометрите и норок при диаре?х оказывает высокий терапевтический эффект

Двукратное с интервалом 48 часов введение иммуномакса щенкам норок в дозе 100 мкг на животное значительно повышает их иммунный статус перед вакцинацией

6 Трехкратное с интервалом 96 часов выпаивание иммуномакса цыплятам-бройлерам в дозе 100 мкг/кг живой массы в критические периоды их жизни достоверно повышает уровень лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови, а также фагоцитарную активность псевдоэозинофилов, значительно улучшает иммунный статус птицы, повышая функциональную активность их Т— и В-лимфоцитов иммунитета, увеличивая концентрацию общего белка и иммуноглобулинов в крови

7 Шестикратное внутримышечное введение иммуномакса новорожденным телятам в дозе 100 мкг на одно животное оказывает высокий лечебный и профилактический эффект при болезнях с проявлением острых желудочно - кишечных расстройств и бронхопневмоний

Рекомендации производству

Результаты наших исследований использованы при разработке

- Инструкции по применению иммуномакса для лечения и профилактики иммунодефицитных состояний у собак, кошек и пушных зверей (утверждена Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору Минсельхоза РФ 2007 г . регистрационный номер ПВР-1-3 7/01994)

- Учебного пособия «Совершенствование организации и экономики ветеринарного дела» (рекомендовано Министерством сельскою хозяйства РФ в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальности 111201 «Ветеринария», 2007)

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Рябов Д А Лечение иммуномаксом спорадических инфекций собак /Д А Рябов, Е В Медова/ Ветеринарная Патология - М 2007 - № 3 - С 242-243

2 Рябов, Д А Фармакотоксикологические свойства иммуномодулятора иммуномакса/ДА Рябов/Ветеринарная Патология -М,2007 - №3 - С 243-247

3 Панина, О Н Хлорсодержащие препараты и окислители, используемые для дезинфекции/ О Н Панина. Д А Рябов, Д А Мамлеева// Экологическая и про-тивоэпизоотическая защита современного животноводства - Н Новгород 2007 -С 22-32

4 Рябов, Д А Применение аэродисперсионных систем для дезинфекции / ДА Рябэв // Экологическая и противоэпизоотическая защита современного животноводства - Н Новгород, 2007 - С 22-32

5 Панина, О Н Организация ветеринарного дела в сельском районе/ О Н Панина, Д А Рябов// Совершенствование организации и экономики ветеринарного дела - Н Новгород, 2007 - С 37-45

6 Чрьянов, И Г Организации ветеринарного дела в городе /ИГ Ирьянов, Д А Рябов //Совершенствование организации и экономики ветеринарного дела». -Н Новгород. 2007 - С 46 - 51

7 Рябов, Д А Совершенствование организации ветеринарных мероприятий / ДА Рябев // Совершенствование организации и экономики ветеринарного дела -Н Новгород, 2007 -С 121-137

Рябов

Дмитрий Александрович

ПРОФИЛАКТИКА ИММУНОДЕФИЦИТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ

автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Корректор Г Н Орехова Компьютерный набор и верстка Э Н Шакерова

Подписано в печать 14 01 08 г Формат 60 90 1/16 Печать трафаретная Бумага офсетная Объем печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ 05/0308

Отпечатано издателем Ю А Николаевым 603073, Нижний Новгород, Таганская, 6-29 тел (831) 250-47-17. e-mail nvapub ^:sand\ ru