Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Профилактика и лечение диареи новорожденных телят лактобактерином и иммуномодуляторами

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР ■ ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ Ч ЗЛКУПКАМ

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ВЕТЕРИНАРНАЯ АКАДЕМИЯ имени К.И.СКРЯБИНА

На правах рукописи

ГРЯЗНЕВА Татьяна Николаевна

ПРОФИЛАКТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ДИАРЕИ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ ДАКТОБАКТЕРИНОМ И ИШУНОМОДШТОРАМИ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1990

Работа выполнена в Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии имени К.И.Скрябина

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Воронин Е.С.

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор Бурлаков В.А.

2. Кандидат ветеринарных наук Данин А.Н.

Ведущая организация:

Всесоюзный ордена Ленина научно-исследовательский

институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р.Коваленко.

~> ■ - ' ' - -

Защита состоится " 1991 г. в часов

на заседании специализированного Ьовета К.120.36.05 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук при Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии имени К.И.Скрябина (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23. Тел. 377-93-83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МВА.

Автореферат разослан " в и ¿рву 1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета

Т.Н.Федосеева

0б2(ая характеристика работу

Актуальность те;ад. Изменяющиеся условия ведения яивотнозодст-L3. поставили пэред наукой и практикой ряд слокдах задач, среди которых одной из важнейших является предупреждение болезней крупного рэгатого скота.

Сосредоточение большого поголовья животных на ограниченных площадях, новые технологии их содержания и кормления оказывают влияние на характер течения болезней, прежде всего у молодняка, способствуют возникновению заболеваний со сложной этиологией, нередко - атипичный проявлением и кассовым распространенней.

Патология органов пищеварения у крупного рогатого скота составляет около 40% от общего числа болезней, причем, 60-70% из них приходится на болезни молодняка в первые 10 дней яизни.

Наибольшее распространение среди болезней телят имеет диарея, заболеваемость которой на молочных фермах и комплексах достигает 80-85$, а падеж - 15-705? от числа заболевших (Гительсон С.С., 1974, Еяинов A.A., 1970, Зарозг В.Г., 1984, КассичА.Ю., 1986, Колесни-чекхо И.Д., 1997, Корси-слоз Г.8., 1980, Сидоров М.А., ISSI, Тарасов И.И., 1984 и др.

Исследования отечественных и зарубежных авторов свидетельствуют об изменении микробного пейзажа возбудителей диарейных кишечных инфекций. Наряду с энтеропатогеннши зшерихиями и сальмонеллами приобретают этиологическое значение при диареях телят такие микроорганизмы как цитробактер, клебсиелла, протей, стафилококк, псевдомонас (Пархоменко Л.В., 1990, Тец В.В., 1988, Швиденко И.Т., 1988, Бовкун т.о., 1986, bo'rki F., 1986, JJaou р., 1986 и др.). Это свидетельствует об актуальности мероприятий, направленных на элиминацию условно-патогенных микроорганизмов. До последнего времени с этой целью широко применяли химиотерапевтические препараты, антибиотики, действие которых проявляется в равной степени как против патогенной и условно-патогенной, так и против-полезной бактериальной флоры, что небезразлично для макроорганизма, т.к. может вызвать побочные явления в виде аллергических реакций и вторичных дисбактериозов.

Бесконтрольное и массовое применение антибиотиков для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней животных способствовало появлению резистентных штаммов микроорганизмов, что аде болоо осложнило работу ветспециалистов по борьбе с этими заболеваниями. Креме того, большим недостатком применяемых в настоящее время

химиотерапевтических, аягкбактерйалышх средств является их экологическая опасность. Необходимость профилактики накопления в продуктах животноводства этих препаратов в опасных для здоровья ладей количествах, подтверждает целесообразность разработки и внедрения таких средств и методов пре* 'преждения и лечения желудочно-кишечных болезней животных, которые были бы достаточно эффективными, экологически чистыми, безвредными как для животных, так и для здоровья людей.

В последние годы большое внимание в ветеринарии стали уделять биологическим препаратам, в частности, бактерийным и иммуно-ыодуляторам.

Цель и задачи исследований. Несмотря на большое количество проведенных исследований по дисбактериоэу кишечника, микробиологические аспекты этой проблемы еще недостаточно изучены: не разработаны критерии оценки состояния кишечной микрофлоры в норме и патологии, не уточнена роль дефицита лактобактерий и бифидофлоры в развитии различных заболеваний у животных, не дано научное обоснование применения лактобактерина, Т-активина, В-активина для профилактики и лечения диареи новорожденных телят.

В соответствии с изложенным нами были поставлены следущие задачи:

1. Изучить динамику заселения микрофлорой кишечника здоровых и больных диареей новорожденных телят.

2. Изучить роль условно-патогенных микроорганизмов при экспериментальном воспроизведении диареи новорожденных телят.

3. Изучить с помощью сканирующего электронного микроскопа колонии условно-патогенных микроорганизмов и роль лактобактерий в процессе антагонизма.

4. Изучить фармакодинам'ику лактобактерина.

5. Определить сравнительную эффективность совместного применения лактобактерина, Т-активина, В-активина при диареях новорожденных телят.

Научная новизна работы. Впервые изучена антагонистическая активность производственных штаммов лактобактерий по отношению к условно-патогенной микрофлоре в организме морских свинок-гнотобион-тов. Установлена этиологическая роль протея, цитробактер, клебси-елл, стафилококка при экспериментальном заражении телят. Впервые создана система протоколирования свертывания информации о микробной заселенности кишечника телят условно-патогенными мккроор-

ганизмвми, рассчитанная на небольшое количество проб на основз нескольких контактов животного с микрофлорой разных видов. Экспериментально установлено существование логарифмически нормального закона распределения заселенности микроорганизмами кишечника телят при использовании лактобактерина, Т- и В-активина. С помощью электронной сканирующей микроскопии установлено, что под действием лактобактерина изменяются биологические свойства энте-робактерий, происходит потеря микроорганизмами адгезивных свойств, поверхностного полисахаридного слоя и переход их в атипичные форш, свойственные Л-грансформации. Предложено комплексное использование биологических препаратов для профилактики и лечения диареи телят. Проведены широкие производственные испытания по определению профилактической и терапевтической эффективности лактобактерина, Т-активина, В-активина при диареях новорожденных телят в различных областях и регионах страны.

Практическая и теоретическая значимость работы. Результаты изучения этиологической роли условно-патогенных микроорганизмов при диареях новорожденных телят используются в республиканских ветеринарных лабораториях Киргизии и Казахстана при диагностике желудочно-кишечных болезней животных.

Разработана схема применения лактобактерина в сочетании с иммуномодуляторами Т- и В-активином для профилактики и лечения диареи новорожденных телят, которая вошла в рекомендации "Профилактика и лечение желудочно-кишечных и респираторных болезней «олодняка крупного рогатого скота биопрепаратами", утвержденные в 1989 г'. Главком ветеринарии Киргизской ССР и внедренные в производство.

Составлено наставление по применению лактобактерина для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней с.-х. животных, утвераденное Г/В Госагропрома СССР в 1989 г.

Внедрены в производство два рационализаторских предложения по способам профилактики и лечения диареи новорожденных телят.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на II и 12 конференциях молодых ученых (MBA, 1988, 1989).

По материалам диссертации сделаны доклады перед ветс^'ециалис-тами Московской (1988-1990 гг), Горьковской (1989), Ленинградской областей (1990), Казахской ССР (г. Алма-Ата, 1989), на республиканских семинарах по болезням молодняка Киргизской ССР (г. Фрунзе, 1989, 1990 гг).

Основная часть диссертации под названием "Экологически безвредные средства нормализации бактериоценоза кишечника телят" была представлена на конкурс мо/ \дых ученых,„членов ВАНТО "За лучшие разработки в области науки и техники за 1989-1990 гг", где заняла I место.

Препараты лактобактерин, Т-активин, В-активин демонстрировались на ДЦНХа СССР в 1989 г и получили золотые, серебряные медали и дипломы.

В 1989 году препараты были отмечены серебряной медалью фирмы "СИБА-ГЕЙГИ" (Швейцария).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 4 статьи.

Объем и структура диссертации. Основной текст работы изложен на 162 страницах машинописи. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, библиографического списка (114 отечественных и 62 зарубежных авторов), приложений. Диссертация иллюстрирована 35 таблицами и рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы. Работа выполнена в научно-исследовательской лаборатории болезней молодняка с.-х. животных Московской ветеринарной академии им. К.И.Скрябина, Горьковского НИИ эпидемиологии и микробиологии. Белорусского НИИ экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского, Всесоюзного НИИ ветеринарной санитарии, в 4-х хозяйствах Московской области ("Память Ильича", "Ра-менское", "Большевик", ОПХ "ЩИС"), в 2-х хозяйствах Горьковской' области (учхоз "Новинки", "Возрождение"), а также в колхозах "XXlJ' съезд КПСС", Казахской ССР и "Заветы Ильича", Киргизской ССР.

В работе использовали 1062 телят в возрасте I-I5 дней.

Экспериментальное воспроизведение диареи условно-патогенными микроорганизмами проведено на 30 новорожденных телятах, живой массой 30-35 кг, черно-пестрой порода. При этом, 18 телят разделили на 6 групп, по 3 головы в каждой. Первую группу телят заражали взвесью суточной агаровой культуры E.coli (О III:K 99+:Н), наделенной из фекалий больного диареей теленка; вторую - P. vulcams О 21, выделенную из лимфоузла теленка, павшего от диареи; третью -К.рпеимота, выделенной из фекалий больного теленка; четвертую -S.aueeus, выделенной из молозива коровы, больной маститом; пятую -

ассоциацией данных микроорганизмов. Шестая группа - контрольная.

Фармакодинамику лактобактерина изучали на 12 новорожденных телятах, которых заражали ассоциацией микроорганизмов, обладащих адгезивными свойствами (Р.мтав! Iis, С.тешин, К.рпеимоша, E.coli К 99, S.auneus), а затем перорально вводили лактобактерин и лактобактерин в сочетании с Т- и В-активином (иммуномодуляторы вводили подкожно).

Всех телят заражали в первый день жизни, однократно, перорально, каждой культурой в дозе 10 млрд.микр.кл. Общая доза смешанных культур также составляла 10 млрд.микр.кл. (по 2 млрд.микр.кл. • каждой культуры). Животных поили цельным молоком 3 раза в день и каждую группу содержали в отдельном боксе. За телятами вели клинические наблюдения, а также бактериологические исследования кишечного содержимого на 2, 4, 7, 10 дни жизни И'патологического материала.

Патогенность выделенных микроорганизмов исследована на 50 белых мышах.

Антагонизм мекду лактобактершши, прртеем и энтеропатоген-ной кишечной палочкой изучен на 2 морских спинках-гнотобионтах, которых получали по методике Чахава O.B. (1972), при консультации профессора Интизарова М.М. Животных выращивали в гнотобиологичес-ких изоляторах из плексигласа. Для кормления применяли диету L-477 Плезанса, а также стерильное молоко.

Проведены бактериологические исследования 171. пробы молока и молозива, смывов с объектов окружающей среды, содержимого влагалищ коров и плодных вод.

• Изучение биологической активности лактобактерий, культураль-но-биохимических свойств, пагогенности, чувствительности микроорганизмов к фагам и антибиотикам проведено на 1989 птакыах.

Изучены антигенные свойства 120 штаммов эперихий, 65 штаммов протея, 20 штаммов цитробактер, 20 штаммов клебсиелл в реакции агглютинации с поли- и моноспецифическими 0-, К- и Н-снворотками.

Количественный подсчет микроорганизмов проводили по методике Эгштейн-Дитвак Р.В. и ВильшанскоЙ Ф.Л. (1969) в модификации Соколовой К.Я. (1972). Для культивирования выделенных бактерий использовали питательные среды Зндо, Плоскирева, кровяной агар, висмут-сульфит агар, желточно-солевой агар, ША, МПБ, МППБ, ПЖА, среда накопления (магниевую и селенитовую), ЫРС-1, МРС-2, МРС-4, МРС-5, среды Блаурока, Олькеницкого и другие.

Идентификация энтеробактерий проводилась с использованием систем иццикаторных бумажных 1СИЪ) и пластин биохимических дифференцирующих энтеробактерии (1ВДЭ).

Антибиотикочувствительность выделенных бактерий изучали методом диффузии в агар с использованием бумажных дисков.

Фагочувствительность микроорганизмов по отношение к колипро-тейному, клебсиеллезному, сине гнойному, стафилококковом^^ сальмо-неллезному фагам определяли по методу Аппельмана (1961).

Биологическую активность лактобактврий in vitro изучали методами, предусмотренными ТУ-Ю-09-19-89.

Исследования строения и изменчивости микроорганизмов под действием лактобактерина были выполнены с помощью электронного микроскопа высокого класса разрешения "Хитачи - 800" со сканирующей приставкой "Хитачи - 8010" (Япония). Для сохранения естественной архитектоники колоний, микроорганизмы выращивали по оригинальной методике на миллипоровых фильтрах "Владипор 0 4,5м, помещенных н& среду MFC-4 , оптимальную для роста лактобактврий (Павлова И.Б.,193?

Статистическую обработку полученных данных провели с помощью персонального компьютера системы 1Ш PC/AT по специально раз ¿»¡Янтарной программе при консультации зап. лабораторией экономией БНИИШ Винокурова В.В. •

Расчет экономической эффективности применения лактобактерина, Т- и В-активина проводили на основании методически рекомгндац2Ш "Определение экономической эффективности использования в ветеринарии результатов научно-исследовательски и огадаго-коиструктиз-ных работ, новой техники, изобретений и рационализаторских предложений" (I9B7) и оценивали путем сравнения основных технико-экономических показателей, полученных при использеваник рекомендуемых биопрепаратов и препаратов, традиционно применяемых ь хозяйствах.

РЕЗУЛЬТАТЫ иссдедовАНий

Динамика бактериального кишечного пейзажа у здоровых новорожденных телят и больных диареей

У здоровых новорожденных телят, тедят-гипотрофиков и больных диареей проводили бактериологические исследования содержимого кишечника на 2, 4, 7, 10, 15 дни жизни.

Установленоs что на 2 день жизни у всех 25 исследованных здоровых телят в 1 ? фекалий содержится эаерихий 10° кл/г» у Ь% ть-днч' ■ цхтробактер з количество IQ3 кл/г. b этой эозрасте у животик* с?-

ц&ч&дось полной отсутствие лактобактерий и дефицит бифидобактерий (до Ю5 кл/г).'На 4 день жизни количестве эшерихий возрастало до 10° кл/г, цитробактер - до 10 кл/г. У 80% животных появлялись лактобактерии в количестве 10^ кл/г. К 7 дню жизни количество эшерихий у 45% телят возрастало до 10^ кд/г, цитробактер - до 10^. У 60% телят в этом возрасте выделяли клвбсиеллу в пределах 10^-10 кл/г. В возрасте 10 дней эщерихии удерживались у всех телят на уровне 10®-Ю9 кд/г. У 15% животных ввделяли сальмонелы в количестве 10 кл/г. На 15 день жизни, наряду с высокий уровней содержания эшерихий (Ю9 кл/г), обнаруживали протей (Ю6 кд/г) я цитробактер (Ю7 кл/г). Лакто- и бифидобактерии выделялись в пределах НА-ЮР кл/г. Такой состав кишечной микрофлоры наблюдался у 96% исследованных животных. У здоровых телят не бвди обнаружены куль -тури энтеробактерий с атипичными ферментативными признаками, а также обладающие гемолитическими и патогенными свойствами.

У всех 90 телят-гипотрофиков при исследовании кишечного содержимого на 4 день жизни выявляли дисбактэриоз. На фоне полного отсутствия лакто- и бифвдобактерий в значительных количествах выделяли эшерихии, протей и цитробактер (до 10^ кл/г), а также клеб-сколлу (до Ю7 кл/г). К 15 дню жизни нормализации кишечной микрофлоры у 75% тедят-гипотрофикоа не наблюдалось.

Срзди условно-патогенных энтерсбактарий у 139 телят, больных диареей,преобладали ошэрнхии (28,29%), протей (18,58%) и цитробактер (11,28%). Также высоким был процент обнаружения патогенных стафилококков (26,38%).

. Установлено, что 64,6% штаммов энтеробактерий, выделенных из фзкзлий больных диареей телят и патологического материала,вызывали гемагглютинацию и 53,8% - давали положительную ДМРГА. При этом, все штаммы протеев, вьщеленные из материала павших от диареи телят и 59% штаммов, выделенных из фекалий, имели маннозорезистент-нузо гемагглютинирующую активность, что подтверждается также и исследованиями Ставцевой Л.Я. (1989). Кроме того, 57,2% штаммов микроорганизмов, ввделенных из молозива, содержимого родовых путей коров, объектов внешней среды, давали положительную ДМРГА, что позволяет считать их факторами передачи возбудителей острых ки-шзчяых инфекций новорожденных телят.

Культурально-биохимические, морфологические свойства, вирулентность, фаго- и антибиотикочувствительность выделенных микроорганизмов

В результате идентификации 1989 штаммов микроорганизмов были, изучены их культурально-биохимичегчсие свойства. Клебсиелла, выделенная от здоровых телят, давала умеренный рост на среде Эндо и напоминала непатогенные вшерихии. Выделенные же от больных диареей телят, клебсиеллы бурно росли на среде Эндо, были белого цвэта, влоаные, блестящие, сливающиеся друг с другом. Энтеропатогоншэ эшерихии,в отличие от непатогенных, на кровяной агаре образовывали зону гемолиза и приобретали на плотных питательных средах в-форш.

Все шташы энтеропатогенннх эшерихий, протея и сальмонелл, выделенные от больных диареей телят и патологического материала, были неспособны ферментировать лактозу. Цитробактер и клзбсиелде давали замедленную положительную реакцию на лактозу. Непатогекшз эшарихаи, клебсиеллы, цитробактер и сальмонеллы, выделенные от здоровых телят давали яркую положительную реакцию на лактозу.

При определении фагочувствительности бактерий было установлено, что высокой фагочувствительностью не обладал ни один микроорганизм, выделанный из кишечного содерашого больных диареей телят. Бее выделенные энтеропатогенные штаммы эшерихий были фаго-резистентны.

Было отмечено быстрое развитие фагорезистентности у бактерий в процесса применения фагов для профилактики и лечения диареи телят. Если на второй день после применения полифага микроорганизмы проявляли среднюю степень фагочувствительвости (лизировались фагом в разведении 10"*^), то на пятый день фаготерапии эшорихии и протей были фаглрезиетентны( а клебсиелла и стафилококк проявляли слабую степень фагочувствительности (лизировались фагом в разведении Ю~2).

Изучение антибиотикочувствительности выделенных пга&агав шасрс-организмов по отношению к 16 антибиотикам, наиболее широко применяемым в хозяйствах страны при желудочно-кишечных болезнях телят, позволило установить, что ни к одному из них высокой чувствительности бактерии не проявили., Энтеропатогенные эшерихии, протей, псевдомонады, сальмонеллы были антибиотикорезистентны. Следовательно, широкое распространение антибиотикорезистентных штаммов бактерий приводит к неэффективности применения антибиотиков в ветеринарной практике при желудочно-кишечных болезнях молодняка.

Выявлена связь адгезивной активности ввделенных культур протея и цитробактер с определенными серогруппами. Так, наиболее . ."го адгезивная активность была обнаружена у штаммов протея серо-

группы О 30:Н I (75%) и у штаммов цитробактор серогруш 0 8 и 0 22 (82%). Эти микроорганизмы были патогенны для белых мышей и вызывали их гибель в концентрации 500 млн. микробных клеток.

Этиологическая роль условно-патогенной микрофлоры при экспериментальном воспроизведении диареи у новорожденных телят

Результаты экспериментального воспроизведения диареи энтеро-патогенной E.colt , P.vuloaius, К.рпеимоша, S.auseus и их ассоциацией показали, что у зсех 15 телят на вторые сутки после заражения набладался профузный понос, резкое повышение температуры тела, угнетение, обезвоживание организма. Погибли все экспериментально зараженные телята. Следует отметить, что в первую очередь пали нивотнко, зараженные ассоциацией энтеробактерий.

На второй день после заражения у телят выделяли энтеропато-генныо эшерихии (10*® кл/г), протей (10® кл/г), клебсиеллы (I08 кл/г) и стафилококк (10^ кл/г). Бифидо- и лактобактерии кэ были обнаружены ни у одного животного опытных групп. Состояние тэ-лят контрольной группы было удовлетворительным.

Проведенные исследования патологического материала от затаенных телят показали, что из всех паренхиматозных органов, а se из крови, яелчи, костного мозга, содержимого сычуга и гожогс отдела кишечника выделяли энтеропатогенные эшерихии, проте.Ч л клебсиаллу.

Таким образом, проведагешз исследования- проде-енс-тр 'рг^,-?;;; этиологическую роль энтеропатогенных E.coli,.P.vulcaars, К.рпеимоша, З.аия eus в происхождении Диареи телят.

Изучение биологической активности производственных штаммов лактобактерий

Антагонистическая активность лактобактерий была изучена в отношении 22 штаммов бактерий, в том числе, энтеропатогенных эшерихий, сальмонелл, протея, цитробактер, клебсиелл, стафилококков. При этом, II штаммов бактерий обладали адгезивными свойствами.

Результаты исследований показали, что в присутствии лактобактерий полностью утрачивали ростовую активность все изучаемые штаммы сальмонелл, цитробактер, клебсиелл, протея, стафилококков, непатогенных эшерихий. Энтетюпатогенкые эшерихии полностью утрачивали ростовую активность при концентрации лактобактерий I млрд. микробных клеток. При концентрации лактобактерий 500 идн. кл/ил,

количество жизнеспособных энтеропатогенных вшерихий составляло 300 в I мл (в контроле - 10^ кл/ыл).

Все исследуемые культуры после воздействия на них лактобак-терий, были проверены на наличие адгезивных свойств в реакции ДМРГА и с помощью сканирующей электронной микроскопии.

Установлено, что адгезивные свойства, исследуемых культур после воздействия лактобактерина утрачиваются и бактерии теряют поверхностный полисахаридный слой.

Изучение антагонизма между лактобактерюши,

протеем и кишечной палочкой на морских свинках - гнотобионтах

Была установлена хорошо выраженная колонизирующая способность лактобактерий в организме гнотсбионтов. Через 24 часа после введения, количество лактобактерий в кишечнике животных удвоилось и достигло уровня 2,0.10** кл/г. В присутствии лактобактерий интенсивного размножения энтеропатогенных эшерихий к протея не происходило, не наблюдалось расстройства пищеварения и ухудшения общего состояния организма. На 5 и 10 дни после введения энтаробактерий наблждаалось резкое снижение их количества до И)'; кл/г, соответственно.

По сообщенаж .ряда авторов (Интизаров М.М., 1974, Чахава О-В., 19У2 и др), продолжительность жизни у интактных бвзмикробных аорских с с/л о к составляет 11-14 дкей, причем, на протяжении жизнк у таких ?.изотнш: наблюдается ярко выраженная капрофагия.

В нашзм 0кспер:с:знтв продолжительность кизил гнотобиотичас-етос морских свинок возросла в 3 раза, при этом капрофапш не наб-лодалось.

Фармакодиназшса лактобактерина при экспериментальных диареях новорожденных телят

Результаты 5:зуч£аня фаршксдинамики лактобактерина показали, что лактобактерии, Бьеденнь© pez os в организм новорожденных телят равномерно распределялись по вгеа отделам пищеварительного тракта и на 3 день жизни выделялись в количестве 2,0.10 кл/г. После заражения телят ассоциацией бактерий (энтеропатогенная E.cols P.MjBaBiIis, К.рпеимота, С.гкеипш, auieus) набледаяось некоторое сниконао количества локтобактерий (до ICr кл/г) в тонком отделе ¡{какчннксЦ однако, клиннчесзск диарея у телят не проявилась. Из кишечного содерииыого ввделялк эшарихии, клебсиеллы, цитробак-тер, коториу утрачивала адгезивные и фоксигенкые свойства. Харак-

терно, что ни из одного отдела желудочно-кишечного тракта телят этой группы не было вццелено энтеропатогенных эшерихий, протея а стафилококка.

При изучении микрофлоры кишечника у телят получавших лакто-бактерин в сочетании с иммуномодуляторами Т- и В-активином, а затем экспериментально зараженных ассоциацией энтеропатогенных бактерий, из всех отделов пищеварительного тракта вццеляли лактобак-терии (10® кл/г), а из кишечного содеркимого - эшерихии, не обладавшие адгезивными свойствами и непатогенные для белых мышей. При вскрытии животных этой группы находили увеличение брыжеечных лимфатических узлов, чего в контрольных группах и в группе, получавшей только лактобактерии, не наблюдали.

Полученные данные позволяют сделать вывод, что применение лактобактерина в комплексе с иммуномодуляторами приводит не только к элиминации патогенных бактерий, но также активизирует иммунный ответ организма на заражение и стимулирует развитие лимфоедной ткани.

Исследование в сканирующем электронном микроскопе колоний энтеропатогенных бактерий и роли лактобактериЯ з процессе антагонизма

В результате исследований по изучению колоний энтеропатогенных бактерий, обладающих адгезивными свойствами, было установлено, что на поверхности колоний протея, эшерихий, клебсиелд н цнтробактер имеются массивные покровы в виде гладких полусферических образований, под которыми отдельные клетки не дифференцируются. Были обнаружены элементы поверхностных образований, производные покрова, в виде нитей и трубочек. В колониях стафилококка были четко видны шаровидные клетки, однако хорошо прослеживалась их ассоциация. Массивных покровов, подобных энтеробактериям, у стафилококков не выявлено.

Исследования угнетения лактобактериями роста протея, клебсиелд, стафилококка, эшерихий показали изменения в поверхностных структурах клеток, свойственные Л-трансформации: отсутствие.покровов, деформация клеток за счет нарушения структуры клеточной стенки, образование сферопластов, почкующихся элементарных телец, превращение бактерий з мелкие извилистые палочковидные клетки-ре вертанты.

Процесс Л-трансформации пгп определенных условиях при-

водить к реверсии и восстановлению клеток в исходную патогенную форму, что влечет за собой повторные вспышки заболеваний и тем самым способствует переходу острой формы болезни в хроническую (Павлова И.Б., 1990).

В этой связи актуальным является применение, лактобактерина одновременно с иммуномодуляторами, что с одной стороны будет способствовать угнетению размножения бактерий, обладающих адгезивными и токсигенными свойствами, выведению их из организма транзитом, а с другой стороны - повышению макрофагальной реакции, предотвращению перехода энтеропатогенных бактерий в реверсивные формы клеток и выработке стабильного иммунитета.

Динамика бактериального кишечного пейзажа у новорожденных телят при использовании лактобактерина, Т-активина, В-активина

При сравнительном изучении количественного и качественного состава кишечной микрофлоры у телят, получавших биопрепараты в различном сочетании (сульфаниламидные, фаги, сыворотки; антибиотики; лактобактерии; лактобактерин и антибиотики; лактобактерин и Т-актквин; лактобактерин в сочетании с Т- и В-активином), наилучшие результаты получены в группе, где применяли лактобактерин, I-и В-активин. На фоне высокого уровня содержания лактобактерий (до кл/г) и бифндобактерий (до 10^ кл/г) полностью исчезали из пищеварительного тракта телят такие бактерии как протей, клеб-сиелла, цитробактер, стафилококк. При этом, у выделенных ешэркхий адгезивных и токсигенных свойств на обнаруживали.

Профилактическая и терапевтическая эффективность лактобактерина в сочетании с иммуномодуляторами Т-акти-вином, В-активином в производственных условиях

Профилактическая эффективность лактобактерина, Т- и В-активина была изучена на 470 телятах, терапевтическая - на 114 телятах в различных областях страны.

Выявлена достаточно высокая профилактическая (73,4$) и терапевтическая (86,7%) эффективность предложенной схемы при диареях у90 телят с врожденной гипотрофией, обусловленной внутриутробной интоксикацией хлорорганическими соединениями (ДЦТ и его изомеры, ПДГ), нитратами и нитритами, которые поступали в организм коров с кормом. В контрольной группе телят-гипотрофиков заболеваемость диареей составила 10055, падеж - 40%.

Было установлено, что опытные и контрольные группы резко отличаются по характеру проявления волнового течения болезни. Из 437 телят, получавших лактобактерин и иммуномодуляторы, диарея проявилась у 28 телят (6,4$). Болезнь протекала в легкой форме и была непродолжительной (в среднем, 2 дня). К 10 даю жизни телят отмечалось высокое содериание лакто- и бифидофлоры (на уровне 10 -10*® кл/г) на фоне исчезновения клебсиелл и цитробактер и низкого уровня протея (до 10 кл/г). Знтеропатогенных эшерихий не обнаруживали. У телят опытных груш наблюдалось повышение аппетита и лучшая усвояемость кориа, по сравнению с контролем.

Примененная нами схема профилактики и лечения диареи новорожденных телят исключала возможность возникновения рецидива болезни. Не было отмечено ни едкого случая повторного заболевания диареей з этой группе телят, хотя в контрольных группах повторные заболевания были нередки.

ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ БИОПРЕПАРАТОВ

Группа телят

Заболеваемость диареей

на 2-3 день жизни Рецидив болезни

на 6-8 день жизни на 10-15 день жизни

абс % абс. % абс. %

Профилактическая эффективность,

л*

Та

Опыт I 179 51 28,5 26 14,5 - - 71,5

Контроль I 46 46 100,0 24 52,2 15 32,6

Опыт 2 437 28 6,4 - - - - 93,6

Контроль 2 120 116 96,6 58 48,3 12 ■ 10,0

Примечание: Опыт I - группа телят, которые получали лактобактерин; Опыт 2 - телята получали лактобактерин, Т- и В-активин.

Профилактическая эффективность лактобактерина при диареях телят составила 71,5^, а при использовании лактобактерина в комплексе с иммуномодуляторами Т- и В-активином, возросла более чад на 2255 и составила' 93,6$, терапевтическая - 100%.

Наряду с лечебно-профилактической эффективностью биопрепаратов установлено, что примененная нами схема профилактики и лечения диареи телят способствовала повышению прироста массы тела на 30-5СЙ, по сравнению с контрольными животными.

Следует отметить, что у 6С$ телят контрольных групп на 8-15

дни ; лани наблюдались признаки респираторных болезней (слизисто-шойное истечение из носа, слезотечение, затрудненное дыхание, кашель). В опытной группе, где животным применяли только лактобактерии, клинические признаки респираторных болезней были отмечены у 20-50% телят. Характерно, что ни в одной из групп, где применяли лактобактерин в сочетании с иымуномодуляторами, не было выявлено телят с признаками респираторных болезней.

Проведенный анализ экономической эффективности применения рекомендуемых биопрепаратов показал высокий уровень окупаемости лечебно-профилактических мероприятий при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят. Экономическая эффективность от применения лактобактерина в комплексе с Т- и В-активином в расчете на I теленка составила 41,89 руб, а окупаемость I рубля затрат - 6,63 руб.

Фактическая окупаемость комплекса лечебно-профилактических мероприятий при диареях телят выше, чем приведенная, т,к. в расчетах не учитывалось значительное снижение трудоемкости предлагаемых мер, по сравнению с традиционно применяемыми в хозяйствах.

ВЫВОДЫ

1. Установлено изменение микроценоза кишечника при диареях новорожденных телят. От больных животных в 28,2% случаев выделяли E.coli, 25,4% - st&phylococcus,. 18,6% - Р»отеи», II , 3% — Cit— ковастен, 4,6? - KleBstella, 4,2? - энтеропатогенная iä.coli, 3,2%-Saluonella, 2,3% - Ептекососсив, 0,9% - PseuD0i:0nas, 0,2% - Harnift.

2. Доказана этиологическая роль протея, стафилококка, клеб-сиелл и цитробактер при диареях телят". В пользу этого свидетельствуют высокие концентрации исходных штаммов бактерий в фекалиях большое животных (I0 --I01 кл/г) и в патологическом материале, наличие адгезивных и токсигенных свойств у энтеробактерий, а также экспериментальное воспроизведение на телятах как моно- так и смешанных инфекций.

3. Выявлена связь между адгезивной активностью ввделенных культур протея и цитробактер и определенными серогруппами. Наиболее часто адгезивная активность выявлялась у штаммов протея серо-группы 0 30:Н I (75%) и цитробактер серогрупп 0 8 и 0 22 (82%).

4. Установлена высокая резистентность 1989 штаммов микроорганизмов, выделенных от животных к с обьзктов внешней среды к 16 антибиотикам. Лишь к гентамицину бактерии проявили слабую чувствительность.

5. Препарат "Лактобактеркн" обладает высокой антагонистической активностью по отношению к выделенным микроорганизмам. Под воздействие* лактобактерий энтеропатогенные эшерихии, протей, клебсиеллы, цитробактер, стафилококк теряют полисахаридный слой, адгезивные свойства и переходят в атипичные формы, свойственные Л-трансформации.

6. Профилактическая эффективность от использования лактобакте-рина при диареях телят составила 71,5%. Совместное применение лакто-бактерина, Т-активина, В-активина при диареях телят показало высокую профилактическую (93,6%) и терапевтическую эффективность.

7. Экономический эффект от проведения комплекса лечебно-профилактических мероприятий при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят с использованием лактобактерина, Т- и В-активина в расчете на I теленка составил 48,89 руб, окупаемость I рубля затрат -6,63 руб.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. По материалам диссертации подготовлены практические рекомендации "Профилактика и лечение желудочно-кишечных и респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота биопрепаратами", которые утверждены Главком ветеринарии Киргизской ССР 20 декабря 1989 года.

2. Составлено наставление по применению лактобактерина для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней молодняка с.-х. животных, утвержденное ГУВ Госагропрома СССР в марте 1989 года.

3. На основе полученных результатов разработана и внедрена схема по бактериальной диагностике желудочно-кишечных болезней новорожденных телят в республиканских ветеринарных лабораториях Киргизии и Казахстана.

4. Внедрено в производство рационализаторское предложение "Способ профилактики и лечения диареи телят" {* 439-11/2582-7-90).

5. Внедрено в производство рационализаторское предложение "Способ профилактики диарей телят-гипотрофиков" (* 439-11/2603-9-90).

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

I. Ветеринарным лабораториям при бактериологических исследованиях материала от больных диареей или павших телят рекомендуется, наряду с энтеропатогенными эшерихиями и сальмонеллами, учитывать этиологическое значение таких микроорганизмов как цитробактер, клебсиелла, протеГ,'стафилококк.

2. В связи с высокой резистентностью условно-патогенной микрофлоры, выделяемой от животных и с объектов внешней среды, к широко применяемым в животноводстве антибиотикам, считать целесообразным исключить их из практики использования для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней новорожденных телят.

3. В связи с высокой антагонистической активностью лактобак-терий по отношению к энтеропатогенным микроорганизмам, эффективностью и безвредностью препарата "Лактобактерин", рекомендовать его широкое применение для профилактики*и лечения острых кишечных инфекций новорожденных телят.

4. Учитывая, что применение при диареях телят лактобактерина в сочетании с Т-активином и В-активином позволяет повысить профилактическую эффективность более чем на 22%, рекомендовать его совместное применение с названными иммуномодуляторами.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Биологические препараты для профилактики диарей телят, вызванных условно-патогенными микроорганизмами. Л.Я.Ставцева, Т.Н.Грязнева, Л.С.Блажева, З.Ы.Бедоева //Современные аспекты профилактики инфекционных болезней молодняка: Межвузовский сб.науч. тр. /Кишиневский с.-х. ин-т им. М.В.Фрунзе.- 1989,- С. 27.

2. Воронин Е.С., Ставцева Л.Я., Грязнева Т.Н. Способ профилактики и лечения диарей новорожденных телят //Ветеринария.- 1990.» 3.- С. 35.

3. Грязнева Т.Н. Изучение антагонизма между лактобактериями, протеид и кишечной палочкой на морских свинках-гнотобионтах //Ыоск.вет.акад. им.К.И.Скрябина.- Деп. в ВШИТЭИагропроы.- № 523. ВС-89 /Опубл. в серии "Ветеринария".- 1990.- К- 2.- С. 6.

■4. Профилактика и лечение диарей телят с использованием неспецифических препаратов и бактериофагов/Е.С.Воронин, Л.Я.Ставцева, Д.А.Девришов, В.П.Шишков, З.М.Бедоева, Т.Н.Грязнева, Ф.Ю.Кама-лутдинов //Доклада ВАСХНИЛ.- 1990.- № II.- С. 47.

Москва, Звенигородское ш. ,5,ВНИИВСГЭ, зак. тиражЮОэкз.