Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Профилактическая и иммуномодулирующая роль споробактерина в схемах специфической в акцинопрофилактики сальмонеллеза у телят

На правах рукописи

Овчинников Александр Константинович

ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ И ИММУНОМОДУЛИРУЮ ЩАЯ РОЛЬ СПОРОВ АКТ ЕРИНА В СХЕМАХ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА У ТЕЛЯТ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа-2004

Работа вы полнена в каф едрах эпиз оотологии и параз итологии, ф из иологии ипатофизиологииФГОУ ВПО «Оренбургскийгосударственныйаграрныйуни-верситет», в Октябрьской межрайонной ветеринарной лаборатории

Научные руководители: заслуженный ветеринарный врач РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор Жданов Петр Иванович I

заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Мешков Виктор Михайлович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Андреева Альфия Васильевна

кандидат биологических наук Хазипов Рустем Барисович

Ведущая организация -ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита состоится 3 декабря 2004 на заседании диссертационного совета Д. 220.003.03. при ФГОУ ВПО «Башкирскийгосударственныйаграрныйуни-верситет» (450001. г. Уфа, ул. 50 лет Октября, 34)

С диссертацией м ожно оз наком иться в библиотеке ФГОУ В ПО «Башкирский государственный аграрный университет»

Автореферат разослан 3 ноября 2004 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

Маннапова Рамзия Тимергалеевна

TföT

ftí

I ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 .Актуальность темы. Сальмонеллез, поражая преимущественно телят 1030-дневного возраста, наносит значительный экономический ущерб хозяйствам (Архангельский И.И., Баданин Н.В., 1960; Ахмедов A.M., 1971; Маннапова Р.Т., 1996). Сальмонеллезный процесс, как сообщают В.П. Урбан и соавт. (1996), может протекать спорадически или с большим охватом поголовья, сопровождаясь высокой летальностью.

В системе противосальмонеллезных мероприятий основной упор делается на вакцинопрофилактику болезни (Корсакова E.H., 2001). При этом если телят получают от неиммунизированных коров, вакцинацию их проводят в 10-дневном возрасте, с последующей ревакцинацией через 10 дней. Телят, получивших коло-стральный иммунитет, прививают вакциной против паратифа (сальмонеллеза) в 20-дневном возрасте. Несмотря на такую тактику, сальмонеллез у телят имеет широкое распространение в хозяйствах Тюльганского и Октябрьского районов Оренбургской области (Данные отчетности РУВ за период 1990-2000 гг.).

В последние годы при лечении животных с преимущественным поражением пищеварительной системы, в том числе и инфекционной этиологии, используются пробиотики (Жданов П.И., 1994; Тараканов Б.В., 2000;Малик Н.И., Панин Л.П., 2001). Они содействуют восстановлению кишечного биоценоза, нарушенного болезнью.

Основываясь на положительном опыте применения споробактерина, изготовленного на основе В. subtilis, для профилактики болезней молодняка (Жданов П.И., 1994; Михин Г.Г., 1996; Старухин П.П. и соавт, 1996), мы поставили перед собой

1.2 цель - проверить эффективность применения споробактерина новорожденным телятам в системе специфической вакцинопрофилактики сальмонел-лезной инфекции в стационарно неблагополучных хозяйствах.

При реализации поставленной цели решались следующие задачи - испыты-валось антагонистическое действие споробактерина по отношению к S. enteritidis - основному возбудителю сальмонеллеза у телят Оренбургской области. Проверялось антагонистическое действие в двух вариантах: in vitro - методом совместного культивирования обоих видов микроорганизмов на МПБ и методом штриховых посевов на среде Гаузе № 2; in vivo - на мышах при создании экспериментальной модели сальмонеллеза.

- проверялась иммуномодулирующая роль споробактерина у кроликов при вакцинации их против сальмонеллеза;

- определялась продолжительность курсов назначения споробактерина новорожденным телятам при вакцинации их против сальмонеллеза в 10-, 20-, 30- и 40-дневном возрасте;

- изучались факторы неспецифической защиты организма месячных телят, а также динамика поствакцинальных антител при различных дозах и схемах предварительного назначения им споробактерина;

I РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ ' БИБЛИОТЕКА

С Петербург J 2ое^>к

- рассчитывалась экономическая эффективность применения споробакте-рина в системе специфической вакцинопрофилактики сальмонеллеза у телят.

1.3. Научная новизна проведенных исследований состоит в том, что, во-первых для получения прочного и продолжительного поствакцинального проти-восальмонеллезного иммунитета предложено предварительное курсовое назначение споробактерина вакцинируемым телятам.

Во-вторых, научно обосновано проведение активной иммунизации телят против сальмонеллеза в 20-30-дневном возрасте, при условии ежедневного приема ими с молозивом (молоком) споробактерина.

В-третьих, созданы предпосылки для управления сальмонеллезным процессом в хозяйствах, стационарно неблагополучных по этой инфекции.

1.4. Теоретическая и практическая значимость работы. Учение об инфекционном и эпизоотическом сальмонеллезном процессах пополнилось новыми данными, которые должны учитываться специалистами соответствующего профиля при разработке рекомендаций по специфической профилактике данной болезни; при подготовке и переподготовке специалистов ветеринарной медицины; при написании монографической литературы.

Многолетний опыт применения споробактерина в хозяйствах, разводящих крупный рогатый скот симментальской и красной степной пород убедительно доказал, что это позволяет повысить устойчивость организма к болезням вообще и к сальмонеллезу, в частности, то есть воздействовать на третье звено эпизоотического процесса, разрывая эпизоотическую цепь.

1.5. Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на' Международном симпозиуме «Социально-экономические, политические и экологические проблемы в сельском хозяйстве России и стран СНГ: История и современность» (Оренбург, 2004); Российской научно-практической конференции, посвященной 50-летию освоения целинных земель, 15-17 сентября 2004 года, г. Оренбург (Оренбург, 2004); расширенном заседании кафедр эпизоотологии и паразитологии, физиологии и патофизиологии ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет» (2004)., научных конференциях факультета ветеринарной медицины и биотехнологии Оренбургского ГАУ (2001-2004).

1.6. Публикации результатов исследований. По результатам исследований вышло 4 научные работы, опубликованные в материалах научно-практических конференций, симпозиумов и трудах научных учреждений.

1.7. Основные научные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Споробактерин, изготовленный на основе В. subtilis шт. 534, обладает антагонистическим действием по отношению к S. enteritidis, что подтверждается экспериментами как in vitro, так и in vivo.

2. Споробактерин жидкий проявляет иммуномодулирующий эффект при вакцинации кроликов против сальмонеллеза.

3. При длительном (3-4-недельном) применении новорожденным телятам и телятам молочного периода споробактерин повышает устойчивость их организма

к болезням, и позволяет получить более напряженный поствакцинальный иммунитет, т.е. воздействует на третье звено эпизоотической цепи.

4. При использовании споробактерина в системе специфической вакцино-профилактики сальмонеллеза телят на каждый вложенный рубль можно получить от 5 до 14 рублей дохода.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, заключение, выводы, предложения производству, список литературы, который содержит 270 наименований, в т.ч. 78 иностранных авторов. Работа изложена на 130 страницах компьютерного набора, иллюстрирована 10 таблицами, 25 рисунками.

III. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материал и методы исследования

Работа проводилась в период с 1999 по 2004 годы в кафедрах эпизоотологии и паразитологии, физиологии и патофизиологии ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет», в Октябрьской межрайонной ветеринарной лаборатории, а также в трех хозяйствах Тюльганского и Октябрьского районов Оренбургской области. Общая схема экспериментов приводится в таблице 1.

Из нее следует, что работа проходила в три этапа. На первом из них in vitro и in vivo устанавливалась антагонистическая активность В. subtilis шт. 534 на основе которой готовился споробактерин (10-млрд. взвесь в 1-7% растворе NaCl), по отношению к S. enteritidis, чаще всего вызывающей сальмонеллез у телят. При этом применяли метод совместного культивирования и метод штриховых посевов на среде Гаузе № 2 (Биргер М.О. и соавт., 1982; Сидоров М.А. и соавт., 1995). Антагонистическое действие споробактерина in vivo проверяли на мышах с живой массой 16,0+1,00 граммов. Десятидневный курс назначения споробактерина начинали в день заражения, через одни и двое суток после заражения летальной дозой сальмонелл. За подопытными животными вели ежедневное клиническое наблюдение. В случае заболевания мышей, учитывали время появления симптомов болезни, продолжительность переболевания, сроки выздоровления больных, а если они погибали, - то результаты патологоанатомического вскрытия. Для объективности исследования больных и наиболее характерные изменения в трупах заснимали на фотопленку.

Второй этап исследований был посвящен изучению иммуномодулирующей роли споробактерина при вакцинации кроликов против сальмонеллеза. С этой целью десяти кроликам, массой тела 2000,0+20,00 граммов, споробактерин вводили per os перед вакцинацией в течение 20 дней подряд и еще 10 дней после нее (до ревакцинации), т.е общий курс назначения им составлял 30 дней (первая опытная группа) Кроликам-аналогам второй группы испытуемый препарат применялся в течение десяти суток до и после вакцинации (курс - 20 дней).

1. Схема опытов

№ Задача исследова- ) Место проведе- Объект ис- Метод исследования Кол-во проб, Варианты назначения Сроки ис- Оценоч-

№ ния 1 ния следования животных споробактерина жи- следо- ные кри-

п/п вотным вания терии

I Определение Оренбургский культуры бактериологичес кий

антагонистический ГАУ, ' микроорга-

активности В sub- Октябрьская низмов

tjlis urr 534 ветлаборатория

и S ententidis

совместное

1 in \ uro ......//...... к\льтивирование 12 Одновременно с 12,18,20,24, Кол-во

АТСС 25 923 48,72,96 колоний

штаммом S enteriti- час

dis

штриховых 29 После l-5-суточного 18,24,48, 60 Зона за-

посевов подращивания В sub- часов держки

tilis на среде роста

Гаузе № 2

2 m vivo _/,------ —/,.— биологический 40, вт ч 10 I в момент зараже- ежедневно Заболе-

мыши контрольных ния в течение ваемость,

2 через сутки 10 суток тяжесть

1 двое суток после болезни,

заражения, 10 дней летально-

подряд сть

1 за 20 дней до вак- Фон через Клинн-

Ii Изучение -----Н------ вакцина про- эпизоотологии ее кий. 40, вт ч 10 цинации и 10 суток 10,30,60,90, ч ее-кий

иммуномодулирую- тив серологический (РА) контрольных после нее 120,150,180 статус.

щей роли cnopo- паратифа те- 2 за 10 дней до и по- ,и 210 су- титр ан-

бактерина при вак- лят, сле вакцинации ток после тител

цинации кролики 3 в день вакцинации вакцинации

и 10 суток после нее

CT»

№

№ Задача Место проведе- Объект Метод исследования Кол-во Варианты назначения Сроки ис- Оценоч-

п/п исследования ния исследова- животных споробактерина жи- следования ные кри-

ния вотным терии

III Применение спо- ООО «Димитро- Телята сим- Клинический, эпизо- 164, в тч 52 5 мл 2 раза в сутки с рождения клинико-

робактерина в во» Тюдьганского ментальской отологический, гема- контрольных 1) 10 дней подряд до 5-и ме- гемато-

системе специфи- района, март породы, вак- тологический, биохи- 2) 20 дней подряд сяцев логиче-

ческой вакцино- 1999-сентябрь цина против мический, фагоцитоз, 3) 30 дней подряд скин ста-

профилактике 2000 г паратифа те- БАС, ЛАС, бета- В месячном тус, фак-

сальмонеллеза те- лят литическ, компле- возрасте торы ес-

лят ментарная тествен-

ной рези-

стентно-

Колхоз им Чка- Телята крас- сти

лова Тюльганс ко- ной степной серологический (РА) 152, в т ч 44 3 мл 3 раза в сутки* Фон через

го района, фев- породы, вак- ----//- контрольных а) 10 суток 10,30,60,90 Титр ан-

ральчжтябрь 2001 цина против б) 20 суток сток тител

г паратифа те- в) 30 суток ---и----

лят --//_.

ЗАО «Нива» Окя- 40, в т ч 13 3 мл 3 раза в сутки

тябрьского рай- контрольных а) 20 суток

она, февраль - б) 30 суток

нюнь 2004 г.

Примечание вакцинация всех подопытных телят, принадлежащих ООО «Димитрово» и колхозу им Чкалова, проводилась в четыре срока - 10-, 20-, 30* и

40-дневном возрасте На каждый срок ставилась самостоятельная серия В ЗАО «Нива» поставлено две серии с испытанием вакцинации в 20- и 30-дневном

возрасте телят

Животным третьейгруппы споробактерин назначался в течение десяти суток после вакцинации, т.е. между вакцинацией и ревакцинацией. Особи контрольной группы препарат не получали, их вакцинировали, а через десять суток-ревакци-нировали. Кроликам всех подопытных групп прим еняливакцину против паратифа телят. За ним и вели ежедневное клиническое наблюдение в течение сем и месяцев. У них определяли титр противосальм онеллезных антител принятым в серологической практике методом (Антонов Б.И. исоавт., 1986).Исследования проводили перед вакцинацией, а потом через 10,30,60,90,120,150,180 и 210 суток после нее.

Третий этап экспериментов был поставлен в натурных условиях производства с отработкой доз и курсов назначения споробактерина телятам »которые в дальнейшем подлеж али вакцинации против сальмонеллез а. Причем изучались разные сроки проведения вакцинации-в 10-, 20-, 30-и 40-дневном возрасте телят симментальской и красной степной пород. Первым из них споробактерин на-з начался 2 раз а в сутки по 5 м л на прием, а вторы м - 3 раз а по Змл.Ч то же касается методологических подходов к продолжительности курсов назначения споробактерина, пути введения препарата, то ониво всех сериях были одинаковы ми. А им енно: препарат начинали прим енять с рождения теленка и в течение последующих 10 (первая опытная группа), 20 (вторая опытная)и30 (третья опытная) суток его жизни, добавляя споробактерин к м олозиву (м олоку). Животные контрольной группы препарат не получали, но вакцинировались и ревакцинирова-лись против сальмонеллеза в те же сроки, что и особи опытных групп. Во всех четырех сериях опытов, у животных обеих пород в м есячном возрасте, обще приняты м и в г ем атолог ии м етодам и, определяли количество эритроцитов и лейкоцитов в единице объема крови, содержание гемоглобина,лейкограмму,а в сыворотке крови - общий белок (реф рактом етрически)и гам м англобулиновую ф рак-цию -турбидим етрически(по Кондрахину И.П.). К ром е того, изучались гум оральные факторы неспецифической защиты - бактерицидная, лизоцимная,бета-литическая активности (по Бухарину О.В. и соавт.), ком плем ентарная активность (поВагнеру Г.Ф.). Фагоцитарную активность сегменгоядерныхнейтроф илов крови устанавливали по А.И. Иванову и Б.А. Чухловину.

Об им муногенности вакцины судили по из м енению титра противосальм о-неллезных антител, проводя фоновое исследование, а затем повторяя их через 10, 30, 60 и 90 дней после вакцинации.

Весь экспериментальный материал в разрезе групп и серий подвергнут биометрической обработке с использованием компьютерных программ. Достоверность различийсравниваемыхгруппустанавливалась по таблицам Стьюденга.

2.2. Результаты собственных исследований и их обсуждение

2.2.1. Определение антагонистической активности споробактерина in vitro методом совместного культивирования

После внесения в пробиркис МПБстандартизированныхвзвесейспоробак-терина и S. enteritidis и инкубирования в терм остате, оценку численности остав-

шихся в живых сальмонелл давали в течение 96 часов на 12, 18, 24, 48, 72 и 96 часу совместного культивирования. В результате анализа полученных при этом данных, установили, что в период с 12 по 18 час произошло сокращение численности сальмонелл в смешанной культуре на 1,02 млрд./мл, тогда как в монокультуре - на 0,32 млр/мл. Разница как между этими значениями, так и результатами по бикультуре на 12 часов, высокодостоверна (р<0,001). Поскольку в составе препарата В. subtilis преимущественно находится в споровой форме (отсюда и название его - споробактерин), требовалось время (более 12 часов) для вегетации. Именно в процессе прорастания спор в среду выделяются биологически активные вещества, которые и обеспечивают антагонистический эффект. Этот эффект проявляется во все временные сроки (24, 48, 72 и 96 часов), потому что количество живых сальмонелл снижалось с 15,55±0,039 млрд/мл на 18 часов до 0,86±0,027 млрд/мл на конец наблюдения. Между тем численность живых сальмонелл уменьшалась и в монокультуре, но менее стремительно, что вполне объяснимо с точки зрения закономерности роста микроорганизмов на несменяемых питательных средах. Таким образом, проведенные исследования убедили нас в существовании антагонизма между В. subtilis и S. enteritidis - основным возбудителем сальмонеллеза телят.

2.2.2. Определение антагонистической активности споробактерина in vitro методом штриховых посевов

Получив столь обнадеживающие результаты, мы решили выяснить, в какие сроки вегетации В. subtilis выделяет бактерицидные факторы, и в течение какого времени они сохраняются в среде культивирования. Используя метод штриховых посевов на среде Гаузе № 2, мы имели возможность ответить на эти вопросы. В частности, нами установлено, что наибольшая зона задержки роста сальмонелл -11,5±0,18 мм, сформировалась в чашках, где предварительное подращивание В. subtilis велось в течение 48 часов. Несколько меньше - 9,5±0,056 мм, этот результат оказался в пробах после суточного подращивания. Третий результат по рассматриваемому параметру - 4,99+0,075 мм - при 60-часовом подращивании В. subtilis. На основании этих данных считаем, что первые порции антагонистических факторов поступают в среду культивирования В. subtilis к 18 часу, в дальнейшем вплоть до 48 часов идет увеличение их количества, а к 60 часу - резкое снижение. Отсюда, для получения специфического действия споробактерина, животным его надо назначать ежедневно или, в крайнем случае, один раз в двое суток.

2.2.3 Определение антагонистической активности споробактерина in

vivo

Работу проводили на мышах, заражая их летальной дозой (LD,oo) S. enteritidis шт. АТСС 25923. В качестве протектора использовали курсовое назначение споробактерина. В ходе анализа полученных материалов, мы установили, что в первой опытной группе, представителям которой споробактерин начали вводить

в день экспериментального заражения сальмонеллами, больных не было вообще, то есть споробактерин здесь обеспечил 100% профилактический эффект. Во второй опытной группе, где курс назначения споробактерина был начат спустя одни сутки после инфицирования животных сальмонеллами, заболело и выздоровело двое мышей. Продолжительность болезни здесь составила 9,6±0,640 против 108,0±0,400 часа в контроле. Заболеваемость во второй группе равнялась 20%, что существенно (р<0,001) меньше контроля, профилактическая эффективность -80%, а терапевтическая - 100%. Иная ситуация сложилась в третьей группе, в которой споробактерин стали применять мышам через двое суток после заражения. Здесь заболели все 10 мышей, но тяжесть болезни у них была разной. Двое мышей выздоровели в течение 2-3 суток, трое - 4 суток, а пятеро - 5 суток. Средняя продолжительность болезни - 100,8 часа. Следовательно, споробактерин в этой группе проявил 100% лечебную эффективность. В контрольной группе также заболели все 10 животных. Болезнь у них проявлялась токсикозом и острым течением, на 4-5-е сутки заболевшие погибали. Итак, в данной группе отмечена 100% заболеваемость и такая же летальность.

Резюмируя по этому этапу исследования, можно сказать, что споробактерин, будучи своевременно назначенным инфицированным сальмонеллами животным, способен упредить клиническое проявление сальмонеллезного процесса. В тех же случаях, когда препарат назначался на стадии инкубационного или продромального развития сальмонеллезного процесса, он ослаблял клиническое проявление сальмонеллеза и в конечном счете содействовал выздоровлению заболевших. Мы разделяем точку зрения В.И. Никитенко (1990), который считает, что В. subtilis шт. 534 в организме животных и человека продуцирует антибиотические вещества с широким спектром действия, а также протеолитические ферменты. Последние могли вызвать разрушение О-антигена, который обеспечивает весь симптомокомплекс при сальмонеллезе (Ахмедов A.M., 1971; Bergey's, 1974).

2.3 Изучение иммуномодулирующей роли споробактерина при вакцинации

Основываясь на положительных результатах своих исследований по применению споробактерина при экспериментальной сальмонеллезной инфекции у мышей, мы посчитали, что споробактерин может проявить иммуномодулирующе действие и при вакцинации животных против сальмонеллеза. Для проверки этой гипотезы поставили эксперимент на кроликах, а потом и телятах. Анализ полученных при этом результатов у кроликов показал, что более активно синтез антител шел у особей первой опытной группы, которых вакцинировали на фоне 30-суточного назначения споробактерина.

Примечательно, что у них был не только высокий титр (1:400), но и сохранялся он на этом уровне 4 месяца. Между тем у кроликов, получавших споробактерин в течение 20 дней, высокий титр (1:400) антител обнаруживался на протяжении только трех месяцев. У представителей третьей и четвертой контрольных групп иммуногенез шел почти однотипно по интенсивности (максимум составил 1:200), но в опытной группе титр антител на уровне 1:100 продержался на один

месяц больше. Эти результаты созвучны тем, которые в свое время получил В.И. Никитенко (1990) и объяснил это явлением транслокации бацилл - проникновением из желудочно-кишечного тракта в кровь и лимфу бактерий, вследствие чего активизируются защитные реакции макроорганизма в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры. В.В. Подберезным, Н.И. Полянцевым (1994) было установлено, что под действием пробиотика наблюдается гиперплазия ■> лимфоидной ткани с увеличением численности макрофагов, а также плазматиче-

ских клеток. Последние, как известно, преобразуют гамма-глобулины сыворотки * крови в иммунные глобулины (антитела).

Итак, на лабораторных животных было убедительно показано, что 30-20-суточное применение споробактерина перед вакцинацией против сальмонеллеза способствует формированию довольно продолжительного (более семи месяцев) и напряженного поствакцинального иммунитета. Теперь предстояло проверить целесообразность подобного подхода к вакцинации в стационарно неблагополучных по сальмонеллезу телят хозяйствах.

2.4. Применение споробактерина в системе специфической вакцинопрофи-лактики сальмонеллеза телят

2.4.1. Результаты исследований в ООО «Димитрове» Тюльганского района

Анализ гематологических, биохимических параметров, а также клеточных и гуморальных факторов неспецифической защиты организма, убедил нас в том, что в одноименных группах, но в разные серии, получены однотипные результаты, поэтому мы их объединили и рассматриваем в консолидированном виде для соответствующих групп. В таблице 2 представлены эти данные.

2. Гематологические показатели у подопытных телят симментальской породы в месячном возрасте_

Гематологический показатель Исследуемая группа телят

1-я опытная 2-я опытная 3-я опытная 4-я контрольная

X ± Бх X ± Sx X ± Бх X ± Sx

Эритроциты, Т/л 7,48 0,093 7,73 0,056 7,90 0,069 7,04 0,040

Лейкоциты, Г/л 11,03 0,011 10,56 0,026 9,43 0,020 12,07 0,014

Гемоглобин, г/л 109,87 0,602 111,88 0,487 116,55 0,285 104,73 0,110

Нейтро-филы палочкоядерные,% 4,45 0,009 4,54 0,010 4,30 0,026 5,48 0,018

сегментоядерные,% 20,12 0,027 19,82 0,035 20,47 0,019 23,75 0,038

Лимфоциты, % 74,49 0,069 74,50 0,038 74,05 0,035 66,78 0,053

Из данных табл. 2, следует, что показатели красной крови у телят опытных групп были существенно лучше, чем у животных контрольной группы. Причем чем больше по времени применялся им споробактерин, тем выше рассматриваемые показатели. Отсюда есть существенные различия и внутри опытных групп -между первой и второй, первой и третьей, второй и третьей. Считаем, что такой эффект обусловлен действием продуктов жизнедеятельности В. виЫШв на эрит-роидный росток миелопоэза. Отчего лучше идет образование дефинитивных форм эритроцитов.

Изменения количества лейкоцитов шли в прямо противоположном направлении. В частности, численность лейкоцитов в единице объема крови была наивысшей у контрольных животных, а существенно меньшей, но оптимальной - в опытных группах. У телят третьей группы лейкоцитов было меньше, чем у особей первой и второй, а во второй - чем у животных первой группы. Менялся и видовой состав лейкоцитов. Так, под действием споробактерина больше стало лимфоцитов (р<0,001) и меньше - палочкоядерных и сегментоядерных нейтро-филов, чем в контроле. По всей видимости, продукты, выделяемые В. эиЫШз, влияют и на клетки-предшественники лимфоцитопоэза, оптимизируя их диффе-ренцировку.

Изучение белкового состава сыворотки крови и факторов неспецифической защиты организма подопытных телят обнаружило изменение и этих показателей (табл. 3).

3. Биохимические показатели и факторы неспецифической защиты орга-

Изучаемый пока- Исследуемая группа

затель 1-я опытная 2-я опытная 3-я опытная 4-я контрольная

X ± Ях X ± 5х X ± X ±

Общий белок сыворотки, г/л 71,08 0,111 72,32 0,444 75,79 0,621 67,54 0,221

Гамма-глобулин, г/л 10,11 0,025 10,62 0,018 13,07 0,051 8,02 0,013

Фагоцитарная активность ней-трофилов, % 42,27 0,002 43,15 0,003 43,78 0,001 39,46 0,001

БАС, % 40,72 0,117 42,73 0,050 43,19 0,045 32,49 0,158

ЛАС, % 6,55 0,012 5,85 0,033 5,68 0,012 7,99 0,025

Бета-литическая активность, % 8,95 0,017 10,15 0,021 10,84 0,024 7,27 0,031

Комплементарная активность, % 29,36 0,302 32,52 0,501 34,87 0,391 21,65 0,698

Так, уровень общего белка и гамма-глобулинов в сыворотке крови телят опытных групп достоверно возрос. Полагаем, что это обусловлено лучшим усвоением составных частей корма и образованием В. зиЬйНв незаменимых амино-

кислот, которые и используются белоксинтезирующим и структурам и печени, лимф оуз лов и др. в качестве пластического м атериала. На оптим изацию перевариваем ости корм а при прием е пробиотиков указ ы вали Н.Е Ездаков (1976); В .В. С м ирнов и с оавт. (1982); П .И. Ж данов, В. А. С е чин (1994).

Модулирующее действие споробактерина сказалось на клеточном и гуморальном звеньях неспецифической защиты организм а. Причем, если активность ф аг оцитов, бактерицидного ф актора, бета-лиз инов и систем ы ком ппем енга существе нно возросла при прием е споробактерина,то лизоцимная активность сыворотки крови-снизилась.Такойрасклад мы объясняем адекватностью реагирования организма телят опытных групп.

Известно, что острые кишечные болезни(ОКЗ)чаще возникают в раннем возрасте, а острые респираторные заболевания -в 15-20-дневном возрасте (Цев-ришов Д .А., 2000). Отсюда повышение бактерицидной активности сыворотки крови, сдерживающейразвитие грам негативной м икрофлоры (БухаринО.В. исо-авт., 1979), а также бета-лигической активности, обеспечивающей защиту от спо-рообразующих м икроорганиз м ов (Бухарин О.ВВ асильев Н.В., 1974), становится как нельзя кстати.

Представление о динамике специф ического гуморального ответа у подопытных животных в разрезе серий, м ожно получить признаком стве с диаграм -мами 1-4 Из данныхрисунка 1 следует, чтоу представителей всех группфонбыл отрицательным, а через 10 суток после вакцинации титр антител был невысоким (1:50). В 30-и 60-дневном возрасте он стал на порядок выше, а максимум в этой серии (1:200) пришелся на 90 день после вакцинации.

фон 10 30 во 90

Дни исследования после вакцинации

га опытная 1 О опытная 2 ■ опытная 3 □ контрольная

Рис. 1 .Динам ика титра противосальм онеллезных антителу подопытных телят в первой серии.

При вакцинации телят в 20-дневном возрасте им мунныйответ оказался более содержательными именно уже при исследовании через 10 суток после вакцинации у ос обей опытных групп титр антител составил 1:100, а затем -1:200. При двух последующих исследованиях во второй и третьей группах он равнялся 1:400, что существенно отличало его от аналогичного показателя в контроле и первой опытной группе.

фон 10 30 60 90

Дни исследования после вакцинации

| И опытная 1 О опытная 2 И опытная 3 О контрольная 4 |

Рис. 2. Динам ика титра антител у подопытных телят во второй серии.

Прифоновом исследовании в месячном возрасте (рис.3)телята контрольной группы реагировали положительно. У них шла реакция в титре 1:50. Это м о-жет быть связано соспонтанным инфицированием их, что трудно исключить в стационарно неблагополучных по сальм онеллезу хозяйствах. В дальнейшем, как у представигелейэтой,так иопытных групп, иммуногенез протекал, как ив предыдущей серии, с той лишь раз ницей, что в эту серию во второй итретьей опытных группах создавался более высокий уровень антител - они обнаруживались даже в разведении сыворотки 1:800.

фон 10 30 60 90

Дни исследования после вакцинации

[»опытная 1 □ опытная 2 Вопьггная 3 D контрольная 4 }

Рис. 3. Динам ика титра противосальм онеллезных антител у подопытных телят в третьей серии.

В четвертой серии (рис. 4)ситуация по контрольным животным висходном состоянии сложилась такойже, что и в третьей серии. Однако в течение ближайших двух м есяцев после вакцинации им м уногенез у них шел более активно, отчего уровень антител достиг самых высоких за все серииэксперименгов значений-1:400 (р<0,001). Из этого следует, что к 40-дневному возрасту телят симментальской породы, очевидно, наступает ф ункциональная з релость им мунной систем ы.

Дни исследования после вакцинации ■ опытная 1 □ опытная 2 ■ опытная 3 ОконтропьнаяТ1

Рис. 4. Динамика титра противосальмонеллезных антител у подопытных телят в четвертой серии.

Назначение споробактерина, как свидетельствуют данные по второй и третьей опытным группам, способствует более качественному становлению - начиная со второго исследования представители этих групп по уровню антител существенно превосходили своих сверстников из первой опытной и контрольной групп. Важно отметить, что при такой схеме вакцинации формируется не только напряженный, но и более продолжительный иммунитет.

Итак, на качество иммунного ответа у подопытных телят влиял возраст, в котором проводилась вакцинация (чем моложе, тем слабее - подобное наблюдение имел и Д.А. Девришов, 2000), и продолжительность курса назначения споробактерина (при 10-дневном курсе эффект слабее, при 20-30-дневном - лучше).

2.4.2. Результаты исследований в колхозе им. Чкалова Тюльганского района

В этом хозяйстве эксперимент был поставлен на телятах красной степной породы - второй по численности в Оренбургской области. Он также проводился в четыре серии, каждая из которых посвящена определенному сроку вакцинации (в 10-, 20-, 30- и 40-дневном возрасте). Учитывая меньшую массу тела телят этой породы при рождении, споробактерин назначали по 3 мл на прием, 3 раза в сутки.

Если в целом охарактеризовать результаты второго научно-производственного опыта, то они созвучны тем, которые были получены в первом. Породная принадлежность наложила некоторый отпечаток лишь на количественную сторону изучаемых параметров, не затрагивая закономерностей по сути явлений. Так, в этом эксперименте подтвердилось модулирующее действие споробактерина на красную и белую кровь, общий белок и гамма-глобулиновую фракцию, клеточные и гуморальные факторы неспецифической защиты, динамику противосальмонеллезных антител. А напряженность иммунитета зависела от возраста вакцинируемого животного и времени, в течение которого назначался перед этим споробактерин.

2.4.3. Результаты исследований в ЗАО «Нива» Октябрьского района

Эксперименты ставились на телятах красной степной породы в состоятельном в экономическом отношении хозяйстве. Необходимость их проведения диктовалась желанием проверить еще раз, насколько жизненны предлагаемые нами схемы применения споробактерина в системе специфической вакцинопрофилак-тики сальмонеллеза. Учитывая результаты двух экспериментов в хозяйствах Тюльганского района, здесь мы отказались от вакцинации животных в 10- и 40-дневном возрасте, а также от 10-дневного назначения споробактерина. В итоге эти эксперименты поставлены в две серии - 20- и 30-дневный возраст вакцинируемых телят, и на двух опытных и одной контрольной группах животных. Биометрическая обработка полученных при этом результатов и сравнительный анализ в разрезе хозяйств показали, что мы находимся на правильном пути. Отсюда в систему противосальмонеллезных мероприятий должны быть внесены коррективы в виде 20-30-суточного назначения споробактерина перед вакцинацией.

2.5. Экономическая эффективность применения споробактерина в системе специфической вакцинопрофилактики сальмонеллеза

Расчеты по экономической эффективности делались по результатам эксперимента в ООО «Димитрово» Тюльганского района. При этом пользовались формулами, предлагаемыми И.Н. Никитиным и В.Ф. Воскобойником (1999). Ввиду высокой заболеваемости (45 из 52 телят) и гибели 18 животных в контрольной группе, хозяйство понесло убытки в сумме 55456,2 рубля. В первой опытной группе заболело 8 телят, из-за снижения прироста массы тела хозяйство недополучило 84 рубля, предотвращенный ущерб здесь составил 11547, 67 рубля. На приобретение споробактерина затратили 1560 рублей. Отсюда экономический эффект равен 9987,7 руб., а экономическая эффективность - 6,4 рубля. Во второй и третьей опытных группах больных не было В связи с этим предотвращенный ущерб исчислялся соответственно в 27291,8 и 16292,5 рубля. На приобретение споробактерина хозяйство затратило 1800 и 2700 рублей соответственно. Экономический эффект по второй опытной группе составил 14,2, а по третьей - 5,03 рубля. Таким образом, с экономической точки зрения более предпочтительным оказалось 20-суточное назначение споробактерина, с вакцинацией в 20-дневном возрасте и ревакцинацией через 10 дней.

ГИ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние годы для профилактики болезней полифакторной этиологии все чаще используются пробиотики (Жданов П.И., 1994; Малик Н.И., Панин Л.П., 2001). Одним из них является споробактерин, изготовленный на основе В. эиМНя шт. 534 (Никитенко В.И., 1990). Препарат прошел хорошую лабораторную апробацию, но недостаточно используется в клинической практике. Благодаря работам П.И. Жданова (1994), П.П. Старухина и соавт. (1996), Г.Г. Михина (1996),

ПИ. Жданова и соавт. (1998), Л.Г. Войтенко и соавт. (2000), А. В Мазаева (2003) его используют в ветеринарной медицине для профилактики диспепсии телят, ОКЗ и ОРЗ молодняка, послеродовых эндометритов у коров, раневой инфекции. Вопрос о применении споробактерина в системе специфической вакци-нопрофилактики сальмонеллеза у телят оставался открытым. Для его решения и были предприняты настоящие исследования. Они включали: 1) изучение антагонистических свойств В subtilis в отношении S enteritidis - основного возбудителя сальмонеллеза телят (Савинкова Н.М., Мешков В М., 1992; Маннапова РТ, 1996). Используя специальные микробиологические методики, удалось доказать наличие антагонизма между В. subtilis и S. enteritidis, определить в какие сроки вегетации начинается выделение веществ с такими свойствами, и в течение какого времени они сохраняются в среде. Помимо этого, решен вопрос об антагонистических отношениях изучаемых микроорганизмов в организме животных на экспериментальной модели сальмонеллеза Показано, что одновременное с заражением назначение споробактерина предупреждает развитие сальмонеллезной инфекции Если курс назначения споробактерина начинается через сутки и двое после инфицирования, заболевание не исключается, но больные всегда излечиваются.

2) изучение иммуномодулирующей роли споробактерина при вакцинации против сальмонеллеза показало, что напряженность и продолжительность гуморального специфического иммунитета зависят от того, в течение какого срока назначается споробактерин.

Заключительная часть работы проводилась в натурных условиях неблагополучных по сальмонеллезу хозяйств на телятах двух самых представительных в Оренбуржье пород - симментальской и красной степной. Общая численность подопытных животных составила 356 голов. При этом отрабатывались разные дозы, кратность (в течение суток) и схемы применения споробактерина, а также апробировались различные сроки проведения вакцинации - в 10-, 20-, 30- и 40-дневном возрасте Было убедительно показано, что споробактерин проявляет модулирующее действие на клетки-предшественники лимфоцито- и миелопоэза, бе-локсинтезирующую функцию печени, работу структур, обеспечивающих гуморальную неспецифическую защиту организма, а также иммуногенез. В этом смысле наши данные согласуются с результатами, полученными П.И Ждановым (1994), Г.Г Михиным (1996), П.П. Старухиным, В М Мешковым, П.И Ждановым (1996), П.И Ждановым и соавт. (1998, 2000), A.B. Мазаевым (2003). Что касается сроков проведения вакцинации телят против сальмонеллеза, то она, по нашим данным биологического и экономического плана, должна проводиться в 20- и 30-дневном возрасте с ревакцинацией через 10 суток, на фоне ежедневного перо-рального назначения споробактерина в течение 3-4 недель. Эта часть наших результатов созвучна концепции Д.А. Девришова (2000).

IV ВЫВОДЫ

1. В subtilís шт. 534 в процессе своей жизнедеятельности выделяет факторы, которые подавляют развитие S. enteritidis как in vitro, так и in vivo.

2. Курсовое назначение споробактерина мышам, заражённым высокопатогенным штаммом сальмонелл, обеспечивает 80-100 % профилактический и 100% терапевтический эффект в зависимости от того, в какие сроки после инфицирования начинается курс.

3. Вакцинация кроликов против сапьмонеллёза (паратифа), проведённая на фоне предварительного назначения им споробактерина, приводит к формированию более прочного и продолжительного специфического иммунитета, чем в контроле.

4. Действие споробактерина на организм телят обеих пород, содержащихся в натурных условиях трёх хозяйствующих субъектов, было однотипным.

5. Назначение споробактерина новорождённым телятам в течение 20-30 суток подряд, в дозе 90-100 млрд. микробных тел в сутки, оказывает модулирующее влияние на кровь, её биохимический состав, клеточные и гуморальные факторы неспецифической защиты организма, а также на уровень поствакцинальных антител.

6. Отнесение сроков вакцинации интактных телят против сальмонеллёза на 30-40 день их жизни способствует выработке противосальмонеллёзных антител в более высоких титрах, чем при иммунизации в 10-дневном возрасте.

7. Применение споробактерина телятам экономически выгодно.

V ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

1. Для улучшения сохранности поголовья телят и повышения их продуктивности предлагаем с рождения и до 20-30-дневного возраста, не делая перерывов, добавлять к скармливаемому им молозиву (молоку) споробактерин жидкий по 3 мл на приём, 3 раза в сутки.

2. Профилактическую вакцинацию телят против сальмонеллёза рекомендуем проводить в 20-30-дневном возрасте, предваряя ей курсовое назначение споробактерина с рождения и в течение 20-30 суток. При этом если вакцинация проводится на 20-й день жизни теленка, через 10 суток введение вакцины нужно повторить, а на 30-й день - без повторения.

VI СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Жданов П.И., Овчинников А.К. Эффективность применения споробактерина при экспериментальном сальмонеллезе у мышей //Социально-экономические, политические и экологические проблемы в сельском хозяйстве России и стран СНГ: История и современность- Материалы международного симпозиума. - Ч. II. -Оренбург: Издат. центр ОГАУ, 2004. - С. 307-309.

2. М ешков В .МОвчинников А .К. С пециф ическая проф илактика сальм онеллеза утелят при назначении им споробактерина//Известия ОГАУ.-2004.-2.-С.149 -151.

3. Овчинников А .К. Последствия вакцинации телят против сальм онеллез а при назначении споробактерина по разным схемам //Научные ипрактические аспекты повышения производства сельскохозяйственнойпродукции.-Оренбург:ПМГ ВНИИМСа, 2004. - С. 103-105.

4. Овчинников А .К. Изучение антагонистических свойств В. БиЬйНв 534 против культуры сальмонелл //Известия ОГАУ. - 2004. - 2. - С. 148-149.

5. Овчинников А .К. Им м уном одулирующая роль споробактерина при вакцинации против сальм онеллеза //Проблем ы устойчивости биоресурсов:Теория ипрактика: Материалы Российской научно-практической конференции, посвященной 50-летию освоения целинных земель 15-17 сентября 2004 года, г. Оренбург.-Оренбург: Издат. центр ОГАУ, 2004. - (в печати).

Подписано в печать 28.10.04. Формат 60x84/16. Усл. печ. л. 1. Печать оперативная. Бумага офсетная. Гарнитура Times. Заказ № 906-3. Тираж 100 экз. Изготовлено ООО «Лань и К0»

РНБ Русский фонд

2007-4 4807

\

1.1 .Актуальность темы. Сальмонеллез, поражая преимущественно телят 10-30-дневного возраста, наносит значительный экономический ущерб хозяйствам (Архангельский И.И., Баданин Н.В., 1960; Ахмедов A.M., 1971; Маннапова Р.Т., 1996). Сальмонеллезный процесс, как сообщают В.П. Урбан и соавт. (1996), может протекать спорадически или с большим охватом поголовья, сопровождаясь высокой летальностью.

В системе противосальмонеллезных мероприятий основной упор делается на вакцинопрофилактику болезни (Корсакова E.H., 2001). При этом если телят получают от неиммунизированных коров, вакцинацию их проводят в 10-дневном возрасте, с последующей ревакцинацией через 10 дней. Телят, получивших колостральный иммунитет, прививают вакциной против паратифа (сальмонеллеза) в 20-дневном возрасте. Несмотря на такую тактику, сальмонеллез у телят имеет широкое распространение в хозяйствах Тюльган-ского и Октябрьского районов Оренбургской области (Данные отчетности РУВ за период 1990-2000 гг.).

В последние годы при лечении животных с преимущественным поражением пищеварительной системы, в том числе и инфекционной этиологии, используются пробиотики (Жданов П.И., 1994; Тараканов Б.В., 2000). Они содействуют восстановлению кишечного биоценоза, нарушенного болезнью.

Основываясь на положительном опыте применения споробактерина, изготовленого на основе В. subtilis, для профилактики болезней молодняка (Жданов П.И., 1994; Михин Г.Г., 1996; Старухин П.П., 1996; Романова О.В., Лютинский С.И., 2000), мы поставили перед собой:

1.2. цель - проверить эффективность применения споробактерина новорожденным телятам в системе вакцинопрофилактики сальмонеллезной инфекции в стационарно неблагополучных хозяйствах.

При реализации поставленной цели решались следующие задачи - ис-пытывалось антагонистическое действие споробактерина по отношению к S. enteritidis - основному возбудителю сальмонеллеза у телят Оренбургской области. Проверялось антагонистическое действие в двух вариантах: in vitro -методом совместного культивирования обоих видов микроорганизмов на MI ib и методом штриховых посевов на среде Гаузе № 2; in vivo - на мышах при создании экспериментальной модели сальмонеллеза;

- проверялась иммуномодулирующая роль споробактерина у кроликов при вакцинации их против сальмонеллеза;

- определялась продолжительность курсов назначения споробактерина новорожденным телятам при вакцинации их против сальмонеллеза в 10-, 20-, 30- и 40-дневном возрасте;

- изучались факторы неспецифической защиты организма месячных телят, а также динамика поствакцинальных антител при различных дозах и схемах предварительного назначения им споробактерина; рассчитывалась экономическая эффективность применения споробактерина в системе вакцинопрофилактики сальмонеллеза у телят.

1.3. Научная новизна проведенных исследований состоит в том, что, во-первых, для получения прочного и продолжительного поствакцинального противосальмонеллезного иммунитета предложено предварительное курсовое назначение споробактерина вакцинируемым телятам.

Во-вторых, научно обосновано проведение активной иммунизации телят против сальмонеллеза в 20-30-дневном возрасте, при условии ежедневного приема ими с молозивом (молоком) споробактерина.

В-третьих, созданы предпосылки для управления сальмонеллезным процессом в хозяйствах, стационарно неблагополучных по этой инфекции.

1.4. Теоретическая и практическая значимость работы. Учение об инфекционном и эпизоотическом сальмонеллезном процессах пополнилось новыми данными, которые должны учитываться специалистами соответствующего профиля при разработке рекомендаций по специфической профилактике данной болезни; при подготовке и переподготовке специалистов ветеринарной медицины; при написании монографической литературы.

Многолетний опыт применения споробактерина в хозяйствах, разводящих крупный рогатый скот симментальской и красной степной пород, убедительно доказал, что это позволяет повысить устойчивость организма к болезням вообще и к сальмонеллезу, в частности, то есть воздействовать на третье звено эпизоотического процесса, разрывая эпизоотическую цепь.

1.5. Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на: Международном симпозиуме «Социально-экономические, политические и экологические проблемы в сельском хозяйстве России и стран СНГ: история и современность» (Оренбург, 2004); Российской научно-практической конференции, посвященной 50-летию освоения целинных земель, 15-17 сентября 2004 года, г. Оренбург (Оренбург, 2004); расширенном заседании кафедр эпизоотологии и паразитологии, физиологии и патофизиологии ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет» (2004), научных конференциях факультета ветеринарной медицины и биотехнологии Оренбургского ГАУ (2001-2004).

1.6. Публикации результатов исследований. По результатам исследований вышло 5 научных работ, опубликованных в материалах научно-практических конференций, симпозиумов и трудах научных учреждений.

1.7. Основные научные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Споробактерин, изготовленный на основе В. subtilis шт. 534, обладает антагонистическим действием по отношению к S. enteritidis, что подтверждается экспериментами как in vitro, так и in vivo.

2. Споробактерин жидкий проявляет иммуномодулирующий эффект при вакцинации кроликов против сальмонеллеза.

3. При длительном (3-4-недельном) применении новорожденным телятам и телятам молочного периода споробактерин повышает устойчивость их организма к болезням, и позволяет получить более напряженный поствакцинальный иммунитет, т.е. воздействует на третье звено эпизоотической цепи.

4. При использовании споробактерина в системе вакцинопрофилактики сальмонеллеза телят на каждый вложенный рубль можно получить от 5 до 14 рублей дохода.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, заключение, выводы, предложения производству, список литературы, который содержит 270 наименований, в т.ч. 78 - иностранных авторов. Работа изложена на 130 страницах компьютерной верстки, иллюстрирована 10 таблицами, 25 рисунками.

V ВЫВОДЫ

1. В. subtilis шт. 534 в процессе своей жизнедеятельности выделяет факторы, которые подавляют развитие S. enteritidis как in vitro, так и in vivo.

2. Курсовое назначение споробактерина мышам, заражённым высокопатогенным штаммом сальмонелл, обеспечивает 80-100 % профилактический и 100% терапевтический эффект в зависимости от того, в какие сроки после инфицирования начинается курс.

3. Вакцинация кроликов против сальмонеллёза (паратифа), проведённая на фоне предварительного назначения им споробактерина, приводит к формированию более прочного и продолжительного специфического иммунитета, чем в контроле.

4. Действие споробактерина на организм телят обеих пород, содержащихся в условиях трёх хозяйствующих субъектов, было однотипным.

5. Назначение споробактерина новорождённым телятам в течение 20-30 суток подряд, в дозе 90-100 млрд. микробных тел в сутки, оказывает модулирующее влияние на кровь, её биохимический состав, клеточные и гуморальные факторы неспецифической защиты организма, а также на уровень поствакцинальных антител.

6. Отнесение сроков вакцинации интактных телят против сальмонеллёза на 30-40 день их жизни способствует выработке противосальмонеллёзных антител в более высоких титрах, чем при иммунизации в 10-дневном возрасте.

7. Применение споробактерина телятам экономически выгодно.

VI. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

1. Для улучшения сохранности поголовья телят и повышения их продуктивности предлагаем с рождения и до 20-30-дневного возраста, не делая перерывов, добавлять и к скармливаемому им молозиву (молоку) споробак-терин жидкий по 3 мл на приём, 3 раза в сутки.

2. Профилактическую вакцинацию телят против сальмонеллёза рекомендуем проводить в 20-3 0-дневном возрасте, предваряя ей курсовое назначение споробактерина с рождения и в течение 20-30 суток. При этом если вакцинация проводится на 20-й день жизни теленка, через 10 суток введение вакцины нужно повторить, а на 30-й день - без повторения.

IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Сальмонеллез у телят наблюдается довольно часто, нанося чувствительный урон хозяйствам, в том числе Тюльганского и Октябрьского районов Оренбургской области. В настоящее время в профилактике болезни основной упор делается на вакцинацию животных. Она проводится на 10-й день жизни теленка, если он получен от невакцинированной против сальмонеллеза коровы. В противном случае вакцину вводят на 20-й день жизни. В дальнейшем (через 10 дней) телята подлежат ревакцинации (Корсакова E.H., 2001). Несмотря на такую тактику, сальмонеллез продолжает оставаться проблемной болезнью. Чтобы внести свой посильный вклад в разрешение данной проблемы, мы и предприняли настоящее исследование.

Цель его - проверить эффективность применения споробактерина в системе специфической вакцинопрофилактики сальмонеллеза телят. Оно проводилось в течение 1999-2004 годов в лабораториях кафедр эпизоотологии, вирусологии и микробиологии, а также физиологии и патофизиологии ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет», Октябрьской межрайонной ветеринарной лаборатории, двух хозяйствах Тюльганского района, и одном - Октябрьского района.

Основываясь на данных литературы (Смирнов В.В. и др., Никитенко В.И., Жданов П.И., Федорова О.О.; Савина И.В. и соавт.), мы решили проверить антагонистические свойства В. subtilis шт. 534 по отношению к S. еп-teritidis, чаще всего вызывающей болезнь телят в вышеназванных районах Оренбургской области (Савинкова Н.М, Мешков В.М., 1992). Применяя метод совместного культивирования В. subtilis и S. enteritidis, обнаружили существенное сокращение численности сальмонелл в смешанной культуре. На рисунке 1 отчетливо видно, что в исходном состоянии сальмонеллы имеют свойственные для них морфологические параметры (длина, толщина, объем). После 18-часового контакта с В. subtilis, размеры уменьшаются. По всей видимости, факторы, выделяемые В. subtilis, воздействуют на мембрану бактериальной клетки, нарушая ее проницаемость. Вследствие чего клетка обезвоживается, а потом и гибнет. Мы не исключаем образование В. subtilis в этом случае антибиотических веществ пептидной природы, на что ранее указывали Б.Е. Айзенман (1973), Н.С. Егоров (1979), Малик Н.И., Панин Л.П., (2001). Так или иначе, совместное культивирование В. subtilis и S. enteritidis приводит к прогрессирующему уменьшению количества последних в среде.

При использовании метода штриховых посевов на среде Гаузе № 2 с разным по продолжительности временем предварительного подращивания В. subtilis, с последующим внесением испытуемого штамма S. enteritidis, нам удалось установить в какие сроки идет накопление неидентифицированных веществ. Первые порции их появляются к 18 часам вегетации В. subtilis, в дальнейшем продукция этих факторов нарастает, достигая максимума к 48-у часу, а спустя 12 часов отмечается снижение антисальмонеллезной активности. Это может свидетельствовать об ограниченном сроке специфического действия продуктов жизнедеятельности В. subtilis, или об образовании этих веществ в период ускоренной вегетации бацилл. На последнее обстоятельство указывалось S. Lee et al. (1975), Е. Katz et al. (1977). С учетом приведенных фактов при разработке схем применения споробактерина животным, необходимо рекомендовать ежедневное или не реже одного раза в 2 дня назначение препарата в течение длительного времени.

Определение антагонистической активности споробактерина in vivo проводилось в условиях лаборатории на беспородных белых мышах, массой 16,0 граммов. Мышей заражали летальной дозой S. enteritidis, но части из них (первая, вторая и третья группы) подкожно, в течение 10-и суток подряд вводили по 200 млн. спор В. subtilis. В группе, где введение споробактерина начинали в день заражения, не заболела ни одна из 10 мышей. Во второй, особям которой инъекции споробактерина производили через сутки после искусственного инфицирования сальмонеллами, заболело двое мышей, причем болезнь у них протекала легко, и в ближайшие два дня они выздоровели. Мыши третьей группы стали регулярно получать инъекции споробактерина на третьи сутки после заражения сальмонеллами. Все 10 животных заболели, но болезнь у них длилась от 2 до 5 суток и завершилась выздоровлением. Мыши контрольной группы заболели и пали все. У них отмечались признаки угнетения, токсикоза (обильное потение, неуверенная походка), а на вскрытии в печени обнаруживались некротические очаги. Таким образом, нами была объективно установлена летальная доза сальмонелл, для заражения. В условиях своевременной инъекции споробактерина зараженным животным был получен 80-100 % профилактический эффект (1-я и 2-я группы). Если введение препарата начиналось в продромальный или начале клинического периода сальмонеллезного процесса, то достигался 100 % лечебный результат (2-я и 3-я группы). Мы разделяем точку зрения В.И. Никитенко (1990), который считает, что В. БиМШБ штамма 534 в организме животных и человека продуцирует антибиотические вещества с широким спектром действия, а также протеолитические ферменты. Последние могли вызвать разрушение О-антигена, который обеспечивает весь симптомокомплекс при сальмонеллезе (Ахмедов А.М., 1971; Ве^еу'Б, 1974).

Следующий шаг в направлении выяснения протективной роли споробактерина при иммунизации против сальмонеллеза, был сделан в опытах на кроликах. Животным, имевшим живую массу тела в 2000, 0 граммов, объе-/ диненным в четыре группы, по 10 голов в каждой, ввели подкожно 1 мл вакцины против паратифа телят, по прошествии 10 суток осуществили ревакцинацию. Кроликов опытных групп вакцинировали на фоне 30-, 20- и 10- суточного перорального назначения споробактерина. За животными вели наблюдение в течение семи месяцев. За это время их 9 раз исследовали серологически на предмет содержания противосальмонеллезных антител. В ходе анализа полученных данных установили, что более активно синтез антител шел у кроликов первой опытной группы, которых вакцинировали на фоне 30-суточного назначения споробактерина. Примечательно, что у них был не только высокий титр (1:400), но и сохранялся он на этом уровне 4 месяца. Между тем у животных, получавших споробактерин в течение 20 дней подряд, высокий (1:400) титр антител обнаруживался на протяжении только трех месяцев. У представителей третьей опытной и четвертой контрольной групп иммуногенез шел почти однотипно по интенсивности (1:200), но в опытной группе титр антител поддерживался на уровне 1:100 на один месяц больше. Эти результаты созвучны тем, которые в свое время получил В.И. Никитенко (1990) и объяснил это явление транслокацией бацилл - проникновением из желудочно-кишечного тракта в кровь и лимфу бактерий, вследствие чего активизируются защитные реакции макроорганизма в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры (в нашем случае против вакцинного штамма сальмонелл).

Конечная цель наших исследований состояла в оптимизации сроков проведения вакцинации телят против сальмонеллеза. Предпосылкой для этого стали обнадеживающие результаты изучения антагонизма между В. sub-tilis штамма 534 и S. enteritidis шт. АТСС 25923 в лабораторных условиях как in vitro, так и in vivo. Исследования с любезного согласия руководства коллективных хозяйств и соответствующих районных управлений ветеринарии провели в стационарно неблагополучных по сальмонеллезу телят хозяйствах на скоте симментальской и красной степной пород. Начали с того, что проверили эффективность проведения вакцинации телят в сроки, рекомендуемые наставлением по применению вакцины, а именно, на 10-й день их жизни, с последующей ревакцинацией через 10 дней. Для этого в ООО «Димитрове» Тюльганского района в 1999 году в первой серии под опыт взяли 41 теленка, создав из их числа четыре группы: три опытные и одну контрольную. Телята первой опытной группы с рождения и до 10-го дня жизни включительно, дважды в сутки с молозивом (молоком) получали по 5 мл споробактерина, т.е. 100 млрд. микробных тел в сутки. Животные второй и третьей опытных групп также получали споробактерин с рождения в вышеназванных дозах и кратности, но назначение препарата им продолжали и после вакцинации еще 10 и 20 суток соответственно. О состоянии подопытных телят судили по результатам ежедневных клинических наблюдений, а также серологических исследований в РА перед вакцинацией, через 10, 30, 60 и 90 суток после нее. В месячном возрасте от подопытных телят отбирали пробы крови для производства гематологических и биохимических анализов, а так же определения факторов клеточной и гуморальной неспецифической защиты организма.

Во второй серии на поголовье в 40 животных, изучалась эффективность вакцинации в 20-дневном возрасте с ревакцинацией через 10 дней. Фоном же вакцинации в опытных группах служило назначение споробактерина с момента рождения и в течение последующих 10, 20 и 30 суток. Тестирование подопытных животных осуществлялось по тем же параметрам и в те же сроки, что и в первой серии.

В третьей серии под опытом находилось 41 животное симментальской породы. В ней проверялась результативность однократной вакцинации всех подопытных групп в 30-дневном возрасте. При этом особям опытных групп с первого дня жизни применялся споробактерин в дозах и по схемам, описанным выше, а критериями оценки состояния организма служили те же параметры, которые использовались в предыдущих сериях.

В четвертой серии было задействовано 42 животных, принадлежащих ООО «Димитрове». В этой серии осуществлялась проверка эффективности однократной вакцинации всех подопытных животных в 40-дневном возрасте. Фон, дозы и кратность применения споробактерина животным опытных групп оставались такими же, что и в предыдущих сериях.

Статистический анализ всех полученных результатов, кроме серологических, в разрезе групп и серий, не выявил существенных различий между одноименными показателями, очевидно, потому, что всякий раз исследовались животные месячного возраста. Именно поэтому данные соответствующих групп, но разных серий, объединены и рассматриваются в консолидированном виде.

Нами установлено, что назначение споробактерина благотворно сказалось на количестве эритроцитов и степени насыщения их гемоглобином по сравнению с контролем. Причем выявлена положительная корреляция между продолжительностью курса назначения споробактерина и количеством эритроцитов, а так же содержанием гемоглобина в них. Отсюда наибольший прирост рассматриваемых показателей отмечен в третьей опытной группе, где споробактерин применялся в течение 30 суток, а наименьший — в первой опытной группе, особи которой получали препарат только 10 суток.

Такой результат может быть обусловлен либо усилением гемопоэза, либо замедлением гемодиереза. Необходимы дополнительные исследования, чтобы однозначно определить причину происходящего. Однако, отталкиваясь от данных литературы (Коваленко С.П., 1975; Ибельгис М.С, Горнак Н.М., 1975; Жданов П.И., 1993) можем предположить, что дело связано с выделением вегетирующими бактериями незаменимых аминокислот, которые используются в качестве пластического материала при гемопоэзе. С другой стороны, возможна продукция В. subtilis факторов, избирательно действующих на полипотентные клетки II и III классов миелопоэза (эритроидный росток). Образование эритроцитов из-за этого усиливается. Наши данные по изменениям красной крови у животных под действием споробактерина согласуются с сообщениями Н.В. Ездакова (1976), П.П. Старухина (1998), A.B. Мазаева (2003).

Численность лейкоцитов у подопытных животных выглядела по-иному. Максимум ее отмечался у контрольных особей, а минимум наблюдался у представителей третьей опытной группы. Важно отметить, что оба этих показателя не выходят за рамки нормальных колебаний количества лейкоцитов у молодняка крупного рогатого скота. В произошедших изменениях количества лейкоцитов мы усматриваем модулирующее действие споробактерина. Как показало изучение лейкограммы у подопытных животных, это действие отразилось на лимфоцитах и молодых нейтрофилах. Доля первых из них в условиях применения споробактерина достоверно возросла, а вторых -уменьшилась. Значит, в организме животных образуется фактор, действующий на клетки-предшественники лимфоцитопоэза.

Под влиянием споробактерина оказался общий белок сыворотки крови, а так же его гамма-глобулиновая фракция. Насыщенность сыворотки крови и общим белком, и гамма-глобулиновой фракцией достоверно повысилась. Считаем, что для функционирования белоксинтезирующих структур печени и лимфоидных образований при применении споробактерина создались более благоприятные условия (наличие незаменимых аминокислот и других сырьевых ресурсов). Как сообщают Н.В. Ездаков (1976), В.В. Смирнов и со-авт., (1982), П.И. Жданов, В.А. Сечин (1994), пробиотики улучшают перева-риваемость органической части кормов, их минеральных компонентов и азота.

Поскольку белки служат источником для синтеза ферментов, части гормонов, биологически активных веществ и т.п., при таких результатах их количественного анализа, следовало ожидать активизацию многих жизненных процессов. Проверка подтвердила эти ожидания. Часть положительных влияний споробактерина на изучаемые параметры жизнедеятельности организма уже рассмотрена нами выше, другие - предстоит рассмотреть.

Так, изучение фагоцитоза у подопытных телят показало, что этот вид клеточной неспецифической защиты организма стал у особей опытных групп более совершенным, ибо существенное возрастание фагоцитарной активности сегментоядерных нейтрофилов произошло на фоне уменьшения численности лейкоцитов, да и зрелых нейтрофилов, в единице объема крови. Одной из причин такой ситуации с фагоцитозом могла стать система комплемента. По нашим данным, комплементарная активность сыворотки крови у телят опытных групп достоверно возросла. Кроме того, могли повлиять на фагоцитоз и монокины, в частности интерлейкин-8, - продукты, образуемые макрофагами (моноцитами). В нашем случае, количество этого вида лейкоцитов уменьшилось, зачит, и в этом проявилось модулирующее действие споробактерина. Изменение фагоцитарной активности лейкоцитов в описанном направлении при назначении споробактерина отмечалось в исследованиях П.И. Жданова (1994), П.П. Старухина и соавт., (1996), A.B. Мазаева (2003) и др.

Состояние гуморальных факторов неспецифической защиты организма телят в месячном возрасте было различным и зависело от групповой принадлежности. В частности, активность таких из них как бактерицидная, бета-литическая и комплементарная у представителей опытных групп была достоверно выше, а лизоцимной - ниже, чем в контроле. Такой расклад мы объясняем адекватностью реагирования организма телят опытных групп. В первые недели жизни телят существует угроза заражения и заболевания острыми кишечными инфекциями (Девришов Д.А., 2000), а в дальнейшем - острыми респираторными заболеваниями (Денисенко В.Н., 1999). Отсюда повышение бактерицидной активности сыворотки крови, сдерживающей развитие грам-негативной микрофлоры, а также бета-литической активности, обеспечивающей защиту от спорообразующих микроорганизмов (Бухарин О.В., Васильев Н.В., 1974), становится как нельзя кстати.

Что касается специфического гуморального ответа у подопытных животных, то он имел разную характеристику в разрезе серий. Минимальный уровень (1:200) противосальмонеллезных антител отмечался в первую серию, а максимальный (1:800) - в четвертую. Мы связываем эти различия, а они проявляются и у интактных (контрольных) животных, с незавершенностью функционального становления иммунной системы к десятому дню жизни. Именно в десятидневном возрасте проводилась вакцинация всех телят против сальмонеллеза в первой серии. Активная иммунизация подопытных телят в четвертой серии проводилась уже в 40-дневном возрасте. К этому времени функция иммунной системы становится более совершенной, в том числе и у особей контрольной группы (титр антител у них спустя 90 дней после вакцинации составлял 1:400 против 1:200 - в первой серии). Очевидно, это происходит потому, что организм телят спонтанно инфицируется сальмонеллами и вынужден адресно реагировать, т.е. синтезировать противосальмонеллезные антитела. Об этом и свидетельствуют результаты фоновых исследований телят контрольной группы в 40-суточном (4-я серия) и 30-суточном (3-я серия) возрасте. В условиях хорошего ресурсного обеспечения (опытные группы) иммуногенез шел более активно, а продукты иммунной системы сохранялись в организме продолжительное время. При иммунизации телят в 20-дневном возрасте, с последующей ревакцинацией через 10 суток (вторая серия) у контрольных животных формировался специфический иммунитет такой же степени выраженности и продолжительности, что и в первую серию. Во второй и третьей опытных группах во второй серии формировался иммунитет более высокого напряжения (в 2 раза), чем во время первой серии. В третью серию телята 2-й и 3-й опытных групп имели еще более напряженный иммунитет, чем в предыдущей серии. Отсюда проистекает второй вывод. Применять споробактерин в системе специфической вакцинопрофилактики сальмонел-леза необходимо с рождения теленка в течение 20-30 дней подряд.

Второй научно-производственный опыт мы поставили на телятах второй по численности молочных пород Оренбургской области — красной степной, в колхозе им. Чкалова Тюльганского района. Общая схема эксперимента была такой же, что и в ООО «Димитрово» на телятах симментальской породы. Различия касались доз споробактерина и кратности (в течение суток) его назначения. Здесь он применялся по 3 мл на прием, 3 раза в сутки.

Если в целом охарактеризовать результаты второго научно-производственного опыта, то они созвучны тем, которые получены в первом. Порода животных наложила некоторый отпечаток лишь на количественную сторону изучаемых параметров, не затрагивая закономерностей по сути явления. В частности, в этом научно-производственном эксперименте подтвердилось модулирующее действие споробактерина на: красную, белую кровь; общий белок сыворотки крови и гамма-глобулиновую фракцию; клеточные и гуморальные факторы неспецифической защиты, динамику противосальмо-неллезных антител.

В третьем научно-производственным опыте, проведенным в ЗАО «Нива» Октябрьского района на телятах красной степной породы, ставилась задача проверить эффективность предлагаемых нами схем применения споробактерина в системе противосальмонеллезных мероприятий в современных условиях хозяйствования. В отличие от предыдущих опытов, мы ограничились двумя схемами назначения новорожденным телятам споробактерина — 20- и 30-суточный курс, в дозе 3 мл на прием, 3 раза в сутки. Вакцинацию подопытных телят проводили только в два срока - в 20-дневном возрасте, с ревакцинацией через 10 суток, и в 30-дневном (без ревакцинации). Обработка полученных при этом результатов и их сопоставление с данными двух предыдущих экспериментов, показала состоятельность предлагаемых нами схем и подходов к организации проивосальмонеллезных мероприятий в современных условиях хозяйствования.

Сделанные нами экономические расчеты еще раз, теперь уже с экономической точки зрения, подтвердили эффективность предлагаемых нововведений.