Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.06) на тему:Применение раствора нейтрального анолита АНК в убойных цехах птицефабрик для предотвращения контаминации тушек и субпродуктов птицы возбудителями кампилобактериоза



На правах рукописи

КЛЁВО Елена Ивановна

ПРИМЕНЕНИЕ РАСТВОРА НЕЙТРАЛЬНОГО АНОЛИТА АНК В УБОЙНЫХ ЦЕХАХ ПТИЦЕФАБРИК ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ КОНТАМИНАЦИИ ТУШЕК И СУБПРОДУКТОВ ПТИЦЫ ВОЗБУДИТЕЛЯМИ КАМПИЛОБ АКТЕРИОЗ А

16.00.06 - Ветеринарная санитария, экология,

зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель -доктор ветеринарных наук, профессор Л.С. Каврук

Москва-2006

Работа выполнена в лаборатории санитарной микробиологии Государственного научного учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены н экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии), а также на базе ППЗ «Кучинский» Балашихинского р-на Московской области и ОНО «Загорское» ЭПХ ВНИТИП г. Сергиев-ГГосад Московской области.

Научный руководитель:

Доктор ветеринарных наук, профессор Каврук Леонид Сергеевич (ПНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии)

Официальные оппоненты:

Доктор ветеринарных наук, профессор Светоч Эдуард Арсентьевич (ГНЦПМиБ)

Кандидат ветеринарных наук, Скляров Олег .Дмитриевич (ФГУ «ВГНКИ»)

Ведущая организации:

Московский государственный университет прикладной биотехнологии

Защита диссертации состоится ¿¿««^¿Уа—2006 г. в_часов на

заседании диссертационного совета Д.008.006.01 при Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии) по адресу 123022, г, Москва, Звенигородское шоссе, д.5

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИИВСГЭ

Россельхозакадемии

Автореферат разослан «

Ученый секретарь Диссертационного совета

Е.С. МаЙстренко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние десятилетия проблеме кампилобактериоза людей и сельскохозяйственных животных, особенно птиц, уделяется огромное внимание как медицинскими, так и ветеринарными специалистами ввиду того, что это заболевание относится к числу тяжелых и опасных пищевых токсикоинфекций, наносящих значительный социальный и экономический ущерб. По рекомендации ФАОЛЗОЗ изучение разных вопросов проблемы кампилобактериоза и в первую очередь средств, обеспечивающих получение безопасных в санитарном отношении продуктов питания людей, включено в национальные программы большинства стран мира, в том числе России. Накопленные в разных странах материалы свидетельствуют о том, что основным источником возбудителей кампилобактериоза является птица (сельскохозяйственная и дикая). Клинически заболевание проявляется у цыплят первых дней н недель жизни. Переболевшие и выжившие цыплята, а также те, у которых внешне отсутствовали симптомы болезни, остаются надолго и в большинстве случаев пожизненными бактерионосителями, выделяя кампилобакгерин С пометом во внешнюю среду, где в условиях водоемов они могут длительно выживать. При убое и потрошении птиц в птицеводческих хозяйствах довольно часто происходит контаминация кампплобактериями готовой продукции, поеггупающей в торговую сеть к места общественного питания. Несоблюдение правил личной гигиены при приготовлении пищи и отсутствие надлежащей термической обработки мясных продуктов приводит к заражению людей возбудителями болезни и возникновению заболевания. Поэтому вопрос получения безопасной, высокого санитарного качества продукции птицеводства непосредственно на производящих ее предприятиях остается актуальным для ветеринаркой и медицинской служб.

Ввиду отсутствия специфических средств профилактики кам п и л оба ктерноза птицы вопрос изыскания химических безвредных для людей бактерицидных вешеств и определения оптимального режима их

цыплят в убойных цехах

птицефабрик, не нарушая при этом практикуемый технологический процесс переработки убитой птицы, является актуальным и представляет большое значение для ветеринарных специалистов.

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований являлось научное обоснование способа обеззараживания тушек и субпродуктов цыплят бройлеров, обеспечивающего получение продукции птицеводства, свободной от контаминации возбудителями кампилобакгериоза людей и животных, после убоя и потрошения птицы.

В соответствии с целью работы нам предстояло решить следующие задачи:

1. Определить широту носительства и видовой состав кампююбактернй среди поголовья иыллят-бройлеров и кур-несушек на ряде птицефабрик Московской области.

2. Определить продолжительность выживания наиболее частых возбудителей камиилобактериоза человека и животных (видов С^е^ш и С .со II) па поверхности тушек и субпродуктов цыплят-бройлеров при плюсовых (-)4, -+40°С) и минусовой (-18°С) температурах их хранения.

3. Изучить устойчивость кампилобактерий к нейтральному анешнту АПК с различными концен¡рациями оксидантов на разных тест-объектах.

4. Изучить степень естественной контаминации тушек и субпродуктов цыплят-бройлеров кампилобактериями после убоя и потрошения птицы.

5. Определить оптимальный режим обеззараживающего действия нейтрального анолита АНК в отношении кампилобактерий и других микроорганизмов в опытах на искусственно и естественно контаминированных тушках и субпродуктах птиц.

6. Определить возможность использования растворов нейтрального анолита для снижения уровня носительства кам пило бактерий в

кишечнике цыплят и степени контаминации ими тушек потрошенной птицы путем выпаивания раствора АПК & последние сутки перед убоем птицы.

7. Испытать обеззараживающее действие нейтрального анолита АНК, находящегося в ванне, при обработке тушек убитой птицы, естественно коптаминированной возбудителем кампилобактериоза, в условиях птицефабрики с широким носительством этих бактерий среди цыплят и кур-несушек.

8, Разработать методические рекомендации по предотвращению контаминации тушек и субпродуктов цыплят-бройлеров камп и лобактерия ми после потрошения убитой птицы.

Научная новизна. В результате проведенных исследований изучена широта носнтельстеа и видовой состав кампилобактерий среди поголовья цыплят-бройлеров и взрослой птицы ряда птицефабрик Московской области. Ог грея еле на степень контаминации тушек и субпродуктов цыплят-бройлеров камшшобактериями после убоя и потрошения птицы и продолжительность выжигания кампилобактерий на поверхности охлажденных и замороженных тушек при длительном их хранении. На основании экспериментальных исследований и производственной проверки определен оптимальный режим обеззараживающего действия нейтрального анолита АНК в отношении кампилобактерий и других микроорганизмов. Научная новизна работы подтверждена заявкой на патеггг № 2005112250 от 25.04.05 г. «Способ санитарной обработки поверхности потрошеных тушек птицы».

Практическая значимость работы. Для обеззараживания потрошеных тушек и субпродуктов, контаминированных кампилобактериями и другими патогенными для человека микроорганизмами, в ваннах охлаждения убойных цехов птицефабрик предложен экологический безопасный химический ■ препарат- раствор нейтрального анолита АНК и режим его применения, хоторые вошли в разработанную коллективом ученых «Инструкцию по применению электрохимически активированных растворов натрия хлорида -

аиолита (AHKJ и католига, получаемых на установках, типа СТЭЛ, для мойки и дезинфекции объектов ветеринарного надзора», согласованную с Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии и направленную для утверждения в Федеральную службу по ветеринарному н фнтоса н ита рн ом у надзору Минсельхоэа РФ.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены:

- на Международной научно-практической конференции, посвященной состоянию и проблемам ветеринарной санитарии, гигиены и экологии в животноводстве, проходившей в г. Чебоксары (октябрь 2004 г.);

- на Заседаниях Ученого Совета ВНИНВСГЭ (2003 - 2005 гг.);

- на межлабораторном совещании ВНИИВСГЭ <2006 г.). Публикация результатов исследований. По теме диссертационной работы

опубликовано 4 статьи и 1 заявка на патент.

Объем и структуру работы. Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста, содержит 9 таблиц, б фотографий. Список литературы включает 189 источников, в том числе 37 иностранных авторов.

Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, анализа и обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ В исследованиях использовали эталонные штаммы Campylobacter jejuni 11168-1/NCTC и Campylobacter coli NCTC 113-52, полученные в лаборатории молекулярной микробиологии Государственного научного центра прикладной микробиологии и биотехнологии, а также полевые штаммы С. jejuni, выделенные из слепой кишки и толстого отдела кишечника птиц и полевые штаммы Salmonella апашт, Salmonella enteriticiis, Staphylococcus aureus из коллекции лаборатории санитарной микробиологии ВНИИВСГЭ.

Для выделения кампилобактерий использовали коммерческий кампнлобакагар (изг. предприятием «Птательние среды» при ГНЦПМиБ, пос. Оболенск Серпуховского р-на Московской обл.) с селективной добавкой НИИЭМ им. Л, Пастера (г. Санкт-Петербург) и 7% гемолизированной крови барана или КРС. Засеянные чашки с плотной питательной средой помешали в герметичные полиэтиленовые пакеты с кампилогазом (фирмы Bection Dickinson, США), создающим оптимальную газовую смесь для роста кампилобактерий (5% кислорода, 10% углекислого газа, 85% азота) или эксикаторы (с использованием метода «горящей свечи»). Инкубирование чашек проводили при температуре + 42°С в течение 24 - 36 ч.

У выделенных культур кампилобактерий изучали морфологические, тинкториальные, культурал ьные, биохимические свойства согласно сушествуюшям дифференциальным схемам в соответствии с общепринятыми тестами видовой идентификации бактерий этого рода. В опытах по изучению сроков выживания кампилобактерий на искусственно контаминированных тест-объектах при различных температурах (+ 4°С, + 10°С и - 18°С) использовали для заражения образцы тушек и субпродуктов (печень, желудки) цыплят-бройлеров, которые искусственно контаминировалн 1 млрд. суспензиями (по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А.Тарасевича) эталонных штаммов С. jejuni и С. coli из расчета I мл на 100 см1. Начиная с 3-го дня, через каждые 2-3 сут , затем через 7-10 сут, а в дальнейшем 1 раз в месяц пробы подвергали бактериологическому исследованию. С каждого искусственно кон-гаминированного объекта делали смывы стерильными увлажненными ватно-м ар левыми тампонами, которые затем отмывали в пробирках с 10 мл стерильного физиологического раствора. Полученную суспензию высевали в чашки с кампилобакагаром, содержащим 7% гемолизированной крови КРС или барана и селективную добавку. Инкубирование чашек проводили в течение 24 - 36 ч при температуре + 42е С.

Для получения раствора ЛНК использовали установку СТЭЛ - 60 - 03 конструкции НПО «Химавтоматика» производительностью 60 л в час, в

освоении работы с которой нам оказал помощь профессор Л.А. Закомырдин, за что приносим ему глубокую благодарность.

При определении бактерицидного действия АНК в отношении суспензий чистых культур С. jejuni с белковой зашитой (2% стерильной сыворотки крови К PC) и без нее, а также на тест-объектах (керамическая, металлическая и кафельная плитки) использовали растворы нейтрального анолита с 200 и 500 мг/л, рН 6,8 - 7,0. Суспензии кампилобактерий готовили из 1 - 2* суточных агаровых культур в стерильном физиологическом растворе в концентрации 1 млрд, микробных клеток в 1 см' по оптическому стандарту мутности ГИСК им. JI.A, Тарасевича. В одну часть пробирок с микробной взвесью добавляли 2% стерильной сыворотки крови КРС в качестве белковой зашиты, затем бактериальную взвесь смешивали с АНК в соотношении 1:9, В другую часть пробирок с той же концентрацией микробных клеток не добавляли белковую защиту. Суспензии выдерживали 1, 2, 3, 5, 7, 10 мин при комнатной температуре. По истечении каждой экспозиции содержимое пробирок высевали на камнилобакагар. В качестве контроля вместо анолита использовали стерильный физиологический раствор в том же соотношении с суспензией кампилобактерий 1:9.

Тест-объекты (керамическая, кафельная, металлическая плитки) заражали аналогичной суспензией С, jejuni из расчета 1мл одно миллиардной взвеси на 100 см1 поверхности, после подсыхания суспензий при комнатной температуре в течение 20 - 30 мин на поверхность одной части зараженных тестов наносили белковую защиту (2% стерильной сыворотки крови КРС), на другую часть зараженных тестов белковую защиту не добавляли. Затем с помошью пульверизатора наносили раствор АНК на подсохшие тест-объекты до интенсивного их увлажнения. По истечении каждой экспозиции действия АНК с поверхности тестов делали смывы стерильными ватно-марлевымн тампонами, которые помешали в пробирки со стерильным физиологическим раствором в объеме 10 мл для нейтрализации остатков анолита, затем полученную суспензию подвергали исследованию по методике, описанной

выше. Контролем служили пробы смывов с аналогичных тест-объектов, обработанных стерильным физиологическим раствором.

В опытах по определению бактерицидного действия ЭХА-растворов на искусственно контаминироваиных суспензиями С, jejuni, Salm, anatum, Salm, enteritidis, Staph, aureus пробах натнвного материала (тушки, желудки, печень цыплят-бройлеров) применяли АНК с С„ 100, 200, 400 и 500 мг/л, pH 7,0 ± 0,1 при экспозиции 1,2,3,5,7,10, 20, 30, 40 и 60 мин. Пробы нативного материала заражали по методике, описанной выше, подсушивали их на воздухе 15 - 20 мин, затем погружали в испытуемые растворы в стеклянных емкостях. По истечении каждой экспозиции с поверхностей тестов, которые повторно не использовали, делали смывы стерильными ватно-марлевымн тампонами. Нейтрализацию действия АНК осуществляли способом, описанным выше. Инкубирование чашек с посевами проводили по ранее изложенной методике. В качестве контроля использовали смывы с аналогичных тест-объектов, не обработанных нейтральным анолитом.

При испытании действия растворов не Морального анолита на уровень содержания кампилобактерий в кишечннке птиц при выпаивании его в последние сутки перед убоем использовали цыплят, находящихся в виварии ОНО «Загорское» ЭПХ ВНИТИП, начиная с однодневного возраста и до убоя. За 7 сут до начала выпойки анолита из поголовья птиц формировали 5 групп (4 опытные и одну контрольную) численностью по 15 гол в каждой, которые находились в одном помещении при равнозначных условиях содержания и кормления. Каждая группа цыплят была размещена в отдельной пронумерованной клетке. Для определения широты естественного носительства кампилобактерий среди разных групп цыплят, а также наличия и количественного уровня бактерий других родов от каждой группы брали по 10 проб помета для бактериологического исследования.

В последние сутки выращивания цыплят-бройлеров (на 42 день жизни), за 16 часов до убоя птииы в каждую клетку опытных групп вместо воды подавался раствор нейтрального анолита с концентрациями оксидантов 100,

200, 300 и 500 мг/л. Пятая контрольная группа птиц получала водопроводную воду. Убой и потрошение цыплят проводили на санитарной бойне ЭПХ ВНИТИП, где от 10 гол каждой группы птиц брали пробы содержимого толстого отдела кишечника, а также по 10 проб смывов с внутренней поверхности тушек. Каждый материал подвергали бактериологическому исследованию в соответствии с общепринятыми методиками на наличие и количественный уровень следующих 5 групп микробов: бактерий группы кишечной палочки, бактерий родов Proteus, Staphylococcus, Salmonella, Campylobacter. Для выделения и количественного подсчета разных групп микробов использовали, соответственно, агар Эндо, спиртово-солевой агар, среду Плоскирева, камлилоба катар с селективной добавкой.

При определении количественного уровня микроорганизмов из исходных разведений суспензий готовили десятикратные последующие разведения от (0'г до I0**6, которые засевали на поверхность чашек с питательной средой в объеме 0,1 мл стеклянным шпателем. Число микробов устанавливали путем умножения количества выросших колоний на разведение пробы и объем посевного материала с последующим пересчетом на 1 г содержимого кишечника или 1 мл смыва С тушек.

В производственных опытах по изучению действия нейтрального анолига на микрофлору тущек п субпродуктов убитой и потрошеной птицы при обработке их в ванне охлаждения использов&пи растворы АНК с Соя 350 и 500 мг/л, рН 6,8 - 7,0. До начала испытания раствора АНК у 10 гол. потрошеной птицы с тушек делали смывы стерильными ватно-марлевым и тампонами. Затем потрошеные тушки погружали в ванну с холодной водопроводной водой с целью их охлаждения согласно существующей в данном хозяйст ве технологии и по истечении экспозиции охлаждения (30 мин) с поверхности тушек вновь делали смывы стерильными ватно-марлевыми тампонами с площади 100 см1 от 15 юл, (контроль), которые затем помещали в пробирки с 10 мл стерильного физиолога чес кого раствора.

После этого воду в ванне охлаждения тушек сливали и заполняли раствором АНК, куда загружали партию потрошеных тушек цыплят с конвейера убойного цеха. Экспозиция выдерживания тушек в растворе АНК составляла 30 мин, после чего тушки извлекали из ванны и с их поверхностей делали смывы увлажненными стерильными вагно-марлевыми тампонами от 15 гол, птицы. Тампоны также помещали в пробирки с 10 мл стерильного физиологического раствора.

Обработку субпродуктов птицы (печени и желудков) от 10 гол., доставленных в лабораторию санитарной микробиологии ВНИИВСГЭ в тот же день, проводили в стеклянной емкости в 10 литрах раствора АНК с Сда 500 мг/л в течение 30 мин. До и после их обработки испытуемым раствором с поверхности проб делали смывы, которые подвергали бактериологическому исследованию аналогично пробам смывов с тушек.

Бактериологическое исследование проб смывов с тушек опытных и контрольных цыплят проводили согласно су шествующим методикам на наличие и количественный уровень кампилобактерий, бактерий группы кишечной палочки, стафилококков.

Производственные и комиссионный опыты по применению растворов АНК в ванне охлаждения при обработке потрошеных тушек птицы осуществляли в убойном цехе ППЗ «Кучин с кий» Балашихи некого р-на Московской области.

2.2, РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2,1. Распространенность кампилобактерий среди поголовья птиц на птицефабриках Московской области и видовой состав этих бактерий Изучение широты носительства и видового состава кампилобактерий среди поголовья птицы проводили на 6 птицефабриках Московской области, В частности, ГУП ППЗ «Смена«, «Феникс-Комерсант» Сергиев-Посадского р-на, ППЗ «К учинский» Балашихи не кого р-на, ОНО «Загорское» ЭПХ ВНИТИП г. Сер гиев-П осад, «Братце вская» Солнечногорского р-на и «Пете ли некая» Одинцовского р-на.

В результате проведенных исследований кампилобактерии вида Campylobacter jejuni были обнаружены среди поголовья птиц на всех шести птицефабриках. Кампилобактерии видов С. coll и С. laridis (соответственно в трех и одной пробах) только в ОНО «Загорское» ЭПХ ВНИТИП, Частота находок этих бактерий в пробах содержимого кишечника на разных птицефабриках была неодинаковой, что видно из данных таблицы 1.

Таблица 1

Частота обнаружения кампилобактерий в пробах содержимого слепой кишки цыплит-

бройлерое и взрослых кур

Название Количество Число проб, Способ

птицефабрики и «ледова! ты х содержащих выращивания

проб ка м пи лоба ктери н цыплят

Братцевская 18 2 Клеточный

ОНО 40 34 Клеточный

«Загорское»

ППЗ 49 43 Клеточный

* Кучинекий»

ППЗ «Смена» 14 - Клеточный

15 8 Напольный

Петел и некая 10 1 Клеточный

И 9 Напольный

«Феникс- 26 24 Напольный

Комерсант-

Итого: 184 121

Полученные нами данные подтверждают широкое носительство кампилобактерий вида Campylobacter jejuni у нтии, хотя степень его была в разных хозяйствах различной и не всегда коррелировала со способом выращивания цыплят-бройлеров. В частности, из данных таблицы 1 видно, что процент обнаружения кампилобактерий в содержимом слепой кишки цыплят, выращенных при напольном способе содержания, составлял 85 - 88%, Находки кампилобактерий у птиц при клеточном содержании на разных птицефабриках значительно варьировали - от 11 до 55 и даже 92%, а у цыплят ППЗ «Смена» они не были обнаружены ни в одной пробе из числа 14

исследованных. Носительство С. jejuni отмечалось как у цыплят-бройлеров 4 -42" дневного возраста, так и у кур-несушек.

2.2.2Дыжнваемость кампилобактерий на поверхности тушек и субпродуктов при различных температурных режимах их хранения

При изучении продолжительности выживания кампилобактерий видов С. jejuni и С. coli на поверхности тушек и субпродуктов (печень, желудки) цыплят-бройлеров при плюсовых (+ 4 и +10°С) и минусовой (-18°С) температурах их хранения установлено, что кампилобактерии сохраняют свою жизнеспособность на указанных объектах при температуре + 10*С в течение трех недель, при температуре + 4°С - в течение 41 дня (наблюдение до наступившего гниения мяса и субпродуктов). Продолжительность выживания С. jejuni и С. coli на искусственно контаминированных тест-объектах, хранящихся при температуре минус 18°С, составила 15 мес (срок наблюдения)

Полученные данные позволяют заключить, что бактерии видов С. jejuni и С. coli способны длительное время выживать на контаминированной продукции птицеводства, которая может быть источником заражения людей при приготовлении пищи и несоблюдении правил личной гигиены, или при недостаточной ее термической обработке.

2.23 Выживаемость кампилобактерий на разных тест-объектач при воздействии нейтрального анолита АНК с различными концентрациями оксияантов

В серии опытов по определению бактерицидной активности нейтрального анолита с различными концентрациями оксияантов - Сох 200 и 500 мг/л, pH 6,9 - 7,0 и суспензией чистой культуры С. jejuni в концентрации 1 млрд м.к^мл, а также в опытах на тест-объектах (керамическая, металлическая и кафельная плитки) в качестве белковой защиты использовали стерильную сыворотку крови КРС в количестве 2%. Другую часть суспензий бактерий и аналогичных

зараженных тест-объектов обрабатывали стерильным физиологическим раствором (контроль).

Результаты проведенных исследований показали, что раствор АПК с концентрацией оксидантов 200 мг/л в суспензионном тесте как с белковой зашитой, так и без нее приводит к гибели кампилобактерий через 3 мин, на керамических, кафельных и металлических тестах с белковой зашитой - также через 3 мин, а без нее - спустя 2 мин контакта с бактериями. Нейтральный анолит с Сок 500 мг/л действует бактерицидно на С. jejuni в суспензионном тесте без белковой зашиты уже в течение 1 мнн, в то время как с белковой защитой - через 2 мин. Этот же раствор приводит к гибели кампилобактерий на тест-объектах (керамическая, кафельная и металлическая плитки) как с белковой зашитой, так и без нее в течение 1 мин.

2.% .^Устойчивость камрипобакг^рий, сальмонелл и стафилококков к действию нейтральиого анолита АНК с разными концентрациями оксидантов в опытах с искусственно контаминированными тушками и субпродуктами птиц

В проведенных нами опытах была изучена устойчивость Campylobacter jejuni, Salmonella ana turn, Salmonella eme nitidis. Staphylococcus aureus к действию растворов нейтрального анолита (рН 7,0 ± 0,1) с концентрациями оксидантов С0|1 100, 200 и 400 мг/л на искусственно контаминированных этими бактериями образцах тушек и субпродуктов (желудки, печень) птицы при экспозиции действия растворов 1,2,3, 5, 7, ) 0, 15,20, 30,40, 60 мин.

Результаты этих опытов показали, что уже спустя 3 мин контакта АНК с Со* 200 мг/л с поверхностью контаминированных проб происходит гибель Campylobacter jejuni при наличии роста тест бактерий в контроле, а при контакте контаминированных проб с нейтральным анолитом с Сох 100 мг/л гибель тест-бактерий наступала спустя 20 мин при наличии роста в контроле.

В то же время нейтральный анолит АНК с концентрацией оксидантов, равной 200 мг/л, при контакте с поверхностью искусственно

контаминированных тестов в течение 30 мни не оказывал какого-либо существенного бактерицидного действия на Salmonella anatum, Salmonella emeritidis н Staphylococcus aureus по сравнению с контролем. Однако при увеличении экспозиции действия АНК с Се, 200 мг/л на конт&чинированные пробы тушек до 60 мин мы отмечали значительное снижение степени контаминации тест-объектов бактериями родов Salmonella и Staphylococcus, соответственно, в 12 н 30 раз по сравнению с контролем. При контакте искусственно зараженных тест-объектов с АНК с 400 мг/л в течение 30 мин снижение обсемененности тушек сальмонеллами и стафилококком происходило, соответственно, в 15 н 13 раз по сравнению с контролем, что видно га данных таблицы 2.

Таблица 2

Устойчивость сальмонелл и стафилококков к действию ЛИК с Ср, 200 и 400 мг/л при различной экс нот и ни

Тмт-бактернн AUK с С« 200 мг/л Киитроль ЛИК с е.. 400 мг/л Контроль

время экспозиции время экслознпин

40 мин 60 мин 20 мни 30 мин

Salmonella emeritidis рост 12 колоний рост 16 КОЛОНИЙ рост 20U колоний рост 30 колоний рост 13 коюннй росг201 колонии

Staphylococcus aureus рост25 колоний роегб колоний рост Ш колоний роет 25 колоний рост 14 колоний росг 181 колонии

2,2.5 Действие растворов нейтрального анолита АНК на уровень содержания кампилрбактернй и других микроорганизмов в кишечнике пыплят при выпаивании их птиие в последние сутки перед убоем и степень

крнтаминацин ими потрошеных тушек В опытах по определению действия растворов нейтрального анолита на уровень содержания кампилобактерий в кишечнике цыплят при выпаивании их птице в последние сутки перед убоем использовали АНК с С« 100, 200, 300 и 500 мг/л, рН 7,0 ±0,1. Опыты проводили на базе ОНО «Загорское» ЭПХ ВНИТИП на 5 группах цыплят (4 опытные и 3 контрольная), естественно контаминированных кампилобактершми и другими микроорганизмами, по 15

гол, в каждой. Бактериологическому исследованию подвергали материал от 10 цыплят каждой группы.

До начала опытов от цыплят из разных клеток исследовали 39 сборных проб помета на наличие и количественный уровень кампнлобактерий, бактерий группы кишечной палочки и стафилококков. При этом было установлено, что среднее количество бактерий группы кишечной палочки составляло )0,4 млн м.к./г; среднее количество стафилококков - 9,8 млн м.к./г; бактерии рода Proteus в титре 4*10"3 содержались в 31 пробе; бактерии рода Campylobacter (в основном вида С jejuni, в отдельных пробах - C.laridis и C.coli) - в 37 пробах. Бактерии рода Salmonella не были обнаружены ни в одной пробе помета птиц.

После проведения опытов, убоя и потрошения птицы исследование содержимого -толстого отдела кишечника 10 контрольных цыплят, не получавших нейтральный аиолнт, показало, что среднее количество бактерий группы кишечной палочки составляло 42,3 млн м.к./г; среднее количество стафилококков - 10,4 млн м.к./г; бактерии рода Proteus были обнаружены лишь в двух пробах в титре 4*10*3; кампилобактерии - в 10 пробах; бактерии рода Salmonella не были обнаружены ни в одном случае.

При исследовании содержимого толстого отдела кишечника потрошеных птиц опытных групп установлено, что у цыплят, получавших АН К с концентрацией оксидантов 100 и 200 мг/л, количественный уровень бактерий группы кишечной палочки составлял в среднем, соответственно, 45,3 и 42,7 млн м.кУг; стафилококки и бактерии рода Proteus содержались лишь в отдельных пробах в количестве, соответственно, 1,6 - 9,6 млн м.к./г, титр протея составлял 4*103 ; кампилобактерии обнаруживали во всех 20 пробах опытной и контрольной групп птиц.

У цыплят, получавших АНК с концентрацией оксидантов 300 мг/л, число бактерий группы кишечной палочки имело несколько меньший показатель -37,5 млн м.кА, хотя он существенно не отличался от количества этих бактерий у других групп гтгнцы. Количественный уровень стафилахокков был в среднем 7,8 млн м.кУг. Бактерии рода Proteus в титре 4* 10"3 были обнаружены только

в одной пробе из числа 10, тогда как кампилобактерии содержались во всех пробах содержимого кишечника.

АНК с С„, 500 мгУл повышал число находок протея в кишечнике по сравнению с контрольными цыплятами (в 5 случаях из числа 10 против двух в контроле), уровень бактерий группы кишечной палочки снижался до 15 млн, м.к./г, а рост колоний стафилококков отсутствовал. Количественный уровень кампилобактерий в среднем составлял 128 тыс. м.к./г.

Бактерии рода Salmonella отсутствовали во всех пробах содержимого кишечника цыплят, получавших АНК с разными концентрациями оксидантов, а также в кишечнике контрольной птицы.

Исследование смывов с внутренней поверхности тушек цыплят, получавших АНК с концентрацией оксидантов COI 100 мг/л, показало следующее: число бактерии группы кишечной палочки составляло в среднем 32 тыс м.к./ 100 смг; среднее количество стафилококков - б тыс м.к./ 100 см2; бактерии рода Proteus были выделены из 9 проб; камнилобактсрии обнаружены в 7 пробах из числа 10.

У цыплят, получавших АНК С концентрацией оксидантов 200 мг/л, количество бактерий группы кишечной палочки в смывах с тушек составляло в среднем 50 тыс м.к./ 100 см2; стафилококков - 3,3 тыс м.к./ 100 см2; бактерии рода Proteus были выделены в титре 4*103 у всех 10 цыплят, кампилобактерии - у 9 цыплят.

У цыплят, получавших АНК с концентрацией оксидантов 300 мг/л, в смывах с тушек среднее количество бактерий группы кишечной палочки равнялось 34 тыс м.к./lOO см' ; стафилококков - 2,15 тыс м.кУЮО см3 ; бактерии рода Proteus выделены от 8 цыплят в титре 4*10''; кампилобактерии -от 9 цыплят из числа 10 исследованных.

У цыплят, получавших АНК с концентрацией оксидантов 500 мг/л, в смывах с тушек среднее количество бактерий группы кишечной палочки равнялось 18,8 тыс м.к./100 см: ; стафилококков - 11,75 тыс м.к./lOO см2 ; бактерии рода Proteus выделены от двух цыплят в титре 4* 10° ;

кампилобактерии удалось обнаружить лишь в одной пробе из числа 10 исследованных и количество последних было незначительным.

Представленные данные позволяют заключить, что выпаивание нейтрального анолита с концентрацией оксидантов 100, 200, 300 мг/л цыплятам за 16 часов до убоя не оказывает какого-либо заметного действия на количественный уровень разных групп микроорганизмов н не предотвращает контаминацию тушек птицы этими микробами при убое и потрошении цыплят. Более заметное действие проявлял раствор нейтрального анолита с концентрацией оксидантов 500 мг/л на количественное содержание в кишечнике цыплят кампилобактерии, тогда как количественный уровень других изучавшихся микроорганизмов почти не отличался от их численности у контрольных цыплят.

Аналогичные результаты были получены при исследовании поверхностей тушек птин, получавших нейтральный анолит с 500 мг/л, в отношении степени контаминации их кампилобактериями. На количественный уровень других микроорганизмов (бактерий группы кишечной палочки, протея, стафилококков) указанный раствор после выпаивания его цыплятам не оказывал выраженного действия по сравнению с числом названных бактерий на тушках контрольной птицы,

2,2,бЛействие растворов нейтрального анолита АНК на микрофлору поверхностей потрошеных тушек и субпродуктов убн^й птицы при обработке

их в ванне охлаждения В опытах по изучению действия нейтрального анолита на микрофлору тушек убитой и потрошеной птицы при обработке их в ванне охлаждения использовали растворы АНК с С011 350 и 500 мг/л, рН 6,8 - 7,0.

В производственных испытаниях действия нейтрального анолита с концентрацией оксидантов Сох 350 мг/л при экспозиции 15 мин на кампилобактерии, стафилококки, бактерии группы кишечной палочки и протей в ванне охлаждения убойного цеха ППЗ «Кучинскнй» на естественно контаминированные этими бактериями тушки цыплят после их потрошения

данный раствор не оказывал какого-либо заменю го действия на количественный уровень перечисленных групп бактерий. Применение нейтрального анолита с С„„ 500 мг/л, рН 6,8 - 7,0 при экспозиции 30 мин в ванне охлаждения тушек потрошеной птицы приводило к полному их обеззараживанию от кампилобакгерий и стафилококков и значительному снижению уровня контаминации их другими бактериями.

2.2.7.Испытание разработанного режима применения нейтрального анолита. используемого в ванне охлаждения, с целью получения безопасной продукции птицеводства в производственных условиях Одной из задач нашей работы являлось производственное испытание разработанного режима применения нейтрального анолита, используемого в ванне охлаждения, с целью получения безопасной продукции птицеводства.

Испытание действия ДНК проводилось комиссионно согласно программы, утвержденной дирекцией ВНИИВСГЭ, на базе убойного цеха ПГ13 «КучинскиЙ» Балашихи не koixj р-на Московской обл., с участием ветврача ППЗ «КучинскиЙ» Г.Н. Егоровой,

В результате испытания было установлено (таблица 3), что при исследовании смывов с тушек птицы после потрошения до охлаждения их водой и обработки АПК во всех 10 пробах отмечался обильный рост колоний кампилобактерий в чашках на поверхности кампилобакагара и энтеробактерий на поверхности агара Энло. 11а поверхности спиртово-солевого М11А рост стафилококков был отмечен в виде единичных колоний в посевах из б проб; из одной пробы - несколько десятков колоний; в оставшихся трех пробах рост стафилококков отсутствовал.

После охлаждения тушек водой без обработки АНК (контрольная группа) также отмечался обильный рост кампилобактерий и энтеробактерий в посевах из всех 15 проб смывов; рост стафилококков в виде единичных колоний наблюдался в 12 пробах, в трех пробах эти бактерии отсутствовали.

В смывах с тушек итиц, обработанных раствором АПК, незначительный по количеству рост колоний кампилобактерий был выявлен только в одном

случае из числа 15 исследованных проб; рост стафилококков в виде единичных колоний отмечен в одном случае; колонии энтеробактерий (в количестве нескольких десятков) обнаруживали в 6 пробах.

Доставленные в полиэтиленовых пакетах (отдельно для каждого тест-объекта) в лабораторию санитарной микробиологии института образцы субпродуктов (печень, желудки) от потрошеных цыплят в количестве по 8 - 10 тестов были подвергнуты в тот же день бактериологическому исследованию до и после обработки их раствором АНК (в стеклянной емкости с Сои 500 мг/л и экспозиции 30 .мин) на наличие и количественный уровень кампилобактерий, стафилококков и энтеробактерий, Результаты исследований смывов с поверхностей субпродуктов показали (таблица 4), что до воздействия указанного раствора АНК в посевах с печени и желудков цыплят отмечался обильный рост колоний энтеробактерий из всех 18 проб. Рост колоний стафилококков (в количестве от единичных до нескольких десятков) был установлен в посевах смывов из 16 проб; в двух пробах рост отсутствовал.

Таблица 3

Сводная таблиц« бактерицидного действия раствора АПК с С«,

500 мг/л на микрофлору поверхностей потрошеных туш*к __п субпродукта цыплят__

Тмт-объекты to Q ^ С | Т Смывы с тест-объектов после потрошения до нйраСчткв АПК в ванне охлаждения Щ С е. с 1 1Г Смывы с тест-объектов после обработки АПК в ванне охлаждения

С с V •—" X I и Среде Ондо ССЛ Ка мнило-бакагар С а ** — s Среда Эндо ССЛ Кам и нло-бака га р

среднее количество КОЕ в одной пробе g среднее количество КОЕ в одной пробе

потрошены* тушки 10 ■ <t 355 3 X л 3 »О е м 2 а н = = S a- х О X ^ с. х Я = § п J U 5 6 « £ = 3 & HI S ? t 15 ' 3? S ^ я О. X * = 2 i * » s ш ТА % И, II1 волной п робе рост too колоний

желудки 10 175 37 5 5 з | 5 = я к 'А \ О 6 10 48,5 2 нет роста

печень 8 115 43 8 47,5 нет роста нет роста

После обработки субпродуктов раствором АНК рост стафилококков отмечался лишь в одной пробе в незначительном количестве из числа 18 проб. Количество колоний энтеробактсрнй снижалось в среднем в 4 раза по сравнению с контрольными пробами.

На основании полученных данных, можно заключить, что нейтральный анолит (рН 6,8 - 7,0) с концентрацией оксидантов (по активному хлору) 500 мг/л при экспозиции 30 мин обеспечивает бактерицидное действие в отношении бактерий вида Campylobacter jejuni и стафилококков и существенно снижает уровень контаминации тушек разными видами энтеробактерий при высокой концентрации последних на поверхности тушек контрольной птицы.

Обработка субпродуктов птицы (печени, желудков) тем же раствором АНК при указанном выше режиме приводит к обеззараживанию их от стафилококков и снижению в 4 раза степени контаминации энтеробактсриями.

2.2.8. Определение остаточных количеств оксидантов в мясе потрошеных туше к цыплят-бройлеров после их обработки нейтральным анолитом АНК

В соответствии с задачами нашей работы нами были проведены опыты в 3-кратной повторности по определению остаточных количеств оксидантов раствора АНК в пробах мяса тушек, подвергнутых воздействию АНК с C01t 500 мг/я (по активному хлору) в течение 30 мин и хранившихся одни сутки при + 4"С.

Мясо грудных мышц и голени цыплят-бройлеров разрезали ножницами на мелкие кусочки, которые помешали в фарфоровые ступки (отдельно каждую пробу) и заливали небольшим объемом дистиллированной воды, затем растирали ткань пестиком до получения гомогенной взвеси. Полученную взвесь разводили в 2 - 3 раза дистиллированной водой и фильтровали через двойной слой марли. Фильтрат исследовали на наличие оксидантов (по активному хлору) йодометрическим методом в соответствии с методикой, изложенной в главе «Материалы и методы».

В результате проведенных исследований в пробах мяса цыплят не были обнаружены даже следы остаточных количеств оксидантов, что подтверждает фает самопроизвольного быстрого распада химических веществ, образуемых при получекип электрохимически активированных растворов и , в частности, нейтрального анолита. Полученные данные позволяют рекомендовать использование продукции птицеводства, подвергнутой обеззараживанию нейтральным анолитом в ванне при вышеуказанном режиме, без последующего промывания ее водопроводной водой и каких-либо ограничений.

Всего в разных опытах нами было исследовано 806 проб, из них - 502 пробы смывов и 304 пробы содержимого кишечника птиц.

з.выводы

1. Наши исследования подтверждают ведущую роль кампилобактерий вида Campylobacter jejuni в носительстве его у сельскохозяйственной птицы. При обследовании 6 птицеводческих хозяйств Московской области бактерии указанного вида были выделены из слепой кишки и толстого отдела кишечника цыплят-бройлеров 4 - 42"" дневного возраста и кур-нссушек во всех хозяйствах. Виды Campylobacter coli н Campylobacter laridis удалось обнаружить лишь в одном хозяйстве и находки их среди поголовья птиц встречались в единичных случаях.

При выборочном исследовании убитой и погибшей птицы частота находок вида Campylobacter jejuni на разных птицефабриках существенно варьировала и не всегда коррелировала с условиями выращивания цыплят. При напольном содержании птиц данные бактерии обнаруживали в 85 - 88% случаев, при клеточном содержании в 11 - 55 и даже 92% случаев,

2. Жизнеспособность эталонных штаммов Campylobacter jejuni 11168-1/NCrC и Campylobacter coli NCTC 113-52 на поверхности искусственно контаминированных тушек и субпродуктов (печень, желудки) цыплят-бройлеров при температуре + 10°С составляла 21 сут, а при температуре

+4°С - 41 сут (наблюдение до наступившего гниения мяса и субпродуктов). Продолжительность выживания С, jejuni и С. coli на аналогичных тест-объектах, хранящихся в замороженном состоянии (- 18°С), составляла 15 мес (срок наблюдения).

3. Выживаемость Campylobacter jejuni в суспензиях чистой культуры с белковой защитой и без нее при контакте с раствором нейтрального анолита АНК с СЬх 200 мг/л составляла 3 пин, а при концентрации оксидантов С^ 500 мг/л С белковой защитой - 2 мин, без белковой защиты - 1 мин. На керамических, кафельных и металлических тестах с белковой защитой гибель кампилобактерий при воздействии раствора ДНК с Соя 200 мг/л наступала через 3 мин, а без белковой зашиты - через 2 мин. Раствор АНК с Сох 500 мг/л приводил к гибели кампилобактерий на указанных тест-объектах в течение 1 мни как с белковой зашитой, так и без нее.

4. При воздействии раствора АНК с С0„ 100 мг/л на искусственно зараженные суспензиями Campylobacter jejuni, Salmonella anatum, Salmonella enteritidis, Staphyloccocus aureus пробы тушек и субпродуктов (печень, желудки) цыплят гибель С, jejuni наступала спустя 20 мин при наличии роста в контроле, а при действии раствора АНК с См 200 мг/л - через 3 мин. В то же время раствор АНК с CU1 200 мг/л при экспозиции 30 мин не оказывал бактерицидного действия на Salmonella anatum, Salmonella enteritidis, Staphyloccocus aureus по сравнению с контролем. При увеличении экспозиции действия этого раствора до 60 мин наблюдалось снижение степени контаминации тест-объектов бактериями родов Salmonella и Staphyloccocus, соответственно, в 12 и 30 раз но сравнению с контролем.

5. Использование нейтрального анолита АНК (pH 7,0 ± 0,1) с Ст 100,200 и 300 мг/л путем выпаивания естественно зараженным С, jejuni цыплятам-бройлерам в последние сутки перед убоем не оказывало существенного влияния на количественное содержание в толстом отделе кишечника птиц бактерий группы кишечной палочки, протея, стафилококков и кампилобактерий по сравнению с контрольными цыплятами, получавшими

водопроводную воду. Выпаивание опытным цыплятам раствора АНК с Сок 500 мг/п за 16 часов до убоя приводило у части цыплят к исчезновению в кишечнике, а у других - снижению количественного уровня бактерий группы кишечной палочки и кампилобактерий, отсутствию в нем у всех цыплят стафилококков, но возрастанию у части особей титра протея по сравнению с контрольной группой птиц.

Выпаивание цыплятам раствора АНК с разными концентрациями оксидантов (С0„ от 100 до 500 мг/л) не предотвращало контаминацию тушек потрошеной птицы бактериями группы кишечной палочки, протеем, стафилококками и кампилобактериями, количественный уровень которых существенно не отличался от численности этих бактерий на тушках контрольных цыплят, получавших водопроводную воду.

6. Обработка тушек убитых потрошеных цыплят, естественно зараженных С. jejuni, нейтральным анолитом ЛНК с Сок 350 мг/л в ванне охлаждения при экспозиции 15 мин не оказывало заметного снижения количественного уровня бактерий группы кишечной палочки, стафилококков и кампилобактерий на поверхности тушек по сравнению с тушками, охлажденными в водопроводной воде. Использование в ванне раствора АНК с COJ! 500 мг/л при экспозиции 30 мин приводило к полному их обеззараживанию от кампилобактерий и стафилококков и значительному снижению уровня контаминации бактериями группы кишечной палочки.

Обработка субпродуктов (печени, желудков) раствором АНК с См 500 мг/л в емкости при экспозиции 30 мин обеспечивала бактерицидное действие в отношении Campylobacter jejuni и стафилококков и существенно (в 4 раза) снижала уровень контаминации субпродуктов бактериями группы кишечной палочки.

7, При определении остаточных количеств оксидантов раствора АНК в пробах мяса тушек, подвергнутых воздействию АНК с С0„ 500 мг/л (по активному хлору) в течение 30 мин и хранившихся одни сутки при + 4°С, в

них нс обнаружены даже следы оксндантов, что указывает на безвредность мяса и возможность его использования без каких-либо ограничений,

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработанный режим применения раствора нейтрального анолита АНК для обеззараживания тушек потрошеной птицы в ванне убойных цехов птицефабрик вошел в «Инструкцию но применению электрохимически активированных растворов хлорида натрия - анолита (АНК) и католита, получаемых на установках типа СТЭЛ, для мойки и дезинфекции объектов ветеринарного надзора» (стр. 11), которая согласованна с Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемин 27 июня 2005 г. и направлена для утверждения в Федеральную службу по ветеринарному и фитосанитарному надзору Минссльхоза РФ.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕ MI-ДИССЕРТАЦИИ

1. Клево Е.И. Бактерицидное действие нейтрального анолита с различной концентрацией оксидантов на разные виды бактерий в опытах in vitro и искусственно контаминированные тушки цыплят// Метериалы междун, научно-практ. конф., посвященной состоянию и проблемам ветеринарной санитарии, гигиены и экологии в животноводстве, Чебоксары - 2004, Т.2., С. 13 - 16.

2. Клево Е.И. Выживаемость кампилобактерий на поверхности тушек и субпродуктов цыплят-бройлеров при различной температуре их хранения// Метериалы межлун. научно-практ. конф., посвященной состоянию и проблемам ветеринарной санитарии, гигиены и экологии в животноводстве, Чебоксары - 2004, Т.2., С. II — 13.

3. Закомырдин A.A., Долгов В.Д., Каврук Л.С., Бутко М.П., Ваннср Н.Э., Семенова Е.Л., Царукян С.С., Клево Е.И. Новое в ветеринарной

санитарии птицеперерабатывающих предприятий I! Ж. «Птица и птицепрояукты». 2005 - №3. - С. 14 - 16,

4, Каврук Л,С„ Клево Е.И. Использование нейтрального анолита для обеззараживания продукции птицеводства // Ветеринарный консультант. 2005 - №20-С. 14- 16.

5. Закомырлин А.А., Бахир В.М., Каврук Л.С., Бут ко М.П., Ваннер Н.Э., Царукян С.С., Кяево Е.И, Способ санитарной обработки поверхности потрошеных тушек птицы //Заявка на патент № 2005112250 от 25.04,05 г.

ВНИИВСГЭ, 2006 г., г. Москва, Звенигородское Ш., Д. 5 Заказ 130/6, тираж 80 экз.