Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.01) на тему:Применение иммуномодулятора тимогена для лечения новорожденных телят с функциональной диспепсией

На правах рукописи

БОНДАРЕНКО Евгений Михайлович

ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОМОДУЛЯТОРА ТИМОГЕНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ С ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ДИСПЕПСИЕЙ

16.00.01 - диагностика болезней и терапия животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 з ноя

Белгород 2009

003483410

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия».

Научный руководитель: Заслуженный ветеринарный врач РФ,

доктор биологических наук, профессор Безбородое Николай Васильевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Мерзленко Руслан Александрович;

кандидат ветеринарных наук Чернявский Артем Петрович

Ведущая организация:

ФГОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет»

Защита состоится « » 2009 г. в часов

на заседании диссертационного совета Д 22tf.004.01 при ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 308503, Белгородская обл., Белгородский р-н, пос. Майский, ул. Вавилова, 1. Тел./факс - (4722) 39-22-62

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия».

Автореферат разослан » 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета / /¡ГН^У' Литвинов Ю.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Интенсификация отрасли молочного скотоводства предусматривает, прежде всего, выполнение мероприятий по обеспечению населения продуктами питания. Важнейшей задачей при этом является сохранность молодняка (Кондакова И.А., 1999; Булыгина М.В., 2000; Сочнев В.В. с соавт., 2000; Когденко Н.В., 2001; Антипов В.А., 2005). Заболевания новорожденных животных, связанные с нарушением обменных процессов, иммуноде-фецитом и адаптацией к условиям промышленного животноводства, широко распространены и причиняют большой экономический ущерб (Аликаев В.А., с соавт.,1983; Анохин Б.М., 1985; Авакаянц Б.М., 1992; Буланкин A.JL, 1996; Шипицын А.Г., 2004 и др.).

В настоящее время предложено немало способов и средств лечения и профилактики диспепсии новорожденных телят, однако проводимые лечебно-профилактические мероприятия постоянно нуждаются в совершенствовании и конкретизации с учетом факторов, вызывающих заболевание (Аксененко С.А., 2006). В немалой степени решению этих вопросов может способствовать применение средств пептидной природы с иммунокорригирующей направленностью действия, которые способны активизировать защитно - приспособительные механизмы адаптации новорожденных к развитию диспепсий рефлекторно - стрессового (функционального) характера и тем самым повысить сохранность и последующую продуктивность животных.

Цель и задачи исследований. Целью работы было изучение терапевтической эффективности, иммунобиохимических и гематологических показателей в организме новорожденных телят с функциональной диспепсией при использовании для лечения синтетического иммуномодулятора тимогена.

Для достижения цели на разрешение бьши поставлены следующие задачи:

- изучение терапевтической эффективности применения синтетического тимогена при лечении новорожденных телят с функциональной диспепсией;

- определение гормональных изменений у новорожденных телят с функциональной диспепсией до и после применения тимогена;

- изучение степени активизации факторов неспецифического иммунитета после применения тимогена;

- исследование гематологических и биохимических показателей крови новорожденных телят при лечении тимогеном;

- изучение гистоструктурных изменений в тканях иммунокомпетент-ных органов телят после применения тимогена с лечебной целью.

Научная новизна. Впервые изучены особенности влияния синтетического иммуномодулятора тимогена на процессы обмена веществ и эффективность лечения новорожденных телят с функциональной диспепсией. Комплексными исследованиями установлено, что глутамил - триптофановый комплекс препарата тимоген повышает иммуно-гормональную активность организма новорожден-

ных телят. Определен эффективный вариант лечения телят с функциональной диспепсией.

Теоретическая и практическая значимость работы. На основании полученных результатов эффективности применения синтетического тимогена и данных биохимических и гистологических исследований тканей животных дано научное обоснование к его практическому применению в ветеринарии в качестве средства лечения новорожденных телят с функциональной диспепсией.

Предложенный производству способ лечения новорожденных телят с функциональной диспепсией может быть использован в молочном скотоводстве при проведении лечебно - профилактических мероприятий, входящих в комплекс диспансеризации животных. Иммуномодулирующие свойства тимогена способствуют повышению уровня процессов метаболизма организма телят при функциональной диспепсии и восстанавливают нарушенный гомеостаз.

Положения, выносимые на защиту:

1. Применение тимогена индуцирует формирование защитных функций у новорожденных телят с функциональной формой диспепсии путем повышения уровня неспецифического иммунитета.

2. Тимоген обладает гормонокорригирующим действием при лечении новорожденных телят с функциональной формой диспепсии.

3. Способ лечения телят с функциональной диспепсией путем применения тимогена способствует оптимизации биохимических показателей крови у новорожденных телят при становлении защитно-приспособительных механизмов.

4. Гистоструктурные изменения в тканях вторичных иммунокомпетент-ных и органов пищеварения у телят с функциональной диспепсией после лечения тимогеном подтверждают иммуномодулирующие и био-корригирующие свойства препарата.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на международных научно-производственных конференциях Белгородской ГСХА, 2009, ВНИВИПФиТ г. Воронеж, 2009, Карачаево-Черкесской государственной техн. академии п. Нижний Архыз, 2009, расширенном заседании кафедры диагностики болезней, терапии, акушерства и хирургии БелГСХА, 2009 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 144 страницах печатного текста. Список литературы включает 309 источников, в том числе отечественных 264 и 145 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 34 таблицами и 22 рисунками.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Научно-производственные опыты проведены на новорожденных телятах хозяйств: АОЗТ «Комсомолец», ОПХ «Белгородское» и АОЗТ племзавод «Ра-зуменский» Белгородского района. Содержание коров привязное в условиях МТФ в зимний период года и с выгоном в летний период на открытые при-фермские загоны. За 10 суток перед родами коров переводили в родильные отделения. Новорожденные телята содержались в условиях профилактория. Раци-

он кормления коров был сбалансирован по основным питательным компонентам. Хозяйства были благополучны по инфекционным и инвазионным заболеваниям.

Опытные группы новорожденных телят формировали по принципу подбора пар-аналогов (время рождения, живая масса при рождении, физиологическое состояние, порода, протекание беременности и родов у коров-матерей и др.) Подбор больных животных в группы осуществляли согласно имеющейся классификации (Митюшин В.В., 1989). В опытные группы подбирали новорожденных телят из числа гипотрофиков, с диагнозом после рождения (2-е сутки) на диспепсию функционального происхождения. Диагноз на наличие диспепсии ставили на основании отмечаемых клинических признаков на 2-е сутки после рождения. Были отмечены частые акты дефекации (5-6 раз/сут), угнетенное состояние у телят, температура 39,0 С, пульс - 120 уд./мин., количество дыхательных движений - 62 в минуту. Кал жидкий, водянистый желтого цвета с примесью слизи. Масса новорожденных телят 32 кг/гол.

Учитывая то, что диспепсия - это полиэтиологичное заболевание, был проведен клинико-лабораторный диагноз в отношении: казеиново-безоарной болезни, колибактериоза телят, анаэробной энтеротоксемии, вирусной диареи, сальмонеллеза, воспаления пуповины.

В качестве средства лечения новорожденных телят с функциональной диспепсией применяли синтетический иммуномодулятор тимоген, состоящий из глутаминовой кислоты и триптофана (ЗАО МБ НПК «Цитомед», г. Санкт-Петербург). На основании результатов предварительно проведенного комплексного изучения эффективности применения препарата тимогена на различных экспериментальных животных, в 1991 году Главным управлением ветеринарии с государственной ветеринарной инспекцией Государственного АПК СССР были утверждены Технические условия и наставление на применение его в ветеринарии (ТУ 10.07. 169-91). Основные лабораторные исследования эффективности применения тимогена проведены на кафедре диагностики болезней, терапии, акушерства и хирургии ФГОУ ВПО Белгородской ГСХА, в Белгородской областной ветеринарной лаборатории, вирусологической лаборатории Центра Госсанэпиднадзора Белгородской области и патологоанатомическо-го отделения городской больницы №2 г. Белгорода.

Опыты по выявлению механизма действия, лечебно-профилактической эффективности и взаимосвязи показателей неспецифической резистентности, гормонального баланса и метаболических изменений в крови новорожденных телят до и после лечения отражены на рисунке. Всего в опытах было использовано 143 новорожденных теленка, имеющих выраженную форму функциональной диспепсии с явлениями гипотрофии.

В первой серии опытов были изучены морфологические и биохимические показатели крови новорожденных телят (п=6) с функциональной диспепсией до и после лечения (со 2-х суток после рождения) тимогеном 0,01% раствором, внутримышечно, в дозе 10 мл/гол/сут в течение 10-и суток (1-я группа). Во 2-й группе (п=6) новорожденных телят с функциональной диспепсией лечение проводили фармазином - 50 в дозе 5,0 (250мг) мл/гол/сут внутримышечно, в течение 4-х суток (базово применяемый антибиотик для лечения животных при

диспепсии). Телят 3-й группы (п=6) подвергали комплексному лечению препаратом фармазин - 50 и тимогеном в указанных выше дозах. Животные 4-й (п=6) группы - контроль (интактные, клинически здоровые телята). В 5-й контрольной группе (п=б) - больные диспепсией телята. Кровь для проведения биохимических и общих гематологических исследований по общепринятым методикам брали из яремной вены первый раз до лечения, а затем на 5-е, 10-е и 20-е сутки.

Рис. 1 - Алгоритм исследований

Во второй серии опытов проводили выявление лечебной эффективности применения тимогена трем группам новорожденных телят, имеющих клиниче-

ские признаки гипотрофии и функциональной диспепсии согласно вышеописанным методикам. Телята 4-й группы - контрольные, больные животные, которым на протяжении исследуемого периода (10 суток) лечение не применяли. 5-я группа - здоровые животные. После проведенного курса лечения учитывали количество выздоровевших по клиническим признакам телят (отсутствие диареи и др.), а так же среднесуточный прирост (г) массы животных.

В третьей серии опытов были проведены гистоморфологические исследования состояния органов пищеварения и вторичных иммунокомпетентных органов у телят (п=3) с функциональной формой диспепсии (1-я группа) на 12-е сутки после рождения, которым вводили тимоген в дозе 10 мл/гол/сут - 10 суток, внутримышечно 0,01% раствора. А так же у больных интактных телят - 2-я группа (п=3). Исследовали участки тканей лимфоузлов (предлопаточные), селезенку, печень, рубец, сычуг. Консервацию отобранного патматериала производили 10%-ым раствором нейтрального формалина. Окрашивание гистосрезов проводили гематоксилин-эозином согласно методам классической гистотехни-ки. Микроскопирование и фотодокументирование материала проводили на микроскопе Ломо Р-11 с использованием микрофотонасадки МФН-11. Полученный цифровой материал обработан статистически при помощи аргумента Стьюдента и таблицы Фишера-Снедока.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Общее действие и фармакологические свойства тимогена

Тимоген субстанция - мононатриевая соль дипептида, состоящего из остатков глутаминовой кислоты и триптофана. Химическая формула препарата -С16Н2оН305Ыа. Тимоген оказывает биокорригирующее влияние на реакции клеточного и гуморального иммунитета. Стимулирует процессы регенерации в случае их угнетения, повышает резистентность организма. Нормализует метаболические процессы. Препарат безвреден, не обладает аллергенными, тератогенными, эмбриотоксическими и мутагенными свойствами. При попадании в кровоток тимоген быстро метаболизируется до составляющих его аминокислот, которые затем используются организмом в биосинтетических целях. Иных ка-таболитов в результате введения тимогена не образуется. Период полураспада препарата составляет 30-60 минут.

3.2. Изменения гормональных показателей в крови подопытных телят

Показатели гормональных изменений в крови новорожденных телят с функциональной диспепсией после применения различных вариантов лечения представлены в таблице 1.

В крови новорожденных телят при появлении клинических признаков функциональной диспепсии было установлено содержание кортизола в пределах (44,3±0,69 нмоль/л), в основном соответствующее показателям других исследователей (Головаха В.И., 1995; Ковзов В.Н., 1999).

Учитывая то, что новорожденные телята с первого дня рождения испытывают стрессовое воздействие на организм полученные данные показывают, что

у телят 1, 2, 3-й групп и 5-й контрольной, изначальный уровень кортизола был на 28,4% выше, чем у животных 4-й контрольной группы, где находились здоровые телята. Снижение концентрации кортизола к 10-м суткам в 1-й группе составило 1,7 раза, во 2-й группе - 1,5 раза, 3-й - 1,5 раза, 4-й группе почти без изменений и 5-й группе - 1,7 раза. Полученные данные снижения уровня гормона показывают, что нет значимых изменений в опытных группах по отношению к контрольной (5-й группе) и уровень стрессирующего влияния снижается по мере адаптации организма к окружающей среде и активизации факторов организма формирующих его гомеостаз. Однако, следует отметить, что во 2-й и 3-й группах, где применяли фармазин-50 уровень снижения меньше, чем в 1-й, 2-й и 5-й группах на 11,8%, что характеризует специфичность влияния антибиотиков на иммунно-гормональные связи. К 20-м суткам исследований интенсивность снижения гормона в 1-й группе составила в 1,4 раза, 2-й группе- 1,3 раза, 3-й группе - 1,8 раза, 4-й группе - 1,4 раза и 5-й группе - без изменений.

Таблица 1 - Содержание кортизола в крови новорожденных телят

при различных вариантах лечения

№ п/п Группа, (п=6) Вводимые препараты Уровень кортизола, нмоль/л

Исходный (на 2-е сут.) Через 5 сут. Через 10 сут. Через 20 сут.

1. 1-я опытная тимоген 44,3±0,69 46,3 ±0,7 26,4±1,24** 18,4±1,17 •

2. 2-я опытная фармазин-50 44,3±0,43 44,1±0,33 28,3±0,5" 20,3±1,4*

3. 3-я опытная тимоген+ фармазин-50 44,2±0,40 47,3±0,8* 30,7±2,0** 17,0±1,1"

4. 4-я интактные (здоровые) телята 34,4±4,0 35,1±4,5 30,8±2,6 21,3±1,4*

5. 5-я интактные (больные) телята 44,3±0,8 45,6±0,7 26,1±1,3" 28,1±2,8

Примечание: -р<0,05; -р<0,001.

Исследования содержания гормона тироксина в крови представлены в таблице 2.

Наиболее лучшее соотношение тироксин/кортизол отмечено после окончания лечения у телят 1-й группы (6,1). На 8,2% меньше это соотношение у телят 3-й опытной группы, где применяли совместное лечение тимогеном и фар-мазином-50. У телят 5-й контрольной группы (больные животные) это соотношение составило 5,3, что на 13,2% меньше, чем после применения тимогена. К 20-м суткам исследований, наилучшее соотношение гормонов так же отмечено в 3-й опытной группе - 10,6. На 11,4% меньше от этого в 1-й группе - 9,4. В 5-й контрольной группе (больные телята) оно составило 5,4 и было меньше в 1,4 раза от соотношения в 1-й группе и в 1,9 раза - в 3-й группе.

Таблица 2 - Содержание тироксина в крови новорожденных телят при различных вариантах лечения__

Вводимые препараты Уровень кортизола, нмоль/л

Исходный (на 2-е сут.) Через 5 сут. Через 10 сут. Через 20 сут.

тимоген 131,88±3,57 158,8±1,69" 162,43±1,25 173,18±1,53"

фармазин-50 136,9±3,2 138,5±3,1 144,7±2,9 163,8±3,5*

тимоген+ фармазин-50 136,0±3,6 166,8±3,Г 173,5±1,8 181,1±2,35"

интактные (здоровые) телята 146,1±3,6 150,1±2,7 156,0±3,7 168,0±4,4

интактные (больные) телята 124,7±3,4 130,6±3,6 138,6±1,5 153,8±3,0*

Характерным является также повышение соотношения гормона тироксина к кортизолу у телят опытных групп, которое составило к 10-м и 20-м суткам от изначального значения соответственно: в 1-й группе - 2,1-3,2; во 2-й - 1,72,6; в 3-й - 1,8-3,5; 4-й - 1,1-1,8 и 5-й - 1,8-1,9. Полученные данные свидетельствуют о биокорригирующем и стимулирующем влиянии тимогена по активизации иммуногормональных связей во время становления адаптационных реакций и формирования гомеостаза у новорожденных телят с функциональной диспепсией. Полученные данные при различных вариантах лечения показали, что изменение соотношения ключевых гормонов тироксина и кортизола наиболее лучшим является у животных 3-й группы, где применяли комплексное лечение.

Отмеченное снижение в результате лечения уровня кортизола у телят 1-й и 3-й опытных групп оказывает благоприятное воздействие на организм новорожденных телят с диспепсией, но этот эффект меньше, чем во 2-й группе соответственно на 8,2 и 19,4%, а в 4-й и 5-й контрольных группах на 25,2 и 65,2%. Проведенные нами исследования уровня тироксина в крови телят подопытных групп свидетельствуют о том, что его изначальный уровень (2-й день жизни) соответствует показателям, отмеченным другими исследователями (Головаха В.И., 1995; Ковзов В.Н., 1999, Романюк В.Л., 2002). Но впоследствии во всех группах телят отмечено повышение содержания в крови тироксина, которое в наибольшей степени выражено у животных 1-й и 3-й опытных групп. Учитывая то, что деятельность щитовидной железы контролируется головным мозгом (ретикулярная формация гипоталамус - гипофиз и эфферентные нервные волокна), то следует полагать, что тимоген затрагивает высшие отделы ЦНС, откуда и начинается нейроэндокринная регуляция функции щитовидной железы, формирующей уровень гомеостаза новорожденных телят. Таким образом, повышение уровня тироксина в первые 10 дней жизни телят отражает физиологические процессы в организме новорожденных, направленные на формирование общего адаптационного синдрома, который наиболее ярче проявляется у животных, подвергнутых лечению тимогеном.

3.3. Иммунобиохимические показатели крови телят подопытных групп 3.3.1. Общий белок и белковые фракции

У телят 1-й группы до начала лечения тимогеном уровень общего белка составил 57,4±1,8 г/л, альбуминов - 72,6±1,45%, глобулинов а - 10,3±0,74%, р-9,1±0,24%, у - 9,0±0,8%. На 10-е сутки: общий белок - 62,7± 1,34 г/л; альбумины - 52,б± 1,57%; глобулины а - 11.9±0,6%; р - 10,2±0,25%; у - 25,3±1,22%. На 20-е сутки: общий белок - 71,5±1,3* г/л; альбумины - 49,7±1,2%; глобулины а -12,6±0,9%; р - 11,7±0,4*%; у - 26,0±0,3%.

У телят 2-й группы до начала лечения: общий белок - 51,2±1,7 г/л; альбумины - 69,3±0,6%; глобулины а - 11,1 ±0,84%; р - 9,3±0,9%; у - 10,3±1,0%. На 10-е сутки: общий белок - 55,8±2,7 г/л; альбумины - 55,6±0,4%; глобулины а -11,4±0,84%; Р - 9,4±0,5%; у - 23,6±0,2%. На 20-е сутки: общий белок -71,2±1,0* г/л; альбумины - 56,4±0,27%; глобулины а - 10,7±0,93%; р -9,2±0,7%; у - 23,7±1,3%.

У телят 3-й группы до начала лечения: общий белок - 53,0±1,6 г/л; альбумины - 69,6±0,91%; глобулины а - 11,3±0,7%; р - 9,6±0,3%; у - 9,5±0,6%. Через 10 суток: общий белок - 81,1±1,6* г/л; альбумины - 53,3±0,9%; глобулины а -12,1±0,7%; р - 10,7±0,65%; у - 23,9±0,5%. На 20-е сутки: общий белок -88,1±1,0* г/л; альбумины - 48,4±0,3*%; глобулины а - 12,8±0,27%; р -11,9±0,61 *%; у - 26,9±0,43%.

У телят 4-й группы до начала лечения: общий белок - 66,Ш=1,4 г/л; альбумины -57,9±0,47%; глобулины а - 16,4±0,4%; р - 15,7±0,5%; у - 10,0±0,15%. Через 10 суток: общий белок - 71,0*1,3 г/л; альбумины - 49,7±0,9%; глобулины а - 15,8±0,52%; р -12Д±0,3%; у - 22,3*0,68%. Через 20 суток: общий белок 72,(Ш),8 г/л; альбумины -49,9±0,3%; глобулины а- 15,1±0,5%; р-11 Д±0,3%; у - 23,&±0Д7%.

У телят 5-й (контроль) группы до начала лечения: общий белок - 56,4±1,9 г/л; альбумины - 67,1±0,9%; глобулины а - 15,0±0,5%; Р - 9,0±0,3%; у -8,9±0,5%. На 10-е сутки: общий белок - 59,7±1,7 г/л; альбумины - 60,8±0,6%; глобулины а - 13,2±0,3%; р - 9,8±0,6%; у - 16,2±0,34%. На 20-е сутки: общий белок - 62,5±1,9 г/л; альбумины - 60,5±0,97%; глобулины а - 12,4±0,7%; р -10,1±0,26%; у -17,0±0,3%.

Проведенные исследования показали, что изначальный (на 2-е сут) уровень общего белка был в пределах физиологических значений. Содержание у-глобулинов (8,0-10,3%) во всех группах изначально было пониженным, что соответствовало данным других исследований (Головаха В.И., 1995 и др.). Повышение у-глобулинов к 10-м суткам у телят 4-й группы (здоровые ж-е) было в 2,2 раза, 1-й группы - в 3,1 раза, 2-й группы - в 2,2 раза, 3-й группы - в 2,5 раза и 5-й группы (больные животные) - в 1,8 раза.

3.3.2.

зЬЗ^З. Показатели липидного обмена

У телят 1-й группы до начала лечения уровень триглицеридов составил 0,20±0,09 ммоль/л, холестерина - 0,68±0,14 ммоль/л, р-липопротеидов -0,45±0,02 ед. На 10-е сутки изменения составили: триглицериды - 0,28±0,01 ммоль/л; холестерин - 1,3±0,04* ммоль/л и Р-липопротевды - 0,69±0,04 ед. К

20-м суткам исследований: триглицериды - 0,42±0,02 ммоль/л, холестерин -1,5±0,07* ммоль/л; Р-липопротеиды - 0,77±0,03 ед.

У телят 2-й группы изначальный уровень был следующим: триглицериды -0,19±0,009 ммоль/л; холестерин - 0,65±0,12 ммоль/л; Р-липопротеиды - 0,38±0,05 ед. Через 10 суток триглицериды - 0,24±0,01 ммоль/л; холестерин - 0,7б±0,13 ммоль/л; р-липопротеиды - 0,41 ±0,03 ед. На 20-е сутки: триглицериды - 0,37±0,02* моль/л; холестерин -1,4±0,18* моль/л; Р-липопротеиды - 0,62±0,05 ед.

У животных 3-й группы до начала лечения: триглицериды - 0,26±0,01 ммоль/л; холестерин - 0,53±0,11 ммоль/л; Р-липопротеиды -0,4±0,03 ед. Через 10 суток: триглицериды - 0,56±0,17 ммоль/л; холестерин - 1,04±0,09 ммоль/л; Р-липопротеиды - 0,84±0,02 ед. Через 20 суток: триглицериды - 0,71 ±0,22 ммоль/л; холестерин - 1,35±0,10* ммоль/л; р-липопротеиды - 0,95±0,05 ед.

У телят 4-й группы изначальный уровень составил: триглицериды -0,26±0,01 ммоль/л; холестерин - 1,6±0,2 ммоль/л; Р-липопротеиды - 0,5±0,0б ед. На 10-е сутки: триглицериды - 0,35±0,02 ммоль/л; холестерин - 1,2±0,15 ммоль/л; р-липопротеиды - 0,57±0,04 ед. На 20-е сутки: триглицериды -038±0,04 ммоль/л; холестерин- 1,35±0,12 ммоль/л; Р-липопротеиды-0,7±0,05 ед.

У телят 5-й группы исходный уровень был следующим: триглицериды -0,20±0,01 ммоль/л; холестерин - 1,02±0,22 ммоль/л; Р-липопротеиды - 0,4±0,04 ед. Через 10 суток изменения составили: триглицериды - 0,26±0,01 ммоль/л; холестерин — 1,0±0,15 ммоль/л и Р-липопротеиды - 0,51±0,03 ед. На 20-е сутки: триглицериды - 0,3±0,01 ммоль/л; холестерин - 1,07±0,15 ммоль/л; Р-липопротеиды - 0,58±0,03 ед.

Накопление триглицеридов в крови новорожденных телят следует связывать с усилением секреции их из печени в кровь в составе липопротеидов низкой плотности, а так же нарушением их катаболизма в кровяном русле (Петри-на С.Н., 1989). Повышение уровня триглицеридов, р-липопротеидов и холестерина следует так же связывать с уменьшением содержания кортизола, который мобилизует энергетические ресурсы (процессы катаболизма) и регулирует реакцию адаптации новорожденных к изменениям условий существования (Лю-бецька Т.В., 2000). Отмеченные изменения содержания Р-липопротеидов были наиболее выраженными у телят 3-й группы, где лечение осуществляли комплексно тимогеном и фармазином-50.

3.3.3. Показатели ферментативной активности крови

Исследования показали, что уровень активностей АлАТ и АсАТ у всех телят опытных групп до начала лечения находился в пределах нижней границы физиологического клиренса и в последующем после лечения наибольшая интенсивность (в пределах нормы) (Головаха В.И., 1995) активности ферментов отмечена у телят 3-й группы. Отмеченное повышение уровня активности ферментов в пределах нормы является результатом адаптационно-компенсаторных реакций организма новорожденных в первые сутки жизни, но на скорость повышения этой активности у телят 3-й группы, очевидно, оказывает стимулирующее действие глутамил - триптофановый комплекс препарата, когда увеличивается степень синтеза ферментов при пониженной скорости выведения их

(Patterson W.H., et al., 1986; Bauer J.E. et al., 1989). Изначально повышенный уровень ЩФ в крови телят всех групп, очевидно, свидетельствуют о наличии в организме заболеваний печени и остеодистрофических явлений, сопутствующих гипотрофии (Коромыслов В.Ф., 1973; Кондрахин И.П., 1985). Таким образом, основная роль, присущая ЩФ по отложению фосфатов кальция в костной ткани, в наибольшей степени проявляется у телят 3-й группы, где применяли тимоген совместно с фармазином-50. Превышение активности ЩФ у телят этой группы над активностью фермента у животных 1-й и 2-й опытных групп к 10-м суткам составило соответственно в 1,4 и 2,6 раза, что характеризует биокорри-гирующее влияние препарата тимогена.

Отмеченное повышение активности АсАТ у телят исследуемых групп связывается с нарушением в организме при стрессе центральной гемодинамики и кислородтранспортной функции крови, что приводит к органной гипоксии. Эти данные подтверждаются исследованиями других авторов (Теппермен Дж., 1989). Повышение активности АлАТ у телят опытных групп следует рассматривать как усиление аланинглюкозного пути с «выбросом» из клеток глюкозы за счет ее дефосфорилирования постепенной активностью ЩФ. Аналогично можно отметить, что усиление липолиза у телят опытных групп возможно за счет ферментации по АсАТ, что в свою очередь предусматривает участие ли-пидных компонентов в цитолизе. (Рослый И.Н., и др., 2002).

3.4. Показатели общего клинического анализа крови телят 3.4.1. Гемоглобин, эритроциты, лейкоциты, СОЭ

Показатели общего гематологического анализа крови телят свидетельствуют о наиболее значимых изменениях по гемоглобину, как одному из основных формирующих буферную систему крови. Исходный уровень (2-е сутки после рождения) гемоглобина у подопытных телят был ниже нижней границы физиологических значений (Соколюк В.М., 1997), которые составляют к этому дню у здоровых животных - 95,0-130,0 г/л, соответственно по группам: 1-я - на 14,9%; 2-я - 13,7%; 3-я - 11,6%; 4-я - 12,7% и 5-я - 16,9%. К 10-м суткам уровень гемоглобина повысился до нормы в 3-й и 4-й (контрольной) группах телят. Таким образом, тимоген, применяемый в качестве лечебного средства при диспепсии телят, за счет повышения концентрации гемоглобина снижал возникший ацидоз в тканях новорожденных по причине накопления молочной кислоты, образующейся в повышенных количествах при недостатке в тканях кислорода, а так же из-за нарушения функции сердечно-сосудистой системы и вследствие имеющейся диареи.

Содержание эритроцитов в крови подопытных телят всех групп до начала лечения было ниже физиологического показателя (Соколюк В.М., 1997, Кондрахин И.П., 2004) на 16,0%. К 10-м суткам после начала лечения во всех группах, кроме 5-й (контроль), где были больные интактные телята, количество эритроцитов поднялось до нормы (Колб В.Г., с соавт., 1976), что характеризует стимулирующий эритропоэз характер действия препаратов, применяемых для лечения. Снижение уровня лейкоцитов у телят всех групп за период исследований характеризует наличие физиологического лейкоцитоза (Смирнов A.M., 1988).

3.4.2. Лейкограмма

Изучение процентного соотношения между отдельными видами лейкоцитов крови новорожденных телят опытных групп показало, что на протяжении всего времени наблюдения изменения по отдельным видам лейкоцитов были незначительными и в основном в пределах физиологических значений для данных животных (Кондрахин И.П., 2004).

До начала лечения во всех группах телят отмечен повышенный уровень лейкоцитов от нормы на 13,0-33,3%. Отмеченная стимуляция моноцитоза у телят 1-3 групп характеризует биокорригирующие свойства применяемых препаратов, причем это повышение бьшо в два раза выше в крови телят 1-й и 3-й групп по отношению ко 2-й, где применяли один фармазин-50. Снижение содержания нейтрофилов палочкоядерных у телят 3-й группы к 10-у дню исследований на 16,2%, очевидно, связано с иммуномодулирующими свойствами глутамил-триптофанового комплекса препарата (снижение на 5,3% так же отмечено у телят 1-й группы). Но уровень этих клеток не выходил за нижнюю границу физиологических параметров (8,0-10,0%).

Повышение уровня процентного содержания лимфоцитов к 10-м суткам было наиболее заметным у телят 3-й группы после лечения тимогеном и фарма-зином-50. Такой незначительный лимфоцитоз (повышение на 10,8%), скорее всего, указывает на быстрое выздоровление (Кондрахин И.П., 2004).

3.5. Показатели неспецифической резистентности в крови телят

Изучение влияния различных вариантов лечения новорожденных телят с функциональной диспепсией показало, что к 10-м суткам после начала лечения уровень ЛАСК, БАСК и ФАНСК был наибольшим в 3-й опытной группе животных (табл. 3).

Таблица 3 - Показатели неспецифической резистентности телят

Время исследований Показатели, (п=6)

Лизоцимная активность, % Бактерицидная активность, % Фагоцитарная активность, %

Группа 1. На 2-е сутки Через 10 суток Через 20 суток 17,3±0,5 18,6±0,23 19,2±0,23 32,3±2.0 37,3±1,8 40,5±1,8 41,93±0,57 52,87±1,41* 71,0±3,11*

Группа 2. На 2-е сутки Через 10 суток Через 20 суток 17,5±0,3 18,5±0,3 19,6±0,1* 30,7±0,9 34,7±0,6* 40,5±1,1* 43,3±0,7 40,5±1,1* 72,8±2,5**

Группа 3. На 2-е сутки Через 10 суток Через 20 суток 17,4±0,2 19,6±0,1* 20,4±0,1* 29,7±1,1 38,9±1,6* 45,3±0,5* 42,5±0,8 61,3±2,3* 76,3±1,6*

Группа 4. На 2-е сутки Через 10 суток Через 20 суток 17,05±0,3 18,1±0,3 19,0±0,3 31,3±1,7 34,3±1,5 37,2±1,4 41,8±0,7 47,6±1,1* 61,3±1,2**

Группа 5. На 2-е сутки Через 10 суток Через 20 суток 16,7±0,6 18,0±0,4 18,4±0,3 28,3±0,64 30,7±0,6 35,9±1,4* 41,2±0,8 47,9±0,9* 61,4±2,4*

Повышение фагоцитарной активности нейтрофилов, особенно с 10 по 20-е сутки, следует рассматривать как индукцию пептидами тимогена дополнительной выработки арахидоновой кислоты клетками организма телят в этом возрасте. Ара-хидоновая кислота является субстратом для синтеза под действием липоксигеназы лейкотреинов - сильных стимуляторов нейтрофилов (Дейл М.М. с соавт., 1998).

3.6. Гистоструктурные изменения в иммунокомпетентных и органах пищеварения

Гистоструктурные изменения у телят после лечения тимогеном и фарма-зином-50 в основном характеризовались: селезенка - лимфатические фолликулы с реактивными центрами, центральные артерии пустые; лимфоузел - ретикулярная ткань густо заполнена лимфоцитами, лимфатических фолликулов в корковом веществе нет. Кровеносные сосуды полнокровные; печень - межуточный отек; пространство Диссе расширено, ретикулоэндотелиоциты набухшие, центральные вены и синусоидные капилляры в основном пустые; сычуг -отмечен небольшой отек собственной пластинки слизистой оболочки без воспалительной инфильтрации; рубец - субэпителиальный небольшой отек без воспалительной инфильтрации; тонкая кишка - воспалительной инфильтрации нет, отек слабо выражен, редкая очаговая воспалительная инфильтрация, представленная лимфоцитами и моноцитами, местами отмечено слущивание покровного эпителия и отдельных его клеток.

У телят (больные) контрольной группы выявленные гистоморфологиче-ские изменения соответствовали наличию острого катарального дескваматив-ного гастроэнтерита и вторичного иммунодефицитного состояния.

3.7. Эффективность различных вариантов лечения телят с фу нкциональной диспепсией

Эффективность от применения различных способов лечения телят с функциональной диспепсией приведена в таблице 4.

Таблица 4 - Лечебная эффективность применяемых препаратов при

Группы телят Вводимые препараты Кол-во телят Выздоровело, (%), через 10 суток Масса тела на начало опыта, кг (среднее) Среднесуточный прирост, г (среднее)

1. Тимоген 22 18(81,8) 38,1±0,22 480,0±5,0

2. Фармазин-50 24 16 (66,6) 38,0±0,30 437,0±3,6

3. Тимоген + Фармазин-50 24 22 (91,6) 37,9±0,26 481,2±5,6

4. Контроль (здоровые животныее) 18 18(100,0) 37,8±0,25 478,3±3,2

5. Контроль (больные животные) 19 2 (10,5) 38,0±0,30 376,1±6,7

В 1-й группе телят, где лечение проводили тимогеном, из 22 голов клинические признаки диспепсии отсутствовали (выздоровело) через 10 суток у 18 (81,8%) животных. Во 2-й опытной группе телят выздоровление к 10-м суткам отмечено у 16 (66,6) голов. Среднесуточный прирост у животных этой группы был на 43,0 г (9,0%) меньше, чем у телят 1-й группы, а 33,3% продолжало проявлять признаки диспепсии после 10-и дней жизни еще в течение 8-10 суток.

В 3-й группе телят, где были животные, которых лечили тимогеном совместно с фармазином-50, выздоровело 91,6%. Среднесуточный прирост живой массы у них составил 481,2±5,6 г, что превышало аналогичный показатель у телят 2-й группы на 44,2г(10,1%) и было равным показателю у животных 1-й группы.

У телят 4-й (контрольной) группы, где были здоровые телята, среднесуточный прирост составил 478,3±3,2 г, что на 2,9 г (0,7%) меньше этого значения в 3-й группе.

Выздоровление телят к 10-м суткам после рождения в 5-й (контроль) группе было незначительным - 10,5%, а среднесуточный прирост живой массы составил в среднем 376,1±6,7 г, что меньше этого показателя у здоровых животных 4-й группы на 21,4% и телят 3-й группы - на 21,9%.

Выздоровление телят опытных групп к 15-м суткам после рождения характеризовалось следующими клиническими признаками: масса тела соответствовала среднефизиологическим значениям для данного возраста и породы. Телята уверенно стояли и передвигались. Голова поднята, хорошо выражены двигательно-пищевые рефлексы. Температура, пульс и дыхание в пределах физиологических значений. Дыхание ровное, глубокое. Тоны сердца хорошо слышны. К 10-м суткам у выздоровевших животных отсутствовала диарея. При пальпации живота болезненных ощущений нет. Слизистые оболочки розово-красного цвета.

ВЫВОДЫ

1. Биокорректор тимоген (глутамин - триптофан) обладает выраженной эн-докринно-иммуной активностью, способствующей сохранению динамического гомеостаза организма при проявлении общего адаптационного синдрома у новорожденных телят с функциональной диспепсией.

2. Применение тимогена внутримышечно в дозе 10 мл/гол/сут. 0,01% раствора, в течение 10-и суток, совместно с фармазином-50 внутримышечно в дозе 5,0 (250 мг) мл/гол., на 2-е сутки после рождения телятам с функциональной диспепсией способствовало выздоровлению к 10-м суткам 91,6% животных, с среднесуточным приростом живой массы 481,2 г, что превышает показатели лечения телят отдельно тимогеном или фармазином-50 соответственно на: 9,8 и 0,25%; 25,0 и 10,1%.

3. Гормонокорригирующее действие к 10-м суткам после лечения телят с функциональной диспепсией тимогеном и фармазином-50 проявляется снижением содержания кортизола в 1,4 раза и повышением содержания тироксина на 27,5% против снижения содержания кортизола в 1,6 раза и повышения содержания тироксина на 11,1% у больных (контроль) диспепсией телят.

4. Иммунобиохимические показатели новорожденных телят к 10-м суткам после применения тимогена и фармазина-50 характеризовались повышением уровня у-глобулинов в 2,5 раза, против повышения к этому сроку в 2,2 раза у здоровых телят. В контрольной группе (больные диспепсией) телят - повышение уровня у-глобулинов было в 1,8 раза. Снижение уровня альбуминов к 10-м суткам было наибольшим после применения тимогена и тимогена с фармазином-50 (на 27,6 и 23,5%). У здоровых и больных телят соответственно на 14,2 и 9,4%.

5. Изменения показателей липидного обмена к 10-м суткам после применения тимогена и фармазина-50 составили: повышение уровня холестерина в 2,5 раза и р-липопротеидов в 2 раза, против практически неизменного состояния у телят (контроль) больных диспепсией.

6. Активность аминотрансфераз и щелочной фосфатазы после лечения телят тимогеном и фармазином-50 характеризовалась к 10-м суткам повышением активности аспартатаминотрансферазы на 19,6%, аланинами-нотрансферазы - 26,7% и щелочной фосфатазы - 23,9%. В контрольной группе (больные диспепсией) телят активность аспартатаминотрансферазы повысилась на 19,4%, аланинаминотрансферазы - 17,0% и щелочной фосфатазы - 8,8%.

7. Гематологические показатели к 10-м суткам после начала лечения телят тимогеном и фармазином-50 составили: повышение содержания гемоглобина на 8,0%; эритроцитов - 27,9%; снижение содержания лейкоцитов на 33,0% при неизменной СОЭ. В контрольной группе (больные) телят отмечена тенденция незначительного повышения гемоглобина, эритроцитов и снижение содержания лейкоцитов, СОЭ - без изменений.

8. Показатели уровня неспецифической резистентности у новорожденных телят к 10-м суткам после начала лечения тимогеном и фармазином-50 имели следующие значения: повышение лизоцимной активности на 12,6%; бактерицидной активности - 30,9% и фагоцитарной активности -44,2%. В контрольной группе (больные) телят - повышение бактерицидной активности на 8,4%, фагоцитарной активности - 16,2% при малозначимых изменениях лизоцимной активности.

9. Общие гистоструктурные изменения в иммунокомпетентных и органах пищеварения новорожденных телят к 12-м суткам после лечения тимогеном и фармазином-50 свидетельствуют о наличии остаточных явлений острого катарального десквамативного гастроэнтерита. Практически полностью отсутствует десквамация эпителия, отек и воспалительная инфильтрация. В лимфоузлах и селезенке происходят изменения, характерные для иммунной стимуляции. У телят контрольной группы морфологические изменения со стороны преджелудка, желудка и тонкой кишки свидетельствуют о наличии острого катарального десквамативного гастроэнтерита. Патологические изменения в лимфоузлах и селезенке свидетельствуют о вторичном иммунодефицитном состоянии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Иммуномодулятор тимоген рекомендуется для лечения новорожденных телят с функциональной диспепсией путем применения в дозе 10 мл/гол/сут 0,01% раствора внутримышечно, в течение 10-и суток совместно с фармазином-50 в дозе 5,0 (250 мг) мл/гол/сут внутримышечно, в течение 4-х суток.

Список опубликованных работ

1. Бондаренко Е.М. Биохимические показатели крови новорожденных телят с функциональной диспепсией до и после применения иммуномодулятора тимогена/ Безбородое Н.В., Бондаренко Е.М.// Мат. межд. конф. Карач. Черкесск, госуд. техн. акад., п. Нижний Архыз. - 2009. - С. 345-351.

2. Бондаренко Е.М. Иммунобиохимические показатели новорожденных телят с функциональной диспепсией при лечении тимогеном/ Бондаренко Е.М., Безбородое Н.В.// Мат. межд. конф. Воронеж, ВНИВИПФиТ, -2009.-С. 83-87.

3. Бондаренко Е.М. Показатели общего клинического анализа крови телят с функциональной диспепсией после лечения тимогеном/ Бондаренко Е.М., Безбородое Н.В.// Мат. межд. конф. БелГСХА, Белгород. - 2009. - С. 50.

4. Бондаренко Е.М. Применение иммуномодулятора тимогена для лечения телят с функциональной диспепсией/ Безбородов Н.В., Бондаренко Е.М.// ж. Молочное и мясное скотоводство, 2009. - С. 24-26. (Издание рец. ВАК РФ)

5. Бондаренко Е.М. Показатели липидного обмена у телят с функциональной диспепсией после лечения тимогеном/ Бондаренко Е.М., Безбородов Н.В.// Бюллетень науч. работ БелГСХА Вып. 16, Белгород, 2009. - С. 4960.

6. Бондаренко Е.М. Иммуномодулирующие свойства тимогена / Безбородов Н.В., Бондаренко Е.М. и др. // Методические рекомендации, БелГСХА, 2009.-50 с.

Формат 60x84,1/16. Усл. печ. л. 1,0. Заказ № 3464. Тираж 100 экз. Типография БВЦ

Актуальность темы. Интенсификация отрасли молочного скотоводства предусматривает, прежде всего, выполнение мероприятий по обеспечению населения продуктами питания. Важнейшей задачей при этом является сохранность молодняка (Кондакова И.А., 1999; Булыгина М.В., 2000; Сочнев В.В. с соавт., 2000; Когденко Н.В., 2001; Антипов В.А., 2005). Заболевания новорожденных животных, связанные с нарушением обменных процессов, иммуноде-фецитом и адаптацией к условиям промышленного животноводства, широко распространены и причиняют большой экономический ущерб (Аликаев В.А., с соавт.,1983; Анохин Б.М., 1985; Авакаянц Б.М., 1992; Буланкин А.Л., 1996; Шипицын А.Г., 2004 и др.).

В настоящее время предложено немало способов и средств лечения и профилактики диспепсии новорожденных телят (Карпуть И.М., 1989; Щербаков Г.Г., 1990; Ортман Р.А. с соавт., 1995; Кондакова И.А., 1999; Булыгина М.В., 2000; Турченко А.Н., 2005; Харитонов Л.В., 2006; Задорожин П.А. с соавт., 2006; Гамидов М.Г., 2006; Петоян Г.Р., 2007; Мирошниченко Е.Б., 2008), однако проводимые лечебно-профилактические мероприятия постоянно нуждаются в совершенствовании и конкретизации с учетом факторов вызывающих заболевание (Аксененко С.А., 2006).

Таким образом, выявление общих закономерностей возникновения и протекания диспепсии у новорожденных животных, равно как создание и внедрение на этой основе новых средств лечения и профилактики данного заболевания, составляет на нынешнем этапе весьма актуальную проблему молочного скотоводства.

В немалой степени решению этих вопросов может способствовать применение средств пептидной природы с иммунокорригирующей направленностью действия, которые способны активизировать защитно - приспособительные механизмы адаптации новорожденных к развитию диспепсий рефлектор-но - стрессового (функционального) характера и тем самым повысить сохранность и последующую продуктивность животных.

Цель и задачи исследований. Целью работы было изучение терапевтической эффективности, имму но биохимических и гематологических показателей в организме новорожденных телят с функциональной диспепсией, при использовании для лечения синтетического йммуномодулятора тимогена.

Для достижения цели на разрешение были поставлены следующие задачи: изучение терапевтической эффективности применения синтетического тимогена при лечении новорожденных телят с функциональной диспепсией; определение гормональных изменений у новорожденных телят с функциональной диспепсией до и после применения тимогена; изучение степени активизации факторов неспецифического иммунитета после применения тимогена; исследование гематологических и биохимических показателей крови новорожденных телят при лечении тимогеном; изучение гистоструктурных изменений в тканях иммунокомпетент-ных и органов пищеварения у телят, после применения тимогена с лечебной целью.

Научная новизна. Впервые изучены особенности влияния синтетического йммуномодулятора тимогена на процессы обмена веществ и эффективность лечения новорожденных телят с функциональной диспепсией. Комплексными исследованиями установлено, что глутамил - триптофановый комплекс препарата тимоген повышает иммуно—гормональную активность организма новорожденных телят. Предложен эффективный вариант лечения телят с функциональной диспепсией.

Теоретическая и практическая значимость работы. На основании полученных результатов эффективности применения синтетического тимогена и данных биохимических и гистологических исследований тканей животных, дано научное обоснование к его практическому применению в ветеринарии, в качестве средства для лечения новорожденных телят с функциональной диспепсией.

Предложенный производству способ лечения новорожденных телят с функциональной диспепсией, может быть использован в молочном скотоводстве при проведении лечебно - профилактических мероприятий входящих в комплекс диспансеризации животных. Иммуномодулирующие свойства тимо-гена способствуют повышению уровня процессов метаболизма организма телят при функциональной диспепсии и восстанавливают нарушенный гомео-стаз.

Положения, выносимые на защиту

1. Применение тимогена индуцирует формирование защитных функций у новорожденных телят с функциональной формой диспепсии, путем повышения уровня неспецифического иммунитета.

2. Тимоген обладает гормонокорригирующим действием при лечении новорожденных телят с функциональной формой диспепсии.

3. Способ лечения телят с функциональной диспепсией путем применения тимогена, способствует оптимизации биохимических показателей крови у новорожденных телят при становлении защитно- приспособительных механизмов.

4. Гистоструктурные изменения в тканях вторичных иммунокомпетент-ных и органах пищеварения у телят с функциональной диспепсией после лечения тимогеном, подтверждают иммуномодулирующие и биокорригирующие свойства препарата.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на международных научно-производственных конференциях Белгородской ГСХА, 2009, ВНИВИПФиТ г. Воронеж, 2009, Карачаево - Черкесской государственной техн. академии п. Нижний Архыз, 2009, расширенном заседании кафедры диагностики болезней, терапии, акушерства и хирургии БелГСХА, 2009 г. Публикации

1. Бондаренко Е.М. Биохимические показатели крови новорожденных телят с функциональной диспепсией до и после применения иммуномодулятора тимогена/ Безбородов Н.В., Бондаренко Е.М.// Мат. межд. конф. Карач. Черкесск, госуд. техн. акад., п. Нижний Архыз. - 2009. - С. 345351.

2. Бондаренко Е.М. Иммунобиохимические показатели новорожденных телят с функциональной диспепсией при лечении тимогеном/ Бондаренко Е.М., Безбородов Н.В.// Мат. межд. конф. Воронеж, ВНИВИПФиТ, -2009.-С. 83-87.

3. Бондаренко Е.М. Показатели общего клинического анализа крови телят с функциональной диспепсией после лечения тимогеном/ Бондаренко Е.М., Безбородов Н.В.// Мат. межд. конф. БелГСХА, Белгород. — 2009. — С. 50.

4. Бондаренко Е.М. Применение иммуномодулятора тимогена для лечения телят с функциональной диспепсией/ Безбородов Н.В., Бондаренко Е.М.// ж. Молочное и мясное скотоводство, 2009. — С. 24-26. (Издание рец. ВАК РФ)

5. Бондаренко Е.М. Показатели липидного обмена у телят с функциональной диспепсией после лечения тимогеном/ Бондаренко Е.М., Безбородов Н.В.// Бюллетень науч. работ БелГСХА Вып. 16, Белгород, 2009. - С. 4960.

6. Бондаренко Е.М. Иммуномодулирующие свойства тимогена/ Безбородов Н.В., Бондаренко Е.М. и др.// Методические рекомендации, БелГСХА, 2009. - 50 с.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ВЫВОДЫ

1. Биокорректор тимоген (глутамил - триптофан) обладает выраженной эндокринно-иммуной активностью, способствующей сохранению динамического гомеостаза организма при проявлении общего адаптационного синдрома у новорожденных телят с функциональной диспепсией.

2. Применение тимогена внутримышечно в дозе 10 мл/гол/сут. 0,01% раствора, в течение 10-и суток, совместно с фармазином-50 внутримышечно в дозе 5,0 (250 мг) мл/гол., на 2-е сутки после рождения, телятам с функциональной диспепсией, способствовало выздоровлению к 10-м суткам 91,6% животных, с среднесуточным приростом живой массы 481,2 г, что превышает показатели лечения телят отдельно тимогеном или фармазином-50 соответственно на: 9,8 и 0,25%; 25,0 и 10,1%.

3. Гормонокорригируюгцее действие к 10-м суткам после лечения телят с функциональной диспепсией тимогеном и фармазином-50, проявляется снижением кортизола в 1,4 раза и повышением тироксина на 27,5%, против снижения кортизола в 1,6 раза и повышения тироксина на 11,1% у больных (контроль) диспепсией телят.

4. Иммунобиохимические показатели новорожденных телят к 10-м суткам после применения тимогена и фармазина-50, характеризовались повышением у - глобулинов в 2,5 раза, против повышения к этому сроку в 2,2 раза у здоровых телят. В контрольной группе (больные диспепсией) телят - повышение у - глобулинов было в 1,8 раза. Снижение уровня альбуминов к 10-м суткам было наибольшим после применения тимогена и тимогена с фармазином — 50 (на 27,6 и 23,5%). У здоровых и больных телят соответственно на 14,2 и 9,4%.

5. Изменения показателей липидного обмена к 10-м суткам после применения тимогена и фармазина-50 составили: повышение холестерина в 2,5 раза и Р-липопротеидов - 2 раза, против практически неизменного состояния у телят (контроль) больных диспепсией.

6. Активность аминотрансфераз и щелочной фосфатазы после лечения телят тимогеном и фармазином-50, характеризовалась к 10-м суткам повышением активности аспартатаминотрансферазы на 19,6%, аланина-минотрансферазы - 26,7% и щелочной фосфатазы - 23,9%. В контрольной группе (больные диспепсией) телят, активность аспартатаминотрансферазы повысилась на 19,4%, аланинаминотрансферазы - 17,0% и щелочной фосфатазы - 8,8%.

7. Гематологические показатели к 10-м суткам после начала лечения телят тимогеном и фармазином-50 составили: повышение гемоглобина на

8,0%; эритроцитов — 27,9%; снижение лейкоцитов на 33,0% при неизменной СОЭ. В контрольной группе (больные) телят отмечена тенденция незначительного повышения гемоглобина, эритроцитов и снижение содержания лейкоцитов, СОЭ — без изменений.

8. Показатели уровня неспецифической резистентности у новорожденных телят к 10-м суткам после начала лечения тимогеном и фармазином-50 имели следующие значения: повышение лизоцимной активности на 12,6%; бактерицидной активности - 30,9% и фагоцитарной активности -44,2%. В контрольной группе (больные) телят - повышение бактерицидной активности на 8,4%, фагоцитарной активности — 16,2% при малозначимых изменениях лизоцимной активности.

9. Общие гистоструктурные изменения в иммунокомпетентных органах новорожденных телят к 12-м суткам после лечения тимогеном и фармазином-50 отражают.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Иммуномодулятор тимоген рекомендуется для лечения новорожденных телят с функциональной диспепсией, путем применения в дозе 10 мл/гол/сут., 0,01% раствора внутримышечно, в течение 10-и суток совместно с фармазином-50 в дозе 5,0 (250 мг) мл/гол/сут внутримышечно, в течение 4-х суток.

Заключение

Приведенные в обзоре литературы материалы различных исследований показали, что в незаразной патологии крупного рогатого скота одно из основных мест занимают неспецифические воспалительные процессы, которые возникают в желудочно-кишечном тракте новорожденных телят.

Исследования дают основание считать, что имеется положительная корреляция между функциональными нарушениями и неспецифическим воспалением органов у коров-матерей и возникновением расстройств желудочно-кишечного тракта у новорожденных телят, полученных от них. Кроме того, статистические данные показывают, что внутренние незаразные заболевания возникают у коров чаще в случаях, когда будучи телочками, они переболевали диспепсией.

Мнение отечественных и зарубежных исследователей в отношении этиологии возникновения диспепсии, в основном сходится на негативном влиянии условно-патогенной микрофлоры, которая развивается на неблагоприятном фоне кормления и содержания новорожденных.

Данные исследований в настоящее время показывают, что проблема выращивания молодняка остается весьма актуальной в промышленном животноводстве. Исследователями достаточно полно изучены многие вопросы этиопа-тогенеза, клинического проявления и диагностики диареи новорожденных телят. Специалистами разработаны соответствующие профилактические, лечебные методы и средства, которые способствуют профилактике и выздоровлению заболевших животных, но вопрос остается актуальным и требует дальнейшего углубленного изучения.

В немалой степени решению этих вопросов может способствовать разработка и применение препаратов и средств пептидной природы, относящихся к группе биокорректоров, которые способны с максимально приближенными к физиологическим параметрам воздействиями, активизировать защитно-приспособительные механизмы адаптации новорожденных при развитии диспепсий, особенно рефлекторно-стрессового характера.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Научно-производственные опыты проведены на новорожденных телятах хозяйств: АОЗТ «Комсомолец», ОПХ «Белгородское» и АОЗТ племзавод «Ра-зуменский» Белгородского района. Содержание коров привязное в условиях МТФ в зимний период года и с выгоном в летний период на открытые при-фермские загоны. За 10 суток перед родами коров переводили в родильные отделения. Новорожденные телята содержались в условиях профилактория. Рацион кормления коров был сбалансирован по основным питательным компонентам. Хозяйства были благополучны по инфекционным и инвазионным заболеваниям.

Опытные группы новорожденных телят формировали по принципу подбора пар-аналогов (время рождения, живая масса при рождении, физиологическое состояние, порода, протекание беременности и родов у коров-матерей и др.) Подбор больных животных в группы осуществляли согласно классификации (Митюшин В.В., 1989), которая характеризует диспепсию как заболевание имеющее различное происхождение и разный характер патологического процесса. Исходя из этого положения, диспепсия делится на три вида: органического происхождения; функционального (рефлекторно-стрессового) характера и казеиново-безоарную болезнь. Как отмечают исследователи, диспепсия рефлекторно-стрессового характера может быть как у нормально развитых (нормотрофиков), так и у физиологически незрелых телят (гипотрофиков), протекая одновременно с уже имеющейся патологией.

В опытные группы подбирали новорожденных телят из числа гипотрофиков, с диагнозом после рождения (2-е сутки) на диспепсию функционального происхождения.

Диагноз на наличие диспепсии у новорожденных телят ставили на основании отмечаемых клинических признаков, на 2-е сутки после рождения. Были отмечены частые акты дефекации (5-6 раз/сут). Угнетенное состояние у тео лят. Температура 39,0 С, пульс - 120 уд./мин., количество дыхательных движений - 62 в минуту. Кал жидкий, водянистый желтого цвета с примесью слизи. Масса новорожденных телят соответствовала средним породным (симментальская порода) показателям и составляла у телят гипотрофиков в среднем 32 кг/гол. Волосяной покров густой, относительно блестящий. Кожа умеренно влажная, эластичная. У телят отмечены умеренно развитые мышцы тела и они достаточно уверенно встают и передвигаются. Сосательный рефлекс выражен удовлетворительно. Поза стояния в первые сутки после рождения длится в течение 20-30 минут. Изгиб спины прямой, отмечена лордозная осанка после вставания. Слезотечение слабо выражено. Состояние глазных яблок без патологических изменений. Телята на 2-е сутки после рождения не имели явных признаков обезвоживания и интоксикации. В ротовой полости у телят при рождении насчитыали 6-7 резцовых зуба. Видимые слизистые оболочки розового цвета, влажные, блестящие, десны розово-красные. На щипок в области крупа, телята реагируют замедленным вскакиванием. Среднесуточный прирост составил в первые 5 суток в среднем 360 грамм.

В ходе сбора анамнеза в хозяйствах, где содержались новорожденные телята опытных групп, при взятии молозива у коров-матерей не соблюдались ветеринарно-санитарные правила по предварительной обработке вымени. Коровы-матери в большинстве своем имели субклинический мастит различного количества долей вымени. Молозиво телятам на МТФ хозяйств часто выпаивали позже одного часа после рождения.

В профилактории МТФ не соблюдались в достаточной мере правила ветеринарной санитарии по содержанию телят в изолированных клетках. Кроме того, отмечено не всегда сбалансированное кормление коров-матерей в сухостойный период, где преобладал силосно-концентратный тип кормления. В рационе стельных коров практически отсутствовали корнеплоды, а за 15 дней до ожидаемого отела не был исключен силос из рациона кормления.

Норма концентрированных кормов в период сухостоя не соблюдалась и была заниженной на 40-50% (1-1,5 кг). Сахаро-протеиновое отношение так же было меньше от физиологического и составило 0,7:0,9 ( норма 0,8-1,5:1,0), а фосфорно-кальциевое отношение было 1:1,27 (норма 1:2).

В хозяйствах не выдерживалось соотношение структуры рациона по грубым, сочным и концентрированным кормам, которое составило 30/35/25 у сухостойных коров и 30/10/50, за 10 суток до родов (норма соответственно: 35/40/15 и 40/10/40).

Анализ рациона коров в зимне-стойловый период в хозяйствах показал дефицит (%): к.ед. - 20; переваримого протеина — 26; обменной энергии — 15; фосфора - 10; сахара - 15; цинка-25; йода-25 и меди - 15.

Исследования технологии кормоприготовления и кормления коров в хозяйстве показали, что в рационах недостает длинностебельчатого сена, что приводит к нарушению рубцового пищеварения. Силос не всегда был хорошего качества. У коров отмечался длительный понос. У большинства исследуемых коров клиническими исследованиями отмечали матовость волосяного покрова, реакция на внешние раздражители ослаблена. Животные неохотно встают. Область печеночного притупления иногда болезненная. При перкуссии в верхней части 11-12-го межреберий часто отмечали тимпанический звук. Пульс и тоны сердца слабые. У большинства коров снижена упитанность. У коров после родов отмечали частое задержание последа, телята ослабленные.

При исследованиях крови отмечено повышение кетоновых тел (ацетоук-сусная, бета-оксимасляная кислоты и ацетон) в два раза (2,35 ммоль/л). Уровень белка повышен - 98,3 г/л, глюкоза — 3,9 ммоль/л, а резервная щелочность по группе опытных коров — матерей в сухостойный период составила 32 об.%.

Отмеченные изменения показывают наличие у коров хронического кетоза.

Вышеперечисленные факторы нарушения технологии содержания сухостойных коров, создавали предпосылки для возникновения процессов нарушения физиологического протекания пищеварения у новорожденных и способствовали возникновению диспепсии рефлекторно-стрессового характера (Анохин Б.М., 1991; Кондрахин И.П., 2004).

Дифференциальный диагноз. Учитывая то, что диспепсия — это поли-этиологичное заболевание, был проведен клинико-лабораторный диагноз в отношении: казеиново-безоарной болезни телят по отсутсвию внезапного появления колик у животных, а также отсутствия облизывания теленка со стороны матери; колибактериоза телят, при котором основные клинические признаки заболевания как угнетение, вялость, отсутствие аппетита, а так же наличие патогенных штаммов кишечной палочки (акты бактериологических исследований в хозяйстве) отсутствовали; анаэробной энтеротоксемии, когда должна присутствовать лихорадка и примесь крови в каловых массах; вирусной диареи, при которой кроме диареи и лихорадки имеются слизистые истечения из носовой полости; сальмонеллеза, который в основном отмечается у телят старше 10-дневного возраста, а также воспаления пуповины, где должна быть температура и воспалительный отек у основания пуповины (Митюшин В.В., 1989; Анохин Б.М., 1991).

Новорожденных телят формировали в группы от коров-матерей находящихся на последнем месяце стельности, клинически здоровых и переведенных в родильное отделение за 10 суток до родов.

В качестве средства лечения новорожденных телят с функциональной диспепсией, применяли синтетический иммуномодулятор тимоген, состоящий из глутаминовой кислоты и триптофана (рис. 1). кгн2

Рис. 1 Структурная формула L-глутамил - L-триптофана (тимоген)

Проведенные ранее исследования (Морозов В.В., 1981; Морозов В.В., Хавинсон В.Х., 2000) показали высокое сродство дипептида с мембранными рецепторами тимоцитов.

Согласно проведенным исследованиям, иммуномодулирующие свойства дипептида реализуются путем трансляции содержащегося в нем сигнала через систему вторичных посредников, часть из которых также имеет пептидную природу. Именно эти качества глутамил — триптофанового комплекса обуславливают широкий спектр биокорригирующих свойств и эффективность применения этого комплекса в разных областях ветеринарии.

На основании результатов предварительно проведенного, комплексного изучения (ЗАО МБ НПК «Цитомед», г. Санкт-Петербург) эффективности применения препарата тимогена на различных экспериментальных животных, в 1991 году Главным управлением ветеринарии с государственной ветеринарной инспекцией Государственного АПК СССР были утверждены Технические условия и наставление на применение его в ветеринарии (ТУ 10.07. 169-91).

В качестве сравнения эффективности лечения применяли в одной из контрольных групп новорожденных телят препарат фармазин-50 (макролидо-вый антибиотик), используемый в хозяйствах в качестве базисно применяемого препарата.

Основные лабораторные исследования эффективности применения тимогена проведены на кафедре диагностики болезней, терапии, акушерства и хирургии ФГОУ ВПО Белгородской ГСХА, в Белгородской областной ветеринарной лаборатории, вирусологической лаборатории Центра Госсанэпиднадзора Белгородской области и патологоанатомического отделения гор. больницы №2 г. Белгорода.

Опыты по выявлению механизма действия, лечебно-профилактической эффективности и взаимосвязи показателей неспецифической резистентности, гормонального баланса и метаболических изменений в крови новорожденных телят до и после лечения отражены на рис. 2.

Всего в опытах было использовано 143 новорожденных телят, имеющих

Рис. 2. Алгоритм исследований выраженную форму функциональной диспепсии с явлениями гипотрофии.

У новорожденных телят гипотрофиков был отмечен невысокий мышечный тонус, сосательный рефлекс был не всегда хорошо выражен, поза стояния затормаживается до 3-4 часов, что указывает на недостаточное функциональное состояние нервно-мышечного тонуса. Масса тела у новорожденных телят была в среднем на 14% меньше, чем у нормотрофиков. Подкожная жировая клетчатка местами была слабо выражена. Кожа нередко морщинистая, эластичность невысокая, дыхательные движения в основном поверхностные, пульс прощупывается недостаточного наполнения. Слизистые бледно-розовые. Температура, пульс, дыхание соответствовали нижней границе физиологической нормы (Т - 39,0 °С; П - 120 уд./мин.; Д - 45 движ./мин.).

В первой серии опытов были изучены морфологические и биохимические показатели крови новорожденных телят (п=6) с функциональной диспепсией до и после лечения (со 2-х суток после рождения) тимогеном 0,01% раствором, внутримышечно, в дозе 10 мл/гол/сут в течение 10-и суток (1-я группа). Во 2-й группе (п=6) новорожденных телят с функциональной диспепсией, лечение проводили фармазином — 50 в дозе 5,0 (250мг) мл/гол/сут внутримышечно, в течение 4-х суток (базово применяемый антибиотик для лечения животных при диспепсии). Телят 3-й группы (п=6) подвергали комплексному лечению препаратом фармазин - 50 и тимогеном в указанных выше дозах. Животные 4-й (п=6) группы — контроль (интактные, клинически здоровые телята). В 5-й контрольной группе (п=6) - больные диспепсией телята.

Кровь для проведения биохимических и общих гематологических исследований брали из яремной вены первый раз до лечения, а затем на 5-е, 10-е и 20-е сутки.

Исследования содержания гормонов кортизола и тироксина в крови новорожденных телят проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа (Инструкция Департамента государственного контроля качества, эффективности и безопасности лекарственных средств и медицинской техники МЗ РФ от 05.01.2001 г., а так же методики ООО «Хемамедико», 2000 г.; Кондрахин И.П., 2004). Данные исследования основаны на показаниях спектрофотометра оптической плотности связанных гормонов со специфическими антителами, фиксированными в твердой фазе, с последующим расчетом их концентрации по калибровочной кривой (Дедов И.И. с соавт., 2006).

Определение остальных биохимических показателей в крови подопытных коров проводили согласно общепринятым методикам (Кондрахин И.П., 2004). Определение общего белка осуществляли согласно реакции основанной на взаимодействии белков с ионами меди в щелочной среде (окраска синего цвета). Фотометрическое определение окраски давало результат, соответствующий концентрации общего белка в пробе.

Определение альбуминов, а, (3 и у-глобулинов в сыворотке крови осуществляли при помощи метода учета протекания электрофореза на бумаге. Принцип метода состоит в том, что смесь белков под воздействием постоянного электрического поля при определенном градиенте потенциалов и рН среды разделялась на фракции. В последующем число и величина фракций выявлялась обработкой бумажных полос красками, окрашивающими белки, с последующим количественным определением белковых фракций методом элюирования краски.

Триглицериды определяли путем катализирования липазной реакции гидролиза триглицерида с образованием жирных кислот и эквимолярного количества глицерина. В последующем глицерин при наличии АТФ гексокиназы и глицерофосфатазы окислялся кислородом воздуха с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. Пероксидаза катализировала окисление хромогенных субстратов перекисью водорода в присутствии хромогенных субстратов и хлорфенола с образованием окрашенного продукта, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации триглицеридов в пробе, что измерялось фотометрически (Кондрахин И.П., 1985).

Наличие концентрации холестерола определяли при помощи методики гидролиза эфиров холестерола холестиринэстеразой. Образовавщийся в результате гидролиза и имеющийся в пробе холестерол, окислялся кислородом воздуха под действием холестериноксидазы с образованием эквимолярных количеств перекиси водорода. В последующем, под влиянием пероксидазы перекись водорода окисляла хромогенные субстраты с образованием окрашенного соединения; интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации холестерола в пробе, что также измерялось фотометрически (Делек-торская JI.H. с соавт., 1974).

Изучение содержания (3-липопротеидов осуществляли турбидиметриче-ским методом (Покровский А.А., 1969). Активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) определяли унифицированным методом Райтмана-Френкеля. Алани-наминотрансфераза катализировала, в присутствии а-кетоглутората, переами-нирование L-аланина с образованием пирувата. Его содержание в пробе определяли фотометрически.

Для определения аспартатаминотрансферазы использовали так же унифицированный метод Райтмана-Френкеля. АсАТ катализировала, в присутствии а-кетоглутарата, переаминирование L-аспартата с образованием оксало-ацетата. Его содержание в пробе определялось затем фотометрически.

Исследование активности щелочной фосфотазы (ЩФ) проводили по унифицированному методу (конечной точке). Щелочная фосфатаза катализирует реакцию гидролиза n-нитрофенилфосфата с образованием эквимолярного количества n-нитрофенола и фосфата. Учитывая то, что скорость образования n-нитрофенола прямо пропорционально активности ЩФ, она измерялась фотометрически (Меньшиков В.В., 1987).

Лизоцимную активность сыворотки крови (ЛАСК) определяли фото-электроколориметрическим методом в модификации отдела зоогигиены УНИИЭВ (1979) с применением суточной культуры Micrococcus lysodeiticus, содержащей 500 млн. микробных тел в 1 мл. Метод основан на учете изменений оптической плотности, так как непрямая количественная оценка лизоцима основана на его способности вызывать лизис бактерий (Емельяненко П.А. с соавт., 1987; Воронин Е.С. с соавт., 2002).

Бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) определяли фотонефелометрическим методом, так же по методике отдела зоогигиены УНИИЭВ (1979) с использованием суточной агаровой культуры Е. Coli, содержащей 2 млрд. микробных тел в 1 мл. Метод основан на учете изменений оптической плотности среды, содержащей микробную взвесь и сыворотку крови, вследствие угнетения размножения тест микроба испытуемой сывороткой.

Фагоцитарную активность нейтрофилов сыворотки крови (ФАНСК) учитывали по методике основанной на учете числа бактерий, захваченных нейтрофилами в процессе их совместного инкубирования в термостате.

Дифференциальный подсчет лейкоцитов (лейкограмму) проводили путем микроскопии сухих фиксированных окрашенных мазков крови опытных коров по общепринятой методике (Кондрахин И.П. с соавт., 2004).

Кровь для проведения лабораторных исследований отбирали из яремной вены телят первый раз на 2-е сутки после рождения (до введения препарата), затем на 5-е , 10-е и 20-е сутки.

Во второй серии опытов проводили выявление лечебной эффективности применения тимогена. Было сформировано 4 группы новорожденных телят, имеющих клинические признаки гипотрофии и функциональной диспепсии. Телятам 1-й группы (п=23) со второго дня после рождения, вводили тимоген 0,01% раствора внутримышечно в дозе 10 мл/гол/сут., в течение 10 дней. Животным 2-й группы (п=26) со второго дня после рождения вводили фармазин-50 в дозе 5,0 мл/гол/сут., в течение 4-х дней внутримышечно. Телятам 3-й группы (п=28) применяли комплексное лечение тимогеном и фармазином-50 в указанных выше дозах. Телята 4-й группы (п=20) — контрольные, больные животные, которым на протяжении исследуемого периода (10 суток) лечение не применяли.

После проведенного курса лечения, учитывали количество выздоровевших по клиническим признакам телят (отсутствие диареи), а так же среднесуточный прирост (г) массы животных.

В третьей серии опытов были проведены гистоморфологические исследования состояния органов пищеварения и вторичных иммунокомпетентных органов у телят (п=3) с функциональной формой диспепсии (1-я группа) на 12-е сутки после рождения, которым вводили тимоген в дозе 10 мл/гол/сут -10 суток, внутримышечно 0,01% раствора. А так же у больных интактных телят - 2-я группа (п=3). Исследовали кусочки тканей лимфоузлов (предлопа-точные), селезенку, печень, тимус, рубец, сычуг. Консервацию отобранного патматериала производили 10%-ым раствором нейтрального формалина. Окрашивание гистосрезов проводили гематоксилин-эозином согласно методам классической гистотехники. Микроскопирование и фотодокументирование материала проводили на микроскопе Ломо с использованием микрофотона-садки МФН-11. Полученный цифровой материал обработан статистически при помощи аргумента Стьюдента и таблицы Фишера-Снедока.