Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Патоморфогенез и патоморфологическая диагностика инфекционной бурсальной болезни птиц

•.*) ^ г 5 9 %

%4. О "

МИНИСТЕРСТВО СсЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФВДЕРАТ,Щ САШТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

БАКУЛИН Валерий Александрович

УДК 619:591.2-091:616.07/9:636.5

ПАТОМиРФОГЕНЕЗ И ПАТОЖРФОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА И СЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬЮЙ БОЛЕЗШ ПТИЦ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

Автореферат диссертации на сбискани^ ученой степени доктора ветеринарных наук

Санкт-Петербург, 1992 г.

Работа выполнена во Всесоюзном научно-исследовательском ветеринарном институте птицеводства.

Научный консультант - доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент ВАСХНИЛ Коровин Р.Н.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки ЬССР лаков М.С..

доктор ветеринарных наук,профессор Зеленский В.П..

доктор ветеринарных наук,профессор Ибрагимов A.A.

Ведущая организация - Саратовский зооветеринарный институт.

Защита диссертации состоится " ^ " хдд^ г.

в 13 часов на заседании специализированного совета Д 120.20.01 в Санкт-Петербургском ветеринарном институте по адресу: 196084, г.Санкт-Петербург-, Московский проспект 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского ветеринарного института.

Автореферат разослан с^оС'&хЯ- 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета доцент

Вжишинз И Ь.

!.. 0Б1НАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ у, *:... ^¿.-Актуальность работы. Инфекционная бурсальная болезнь птиц ~ ХКББ, болезнь Гамборо, инфекционный бурсит) - широкораспростра--ненное, малоизученное вирусное заболевание, сопровозда-оиееся поражением лимфоидных органов цыплят с последующим развитием иммунодефицита, в результате которого повышается восприимчивость птиц к возбудителям заразных заболеваний.

Существует ряд работ, как* правило зарубежных исследователей, посвяшенных изучению морфологии и морфогенеза вируса ИББ, патогенеза заболевания, патоморфологических изменений во внутренних органах цыплят, отмечаемых при ИББ (Ибрагимов A.A.,1974; Peters С. , 1967; Cheville к.р. , I9G7; V.'eikel S. , ЮТ; Ley D.H. et al. , 1933 ).

Однако многие аспекты указанных проблем нуждаются в дополнительных исследованиях. Имеющиеся одиночные сообщения зарубежных авторов о динамике латокорфологических и ультраструктурн лс изменений при ИББ, охватывают незначительный срок наблюдения. Необходимы исследования, посвященные возможности регенерации лим;оидных органов, особенно фабрициевой сумки, в условиях пере-болевания птиц ИББ. Недостаточно изучены вопросы, связанные с морфологией вируса ИББ, с возникновением при определенных условиях трубчатых вирусоподобных структур и не исследованы их биологические свойства, а также влияние их присутствия в вируссо-держащем материале на биологические свойства вируса с типичней, икосаэдрической морфологией. Имеются неполные и не систематизированные сведения по дифференциальной патоморф о логической диагностике ИББ и не отобраны наиболее информативные критерии, позволявшие бы более достоверно реаать подобные вопросы.

Приведенные данные и актуальность проблемы послужили основанием для проведения настоящей работы.

Цель и задачи исследований: Целью работы было изучение па-тоыореологических и ультраструктурных изменений во внутренних органах цыплят при .экспериментальной и спонтанной формах ИББ,а также разработка дифф еренциальной па то морф о л о г и ч е с ко й диагностики данного заболевания.

для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить патоморфологические, гистохимические и ультра-

структурные изменения во внутренних органах птиц при экспериментальной и спонтанной формах ИББ;

- Исследовать морфологию некоторых эталонных вакцинных и эпизоотических штаммов вируса ИББ, репродуцированных на различных миологических моделях;

- изучить патоморфологические изменения во внутренних органах цыплят при аденов1фусном гепатите с тельцами-включениями, "Синдроме снижения яйценоскости-76п, болезни ыарека, лим-(|оидном лейкозе, саркоме Рауса, пастереллезе, колибактериозе, кокцидиозе, при ассоциированном течении колибактериоза и кок-ццдиоза, ИББ и аденовирусного гепатита и разработать основные положения для дифференциальной патомор(|ологической диагностики ИББ.

Научная новизна работы. Проведены исследования, охватывавшие длительный срок наблюдения динамики патомои^ологических изменений во внутренних органах птиц, зараженных различными штаммами вируса ИББ и изучен морфогенез регенерации лимфоид-ных органов. Исследованы патоморфологические изменения при спонтанном проявлении ИББ у цыплят из птицехозяйств, расположенных в различных природноклиматических зонах страны. Проведены сравнительные электронномикроскопические исследования эталонных вакцинных и эпизоотических штаммов, а такке отечественных иэолятов вируса ИББ и изучена возможность возникновения вирусоподобных трубчатых структур при репродукции вируса на различных биологических моделях. Исследованы ультраструктурные изменения в лимфоидных органах цыплят в динамике вирусной инфекции. Изучены патоморфологические изменения во внутренних органах птиц при болезни Марека, лим]оидном лейкозе, саркоме Рауса, аденовирусном гепатите с тельцами-включениями, "Синдроме снижения яйценоскости-76", пастереллезе, колибактериозе, кокцидиозе, ассоциированном течении колибактериоза и кокцидиоза и разработана дифференциальная патоморфо-логическая диагностика ИББ от других болезней птиц. В ряде птк.,ехозяйств, диагностирован аденовирусный гепатит с тельцами-включениями, изолирован и идентифицирован аденовирус птиц, с использованием которого в дальнейшем изучена патомореология экспериментального аденовирусного гепатита и исследовано влияние ИББ на развитие аденовирусной инфекции.

Практическая значимость работы. Полученные данные могут быть использованы для дальнейшего изучения биологических свойств вируса ИББ и патогенеза, вызываемого им заболевания, при проведении диагностических исследований, а также пои разработке и производстве средств диагностики и профилактики ИББ. Результаты исследований могут быть полезны при написании мс.ю-граоий, учебников и атласов по морфологии и морфогенезу вирусов, либо посвяшенных патоморфбгенезу и диагностике болезней птиц.

Реализация результатов исследований. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены в практику: "Геко-мевдации по г:атомо р.; о логической диагностике инфекционной бур-сальной болезни (ИББ)", одобренные Птицепромом СССР 26.05.81: "Временные методические указания по диагностике болезни Гам-боро", утвервденные ГУВ СССР 19.07.90, Я 044-3; "Краткое руководство по электронномикроскопической диагностике вирусных болезней птиц", одобренное ГУВ СССР 07.03.91 }? 043-6, а также ВАиШ1Л - 27.02.91.

..¡атериалы диссертации использованы при разработке кнакти-вированной вакцины против болезни птиц "Синдром снижения ях'ще-носкости" Ошмгшект НТд на опытное применение вакцины утвержден Г/Л СССР 23.09.39), и живой вкрусвакцины против ИББ (Комплект КГц на опытное применение вакцины утверяден ГУВ СССР 23.07.91).

Апробация -'аботы. Резз'льтаты исследований долонены на Всесоюзной конференции молодых ученых и аспирантов, работающих в области птицеводства, г.Загорск, 1979 г.; на Всесоюзной конференции "Разработка, апробация и государственный контроль ветеринарных препаратов", г.Москва, ВГНКИ, 1931 г.; на Научно-производственной конференции "Ветеринарное обеспечение крупных ливотноводческих комплексов на промышленной основе", Ленинград, 1932 г.; на II Всесоюзном съезде параэитоценологов, ".Киев. 1933 г.; на IX'Всесоюзной научно-производственной конференции по патоморфологии сельскохозяйственных животных, г.Каунас, 1934 г.

Публикации результатов исследований. Основные положения диссертации опубликованы в 22 работах.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из вве-

дения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы, приложения.

Объем диссертации 261 страниц. Список литературы включает 331 : сточник, в том числе 253 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 83 рисунками и 4 таблицами.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследования

Изучение патоморфологии экспериментальной формы ИЕБ проводили в 2 опытах на 244 цыплятах 34-дневного возраста, породы "Белый леггорн".В первом опыте 84 цыпленка 34-дневного возраста были заражены интраназально патогенным штаммом " Keanitz " вируса ИББ, а 30 незараженных птиц служили контролем. Убой опытных и контрольных цыплят про водили на I, 3, 7, 12, 17, 20, 25, 30 , 40 , 50 , 60 и 120 сутки после заражения. Предназначенные для гистологических исследований пробы бабрициевой сумки, селезенки, тиьуса эзо^агальных и ценальных миндалин, почек, печени, двенадцатиперстной кишки и, выборочно, других органов, фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина и в 96° этиловом спирте, с последующей заливкой в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, на соединительную ткань по Ван-Гизону и Слинченко, на нейтральные гликозаминоглика-. ны по Хочкиссу; на кислые гликозаминогликаны по Стидмецу, на РНК по Браше.

Во втором опыте 100 цыплят 34-дневного возраста были заражены интраназально патогенным штаммом "52/70'' вируса .ИББ, а 30 незараженных птиц служили контролем. Убой цыплят проводили на I, 3, 7, 12, 25, 60 и 120 сутки после заражения. Объекты и методы гистологических исследований были те же, что и в первом опыте.

Изучение патоморфологических изменений во внутренних органах цыплят при заражении их отечественными изолятами вируса ИББ роводили на 180 цыплятах 35-дневного возраста, зараженных интраназально вируссодеркашим патматеоиалом. Для заражения птиц использовали изоляты "Братцевский", "Орехово-Зуевский", "Истро-Сенежский", "Нальчикский", "Большевик", "Смена", "Ухтинский". Цыплят убивали на 3, 7, 10, 15, 25 сутки после

чался отек мемжелезистой ткани, особенно в области соединительнотканных перегородок складок слизистой оболочки, гиперемия,наличие лимфоцитарно-гистиоцитарных пролифератов в интерстиции складок, распространяющихся на железистую ткань и нарушающих структуру складок. Ь маточном отделе яйцевода отмечался отек слизистой оболочки, гиперемия, наличие очаговых или диффузных лимфоцитарно-гистиоиитарных пролифератов. Б эпителиальных клетках яйцевода и наиболее часто в его маточном отделе, отмечали внутриядерные тельца-включения. Подобный комплекс изменений в репродуктивном, тракте установили в своих исследования Van Eck J.H.B, et. el. СЬ7о),уоп H. Ко hl er et. al. ШЬ2), XamagucM S. , Tanlguohi T. (I9ö3). При исследовании материала от'птиц, зараженных вирусом CCrt-76 внутримышечно, нами были отмечены поражения мышечной ткани в виде отека, гиперемии, нарушения структуры кровеносных сосудов, развития периваскулярных лимфоцитарно-гистиоцитарных пролифератов, дистрофических изменений в мышечных волокнах и формирования очаговых некрозов. .

Заражение цкпдяг иэолятом "19/89" аденовируса птиц сопровождалось развитием аденовирусного гепатита с тельцами-включениями, с характерными клиническими признаками и патоморфологическими изменениями. В печени с 3 суток после заражения наблодалась гиперемия, очаговые кровоизлияния, наиболее выраженные в области капсулы органа, вакуолизация цитоплазмы гепатоцитов и формирование микронекрозов. В отдельных пробах выявлялись внутриядерные тельца-включения, которые на о сутки имели довольно четкую морфологию, йериваскулярно или в непосредственной близости от некротических очагов выявлялись лимфоцитарно-гистиоцитарные пролифераты, которые на а сутки после заражения приобретали достаточно крупные размеры и локализовались в различных участках, но чаще в области капсулы печени. Наблюдалось нарушение целостности кровеносных сосудов, периваскулярные и разлитые кровоизлияния, набухание цитоплазмы клеток Куцфера с наличием в ней фагоцитированного материала. В ядрах гепатоцитов выявлены включения двух типов: эозинофильные и базофильные. первые бьтли гомогенные, розового цвета, округлой, овальной, ре--е неправильной формы с ободком просветления по периферии включения. Чцерный хроматин в виде глыбок был оттеснен к оболочке ядра. Базофильные включения были интенсивно-синего цвета и ча-

сто сливались с ядерным хроматином полностью заполняли ядро, которое в подобных случаях было в 2-3 раза больше, чем ядра гепатоцитов, не содержащие включения. Отмечалась также зернистая дистрофия эпителия желчных протоков и его десквамация, а в отдельных случаях пролиферация.

В отдельных случаях у птиц, имевших ярко выраженные изменения печени, на 6-8 сутки после заражения отмечали панкреатит с наличием базофильных и эозинофильных внутриядерных телец-включений в клетках железистой ткани, а также спленит с внутриядерными тельцами-включениями в ретикулярных клетках. В фабрициевой сукке на 3 сутки после заражения наблюдалось обеднение фолликулов лимфоцитами, что на б сутки сменялось сильной гипоплазией лимфоидных фолликулов, уменьшением их в 1,5-2 раза, обеднением лимфоцитами коркового и мозгового слоев фолликулов, в отдельных случаях отеком и утолщением меяфолликулярных соединительнотканных перегородок. У птиц, павших и убитых, в состоянии агонии на 6-8 сутки после заражения, с наличием интенсивных изменений внутренних органов, в фабрициевой сумке находили сильно атрофированные фолликулы, в которых, особенно в мозговом слое, почти атсугствовали лимфоциты, а структура фор -мировалась в основном ретикулярными клетками. Складки слизистой оболочки были истончены, ветвистые, межцолликулярные соединительнотканные перегородки утолщены, гиперемированы, изредка с очаговыми кровоизлияниями. Сведения о поражении лшфэид-ных органов, в том числе фабрициевой сумки при аденовирусных инфекциях, противоречивы. Ряд авторов ( Faaiy a.m. et al. , 1976; Grimes T.l!. et al. , 1977; Grimes ТЛ1. and King D.\ J., 1977; Hoffman R. end Dom p. , 1977) отмечали атрофию тимуса, селезенки и фабрициевой сумки, в то же время имеются сообщения (Ибрагимов А.А., Горюнова Т.И., 1987; Reece н.ь. et al., 1986) о том, что при аденовирусном гепатите в фабрициевой сумке отмечаются изменения, которые отражают неспецифическую ре-.акцию на антигенное воздействие аденовирусов на организм цыплят. Подученные нами данные подтверждают сведения последних авторов, что однако не исключает возможности другого пути развития патологического процесса.

11атоморфологические изменения при спонтанной форме аденовирусного гепатита с тельцами-включениями, исследованные

наш на материале из 3 птицехозяйств страны, в которых впервые было зарегистрировано данное заболевание и ввделен вирус, в дальнейшем использованный в наших экспериментах, в целом были подобны тем, которые отмечались при исследовании экспериментального аденовирусного гепатита с тельцами-включениями.

Имеются сообщения ( ?а<11у а.г.. et а1. , 1976) о том, что для успешного развития аденовирусного гепатита, особенно его спонтанного проявления, необходимо воздействие на организм птиц иммунодепрессируюших факторов, в том числе вируса ИББ. Проведенные нами исследования показали, что экспериментальгое заражение цыплят штаммом "52/70" вируса ИББ за сутки до инфицирования изолятом "19/89" аденовируса птиц способствует более яркому клиническому проявлению аденовкусного гепатита с тельцами-включениями. Если в группах цыплят, зараженных только вирусом ИББ или аденовирусом, смертность соответственно составляет 10 и 20%, то цри ассоциированном течении заболеваний она достигала 45$. Одновременно увеличивалось с 40 до 70% количество птиц, имевших макроскопические поранения печени, характерные для аденовирусного гепатита. Гистологическими исследованиями были установлены более интенсивные поражения печени, а также более частая генерализация аденовирусной инфекции, что подтверждалось увеличением с 5 до 2Э/0 количества случаев сочетания гепатита с панкреатитом с интрануклеарными включениями в железистых клетках и спленитом с интрануклеарными включениями в ретикулярных клетках. При ассоциированном течении инфекций также значительно интенсивнее были изменения в лимфоидных органах.

3. В ы в о д ы

I. Переболевание цыплят ИББ сопровождается серозно-гемор-рагическим, либо фибринозным бурситом, серозно-геморрагическим спленитом, акцидентальной инволюцией ти^са, костного мозга, эзофагальных и цекальных миндалин, нефрозо-нефритом, 'а также точечными или разлитыми кровоизлияниями в скелетной мускулатуре и железистом желудке.

1.1. Характер и динамика патоморфологических изменений во внутренних органах цыплят, экспериментально зараженных 7 отечественными изолятами вируса ИББ и референтными штаммами "52/70"

и " Kemnitz " аналогичны. Отличия в вирулентности различных штаммов и изолятов патоморфологически проявляются в разной интенсивности поражения фабрициевой сумки и других лимфаидных органов.

1.2. Патоморфогенез спонтанного проявления ИББ, исследованный на материале от цыплят с 29 птицефабрик разных природно-климатических зон страны в целом подобен динамике патоморфоло-гических изменений при экспериментальной форме заболевания.

2. Ведущим патоморфологическим признаком ИББ является некроз клеточных элементов в B-зависимых зонах центральных и периферических органах иммуногенеза.

2.1. В фабрициевой сумке в начальный период заболевания отмечается массовый некроз лимфоцитов, а затем ретикулярных клеток с образованием в большинстве фолликулов некротических очагов коагуляционного характера, атрофией фолликулов и заменой их на железистые структуры, реже кисты. У птиц реконвалес-центов в 50% случаев возможно восстановление структуры фабрициевой сумки за счет новообразования и значительно реже путем регенерации атрофированных фолликулов.

2.2. При спонтанном заражении вирусом ИББ птиц, имеющих к нему антитела, в фабрициевой сумке может отмечаться местная иммунная реакция, при которой наряду с атрофией единичных фолликулов происходит формирование обширных лимфоцитарных пролифера-тов с образованием в них лимфоидных фолликулов.

2.3. В тимусе в начальный период заболевания наблюдается гиперемия, гиперплазия цитоплазмы ретикулярных клеток, макро-фагальнай реакция, некроз лимфоцитов в мозговом и, особенно, в корковом слое долек, увеличение количества и размеров телец Гассаля.

2.4. В костном мозге отмечается снижение общего числа клеточных элементов, некроз эритроцитоь, увеличение количества ма!фофагов, содержащих фагоцитированный материал.

2.5. В селезенке наблюдается гиперемия сосудов красной цульпы, скопление эритроцитов и макрофагальная реакция в области артериальных гильз, некроз лимфоцитов в красной пульпе, периартериальных лимфатических влагалищах и фолликулах.

2.6. В эзофагальных и цекальных миндалинах изменения отсутствуют или проявляются в начальной стадии заболевания гиле-

ного возраста, из которых было сформировано 3 группы опытных и I группа контрольных птиц, которых соответственно заражали: патогенным штаммом E.coli серотипа Og, подкожно, в дозе 500 млн. микробных тел на цыпленка; патогенным штаммом E.te-neiia , в дозе 100 тыс. ооцист на цыпленка; патогенным штаммом Е.tenelia , а затем на 5 сутки патогенным штаммом Е.со-, в тех же дозах, что и предыдущие группы.

Убой опытных и контрольный птиц проводили на 3, 7, 10, 15 сутки после заражения. Объекты и методы гистологических исследований были те :".е, что и в предыдущих опытах.

Опыт по изучению влияния КЕБ на развитие аденовирусного гепатита с тельцами-включениями проводили на 120 цыплятах 30-дневного возраста, из которых было сформировано 4 группы: I группу птиц заражали интрайазально штаммом "52Л0" вируса 11ББ; 2 - интраназально изолятом "19/89" аденовируса птиц; 3 - инт--раназально штаммом "52Д0" вируса ИББ, а затем, через 24 часа, инфицировали изолятом "19/89" аденовируса птиц; 4 группа птиц служила незасаженным контролем. Убой цыплят и отбор проб внутренних органов проводили на 3, 6, 10 сутки после заражения аденовирусом. Гистологическая обработка материала осуществлялась по тем же методикам, что и в предыдущих опытах.

Иццекс сумки ("ПС" или соотношение массы фабрициевой сумки к массе тела цыпленка) определяли по общепринятой методике. Полученные результаты обрабатывали статистически, с определением уровня достоверности по Сгыоденту (Каминский Л.С.,1964).

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Патоморфология экспериментальной формы ИББ

Опыты по изучению патошрфологии экспериментальной формы ИББ позволили исследовать патоморфогенез остргаго течения заболевания, которое наблюдалось при заражении птиц штаммом "52/70" вируса ИББ и отечественным изолятом данного вируса "Ухтинский", а также, при суб клики чес ком проявлении болезни у цыплят, загаженных штаммом " Kemnitz " и рядом отечественных изолятов.

При остром течении ИББ заболеваемость птиц доставила 75%, а смертность 31%. при субклинической форме заболевание протекало бессимптомно, смертность цыплят не отмечалась. В начальных стадиях болезни (3 сутки после заражения) при остром те-

чении ПББ отмечали увеличение фабрициевой сумки в 1,5-3 раза, напряженность и ослизненность серозной оболочки, желтушное окрашивание органа. Наблюдалась гиперемия слизистой оболочки, на-личгл в ней точечных, пятнистых или разлитых кровоизлияний.Иногда встречался тотальный геморрагический или фибринозный бурсит. У отдельных птиц одновременно выявляли точечные, реже полосчатые геморрагии в мышцах бедра, груди и крила. Иногда отмечались кровоизлияния в слизистой оболочке железистого желудка на границе его с мышечным желудком. Тимус в данный срок был в пределах нормы, либо несколько уменьшен и гиперемирован. Селезенка в отдельных случаях была незначительно уменьшена.

В последующие сроки (с 12-Г7 суток после заражения), в большинстве случаев наблюдалась атрофия фабрициевой сумки, которая часто была в 2-3 раза меньше, чем у контрольных незара-кенных птиц и имела вид дряблого, тонкостенного, серозного мешочка, через стенку которого просматривались контуры истонченных складок слизистой оболочки.

На 120 сутки в 2 из 5 случаев при заражении птиц штаммом "52/70" и в 4 из 7 при заражении штаммом "Кег.г.из " фабрицие-ва сумка была в пределах нормы, а у остальных орган был в той или иной степени атрофирован.

При гистологическом исследовании внутренних органов цыплят, зараженных эталонными аташами "52/70" и " КетяИг а также семью отечественными изолятами вируса ИББ, выявлена в целом однотипная динамика патоморф ологических изменений, которая в обобщенном виде достаточно полно характеризует патомор-г[огенез ИББ. Какие-либо принципиальные особенности в плане патогенеза, вызываемого ими заболевания или наличие у выделенных изолятов вируса ИББ, измененного, либо "дополнительного" тропизма к каким-нибудь тканям и органам цыплят не установлено.

Через сут.ки после заражения к фолликулах фабрициевой сумки отмечали некроз лимфоцитов, набухание цитоплазмы ретикулярных клеток, отек и гиперемию складок слизистой оболочки. В тимусе можно было выявить некробиотические изменения в лимфоцитах коркового слоя долек, в почках у отдельных птиц зернистую дистрофию в эпителии канальцев.

Па 3 сутки в фабрициевых сумках различных циплят было отмечено несколько вариантов па то морфологических изменений, отражающих различную степень интенсивности течения патологического

процесса и условно разделениях на следующие типы:

1. Сильное уменьшение размеров и обеднение фолликулов лимфоцитами вследствие их некроза, при одновременной гиперплазии ретикулярных клеток, придавших фолликулам вид "пчелиных сотов". Одиночные фолликулы с некротическими очагам коагуляционкогэ характера в мозговом слое. Умеренный, иногда сильно выраженный, отек ме)гф.олликулярной соединительной ткани, инфильтрация <?■? ликфоцитаоно-гкстиоцитарными клетками. Очаговые или ди&уцкие !фовоизлияния, иногда принимающие характер тотального геморрагического бурсита с инфильтрацией форменными элементами крови фолликулов и ме:фолликулярнкх соединительнотканных перегородок.

2. Некроз лимфоцитов и других клеточных элементов мозгового слоя большинства фолликулов и формирование на его месте некротического очага, при одновременном сохранении коркового слоя, либо его атрофии. Гиперемия, отек, очаговые кровоизлияния в ме;п|олликулярнь;х соединительнотканных перегородках, утолшение последних в 5-10 раз.

3. Тотальный некроз большинства фолликулов, превращающий последние в сплошной некротический детрит. 3 оппеделенк:'х случаях распространение некротического процесса на все слои слизистой оболочки, отторжение клеточного детрита в просвет органа и формирование язвенных поражений слизистой оболочки, скопление в просвете фабрициевой сумки клеточного детрита, пропитанного фибринозным экссудатом. Гиперемия, отек и утолцение меяфолликулярннх соединительнотканных перегородок, инфильтрация их лим;оцитарно-гистиоцитарными клетками, либо наличие очаговых или разлитых кровоизлияний.

3 тимусе в данные сроки после заражения наблюдалась гиперемия, обеднение лимфоцитами мозгового и, особенно, коркового слоев долек, частое выявление в коре лимфоцитов в различной степени деструкции. В связи с выраженной делимфатизацией коркового слоя часто выявлялись ретикулярные клетки с набухшей цитоплазмой, в отдельных случаях содержащие (фагоцитированный материал. В мозговом слое долек заметно было увеличение количества и размеров телец Гассаля. Атрофия долек сочеталась с увеличением количества ыеждольковой соединительна, ткани.

В слезенке на 3 сутки после заражения отмечался некроз лимфоцитов в периартериальнкх лимфатических влагалищах и в фол-

ликулах, при этом непораженные фолликулы не встречались. Наблюдалась гиперплазия ретикулярных клеток, гиперемия, в отдельных сдучаях очаговые кровоизлияния,, макрофагальная реакция в области артериальных гильз.' Подобные данные были получены и другими авторам ( Ttelkel s. , 1977; Henry с.;у. et al. ,1980; Ley D.K. et al. , 1983) и, видимо, следует согласиться с ними, что в данном случае происходит некроз клеточных элементов лимфоидного ряда, сосредоточенных в &-клеточных зонах селезенки. В эзофагальных и цекальных мивдалинах отмечалась гиперемия, в отдельных сдучаях очаговые кровоизлияния, одиночные или небольшие группы некротизированных лимфоцитов, атрофия фолликулов, ма!фофагальная реакция. В костном мозге наблюдалось уменьшение количества клеточных элементов, некроз эритроцитов, макрофагальная реакция. В почках отмечали гиперемию, очаговые кровоизлияния, зернистую дистрофию эпителия проксимальных канальцев, скопление в их просвете эозинофильных масс.

На 7 сутки после заражения в фабрициевой сумке отмечалась гиперемия, отек и многократное утолщение меячфолли^л^ных соединительнотканных перегородок, .инфильтрация их лимфоцитарно--гистиоцитарными клетками. Выявлялись очаговые, в отдельных сдучаях разлитые геморрагические инфильтраты вплоть до тотального геморрагического бурсита. Отмечались случаи скопления фибринозного экссудата, в щро свете, органа, иногда выявляли не1фоз и дескЕамацию эпителия слизистой оболочки, что приводило к образованию эрозий и язв. Фоллифлы были уменьшены в 2-3 раза. Преобладающей в данные сроки была форма поракения фолликулов, развивающаяся в результате некроза клеточных элементов, происходившего в предыдущие сроки и завершавшегося образованием не!ф0тических очагов в мозговом слое. Последний представлял собой полость, еще содержанию остатки некротических масс, либо гомогенное, ШИК-полокительное, слабоэозинофильное вещество и.иногда ограниченную 3-5 родами ретикулярных клеток. Корковый слой фолликула, как правило, был атрофирован и представлен 1-3 радами ретикулярных клеток. Некроз лимфоцитов и ретикулярных клеток мозгового слоя, атрофия коркового слоя, при которой его трудно дифференцировать как таковой, сопровогх-жались дифференциацией пограничного кортикомедулдярного эпителия в гселезистнй, образованием на. месте многих пораженных фол-

ликулов желез, в отдельных случаях еше содержащих клеточный детрит. В некоторых, фабрициевых сумках в мозговом слое фолликулов одновременно с некрозом лимфоцитов происходила гиперплазия ретикулярных клеток, имевших набухшую цитоплазьу. Соседние ретикулярные клетки по 2-4 соединялись свои/.и отростками, придавая мозговому слою вид "пчелиных сотов". В пространствах, ограниченных отростками ретикулярных клеток, выявлялся слабо-эозинофильный материал, глыбки хроматина или некротизированные лиъфэциты. Иногда образование в мозговом слое кистозной полости не сочеталось с дифференциацией кортнкомедулляркого эпителия в железистый, при этом, на месте фолликула фоомировалесь киста, равная или в 2-3 раза превышающая его по размеру, содержащая в отдельных случаях остатки некротических масс, ШИК-положительное, слабоэозинофильное вещество. Выявлялись в данный срок также "псевдофолликулы", которые состояли, в основном, из ретикулярных клеток, лимфоциты в них практически отсутствовал;, а дифференциация на корковый и мозговой слои была затруднена. В (фолликулах, расположенных близко к поверхности складки слизистой оболочки, распад клеточных элементов мозгового слоя распространялся на базальнуга мембрану, приводил ее к разрушению и десквамации эпителия слизистой оболочки, цолость кисты, ©формировавшейся на месте (фолликула, открывалась в просвет органа,куда отторгались некротические массы, и на месте фолликула образовывалось Кииптообразное впячивание слизистой оболочки.принты на разных стадиях развития выявлялись во многих участках складки слизистой оболочки, придавая ей ветвистый вид. В области покровного эпителия слизистой оболочки просвета фабрициевой сумки отмечались межэпителиальные микрокисты, округлой формы, занимавлие пространство величиной в 3-5 или 10-15 эпителиальных клеток и окруженные 1-3 слоями вытянутых, уплощенных клеток. Полость микрокисты содержала гомогенное или сетчатое, эозинофильное вещество, иногда с примесью базофильных глыбок. В отдельных участках между эпителиальными клетками слизистой оболочки отмечались межэпителиальные лимфоциты в состоянии некроза. Возможно, подобные структуры и давали начало образованию межэпителиальнкх микрокист. Формирование микрокист, как правило, завершалось отторжением их содержишго в просвет бурсы и регенерацией микроэрозии. В единичных случаях, при одно-

временном разрушении базальной мембраны, формировались микроязвенные поражения слизистой оболочки. В селезенке на 7 сутки после заражения сохранялась гиперемия, макрофагальная реакция в периартериальных лимфатических влагалишах и в красной пульпе, непораженные фолликулы на выявлялись.

Встречались единичные, очаговые линфладно-клеточные проли-фераты. В тилусе продолжала отмечаться атрофия коркового слоя, гиперемия, увеличение количества и размеров телец Гассаля, гиперплазия ретикулярных клеток. Наличие изменений в тимусе, видимо, обусловлено не только поражением вирусом ИББ определенной части лимфоцитов, которые имеют принадлежность к В-клеточ-ной системе ( Ро-ЬтгогоувМ, Б.Р. , 1972), но и необходимостью участия органа в реакции на стресс и в формировании иммунного ответа на сам вирус, что находило свое проявление в акцидента-льной инволюции. В костном мозге на 7 сутки после заражения сохранялось уменьшение количества клеточных элементов, не!фоз эритроцитов, макрофагальная реакция, Встречались фолликулопо-добные скопления клеток типа бластов.

Наблюдающийся, по нашим данным и по сведениям 7/'е1ке1 Б. (1977), некроз одиночных или небольших групп клеточных элементов костного мозга и, прежде всего, эритроцитов, не являющихся объектом инфицирования вирусом МВБ, видимо, связан с резким изменением в организме' количественного .соотношения различных клеточных элементов костномозгового происхождения. Есть сведения об участии клеток зритроидного рада в регуляции антителогенеза путем подавления пролиферации В-лш4оцигов и снижения накопления антителообразуюших клеток (Цырлова И.Г., 1987). В условиях дефицита В-клеточной популяции лимфоцитов и в связи с необходимостью его восполнения организм по принципу обратной связи устраняет сдерживавшие этот процесс факторы, в том числе определенную часть эритроцитов, что находит свое проявлеше в их гибели. Эзофагальные и цекальные миндалины в данные сроки, в основном, были в' пределах нормы, но в отдельных случаях еще наблюдалась атрофия мивдалин, при этом чаще выявлялись митозы. В почках отмечалась гиперемия, вакуолизация эпителия проксимальных канальцев, просветы которых были расширены, содержали сетчатое или гомогенное слабоэозинофильное вещество. Ядра некоторых эпителиальных клеток были пикнотичны, неправильной формы,

в отдельных случаях в состоянии рексиса или лизиса. Наблюдался отек почечных клубочков, расширение пространств между'внутренним и наружным листками капсулы клубочка. В штерстициаль-ной ткани отмечались очаговые скопления клеточных элементов, среди которых преобладали лимфоциты и гистиоциты, ¡.¿ежканальце-вые пространства были расширены, гиперешрованы. Выявлялись канальцы с некрозом эпителия, разрушением стенки канальца и окруженные лимфоцитарно-гистиоцитарным пролифератом. В печени в единичных случаях отмечалась гиперемия, очаговые кровоизлияния, образование перкваскулярнкх лимфоцитарно-гистиоцитарных пролифератов, жировая или зернистая дистрофия гепатоцитов. В подслизистом слое слизистой оболочки кишечника иногда наблюдался некроз лимфоцитов, незначительная инфильтрация псевдоэозино-филами, умеренные макрофагальная и плазмоцитарная реакции.

На 12-Г7 сутки после заражения складки слизистой оболочки фабрициевой сумки выглядели ветвистыми за счет наличия в них бухтообразных впячиваний, крипт, сформировавшихся на месте атрофированных фолликулов. Мемфоляикулярные соед15нительно~ тканные перегородки утолщены в 10-30 раз. Отдельные складки слизистой оболочки были практически полностью заполнены бурно разрастающейся соединительной тканью, среди элементов которой встречались единичные железы. Более типичными для данных сроков являлись складки слизистой оболочки, в которых на фоне увеличения соединительнотканной стромы чаще встречались железы, единично крупные кисты и "сотовидные" фолликулы, сформированные, в основном, ретикулярными клетками. Размеры таких фолликулов были в 2-3 раза меньше, чем в норме. Лишь условно в них можно было провести дифференциацию на мозговой и корковый слои. В некоторых фабрициевых сумках отмечались фолли!сулы с достаточно хорошо выраженным корковым слоем при крайней степени атрофии мозгового слоя.:В подэпи тели ально й и в межфолликулярной соединительной ткани, около ранее существовавших и новообразованных кровеносных сосудов, в большинстве складок слизистой оболочки отмечались очаговые периваскулярные лиыфоцитар-ные пролифераты, по размерам в некоторых случаях равные размеру фолликула фабрициевой сумки контрольных птиц. Количество их колебалось в пределах 1-5 в одной складке. Частота обнаружения пролифератов, их размеры были выше в тех органах» в ко-

торых складки слизистой оболочки содержали значительное количество соединительной ткани, богатой клеточными элементами различной степени зрелости и !фовеносными сосудами. В отдельных случаях наблюдалось восстановление ранее атрофированных фолли-Кудив. Процесс начинался с накопления лимфоцитов в корковом слое и их пролиферации, с последующим заполнением мозгового слоя. Атрофия фолликулов, завершавшаяся образованием желез и особенно 1фугшых кист, явление, вццимо, плохо обратимое и восстановление на их месте лимфоидных фолликулов наблюдалось 1файне редко. В области покровного эпителия просвета фабрицие-вой сумки, как и в предыдущие сроки, встречались межэпителиальные кисты.

Структура ттуса, селезенки, костного мозга, эзофагальных и цекальных миндалин в данный срок была, как у контрольных птиц. Однако в селезенке и в миндалинах, особенно у птиц, имевших сильно атрофированную фабрициеву сумку, количество фолликулов и межфоллицулярной лимфоадной ткани было увеличено. В почках некоторых цыплят выявляли изменения, отмеченные в предьдушие сроки.

На 25-30-40 сутки после заражения складки слизистой оболочки фабрициевой сумки были ветвистые, изрезаны криптами, истончены у основания. Соединительная ткань в некоторых случаях была богата кровеносными сосудами различных калибров, около которых формировались лимфоцитарные цролифераты, образующие фолликулы. Ведущей структурой складки все еще оставались железы, развившиеся на месте атрофированных фолликулов, единично отмечались регенерировавшие фолликулы. В эзофагальных и цекальных мивдалинах количество фолликулов и межфолликулярной лимфоид-ной ткани, как и в предадут® сроки, было больше, чем у контрольных птиц, особенно в тех случаях, когда фабрицпева сумка была достаточно сильно атрофирована, а процессы регенерации лшфзидных структур проявлялись незначительно. В своих работах Б. \7eikel (1977) и .1.0.А.0коуе, К.игоикт/и (1984) показывали принципиальную возможность и описали начальные этапы процессов регенерации лимфоидных структур фабрициевой сумки. По нашим данным, регенерация органа чаше идет двумя цутями, за счет формирования новообразованных фолликулов, а также цутем восстановления фолликулов, находящихся в различной степени ат-

рофии. Первый более предпочтителен, поскольку величина новообразованных фолликулов, их насыщенность клеточными элементами значительно преобладают над таковыми у регенерировавших фолликулов. Успех регенерации фабрициевой сумки в определенной степени зависел от степени выра'-'онности и качественного состава межфолликулярной соединительной ткани. Если в ней было много кровеносных сосудов, являвшихся местом, около которого начиналось новообразование фолликула, а также если она была богата соединительнотканными клетками, которые фагоцитируя окружающую ■ новообразуюшиеся фолликулы соединительную ткань освобождали пространство для фолликулов (Серов З.В., Шехтер A.B., 1980), то процесс регенерации шел достаточно интенсивно..

На 60 сутки после заражения в фабрициевых сумках с хорошо выраженной регенерацией в большинстве складок слизистой оболочки преобладали новообразованные фолликулы, встречались ранее атрофированные регенерирующие фолликулы и единично железистые структуры. В некоторых фабрициевых сумках складки слизистой оболочки были истончены, ветвистые, заполнены зрелой соединительной тканью, бедной клеточными элементами и кровеносными сосудами и практически не содержащими регенерирующие и новообразованные фолликулы. При этом изредка встречались железы и, крайне редко, очаги лимфоцитарных пролифератов. Структура .эзо-фагальных и цекальных миндалинах была такой же, как в предццу-шие сроки исследований.

На 120 сутки после заражения в 4 из 7 исследованных фабрициевых сумок цыплят, зараженных штаммом " Kemnitz " вщэуса ИББ, и в 2 из 5 случаев при заражении штаммом "52/70" структура органа была в пределах нормы. В складках слизистой оболочки большинство фолликулов по морфологии и размерам были неотличимы от таковых у контрольных птиц. Преобладали новообразованные фолликулы, количество соединительной ткани в.межфолликулярных перегородках было в пределах нормы. Однако в некоторых складках, чаше 'в их основании или в средней части, как свидетельство продолжающейся регенерации, встречались перивас-кулярные лим|0Читарные пролифераты, формирующие фолликулы. По мере восстановления структуры фабрициевой сумки складки слизистой оболочки приобретали характерный им ввд, исчезала ветвистость, а также криптообразные впячивания слизистой оболочки.

В случаях атрофии фабрициевой сумки складки слизистой выгладе-ли крайне истонченными, были укорочены, ветвистые, заполнены зрелой соединительной тканью. Фолликулы, либо фолликулоподоб-ные структуры практически отсутствовали. Встречались одиночные железы, лишь в отдельных складках выявлялись регенерировавшие, либо новообразованные фолликулы, а также единичные очаги скопления лимфоидной ткани, формирующие фолликулы, что свидетельствовало о слабовыраженном, но продолжающемся процессе регенерации. В эзофагальных и цекальных миндалинах, в данные сроки продолжало сохраняться повышенное количество фолликулов и межфолликулярной ликфоидной ткани, более выраженное в органах, взятых от птиц, у которых сильнее проявлялась атрофия фабрициевой сумки.

Патоморфологические исследования, проводившиеся в опытах по сравнительному изучению имцуногедаой активности живых вирус-вакцин против ИВБ, показали, что у птиц, имеющих антитела к вирусу ИББ, находящихся в условиях, приводящих к спонтанному заражению эпизоотическим штаммом В1фуса, в фабрициевой сумке могут развиваться структурные изменения, которые отражают морфо- * логическое проявление Мастной иммунной реакции. Морфогенез данного процесса во всех исследованных нами ситуациях начинался с некроза одного - дчух, реже несколько большего числа фолликулов, располагавшихся в нижней трети складок слизистой оболочки, затем происходила атрофия фолликулов, сопровождавшаяся образованием во!фуг них обшщшого лимфоцитарного пролиферата. По мере развития на месте атрофированных фолликулов желез и крайне редко кист, шло увеличение окружающего их лиифоцитарного пролиферата и на заключительных этапах процесса образование в нем очаговых скоплений лимфоидаых клеток, формирующих фолликулы. Верхняя и средняя часть подобных складок имела обычную структуру и была заполнена неповрелденными лиггоидными фолликулами. Так же неповрежденными, с характерной структурой оставались 'большинство складок слизистой оболочки, видимых на тотальном поперечном срезе фабрициевой (умки. Местная иммунная реакция в фабрициевой.сумке цыплят, видимо, не специфична для какого-либо заболевания, в том числе для ИББ и является проявлением локального защитного механизма на действие антигенов, либо повреждающих факторов.

2.2.2. Патоморфология спонтанной формы ИББ

Изучение спонтанной формы ИББ, проведенное в период 19781991 годов, показало, что заболевание отмечается в птицехозяй-ствах, специализирующихся на разведении птицы различных пород и размещенных в самых разнообразных природноклиматических зонах, таких, как Прибалтика, Центральная черноземная и нечерноземная зоны России, Дальний Восток, Украина, Средняя Азия,Кавказ, Белоруссия, Ресцублика 1юми, Молдова. Динамика и характер па то морс? ологических изменений, их варианты, отмечающиеся при • спонтанной форме болезни, были подобны тем, которые выявлялись при экспериментально воспроизведенном заболевании. Острое течение ИББ в настоящее время встречается- редко. При этом наблюдается яркое патанатомическое проявление заболевайия, особенно в начальные сроки, часто в виде геморрагического или фибринозного бурсита, которые встречаются в 30% случаев. Подобные высокоинтенсивные изменения часто сопровождались атрофией фабрицие-вой сумки у птиц реконвалесцентов. ;

При субклиническом течении болезни патанатомические изменения в начальной стадии заболевания выражены слабо, в виде гиперемии слизистой оболочки, отдельных точечных кровоизлияний в складках слизистой оболочки. В некоторых случаях заболевание патанатомически не проявляется вовсе и для его регистрации необходимы гистологические исследования. На общем фоне слабой выраженности изменений встречаются единичные случаи (1-2%) с достаточно интенсивными поражениями фабрициевой сумки в ввде геморрагического или фибринозного бурсита. Несмотря на субклиническое начало заболевания, которое отмечается у птиц 30-40-дневного возраста, как результат переболевания ИББ, у 50-60-дневных цыплят часто устанавливают атрофию фабрициевой сумки.

2.2.3. Электронномикроскопические исследования при ИББ

При исследовании методом негативного контрастирования морфологии вируса ИББ, выполненном на вируссодержашем материале, полученном с использованием различных биологических .моделей, установлено, что во всех изученных пробах видосные частицы имели форцу икосаэдра, обладали кубическим типом симметрии, имели размеры 55-65 нм, содержали 4 капсомера на грани, величиной по 8-9 нм каждый. Вир ионы не имели суперкапсидной оболочки и были покрыты одним слоем капсомеров. Подобные данные были

получены рядом других авторов ( Kosters S. et al. , IS72; Ki-rai К. et al. , 1974; Karkness J.Vi. et al. , 1975; Libermcn K. , 1987), справедливо отнесших вирус к семейству Birnaviri-dae .

Наряду с вирионами с характерной структурой, при исследовании материала методом именной электронной микроскопии, выявлялись маленькие частицы диаметром 18-20 нм, в которых можно было видеть четыре субъединицы, диаметр которых соответствовал диаметру капсомеров вируса ИББ. Чаше такие малые частицы отмечались при исследовании гомогената фабрициевых сумок цыплят, зараженных вирусом ИББ. Вероятно, наиболее точно их происхождение объясняют Karkness J.w. et al. (IS75), считая их продуктами распада вируса. В единичных случаях, например при исследовании вакцины "Гумбовак Дессау", приготовленной на культуре клеток эмбрионов гсур; ХАЖ эмбрионов уток, зараженных патогенным штаммом "52/70" вируса ИББ; ХАШ" эмбрионов уток, зараженных вакцинным штаммом "Д-78", наряду с вирусами с типичной морфологией встречались трубчатые вирусоподобные структуры, изредка слегка изогнутые на одном из концов, и обладающие, видимо,спиральным типом симметрии. Если вирионы с характерной структурой ' были округлой формы, размером 55-65 нм, то размер трубчатых вирусоподобных структур был 30-40 (до 50) нм в диаметре и длиной от 93 до 970 нм. Вирусоподобные структуры были покрыты одним слоем капсомеров, размер которых был такой же, как у капсомеров вирусов с типичной морфологией, т.е. 8-9 нм. Располагались трубчатые структуры одиночно или в виде групп из 2-6 образований, ориентированных под углом, либо параллельно друг к другу и были разделены между собой одиночными, округлыми вирионами, ■ либо их небольшими группами. В отдельных случаях выявлялись скопления располагавшихся параллельно и плотно прилегающих друг к другу трубчатых вирусоподобных структур. Имеются единичные сообщения о выявлении аналогичны;- вирусоподобных образований при исследовании методом негативного контрастирования го могената фабрициевых сумок цыплят, зараженных вирусом ИББ ( Harkness J.'.v. et al. , 1975) и при изучении методом ультратонких срезов головного мозга мышей, также инфицированных данным вирусом ( Bestetti G. et al. , 1980). В своих исследованиях мы значительно расширили круг биологических моделей, на ко-

торых вели накопление вируса, однако частота обнаружения проб с трубчатыми вирусоподобными структурами среди общего количества исследованного материала была незначительной. Встречались они только в материале, содержащем вирусы ИББ с типичной морфологией. Не удалось отметить зависимости частота обнаружения трубчатых форм от биологической модели, на которой культивируется вирус и его вирулентности.

Несмотря на наличие литературных сведений (Быковский А.Ф., и др., 1983) о том, что смешанная инфекция является предраспо- • латающим фактором для развития аномальных форм вируса, не были установлены трубчатые вирусоподобные структуры в материале (ХАЖ эмбрионов кур), где была выявлена контаминация аденовирусом эмбрионов кур, зараженных вирусом ИББ.

Метод иммунной электронной микроскопии с использованием антисыворотки к вирусу ИББ подтвердил вирусспецифичюсть трубчатых вирусоподобных структур. Как при использовании имцуно-сорбентного метода, так и метода декорирования было установлено, что отмечается антигенное родство трубчатых вирусоподобных образований с вирусом ИББ. Причины возникновения данных вирусоподобных структур, их роль в морфогенезе вируса и патогенезе заболевания пока не установлена. Подобные образования отмечались при изучении рота-, папова- и орбивирусов (Быковский Д.Ф., 1975; Лурия С. и др., 1981; Euismans J. and. Els H. , 1979; Kimura Т. , I98I; Suzuki S. et al. , 1984; Kimura T. and Kase a. , 1987). Они расцениваются как упорядоченно организованные агрегаты белковых субъединиц, формирующие двумерную, кристаллическую решетку, свернутую в форме цилиндра и лишенную нуклеиновой кислоты. Образование их происходит в результате нарушения процесса сборки молекул капсидного белка в условиях его избыточного синтеза ( Kiselev N. A. et al. , 1969; Hula-mans J. and Ells H. , 1979; Chasly D. and Labram J. ,1983). Полученные нами данные позволяют сделать заключение о природе и структурной организации отмеченных при ИББ трубчатьЬс вирусоподобных образований. Однако можно предположить, что их присутствие в вируссодержащем материале может повлиять на проявление биологических свойств вируса ИББ. При одних и тех же условиях структура с кубическим типом симметрии энергетически более выгодна, является более стабильной, но ее способность к взаимодействию оказывается ниже, чем у спиральных структур.Это

может означать болыщгю устойчивость икосаэдрических форм вирусов, a Taii.-.-j то, что их трубчатые формы, при прочих равных условиях, интенсивнее взаимодействуют с рецепторами клеточных мембран и являются в некоторых аспектах более биологически активными.

фи изучении ультраструктурных изменений в фабрициевой сумке при ИББ установлено, что через 24 часа после заражения в лимфоцитах мозгового слоя фолликулов отмечается набухание и деструкция митохондрий, появлений в цитоплазме липидных вакуолей и электронноплотных тел, незначительное расширение пластинчатого комплекса; более часто встречаются мультивезикулярные тела, конденсация хроматина едра. Вирусорепликативные комплексы и вирусные частицы в виде кристаллоидных скоплений выявлялись в цитоплазме лимфоцитов и ретикулярных клеток через 36 часов после заражения и иногда были окружены мембраной. Подобные данные, полученные также II.P. Cheville (1967) и G. Asdrubali and z. Kughetti (1972) значительно дополняют сведения bun -ger P.D. and H.J. liuddux (1972), которые утверждали, что местом репликации вируса ИББ в фабрициевой сумке являются макрофаги. Через 72 часа в ретикулярных клетках и в лимфоцитах еше выделялись как инкапсулированные, так и не ограниченные от содержимого цитоплазмы какими-либо структурами кристаллоидные скопления вирусов, что свидетельствовало о цродолжаюшейся репликации. Однако чаще вирусные частицы обнаруживали в фаголи-зосомах макрофагов, либо свободнолежашими среди клеточного детрита мозгового слоя фолликулов. На 6-10 сутки после заражения, вирусные частицы встречались только среди клеточного детрита, в ваде свободно лежащих вирйонов, либо их скоплений, иногда окруженных мембраной или включенных в состав фаголизосом.

2.2.4. Дифференциальная латоморфологическая "диагностика

Исследование патоморфогенеза и имьуно морфологии при ряде заразных болезней птиц позволили провести отбор наиболее информативных критериев для их. патоморфологической дифференциации от ИББ. Было установлено, что у птиц, экспериментально зараженных аденовирусами, вирусом саркомы Рауса, возбудителями пасте-реллеза, кокцидиоза, колибактериоза, а также при ассоциированном течении двух последних заболеваний, происходило развитие инфекционного процесса с-характерными, имеющими дифференциально диагностическое значение, патоморфологическими изменениями

во внутренних органах и со сравнительно однотипными морфологическими изменениями в лшфзидных органах, в том числе в фабри-циевой сумке. В последней отмечали атрофию, в некоторых случаях очень силыую, лим^оидных фолликулов, уменьшение их в 2-3 раза вследствие обеднения лимфоцитами, происходившем, в основном, за счет их миграции за пределы органа. При этом достаточно четко просматривались ретикулярные клетки и кортикомедуллярный эпителий, которые в норме, при большой насыщенности фолликулов лимфоцитами, выявляются недостаточно четко. В некоторых случаях, при очень массивном антигенном воздействии большой дозы высоко патогенного возбудителя на организм цыплят, отмечался, видимо, сконцентрированный во времени выброс за пределы органа лимфоцитов, в результате чего фолликулы, еше в той или иной степени сохранявшие свои размеры, практически не содержали лимфоцитов, мозговой слой из округлого или овального приобретал полигональную форму, а граница мевду корковым и мозговым слоями, представленная базальной мембраной, С расположенным на ней кортикомедуллярным эпителием, становилась в некоторых участках вогнутой в сторону мозгового слоя фолликула. Последующим этапом было уменьшение фолликуловв в 2-3 раза с одновременным утолщением, гиперемией, отеком межфолликулярных соединительнотканных перегородок, иногда с наличием в них очаговых кровоизлияний. Описанные изменения в фабрициевой сумке не специфичны и, видимо, отражают участие органа в формировании иммунного ответа.

При изучении материала от кур, больных лшфидным лейкозом, находили характерные для заболевания опухолевые образования во внутренних органах. В фабрициевой сумке наблюдалось развитие опухоли ди|фузно инфильтрирующей ткани органа. Процесс начинался с пролиферации' клеточных элементов отдельных фолликулов, с последующим распространением опухоли на непораженное структуры органа. В целом подобные данные были получены и другими'авторами (Королев A.M., 1978; Касьяненко И.И., 1978; Федотов A.B., 1979).

При исследовании внутренних органов от цыплят, зараженных вирусом болезни Марека, отмечали развитие в них характерной для заболевания опухоли. В фабрициевой сумке наиболее часто наблюдалась атрофия определенного количества лшфэидных фоллику-

лов с заменой их на кистозные полости, значительно реже железы. При этом в пределах одной складки слизистой оболочки иногда встречалось цримерно равное количество непораженных фолликулов и атипичных структур, в основном, кистозных полостей, сформировавшихся на месте атрофированных фолликулов. В отдельных случаях наблюдали атрофию большинства фолликулов органа с одновременным разростом меяфолликулярной соединительной ткани. Иногда отмечали развитие в фабрициевых сумках опухоли с характерным для болезни Марека клеточным составом, а также случаи, когда структура фабрициевой сумки оставалась практически в пределах нормы.

Заражение цыплят вирусом саркомы Рауса сопровождалось развитием оцухоли первоначально в месте введения вируса, а в последующем - на брыжейке кишечника, в печени и почках. Если оцу-холь, пусть даже значительных размеров, оставалась локализованной только в месте введения вируса, поражения фабрициевой сумки практически не отмечались, фи наличии оцухолевых метастазов во внутренних органах наблюдалась атрофия лимфовдных фолликулов, которые в бтдельных случаях были уменьшат в 1,52 раза, крайне обеднены, лимфоцитами, ери этом ведущим способом делимфатизации фолликулов являлась миграция лимфоцитов за пределы органа. Одновременю имело место утолщение в 2-3 раза межфолликулярных соединительнотканных перегородок, их отек,иногда гиперемия. Полученные данные согласуются с мнением А.ы. Fadly and L.B, Bacon (1979), отмечавшим зависимость менду степенью распространенности саркоматозных поражений во внутренних органах и интенсивностью структурных изменений в фабрициевой сумке, которые, на наш взгляд, носят функциональный хар:ктер.

При инфицировании цыплят 19- и 140-дневного возраста аденовирусом, вызывавшим болезнь птиц "Синдром снижения яйценос-кости-76" (ССЯ-76), отмечали развитие заболевания с характерными клиническими и патоморфологическими изменениями у птиц 140-дневного возраста, при отсутствии какого-либо проявления брлезни у 19-дневных цыплят. У птиц 140-дневного возраста в мозговом слое яичника отмечали гиперемию, лимфоцитарно-гистио-цитарные пролифераты, очаговые 1фовоизлияния, дистрофические изменения в эпителии фолликулов, иногда приводящие к некрозу эпителия и самого фолликула. В белковом отделе яйцевода отме-

заражения. .Методы гистологических исследований были те же, что и в первом опыте. Перед заражением вируссодержаший материал исследовали в реакции диффузионной преципитации в агаровом геле (РДЛ) с куриной гиперимцунной сывороткой, содержащей антитела к вирусу ИББ. Так же проводились исследования изолятов электронномикроскопическим методом негативного контрастировг-ния по I'ermut l,:.v. (1972) на наличие вирусов ИББ и отсутствие вирусов контаминатов из других таксономических групп.

Исследование патоморфологии проявления местной именной реакции в фабоициевой сумке цыплят проводили на патматериале от 150 птиц из 3 опытов по изучению иымуногенной активное-и живых вирусвакцин против ИББ, приготовленных из штаммов " Des-say "д-78" и " Lulcert ". Пробы фабрициевой сумки брали перед вакцинацией, на 5, 7, 14 (и/или 21) сутки после вакцинации, а также в различные сроки после заражения птиц опытных и контрольных групп патогенным штаммом "52/70" вируса ИББ. Материал фиксировали в 96° этиловом спирте и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином.

Изучение патокорфологии спонтанной формы ИББ проводили на патматериале от 1803 цыплят I-120-дневного возраста с 29 птица:абрик страны. Пробы ¿абрициезой сумки и, выборочно, других внутренних органов (Фиксировали в 10*. растворе формалина или в 90° этиловом спирте и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и оозином.

При изучении мора ологии вируса ИББ методом негативного контрастирования использовали следующий материал: I. хориоал-лантоисную жидкость эмбрионов кур (ХАЖ) - I, 2, 5 пассаж вакцинного штамма V,-73" вируса ИББ и 2 пассаж вакцинного штамма "Ji3h-223"; 2. XA't эмбрионов уток - 2 пассаж патогенного штамма "52/70" вируса ИББ, I пассаж вакцинного штамма "Д-78", 4 пассаж вакцинных штаммов "Д-78" и ЛЗД-228"; 3. вакцина-" Des-say » (ГДР) против ИББ; 4. культуральная жидкость цулыуры клеток с ибробластов^ эмбрионов кур - 2 пассан вакцинного штамма " Эеиаг.у ", 3 пассаж патогенного штамма "52/70" вируса ИББ, 3 пассаж вакцинных штаммов " Deasay " и "Д-73"; 5. культураль-ная кидкость культуры клеток перепелок - 2 пассаж вакцинных штаммов " Веззау " и "Д-78", 3 пассаж вакцинного штамма "Д-78"; б. гомогенат хориоаллантоисных оболочек эмбрионов цур, зара-

женных вакцинным штаммом "Д-78", 3 и 5 пассаж вакцинного штамма "ЛЗД-223"; 7. Гомогенат тулек эмбрионов кур, зараженных вакцинным штаммом "Д-78", 5 пассаж; 8. гомогенат фабрициевых сумок цыплят, зараженных патогенным штаммом "52/70" вируса ИББ; 9. ХЛ1 эмбрионов КУР» зараженных патогенным штаммом "52/70"; и контакироваккых нетипированным аденовирусом; 10. вакцина ВНИВИД против ИББ из штамма " Lukert "; II. изоляты вируса ИББ с птицефабрик "Братцевская", "Смена", "Орехово-Зуевская","Кст-ро-Сенежская" (Московской области), "Нальчикская" (Кабардино-Балкария), "Большевик" (Ленинградской области), "Ухтинская" (Республика Коми), ¡материал осветляли низ коскоростным центрифугированием в течение 10 мин при 5 тыс.об/мин. Из надосадоч-ной жидкости готовили препараты, которые обрабатывали общепринятым методом негативного контрастирования ( Wermut v. , 1972), а также с использованием метода имцунной электронной ми!фоскопии ( Earkness J.Y;, et al. , 1975). При необходимости проводили ультрацентрифугирование патматериала в ультрацентрифуге "Бекман" в роторе Т-30, в течение 1,5 часа, при 30 тыс.об/мин. Просмотр материала осуществляли в электронном микроскопе "Tesia 3S- 540" при ускоряющем напряжении 80 кв.

Ультраструктурные изменения в лиьцовдных органах при ИББ изучали на патматериале от 'цыплят 35-дневного возраста, экспериментально зараженных патогенным штаммом "52/70" вируса ИББ. Убой птиц проводили на I, 3, б и 10 сутки после зара-

жения. Материал фиксировали в 2% растворе глутаральдегида,приготовленном на буфере ¡¿илонинга, с постфиксацией в 2% растворе четырехокиси осьмия. После обезвоживания в спиртах восходящей концентрации материал заливали в эпон. Готовили полутонкие срезы с последующим их окрашиванием метиленовой синью. Ультратонкие срезы поучали на ультратоке " 1КВ 4800" или "Reichert • Контрастирование срезов проводили уранилацетатом и цитратом свинца. Готовые препараты изучали в электронном микроскопе " Tesla ВС-540", при ускоряющем напряжении 80 кв.

Опыт по изучению патоморфологии болезни птиц "Синдром снижения яйценоскости-76" (ССЯ-76) проводили на 120 цыплятах 19-и 140-дневного возраста, зараженных штаммом "BC-I4" вируса ССЯ-76. В качестве контрольных использовали 40 незараженных цыплят 19- и 140-дневного возраста. Убой опытных и контрольных

птиц проводили на I, 2, 3, 5, б, 9, 10, 15, 20, 30 сутки после заражения. Для гистологических исследований брали пробы фабри-циевой сумки, тимуса, селезенки, яичника, белкового и маточного отделов яйцевода, выборочно, печени, толстого отдела кииеч-ника. Цробн фиксировали в 103 растворе нейтрального формалина и 90° этиловом спирте, с последующей заливкой в парафин, фсзы окрашивали гематоксилином и осзином.

Изучение патоморфологии аденовирусного гепатита с тельцами-включениями проводили в 2 опытах. В первом опыте из 23 С11Ф-цыплят 3-дневког'о возраста 13 бы ли эараг.енк внутрибргазинно материалом, содержащим изолят "19/39" аденовируса птиц, а 5 не-зараженных цыплят слунили контролем. Убой птиц проводили на 3, 8, 10 сутки после заражения. Для гистологических исследований брали пробы печени, тимуса, селезенки, фабрицкевой сумки, материал фиксировали в 96° этиловом спирте и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Второй опыт проводили на 49 С113-цыплятах 5-дневного возраста, из которых было сформировано 3 группы: I группа состояла из 24 птиц, которых заражали внутрибоюаинно, тем же, что и в первом опыте вирус-содеркаыим материалом; 2 группа из 15 птиц была заракена инт-раназалыю; 3 группа птиц служила контролем. Убой цыплят проводили на 3, с, 8, 10 сутки после заражения, ¿дя гистологических исследований брали пробы печени, 12-перстной кишки, поджелудочной железы, почек, легких, селезенки, тш.уса, фабрицие-вой сумки, материал фиксировали в 96° этиловом спирте и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Изучение патоморфологии спонтанного проявления аденовирусного гепатита с тельцнми-включениями проводили на материале от 68 цыплят 10-50-дневного возраста, фобы печени, фабрициевой сумки, почек фиксировали в 10$ растворе нейтрального формалина. Готовили замороженные и парафиновые срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином, а также на жиры Суданом 1У. Для электоонкомикроскопических исследований готовили гомогенат печени, который разводили 1:1 физиологическим раствором и центрифугировали при 3 тыс.об/мин в течение 15 минут, ьз надоса-дочнсй жидкости изготог.или препараты методом негативного контрастирования с использованием фосфорно-вольфрамовой кислоты по Кегтиа и.у. (1972). Просмотр препаратов осуществляли в

' электронном микроскопе Tesla BS- 540, при ускорявшем напряжении 80 кв. Серологические исследования сыворотки крови цыплят на наличие антител к аденовирусу и вирусу ЙББ проводили в реакции диффузионной преципитации в агаровом геле по общепринятой методике, с использованием штамма "Phelps " аденовируса птиц I серотипа и штамма "52/70" вируса ИББ.

Натомоифологические изменения внутренних органов при бо-• лезни ?Дарека изучали на патматериале от 3 группы птиц, которых заражали вцутрибрюшинно патогенным штаммом "ЗК" вируса болезни Нарека: I группа - в 1-дневном возрасте; 2 группа - в 14-дневном; 3 груша - двавды в 14, а затем в 15-дневном возрасте. Отбор патматериала проводили соответственно по возрастным группам, через 76, 129 и 106 суток после заражения, методы гистологических исследований были те же, что и в предыдущих опытах.

Натоморфологические изменения во внутренних органах при лимфоидном лейкозе проводили на патматериале от 20 кур 9-15-месячного возраста, спонтанно заболевших лейкозом. Объекты и методы гистологических исследований были те, что и в предыдущих опытах.

Изучение патоморфологических изменений в лим^оидных и других внутренних органах при саркоме Рауса проводили на патматериале от 50 цыплят в 14-дневном возрасте, зараженных в крыловую перепонку вирусом саркомы Рауса, штамм БН- Rsv ( raf-I).-Убой птиц и отбор патматериала проводили на 30 и 40 сутки после заражения. Методы гистологических исследований были те же,что и в предыдущих случаях.

Опыты по изучению патоморфологических изменений во внутренних органах птиц при пастереллезе проводили на 60 цыплятах 7-, £7-, 67- и 90-дневного возраста, которых заражали высоковирулентным штаммом "115". Р.multocida , в разведении дозе: I возрастная группа 0,1 мл интраорбитально, остальные 3 возрастные группы в дозе 0,2 мл внутримышечно. Отбор патматериала от павших и вынужденно убитых птиц проводили на I, 3, 6, 7, 8 сутки после заражения. Объекты и методы гистологических исследований были те же, что и в предыдущих опытах.

Г1атоморфологические изменения во внутренних органах цыплят при колибактериозе и кокцидиозе, а также ггри ассоциированном течении данных заболеваний изучали на 120 цыплятах 20-днев-

ремией, инфильтрацией тканей псевдоэозинофилами, умеренным некрозом- клеточных элементов лимфоидной ткани, макрофагальной реакцией. У переболевших птиц, в фабрициевой сумке которых набли-дается атрофия лимфоидных структур, в эзофагальных и цекальних миндалинах отмечается увеличение количества лимфоидных фолликулов и межфолликулярной лимфоидной ткани.

3. Морфология 7 отечественных изолятов вируса ИББ и референтных штаммов "52/70" и "Kemnitz " идентична, характерна для вирусов семейства " Birnaviridae что можно исполь*-зовать три экспресс-диагностике вызываемого ими заболевания.

3.1. Экспресс-диагностика ИББ с помощью электронной микроскопии проводится исследованием гомоГената фабрициевой сумки больных птиц методом негативного контрастирования, при этом вероятность обнаружения вируса значительно повышается при использовании метода иммунной электронной ми!фоскопии.

3.2. Морфогенез вируса может сопровождаться образованием трубчатых вирусоподобных структур, антигенородственных вирусу ИББ и формирующихся в различных биологических моделях при использовании как вакцинных, так и патогенных штаммов вируса. Частота обнаружения трубчатых вирусоподобных структур незначительна и не зависит от типа биологической модели, на которой культивируется вирус, наличия у него вакцинных, либо патогенных свойств.

3.3. Наиболее часто вирионы, виропласты, либо {фисталло-идные скопления вируса обнаруживаются в цитоплазме лимфоцитов, реже в ретикулярных клетках фабрициевой сумки, являющихся местом репликации вируса, а также в макрофагах.

4. При дифференциальной патоморфологической диагностике ИББ наибольшее значение имеет исключение опухолевых болезней птиц, аденовирусной инфекции, а также интенсивного антигенного воздействия различных патогенных микроорганизмов.

4.1. При лимфоадном лейкозе патологический процесс в организме птиц начинается с пролиферации клеточных элементов одного или нескольких фолликулов фабрициевой сумки, формирующих первичный опухолевый очаг, инфильтративный рост которого приводит к разрушению структуры органа.

4.2. Болезнь Марека сопровождается атрофией определенного количества лимфоидных фолликулов фабрициевой сумки с заменой

их на кистозные полости, значительно реже железы. При этом в пределах одной складки слизистой оболочки встречается примерно равное количество непораженных фолликулов и атипичных структур, сформировавшихся на месте атрофированных фолликулов. В отдельных случаях наблюдается атрофия большинства фолликулов органа с одновременным разррстом меж^олликулярной соединительной ткани, либо развитие в фабрициевой сумке опухоли с характерным для болезни Марека клеточным составом.

4.3. При экспериментальной аденовирусной инфекции, саркоме Рауса, пастереллезе, колибактериозе, кокцидиозе, ассоциированном течении кокцидиоза и колибактериоза птиц в фабрициевой румке наблюдается и мцу но морфологическая реакция, отражающая участие органа в формировании иммунного ответа на антигенное воздействие. При этом отмечается уменьшение фолликулов в 2-3 раза, сильная их делимфатизация, происходящая за счет миграции лимфоцитов за пределы органа. В мозговом слое хорошо просматриваются стромальные ретикулярные клетки и кортикомедуллярный эпителий, которые в норме в связи с насыщенностью фолликулов лимфоцитами менее различимы. Отмечается отек и утолшение меж -фолликулярных соединительнотканных перегородок, гиперемия, изредка очаговые кровоизлияния.

4.4. При заражении цыплят 19-дневного возраста вирусом ССЯ-76 аденовирусная инфекция не проявляется. Интраназальное инфицирование вирусом ССЯ-76 кур 140-дневного возраста сопровождается катаральным оофоритом, сальпингитом с наличием базо-фильных интрацуклеарных включений в эпителии преимущественно маточного'отдела яйцевода. При внутримышечном заражении наряду с поражениями репродуктивного тракта отмечается острый серозный миозит. Патоморфологические изменения в фабрициевой сумке не патогномоничны.

4.5. При заражении цыплят первых длей жизни изолятом "19/89" аденовируса птиц развивается гепатит с тельцами-включениями, а при генерализации инфекции спленит с наличием интрацуклеарных включений в ретикулярных клетках селезенки и панкреатит с образованием интрацуклеарных включений в железистых клетках поджелудочной железы. Патоморфологические изменения в фабрициевой сумке не патогномоничны.

5. Заражение цыплят вирусом ИББ за сутки до инфицирова-

ния изолятом "19/89" аденовируса птиц способствует более яркому клиническое и пата морфологическое проявлению гепатита с тельцами-включениями, фи этом значительно чаше происходит генерализация инфекции с развитием спленита с интрануклеарными включениями в ретикулярных клетках селезенки и панкреатита с интрануклеарными включениями в железистых клетках поджелудочной железы.

4. ПРЩОМШ ПРОИЗВОДСТВУ

I. Материалы диссертации использованы при разработке:

1.1. Рекомендаций по патоморфологической диагностике инфекционной бурсальной болезни (ИББ), одобренных Научно-Техническим Советом Птицепрома СССР, 25.05.81.

1.2. Временных методических указаний по диагностике болезни Гамборо, утвержденных ГУВ СССР, 19.07.90, if 044-3.

1.3. Краткого руководства по электронномикроскопической диагностике вирусных болезней птиц, одобренного ГУВ СССР, 7.03.91, № 043-6, а также ВАСХНШ1 27.02.91.

1.4. Инактивированной вакцины против болезни птиц "Сивд-ром снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76)", Комплект НГД на опытное применение вакцины утвержден ГУВ СССР 28.09.89.

1.5. Живой вирус вакцины против ИББ, Комплект НТД на опытное применение вакцины утвержден ГУВ СССР 23.07.91.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ Ш ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бакулин В.А., Рвдчук Л.А. Патоморфологические изменения у цыплят при болезни Гамборо.// Экспресс-информ. Передовой научно-производственный опыт, в птицеводстве. - Загорск, 1979.

- № 6. - С.25-27.

2. Бакулин В.А., Радчук Л.А. Морфологические изменения в центральных и периферических органах цыплят при болезни Гамборо.// Передовой научно-производственный опыт в производстве. -Загорск, 1981. - if 5. - С.44-46.

3. Кудрявцев Ф.С., Бакулин В.А., Рад^ук Л.А. Рекомендации по патоморфологической диагностике инфекционной бурсальной болезни (ИББ) - Л., 1981. - 14 с.

4. Бакулин В.А., Кудрявцев Ф.С., Королев A.M., Радчук Л.А. Дифференциальная патологоморфологическая диагностика болезни

Гамборо и болезни Марека.// Тез .докл. Всесоюзн.науч. кон|. Разработка, апробация и государственный контроль ветеринарных препаратов. - М., 1981. - С. 122-123.

5. Кудрявцев Ф.С., Рад^ук Л.А., Бакулин В.А. Опыт профилактики инфекционного бурсита цыплят.// Ветеринария. - 1982. -

# 8. - С.З'.-ЗЗ.

6. Бакулин В.А., %дрявцев Ф.С., Радцук Л.А. Патоморфоло-гия инфекционного бурсита.// Ветеринария. - 1982. - Jf 3. - С. 37-39.

7. Кудрявцев Ф.С., Радцук Л.А., Бакулин В.А., Зеленская Н.П. Лабораторная диагностика инфекционной бурсальной болезни // Краткие тез.докл.н.-пр.конф./ Ветеринарное обеспечение крупных животноводческих комплексов на промышленной основе. - Л., 1982. - G.I06-109.

8. Шфкина Л.М., Бакулин В.А.* Радцук Л.А., Кудрявцев Ф.С. Савостьянов Г.А., Алиев A.C. Морфология вируса инфекционного бурсита цыплят // Там же. - 114 с.

9. Бакулин В.А., Илюшечкин Ю.П., Дорофеев Г.А., Дорофеева P.M. Патоморфология ассоциированного течения кокцидиоза и коли-,, бактериоза цыплят.// Гез.докл.П Всесоюзн.съезда паразитоцено-логов. - Киев, 1983. - С.36-37.

10. Радцук Л.А., Барулин В.А., Белкина И.В. Диагностика и профилактика инфекционного бурсита птиц.// Сб.науч.тр. ВНИВИП/ Новое в борьбе с болезнями птиц. - Л., 1934. - С.36-39.

11. %дрявцев Ф.С., Алиев A.C., Радчук Л.А., Бакулин В.А., Мадушко Ц.Б. Особенности течения инфекционной бурсальной болезни.// Тез.докл.н.конф./ Система мероприятий по обеспечению эпизоотического благополучия и рентабельности птицеводческих предприятий. Ломоносов, 1985. - Часть П. - С.37-38.

12. Барулин В.А., Савостьянов Г.А., Миркина Л.М. и др. Электронно микроскопические исследования при болезни Гамборо. // Ветеринария. - 1985. - * II. - С.38-39.

13. Хохлачев О.Ф., Бакулин В.А., Савостьянов Г.А. Клинико-патолого-анатомическая характеристика болезни птиц "Сиедром снижения яйценоскости-76" // Экспресс-информ. - Передовой научно-производственный опыт в птицеводстве. - Загорск, 1986. -

К 10. - С. 15-17.

14. Бакулин В.А. Патоморфологическая диагностика болезни 1'амборо.// "Материалы IX Всес.н.конф. по патоморфологии с.х. животных/ проблемы патоморф.диагностики болезней в промышленном :.-:иьстноводстве. - Вильнюс, 19ои. - С.336-341.

Кудрявцев Ф.С., Белкина И.В., Алиев A.C., Радчук Ji.A., и;; кул пи В.п., Скакунова Т.'Л. Иммунопрофилактика болезни Гамборо. // Сб.научн.тр./ Современные средства и методы борьбы с заразными болезнями с/х птиц. - л., Гао7. - С.31-38.

iö. лакулин В.А., лохлачев о.Ф., Савостьянов.Г.А., Коровин Р.К., Сергеев В.Д. Иатоморфология при болезни птиц "Синдром с.;и,.»еиия яйценоскости-7и" // Ветеринария. - I9bö. - Jf 6. - С. 2b-3I.

17. Бакулин В.а., Радчук Л.А., Алиев A.C. и др. Иатоморфология спонтанного проявления аденовирусного гепатита с тельцами-включениями у цыплят.// Экспресс-информ. Передовой научно-производственный опыт в птицеводстве. - Загорск, 1989. - № 3. - С.43-46.

16. Бакулин В.А., Алиев A.C., Радчук Ji.A. и др. Цилиндрические формы вируса болезни Гамборо.// Ветеринария. - 1990. -12. - С.2с-3и.

i*. «лиев л.о., Кудрявцев &.С., Дкавадов Э.Д., Бакулин В.А.,

i олод h.I-, мкагносткка инфекционной бурсальной болезни (-отсдические рекомендации). - л., 1991. - 1С с.

20. ^акулкк В.Л. Распространенность болезни Гамборо по данным патокорфологических исследований.// Экспресс-информ. ..иредОЕОй научно-производственный опыт в птицеводстве.

- Загорск, 1991. - С 4. - C.öü-öZ.

21. Бакулин В.А. Морфологическое проявление местной иммунной реакции з фабрициевой сумке иыплят при болезни Гамборо.

/ - е. -

22. Бакулин В.А. Иатоморфология экспериментального прияв/е-ния аденовирусного гепатита с тельцами-включениями.// Экспресс-информ. Передовой научно-производственный опыт в птицеводстве.

- Sai срск, - i,i о. - 3.50-52.