Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Патоморфология и иммуноморфологические реакции при инфекционном бурсите цыплят (болезни Гамборо) и при вакцинации

На правах рукописи

Садчикова Анна Алексеевна

Патоморфология и иммуноморфологические реакции при инфекционном бурсите цыплят (болезни Гамборо) и при вакцинации

16.00.02. - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 2004

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Стрельников Алексей Павлович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Кунаков Альберт Александрович кандидат ветеринарных наук, доцент Сушкова Нина Константиновна

Ведущая организация: Российский государственный аграрный заочный университет

Защита с о » 200 4 г. в часов а заседании

диссертационного совета Д-2'20.042.02. в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина» по адресу: 109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23, тел.: (095) 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина».

г

Автореферат разослан « >> АС^-б^^С 200 Ж года.

Ученый секретарь диссертационного совета И.Г.Волкова

ттш

9 325¿С

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время одной из актуальных проблем в промышленном птицеводстве является инфекционная бурсальная болезнь (болезнь Гамборо, инфекционный бурсит) - широко распространенная, высококонтагиозная, вирусная болезнь молодых цыплят, которая характеризуется поражением лимфоидной ткани фабрициевой сумки (бурсы), высокой смертностью и иммунодепрессивным действием возбудителя (Алиев А.С., 1991; Аттакпа Я.Э., 1992; Бакулин ВА., 1991; Борисов В.А., 1995; Герман В.В., Ибрагимов А.А., 1978).

Инфекционная бурсальная болезнь приводит к большим экономическим потерям, так как вызывает высокую заболеваемость и летальность птиц. Это связано с тем, что в стадах молодняка яичных пород смертность достигает 40-80%, а стадах бройлеров - 30-40%. Особую опасность представляет субклиническая форма заболевания, так как приводит к осложнению вторичными секундарными инфекциями (Алиев А.С., 1991; Ануфриева Т.А., Ольшевская Т.И., 1992;Бакулин ВА., Аксенова Е.Г. и др., 1998; Adejoro S.O., 1991; Homer B.L., Butcher G.D. etal.,

Иммуноморфогенез у птиц, вакцинированных против болезни Гамборо изучен недостаточно. Ряд исследователей указывает на то, что используемые для вакцинации вакцины вызывают иммунодепрессию, обусловленную явлением делимфатизации и атрофии лимфоидной ткани в органах лимфоидной системы птиц (Бирман Б.Я., Голубничий В.П, и др., 1996; Болотников И.А., Конопатов Ю.В., 1993; Лох В .А, Беляев A.M.; 1981; Allan W.H., Faragher J.T. 1972; Cloud S.S., Rosenberg J.K., 1992; Coletti M., 1997).

Несмотря на некоторые успехи в разработке специфической профилактики, многие вопросы морфологии органов иммунной системы здоровых, больных и вакцинированных птиц изучен недостаточно, а без знания этой системы нельзя познать патогенез болезни и разработать эффективную патогенетическую терапию и специфическую профилактику (Алиев А.С., Сираждинов Р.С. и др., 1999; Бирман БЛ., Грушин В.Н,. Дягилев К.К, 1999; Кожемякина Н, 1996; Ибрагимов А.А., 1974, 1978; Жаров А.В., 2000; Стрельников А.П., 1989; Идрисов Г.З.. 1998; Дроздова Л.И., 1998; Zutkert P.D., Hitcher S.B., 1984).

1992).

Цель и задачи исследования. Основная цель работы - изучить патоморфологические и иммуноморфологические изменения в органах иммунной системы при естественной вспышке инфекционной бурсальной болезни и вакцинации против нее.

В связи с этим мы поставили следующие задачи:

Изучить патоморфологию и иммуноморфологические реакции в органах иммунной системы при инфекционной бурсальной болезни птиц;

Изучить патоморфологию и иммуноморфологические реакции в органах иммунной системы при вакцинации сухой живой вирус-вакциной «Витрерфилд 2512» оральным методом;

Установить характерные морфологические признаки болезни и возможность их использования в диагностических целях.

Научная новизна. Впервые использованы морфологические, гистохимические и морфометрические методы исследования органов иммунной системы цыплят при естественной вспышке инфекционной бурсальной болезни и при вакцинации против нее. Показана динамика развития патологического процесса и характеристика морфологических изменений на микроскопическом уровне. Полученные данные позволили глубже познать патоморфологию и иммуноморфологию при вакцинации против болезни Гамборо и при естественной вспышке этого заболевания. Наряду с известными положениями нами получены дополнительные сведения по функциональной морфологии болезни Гамборо и вакцинации против этой болезни. Изучены количественные и качественные изменения в органах иммунной системы при естественной вспышке инфекционной бурсальной болезни и при вакцинации против этой болезни. По результатам исследования изданы «Методические рекомендации по патологоанатомической диагностике инфекционной бурсальной болезни кур, болезни Гамборо».

Теоретическое значение работы. Изучение патоморфологических, морфометрических и иммуноморфологических изменений в органах и тканях больных и вакцинированных животных служит основой для диагностики болезни и понимания специфической профилактики ее. Описанные морфологические изменения в органах иммунной системы птиц значительно дополняют данные о патогенезе этой болезни. Проведенные морфологические и

иммуноморфологические исследования позволили определить иммуногенные качества и реактогенность вакцины, используемой для профилактики инфекционной бурсальной болезни птиц.

Практическое значение работы. По результатам исследований разработаны и утверждены «Методические рекомендации по патологоанатомической диагностике инфекционной бурсальной болезни кур, болезни Гамборо».

Результаты наших исследований могут быть использованы для написания соответствующих разделов учебных руководств и пособий по патологической анатомии и гистологии.

Данные диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах патологической анатомии и физиологии им. В.М.Коропова, птицеводства и болезней птиц, эпизоотологии ФГОУ ВПО «МГАВМиБ им. К.И.Скрябина».

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Уфа, 17-19 сентября 2003 г.), Международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию академии (Москва, 30-31 марта, 1 апреля 2004 г.), обсуждены на кафедре патологической анатомии и физиологии им. В.М.Коропова, на межкафедральом совещании с участием кафедр нормальной анатомии, гистологии, птицеводства и болезней птиц ФГОУ ВПО «МГАВМиБ им. К.И.Скрябина».

Публикации результатов исследования. По теме диссертации опубликовано три печатные работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице компьютерного набора, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, сведений о практическом использовании результатов исследований, списка литературы, включающего 182 источника, в том числе 76 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 5 диаграммами, 27 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Патоморфологические изменения в органах иммунной системы при естественной вспышке инфекционной бурсальной болезни;

2. Патоморфологические изменения в органах иммунной системы при вакцинации птиц сухой живой вирус-вакциной из штамма «Винтерфилд 2512»;

3. Возможность использования полученных данных для своевременной диагностики болезни.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы. Материалом для исследований служили павшие от болезни Гамборо цыплята и органы цыплят, вакцинированных против инфекционного бурсита сухой вирус-вакциной из штамма «Винтерфилд -2512». Всего было исследовано 483 цыпленка. Контролем служили органы клинически здоровых цыплят. В эксперименте птиц убивали на 3, 5, 7, 10, 12 , 16 и 21 дни после вакцинации по пять голов. Вскрытие проводилось по методике профессоров Жарова А.В., Стрельникова А.П. и Куриленко А.Н. (1985).

Для выявления больных животных пользовались методом осмотра. Диагноз подтверждали патологоанатомическим и гистологическим методами. Гистологически материал обработан от 94 голов в эксперименте, и от 71 головы павших. Гистохимическому исследованию подвергались органы иммунной системы: фабрициева сумка, тимус, селезенка, лимфоидный аппарат слепых кишок, железа Гардера и дивертикул Меккеля. Выборочно гистологическому исследованию подвергали паренхиматозные органы - печень, почки, сердце и др.

Материал фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Кусочки заливали в парафин и получали срезы толщиной 5 мкм. При окраске срезов применяли принятые в патологоанатомической практике методики. Для общего осмотра срезы окрашивали гематоксилин-эозином, на соединительную ткань по Ван-Гизону. Из гистохимических методов применяли окраску на жир Суданом - III, на нуклеиновые кислоты - по Браше, на слизь - муцикармином. Пигмент гемосидерин выявляли по Перлсу, гликоген по Шабадаш. Вакцинацию проводили сухой живой вирус-вакциной из штамма «Винтерфилд 2512» серии № 45. Исследованию был подвергнут четырехлинейный аутосексный кросс «Птичное», всего было провакцинировано 9540 голов.

Морфофункциональное состояние тимуса, фабрициевой сумки, селезенки и лимфоидного аппарата слепых кишок исследовали гистологически, гистохимически и морфометрически, учитывая соотношение коркового и мозгового вещества и величины фолликулов.

Лимфоидные структуры иммунной системы цыплят измеряли с помощью окулярмикрометра и сетки-шаблона профессора Г.Г.Автандилова (1975), подсчет клеточных элементов проводили в 50 полях зрения микроскопа, учитывали плазмоклеточную реакцию в лимфоидных органах иммунной системы.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Патологоанатомические изменения. Общая картина вскрытия трупов сводилась к следующему.

При наружном осмотре находили взъерошенность перьевого покрова, вокруг анального отверстия сильное, реже слабое загрязнение каловыми массами. Кожные придатки (ушные мочки, гребешки, сережки) были слегка синеватые, реже изменения отсутствовали. В большинстве случаев павшие цыплята имели хорошую упитанность.

При внутреннем осмотре находили разнообразную картину, в зависимости от тяжести заболевания.

Наблюдалось сильное обезвоживание подкожной клетчатки и мускулатуры, что проявлялось сухостью и ухудшением отделяемости кожи. Отмечали потемнение и депигментированность мышц и фасций бедер, в области паха и иногда груди. У большинства цыплят в мышцах бедер находили точечные, полосчатые или обширные кровоизлияния, реже они обнаруживались в грудных мышцах и еще реже в мышцах крыльев. В отдельных случаях в сердечной мышце отмечали отек эпикарда, а также фибринозные наложения на серозных оболочках сердца, в основном на перикарде. Селезенка слегка увеличена.

Печень в большинстве случаев была несколько увеличена, дрябловатой консистенции, малокровна, поверхность разреза тусклая, неравномерно окрашена, серовато-коричневого цвета, рисунок паренхимы сглажен. В почках, в большинстве случаев, отмечали увеличение их объема, они выступали над уровнем костных основ поясничных позвонков, были дряблой консистенции, поверхность разреза их, как правило, тусклая, края разреза плохо сходятся, они малокровны,

неравномерно окрашены и имели светло-серый, светло-коричневый или коричневый цвет. Скопление уратов в канальцах и мочеточниках придавали почкам мозаичность. Встречались случаи наличия кровоизлияний и эрозий на слизистой оболочке железистого желудка на границе с мышечным желудком. В тонком отделе кишечника наблюдали катаральный. Слизистая оболочка толстого отдела кишечника гиперемирована. Клоака и прямая кишка заполнены жидким содержимым молочного цвета.

Основные патологоанатомические изменения отмечали в фабрициевой сумке. Изменения в фабрициевой сумке зависели от времени прошедшего после появления первых признаков заболевания. Чаще всего изменения в фабрициевой сумки обнаруживали на 2-3 день, когда она увеличивалась в полтора - два раза, на фабрициевой сумке появляется желатинообразный желтоватый экссудат, покрывающий серозную поверхность.

Капсула была напряжена, покрасневшая. Полосчатость, которая характерна для складок фабрициевой сумки, становилась более выраженной, цвет органа изменялся с серо-белого на кремовый. В просвете фабрициевой сумки и между ее складками находили в некоторых случаях тягучий экссудат соломенного цвета, гнойно-кровянистое содержимое или сгустки фибрина, в тяжелых случаях кровянистую жидкость.

МИКРОКАРТИНА БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ

Фабрициева сумка. Морфологические изменения в фабрициевой сумке, по нашим наблюдениям, характеризуются разнообразием. В ней можно было отметить наличие острых, подострых и хронических воспалительных процессов, вплоть до некрозов отдельных фолликулов и замещению их соединительной тканью.

В начальных стадиях заболевания наблюдали острую воспалительную реакцию с расстройством микроциркуляторного русла и незначительной дескомплексацией клеточных структур.

Спустя два дня после проявления болезни находили незначительное увеличение макрофагов в мозговом веществе лимфатических фолликулов. Кортико-медулярный эпителий выступал не очень четко и большей частью сливался с корковым веществом лимфатического фолликула. Клеточный состав обоих слоев был однороден, в мозговом слое преобладали клетки, имеющие

морфологическую характеристику В-лифоцитов, в корковом слое Т-лимфоцитов. Межфолликулярная соединительная ткань незначительно отечная, волокна разрыхлены. Можно было также отметить повышенное количество псевдоэозинофильных лейкоцитов.

По мере развития болезни в лимфатических фолликулах количество макрофагальных элементов увеличивается они распознаются по своим размерам и просветленной цитоплазмой. Ядра их крупные, цитоплазма слегка базофильная. Число ретикулярных клеток растет. Незначительные изменения претерпевает кортико-медулярный эпителий. Поэтому граница между корковым и мозговым слоями стушевывается. Уже в это время отдельные клеточные элементы мозгового вещества лимфатических фолликулов начинают приобретать пенистое строение.

В тяжелых случаях болезни дистрофические и некротические процессы в лимфатических фолликулах фабрицкевой сумки преобладают, что приводит их к полной деструкции. Такие лимфатические фолликулы уменьшены в объеме. Корковое и мозговое вещество практически не просматривается. Не четко выступает кортико-медулярный эпителий. Лимфатические клетки отсутствуют. Если они и встречаются, то только по периферии мозгового слоя. Вместо них выступают клетки макрофагального типа, они имеют крупные размеры, цитоплазма их имеет пенисто-ячеистое строение. Ядра в них в состоянии пикноза и в большинстве своем смещены к периферии и нередко ядра полностью отсутствуют. На месте их видна эозинофильная масса с контурами клеток. Некоторые клетки лежат обособленно, и как бы отодвигают кортико-медулярный эпителий. В зоне коркового слоя лимфатических фолликулов лимфоидных клеток совсем мало. Ядра их подвергаются пикнозу, а часть - рексису. Можно отметить и вакуолизированные клетки. Одновременно деструктивные процессы отмечались и со стороны межфолликулярной соединительной ткани. Волокна ее разделены и просматривается незначительная слегка оксифильная масса с признаками гидропической дистрофии.

Деструкция лимфатических фолликулов фабрициевой сумки в разные периоды болезни была выражена неодинаково. Часть этих изменений уже описана выше. Некоторые патологические процессы в фабрициевой сумке рассматриваются как средней тяжести, где еще не наступили необратимые процессы. Особенностью

этой стадии является резкая делимфотизация коркового слоя лимфатических фолликулов. В корковой зоне остаются лишь единичные лимфоидные клетки, расположенные цепочкой или в одиночку.

Характерной особенностью поражения лимфатических фолликулов фабрициевой сумки был распад ядер по типу кариорексиса кортико-медулярного эпителия. Глыбки хроматина в таких ядрах напоминали мальтийский крест. В таких фолликулах корковый слой или отсутствовал или был представлен одним или двумя рядами лимфоцитов. Изменений со стороны соединительнотканных волокон, окружающих лимфатические фолликулы не находили. Сосуды микроциркуляторного русла кровенаполнены. Местами можно было отметить незначительный периваскулярный отек.

При ярко выраженном геморрагическом бурсите складки фабрициеволй сумки, на уровне светового микроскопа, изменены до неузнаваемости. На месте лимфатических фолликулов находили скопища крови. Практически весь фолликул был заполнен форменными элементами крови и плазмой. Серозно-геморрагический выпот пронизывал все структуры складок фабрициевой сумки.

Помимо острого геморрагического бурсита с кровоизлияниями, отмечали картину катарально-геморрагического воспаления слизистой просвета фабрициевой сумки. По сути этот процесс мало чем отличается от катаров слизистых оболочек других органов.

При затухании воспалительных процессов в лимфатических фолликулах доминирующими становятся пролиферативне процессы, причем в основном разрастается соединительная ткань. Разросшаяся соединительная ткань сдавливает лимфатические фолликулы и они резко уменьшаются в объеме. В самом лимфатическом фолликуле отмечается перегруппировка клеточных элементов. В центре лимфатического атрофированного фолликула проявляются клетки, которые по морфологии можно отнести к малым и средним лимфоцитам периферической крови. Клеточный состав в основном, однороден, но среди них отмечаются и клетки макрофагального типа, ретикулярная ткань слабо выражена. Кортико-медулярный эпителий в основном не изменен.

Как показали наши исследования, острые воспалительные процессы могут переходить в хронические. Наблюдали обостренный десквамативный катар слизистой оболочки фабрициевой сумки.

У цыплят больных инфекционным бурситом в лимфатических фолликулах фабрициевой сумки формируются кисты. На уровне светового микроскопа они выглядят как овальные или полуовальные, или округлые полости, заполненные слегка оксифильной однородной массой. Эта масса в разных участках кисты выглядит по разному. В одних случаях она окрашивается более интенсивно и прилегает к периферии полости, в других - основная масса сосредоточена в центре полости. Между массой и стенкой полости отчетливо просматривалась светлая полоска в которой каких-либо клеточных структур не отмечали. В содержимом этих кист можно было наблюдать единичные клеточные структуры, которые не имели каких-либо специфических форм. Формирование кист идет преимущественно с центральной части лимфатического фолликула и постепенно доходит до кортико-медулярного эпителия, который, по-видимому и является внутренней стенкой образовавшихся микрокист. Если, такая киста попадает поле зрения в косом или продольном сечении, то можно было наблюдать, по краю ее сохранившиеся крупные пенистые макрофаги. В некоторых случаях в сформировавшихся микрокистах, отчетливо выступала корковая зона фолликула, но она была представлена узкой полоской клеточных элементов. Они в основном сохраняли свою структуру и интенсивно прокрашивались гематоксилином.

Тимус. По мере развития болезни в тимусе происходят определенные морфологические изменения, как нам удалось выяснить, в этом органе при инфекционном бурсите происходит убыль лимфоцитов, прежде всего, из коркового слоя, это с этой стороны, с другой - идет разряжение пространства между тимоцитами. Среди однородных лимфоцитов коркового вещества тимуса, находили клетки макрофагального типа, в принципе они есть и норме, но здесь их было повышенное количество. Основная их роль - захват дериватов, подвергшихся некробиотическим процессам, лимфоцитов. В связи с опустением (делимфотизацией) коркового слоя тимусса происходит стушевывание коркового и мозгового вещества органа - так называемая инверсия слоев. Можно было так же

отметить незначительный отек междольковой соединительной ткани, а в участках, где расположены сосуды (мозговой слой) их сильное полнокровие.

Селезенка. При инфекционном бурсите в процесс вовлекаются все составные части этого органа. Основной признак резкое полнокровие и депонирование крови в красной пульпе. Пикноз и рексис лимфоцитов и захват клеточных дериватов макрофагами, благодаря чему количество гемоседерина селезенки увеличивается. Распад ядер по типу рексиса морфологически имеет ту же характеристику, что и в других лимфоидных органах.

Лимфоидный аппарат слепых кишок. В лимфоидных узелках кишечных «тонсилл», как и в лимфатических фолликулах фабрициевой сумки, отмечали появление крупных одноядерных клеток, имеющих крупное базофильное ядро с одним ядрышком в центре, и более менее отчетливо выраженную базофильную цитоплазму. Эти клеточные структуры были разбросаны в лимфатическом узелке в разной степени. Другие клеточные элементы, больше напоминающие средние лимфоциты периферической крови, заполняли оставшееся пространство. Сам лимфоидный узелок был окружен узкой полоской соединительной ткани, имеющей грубую волокнистость и продолговатые веретенообразные ядра с сильно заостренными краями.

Прилегающие ворсинки и крипты также имели морфологические изменения. Они касались, прежде всего, выстилающего их железистого эпителия, клетки набухшие, апикальные их края содержат оксифильную массу, которая нередко отходит просвет кишечной трубки. Особенно отмечали изменения ядер этих эпителиальных клеток, в них можно отметить все стадии их распада: пикноз, рексис и лизис. Многие из них были с признаками гиперхроматоза. Среди эпителиальных клеток, ворсинок и крипт в одиночку или небольшими группами распологались лимфоциты и псевдоэозинофильные лейкоциты.

В железе Гардера и дивертикуле Меккеля находили достоверное уменьшение клеток плазмоцитарного ряда.

Печень. В печени отмечали неравномерное увеличение объема эпителиальных клеток, в результате чего происходит сдавливание капилляров, происходит набухание и помутнение цитоплазмы. Характерно появление и накопление в цитоплазме зернистости белковой природы. Очертания ядра и

границы клеток трудно различимы. В редких случаях находили случаи, когда цитоплазма приобретала пенистый вид. На отдельных препаратах наблюдалась картина очаговой жировой декомпозиции с распадом ядер, результатом чего появляются участки жирового некроза.

Почки. В начальной стадии преобладали признаки диффузной зернистой дистрофии эпителия проксимальных канальцев почек. Эпителий дистальных канальцев уплощен, просветы их расширены и заполнены клеточным детритом с примесью псеводэозинофилов. По мере развития процесса эпителий проксимальных канальцев подвергается некробиозу и отторгается от базальной мембраны. На поздних стадиях можно находить небольшие очаги нефросклероза и регенерацию эпителия мочевых канальцев.

МОРФОЛОГИЯ ИММУННЫХ И ДРУГИХ ОРГАНОВ ПРИ ВАКЦИНАЦИИ Клиническая картина. В процессе наблюдения за вакцинированными птицами не выявлено каких-либо значительных отклонений от нормы. Цыплята были подвижные, активно поедали корм. Встречались случаи падежа с клиническими признаками болезни Гамборо (1%) и патологоанатомическими изменениями, описанными выше.

Такие цыплята становились вялыми, малоподвижными, неохотно поедали корм. В дальнейшем появлялся понос белесоватого цвета и в некоторых случаях дрожание мышц головы, шеи и туловища. Цыплята, у которых появлялись такие клинические признаки отставали в росте, перьевой покров у них были взъерошены, загрязнен. Эти цыплята, как правило, умирали, а выжившие заметно отставали в росте.

МИКРОКАРТИНАИ МОРФОМЕТРИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Фабрициева сумка. Размеры лимфатических фолликулов (в относительных величинах) колеблются по дням опыта. Это колебание отмечали, как в контрольной, так и в опытной группах.

У птиц опытной группы максимальное нарастание величины лимфатических фолликулов наблюдалось на 7-10-й день после первой вакцинации, которое происходило за счет разрастания корковой и менее мозговой зон. В корковом веществе происходило уменьшение количества лимфоцитов. Начиная с 12-го дня, происходит постепенное снижение размеров лимфатических фолликулов. По

и

отношению размеров мозгового и коркового вещества, то значительных изменений мы не обнаруживали.

Тимус. По результатам морфометрии тимуса можно сделать вывод, что корковое вещество в начале опыта по сравнению с контролем уменьшается.

В отдельные дни опыта толщина коркового и мозгового вещества практически не отличались, т.е. были практически одинаковые значения. Так с 10-го дня после вакцинации разброс начинает уменьшаться у контрольной группы эти величины составляют 36,8%, у опытной 36%, это явление наблюдается на 12-й день после вакцинации у контрольной группы значение составляет 42,4% у опытной 43,4%, затем значение достигает максимальных значений это происходит на 16-й день в контроле 44,1% в опыте 42,1%. Надо отметить, что с 12-й по 16-й день происходит увеличение коркового слоя в контроле по сравнению с опытной группой. На 21 день картина меняется и корковый слой контрольной группой становится выше опытной, значения соответственно 42,1% и 38,4%.

Плотность расположения лимфоцитов у птиц опытной группы на 10-12 дни после вакцинации в условной единице площади коркового вещества была несколько ниже преимущественно за счет уменьшения количества малых лимфоцитов. Уменьшение толщины коркового слоя тимуса соответственно приводила к увеличению толщины мозгового вещества тимуса.

По нашим данным начиная с 10-го дня опыта и по нарастающей до 16-го дня опыта отмечались незначительные отклонения величины коркового и мозгового вещества, но на 16-й день опыта мозговое вещество было значительно меньше коркового вещества (корковое вещество в контроле 44,1% в опыте 42,1%. Мозговое вещество в опыте и контроле имело одинаковое значение 25,4%).

На 10-й день после вакцинации в тимусе происходило расширение обеих зон долек как мозговой так и корковой, наблюдали снижение плотности расположения тимоцитов в них, это является свидетельством активной миграции клеток за пределы органа, превышающей их пролиферативную способность.

Селезенка. Результаты морфометрии лимфоидных структур селезенки у вакцинированных против инфекционной бурсальной болезни цыплят показывают, что количество лимфоидных узелков (бурсзависимой лимфоидной ткани) в срезе органа сильно колеблются как у цыплят контрольной группы, так и у цыплят опытной групп.

Это колебание составляет от 4 до 8 в контрольной группе и от 6 до 12 в опытной группе. В сравнении полученных данных не наблюдается значительного превосходства какой-либо группы.

Однако надо отметить, что на 10-й и 21-й день после вакцинации размер лимфоидных узелков значительно увеличился по сравнению с контролем. В некоторых случаях мы находили первичную периваскулярную ретикулоэндотелиальную гиперплазию и распад ядер в зародышевых центрах.

Величина лимфатических узлов по дням опыта также подвержена незначительным колебаниям. Это колебание в контрольной группе от 16,8% до 26,7% в опыте от 22,3% до 31,4%. Надо отметить, что значительное увеличение размеров лимфатических фолликулов происходит на 10-12-й день, а затем происходит снижение.

Лимфоидный аппарат слепых кишок (кишечные «тонсиллы»). Размер лимфатических узелков (фолликулов) значительно колеблется по дням опыта у птиц контрольной группы, так и опытной группы. У птиц контрольной группы это колебание регистрируется в пределах величин от 33,2 до 41,2% у опытной группы 36,4 до 56,4%. Также найдено, что лимфоидные узелки увеличиваются в размере в более поздние сроки опыта на 7-й и 10-й дни после вакцинации против инфекционной бурсальной болезни. Отмечено увеличение размеров лимфатических фолликулов у птиц контрольной группы количество лимфоидных узелков в лимфоидном аппарате слепых кишок также подвержено большим колебаниям как в контроле, так и опыте. Эти величины в контроле от 4 до 16 в опыте от 6 до 16 единиц. В первые дни после вакцинации значительных изменений в количестве плазматических клеток не происходит. Начиная с 7-го дня после вакцинации в опытной группе возрастает количество плазматических клеток на 5-й день - 12,4 % на 7-й день - 24. На 10-й день после первой вакцинации отмечали достаточно сильное, ярко выраженное увеличение числа плазмоцитов, по сравнению с контролем.

Паренхиматозные органы. В печени регистрировались изменения характерные для зернистой дистрофии. В почках находили признаки зернистой дистрофии эпителия проксимальных канальцев почек, в других органах изменений не найдено.

Как показали ниши исследования, в органах иммунной системы цыплят при инфекционном бурсите происходят глубокие морфологические изменения, как при естественном течении болезни, так и при вакцинации. Особенно тяжелые дистрофические и некробиотические процессы имеют место в фабрициевой сумке.

Морфологически они проявляются резким расстройством сосудов микроциркуляторного русла, массовой гибелью лимфоцитов мозгового вещества лимфатических фолликулов, отеком и клеточной инфильтрацией межфолликулярной соединительной ткани. Для доказательства морфологической перестройки в лимфоидных органах, нами широко использован морфометический метод для оценки иммуногенной активности вакцины. Проводилось измерение лимфоидных структур в фабрициевой сумке, тимусе, селезенке и лимфоидном аппарате слепых кишок. Литературные источники (Г.Г.Автандилов, 1975; Н.А.Плохинский, 1961 и др.) подтверждают высокую информативность этого метода.

Как показали наши исследования центральные и периферические лимфоидные органы иммунной системы птиц играют существенную роль в патогенезе инфекционного бурсита цыплят и при формировании защитных механизмов при вакцинации. Эти данные не расходятся с литературными источниками (Ибрагимов А.А.,. 1978; Стрельников А.П., 1982;Жаров А.В., 1999; Дроздова Л.И., 1998 и многие другие).

Инфекционный агент, попадая в организм цыплят, неизбежно проходит через лимфоидную систему. Лимфоидные скопления, по пути следования инфекции, осуществляют защитно-барьерную функцию. Эти же лимфоидные скопления являются основными поставщиками иммунных антител, что видно по нарастанию количества плазматических клеток (в фабрициевой сумке, селезенке, лимфоидном аппарате слепых кишок), а также отмечаются активные лимфоретикулярные и макрофагальные реакции, что приводит к количественному и качественному увеличению этих структур.

Особое место занимает тимус. В этом органе не отмечается резкого увеличения количества плазматических клеток, но отмечено, что фигур митоза в корковом веществе становится значительно больше. Т.И.Ивановская показала, что антигенная стимуляция вызывает в тимусе реакцию иммуногенеза в виде акцидентальной инволюции органа. Из тимуса в кровоток поступают малые лимфоциты. Они практически встречаются всюду и походу своего движения вступают в контакт с инородными корпускулярными частицами.

В литературных источниках мало сведений о роли лимфоидного аппарата слепых кишок. Как показали наши исследования миндалины слепых кишок являются составной частью иммунной системы, они активно участвуют во всех иммуноморфологических реакциях.

выводы

1. Основными патологоанатомическими признаками инфекционного бурсита цыплят являются гемодинамические расстройства, проявляющиеся точечными кровоизлияниями на серозных покровах паренхиматозных органов, мышц бедра, груди и (реже) крыльев, по складкам слизистой оболочки фабрициевой сумки с последующим развитием серозно-фибринозного и (реже) катарально-геморрагического бурсита в острых случаях болезни, и атрофией, фиброплазией с образованием кист - в хронических (затяжных). Осложняющими процессами могут быть фибринозный перикардит и аеросаккулит, серозно-геморрагический спленит, белково-жировая дистрофия паренхиматозных органов.

2. Гистологически устанавливают - массовый распад лимфоцитов в лимфоидных органах (селезенка, фабрициева сумка, тимус, лимфоидный аппарат слепых кишок) по типу кариорексиса и кариопикноза, которым сопутствует макрофагальная реакция, с последующим заполнением мозгового вещества фабрициевой сумки клеточным дериватом с большим выходом псевдоэозинофильных лейкоцитов. В фабрициевой сумке отмечается также отек межфолликулярной соединительной ткани с инфильтрацией ее мононуклеарами и гетерофилами(псевдоэозинофилами).

3. Общими патологическими процессами в лимфоидных и паренхиматозных органах при инфекционном бурсите являются огрубление ретикулярной ткани, мукоидное и фибринозное набухание стенок сосудов микроциркуляторного русла, их лимфоидная и псевдоэозинофильная инфильтрация, плазморрагии и кровоизлияния. Увеличение стромальных элементов и уменьшение лимфоидных, ослабление пролиферативных процессов, с ярко выраженными дистрофическими процессами в почках, сердечной мышце, печени.

4. Кортико-медулярный эпителий лимфатических фолликулов фабрициевой сумки остается неизменным на протяжении всей болезни, только в тяжелых условиях ядра его подвергаются распаду по типу кариорексиса.

5. Иммунизация цыплят против инфекционного бурсита вызывает иммунологическую перестройку в лимфоидных органах, что проявляется макрофагальной и плазмоцитарной реакцией, количественным и качественным увеличением лимфоидных структур в фабрициевой сумке, селезенке и лимфоидном аппарате слепых кишок. В тимусе отмечается митотическая активность лимфоцитов коркового вещества.

6. Плазмоцитарная реакция в лимфоидных органах начинает проявляться на 5-7 дни после вакцинации, достигая своего пика к 12-15 дню, затем идет на убыль.

7. Комплекс пато- и иммунологических исследований органов иммунной системы позволяет оценивать иммунный статус организма цыплят, проводить эффективное лечебно-профилактические мероприятия и прогнозировать сохранность молодняка.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Изданы практические предложения Методические рекомендации по патологоанатомической диагностике бурсальной болезни цыплят (болезни Гамборо). - М:, ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И.Скрябина, 2004, 14с.

2. Для оценки иммуногенных и реактогенных свойств вакцин, применяемых в птицеводстве, рекомендуем использовать (на ряду с другими) морфометрический метод.

3. Полученные данные можно использовать в научных исследованиях и в учебном процессе.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Родкина А.А. Патологоанатомические и гистологические изменения при болезни Гамборо // Ветеринария. - № 20,2003. - С. 19-20.

2. Родкина А.А. Некроз и апоптоз в фабрициевой сумке у цыплят при болезни Гамборо // Материалы Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины: Сборник научных трудов - Уфа, 2004. -С. 117-118.

3. Родкина А.А. Морфологические изменения лимфоидных органов цыплят, вакцинированных против болезни Гамборо // Материалы Международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И.Скрябина: Сб. науч. тр. - М., 2004. - С. (в печати)

4. Родкина А.А. Стрельников АЛ. Патологоанатомическая диагностика инфекционной бурсальной болезни цыплят (болезни Гамборо): Методические рекомендации. -М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И.Скрябина, 2004,14 с.

Принято к исполнению 11/11/2004 Исполнено 12/11/2004

Заказ № 446 Тираж: 100 экз.

ООО «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 Москва, Балаклавский пр-т, 20-2-93 (095) 747-64-70 (095)318-40-68 www.autoreferat.ru

РНБ Русский фонд

2005-4 2311б

В настоящее время одной из актуальных проблем в промышленном птицеводстве является инфекционная бурсальная болезнь (болезнь Гамборо, инфекционный бурсит) - широко распространенная, высококонтагиозная, вирусная болезнь молодых цыплят, которая характеризуется поражением лимфоидной ткани фабрициевой сумки (бурсы), высокой смертностью и иммунодепрессивным действием возбудителя, обуславливающим проявления секундарных инфекций (Алиев А.С., 1991; Аттакпа Я.Э., 1992; Бакулин В.А., 1991; Борисов В.А., 1995; Герман В.В., Ибрагимов А.А., 1978).

Инфекционная бурсальная болезнь приводит к большим экономическим потерям, так как вызывает высокую заболеваемость и летальность птиц. Это связано с тем, что в стадах молодняка яичных пород смертность достигает 40-80%, а стадах бройлеров - 30-40%. Особую опасность представляет субклиническая форма заболевания, так как приводит к осложнению вторичными секундарными инфекциями (Алиев А.С., 1991; Ануфриева Т.А., Ольшевская Т.И., 1992;Бакулин В.А., Аксенова Е.Г. и др., 1998; Adejoro S.O., 1991; Homer B.L., Butcher G.D. et.al., 1992).

Иммуноморфогенез у птиц, вакцинированных против болезни Гамборо изучен недостаточно. Ряд исследователей указывает на то, что используемые для вакцинации вакцины вызывают иммунодепрессию, обусловленную явлением делимфатизации и атрофии лимфоидной ткани в органах лимфоидной системы птиц (Бирман Б .Я., Голубничий В.П, и др., 1996; Болотников И.А., Конопатов Ю.В., 1993; Лох В.А, Беляев A.M.; 1981; Allan W.H., Faragher J.T. 1972; Cloud S.S., Rosenberg J.K., 1992; Coletti M., 1997).

Данная болезнь представляет серьезную опасность в связи с выраженным иммунодепрессивным действием вируса, поражающего фабрициеву сумку (Бакулин В.А, 1991; Бирман Б.Я, Грушин В.Н. и др., 1999; громов И.Н., Прудников С.В., 1998; Ибрагимов А.А., 1974, 1978; Жаров А.В., 2000; Красников Г.А., Герман В.В., Ольховик Л.А., 1995; Лох В.А., Беляев

A.M. и др., 1981; Ибрагимов А.А., 1974, 1978; Жаров А.В., 2000; Стрельников А.П., 1989; Дроздова Л.И., 1998; Идрисов Г.З., 1998; Cloud S.S. et. al., 1993; Dohms J.E., Metz A., 1991) .

Несмотря на некоторые успехи в разработке специфической профилактики, многие вопросы морфологии органов иммунной системы здоровых, больных и вакцинированных птиц изучен недостаточно, а без знания этой системы нельзя познать патогенез болезни и разработать эффективную патогенетическую терапию и специфическую профилактику (Алиев А.С., Сираждинов Р.С. и др., 1999; Бирман Б.Я., Грушин В.Н,. Дягилев К.К., 1999; 1998; Zutkert P.D., Hitcher S.B., 1984 и многие др.).

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ

Основная цель работы - изучить патоморфологические и иммуноморфологические изменения в органах иммунной системы при естественной вспышке инфекционной бурсальной болезни и вакцинации против нее.

В связи с этим мы поставили следующие задачи:

1. Изучить патоморфологию и иммуноморфологические реакции в органах иммунной системы при инфекционной бурсальной болезни птиц;

2. Изучить патоморфологию и иммуноморфологические реакции в органах иммунной системы при вакцинации сухой живой вирус-вакциной «Винтерфилд 2512» оральным методом;

3. Установить характерные морфологические признаки болезни и возможность их использования в диагностических целях.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые использованы морфологические, гистологические и морфометрические методы исследования органов иммунной системы цыплят при естественной вспышке инфекционной бурсальной болезни и при вакцинации против нее.

С помощью морфологических методов установлено снижение малых лимфоцитов в тимусе при естественной вспышке инфекционной бурсальной болезни, так и при вакцинации против этой болезни.

Показана динамика развития патологического процесса и характеристика морфологических изменений на микроскопическом уровне.

Полученные данные позволили глубже познать патоморфологию и иммуноморфологию при вакцинации против болезни Гамборо и при естественной вспышке этого заболевания.

Наряду с известными положениями нами получены дополнительные сведения по функциональной морфологии болезни Гамборо и вакцинации против этой болезни.

Изучены количественные и качественные изменения в органах иммунной системы при естественной вспышке инфекционной бурсальной болезни и при вакцинации против этой болезни.

По результатам исследования изданы «Методические рекомендации по патологоанатомической диагностике инфекционной бурсальной болезни кур, болезни Гамборо».

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ

Изучение патоморфологических, морфометрических и иммуноморфологических изменений в органах и тканях больных и вакцинированных животных служит основой для диагностики болезни и понимания специфической профилактики ее.

Описанные морфологические изменения в органах иммунной системы птиц значительно дополняют данные о патогенезе этой болезни.

Проведенные морфологические и иммуноморфологические исследования позволили определить иммуногенные качества и реактогенность вакцины, используемой для профилактики инфекционной бурсальной болезни птиц.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ

По результатам исследований разработаны и утверждены «Методические рекомендации по патологоанатомической диагностике инфекционной бурсальной болезни кур, болезни Гамборо», Протокол заседания методической комиссии факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «МГАВМиБ им. К.И.Скрябина» от 20.04.2004 г. за № 7.

Результаты наших исследований могут быть использованы для написания соответствующих разделов учебных руководств и пособий по патологической анатомии и гистологии.

Данные диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах патологической анатомии и физиологии им. В.М.Коропова, птицеводства и болезней птиц, эпизоотологии ФГОУ ВПО «МГАВМиБ им. К.И.Скрябина».

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы диссертации были доложены на Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Уфа, 17-19 сентября 2003 г.), Международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию академии (Москва, 30-31 марта, 1 апреля 2004 г.), доложены и обсуждены на кафедре патологической анатомии и физиологии им. В.М.Коропова ФГОУ ВПО «Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина», на межкафедральном совещании с участием кафедр нормальной анатомии, гистологии и птицеводства и болезней птиц.

ПУБЛИКАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

По теме диссертации опубликовано три печатные работы в материалах Всероссийской конференции и журнале «Ветеринария» и трудах ФГОУ ВПО «МГАВМиБ им. К.И.Скрябина», посвященных 85-летию академии.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 131 странице машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, сведений о практическом использовании результатов исследований, списка литературы, включающего 182 источника, в том числе 76 иностранных авторов. В приложении представлены основные документы, подтверждающие результаты исследований и их практическую ценность. Работа иллюстрирована 5 диаграммами, 27 рисунками.

5. ВЫВОДЫ

1. Основными патологоанатомическими признаками инфекционного бурсита цыплят являются гемодинамические расстройства, проявляющиеся точечными кровоизлияниями на серозных покровах паренхиматозных органов, мышц бедра, груди и (реже) крыльев, по складкам слизистой оболочки фабрициевой сумки с последующим развитием серозно-фибринозного и (реже) катарально-геморрагического бурсита в острых случаях болезни, и атрофией, фиброплазией с образованием кист - в хронических (затяжных). Осложняющими процессами могут быть фибринозный перикардит и аеросаккулит, серозно-геморрагический спленит, белково-жировая дистрофия паренхиматозных органов.

2. Гистологически устанавливают - массовый распад лимфоцитов в лимфоидных органах (селезенка, фабрициева сумка, тимус, лимфоидный аппарат слепых кишок) по типу кариорексиса и кариопикноза, которым сопутствует макрофагальная реакция, с последующим заполнением мозгового вещества фабрициевой сумки клеточным детриватом с большим выходом псевдоэозинофильных лейкоцитов. В фабрициевой сумке отмечается также отек межфолликулярной соединительной ткани с инфильтрацией ее мононуклеарами и гетерофилами (псевдоэозинофилами).

3. Общими патологическими процессами в лимфоидных и паренхиматозных органах при инфекционном бурсите являются огрубление ретикулярной ткани, мукоидное и фибринозное набухание стенок сосудов микроциркуляторного русла, их лимфоидная и псевдоэозинофильная инфильтрация, плазморрагии и кровоизлияния. Увеличение стромальных элементов и уменьшение лимфоидных, ослабление пролиферативных процессов, с ярко выраженными дистрофическими процессами в почках, сердечной мышце, печени.

4. Кортико-медуллярный эпителий лимфатических фолликулов фабрициевой сумки остается неизменным на протяжении всей болезни только (в тяжелых условиях) ядра его подвергаются распаду по типу кариорексиса.

5. Иммунизация цыплят против инфекционного бурсита вызывает иммунологическую перестройку в лимфоидных органах, что проявляется макрофагальной и плазмоцитарной реакцией, количественным и качественным увеличением лимфоидных структур в фабрициевой сумке, селезенке и лимфоидном аппарате слепых кишок. В тимусе отмечается митотическая активность лимфоцитов коркового вещества.

6. Плазмоцитарная реакция в лимфоидных органах начинает проявляться на 5-7 дни после вакцинации, достигая своего пика к 12-15 дню, затем идет на убыль.

7. Комплекс пато- и иммунологических исследований органов иммунной системы позволяет оценивать иммунный статус организма цыплят, проводить эффективные лечебно-профилактические мероприятия и прогнозировать сохранность молодняка.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Изданы практические предложения Методические рекомендации по патологоанатомической диагностике бурсальной болезни цыплят (болезни Гамборо).

2. Для оценки иммуногенных и реактогенных свойств вакцин, применяемых в птицеводстве, рекомендуем использовать(на ряду с другими) морфометрический метод.

3. Полученные данные можно использовать в научных исследованиях и в учебном процессе.