Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Оценка сравнительной эффективности иммуно-корректоров для повышения резистентности крупного рогатого скота

На правах рукописи

ОЦЕНКА СРАВНИТЕЛЬНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ИММУНО-КОРРЕКТОРОВ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16 00 04 Ветеринарная фармакология с токсикологией 16 00 03 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ Н \ СОИСКАНИЕ V ЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ВЕТЕРИНАРНЫХ НАУК

Краснодар - 2008

□034447В2

003444762

Работа выполнялась в лаборатории терапии Краснодарского науч но-исследовательского ветеринарного института РАСХН

Научные руководители

заслуженный деятель науки РФ доктор ветеринарных наук, член-кор РАСХН, профессор Антипов Валерий Александрович

доктор ветеринарных наук Басова Наталья Юрьевна

Официальные оппоненты доктор ветеринарных наук

Кузьмпнова Бленд Васильевна

доктор ветеринарных наук, профессор

Дорофеев Виталий Иванович

Ведущая организация ФГУ «Донской государственный аграрный университет»

диссертационного совета Д 220 038 07 в Кубанском государственном аграрном университете по адресу 350044, г Краснодар, ул Калинина, 13

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета

Защита состоится

в часов на заседании

Автореферат разослан « р »

г

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных нау

И А Родин

1.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1. Актуальность проблемы. В настоящее время широкое распространение получили болезни животных, развивающиеся на фоне снижения естественной резистентности, обусловленной как не специфическими факторами, в первую очередь, нарушением содержания и кормления, (В С Бузлама, 1987, А А Конопаткин, 1993, Р H , Коровин 1995, Бондаренко О И, с соавт , 1996, А Г Шитый с соавт, 1997, M С Найденский 1995-1997, К X Папуниди, 1998, А В Иванов, 2000,), так и специфическими ( В M Данилевский, 1974; M А Сидоров с соавт ,1975, Г П Бородай, 1978, А Г Глотов с соавт, 2006, Р Ide, 1970, L Lühe, 1974, D Me Kercher 1978, L Sidoli, 1979, L Thomas etei, 1980, С Ungureanu etel, 1981, MA Muneer, JO. Farah, JAWewman, S M Cogan, 1988), которые приводят к возникновению вторичных им-мунодефицитных состояний В развитии целого ряда болезней неинфекционной этиологии, таких, как эндометрит, мастит, диспепсия, бронхопневмония в конечном итоге принимают участие бактериальные и вирусные агенты, часто сами выступающие в роли иммуносупресоров (вирус лейкоза КРС, герпес вирус, парамиксовирус, и др ) (В Г Зароза, 1978, В Е, Сединов, 1982 В Н, Сюрин с соавторами, 1983, А А Конопаткин с соавторами, 1984, Э А Шегидевич, 1984, Ю H Федоров, 2000, ПН Смирнов, 2007, С G Loosli, 1968, A Edward, 1978, D Pritchard, 1980, A -M К Virtala, G D Mechor, У T Grohn, H W Erb, E J Dubovi, 1996)

Поскольку практически все заболевания, все процессы в организме в той или иной степени связаны с различными иммунодефицитами, (ЮН Федоров, О А Верховцев, 1996,Р M Хаитов, БВПинегин, 1996, Р M Хаитов, 1999, А А Яримин 1999,) а применение традиционных схем профилактики таких болезней не всегда успешно, иммунокоррек-ция приобретает все большее значение в комплексной профилактике и терапии большинства патологических процессов (Д H Лазарева, Е К Алехин, 1985, Ю H Федоров, 2000, П H Смирнов, 2007)

Иммуностимуляция без интерпретации показателей, характеризующих иммунный статус может привести к нарушению полноценного функционирования иммунной системы, иммуносупрессии и, как результат, гибели животных от сопутствующих заболеваний (Р Петров, 1982, ЮН Федоров,2000)

С учетом изложенного, весьма актуальным следует считать поиск эффективных и безопасных средств, усиливающих иммунную защиту, устойчивость к стрессам и стимулирующих обменные процессы в организме (Бузлама В С , 1997, Конопатов Ю В , 1992, Уразаев H А , 1995)

Поэтому изучение иммунобиологических параметров КРС, определение эффективности иммунотропных препаратов для повышения резистентности животных является актуальной проблемой

1.2. Цель исследований - выявить наиболее часто встречающиеся дефициты иммунитета у крупного рогатого скота в Краснодарском крае и определить эффективность применения иммуностимуляторов для повышения резистентности животных

1.3. Задачи исследований:

1 Изучить распространение незаразных болезней КРС на территории Краснодарского края

2 Установить наиболее распространенные дефициты иммунитета, встречающиеся у КРС в Краснодарском крае

3 Подобрать доступные иммуностимулирующие препараты, корректирующие выявленные у КРС иммунодефицитные состояния

4 Изучить влияние ПАК - 9000 на иммуногенез, токсикологические параметры новых иммуностимулирующих препаратов иммунофан и ПАК-9000.

5 Изучить влияние иммуностимулирующих препаратов на клинические и иммунобиологические показатели КРС

6 Определить эффективность применения иммуностимулирующих препаратов в системе лечебно-профилактических мероприятий

1.4 Научная новизна работы. Изучено распространение болезней крупного рогатого скота на территории Краснодарского края, выявлены наиболее часто встречающиеся патологии

Впервые в сравнительном аспекте изучены иммуннобиологические показатели крупного рогатого скота различных пород молочного направления, разводимых в регионе, различных физиологических и возрастных групп Изучены иммунобиологические показатели у инфицированных ВЛ КРС, больных лейкозом коров в сравнении с интактными

Установлены наиболее распространенные у крупного рогатого скота в Краснодарском крае дефициты иммунитета

Подобраны иммуностимулирующие препараты для коррекции выявленных нарушений иммунитета - иммунофан и ПАК-9000, изучены их, токсикологические свойства, влияние препарата ПАК-9000 на иммуногенез, установлена высокая иммунотропная активность изученных препаратов, низкая токсичность, отсутствие кожно- резорбтивного и раздражающего действия, эмбриотоксической и тератогенной активности

Доказано позитивное влияние новых иммуностимулирующих препаратов на клинические и иммунобиологические показатели КРС и эф-

фективность их применения для повышения резистентности в системе лечебно-профилактических мероприятий, а так же снижения внутриутробного и постнатального инфицирования телят ВЛ КРС

1.5. Теоретическая и практическая значимость работы. Дана комплексная характеристика иммунобиологического и биохимического статуса КРС различных пород, физиологических и возрастных групп,

иммунобиологического и биохимического статуса у инфицированных ВЛ КРС, больных лейкозом коров в сравнении с интактными

Выявлены наиболее часто встречающиеся дефициты иммунитета у КРС на территории края

На основе полученных знаний об иммунобиологическом статусе КРС подобраны, изучены и предложены в ветеринарную практику новые эффективные, доступные иммуностимуляторы для повышения резистентности КРС

Практикующим ветеринарным специалистам предложена система, повышения естественной резистентности крупного рогатого скота, включающая применение иммуностимуляторов на фоне нормализации обменных процессов, способствующая снижению заболеваемости, повышению сохранности и продуктивности коров и телят

Предложенные препараты и схемы могут быть использованы при оздоровлении скотоводческих хозяйств Краснодарского края от лейкоза

1.6. Основные положения, выносимые на защиту.

- распространение заболеваний крупного рогатого скота в Краснодарском крае

- иммунобиологические показатели крупного рогатого скота различных возрастных, физиологических, породных групп, сравнительная оценка иммунобиологических и биохимических показателей инфицированных ВЛ КРС, больных лейкозом и интактных коров

- результаты исследований токсикологических свойств и влияния на иммуногенез новых синтетических иммуностимуляторов- иммунофа-на и ПАК-9000

- результаты применения иммуностимулирующих препаратов имму-нофана и ПАК - 9000 для повышения резистентности крупного рогатого скота в системе профилактических мероприятий

1.7. Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях», посвященной 60-летию Краснодарского НИВИ (2006), на первой всероссийской научно-практической конференции

молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса», посвященной 85- летию КубГАУ (2007), на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной 125-летию ветеринарии Курской области, доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета Краснодарского НИВИ (2005-2008)

Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертационной работе, заслушаны, обсуждены и одобрены на межлабораторном совещании сотрудников КНИВИ (2008)

1.8. Публикация материалов исследований. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе 1 в реферируемом издании, рекомендуемом ВАК РФ

1.9. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 191 странице компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы, приложений

Работа иллюстрирована 37 таблицами, 21 рисунком Список литературы включает 305 источников, из них 258 отечественных и 47 зарубежных авторов

1.10. Внедрение результатов исследований. Система мероприятий, для повышения сохранности и продуктивности крупного рогатого скота, включающая применение иммуностимулирующих препаратов ПАК-9000, иммунофан и левомизов, внедрена в двух хозяйствах Краснодарского края ОАО п/з им В И Чапаева Динского района и ОПХ п/з «Ленинский путь» Новокубанского района На основе результатов исследований разработано «Временное наставление по применению препарата ПАК-9000», рассмотренное и одобренное ученым советом КНИВИ (протокол №4 от 26 мая 2008 г)

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.Материалы и методы исследований

Работа проводилась в лабораториях терапии, фармакологии ГНУ Краснодарского НИВИ, кафедре органической химии КубГУ, кафедре анатомии сельскохозяйственных животных ФГОУ ВПО КубГАУ, лаборатории биотехнологии СКНИИЖ в 4 животноводческих хозяйствах Краснодарского края с 2006 по 2008 годы, согласно НИР по теме 08 04 03 госконтракту по НИОКР №2 3 /17-2007.

Анализ распространения неинфекционных болезней крупного рогатого скота проводили по данным ветеринарной отчетности Краснодарского края, форме 2-вет Изучение иммунобиологических показате-

лей крупного рогатого скота проводили в 4-х хозяйствах 3-х районов края и г Краснодара

Эпизоотологические, клинические, патологоанатомические исследования проводили по общепринятым методам

Комплексный гематологический анализ - автоматизированным анализатором «Абакус» (Австрия) и унифицированным методом подсчета в счетной камере, подсчет общего количества лейкоцитов - унифицированными методами подсчета в автоматическом счетчике типа «PS-5» - Пикоскел и в счетной камере, скорость оседания эритроцитов (СОЭ) - методом Панченкова, гемоглобина - по методу Сали и гемиг-лобинцианидным методом, количественную оценку лимфоидных элементов - с помощью гематологического электронного цифрового счетчика, согласно методическим рекомендациям по ветеринарной гематологии (А А Кудрявцев, с соавт, М,1969, ГА Симонян, Ф Ф Хисамутдинов, М, 1995).

Определение общего белка в сыворотке крови (колориметрически), белковых фракций (нефелометрически), каротина и витамина А (по Бессею, в модификации Анисовой), мочевины (цветной реакцией с диацетилмонооксимом и тиосемикарбазидом), общего кальция (с орто-кризолфталеином), неорганического фосфора (с ванадат-молибдатным реактивом), глюкозы (ферментативно). Активность трансаминаз, мочевую кислоту, билирубин, общие липиды, - с помощью наборов фирмы «ДЦС» Микроэлементный состав крови исследовался атомно-абсорбционным методом.

Бактерицидную активность сыворотки крови - нефелометриче-ским методом по отношению к референтному штамму Е coli 055 в нашей модификации, лизоцимную активность сыворотки крови - нефеломет-рическим методом с М lysodeiticus ( ацетоновая культура ), фагоцитарную активность нейтрофильных гранулоцитов периферической крови -с тест-культурой St aureus 209р, оценку функциональной активности микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов - по спонтанному и стимулированному NBT- тесту, стимуляцию проводили тест-культурой St aureus 209р, циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) - методом преципитации с полиэтиленгликолем-6000, количество Т-лимфоцитов и их субпопуляций - методом спонтанного розеткообразо-вания со стабилизированными эритроцитами барана с теофиллином и без, количество B-лимфоцитов - розеткообразованием с ЕАС-комплексом с использованием стабилизированных эритроцитов быка, основываясь на " Методических указаниях по тестированию естественной резистентности телят" М, 1980, "Тестирование состояния микоби-

цидной системы нейтрофильных гранулоцитов в диагностике иммунного дефицита" и "Методах оценки функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов", И В Нестерова с соавт ,1992 Титры антиэрит-роцитарных антител определяли в РМГА согласно "Иммунологическим методам" под редакцией ГФримеля, 1987 Инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота коров и колостральный иммунитет у телят выявляли в реакции иммунной диффузии в агаровом геле (РИД) согласно "Методическим указаниям по диагностике лейкоза крупного рогатого скота " № 13-7-2/2130 от 23 08 2000 г с помощью набора для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота ФГУП "Курская биофабрика-фирма "Биок", больных лейкозом коров - по результатам гематологического исследования - выявление повышенного содержания лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови, согласно "лейкозного ключа", выявление внутриутробного инфицирования телят вирусом лейкоза крупного рогатого скота - молекулярно-генетическим методом полимеразной цепной реакцией (ПЦР) "Nested» - ПЦР для гена env вируса лейкоза крупного рогатого скота проводили по методу Licursi М et al , титры к парагриппу -3 КРС в РТГА, согласно «наставлению по применению набора диагностикумов парагриппа-3 крупного рогатого скота» № 432-3 от 02 06 1989 г выпущенных Государственной Приволжской биофабрикой, ТУ-10-19-84-89, серия №5

Общетоксические свойства препаратов оценивали путем определения острой и хронической токсичности а также возможных побочных свойств и отдаленных последствий в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденными ГУВ СССР и «Методическими рекомендациями по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии», одобренных секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998)

Определение острой токсичности проводили на белых крысах по методу Deishmann, Le Blank (1943), согласно «Методическим указаниям по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных», Воронеж, 1987

Параметры хронической токсичности изучали по общепринятым методикам, при этом препараты задавали ежедневно в терапевтической, и дозах, превышающих терапевтическую в 3 и 5 раз в течение двух месяцев При наблюдениях учитывали потребление корма, воды, состояние шерсти и слизистых оболочек, показатели дыхания, пульса, температуры тела Взвешивание животных осуществляли в начале опыта, а затем каждые 20 дней, кровь для морфологических исследований брали

3 раза (фоновое, на 30 и 60 сутки) В начале и по окончанию эксперимента проводили биохимические исследования сыворотки крови, а ме-стно-раздражающее действие на желудочно-кишечный тракт оценивали в процессе патоморфологического изучения при макро- и микроскопическом исследовании

В хронических опытах оценивали влияние препаратов на функцию пищеварительного тракта, для этого каждые 20 дней от животных опытной и контрольной групп собирали фекалии, в которых определяли цвет, запах, консистенцию (органолептически), наличие кровяных пигментов (бензидиновой пробой), желчных пигментов, жира (окраской суданом-3), крахмала (обработка раствором Люголя), рН-(лакмусовой бумагой)

Определение кумулятивных свойств проводили по методу Lim (1961), на белых крысах в течение 28 дней по определенной схеме, оценивая при этом степень накопления изучаемых препаратов в организме животных

Выявление кожно-резорбтивного действия изучаемых веществ проводилось по методике И В Саноцкого (1970) методом накожных аппликаций на морских свинках и конъюнктивальной пробой на кроликах.

Исследования по изучению эмбриотоксической и тератогенной активности проведили общепринятыми методами на белых мышах при ежедневном введении на протяжении всего срока беременности.

Патоморфологические исследования органов и тканей животных проводили общепринятыми в патоморфологии методам (ГА Меркулов, 1969), Материал для исследования (печень, селезенка, почки, легкие и сердце, семенники) отбирали непосредственно после убоя и фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина Кишечник отбирали в области перехода двенадцатиперстной кишки в тощую, а поджелудочную железу в центральной части вентральной доли Проводку материала для гистологических исследований осуществляли по общепринятой методике, заливку осуществляли в парафин, серийные парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм готовили при помощи санного микротома МС-2, окрашивали гематоксилином и эозином Микрофотографии изготавливали при помощи микроскопа «Микмед -1» и цифрового фотоаппарата « Canon -540 А», при увеличении х200 ( ок 10 х об 20) и х400 (ок х10 х об 40)

Оценку фармакологического действия препаратов на основные показатели обмена веществ, проводили путем изучения гематологических и биохимических показателей крови опытных животных

Определение экономической эффективности применения препаратов проводили согласно "Методическим рекомендациям по определению общего экономического эффекта от использования результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ в агропромышленном комплексе" Москва, 2007

Математическую и биометрическую обработку экспериментальных данных осуществляли с помощью программы Microsoft Excel 2000 на компьютере Пентиум 2, степень достоверности устанавливали по распределению Стьюдента

2.2.Распространение неннфекционных болезней крупного рогатого скота в Краснодарском крае

Анализ заболеваемости и отхода крупного рогатого скота в Краснодарском крае свидетельствует о широком распространении незаразных болезней Не смотря на значительное снижение поголовья за последние 10 лет - в 1,9 раза, заболеваемость животных остается высокой Если в 1997 году заболеваемость крупного рогатого скота в Краснодарском крае была 63,4%, то в 2007 году этот показатель, только от не заразных болезней, составил 52,9% и колебался в 2005-2007 годах в пределах 51,2%- 52,9%, или ежегодно заболевало 346900-400200 животных Таким образом, в Краснодарском крае заболеваемость крупного рогатого скота за последние три года составила 51,8%±0,55 к обороту стада Наиболее часто регистрировали болезни органов размножения -39,17% ±0,61, органов пищеварения - 28,64%±0,49 , органов дыхания -18,5%±0,39 и обмена веществ - 14,37%+0,24 Летальность животных за тот же период составила в среднем 1,95%+0Д1, смертность -1,01%±0,06 Наиболее часто регистрировали отход от болезней органов пищеварения - пало 48,27%±0,78 и вынуждено убито - 46,02%±0,1б, от болезней органов дыхания - пало 25,63%±0,81 и вынужденно убито 28,64%±1,56, болезней обмена - пало 15,57%+1,92 и вынужденно убито 10,45%+1,2 Соответственно к общему количеству павших и вынужденно убитых животных От болезней органов размножения за тот же период пало 1,15%±0,11 и было вынужденно убито 5,14%±0,18

2 3. Иммунобилогические показатели крупного рогатого скота.

2.3.1. Иммунобиологические показатели крупного рогатого скота различных породных групп. Иммунобиологические показатели крупного рогатого скота различных пород молочного направления изучали на базе 4-х хозяйств Краснодарского края, имеющих хорошую кормовую базу и получаю-

щих молочную продуктивность выше 5,5 тыс кг молока на фуражную корову, у клинически здоровых дойных животных в возрасте 2-4 лактации, 2-4 месяцев стельности айширской, красной степной, голштино-фризской пород местного разведения и голштино-фризской породы привезенный из Ленинградской области

Достоверных различий между гематологическими показателями у животных различных породных групп не отмечали У коров красной степной породы выявлена эозинофилия в пределах 6,33%±2,25, что может объясняться чрезмерной антигенной нагрузкой и подтверждается показателями ЦИК - 600,17ед ±89,05, которые, впрочем, очень высоки у всех обследованных животных, не зависимо от породной принадлежности и превышают показатели нормы в 3,2-12 раз

У обследованных коров показатели ФА ниже нормы и находятся в пределах 18,4%±2,03 - 33,6%±3,44, низкая активность микробицидной системы НГ, что подтверждается результатами НБТ-теста и низким коэффициентом мобилизации, при достаточно высоком количестве фар-мазин-позитивных нейтрофилов в спонтанном НБТ-тесте

Относительное и абсолютное количество Т- и В-лимфоцитов не имело достоверных различий у животных разных пород При низких показателях количества Т-лимфоцитов (36,17%±5,1 - 51,3%±3,2) и В-лимфоцитов( 21,83%±3,48 - 28,5%±3,62 ) их соотношение находилось в пределах нормы

Количество ^ в у всех животных находился в пределах нормы, однако, у коров красной степной породы этот показатель был достоверно ( Р<0,95 ) на 16,9% - 33,6% ниже, чем у животных других пород, при этом количество М было выше на 21,9% - 52,5% по сравнению с черно-пестрым и айширским скотом и превышало норму на 12,5%

Бактерицидная активность сыворотки крови у коров айширской породы была достоверно (Р<0,01) выше, чем у других породных групп и достигала значения 91,01%±1,64

Лизоцимная активность сыворотки крови у всех обследованных животных была низкой (19,2 ед ±10,6 - 23,9 ед ±1,05) 2.3.2.Иммунобиологические показатели крупного рогатого скота различных физиологических групп Иммунобиологические показатели коров различных физиологических групп изучали в ОПХ п/з «Ленинский путь» Новокубанского района, у клинически здоровых коров в возрасте 2-4 лактации, голштино-фризский породы 4 групп по 5 животных в группе 1 - коровы через 1 -1,5 месяцев после отела, не стельные, 2 - стельность 7-7,5 месяцев, 3 -2-4 месяца стельности, 4 - коровы - «перегулыцицы», не стельные

У глубоко стельных сухостойных коров было достоверно (Р<0,001) выше количество гемоглобина на 13,7% по сравнению с коровами в первой фазе лактации, на 10,4% - по сравнению с 3-й группой коров и на 10,1% - по сравнению с коровами- «перегулыцицами»

Другие изученные гематологические показатели не имели достоверных различий Количество эритроцитов понижено (ниже 5x10 12 /л) у всех животных, цветовой показатель был ниже нормы на 18,9% - 27,8% Отмечена относительная эозинофилия у коров 3 и 4 групп и лим-фоцитоз у коров 1 и 2 групп, нейтропения (на 24,3% - 44,1% ниже нормы) у всех обследованных животных

У всех животных понижена фагоцитарная активность, низкое фагоцитарное число, при этом фагоцитоз не завершен только в 4-й группе - коров - «перегулыциц» (показатель ниже 1,0)

Показатели клеточного звена иммунитета не имели достоверных различий, относительное и абсолютное количество Т- и В-лимфоцитов понижено, их процентное соотношение соответствовало норме у всех коров, кроме животных 1-й группы, где отмечено понижение количества Т-лимфоцитов, количество ^ в у всех животных находился в пределах нормы, однако, у коров 4-й группы этот показатель был на 10,6% -22,7% ниже, чем у животных других групп, при этом количества М и А находились в пределах нормы и не имели существенных отличий от показателей в других группах ЦИК резко повышены у животных всех физиологических групп в 8-15 раз, по сравнению с коровами 1-й группы достоверно повышение этого показателя у животных 2-й ( Р<0,001) и 3-й групп (Р<0,05)

Низкая бактерицидная и лизоцимная (12,78ед+0,9-15,22 ед ±1,41) активность сыворотки крови

2.3.3.Иммунобиологические показатели молодняка крупного рогатого скота различных возрастных групп

Для изучения имунобиологических показателей молодняка было сформировано 3 группы телят айширской породы разного возраста по 10 животных в группе 1-я группа - телята в возрасте 1-1,5 месяцев, 2-я группа - телята 3-4 месячного возраста и 3-я группа - телята 5-6 месяцев

У телят в возрасте 5-6 месяцев отмечается повышение общего количества лейкоцитов на 129% или в 2,3 раза по сравнению с телятами 34 месячного возраста и на 59,5% - телятами 1-1,5 месячного возраста У всех возрастных групп выявлена анемия - цветовой показатель 0,56 ед ± 0,08 - 0,6 ед ±0,14 (0,03), нейропения и лимфоцитоз

Снижение фагоцитарной активности у телят 3-4-хмесячного возраста компенсировался за счет активизации микробицидной системы нитро-филов - коэффициент мобилизации 1,33 ед±0,29, в показателях клеточного звена иммунитета у животных данной возрастной группы отмечен сдвиг в сторону увеличения Т-лимфоцитов и нарушения соотношения Т- и В-лимфоцитов, при этом активность В-лимфоцитов повышена, о чем свидетельствует высокое значение ^ в

Показатели естественной резистентности находились на высоком уровне бактерицидная активность варьировала в диапазоне от 42,1%±1,5 у телят 3-4-х месячного возраста до 73,9%±2,1б - у телят 56-и месячного возраста, лизоцимная активность, соответственно от 28,6 ед ±4,8 до 38,34 ед ±6,9

Таким образом, установлено, что не смотря на возрастные, физиологические и породные особенности, у крупного рогатого скота в Краснодарском крае выявлены нарушения клеточного звена иммунитета, дефицит фагоцитоза, и неспецифического звена по лизоцимной активности

2 3.4.Биох1шнческие показатели крупного рогатого скота различных возрастных групп

Биохимические показатели, характеризующие основные обменные процессы были изучены у крупного рогатого скота айширской породы 3 групп телята 3-4-х месячного возраста, телки 15-17-и месячного возраста и коровы 2-3 лактации, 2-4-х месяцев стельности

Установили, что у 100% телят и у 33%телок общий белок ниже нормы на 18,7% - 41,5%, нарушение его фракционного состава выявлено у 100% телят, изменения в протеинограммах связаны с повышением альбуминовой (на 3,7% -23,8%), и резким снижением у - глобулиновой фракции (на 20,4%-95,6%), что характерно при наличии иммунодефи-цитного состояния В 40% проб не значительно, на 3,8% -11,3% повышено содержание глюкозы, мочевина снижена в 50% проб АЛТ снижена у 90% телят, Са Р соотношение нарушено у 100%телят и 80% телок, за счет повышенного содержания Р Зарегистрированы низкие значения цинка и магния - 20%, железа - 100% проб, концентрация каротина на нижней границе нормы у 70% и ниже нормы у 30% обследованных телят Концентрация глюкозы снижена у 40%телок, патология печени по тимоловой пробе выявлена у 20% Концентрация каротина у всех телок ниже нормы

У 70% коров установили снижение общего белка и нарушение его фракционный состава за счет снижения альбуминовой и повышения

у-глобулиновой фракций, глюкоза снижена в 90% проб на 17,5%-82,5%, в 100% образцов нарушено Са Р соотношение, снижено содержание цинка и меди, в 80% - каротина Патология печени по тимоловой пробе установлена у 30% обследованных коров

Результаты проведенных исследований подтверждают мнение, что нарушения обменных процессов у крупного рогатого скота способствуют развитию вторичных иммунодефицитных состояний

2.3.5 Иммунобиологические показатели инфицированных ВЛ КРС и больных лейкозом коров в сравнении с интактными

Лейкоз крупного рогатого скота, занимает в структуре инфекционных патологий в Краснодарском крае ведущее место

Изучили показатели иммунитета и их взаимосвязь с обменными процессами у глубоко стельных интактных, зараженных ВЛ КРС и больных лейкозом коров айширской породы 2-3 стельности, из которых сформировали 3 группы по 10 голов в каждой

1-инфицированные, 2 - интактные, 3 - больные У больных лейкозом коров понижено содержание общего белка (Р<0,001), изменен его фракционный состав за счет увеличения (5-глобулиновой и снижения у-глобулиновой фракций Количество глюкозы у больных и интактных коров сравнимы, однако, отмечено резкое снижение этого показателя у инфицированных животных - на 45%, по сравнению с интактными Количество мочевины достоверно (Р<0,05) снижено у больных коров, аминотрансферазы соответствуют показателям нормы

Установлено достоверное снижение уровня магния, цинка и железа в сыворотке крови больных лейкозом коров, магния - инфицированных Кальций повышен на 43% у инфицированных коров Достоверно снижение каротина у инфицированных и больных лейкозом коров по сравнению с интактными У больных коров достоверно (Р<0,01) снижено количество гемоглобина, прослеживается тенденция к развитию анемии, лейкоцитоз, лимфоцитоз, нейтропения Остальные гематологические показатели достоверно не различались у больных лейкозом, инфицированных ВЛ КРС и интактных коров

Результаты иммунологических исследований выявили повышение ФЧ и ФИ, при резко сниженной активности микробицидной системы У больных коров регистрируется увеличение количества Т- и В-лимфоцитов, как в процентном, так и в абсолютном значениях, однако, функциональная активность В-лимфоцитов, продуцирующих иммуноглобулин класса М снижена

Лизоцимная активность сыворотки крови интактных коров была ниже на 32,8% по сравнению с инфицировнными и на 31,7% - больными лейкозом Бактерицидная активность сыворотки крови интактных животных на 38,8% ниже, чем у инфицированных и на 20,6% выше, чем у больных.

2.4.Влияние ПАК-9000 на иммуногенез

Изучение влияния различных доз двух новых синтезированных препаратов (препараты представляют собой прозрачные, слегка опалес-цирующие 3% растворы сополимеров (ПАК-ПАН) и полимера (ПАК-9000) органических кислот в дистиллированной воде, рН 5,5-6,1) на иммуногенез по иммунному ответу на внутривенное введение эритроци-тарного антигена беспородным белым мышам массой 18-20 г

Было использовано 70 белых мышей, которых по принципу пар-аналогов разделили на 7 групп по 10 животных в группе шесть опытных и 1 - контрольная Изучали дозировки препаратов 0,1, 0,25 и 0,5 мг/кг массы при внутримышечном введении на фоне двукратной иммунизации отмытыми эритроцитами барана. Контрольным животным вводили физиологический раствор Через 7 дней после второго введения эритроцитов у мышей всех групп взяли кровь и определили уровень ан-тиэритроцитарных антител в РМГА Наиболее высокие титры антител были у животных 5 опытной группы, которым ввели ПАК-9000 в дозе 0,1 мг/кг массы тела - 1 256 Основываясь на полученных результатах в дальнейшем проводили изучение препарата ПАК-9000 в дозе 0,1 мг/кг массы тела животного при внутримышечным введении

2.5. Токсикологическая оценка ПАК-9000 Изучение острой токсичности препарата ПАК-9000 проводили на 16 белых не линейных крысах с массой тела 195-205 г из которых по принципу пар-аналогов сформировали две группы - опытную и контрольную Крысам однократно в диапазоне от 4 до 646 мг/кг массы тела, вводили препарат для определения различных доз ЬБ при однократном внутримышечном введении препарата, в диапазоне объемов от 0,02 см3 до 5,0 см3 Животным контрольной группы в тех же объемах - физиологический раствор Наблюдение вели в течение 14 дней

Было установлено, что введение препарата животным с № 1-7 не выявило клинической картины отравления Введение крысе с № 9 препарата в дозе 436 мг/кг массы тела привело к появлению выраженных клинических признаков интоксикации, на 11 день наступила гибель (таб 1)

Таблица 1

Результаты определения острой токсичности препарата ПАК 9000 для

№п/п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

Исследуемая доза, мг/кг 4 8 16 32 64 128 282 320 436 646 359

Выжило/погибло (+/-) + + + + + + + + - - -

День наступления гибели И 9 9

Исходя из факта гибели животного № 9, не перенесшего дозу препарата 436 мг/кг массы тела и оставшейся в живых крысы под № 8 с дозировкой 320 мг/кг, была установлена доза, являющаяся максимально переносимой и не вызывающей гибели животного при однократном внутримышечном применении - 1ЛЭ„ - 320,0 мг/кг массы тела Доза 359,0 мг/кг массы тела соответствует Ы}50, доза 436 мг/кг массы тела соответствует ЬОюо

Изучение хронической токсичности препарата ПАК-9000 проводили на 40 беспородных белых крысах живой массой 185-205 г, которых по принципу пар-аналогов разделили на 4 группы по 10 животных в группе - три опытных и одна контрольная

Крысам 1 опытной группы терапевтическую дозу (0,1 мг/кг массы тела) ПАК-9000 вводили внутримышечно, на протяжении 2 месяцев по схеме трижды, с интервалом 24 часа Животным второй и третьей опытных групп - в трехкратной и пятикратной терапевтической дозе (0,3 мг/кг и 0,5 мг/кг массы тела) в объеме 0,5 см3 Контрольным животным в том же объеме инъецировали стерильный физиологический раствор

За животными вели наблюдение в течение всего срока эксперимента Учитывали общее состояние, аппетит, активность, поведенческие реакции Массу тела контролировали трехкратно в начале опыта, через 30 дней и на момент завершения исследований, в те же сроки отбирали кровь для проведения гематологических и иммунологических исследований

Установили, что длительное применение препарата в терапевтической и дозах в 3 и 5 раз превышающих рекомендуемую терапевтическую не оказывает вредного влияния на организм белых крыс Расстройств пищеварения от применения препарата ПАК- 9000 не зарегистрировано

Анализ динамики массы тела в выявил увеличение данного показателя у животных всех опытных групп, наибольший эффект наблюдали при введении препарата в дозе 0,1 мг/кг массы тела Прирост массы тела на 1 животное в первой группе составил 202,4%, во второй - 127,8% и в третьей - 115,4% по отношению к контролю

Морфологические исследования крови не выявили токсического влияния препарата ПАК-9000 Показатели, характеризующие иммунитет, свидетельствуют о иммуностимулирующим действии изучаемого препарата, отмечено повышение лизоцимной активности сыворотки крови, фагоцитарной активности нейтрофилов и их микробицидной системы, что подтверждается показателями ФА, ФЧ, КМ

При проведении патоморфологических исследований органов убитых после последнего взвешивания подопытных крыс отклонений и особенностей строения выявлено не было

Длительное введении ПАК-9000 в терапевтической дозе и дозах, в три и пять раз превышающих терапевтическую, вредного действия на организм не оказало, функции жизненно важных органов и систем оставались без изменений

Изучение субхронической токсичности препарата ПАК- 9000 проводилось на белых крысах в течение 28 дней Препарат вводился ежедневно внутримышечно с начальной дозой от 1Л350 (3 59 мг/кг) по схеме, представленной в таблице 2 За животными вели ежедневное наблюдение, проводили морфологические исследования крови Погибшие крысы подвергались паталогоанатомическому вскрытию с последующим гистологическим исследованием внутренних органов

В результате исследований установлено, что гибель животных от суммарного применения доз препарата ПАК- 9000 наблюдалась на 11,12,13,15,19,21,22,23 и 24 сутки от начала эксперимента Кк = 5,24 - по классификации Л И. Медведя с соавторами (1968г), образец препарата ПАК-9000 относится к 4-му классу по кумулятивному действию - слабая кумуляция

Анализируя полученные результаты, установили, что суммарная доза препарата в 11630 раз превышающая терапевтическую, вызывала у подопытных крыс умеренный лейкоцитоз, лимфоцитоз, эозинопению, нейропению Доза в 29580 раз превышающая терапевтическую, вызывала у животных резкий лейкоцитоз ( в пределах 41,2 х 109/л ±1,6, что в 2 раза превышает норму), лимфоцитоз, нейтрофилез, снижение количества гемоглобина и эритроцитов, что свидетельствует о развитии воспалительной реакции

Таблица 2

Схема проведения субхронической токсичности препарата ПАК - 9000 (п=35) ___

период 1 2 3 4 5 6 7

ДНИ 1-4 5-8 9-12 13-16 17-20 21-24 25-28

доли от 1Ао (359 мг/кг) 0,1 0,15 0,22 0,34 0,5 0,75 1,12

доза, мг/кг 35,9 53,85 78,98 122,06 179,5 269,25 402,08

гибель, % 0 0 13,3 6,7 13,3 53,4 13,3

суммарная доза за период, мг/кг 143,6 215,4 315,92 488,24 718,0 1077,6 1608,32

суммарная доза от начала опыта, мг/кг 143,6 359,0 674,92 1163,16 1881,16 2958,76 4567,08

По окончанию эксперимента, было изучено воздействие препарата на макро- и микроструктуры внутренних органов

У животных макроскопически регистрировали фибринозный перикардит, серозно-геморрагический экссудат в брюшной полости, отек и эмфизему легких, вздутие желудка (на фоне воспаления дна желудка), серозно-катаральный энтерит, вздутие толстого отдела кишечника, резкое увеличение слепой кишки, жировая дистрофия печени, увеличение селезенки, желчного пузыря и почек, переполнение мочевого пузыря, геморрагический отек семенников (у самцов), отек задких конечностей

При анализе результатов патоморфологических исследований установили, что препарат ПАК-9000 обладает избирательным кумулятивно-токсическим действием, в высоких дозировках оказывает токсическое действие на печень, почки, сердце, селезенку, слизистую желудка, лимфатические узлы, обладает ярко выраженным аутоиммунным действием

2.5.1. Раздражающее и кожно-рсзорбтивнос действие ПАК-9000

Местнораздражающее действие препарата ПАК- 9000 изучали путем эпикулярных провокационных накожных аппликаций на морских свинках Перед началом опыта проводили сенсибилизацию животных путем многократных (18 раз) в объеме 0,1 см3 нанесений на кожу ПАК-9000 После выдержки инкубационного перида, продолжавшегося 14 дней, на свежевыстреженный участок кожи наносили разрешающую дозу препарата - 0,3 см3 Изменений в клиническом статусе животных и на месте аппликации за время проведения опыта и после его прекращения выявлено не было Эластичность, подвижность и упругость кожи оставалась неизменной При пальпации места аппликации болевая реакция не отмечалась Отека кожи и геморрагий не установлено

На основании перечисленного выше, реакцию оценили как отрицательную

При постановке конъюнктивальной пробы на кроликах изменений местного аллергического характера не выявили

Таким образом, препарат ПАК 9000 не оказывает патологического действия на организм животных, его можно охарактеризовать как не обладающий раздражающим и кожно-резорбтивным действием 2 5.2 Эмбриотоксическая и тератогенная активность ПАК-9000 Исследования по изучению эмбриотоксической и тератогенной активности препарата ПАК-9000 были проведены общепринятыми методами на белых крысах при внутримышечном введении на протяжении всего срока беременности

В результате проведенных исследований установлено, что его назначение в терапевтической дозе беременным животным не оказывает токсического влияния на течение беременности и роды, потомство, рожденное от крыс, которым вводили препарат во время беременности, не отличалось от крысят контрольных животных Различий в росте, развитии и поведении обнаружено не было

2.6.Токсикологнческая оценка иммунофана Изучение токсичности (острой и хронической) иммунофана проводили совместно с А Г Степановым

Острую токсичность препарата определяли на 60-ти белых беспородных мышах Препарат вводили однократно подкожно, в объеме 0,1 см3 наЮ г веса мыши Длительность наблюдения за животными составляла 14 дней

Состояние животных оценивали по поведению, пищевой активности, изменению массы тела

Хроническую токсичность иммунофана изучали при подкожном введении на 160 крысах При подборе доз для проведения хронических экспериментов учитывали рекомендуемую терапевтическую дозу для клинических исследований, а также величины ЛД50 препарата при подкожном введении мышам Исходя из этого, его терапевтическая доза была равна 0,5 мкг/кг (1/120000 от ЛД5о) и промежуточная (между субтоксической и терапевтической)- 5 мкг/кг (1/12000 от ЛД50)

Животным контрольных групп вводили подкожно стерильный физиологический раствор в том же объеме Препараты вводили в течение месяца Наблюдали за общим состоянием животных, гомеостаз оценивали с помощью гематологических, биохимических и патоморфологических тестов

В результате проведенных исследований установили, что при однократном подкожном введении иммунофана мышам в максимальных дозах (30-60 мг/кг) в течение 50-70 минут отмечалось резкое угнетение двигательной и рефлекторной активности мышей, которое проходило через 2-3 часа Гибели у подопытных мышей в течение суток не отмечалось Наблюдения за мышами в последующие 14 суток не выявили значительных отклонений от нормы поведения животных в целом

Учитывая малые рекомендуемые терапевтические дозы (0,5 мкг/кг), сочли нецелесообразным дальнейшее определение ДЦя препарата

При изучении хронической токсичности иммунофана не установлено значимых изменений биохимических показателей крыс, при па-тологоанатомических исследованиях не выявлено его вредного действия в дозах 0,5-50 мкг/кг при ежедневном одноразовом подкожном введении крысам в течение одного месяца, а в терапевтической дозе (0,5 мкг/кг) препарат способствовал отчетливому (статистически значимому) увеличению массы тела крыс

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о слабой токсичности иммунофана 2 6.1. Раздражающее и кожно-резорбтивное действие иммунофана Местнораздражающее действие иммунофана изучали путем эпи-кулярных провокационных накожных аппликаций на морских свинках и конъюнктивальнай пробы на кроликах

Установили, что иммунофан в дозах 0,5, 5 и 50 мкг/кг при внутрикожном введении сенсибилизированным животным не оказывает раздражающего действия

У кроликов в 50% случаев наблюдалась положительная реакция через 24 часа после введения 0,1% раствора иммунофана в конъюнкти-вальную область, которая исчезла к 48 часу наблюдения

Таким образом, введение иммунофана в дозах 0,5, 5 и 50 мкг/кг не оказывает патологически значимых изменений аллергологического статуса организма животных

2.7. Применение иммунокорректоров при болезнях КРС 2.7.1. Влияние иммунокорректоров на инфицирование BJI КРС Для изучения влияния совместного применения иммуностимулирующих препаратов и витаминно-минеральных премиксов на внутриутробное и постнатальное инфицирование телят BJI КРС отобрали 20 инфицированных и больных лейкозом коров, которых по принципу пар-аналогов разделили на 4 группы, по 5 голов Всем взятым в опыт животным в рацион ввели премикс Коровам 1 -й группы по схеме 1 раз в неделю до отела внутримышечно вводили левамизол из расчета 1 мг/кг массы тела животного

2-й группы - внутримышечно вводили иммунофан из расчета 0,5 мкг/кг массы тела животного

3-й группы - препарат ПАК-9000 из расчета 0,15 мг/кг массы тела животного

4-й контрольной группы - в те же сроки по 5, 0 см3 стерильного физиологического раствора

Телятам, полученным от коров опытных групп ежемесячно, трижды с интервалом 3 дня вводили иммуномодуляторы, которые применяли их матерям, в тех же дозировках Интерьерные показатели коров изучали до начала опыта и через 1 месяц после отела Внутриутробное инфицирование телят не получавших молозива выявляли молекулярно-генетическим методом в ПЦР и в РИД Продолжительность колостраль-ного иммунитета, инфицирование телят вирусом лейкоза и их интерьерные показатели определяли в 4,5 и 6 месячном возрасте

Установили, что при введении иммуностимуляторов глубоко стельным инфицированным BJI КРС и больным лейкозом коровам на фоне нормализации обменных процессов регистрируется увеличение в сыворотке крови общего количества белка на 14%, 14,4% и 10,9% по сравнению с коровами контрольной группы, повысилось содержание альбуминовой и у-глобулиновой фракций, глюкозы, цинка, железа, магния, меди Снизилось количество мочевины, нормализовались гематологические и иммунологические показатели

Внутриутробное инфицирование зарегистрировано у 1 (20%) теленка контрольной группы, до приема молозива все телята были РИД негативны В 4-х месячном возрасте было выявлено 3 РИД позитивных теленка 2 (40%) в контрольной группе и 1(20%) в группе, где животным вводили иммунофан

Данные гематологических исследований новорожденных телят свидетельствуют об усиленном эритропоэзе у телят опытных групп, по сравнению с контрольной и гемопоэзе у животных 2 и 3 опытных групп, нормализовалось количества лейкоцитов и лимфоцитов Масса телят при рождении в контрольной группе составляла 23,4 кг, что на 14,5% ниже, чем в первой, на 14,9% - чем во второй и на13,97% чем в третьей опытной группе, где эти показатели составили соответственно 27,4 кг, 27,5 кг и 27,2 кг

2.7.2. Влияние иммуностимуляторов на иммунобиологические

показатели и сохранность коров после отела Влияние иммунофана и ПАК-9000 на иммунобиологические показатели и сохранность коров после отела проводили на базе п/з «Чапаева», Динского района и учхоза «Краснодарский», г Краснодар на коровах 7-7,5 мес стельности

Животным 1-х опытных групп трижды, с интервалом 7 дней вводили иммунофан в дозе 0,5 мкг/кг, 2-х опытных групп - ПАК-9000 в дозе 0,1 мг/кг, контрольных - физ раствор

Проанализировав состояние коров после отела установили, что заболеваемость животных в опытных группах была ниже, чем в контрольных в п\з им Чапаева сохранность коров после отела составила 85,7% (выбыла 1 корова), а среднее количество дней до первого осеменения - 105,5, во второй опытной группе сохранность была 100% а количество дней до первого осеменения - 88,5, тогда как в контрольной группе эти показатели были соответственно 71,4% (выбыло 2 коровы) и 107 дней, или на 2 дня больше чем в первой и на 18,5 - чем во второй (таб 3)

Таблица 3

Влияние иммунокорректоров на сохранность и оплодотворяемость коров в течение 6 месяцев после отела в ОАО п/з им В И Чапаева

(п=7)

№ Сохранность ко- Количество Стельных ко-

груп Препарат ров после отела дней до 1-го ров

пы коров % осеменения коров %

1 Иммунофан 6 85,7 105,5 4 57,1

2 ПАК-9000 7 100 88,5 6 85,7

3 Физ раствор 5 71,4 107 4 57,1

В учхозе «Краснодарский», в опытной группе сохранность коров составила 71,4% (выбыло 2 головы), а количество дней до первого осеменения - 95,6, в контрольной группе сохранность была всего 28,6%

( выбыло 5 коров), у оставшихся в живых количество дней до первого осеменения 84,5

У коров опытных групп нормализовался белковый, углеводный, витаминный и минеральный обмены, стабилизировались гематологические и иммунологические показатели, масса телят при рождении в опытных группах была выше, чем в контроле соответственно на 2,9% и 1,03%

2.7.3. Влняннс иммуностимуляторов на иммунобиологические

показатели и сохранность телят

Влияние иммунофана и ПАК-9000 на иммунобиологические показатели и сохранность телят изучали в двух сериях опытов в ОАО п/з им В И Чапаева Динского

Для проведения исследований по принципу пар-аналогов сформировали 3 группы коров (2 опытных и контрольную) в возрасте 2-4 отела, со сроком стельности 7-7,5 месяцев

Все животные получали общий для данной физиологической группы рацион с добавлением минерально-витаминного кормового премикса, выпускаемого отделом фармации Краснодарского НИВИ

Телятам, полученным от коров 1-й опытной группы (с 14-и дневного возраста) дважды с интервалом 14 дней вводили иммунофан в объеме 1,0 см3 Коровам и телятам 2-й опытной группы по аналогичной схеме вводили ПАК-9000 из расчета 0,1 мг/кг массы тела Животным контрольной группы вводили стерильный физиологический раствор

Кроме того телят, полученных от коров опытных и контрольной групп в 14-20-и дневном возрасте дважды, с интервалом 14 дней вакцинировали против ПГ-3 и ИРТ, инактивированной сорбированной вакциной, выпускаемой ВНИИЗЖ, согласно наставлению по применению

Кровь для проведения гематологических, биохимических, иммунологических исследований брали до применения иммуностимуляторов и через 14 дней после повторного введения препаратов Критериями оценки эффективности были показатели живого веса телят при рождении, заболеваемости, сохранности, прироста живой массы, титры специфических антител к ПГ-3

Было установлено, что через 14 дней после второго введения иммуностимуляторов у теля г контрольных групп достоверно повысилось количество эритроцитов (на 12 % -12,7%), гемоглобина ( на 9,8%-12,3%), бактерицидной и фагоцитарной активности сыворотки крови, КМ по НБТ-тесту

Количество лейкоцитов у телят опытных групп в конце опыта снизилось на 33,6% - 40,4% и составило 6,9x109/л - 7,27х109/л, у телят контрольной группы снизилось на 31,4% и было выше нормы

Бактерицидная активность сыворотки крови у телят опытных групп возросла в среднем на 44,5% по отношению к фоновым показателям и была выше на 40,1% -97% чем у телят контрольной группы в тот же период Активность фагоцитоза у подопытных и контрольных животных увеличилась по сравнению с фоновыми показателями, однако, у телят опытных групп это увеличение было более значительным

Заболевания парагриппом-3 в опытных группах телят не отмечали В контрольных группах заболело 57% животных

Таблица 4

Прирост живой массы, заболеваемость и сохранность телят

№ Показатель Препарат

п/п Иммунофан ПАК - 9000 Контроль

1 Количество животных 15 15 15

2 Заболело 5 3 7

3 Пало 2 0 3

4 Заболеваемость% 33,3 20 46,6

5 Сохранность 86,7 100 80

6 Средняя масса тела при рождении 29,7 29,15 28,85

7 Среднесуточный прирост 0,654 0,568 0,480

8 Средняя масса тела в 2 мес 68,94 63,25 57,65

Заболеваемость телят 1 опытной группы была ниже, чем контрольной на 13,3% и составляла 33,3%, тогда как в контрольной группе

этот показатель был равен 46,6% Во второй опытной группе заболеваемость телят была 20%, что ниже показателей контроля на 26,6% Сохранность телят опытных групп также была выше, чем в контрольной на 6,7% в первой опытной группе, что составило 86,7% против 80% в контрольной группе, во второй опытной группе этот показатель был на 20 % выше по сравнению с контролем и равнялся 100% - не пал ни один теленок

Масса тела при рождении у телят первой и второй опытных групп был выше чем у контрольных соответственно на 2,86% и 1,03%

Среднесуточный прирост массы тела у телят первой опытной группы был выше, чем у контрольных аналогов на 26,6% и составлял 0,654 кг, в контрольной группе этот показатель был на уровне 0,480 кг Во второй опытной группе среднесуточный прирост массы тела был выше, чем у контрольных на 15,5% и составлял 0,568 кг

Таким образом, введение в систему комплексной этиопатогенети-ческой фармакопрофилактики иммуностимулирующих препаратов им-мунофан и ПАК-9000 способствует снижению заболеваемости, повышению сохранности молодняка крупного рогатого скота, увеличению прироста массы тела телят

Иммуностимуляторы способствовали повышению количества общего белка и нормализации показателей протеинограмм у животных опытных групп за счет повышения относительного количества у-глобулинов и снижения альбуминовой фракции, стабилизировался минеральный обмен, и хотя во всех группах Са р соотношение было нарушено (за счет высокого уровня Р), но у телят опытных групп этот дисбаланс был выражен меньше (таблица 5)

Таблица 5

Влияние иммуномадуляторов на биохимические показатели телят

(М±п, п=15)

Группа Общий белок аль-бу-ми- а Р У мочевина глюкоза Са р

1 66,4 55,8 15,4 12,3 16,5 0,54 3,19 2,08 2,52

2 64,8 61,25 12 11,45 15,3 0,67 4,02 2,17 2,9

контроль 62,2 62,2 11,3 10,9 15,6 0,66 3,72 2,19 3,0

г/л % % % % м моль/л м моль/л м моль/л м моль/л

Уровень общего белка у подопытных телят был выше на 4,1 -

6,3% по сравнению с контрольными

При проведении широкого производственного опыта по изучению влияния ПАК-9000 на заболеваемость и сохранность молодняка крупного рогатого скота в ОПХ п/з«Ленинский путь» Новокубанского района, установили, что при его введении в систему лечебно-профилактических мероприятий, сохранность телят повысилась с 86,25% до 96,16% или на 10%, что в абсолютных значениях дает прибавку по хозяйству за год -167 телят (таб 6)

Таблица 6

Показатели отхода и сохранности телят при применении ПАК-9000

Ферма Дон рименения ПАК-9000 С использование ПАК-9000

Получено телят за год Отход Сохранность, % Получено телят за год Отход Сохранность, %

телят % телят %

МТФ 1 604 111 18,4 81,6 631 17 2,6 97,4

МТФЗ 449 24 5,3 94,6 472 14 3,0 97,0

МТФ 5 504 79 15,7 84,4 564 33 5,8 94,2

По хозяйству 1557 214 13,7 86,25 1667 64 3,8 96,2

Кроме повышения сохранности, применение препарата ПАК-9000 способствовало снижению послеродовых осложнений у коров и нетелей, повысилось количество полученных телят на 6,6% или 110 голов

Таким образом, применение иммуностимулирующего препарата ПАК-9000 повышает рождаемость телят, снижает заболеваемость и повышает сохранность молодняка крупного рогатого скота

3 ВЫВОДЫ

1 Заболеваемость КРС в Краснодарском крае остается высокой, в 20052007гг колебалась в пределах 51,2% - 52,9% к обороту стада Наиболее часто регистрировали болезни органов размножения -39,17±0,61%, пищеварения - 28,64±0,49%, дыхания - 18,510,39%, обмена веществ - 14,37±0,24%

Летальность за тот же период составила в среднем 1,95+0,11%, смертность - 1,01+0,06% От болезней органов пищеварения - пало 48,27%±0,78 и вынужденно убито - 46,02%±0,16 , органов дыхания -пало 25,63%±0,81 и вынужденно убито 28,64%±1,56, болезней обмена-пало 15,57%+1,92 и вынужденно убито 10,45%±1,21 соответственно к общему количеству павших и вынужденно убитых животных От болез-

ней органов размножения пало 1,15%±0,11 и было вынужденно убито 5,14%±0,18

2 У коров в не зависимости от породной принадлежности регистрируются. дефицит клеточного звена иммунитета ( процент содержания Т - лимфоцитов - 36,17%±5,18 - 51,3%±3,2, В-лимфоцитов -21,83%±3,48 - 28,5%±3,62), фагоцитоза (18,4%±2,03 - 33,6%±3,44) и низкие показатели лизоцимной активности (19,2 ед±10,6 -23,9ед ±1,05), при резко (в 3,2 - 12 раз) повышенных ЦИКах

У молодняка крупного рогатого скота 1-6 месячного возраста отмечается дефицит фагоцитоза (процент НГ в пределах 19,8% ± 2,9-28,0%±2,75), анемия - ЦП от 0,56 ед ±0,08 до 0,6 ед ±0,14, нарушение клеточного звена иммунитета

3 У телят 3-4 месячного возраста нарушены белковый (снижен общий белок на 18,7 - 41,5%, повышена альбуминовая (на 3,7%-23,86%) и резко снижена у-глобулиновая (на 20,4-95,6%) фракции, углеводный (повышена глюкоза на 3,8%±1,3 в 40% проб), минеральный (нарушено Са Р соотношение за счет повышенного содержания Р), витаминный (каротин у 70% животных на нижней границе, у 30% проб - ниже нормы) обмены

У телок случного возраста и коров кроме этого, отмечается нарушение фракционного состава белка за счет повышения у - глобулиновой фракции у 70% животных и патология печени у 30% по тимоловой пробе

4 У инфицированных ВЛ КРС и больных лейкозом коров увеличено количество Т- и В- лимфоцитов соответственно на 22,9 - 24,8% и 5,7% - 62,9%, снижена функциональная активность В - лимфоцитов, продуцирующих ^ класса М на 21,8% и 92%, активность микроби-цидной системы микрофагов на - 45,5% и 47,3% по КМ

У больных лейкозом коров изменен фракционный состав белка за счет увеличения Р - глобулиновой фракции на 43,3% и снижения у -глобулиновой на 36%, снижено количество мочевины на 45,9%, магния на 41,2%, цинка на 19,5%, железа на 21,9%, каротина на 71,4%, гемагло-бина на 20%

5 Иммуностимулятор ПАК - 9000 в дозе 0,1 мг/кг массы тела активизирует иммуногенез, повышает титры антиэритроцитарных антител в 9,6 раз, по сравнению с контролем Среднесмертельная доза препарата (1ЛЗ 50= 359,0 мг/кг массы тела) в 3590 раз превышает рекомендуемую терапевтическую Не оказывает вредного действия на организм при длительном введении Относится к 4-му классу кумуляции -

слабая кумуляция Не обладает местным раздражающим и кэжно-резорбтивным действием, эмбриотоксической и тератогенной активностью

Иммунофан относится к малотоксичным препаратам При длительном многократном его введении не оказывает токсического действия на организм животных, не вызывает морфофункциональных изме-неий систем и тканей органов, не нарушает процессы пищеварения, мочеотделения, не проявляет сенсебилизирующего действия

6 Применение иммуностимулирующих препаратов левамизола в дозе 1 мг/кг массы тела, иммунофана - 0,5 мг/кг массы тела, ПАК-9000 -0,15 мг/кг массы тела глубокостельным инфицированным В Л КРС и больным лейкозом коровам на фоне применения минерально-витаминных премиксов, нормализует обменные процессы, увеличивает количество белка в сыворотке крови на 10,9% - 14,4%, содержание альбуминовой и у - глобулиновой фракции, глюкозы, микроэлементов Снижает внутриутробное инфицирование телят ВЛ КРС в эксперименте на 20%, повышает массу тела при рождении на 13,97% -14,9%

Введение иммуностимуляторов телятам снижает постнаталыюе инфицирование ВЛ КРС на 50-100%, активизирует эритро - и гемопоэз

7 Применение иммунофана и ПАК -9000 глубокостельным коровам нормализует гематологические показатели, белковый, углеводный, витаминный обмены, повышает сохранность коров после отела соответственно на 16,6% и 28,6%-40,0%, сокращает количество дней до 1-го осеменения на 1,5-18,5 и повышает оплодотворенность коров на 33,2% - 33,4%

8 Введение иммунофана и ПАК - 9000 в систему профилактических мероприятий повышает у телят опытных групп эритропоэз (количество эритроцитов по сравнению с контролем выше соответственно на 12% и 12,7%), гемопоэз (увеличение гемоглобина на 9,8% и 12,3%), фагоцитарную и бактерицидную активность крови, нормализует обменные процессы повышается общий белок на 4,1% - 6,8%, у - глобулиновой фракция

Заболеваемость телят опытных групп ниже, по сравнению с контролем на 13,3%-20% Масса тела при рождении выше, чем в контроле в среднем по группам на 2,86% и 1,03%, среднесуточный прирост массы тела выше на 26,6% и 15,5%)

9 Введение ПАК- 9000 в систему профилактических мероприятий в условиях широкого производственного опыта повысило рождаемость телят - на 6,6%, сохранность - на 9,91%, что позволило дополнитель-

но по хозяйству получить 265 телят Экономическая эффективность его применения - 5,1 рубля на 1 рубль затрат

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ Для повышения естественной резистентности крупного рогатого скота, снижения его заболеваемости, отхода и повышения продуктивности показано применение иммуностимулирующих препаратов, нормализующих показатели клеточного звена иммунитета, повышающие активность фагоцитов и неспецифических гуморальных факторов - имму-нофан и ПАК-9000 Применение иммуностимуляторов осуществлять на фоне нормализации обменных процессов и под контролем иммунобиологических показателей Рекомендуется применение препаратов имму-нофан и ПАК-9000 в системе оздоровительных противолейкозных мероприятий На основе результатов исследований разработано «Временное наставление по применению препарата ПАК-9000», рассмотренное и одобренное ученым советом КНИВИ (протокол №4 от 26 мая 2008 г )

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Семененко М П Состояние обмена веществ и естественной резистентности организма при некоторых желудочно-кишечных и респираторных патологиях у молодняка сельскохозяйственных животных /МП Семененко, Н Ю Басова, М А Староселов // Актуальные проблемы ветеринарной медицины - Курск, 2008 - С 364-367

2 Марков А Н Влияние левамизола на иммунные показатели телок/ А Н Марков, М А Староселов, Н Ю Басова// Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях - Краснодар, 2006 - С 411414

3 Староселов М А Влияние препарата иммунофан на показатели естественной резистентности и сохранности телят / М А Староселов // Труды КубГАУ -2008 -Вып №3(12)

4 Староселов М А Иммунобиологические показатели инфицированного вирусом лейкоза КРС и больных лейкозом коров в сравнении с интактными / М А Староселов, Н Ю Басова // Научный журнал КубГАУ [электронный ресурс] - Краснодар КубГАУ, 2008 - № 06(40) - 8 с - Режим доступа http ej kubagro ru/2008/06/pdf/07 pdf

5 Староселов M А Иммунобиологические показатели крупного рогатого скота различных физиологических групп / М А Сароселов, Н Ю Басова // Научный журнал КубГАУ [электронный ресурс] -Краснодар КубГАУ, 2008 - № 06(40) - 6 с - Режим доступа http ej kubagro ru/2008/06/pdß'07 pdf

Подпиеанов печать10 062008 г.

Бумага офсетная Печ л I Тираж 100 экз

Формат 60x84 j/](

Офсетная печать 3акгв№349

Огпечатано в типографии КубГАУ 350044, г Краснодар, ул Калинина, 13

1.1. Актуальность проблемы. В настоящее время широкое распространение получили болезни животных, развивающиеся на фоне снижения естественной резистентности, обусловленной как не специфическими факторами, в первую очередь, нарушением содержания и кормления, (B.C. Бузла-ма, 1987; А.А. Конопаткин, 1993; Р.И., Коровин 1995; О.И.Бондаренко, с со-авт., 1996; А.Г.Шитый с соавт., 1997; М.С. Найденский 1995-1997; К.Х.Папуниди, 1998; А.В. Иванов, 2000;), так и специфическими ( В.М. Данилевский, 1974; М.А. Сидоров с соавт.,1975; Г.П. Бородай, 1978; В. Тилга, М. Тедер, 1978; А.Г. Глотов с соавт, 2006; P. Ide, 1970; L.Lillie, 1974; D. Bryson, 1978; D. Mc.Kercher . 1978; L.Sidoii, 1979; A. Mayr, 1979; L. Thomas at.el, 1980; C. Ungureanu et.el.,1981; M.A. Muneer, J.O. Farah, J.A.Wewman, S.M.Cogan, 1988), которые приводят к возникновению вторичных иммуно-дефицитных состояний. В развитии целого ряда болезней неипфекциоиной этиологии, таких, как эндометрит, мастит, диспепсия, бронхопневмония в конечном итоге принимают участие бактериальные и вирусные агенты, часто сами выступающие в роли иммуносупресоров (вирус лейкоза КРС, герпес вирус, парамиксовирус, и др.) (В.Г. Зароза, 1978; В.Е, Сединов, 1982: В.К, Сюрин с соавторами, 1983; А.А. Конопаткин с соавторами, 1984; Н.И. Крюков с соавторами, 1984; Э.А. Шегидевич, 1984; Ю.Н.Федоров, 2000; П.Н.Смирнов, 2007; C.G.Loosli, 1968; L.E.Lille, 1974; A.Edward, 1978; D.Pritchard, 1980; A.-M.K.Virtala, G.D.Mechor, y.T.Grohn, H. W.Erb, E.J.Dubovi, 1996).Поскольку практически все заболевания, все процессы в организме в той или иной степени связаны с различными иммунодефицитами, (Ю.Н.Федоров, О.А.Верховцев. 1996; Р.М Хаитов, Б.В.Пинегин, 1996; Р.М Хаитов, 1999; А.А. Ярймин 1999), а применение традиционных схем лечения таких болезней не всегда успешно, иммунокоррекция приобретает все большее значение в комплексной профилактики и терапии большинства патоло-гических процессов (Д.Н.Лазарева, Е.К.Алехин, 1985; Ю.Н. Федоров, 2000; П.Н.Смирнов, 2007).Иммуностимуляция без интерпретации показателей, характеризующих иммунный статус может привести к нарушению полноценного функционирования иммунной системы, иммуносупрессии и, как результат, гибели животных от сопутствующих заболеваний ( Р. Петров, 1982; Ю.Н.Федоров, 2000).С учетом изложенного, весьма актуальным следует считать поиск эффективных и безопасных средств, усиливающих иммунную защиту, устойчивость к стрессам и стимулирующих обменные процессы в организме (B.C.Бузлама, 1997: Ю.В.Конопатов, 1992; Н.А.Уразаев, 1995).Поэтому изучение иммунобиологических параметров КРС, определение эффективности имхмунотропных препаратов для повышения резистентности животных является актуальной проблемой.Цель: Выявить наиболее часто встречающиеся дефициты иммунитета у крупного рогатого скота в Краснодарском крае и определить эффективность нриминения иммуностимуляторов для повышения резистентности :ъч-вотных.Задачи: 1. Изучить распространение незаразных болезней КРС на территории Краснодарского края.2. Установить наиболее распространенные дефициты иммунитета, встречающиеся у КРС в Краснодарском крае.3. Подобрать доступные иммуностимулирующие препараты, корректирующие выявленные у КРС иммунодефицитные состояния.4. Изучить влияние ПАК - 9000 на иммуногинез, токсикологические параметры новых иммуностимулирующих препаратов иммунофан и ПАК -9000.5. Изучить влияние иммуностимулирующих препаратов на клинические и иммунобиологические показатели КРС.

6. Определить эффективность применения иммуностимулирующих препаратов в системе лечебно-профилактических мероприятий.Научная новизна работы. Изучено распространение болезней крупного рогатого скота на территории Краснодарского края, выявлены наиболее часто встречающиеся патологии.Впервые в сравнительном аспекте изучены иммуннобиологические показатели крупного рогатого скота различных пород молочного направления, разводимых в регионе, различных физиологических и возрастных групп. Изучены иммунобиологические показатели у инфицированных В Л КРС, больных лейкозом коров в сравнении с интактными.Установлены наиболее распространенные у крупного рогатого скота в Краснодарском крае дефициты иммунитета.Подобраны иммуностимулирующие препараты для коррекции выявленных нарушений иммунитета — иммунофан и ПАК-9000, изучены их, токсикологические свойства, влияние препарата ПАК-9000 на иммуногенез, установлена высокая иммунотропная активность изученных препаратов, низкая токсичность, отсутствие кожно- резорбтивного и раздражающего действия, эмбриотоксической и тератогенной активности.Доказано позитивное влияние новых иммуностимулирующих препаратов на клинические и иммунобиологические показатели КРС и эффективность их применения для повышения резистентности в системе лечебно-профилактических мероприятий, а так же снижения внутриутробного и пост-натального инфицирования телят В Л КРС. Теоретическая и практическая значимость работы. Дана комплексная характеристика иммунобиологического и биохимического статуса КРС различных пород, физиологических и возрастных групп, иммунобиологического и биохимического статуса у инфицированных ВЛ КРС, больных лейкозом коров в сравнении с интактными.Выявлены наиболее часто встречающиеся дефициты иммунитета у КРС на территории края.На основе полученных знаний об иммунобиологическом статусе КРС подобраны, изучены и предложены в ветеринарную практику новые эффективные, доступные иммуностимуляторы для повышения резистентности КРС. Практикующим ветеринарным специалистам предложена система, повышения естественной резистентности крупного рогатого скота, включающая применение иммуностимуляторов на фоне нормализации обменных процессов, способствующая снижению заболеваемости, повышению сохранности и продуктивности коров и телят.Предложенные препараты и схемы могут быть использованы при оздоровлении скотоводческих хозяйств Краснодарского края от лейкоза.Основные положения, выносимые на защиту. - распространение заболеваний крупного рогатого скота в Краснодарском крае. - иммунобиологические показатели крупного рогатого скота различных возрастных, физиологических, породных групп, сравнительная оценка иммунобиологических и биохимических показателей инфицированных ВЛ КРС, больных лейкозом и интактных коров. - результаты исследований токсикологических свойств и влияния на иммуногенез новых синтетических иммуностимуляторов- иммунофана и ПАК-9000. - результаты применения иммуностимулирующих препаратов иммунофана и ПАК - 9000 для повышения резистентности крупного рогатого скота в системе профилактических мероприятий.Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях», посвященной 60-летию Краснодарского НИВИ (2006); на первой всероссий-з ской научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса», посвященной 85- летию КубГАУ (2007); на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной 125-летию ветеринарии Курской области; доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета Краснодарского НИВИ (2005 - 2008).Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертационной работе, заслушаны, обсуждены и одобрены на межлабораторном совещании сотрудников КНИВИ (2008).

5.ВЫВОДЫ

1. Заболеваемость КРС в Краснодарском крае остается высокой, в 20052007гг. колебалась в пределах 51,2% - 52,9%, в среднем за 3 года 51,8 ± 0,55%о к обороту стада. Наиболее часто регистрировали болезни органов размножения - 39,17±0,61%>, пищеварения - 28,64±0,49%, дыхания -18,5±0,39%, болезни обмена веществ - 14,37±0,24%.

2. Летальность за тот же период составила в среднем 1,95±0,11%, смертность - 1,01±0,06%. Наиболее часто регистрировали отход от болезней органов пищеварения - падеж 48,27%±0,78 и вынужденный убой -46,02%±0,16 , от болезней органов дыхания - пало 25,63%±0,81 и вынужденно убито 28,64%±1,56, болезней обмена - пало 15,57%±1,92 и вынужденно убито 10,45%±1,21 соответственно к общему количеству павших и вынужденно убитых животных. От болезней органов размножения пало 1,15%±0,11 и было вынужденно убито 5,14%±0,18.

3. У коров молочного направления продуктивности, в не зависимости от породной принадлежности регистрируется дефицит клеточного звена иммунитета ( процент содержания Т - лимфоцитов — 36,17%±5,18 - 51,3%±3,2; В-лимфоцитов - 21,83%±3,48 - 28,5%±3,62), фагоцитоза (18,4%±2,03 -33,6%±3,44) и низкие показктели лизоцимной активности (19,2 ед.±10,6 -23,9ед.±1,05), при резко (в 3,2 - 12 раз) повышенных ЦИКах.

4. У молодняка крупного рогатого скота отмечена анемия - ЦП от 0,56 ед. ±0,08 у телят месячного возраста до 0,6 ед.±0,14 - у 3-6 месячных телят, дефицит фагоцитоза - процент НГ в пределах 19,8% ± 2,9 у 3-4-х месячных телят 25,3%±4,5 - у 1-2 -х месячных и 28,0±2,75 у 5-6-и месячных; у телят 34 и 5-6 месячного возраста - нарушение клеточного звена иммунитета, характеризующаяся нарушением соотношения количества Т~ и В - лимфоцитов.

5. У нетелей 3-4 мес. возраста нарушены белковый (снижен общий белок на 18,7 - 41,5% изменеия его фракционного состава, связанный с повышением альбуминовой (на 3,7%-23,86%) и резким снижением у-глобулиновой (на 20,4-95,6%) фракций); углеводный (повышение глюкозы на 3,8+1,3% в 40% проб); минеральный (нарушено Са:Р соотношение за счет повышенного содержания Р); витаминный (каротин у 70% животных на нижней границе, у 30% проб - ниже нормы) обменов. Аналогичная картина отмечена у телок случного возраста и коров, но у коров отмечается нарушение фракционного состава белка за счет повышения у - глобулиновой фракции у 70%) животных и патология печени у 30% по тимоловой пробе.

6. У инфицированных BJI КРС и больных лейкозом коров увеличено количество Т- и В- лимфоцитов по сравнению с интактными соответственно на 22,9 - 24,8%) и 5,7% - 62,9%), но снижена функциональная активность В -лимфоцитов, продуцирующих Ig класса М на 21,8% и 92%. Снижена активность микробицидной системы микрофагов на - 45,5% и 47,3% по КМ.

У больных лейкозом коров изменен фракционный состав белка за счет увеличения ß - глобулиновой фракции на 43,3% и снижения у - глобулиновой на 36%), снижено количество мочевины на 45,9%, магния на 41,2%, цинка на 19,5%, железа на 21,9%, каротина на 71,4%, гемаглютинина на 20%.

7. Иммуностимулятор ПАК - 9000 в дозе 0,1 мг/кг массы тела активизирует иммуногенез, повышает титры антиэритроцитарных антител до 1: 256, или в 9,6 раз, по сравнению с контролем. Среднесмертельная доза препарата (LD 50= 359,0 мг/кг массы тела) в 3590 раз превышает рекомендуемую терапевтическую, LDioo - в 4360 раз. Не оказывает вредного действия на организм при длительном введении в терапевтических и дозах в 3 и 5 превышающих терапевтическую. Относится к 4-му классу кумуляции - слабая кумуляция. Не обладает местным раздражающим и кожно-резорбгивным действием, эмбриотоксической и тератогенной токсичностью.

8. Иммунофан относится к малотоксичным препаратам. При длительном многократном его введении в терапевтической и субтоксической дозах не оказывает токсического действия на организм животных, не вызывает морфофункциональных изменеий систем и тканей органов, не нарушает процессы пищеварения, мочеотделения, не проявляет сенсебилизирующего действия.

9. Применение иммуностимулирующих препаратов: левамизола в дозе 1 мг/кг массы тела, иммунофана - 0,5 мг/кг массы тела, ПАК-9000 - 0,15 мг/кг массы тела глубокостельным инфицированным ВЛ КРС и больным лейкозом коровам на фоне применения минерально-витаминных премиксов, нормализует обменные процессы, увеличивает количество белка в сыворотке крови на 10,9% - 14,4%, содержание альбуминовой и у - глобулиновой фракции, глюкозы, микроэлементов. Снижает внутриутробное инфицирование в эксперименте на 20%.

10. Введение иммуностимуляторов телятам, полученных от инфицированных В Л КРС и больных лейкозом коров снижает постнаталыюе инфицирование телят на 50-100%) и повышает массу тела при рождении на 13,97 -14,9%, активизирует эритро - и гемопоэз.

11. Применение иммунофана и ПАК -9000 глубокостельным коровам нормализует гематологические показатели, белковый, углеводный, витаминный обмены, повышает сохранность коров после отела соответственно на 16,6% и 28,6%-40,0%, сокращает количество дней до 1-го осеменения на 1,517 и повышает оплодотворенность коров на 33,2% - 33,4%.

12. Введение иммунофана и ПАК - 9000 в систему профилактических мероприятий повышает у телят опытных групп эритропоэз (количество эритроцитов по сравнению с контролем выше соответственно на 12% и 12,7%), гемопоэз - увеличение гемоглобина на 9,8% и 12,3%, фагоцитарную и бактерицидную активность крови (на 40,1%>±0,71); нормализует обменные процессы: повышается общий белок на 4,1% - 6.8%, у - глобулиновой фракция.

13. Заболеваемость телят опытных групп ниже, по сравнению с контролем на 13,3%-20%. Масса тела при рождении у телят опытных групп была выше, чем в контроле в среднем по группам на 2,86% и 1,03%), среднесуточный прирост живой массы выше на 26,6% и 15,5%.

14. Введение ПАК- 9000 в систему профилактических мероприятий в условиях широкого производственного опыта повысило сохранность телят на 9,91%, рождаемость - на 6,6%, что позволило дополнительно по хозяйству получить 265 телят. Экономическая эффективность его применения - 5,1 рубля на 1 рубль затрат.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для повышения естественной резистентности крупного рогатого скота, снижения его заболеваемости, отхода и повышения продуктивности показано применение иммуностимулирующих препаратов, нормализующих показатели клеточного звена иммунитета, повышающие активность фагоцитов и неспецифических гуморальных факторов - иммунофан и ПАК-9000. Применение иммуностимуляторов осуществлять на фоне нормализации обменных процессов и под контролем иммунобиологических показателей. Рекомендуется применение препаратов иммунофан и ПАК-9000 в системе оздоровительных противолейкозных мероприятий. На основе результатов исследований разработано «Временное наставление по применению препарата ПАК-9000», рассмотренное и одобренное ученым советом КНИВИ (протокол №4 от 26 мая 2008 г.).

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Значительная часть болезней органов дыхания, такие как бронхопневмония, органов пищеварения - диареи, гастроэнтериты, органов размножения - маститы, эндометриты, развиваются на фоне факторов, снижающих резистентность организма животных.

Не смотря на значительное снижение поголовья крупного рогатого скота за последние 10 лет, с 927627 голов в 1997 году до 486300 голов в 2007 году, или в 1,9 раза, заболеваемость животных остается высокой. Если в 1997 году заболеваемость крупного рогатого скота в Краснодарском крае была 63,4%, то в 2007 году не заразными болезнями заболело 52,9%. В 2005-2007 годах заболеваемость крупного рогатого скота колебалась в пределах 51,2%- 52,9%. Из заболеваний у крупного рогатого скота в крае наиболее распространены болезни органов размножения 38,1% - 40,2% (39,17+0,61), от общего количества заболевших, органов пищеварения -28,02% - 29,6% (28,64 %±0,49), и органов дыхания -17,73% - 18,99% (18,5±0,39 ). Заболеваемость болезнями органов размножения и пищеварения в 2007 году по сравнению с 2005-2006 годами, возросла соответственно на 5,2% и 5,3%.

Отход крупного рогатого скота ( вынужденный убой и падеж) от незаразных болезней за тот же период был в пределах 1,64% - 1,74%. Смертность колебалась от 0,9% в 2005г. до 1,1% в 2007 г. ( 1,01% ±0,06 ), летальность -1,76% в 2005г. -2,15% в 2007г. (1,95%±0,11) (табл.2).

От болезней органов пищеварения падеж колебался от 46,9% до 49,6% (48,27%+0,78). От болезней органов дыхания за тот же период падеж составлял 24,3% - 27,1% (25,63%±0,81). От болезней обмена веществ падеж составлял 13,6% - 19,4% (15,57%±1,92 ) и возрос в 2007 году по отношению к 2005 году на 29,4%.

Гибель животных от болезней органов размножения составила 0,93%-1,21%>, вынужденый убой - 4,79%) - 5,34%.

При изучении иммунобиологических показателей коров различных пород, наиболее широко распространенных в Краснодарском крае: красной степной, айширской, черно- пестрой, установили, что достоверных различий между гематологическими показателями у животных различных породных групп не отмечается. Относительно высокое количество лейкоцитов (10,1 -10,98 х109/л) выявлено как у коров айширской породы, так и черно-пестрой, тогда как у коров черно-пестрой породы СПХ «Восток» этот показатель на 16% ниже, чем у животных той же породы из учхоза «Краснодарский», что можно объяснить наличием в учхозе коров, больных лейкозом КРС - 28,6 % в группе обследованных, тогда как в СПХ «Восток» больных лейкозом коров выявлено не было, при этом инфицирование ВЛ КРС в этом хозяйстве (обследованные животные) достигало 70%>, в учхозе «Краснодарский» - 57,1%),

Относительное количество нейтрофильных гранулоцитов сопоставимо у животных красной степной и черно-пестрой пород п/з «Ленинский путь» и учхоза «Краснодарский», коров черно-пестрой и айширской пород СПХ «Восток» и п/з им.Чапаева. Выявленная у животных эозинофилия в пределах 6,33%±2,25, может объясняться чрезмерной антигенной нагрузкой и подтверждается показателями ЦИК - 600,17 ед ± 89,05, которые, очень высоки у всех обследованных животных, не зависимо от породной принадлежности и превышают показатели нормы в 3,2-12 раз. У коров различных пород молоч ного направления продуктивности отмечен дефицит клеточного звена иммунитета (снижено абсолютное и относительное количество Т- и В-лимфоцитов), дефицит фагоцитоза нейтрофильных гранулоцитов и низкие показатели лизоцимной активности сыворотки крови при резко повышенном количестве ЦИК.

У животных различных пород показатели ФА ниже нормы и находятся в пределах 18,4%±2,03 - 33,6%>±3,44, однако, у коров айширской породы этот показатель достоверно (Р<0,01) ниже, чем у черно-пестрого скота на 21,7%

45,2% и на 32,7%) - чем у красного степного. Показателям низкой ФА у ай-ширского скота сопутствует и низкая активность микробицидной системы НГ, что подтверждается результатами НБТ-теста и о чем свидетельствует низкий, относительно других групп, коэффициент мобилизации, при достаточно высоком количестве фармазин-позитивных нейтрофилов в спонтанном НБТ-тесте.

Относительное и абсолютное количество Т- и В-лимфоцитов не имело достоверных различий у животных разных пород. При низких показателях (количество Т-лимфоцитов: 36,17%±5,1 - у красной степной породы, 42,3%±4,8 и 51,3%±3,2 у черно-пестрой, 48,8%±4,23 у айширской; В-лимфоцитов: 21,83%±3,48 у красной степной, 26,1%±4,26 и 28,5%±3,62 у черно-пестрой, 27,2%±3,23 у айширской) соотношение относительного количества Т- и В-лимфоцитов находилось в пределах нормы для взрослых животных.

Количество О у всех животных находился в пределах нормы, однако, у коров красной степной породы этот показатель был достоверно (Р<0,95) на 16,9%) - 33,6% ниже, чем у животных других пород, при этом количество ^ М было выше на 21,9% - 52,5% по сравнению с черно-пестрым и айшир-ским скотом и превышало норму на 12,5%.

Бактерицидная активность сыворотки крови у коров айширской породы была достоверно (р<0,01) выше, чем у других породных групп и достигала значения 91,01%±1,64.

Лизоцимная активность сыворотки крови у всех обследованных животных была низкой и достигала значений 19,2 ед.±10,6 - 20,88 ед.±4,15 у коров черно-пестрой породы, 23,9 ед.±1,05 у красной степной и 22,15 ед.±4,7 у айширской породы.

У клинически здоровых коров в возрасте 2-4 лактации: через 1-1,5 месяцев после отела, не стельных, стельностью 7-7,5 месяцев, 2-4 месяца стельности, коров - «перегульщиц», не стельных отмечен дефицит клеточного звена иммунитета ( снижено абсолютное и относительное количество Ти В-лимфоцитов ), дефицит фагоцитоза нейтрофильных гранулоцитов и низкие показатели лизоцимной активности сыворотки крови при резко повышенном количестве ЦИК.

У глубокостельных сухостойных коров было выше количество гемоглобина на 13,7% по сравнению с коровами в первой фазе лактации и на 10,4% - по сравнению группой коров во второй фазе лактации и на 10,1% -по сравнению с коровами- «перегулыцицами», при этом количество гемоглобина у всех обследованных животных в пределах нормы для данной возрастной группы.

Другие изученные гематологические показатели не имели достоверных различий у коров разных физиологических групп. При этом цветовой показатель находился в пределах от 0,65±0,02 у коров- «перегульщиц», до 0,73+0,003 у сухостойных коров и был ниже нормы на 18,9% - 27,8%.

У животных всех групп понижена фагоцитарная активность нейтрофильных гранулоцитов, низкое фагоцитарное число, при этом фагоцитоз не завершен только в группе коров — «перегульщиц» (показатель ниже 1,0), у коров этой группы относительно низкие показатели фагоцитарной активности - на 3,0% -12,2%, фагоцитарного числа - на 2,9% - 7,3% по сравнению с аналогичными показателями в других группах. Низкая фагоцитарная активность у коров этой физиологической группы сочетается с недостаточной активностью микробицидной системы фагоцитов и подтверждается низким, относительно животных других групп, коэффициентом мобилизации по НБТ-тесту.

Показатели клеточного звена иммунитета не имели достоверных различий у коров изучаемых физиологических групп, относительное и абсолютное количество Т- и В-лимфоцитов понижено, процентное соотношение Т- и В-лимфоцитов соответствовало норме у всех коров, кроме животных 1-й группы, где отмечено понижение количества Т-лимфоцитов.

Показатели гуморальнго звена иммунитета, всех животных находился в пределах нормы. ЦИК резко повышен у животных всех физиологических групп в 8-15 раз, что свидетельствует о не компенсированной антигенной нагрузке.

Лизоцимная активность сыворотки крови у всех обследованных животных была низкой и достигала значений от 12,78 ед ±0,9 - у коров - «пере-гулыциц» до 15,22 ед ±1,41 у коров через 1-1,5 месяца после отела.

Аналогичная картина наблюдается и у молодняка крупного рогатого скота: не смотря на возрастные особенности, у телят 1-6 -и месячного возраста выявлен дефицит фагоцитоза, у телят 3-4 -х и 5-6-и месячного возраста - нарушения клеточного звена иммунитета.

У больных лейкозом глубоко стельных коров понижено содержание общего белка в сыворотке крови, изменен фракционный состав белка, за счет увеличения [3-глобулиновой и снижения у-глобулиновой фракций. Количество глюкозы у больных и интактных коров сравнимы, однако, отмечено резкое снижение этого показателя у инфицированных животных - на 45%, по сравнению с интактными, что молено объяснить высокими энергетическими затратами животных, находящихся в стадии компенсации, снижение количества мочевины у больных коров чт может свидетельствовать о нарушении ее синтеза в печени и подтверждается резким увеличение аланинаминотранс-феразы в сыворотке крови. Увеличение аспартатаминотрансферазы у инфицированных коров может свидетельствовать о не компенсируемой сердечной нагрузке.

Достоверное снижение уровня магния, цинка и железа в сыворотке крови больных лейкозом коров, магния - у инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота коров, по сравнению с неинфицированнымии, количества кальция - на 43% у инфицированных коров, каротина в сыворотке крови инфицированных и больных лейкозом коров по сравнению с интактными было достоверно повышено (Р>0,001).

Снижение количества нейтрофильных гранулоцитов, свидетельствует о наличии иммунодефицитного состояния, регистрируемого у больных лейкозом коров и об усугублении у больных лейкозом коров физиологического иммунодефицита, развивающегося в период беременности.

У инфицированного вирусом лейкоза крупного рогатого скота и больных лейкозом коров увеличивается количество Т- и В- лимфоцитов, при этом снижается способность В-клеток продуцировать иммуноглобулин класса М. Полученные данные подтверждают мнение, что ВЛ КРС является активным иммуноссупрессором.

ПАК-9000 в дозе 0,1 мг/кг массы тела стимулирует иммуногенез, титры антиэритроцитарных антител достигали 1: 256. При введении этого препарата в более высоких дозах - 0,25 мг/кг массы тела и 0,5 мг/кг массы тела титры антител были значительно ниже и соответственно достигали значений 1:80 и 1:51.

При введении препарата ПАК-ПАН в дозе 0,25 мг/кг и ОЛ мг/кг массы тела он проявлял явную иммуносупрессию.

Доза, являющаяся максимально переносимой и не вызывающей гибели животного при однократном внутримышечном применении препарата ПАК-9000 (Ь00 )- 320,0 мг/кг массы тела, доза 359,0 мг/кг массы тела, вызвавшая гибель, является среднесмертельной и соответствует ЬО50, в 3590 раз превышает рекомендуемую терапевтическую, доза 436 мг/кг массы тела, превышающая рекомендуемую терапевтическую в 4360 раз, является абсолютно смертельной и соответствует ЫЭюо.

Длительное применение препарата ПАК-9000 в различных дозах: терапевтической и в 3 и 5 раз превышающих рекомендуемую терапевтическую дозу, не оказывает вредного влияния на организм белых крыс. Предлагаемый корм они поедали охотно. Состояние животных в группах на протяжении двух месячного периода опыта оставалось удовлетворительным. Аппетит, дыхание, поведенческие реакции, рефлексы не претерпели изменений. Расстройств пищеварения от применения препарата ПАК- 9000 не зарегистрировано. Масса тела в процессе роста и развития крыс увеличилась у животных всех опытных групп, причем, наибольший эффект наблюдали при введении препарата в дозе 0,1 мг/кг массы тела: прирост массы тела на 1 животное в этой группе составил 202,4%, по отношению к контролю, а прирост живой-массы тела — с 110,5 г.

Морфологические исследования крови так же не выявили токсического влияния препарата ПАК-9000, гемоглобин и эритроциты достоверно (Р<0,001) были выше, чем в контрольной группе и, достоверно (Р< 0,05) повысились по сравнению с фоновыми показателями. Незначительное снижение содержания нейтрофильных гранулоцитов у крыс 3-й опытной группы за счет лейкоцитоза, на 30-й день, можно объяснить временным угнетением иммунитета в результате применения больших доз иммуностимулятора, впрочем, эти показатели нормализовались к 60-у дню.

Показатели, характеризующие иммунитет, свидетельствуют о иммуностимулирующим действии изучаемого препарата: в процессе исследований, у животных опытных групп отмечено повышение лизоцимной активности сыворотки крови, фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови и их микробицидной системы, что подтверждается показателями ФА, ФЧ, КМ.

При убое и проведении патоморфологических исследований у крыс опытных групп в сравнении с контрольной отклонений и особенностей строения выявлено не было.

Соотношения масс внутренних органов к массе тела как у крыс опытных, так и контрольной групп достоверно не отличается, что свидетельствует об отсутствии токсического воздействия изучаемого препарата и отсутствии нагрузки на органы и ткани.

Таким образом, было установлено, что при длительном введении препарата ПАК-9000 в терапевтической дозе и дозах, в три и пять раз превышающих рекомендуемую терапевтическую, вредного действия на организм не наблюдалось, функции жизненно важных органов и систем оставались без изменений.

Коэффициент кумуляции (Кк) при многократном введении препарата ПАК-9000 (Кк ) = 5,24 - по классификации ЛИ. Медведя с соавторами (1968г.), образец препарата ПАК-9000 относится к 4-му классу по кумулятивному действию - слабая кумуляция.

Выраженное аутоиммунное действие высоких дозировок ПАК-9000 можно объяснить иммунотропными свойствами препарата.

Изучив местнораздражающее действие препарата ПАК- 9000 на морских свинках путем эпикулярных провокационных накожных аппликаций, установили, что изменений в клиническом статусе животных и на месте аппликации за время проведения опыта и после его прекращения выявлено не было. Эластичность, подвижность и упругость кожи оставалась неизменной. У кролика, которому вводили 3% раствор препарата ПАК- 9000 по верхнее веко, отмечали слабую положительную реакцию на введение, проявившуюся слезотечением и слабым покраснением конъюнктивы глаза, сужения зрачка не наблюдали, все признаки действия препарата исчезали в течение 1 часа.

Препарат ПАК-9000 можно охарактеризовать как не обладающий раздражающим и кожно-резорбтивным действием.

Препарат ПАК-9000 не обладает эмбриотоксическим действием, его назначение в терапевтической дозе беременным животным не оказывает токсического влияния па течение беременности и роды. Роды у крыс опытной группы наступали, как правило, на 23-24 дни беременности. Численность помета у самок, которым вводили препарат, была аналогичной численности помета контрольных животных, крысята рождались живыми, без внешних аномалий. Потомство, рожденное от крыс, которым вводили препарат во время беременности, не отличалось от крысят контрольных животных.

Результаты изучения хронической токсичности иммунофана (тимогек-сина) позволяют сделать следующие выводы:

Иммунофан, при ежедневном, одноразовом, подкожном введении крысам в течение одного месяца в терапевтической дозе (0,5 мкг/кг), не оказывал влияние на поведение животных, состояние шерстного покрова, частоту сердечных сокращений и способствовал отчетливому (статистически значимому) увеличению массы тела крыс.

В субтоксической (50 мкг/кг) и промежуточной между терапевтической и субтоксической (5 мкг/кг) дозах иммунофан несколько снижал двигательную активность (отчетливо у крыс) и увеличивал эмоциональный фон подопытных крыс. На прирост массы тела он в указанных дозах оказывал незначительное действие. Так, масса тела крыс, получавших его в дозах 5 мкг/кг, практически соответствовала контрольной группе животных, а у группы подопытных крыс, получавших тимогексин в дозе 50 мкг/кг, прирост массы тела был отрицателен

Имунофан в дозах 0,5; 5 и 50 мкг/кг при внутрикожном введении сенсибилизированным животным не приводит, к образованию комплекса антиген-антитело-комплемент, обеспечивающего развитие выраженного воспаления с нейтрофильной инфильтрацией кожного покрова. У крупного рогатого скота молочного направления в Краснодарском крае наиболее часто регистрируется дефицит иммунитета по клеточному звену, дефицит фагоцитоза и снижены показатели естественной резистентности: бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, поэтому применяемые иммуностимуляторы должны повышать данные показатели, быть доступными по цене, удобными в применении, вписываться в систему мероприятий. Отобранные нами препараты: левомизол, иммунофан и ПАК-9000 полностью отвечают этим требованиям.

Являясь иммуносупрессором, ВЛ КРС усугубляет иммунодефицит.

Применение иммуностимуляторов в период сухостоя коровам, инфицированным ВЛ КРС и больным лейкозом повышало после отела количество общего белка, по сравнению с животными контрольной группы соответственно на 14%, 14,4% и 10,9%, достоверно возросла альбуминовая и у-глобулиновая фракции, количество глюкозы, снизилось количество мочевины, повысилось содержание в сыворотке крови цинка, меди, железа, магния, нормализовались гематологические и иммунологические показатели. Введение иммуностимулирующих препаратов снизило внутри утробное инфицирование телят, рожденных от инфицированных вирусом лейкоза и больных лейкозом коров в эксперименте на 20%, постнатальное инфицирование - на 50-100%.

У новорожденных телят, полученных от коров опытных групп эритро-поэз и гемопоэз был на более высоком уровне, по сравнению с контролем, ниже общее количество лейкоцитов и лимфоцитов. Средняя живая масса тела новорожденных телят опытных групп на 14,5%, 14,9 и 13,97% соответственно выше, чем в контрольной группе.

Введение иммуностимуляторов коровам в период физиологического иммунодефицита ( период сухостоя) снижает заболеваемость животных после отела: в опытных группах заболеваемость была ниже, чем в контрольных: в п\з им. Чапаева сохранность коров после отела составила 85,7% (выбыла 1 корова), а среднее количество дней до первого осеменения - 105,5; во второй опытной группе сохранность была 100% а количество дней до первого осеменения - 88,5, тогда как в контрольной группе эти показатели были соответственно 71,4% (выбыло 2 коровы) и 107 дней, или на 2 дня больше чем в первой и на 18,5 - чем во второй, нормализует обменные процессы.

При профилактике болезней молодняка для повышения резистентности на фоне нормализации обменных процессов применение иммунофана и ПАК-9000

Снижает заболеваемость телят на 13,3% - 26,6%, повышает сохранность на 6,7%- 20 %. Живая масса при рождении у телят опытных групп был выше чем у контрольных соответственно на 2,86% и 1,03%. Среднесуточный прирост живой массы у телят групп где использовали иммунофан был выше, чем у контрольных аналогов на 26,6% и составлял 0,654 кг, тогда как в контрольных группах этот показатель был на уровне 0,480 кг. Во опытных группах, где использовали ПАК-9000 среднесуточный прирост живой массы также был выше, чем у контрольных на 15,5% и составлял 0,568 кг. по видимому за счет того, что иммуностимуляторы способствовали повышению количества общего белка и нормализации показателей протеинограмм у животных опытных групп, повышению относительного количества гамма-глобулинов и снижению альбуминовой фракции, стабилизации минерального обмена.

При применении ПАК-9000 в широком производственном опыте в ОПХ п/з«Ленинский путь» Новокубанского района, на молочно-товарных фермах сохранность телят повысилась с 86,25% до 96,16% в среднем по хозяйству, в том числе МТФ № 1 - с 81,6% до 97,4%; МТФ № 3 - с 94,6% до 97,0%; МТФ № 5 - с 84,3 6% до 94,2% или на 10%, что в абсолютных значениях дает прибавку по хозяйству за год - 155-167 телят, за счет снижения послеродовых осложнений у коров и нетелей, телят было получено на 6,6% больше, или на 110 голов.

Экономическая эффективность применения ПАК-9000 - 5,1 рубля на 1 рубль затрат.