Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эколого - иммунологическая характеристика крупного рогатого скота разных территорий Сибири с учетом оздоровления стад от лейкоза

На правах руко^си

- М101Т 2ЯП0

АГАРКОВА ТАТЬЯНА АНАТОЛЬЕВНА

ЭКОЛОГО - ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА РАЗНЫХ ТЕРРИТОРИЙ СИБИРИ С УЧЕТОМ ОЗДОРОВЛЕНИЯ СТАД ОТ ЛЕЙКОЗА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Новосибирск 2000

Работа выполнена в отделе ветеринарной онкологии и экологии Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ П.Н. СМИРНОВ

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор А.Г. НЕЗАВИТИН

кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник В.В. РАЗУМОВСКАЯ

старшин

Ведущее учреждение:

Институт ветеринарной медицины Омского агроуниверситета

Защита диссертации состоится (« » ¿//&//С 2000г. в на заседании диссертационного совета Д. 020. 23. 01 в Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН по адресу: 630500, Новосибирская область, п. Краснообск, ИЭВСиДВ

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО РАСХН.

Автореферат разослан 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук

А.А. Самоловов

/7 2 У Ь

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Прогрессирующее ухудшение экологического состояния территорий Сибири накладывает негативный отпечаток как на здоровье людей, так и сельскохозяйственных животных (P.M. Хаитов и соавт., 1995; И.М. Донник, 1997; А.И. Павлова, 1998; В.П. Урбан, 1999; П.Н. Смирнов, 1999; др.). В популяциях животных, кроме того, имеет место существенное влияние биотических факторов, в частности вакцинной природы, в особенности в эпизоотически неблагополучных стадах. Негативное (иммунодепрессивное) воздействие на организм оказывают и многочисленные химиопрепараты, используемые в качестве противопаразитарных средств.

С учетом изложенного в настоящее время вполне обоснованно возникла необходимость определения и сравнительной оценки иммуноморфологического статуса животных, в частности крупного рогатого скота, районированного в разных климатогеографичеких условиях и разной генеалогической принадлежности. Последнее позволит более эффективно осуществлять мониторинг за состоянием здоровья животных, вести целенаправленный отбор особей для племенных целей, эффективно обеспечивать эпизоотическое благополучие популяций по той или иной нозологии. При этом существенным дополнением должны служить наиболее полные знания об особенностях эпизоотического процесса конкретно рассматриваемых инфекций. И на этой основе разработка научно обоснованной системы профилактики и оздоровления стад от инфекций.

В нашей работе в качестве модельной нозологической формы был взят лейкоз крупного рогатого скота отдельных территорий Сибири.

Цель работы.

Дать комплексную оценку иммунной системе крупного рогатого скота, на популяционном уровне, в зависимости от экологических особенностей территорий и оздоровления стад от лейкоза.

Задачи исследований:

1. Провести генеалогический анализ популяций крупного рогатого скота и дать оценку по показателям фагоцитоза.

2. Дать сравнительную адаптационную оценку крупному рогатому скоту разных популяций по показателям клеточного и гуморального звеньев иммунной системы.

3. Провести изучение эпизоотического состояния популяций крупного рогатого скота изучаемых территорий.

4. Довести, в процессе реализации, до оптимального варианта научно обоснованную систему оздоровления стад крупного рогатого скота от лейкоза на примере модельных хозяйств.

5. Провести изыскание иммунотропного препарата, прежде всего, отечественного производства, способного прямо или опосредованно нейтрализовать ВЖРС в организме - вирусоносителе.

Научная новизна.

Установлено, что повсеместная голштинизация молочных стад с целью повышения продуктивности сибирского скота в значительной мере способствовала расшатыванию устойчивости местного скота к болезням. По показателям естественной резистентности преимущество имели только коровы линии Силлинг Трайджун Рокит. Достоверно более низкой фагоцитарной активностью обладали коровы линии Уес Идеал.

Показано, что крупный рогатый скот, районированный в Якутии, характеризуется достоверно более высокими показателями фагоцитоза (83,3%), в сравнении с животными Западной Сибири (56,1%).

Установлено, что число особей с отклонениями от нормативного уровня концентрации и циркулирующих иммунных комплексов в крови

превалировало в популяциях крупного рогатого скота экологически неблагополучных территорий.

Впервые изучена динамика показателей титра противовирусных антител у инфицированных ВЬУ животных, позволяющая прогнозировать течение эпизоотического процесса лейкоза крупного рогатого скота.

Практическое значение работы.

Ряд положений диссертации использован при разработке проекта Правил по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота (М., 1999).

Разработана панель наиболее информативных тестов для оценки иммунологической активности и естественной резистентности крупного рогатого скота с привязкой к адаптационным возможностям животных в разных экологических условиях.

Изучен морфологический статус периферической крови крупного рогатого скота, районированного в Якутии и Западной Сибири. Материалы могут быть использованы в диагностической работе специалистами ветеринарных лабораторий, а также в селекционно - племенной работе.

Показатели концентрации циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) сыворотки крови крупного рогатого скота могут служить интегральным тестом определения техногенной нагрузки на иммунокомпетентную систему животных в конкретных экологических условиях.

Основные положения, выносимые на защиту:

• результаты изучения показателей естественной резистентности крупного рогатого скота разных территорий Западной Сибири;

• результаты определения концентрации циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови крупного рогатого скота экологически неблагополучных территорий;

• результаты изучения эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в некоторых областях Сибири;

• результаты сравнительного изучения влияния отечественных иммуномодуляторов на инфекционный процесс лейкоза крупного рогатого скота;

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научно - практической конференции «Профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями молодняка крупного рогатого скота и свиней» (Новосибирск, 1996); II научной конференции Новосибирского отделения Паразитологического общества РАН «Паразиты и вызываемые ими болезни в Сибири» (Новосибирск, 1997); 1-й научно-практической конференции факультета ветеринарной медицины НГАУ «Актуальные вопросы ветеринарии» (Новосибирск, 1997); конференции научной молодежи «Молодые ученые в решении проблем Сибирской аграрной науки» (Новосибирск, 1997); научной конференции, посвященной 50-летию Алтайской НИВС «Ассоциативные инфекции сельскохозяйственных животных и новые подходы к их ликвидации и профилактике» (Барнаул, 1997); научно-практической конференции, посвященной 65-летию Иркутской НИВС «Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных» (Иркутск, 1997), конференции научной молодежи СО Россельхозакадемии «Вклад молодых ученых в развитие Сибирской аграрной науки» (Новосибирск, 1998); межрегиональной научно-практической конференции «Опыт и проблемы обеспечения продовольственной безопасности государства» (Екатеринбург, 1998); 2-й научно - практической конференции факультета ветеринарной медицины НГАУ «Актуальные вопросы ветеринарии» (Новосибирск, 1999).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 научных работ в научных журналах, сборниках научных трудов ИЭВСиДВ, НГАУ, Алтайской НИВС, Иркутской НИВС; в коллективных монографиях «Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири», «Научно обоснованная система оздоровления и профилактики лейкоза крупного рогатого скота в Курганской области» и «Комплексная программа оздоровления и профилактики лейкоза крупного рогатого скота в Новосибирской области на 1999-2003 гг. (теоретические и практические аспекты)».

Структура и объем диссертации Диссертация изложена 165 страницах и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, библиографию и приложение. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 15 рисунками. Библиографический указатель включает 214 источников, в том числе 53 зарубежных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ I. Материалы и методы исследования

Диссертационная работа выполнялась в течение 1995 - 2000 гг. в лаборатории ветеринарной онкологии и экологии Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН при непосредственном руководстве профессора П.Н. Смирнова.

Для реализации поставленных задач было подобрано несколько модельных хозяйств с разным эпизоотическим состоянием по лейкозу.

Объектом исследования являлся крупный рогатый скот. Предмет исследований составляли пробы крови, сыворотки крови животных разных половозрастных групп, из разных экологических зон Сибири.

Для изучения эпизоотической ситуации по лейкозу в отдельных хозяйствах были использованы результаты серологических и гематологических исследований, проведенных лично соискателем, а также сотрудниками отдела лейкозов ИЭВСиДВ. При этом, выражаю всем им глубокую признательность за помощь в проведении исследований и сборе материала.

Изучение эпизоотической ситуации, а также разработка и реализация программы оздоровительно - профилактических мероприятий по лейкозу выполнялись при непосредственном методическом и практическом участии соискателя при экспедиционных выездах.

Общие данные о количестве исследованных животных

Проведено исследование 5 100 голов крупного рогатого скота:

1. Группа взрослых клинически здоровых животных - 50 гол;

2. Животные разных половозрастных групп - 50 голов;

3. Животные модельных хозяйств, разных в экологическом отношении - 5 ООО гол.

Предметом исследований служила сыворотка крови животных. Подготовленные пробы хранили при температуре -18С.

Концентрацию белковых фракций в сыворотке крови исследуемых животных определяли методом электрофореза в теле агарозы марки В, описанным В.М. Чекишевым (1977).

Общее содержание сывороточного белка в сыворотке крови определяли рефрактометрически.

Исследование периферической крови включало подсчет абсолютного содержания лейкоцитов в 1 мкл - микроскопией в камере Горяева, а лимфоцитов - методом фазово - контрастного микроскопирования, описанным П.Н. Смирновым и соавт. (1989).

Инфекцию ВЛКРС у животных диагностировали в тест - системе "РИД в агаровом геле с антигеном ВЛКРС" по методике, утвержденной ГУВ МСХ СССР 30 ноября 1989 года.

Естественную резистентность животных оценивали по методике, описанной П.Н. Смирновым и соавт. (1989), включающей панель наиболее информативных диагностических тестов:

- оценку уровня фагоцитарной активности нейтрофилов;

- определение напряженности бактерицидной активности сыворотки крови;

- оценку уровня лизоцимной активности сыворотки крови.

При постановке опсоно - фагоцитарной реакции (ОФР) использовали тест - культуру белого стафилококка (Staphilococcus albus). Рассчитывали активность фагоцитоза (ФА), индекс фагоцитоза (ФИ), фагоцитарное число (ФЧ).

Напряженность бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови определяли нефелометрически, используя в качестве тест - микроба в первом случае - культуру Е. Coli и во втором - микрококка (Micrococcus lyzodeiticus).

Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови животных определяли методом осаждения в полиэтиленгликоле молекулярной массой 6000 (ПЭГ - преципитация) (М. Digeon, 1977) с некоторыми модификациями. Для приготовления 3 и 4 % растворов ПЭГ 6000 использовали 0.001 М боратный буфер. Постановку реакции осуществляли в плоскодонных 96 - луночных планшетах для иммунологических исследований.

Статистическая обработка данных включала подсчет средних (М), стандартных ошибок (ш), стандартных отклонений (5), достоверности. В таблицах информация представлена в виде М±т, в некоторых случаях М±5.

Анализ эпизоотической ситуации по инфекции BJIKPC и лейкозу крупного рогатого скота проводили по методике С.И. Джупина и В.А. Ведерникова (1981).

2. Иммуногенетическая характеристика крупного рогатого скота ПЗ "Первомайский" с разной степенью компрометации в отношении к лейкозу

Исследования проводили в ПЗ «Первомайский» Новосибирской области, который является базовым хозяйством по созданию нового типа голштинизированного черно-пестрого скота. Стадо коров племзавода имеет неоднородную генетическую структуру. Оно представлено особями, происходящими от животных различного экогенеза, а также чистопородными черно-пестрыми коровами и голштинскими помесями. В конце 70-х годов начат завоз импортного черно-пестрого скота в ПЗ из Голландии, Дании и Германии (Б.Л.Панов, B.JT.Петухов и соавт., 1997).

Таблица 1

Показатели ОФР у коров разной линейной принадлежности (средние по линиям, М±т, о)

Показатели ОФР У. Идеал М. Чифтейн Р. Соверннг С.Т. Рокит

Фагоцитарная активность (ФА),% 48.4±8.7 а=19.5 57.2+10.5 о =14.9 50.0±7.8 о =17.4 57.3+5.7 а =9.8

Фагоцитарный индекс (ФИ), ед. 3.2±1.1 <1=2.5 4.3:10.7 а =0.9 4.0+0.7 о =1.5 5.4+1,6 о =2.7

Фагоцитарное число (ФЧ), ед. 5.8±1.2 о=2.7 7.5±0.б а =0.8 9.3±2.4 с =4.8 9.0+1.8 0=3.1

В Т13 «Первомайский» используются быки-производители четырех основных голштинских линий: Уес Идеал, Силлинг Трайджун Рокит, Рефлекшн Соверинг, Монтвик Чифтейн.

В таблице 1 представлены данные по естественной резистентности коров разной линейной принадлежности.

Из нее видно, что наибольшей фагоцитарной активностью обладали потомки линий Силлинг Трайджун Рокит и Монтвик Чифтейн (разница достоверна).

Наиболее низкий показатель фагоцитирующих нейтрофилов был выявлен в крови коров линии Уес Идеал. Помеси этой линии имели и более низкие показатели ФИ и ФЧ (Р<0,05).

Следует, однако, отметить, что при относительно высокой общей ФА микрофагов крови у коров линии Монтвик Чифтейн (57,2±10,5%), животные этой линии имели невысокие показатели ФИ и ФЧ. В то же время коровы линии Р.Соверинг по интенсивности фагоцитоза (ФЧ) выгодно отличались от животных других линий.

3. Сравнительная оценка естественной резистентности крупного рогатого скота разных территорий Сибири в связи с инфекцией ВЛКРС

Оценке естественной резистентности животных в настоящее время придается важное значение в развитии ряда физиологических и патологических состояний.

Изначально задачей наших исследований являлось проведение сравнительного изучения показателей естественной резистентности (по фагоцитарной активности крови) коров двух ферм ПЗ "Первомайский", одна из которых (№1) неблагополучна по лейкозной инфекции (100% поголовья инфицировано ВЬУ), другая (№3) свободна от данной инфекции.*

Из нее видно, что фагоцитарная активность микрофагов в весеннее время у животных обеих групп достоверной разницы не имела, хотя и наблюдали небольшое превышение у интактных к ВЛКРС коров.

В этот же сезон года, по другому показателю ОФР - индексу фагоцитоза преимущество было за инфицированными ВЛКРС животными. Та же тенденция была сохранена и по числу микробных клеток в пересчете на один активный (фагоцитирующий) нейтрофил (ФЧ). При этом достоверно более высоким данный показатель был у коров, скомпрометированных в отношении лейкозной инфекции - 8,7+0,7 против 6,9±0,3 м.т./акт.нейтр (табл. 2).

Из таблицы также видно, что у инфицированных ВЛКРС коров (ферма №1) сезонной разницы в фагоцитарной активности нет. Нет ее и в показателе ФИ, хотя небольшая тенденция снижения в осенний период все же имелась, но разница не была достоверной. По числу микробных клеток на один активный нейтрофил (ФЧ) преимущество имели те же, инфицированные ВЛКРС, животные в весенний период (разница достоверна).

* на ферме 1 было сконцентрировано все серопознтивное поголовье га других ферм.

8

Таблица 2

Показатели ОФР у коров подопытных групп в разные сезоны года

Показатели ОФР Весна Осень

Ферма №1 Ферма №3 Ферма №1 Ферма №3

ФА, % 54,1 ±5,6 58,0±4,1 54,8±5,8** 37,4±1,9

ФИ, м.к. 5,0+0,9 4,1 ±0,4 3,1+0,6** 2,1±0,2

ФЧ, м.к. 8,710,7* 6,9+0,3 5,6+0,4 5,7±0,5

У интактных в отношении вируса коров (ферма №3) фагоцитарная активность была достоверно выше весной (58,0±4,1% против 37,4±1,9%). По индексу фагоцитоза разница также достоверна - в пользу весеннего периода, однако по ФЧ, хотя и сохранялись различия, но они были не достоверны.

Сравнительные исследования животных разных возрастных групп мы провели также в совхозе "Новый" Мирнинского района Якутии, куда были организованы экспедиционные выезды. Для сравнения были происследованы телята разновозрастных групп (новорожденные, затем в 6,12 и 18 мес), а также коровы примерно одного возраста и коровы частного сектора (рис. 1).

Из рисунка видно, что среди животных всех сравниваемых групп у новорожденных телят фагоцитарная активность была наиболее высокой -93,5%, так же как и фагоцитарный индекс - 41,3 м.т./нейтр. и фагоцитарное число - 44,0 м.т./акт.нейтр.

С увеличением возраста показатели фагоцитарной активности, фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа у животных снижаются, лишь во взрослом состоянии показатели ОФР достигают уровня 6-ти месячных телят. У телок случного возраста, по сравнению с животными других возрастных групп, происходит снижение концентрации лейкоцитов в 1,7 раза, лимфоцитов

- в 1,9 раза (Р<0,001). За счет снижения концентрации лейкоцитов происходило снижение фагоцитарного индекса - 6,1 м.т./нейтр., это в 1,7 раза ниже, по сравнению с12-мес телятами. Показатель фагоцитарного числа снижался до 9,4 м.т./акт.нейтр. - это в 1,4 раза ниже, чем у телят 12-ти месячного возраста, а фагоцитарная активность- до 62,9 %.

Из проведенных исследований установлено, что у крупного рогатого скота, адаптированного к условиям Якутии (с-з «Новый» Мирнинского улуса), функциональные возможности макрофагальной системы выше, чем у животных Западной Сибири (ФА - 83,3%; ФИ -10,9 м.т./нейтр; ФЧ - 13,2 м.т./нейтр). Коровы ПЗ "Первомайский" как по фагоцитарной активности микрофагов, так и по индексу фагоцитоза и фагоцитарному числу, стоят на более низком уровне

- разница достоверна.

Для получения более полной информации о состоянии иммунной системы животных в разных экологических зонах мы использовали показатели

белкового состава сыворотки крови (содержание общего белка, у-глобулинов класса в, альбуминов, альфа- и бета - глобулинов).

Необходимо отметить, что по концентрации сывороточных белков преимущество за коровами, свободными от лейкозной инфекции. Однако

Телята бмес 12мес Шмсс 8лет

________________________________

—•—Фагоцитарный индекс —л- -Фагоцитарное число —В— Фагоцитарная активность

Рис.1. Динамика показателей опсоно-фагоцитарной реакции у крупного рогатого скота с-за «Новый» Мирнинского района

достоверная разница имела место только по концентрации (6,4 против 2,7) (Р<0,01). Здесь же следует отметить, что свободные от инфекции коровы Мирнинского Района Якутии имели достоверно более высокие показатели, в сравнении с коровами из ПЗ "Первомайский", только по уровню альбуминов (7,69). Однако, как было отмечено выше, коровы из Якутии обладали более высокой фагоцитарной активностью.

Наиболее контрастно выглядела разница в изучаемых показателях между животными разных возрастных групп. Так, например, телки к случному

возрасту (18 мес) постепенно достигали уровня взрослых животных по общему белку, альбуминам, альфа - глобулинам, 1ц01 и

На более низком уровне была зарегистрирована концентрация (обоих подклассов) у новорожденных телят (3,83 и 2,08 - соответственно).

Циркулирующие иммунные комплексы у крупного

рогатого скота и их роль в иммунитете

Следующим показателем, который мы использовали в своих исследованиях, была концентрация циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови животных. Циркулирующие иммунные комплексы являются неотъемлемым компонентом гуморального иммунного ответа при различных заболеваниях, в том числе и инфекционно-воспалительных процессах. Определение их содержания в сыворотке крови было проведено совместно с аспирантом лаборатории ветеринарной онкологии и экологии Логиновым С.И.

Возрастная динамика показателя иммунных комплексов животных совхоза «Новый» Мирнинского района Якутии имела свои особенности. Крайне низкое их содержание выявили у новорожденных телят, а у телок случного возраста уровень ЦИК достигал показателей взрослых животных и даже несколько превосходил их, что дало нам основание относить таких особей к группе риска по возможному развитию иммунопатологических состояний.

4. Сравнительная эффективность различных вариантов (схем) оздоровления неблагополучных по лейкозу стад

Для изучения сравнительной эффективности разных вариантов оздоровления неблагополучных по лейкозу стад было подобрано несколько модельных хозяйств с разным эпизоотическим состоянием по лейкозу. Изначально мы проверили степень эффективности нескольких вариантов оздоровления стад в хозяйствах Шушенского района Красноярского края совместно с главным ветеринарным врачом района Двойниковым В.К.

Прежде всего разработали комплексную программу (по сути дела систему) оздоровления стад, включавшую 3 основных блока (табл. 3).

В рамках действующей в то время инструкции по лейкозу крупного рогатого скота использовали 3 варианта оздоровления.

Первый вариант - для двух хозяйств (АО «Субботинское» с инфицированностью дойного стада 12% и АО «Колос» - с инфицированностъю 14.9%) предусматривал разделение стада на две группы - серонегативную и серопозитивную.

Второй вариант - для двух хозяйств (АО «Россия» и совхоз -техникум). Первое с инфицированностью дойного стада 23,8%, второе - 43,0%. Данный вариант оздоровления исключал разделение стада.

После первичного исследования коров и нетелей с помощью РИД в агаре с антигеном ВЛКРС всех серолозитивных животных подвергали

гематологическому исследованию (повторяя через каждые 6 мес), больных выбраковывали на мясо.

Таблица 3

Система оздоровления хозяйств Шушенского _района от лейкоза крупного рогатого скота_

ОСНОВНЫЕ БЛОКИ

Ветеринарный

Научно - методический

Организационно -хозяйственный

1 Диагностические исследования крупного рогатого скота от 6 мес и старше на ВЛКРС инфекцию

2.Исследование взрослого серопозигивного крупного рогатого скота на лейкоз гематоло гически

3.ВеперинарньЧе обработки животных по единому установленному порядку -начинать с РИД (-) и заканчивать РИД (+)

1. Анализ эпизоотической ситуации.

2.Разработка планов оздоровления стад с выбором наиболее оптимального варианта оздоровления.

3.Использование комплекса высокочувствительных методов диагностики инфекции ВЛКРС.

4.Курсы подготовки ветврачей - серологов -гематологов.

5 Курсы подготовки истрачен

организаторов оздоровительной работы

1.Изоляция из общего стада серопозитивных животных в течение 4-5 дней

2.Таврение РИД{+) животных.

3.Пастеризация сборного молока для выпойки телятам с 10-дневного возраста или использование молока от коров из РИД (-) гуртов.

4.Изолированные родильные отделения для РИД (+) и РИД (-) коров и нетелей.

5.Периодические (не реже 1 раза в 6 мес) рабочие совещания на уровне главы администрации (по итогам оздоровстельной работы)

Третий вариант оздоровления возник, исходя из технологических особенностей двух хозяйств - АО «Сибирь» (31,6% коров инфицированы ВЛКРС) и АО «Нива» (20,5%). Он представлял собой сочетание первых двух вариантов - небольшие фермы (по 200 голов) оздоравливали методом разделения стада, а крупные (комплексы) - методом замены серопозитивных группами выращенных изолированно серонегативных нетелей.

Все изучаемые варианты оздоровления неблагополучных по лейкозу хозяйств обеспечили позитивные результаты. Эпизоотическая ситуация по инфекции ВЛКРС во всех шести сельскохозяйственных предприятиях через 2,5 года оздоровления характеризовалась единичными случаями выделения серопозитивных (в РИД) животных. В то же время выявлены преимущества применения полного разделения стада на серопозитивную и серонегативную группы, перед другими схемами оздоровления.

Далее мы продолжили отработку схем оздоровления на примере с-за «Пашинский» Новосибирской области. Анализируя динамику выявления инфицированных вирусом лейкоза коров в этом хозяйстве, в разрезе отдельных гуртов, в процессе оздоровления, не трудно было заметить, что эпизоотический

процесс инфекции ВЛКРС в каждом из 4-х сравниваемых гуртов развивался по - своему.

По классическому варианту оздоровление от ВЛКРС- инфекции шло в гурте №2. Однако своеобразная динамика имела место в гурте №3. Если при весенних исследованиях выявлялось (в оздоравливаемой популяции) до 1% инфицированных ВЛКРС животных, то осенью результат по этому же гурту был отрицательным.

Совершенно иное проявление эпизоотического процесса имело место в гурте №1. Говорить о стабильном благополучии к 1996 году не представлялось возможным. По-видимому в этом и состоит сложность достижения стойкого благополучия стад по инфекции ВЛКРС на завершающей стадии оздоровления, в особенности, в хозяйствах со значительной экологической загрязненностью, к каковым относится ПЗ «Пашинский» (пригород Новосибирска). Полного завершения оздоровительной работы по данному хозяйству удалось достичь только к концу 1997 года.

Примером второго варианта оздоровления может служить ферма Петровка АО "Омский бекон".

1x.93г. IX М.Э5г. Х.65г. 1У.ВЭ-. Х9йг. 1Н.97Г. Ш?г. дата исследования

Рис. 2. Динамика показателен инфицированности дойного стада ф. Петровка АО «Омский бекон» вирусом лейкоза

После первого серологического исследования дойного стада, проведенного осенью 1993 года, мы выявили 74,2% вирусоносителей (РИД-положительных) и 7,5% гематологически больных лейкозом коров. Своевременно были приняты меры по купированию инфекции ВЛКРС.

Из рисунка 2 видно, что только с 3-4-го исследований прослеживается тенденция постепенного снижения эпизоотической напряженности по лейкозу в оздоравливаемой популяции.

Серологическое исследование дойного стада, проводимое с интервалом 2 мес., позволило к июню 1997 г. снизить уровень инфицированности коров и нетелей до 0,2 %, а в марте и июне 1998 года были получены два подряд отрицательных результата в РИД по всему стаду. Согласно действовавшей в то

время инструкции по лейкозу (М., 1989) - пункт 3.1, на ферме Петровка дойное стадо объявили благополучным по лейкозной инфекции. На протяжении 19981999 годов при контрольных исследованиях сывороток крови коров в РИД результат оставался отрицательным.

В ПЗ «Первомайский», исходя из технологических особенностей хозяйства, использовали комбинированную схему оздоровления.

Следующим модельным сельхозпредприятием было «Толмачевское» Новосибирской области. Его отличительной особенностью являлось пригородное расположение и, следовательно, достаточно сложная экологическая обстановка. Однако и в этом хозяйстве мы достигли позитивного результата за короткий срок. Оздоровительную работу в стаде мы проводили методом постепенной замены реагирующего на ВЛКРС - инфекцию поголовья. Осенью 1997 г. (на момент первичного обследования поголовья) показатель инфицированности телок в 12, 18 мес и коров был относительно высоким - от 14,1 до 38,9%.

В данном хозяйстве мы использовали ту же схему разрыва эпизоотической цепи (таврение вирусоносителей и их изоляцию от восприимчивых животных). Число инфицированных коров удалось снизить до 1.5%.

На завершающей стадии оздоровления стада от инфекции ВЛКРС мы предложили одномоментную выбраковку оставшегося от передержки серопозитивного поголовья.

5. Особенности динамики инфекционного и эпизоотического процессов лейкоза крупного рогатого скота при реализации программы оздоровительных мероприятий от лейкоза

В процессе проведения массовых серологических исследований, связанных с оздоровлением стад, мы отметили, что РИД проявляется по-разному, в особенности в свежих очагах инфекции, поэтому по степени выраженности линии преципитации, относительно антигена и испытуемой сыворотки, мы создали систему учета РИД с чр51 антигеном в 5-ти крестах.

Предварительный анализ распределения инфицированных вирусом лейкоза животных по этой системе выявил его неоднородность. Это было прослежено на примере хозяйств разных регионов: "30 лет Победы" Тальменского района Алтайского края (экологически неблагополучная зона), ПЗ "Первомайский" Татарского района Новосибирской области (относительно благополучная экологическая зона), ОПХ "Новостройка" Кемеровской области (экологически неблагополучная зона), "Толмачевское", "Пашинский" Новосибирского района (экологически неблагополучная зона).

При уровне инфицированности стада 34.0% число реагирующих животных на 4 креста составляло 40%; на 3 креста - 20% и 15% -на 2 креста. Около 25% реагировало на 1 крест. В последующие месяцы расклад положительно реагирующих был несколько иным. Явное преимущество имели животные, реагирующие в РИД на 3 креста. Значительно меньше на 4 креста. В

то же время большую долю среди серопозитивных животных занимали реагирующие на 2 и 1 крест. В мае, как и в январе, вновь выявлялось 6-8% животных, реагирующих на 5 крестов. Данное хозяйство характеризовалось стационарностью лейкозной инфекции.

В такой же последовательности мы проанализировали показатели реагирования животных двух стад ПЗ "Первомайский" Новосибирской области (рис. 3,4).

-

-

И

и га 11 I

13.05.95 13.07.95 13.11.95 20.03.9S 21.11.98 26.03.97 24.06.97 17.09.97 30.10.97 25.12.97 18.03.98 19,06,98

Дата исследований □ +++++ ЕЗ++++ □+++ 0++ ¡3 +

Рис. 3. Распределение числа инфицированных ВЛКРС животных по степени проявления РИД (в крестах) на примере ПЗ «Первомайский» (ферма № 2)

Данные стада были доведены до оздоровления от ВЛКРС - инфекции, однако в 1994-95 гг. инфекция вновь была занесена в дойные гурты с «ремонтными» телками. Следовательно, мы квалифицируем их как "свежие очага" инфекции.

£3 О.

т

ё X

3"

Й >»

а.

л а> о.

13.05.95 13.07.95 13.11.95 20.03.96 21.11.96 26.03.97 24,06,97 17.09.97 Дата исследования

сз ♦++++ В ++++ □ В ++ ЕЗ+

Рис. 4. Распределение числа инфицированных ВЛКРС животных по степени проявления РИД (в крестах) на примере ГО «Первомайский» (ферма № 3)

Первоначально провели 2 серологических исследования с интервалом 2 месяца. При первом исследовании ни в одном стаде не выявлено животных, реагирующих на 5 крестов. В двух стадах не зарегистрировано слабоположительных реакций (на 1 крест) и только при втором исследовании появились единичные случаи таких реакций. В основном при читке реакции в числе серопозитивных случаев РИД была на 3 креста. Данную особенность мы склонны квалифицировать как результат остропротекающей инфекции (свежие случаи). Это согласуется с данными, описанными Т.Д.Каратаевой (1995), на модели экспериментального лейкоза, вариантом инфекционного процесса. Изначально автором был зарегистрирован относительно высокий иммунный ответ на ¿р51 ВЛКРС (на 3-4 креста), а в последующем он снизился до 1-2 крестов и сохранялся на этом уровне до конца опыта.

Проводя сравнительный анализ инфицированных ВЛКРС животных за год, мы заметили, что среди серопозитивных коров преобладающее число животных реагировало в РИД на три креста.

В 1995 году среди серопозитивных коров фермы №2, реагирующих на 3 креста, выявили 65,7% животных, на 4 креста - 18,6% , на 2 и 1, соответственно - 11,8% и 3,9%. На ферме №3 выявили аналогичную картину. По результатам серологического исследования большее число составили животные, прореагировавшие на 3 креста (70,9%), затем на 4 креста - 17,7%, на 2 и 1 -7,6% и 3,8% соответственно.

В 1996 году среди реагирующих в РИД коров фермы №2 на 4 креста выявили всего лишь 1,6%. Преобладающее большинство составляли животные на 3 креста (59,0%), но увеличилось число реагирующих на 1 (26,2%) и на 2 креста (13,1%). На ферме №3 в 1996 году распределение по показателю иммунного ответа (в РИД) незначительно изменилось. Но как и в 1995 году, по-прежнему приоритет составили реагирующие на 3 креста (62,4%), гораздо меньше на 2 креста (13,9%), на 4 креста (12,9%) и на 1 крест (8,9%).

В 1997 году преобладающее большинство осталось за реагирующими на 3 креста (53,6%), при заметном увеличении числа животных, реагирующих на 1 (10,7%) и на 2 креста - 21,4%.

У животных фермы №3 в 1997 году реагирующих на 1 и 2 креста почти не выявляли. Зарегистрированы в основном коровы реагирующие на 3 креста -72,1% и на 4 - 53,5%.

Среди РИД-положительных коров в период проведения диагностических исследований реагирующих на 5 крестов не выявили, однако большая часть инфицированных животных реагировала на 3 креста.

Следовательно, на ферме №2 лейкозный процесс носил хроническое течение, а на ферме №3 - острое, периодически возникали «свежие» очаги инфекции.

Для сравнения динамики лейкозного процесса в другой экологической зоне мы проанализировали результаты серологических исследований коров ОПХ "Новостройка" Кемеровской области. Опытно - производственное хозяйство находится в 16 км от города Кемерово.

При этом по аналогии с вышеописанными хозяйствами оценку РИД выражали в крестах по 5-ти бальной системе.

В процессе оздоровления стада от инфекции ВЛКРС (с 28,3% - октябрь 1996 г., до декабря 1996 г.) в популяции фермы № 2 шло перераспределение численности особей по высоте титра противовирусных антител - тенденция снижения серопозитивных животных на 5 крестов и увеличение численности особей с реакцией (РИД) на три и два креста. Последнее указывало на тенденцию затухания эпизоотического процесса лейкозной инфекции.

В другой бригаде этой же (второй) фермы эпизоотический процесс протекал по той же аналогии. По мере выявления серопозитивных животных с высокими титрами антител в стаде оставались особи с титрами на 2 и 3 креста.

По ферме № 3 мы выявили ту же тенденцию. Более того, сокращение числа животных, реагирующих и на пять и на четыре креста сопровождалось повышением числа животных, реагирующих на 1-3 креста.

В заключение по данному вопросу следует высветить еще одну немаловажную деталь: использование дифференцированной (по титру антител) оценки серопозитивных животных позволяет, с определенной долей уверенности, говорить о степени стационарности инфекции в стаде. К примеру, в с-зе «Пашинский» наибольшую долю серопозитивных составляли особи с титром антител в РИД на 3 и 4 креста, соответственно 33,1 и 31,7%, против 31,8% - на четыре, 52,7% - на три и 0,9% животных - на пять крестов.

6. Сравнительное изучение влияния иммуномодуляторов

отечественного производства на инфекцию ВЛКРСу животных

С момента открытия вируса лейкоза крупного рогатого скота был начат активный , поиск противовирусных препаратов, обладающих интерфероногенным эффектом и усиливающим активность иммунной системы у инфицированных ВЛКРС животных.

В ходе практической отработки программы оздоровления стад от лейкозной инфекции мы поставили ряд опытов по изучению влияния некоторых иммуномодуляторов интерфероногенного действия: вестин, альнорин, субалин, ветом, вирицид, зраконд и стимаден. Свои исследования проводили в АОЗТ «Бердское» и «Пригородное» Новосибирской области.

Из проведенных опытов по испытанию иммуномодуляторов внимания заслуживает только опыт с альнорином.

Результаты исследований в РИД показали, что только у 2-х подопытных животных, обработанных альнорином, при пятом исследовании сыворотки крови в РИД дали отрицательный результат. У животных, обработанных другими препаратами, заметных изменений в титре антител не установлено.

В следующем опыте (1998) из числа инфицированных ВЛКРС коров дойного стада было сформировано еще 4 опытных и 1 контрольная группы (по 5 животных в группе), на которых испытали препарат альнорин.

Через 1 месяц после завершения курса введения альнорина у животных всех групп РИД сохранялась, однако еще через две недели в I группе РИД была отрицательной у коровы по кличке Красавица; во II группе - у коровы по кличке Тишина. В III группе «выпадений» РИД у животных не зарегистрировали, а в IV - через 1.5 месяца у коровы по кличке Галка, у других животных реакция сохранялась.

Через 2 месяца после введения альнорина животные всех четырех групп вновь реагировали в РИД положительно.

Для полноты изучения влияния иммуномодуляторов на ИКС животных, мы провели определение концентрации сывороточных белков разной электофоретической подвижности животных всех 5-ти подопытных групп.

Результаты исследований показали, что альнорин и альнорин в ассоциации с вестином обладают наибольшим иммуностимулирующим

эффектом. Эуо опосредованно можно проследить по динамике показателей концентрации а, р, у - глобулинов, причем в случае, если альнорин вводили в моно - варианте.

На основании результатов исследования проб сыворотки крови у подопытных животных под влиянием препаратов ветом - 2 и ветом - 4 у 33.3% BJIKPC инфицированных животных через 7 дней после введения иммуномодуляторов по разработанной схеме, учитывавшей дозировку и кратность введения, в сыворотке крови имело место кратковременное снижение титра специфических антител. Однако, ветом 1.1, вирицид, эраконд + стимаден, изменений в титре специфических к BJIKPC антител, не вызывали. Итак, результаты проведенных исследований позволяют говорить о том, что поиск противовирусных препаратов необходимо продолжать.

ВЫВОДЫ

1. По показателям естественной резистентности преимущество имели коровы линии Силлинг Трайджун Рокит (ФА-57,3%; ФИ-5,4 м.т./нейтр.; ФЧ-9,0 м.т./нейтр). На второе место, в ряду 4-х сравниваемых линий, можно отнести коров линии Монтвик Чифтейн. Сравнительно низкой фагоцитарной активностью обладали коровы линии Уес Идеал (ФЛ-48,4%; ФИ-3,2 м.т./нейтр., ФЧ-5,8 м.т./нейтр).

2. Наиболее высокие показатели поглотительной активности микрофагов выявлены в весенний период у коров, инфицированных вирусом лейкоза (BLV). В осеннее время показатели ОФР у инфицированных вирусом лейкоза коров (ФА-54%, ФИ-3,1 м.т./нейтр.) также превосходили таковые интактных, в отношении BJIKPC, животных (ФА- 37,4%; ФИ- 2,1 м.т./нейтр), при относительно равном показателе фагоцитарного числа (5,6 м.т./нейтр. и 5,7 м.т./нейтр. - соответственно).

3. Новорожденные телята характеризуются относительно высокими показателями фагоцитоза (до 93,5 %), при ФИ, равном 41,3 м.т./нейтр. и ФЧ -44,0 м.т./акт.нейтр. При этом бактерицидность сыворотки крови также была более высокой в сравнении с животными других возрастных групп - 59,4 % (Р < 0,001). С увеличением возраста показатели ОФР у животных снижаются и только у взрослых коров они достигают уровня 6-ти месячных телят. Последнее мы связываем со значительной иммунологической нагрузкой (вакцинации, противопаразитарные обработки) на организм телят этого возраста.

4. Крупный рогатый скот, адаптированный к условиям Якутии, характеризуется достоверно более высокими показателями фагоцитоза (ФА в 1,4 раза, ФИ - в 2,6 раза, ФЧ - в 1,9 раза), в сравнении с животными ЗападноСибирского региона.

5. Установлен ингибирующий продукцию сывороточных белков эффект вируса лейкоза (ВЛКРС). Разница в концентрации IgG2 между инфицированными ВЛКРС и свободными от инфекции животными, соответственно - 2,68 г/л у инфицированных и 6,4 г/л - интактных, разница достоверна (Р<0,01).

6. Число особей с отклонениями от нормативного уровня концентрации и ЦИК превалировало в популяциях крупного рогатого скота экологически неблагополучных территорий. При этом признаки стимуляции гуморального звена иммунной системы характеризуют начальную стадию нарушения функции ИКС, развивающегося под влиянием негативных экологичесских факторов. В последующем появление в таких популяциях представительного числа животных с иммунологической недостаточностью свидетельствует о более глубоких изменениях, происходящих в иммунной системе при длительной экологической нагрузке.

7. Из изученных нами иммуномодуляторов (альнорин, вестин, субалин, вирицид, эраконд, сгимаден, ветом-1.1., ветом-3, ветом-4 - в качестве противовирусных (ВЬУ) средств) наибольшим иммуностимулирующим эффектом обладал альнорин, вводимый в организм инфицированных ВЬУ животных в моно-варианте. Только при применении альнорина был зарегистрирован «феномен выпадения» РИД у инфицированных ВЬУ животных, однако положительная биопроба на лейкозную инфекцию указывала на сохранившуюся персистенцию ВЬУ.

8. Выявленные нами изменения титра противовирусных (к ВЬУ) антител у серопозитивных животных, в сторону повышения или снижения, могут служить маркером прогнозирования течения эпизоотического процесса лейкоза крупного рогатого скота. Повышение, как правило, выражает обострение инфекции ВЬУ.

9. Выбор оптимального варианта оздоровления зависит как от уровня инфицированности стада вирусом лейкоза, так и от технологии ведения животноводства и экономических возможностей сельхозпредприятий. Даже при инфицированности более 70% можно использовать вариант разделения стада на серонегативную и серопозитивную группы с последующей постепенной заменой серопозитивного поголовья. На завершающей стадии оздоровления экономически обоснованным является разовая выбраковка оставшегося на передержке серопозитивного поголовья с последующим ежеквартальным серологическим контролем за животными до получения 2-х отрицательных результатов по стаду.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Правила по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота. Утв. 23.06.1999 г. ДВ МСХиП РФ

2. Методические рекомендации «Определение уровня циркулирующих иммунных комплексов у крупного рогатого скота и его прогностическая значимость в динамике инфекционно-воспалительных процессов». Рассмотрены и рекомендованы к изданию Ученым советом ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол №7 от 13.11.97 г.) и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол №7 от 17.11.97 г.).

При проведении комплексных эколого - иммунологических исследований крупного рогатого скота, при оценке функционального состояния иммунной системы, рекомендуется использовать относительный показатель особей в популяции с отклонениями от нормативного уровня концентрации IgG и. ЦИК.

3. Комплексная программа оздоровления и профилактики лейкоза крупного рогатого скота в Новосибирской области на 1999 - 2003 гг. (теоретические и практические аспекты). Рассмотрены и рекомендованы к изданию Ученым советом ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол №7 от 20.11.99 г.) и Администрацией Новосибирской области.

Разработанная и реализованная с высокой эффективностью научно обоснованная система противолейкозных мероприятий позволила в 1995-1999 гг. оздоровить ряд хозяйств Новосибирской и Омской областей.

СПИСОК РАБОТ, ОТРАЖАЮЩИХ ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Храмцов В.В., Агаркова Т.А. Эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота в некоторых областях Сибири // Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири.- Новосибирск, 1995,- С. 57-61.

2. Агаркова Т.А. Характеристика отдельных стад по титрам антител к gp 51 BJIKPC, ее эпизоотическая значимость и интерпретация // Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири.- Новосибирск, 1995.- С. 155- 157.

3. Павлова А.И., Агаркова Т.А., Попова Н.В., Федорова П.Н., Ерова Л.М. Сравнительное изучение биохимического состава молока инфицированных ВЛКРС животных // Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири.- Новосибирск, 1995.- С. 206 - 210.

4. Ерова Л.М., Агаркова Т.А. Изменение частоты парааллершческих реакций у крупного рогатого скота на туберкулин в процессе оздоровления стад от лейкоза // Материалы конф. молод, ученых СО РАСХН,- Новосибирск, 1996,- С.34-35.

5. Агаркова Т.А. Поглотительная способность нейтрофилов у крупного рогатого скота и ее значение в оценке резистентности животных // Тез. докл. I науч. конф. Новосибирского отделения Паразитологического общества РАН «Паразиты и паразитарные болезни в Западной Сибири» (Новосибирск, 1996).-Новосибирск, 1996,- С. 105 - 106.

6. Дыдаева Л.Г., Павлова А.И., Смирнов П.Н., Агаркова Т.А., Каратаева Т.Д., Игнатьева М.С. Изменение гематологического статуса у крупного рогатого скота в зависимости от породной принадлежности // Тез. докл. I науч. конф. Новосибирского отделения Паразитологического общества РАН «Паразиты и паразитарные болезни в Западной Сибири» (Новосибирск, 1996).-Новосибирск, 1996,- С. 40 - 41.

7. Логинов С.И., Смирнов П.Н., Агаркова Т.А., Трунов А.Н., Павлова А.И., Апалышн В.А. Результаты тестирования гуморального звена иммунной

системы КРС на разных территориях Сибири // Вест. Российской академии с.-х. наук,- 1997,- № 1,- С. 75 - 77.

8. Смирнов П.Н., Логинов С.И., Агаркова Т.А., Павлова А.И., Дыдаева Л.Г., Попова Н.В., Федорова П.Н. Эколого - иммунологическое исследование крупного рогатого скота в Якутии И Вест. Российской академии с.-х. наук,-

1997,-№6.-С. 68-71.

9. Храмцов В.В., Мерман В.Г., Логинов С.И., Агаркова Т.А. Распространение лейкоза крупного рогатого скота в Кемеровской области (на модели племенных хозяйств) // Тез. докл. II науч. конф. Новосибирского отделения паразитологического общества РАН «Паразиты и вызываемые ими болезни в Сибири» (Новосибирск, 1997).- Новосибирск, 1997.- С. 136 -137.

Ю.Логинов С.И., Агаркова Т.А., Павлова А.И., Апалькин В.А. Циркулирующие иммунные комплексы - интегральный тест оценки • ксенобиотической нагрузки на организм животных // Тез. докл. 1-й научно -практической конференции факультета ветеринарной медицины НГАУ «Актуальные вопросы ветеринарии» (Новосибирск, 1997).- Новосибирск, 1997,-С. 94 - 96.

11.Агаркова Т.А. Сранительная характеристика действия некоторых отечественных иммуномодуляторов на иммунную систему // Тез. докл. участников конф. научной молодежи «Молодые ученые в решении проблем Сибирской аграрной науки» (30 мая 1997 г., Краснообск).- Новосибирск, 1997,-С. 48 - 49.

12.Агаркова Т.А., Железняк В.И. Динамика показателей инфицированности дойного стада АО «Омский бекон» вирусом лейкоза в процессе реализации программы оздоровления // Тез. докл. научной конференции, посвященной 50-летию Алтайской НИВС «Ассоциативные инфекции сельскохозяйственных животных и новые подходы к их ликвидации и профилактике» (30-31 июля 1997 г., г. Барнаул).- Барнаул, 1997,- С. 55 - 56.

13. Агаркова Т.А. Методологический аспект оздоровления сельхозпредприятий от лейкоза крупного рогатого скота И Тез. докл. науч.-прак. конф., посвященной 65-летию Иркутской НИВС «Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных» (Иркутск, 1997).- Иркутск, 1997,- С. 67 - 68.

14.Смирнов П.Н., Логинов С.И., Агаркова Т.А., Павлова А.И., Дыдаева Л.Г., Дмитриев Г.Г. Зависимость функционального состояния гуморального иммунитета и активности фагоцитарной системы крупного рогатого скота Вилюйской группы районов Якутии // Материалы межрегиональной науч,-практ. конф. «Опыт и проблемы обеспечения продовольственной безопасности государства» (28 - 30 мая 1998 г.).- Екатеринбург, 1998,- С. 172 - 174.

15.Агаркова Т.А. Сравнительное изучение показателей олсонофагоцитарной реакции у коров в зависимости от сезона года и лейкозной инфекции // Материалы конф. научной молодежи СО Россельхозакадемии «Вклад молодых ученых в развитие сибирской аграрной науки» (23 апреля

1998, г. Краснообск).- Новосибирск, 1998,- С. 125 - 127.

16.Агаркова Т.А. Сравнительное изучение фагоцитоза у коров в зависимости от линейной принадлежности // Тез. докл. 2-й научно -

практической конференции факультета ветеринарной медицины НГАУ «Актуальные вопросы ветеринарии» (Новосибирск, 1999).- Новосибирск, 1999.-С. 78 - 79.

Подписано к печати 13.04.2000 г. Формат 60x84/16. Объем 1,5 печ.л. Тираж 70 экз. Заказ № 90.

Отпечатано в типографии "Ревик - К" 630500, Новосибирская область, п. Краснообск

Актуальность проблемы. Прогрессирующее ухудшение экологического состояния территорий Сибири накладывает негативный отпечаток как на здоровье людей, так и на сельскохозяйственных животных (P.M. Хаитов и соавт., 1995; И.М. Донник, 1997; А.И. Павлова, 1998; В.П. Урбан, 1999; A.M. Смирнов, 1999; др.). В популяциях животных, кроме того, имеет место существенное влияние биотических факторов, в частности вакцинной природы, в особенности в эпизоотически неблагополучных стадах. Негативное (иммунодепрессивное) воздействие на организм оказывают и многочисленные химиопрепараты, используемые в качестве противопаразитарных средств.

С учетом изложенного в настоящее время вполне обоснованно возникла необходимость определения и сравнительной оценки иммуноморфологического статуса животных, в частности крупного рогатого скота, районированного в разных климатогеографичеких условиях и разной генеалогической принадлежности. Последнее позволит более эффективно осуществлять мониторинг за состоянием здоровья животных, вести целенаправленный отбор особей для племенных целей, эффективно обеспечивать эпизоотическое благополучие популяций по той или иной нозологии. При этом существенным дополнением должны служить наиболее полные знания об особенностях эпизоотического процесса конкретно рассматриваемых инфекций. И на этой основе разработка научно обоснованной системы профилактики и оздоровления стад от инфекций.

В нашей работе в качестве модельной хронической инфекции сельскохозяйственных животных был взят лейкоз крупного рогатого скота отдельных территорий Сибири.

Цель работы.

Дать комплексную оценку иммунной системе крупного рогатого скота, на популяционном уровне, в зависимости от экологических особенностей территорий и оздоровления стад от лейкоза

Задачи исследований:

1. Провести генеалогический анализ популяций крупного рогатого скота и дать оценку по показателям фагоцитоза.

2. Дать сравнительную адаптационную оценку крупному рогатому скоту разных популяций по показателям клеточного и гуморального звеньев иммунной системы .

3. Провести изучение эпизоотического состояния популяций крупного рогатого скота изучаемых территорий.

4. Довести, в процессе реализации, до оптимального варианта научно обоснованную систему оздоровления стад крупного рогатого скота от лейкоза.

5. Провести изыскание иммунотропного препарата, прежде всего, отечественного производства, способный прямо или опосредованно нейтрализовать ВЛКРС в организме - вирусоносителе.

Научная новизна

Установлено, что повсеместная голштинизация молочных стад с целью повышения продуктивности сибирского скота в значительной мере способствовала расшатыванию устойчивости местного скота к болезням. По показателям естественной резистентности преимущество имели место только коровы линии Силлинг Трайджун Рокит. Достоверно более низкой фагоцитарной активностью обладали коровы линии Уес Идеал.

Показано, что крупный рогатый скот, районированный в Якутии, характеризуется достоверно более высокими показателями фагоцитоза (83,3%), в сравнении с животными Западной Сибири (56,1%).

Установлено, что число особей с отклонениями от нормативного уровня концентрации и циркулирующих иммунных комплексов в крови превалировало в популяциях крупного рогатого скота экологически неблагополучных территорий.

Впервые изучена динамика показателей титра противовирусных антител у инфицированных ВЬУ животных, позволяющая прогнозировать течение эпизоотического процесса лейкоза крупного рогатого скота.

Практическое значение работы.

Ряд положений диссертации использован при разработке проекта Правил по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота (М., 1999).

Разработана панель наиболее информативных тестов для оценки иммунологической активности и естественной резистентности крупного рогатого скота с привязкой к адаптационным возможностям животных в разных экологических условиях.

Изучен морфологический статус периферической крови крупного рогатого скота, районированного в Якутии и Западной Сибири. Материалы могут быть использованы в диагностической работе специалистами ветеринарных лабораторий, а также в селекционно - племенной работе.

Показатели концентрации циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) сыворотки крови крупного рогатого скота могут служить интегральным тестом определения техногенной нагрузки на иммунокомпетентную систему животных в конкретных экологических условиях.

Основные положения, выносимые на защиту:

• результаты изучения показателей естественной резистентности крупного рогатого скота разных территорий Западной Сибири;

• результаты определения концентрации циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови крупного рогатого скота экологически неблагополучных территорий;

• результаты изучения эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в некоторых областях Сибири;

• результаты сравнительного изучения влияния отечественных иммуномодуляторов на инфекционный процесс лейкоза крупного рогатого скота;

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научно - практической конференции «Профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями молодняка крупного рогатого скота и свиней» (Новосибирск, 1996); II научной конференции Новосибирского отделения Паразитологического общества РАН «Паразиты и вызываемые ими болезни в Сибири» (Новосибирск, 1997); 1-й научно-практической конференции факультета ветеринарной медицины НГАУ «Актуальные вопросы ветеринарии» (Новосибирск, 1997); конференции научной молодежи «Молодые ученые в решении проблем Сибирской аграрной науки» (Новосибирск, 1997); научной конференции, посвященной 50-летию Алтайской НИВС «Ассоциативные инфекции сельскохозяйственных животных и новые подходы к их ликвидации и профилактике» (Барнаул, 1997); научно-практической конференции, посвященной 65-летаю Иркутской НИВС «Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных» (Иркутск, 1997); конференции научной молодежи СО Россельхозакадемии «Вклад молодых ученых в развитие Сибирской аграрной науки» (Новосибирск, 1998); межрегиональной научно-практической конференции «Опыт и проблемы обеспечения продовольственной безопасности государства» (Екатеринбург, 1998); 2-й научно - практической конференции факультета ветеринарной медицины НГАУ «Актуальные вопросы ветеринарии» (Новосибирск, 1999).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 научных работ в научных журналах, сборниках научных трудов ИЭВСиДВ, НГАУ, Алтайской НИВС, Иркутской НИВС; в коллективных монографиях «Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири», «Научно обоснованная система оздоровления и профилактики лейкоза крупного рогатого скота в Курганской 8 области» и «Комплексная программа оздоровления и профилактики лейкоза крупного рогатого скота в Новосибирской области на 1999 - 2003 гг. (теоретические и практические аспекты)».

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 165 страницах и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, библиографию и приложение. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 15 рисунками. Библиографический указатель включает 214 источников, в том числе 53 зарубежных.

ВЫВОДЫ

1. По показателям естественной резистентности преимущество имели коровы линии Силлинг Трайджун Рокит (ФА-57,3%; ФИ-5,4 м.т./нейтр.; ФЧ-9,0 м.т./нейтр). На второе место, в ряду 4-х сравниваемых линий, можно отнести коров линии Монтвик Чифтейн. Сравнительно низкой фагоцитарной активностью обладали коровы линии Уес Идеал (ФА-48,4%; ФИ-3,2 м.т./нейтр., ФЧ-5,8 м.т./нейтр).

2. Наиболее высокие показатели поглотительной активности микрофагов выявлены в весенний период у коров, инфицированных вирусом лейкоза (ВЬУ). В осеннее время показатели ОФР у инфицированных вирусом лейкоза коров (ФА-54%, ФИ-3,1 м.т./нейтр.) также превосходили таковые интактных, в отношении ВЖРС, животных (ФА- 37,4%; ФИ- 2,1 м.т./нейтр), при относительно равном показателе фагоцитарного числа (5,6 м.т./нейтр. и 5,7 м.т./нейтр. - соответственно).

3. Новорожденные телята характеризуются относительно высокими показателями фагоцитоза (до 93,5 %), при ФИ, равном 41,3 м.т./нейтр. и ФЧ -44,0 м.т./аьсг.нейтр. При этом бактерицидность сыворотки крови также была более высокой в сравнении с животными других возрастных групп - 59,4 % (Р < 0,001). С увеличением возраста показатели ОФР у животных снижаются и только у взрослых коров они достигают уровня 6-ти месячных телят. Последнее мы связываем со значительной иммунологической нагрузкой (вакцинации, противопаразитарные обработки) на организм телят этого возраста.

4. Крупный рогатый скот, адаптированный к условиям Якутии, характеризуется достоверно более высокими показателями фагоцитоза (ФА в 1,4 раза, ФИ - в 2,6 раза, ФЧ - в 1,9 раза), в сравнении с животными ЗападноСибирского региона.

5. Установлен ингибирующий продукцию сывороточных белков эффект вируса лейкоза (ВЛКРС). Разница в концентрации 1^02 между инфицированными ВЛКРС и свободными от инфекции животными, соответственно - 2,68 г/л у инфицированных и 6,4 г/л - интактных, разница достоверна (Р<0,01).

6. Число особей с отклонениями от нормативного уровня концентрации и ЦИК превалировало в популяциях крупного рогатого скота экологически неблагополучных территорий. При этом признаки стимуляции гуморального звена иммунной системы характеризуют начальную стадию нарушения функции ИКС, развивающегося под влиянием негативных экологичесских факторов. В последующем появление в таких популяциях представительного числа животных с иммунологической недостаточностью свидетельствует о более глубоких изменениях, происходящих в иммунной системе при длительной экологической нагрузке.

7. Из изученных нами иммуномодуляторов (альнорин, вестин, субалин, вирицид, эраконд, стимаден, ветом-1.1., ветом-3, ветом-4 - в качестве противовирусных (ВЬУ) средств) наибольшим иммуностимулирующим эффектом обладал альнорин, вводимый в организм инфицированных ВЬУ животных в моно-варианте. Только при применении альнорина был зарегистрирован «феномен выпадения» РИД у инфицированных ВЬУ животных, однако положительная биопроба на лейкозную инфекцию указывала на сохранившуюся персистенцию ВЬУ.

8. Выявленные нами изменения титра противовирусных (к ВЬУ) антител у серопозитивных животных, в сторону повышения или снижения, могут служить маркером прогнозирования течения эпизоотического процесса лейкоза крупного рогатого скота. Повышение, как правило, выражает обострение инфекции ВЬУ.

9. Выбор оптимального варианта оздоровления зависит как от уровня инфицированности стада вирусом лейкоза, так и от технологии ведения животноводства и экономических возможностей сельхозпредприятий. Даже при инфицированности более 70% можно использовать вариант разделения стада на серонегативную и серопозитивную группы с последующей постепенной заменой серопозитивного поголовья. На завершающей стадии

123 оздоровления экономически обоснованным является разовая выбраковка оставшегося на передержке серопозитивного поголовья с последующим ежеквартальным серологическим контролем за животными до получения 2-х отрицательных результатов по стаду.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Правила по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота. Утв. 23.06.1999 г. ДВ МСХиП РФ

2. Методические рекомендации «Определение уровня циркулирующих иммунных комплексов у крупного рогатого скота и его прогностическая значимость в динамике инфекционно-воспалительных процессов». Рассмотрены и рекомендованы к изданию Ученым советом ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол №7 от 13.11.97 г.) и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол №7 от 17.11.97 г.).

При проведении комплексных эколого - иммунологических исследований крупного рогатого скота, при оценке функционального состояния иммунной системы, рекомендуется использовать относительный показатель особей в популяции с отклонениями от нормативного уровня концентрации ^О и ЦИК.

3. Комплексная программа оздоровления и профилактики лейкоза крупного рогатого скота в Новосибирской области на 1999 - 2003 гг. (теоретические и практические аспекты). Рассмотрены и рекомендованы к изданию Ученым советом ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол №7 от 20.11.99 г.) и Администрацией Новосибирской области.

Разработанная и реализованная с высокой эффективностью научно обоснованная система противолейкозных мероприятий позволила в 1995-1999 гг. оздоровить ряд хозяйств Новосибирской и Омской областей.

1.7. ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ

На сегодняшний день, прежде чем осуществлять задачу по оздоровлению стад крупного рогатого скота от лейкоза, необходимо иметь наиболее объективное представление об особенностях эпизоотической ситуации хозяйств Новосибирской области по лейкозу в разрезе отдельных климато-географических зон. Кроме того, для разработки наиболее рационального варианта поэтапного оздоровления племенных хозяйств новосибирской области обоснованного, в первую очередь, экономической целесообразностью, были необходимы знания селекционно-генетических характеристик племенного генофонда области, в особенности по устойчивости (восприимчивости) к ВЛКРС-инфекции и лейкозу.

Основные методы профилактики и оздоровления стад от лейкоза крупного рогатого скота приведены в публикациях ряда отечественных и зарубежных исследователей (В.П. Шишков, Л.Г. Бурба, 1977; В.А. Крикун, В.Т. Кумков, Л.И. Нагаева, 1979; А.Ф. Валихов, В.П. Шишков, Л.Г. Бурба, 1980; В.М. Лемеш, H.A. Ковалев, В.И. Корягин, Н.Д. Шустерман, 1983; В.М. Нахмансон, Е.А. Дун, 1986).

Государственные пограммы борьбы с лейкозом крупного рогатого скта действуют в ФРГ, Бельгии, Нидерландах, Финляндии (Ohshima К., Okada К., Numakunai S., 1980; Pittler Н., Lorenz R.J., 1988). Во всех этих странах, в том числе и в Дании, полностью или частично используют в качестве диагностического теста реакцию иммунодиффузии с гликопротеидным антигеном BJIKPC.

Программы борьбы с лейкозом и онковирусной инфекцией, применяемые в ряде европейских стран, включают следующие основные меры:

1. Поголовный убой стад при установлении у животных клинико-гематологических проявлений лейкоза и антител к BJIKPC.

2. Разделение инфицированного ВЛКРС стада на группы положительные и отрицательные в РИД.

3. Постепенная замена положительно реагирующих коров животными, свободыми от ВЛКРС.

В нашей стране борьба с лейкозом крупного рогатого скота осуществляется согласно ветеринарному Законодательству. В 1965 году ГУВ МСХ СССР впервые утвердила временную инструкцию о мероприятиях по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота. В 1969, 1973, 1984, 1989, 1999 годах, с учетом накопленных знаний по этиологии, эпизоотологии и генетике лейкоза, в инструкции вносились ряд изменений, дополнений.

Из представленных выше литературных данных видно, какую значительную роль в иммунитете играет естественная резистентность организма. Снижение активности неспецифических гуморальных и клеточных факторов естественой резистентности многие авторы рассматривают как одну из причин повышения частоты опухолевых заболеваний и, в частности, лейкозов.

Проведение эколого-иммунологических исследований заслуживает особого внимания ученых и практиков с позиции оценки изменений иммунитета под влиянием различных антропогенных факторов, что особенно актуально в последнее время в связи с общим ухудшением среды обитания и развитием вредных производств. Можно предположить, что иммунная система организма, более всего подверженная влиянию экологических факторов (P.M.

Хаитов и др., 1995), способна адекватно отвечать на их воздействие изменением уровня иммунных комплексов в крови животных и человека.

Начиная с открытия вируса лейкоза крупного рогатого скота (G. Miller, 1969), был начат активный поиск противовирусных препаратов, обладающих интерфероногенным эффектом и усиливающим активность иммунной системы у инфицированных BJIKPC животных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Диссертационная работа выполнялась в течение 1995 - 2000 гг. в лаборатории ветеринарной онкологии и экологии Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН при непосредственном руководстве профессора П.Н. Смирнова.

Для реализации поставленных задач было подобрано несколько модельных хозяйств с разным эпизоотическим состоянием по лейкозу. Объектом исследования являлся крупный рогатый скот. Предмет исследований составляли пробы крови, сыворотки крови животных разных половозрастных групп, из разных экологических зон Сибири.

Для изучения эпизоотической ситуации по лейкозу в отдельных хозяйствах были использованы результаты серологических и гематологических исследований, проведенных лично соискателем, а также сотрудниками отдела лейкозов ИЭВСиДВ. При этом, выражаю всем им глубокую признательность за помощь в проведении исследований и сборе материала.

Изучение эпизоотической ситуации, а также разработка и реализация программы оздоровительно - профилактических мероприятий по лейкозу выполнялись при непосредственном методическом и практическом участии соискателя при экспедиционных выездах.

Общие данные о количестве исследованных животных

Проведено исследование 5 100 голов крупного рогатого скота:

1. Группа взрослых клинически здоровых животных - 50 голов;

2. Животные разных половозрастных групп - 50 голов;

3. Животные модельных хозяйств из разных экологических зон - 5 ООО гол.

Предметом исследований являлась сыворотка крови животных. Для этого осуществляли забор крови из яремной вены животных в пробирки (бактериологические или Флоринского), выдерживали в теплом месте (не выше 40С) 2-3 ч. Для лучшего отделения сыворотки образовавшийся сгусток обводили в пробирке профломбированной проволокой (спицей). После этого пробирки переносили в холодильник при 4С и отстаивали 10-12 ч. Отстоявшиеся пробы сыворотки сливали в пробирки Флоринского и маркировали. Подготовленные пробы хранили при температуре -18С.

Концентрацию белковых фракций в сыворотке крови исследуемых животных определяли методом электрофореза в геле агарозы марки В, описанным В.М. Чекишевым (1977).

Содержание сывороточного белка в сыворотке крови определяли рефрактометрически.

Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови животных определяли методом осаждения в полиэтиленгликоле молекулярной массой 6000 (ПЭГ - преципитация) (М. М^еоп, 1977) с некоторыми модификациями. Для приготовления 3 и 4 % растворов ПЭГ 6000 использовали 0.001 М боратный буфер. Для постановки реакции использовали плоскодонные 96 - луночные планшеты для иммунологических реакций.

Исследование периферической крови включало подсчет содержания лейкоцитов в 1 мкл - микроскопией в камере Горяева, а лимфоцитов - методом фазово - контрастного микроскопирования, описанным П.Н. Смирновым и соавт. (1989).

Инфекцию ВЛКРС у животных диагностировали в тест - системе (РИД) в агаровом геле с антигеном ВЛКРС по методике, утвержденной ГУВ МСХ СССР 30 ноября 1989 года.

Естественную резистентность животных оценивали по методике, описанной П.Н. Смирновым и соавт. (1989), включающей панель наиболее информативных диагностических тестов:

- оценку уровня фагоцитарной активности нейтрофилов;

- определение напряженности бактерицидной активности сыворотки крови;

- оценку уровня лизоцимной активности сыворотки крови;

При постановке опсоно - фагоцитарной реакции (ОФР) использовали тест - культуру белого стафилококка (Staphilococcus albus). Рассчитывали активность фагоцитоза (ФА), индекс фагоцитоза (ФИ), фагоцитарное число (ФЧ).

Напряженность бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови определяли нефелометрически, используя в качестве тест - микроба в первом случае - культуру Е. Coli и во втором - микрококка (Micrococcus lyzodeiticus).

Статистическая обработка данных включала подсчет средних (М), стандартных ошибок (т), стандартных отклонений (8), достоверности, коэффициента вариации. В таблицах информация представлена в виде М±т, в некоторых случаях М±5.

Анализ эпизоотической ситуации по инфекции ВЛКРС и лейкозу крупного рогатого скота проводили по методике С.И. Джупина и В.А. Ведерникова (1981).

Для более объективного изучения функциональной активности иммунной системы животных необходимо определиться с понятием «нормы» для отдельных ее показателей.

В обзоре литературы мы отмечали большую вариабельность количественных показателей иммунной системы, изменяющей свой облик под воздействием непрерывно поступающих в организм антигенов. В некоторых случаях разброс индивидуальных показателей настолько велик, что включает в себя практически все значения измененных показателей, полученных при изучении патологических состояний (И.И. Бенедиктов, C.B. Ольховикова, 1986; P.M. Хаитов и соавт., 1995; П.Н. Смирнов и соавт., 1997).

Многие исследователи придерживаются мнения о том, что понятие нормы должно быть строго индивидуальным, поскольку кроме громадного разброса значений от индивидуума к индивидууму, нельзя не принимать во внимание многообразие взаимосвязей между отдельными звеньями систем организма. Недостаточно эффективно использовать в качестве «норм» грубых среднестатистических значений отдельных параметров в популяции.

Процессы индивидуального развития организма неразрывно связаны с формированием иммунной системы, и многие заболевания, характерные для определенного возраста, могут находиться под ее контролем.

Рассматривая у крупного рогатого скота возрастную динамику основного показателя активности гуморального звена иммунной системы -концентрацию иммуноглобулинов, можно с уверенностью сказать, что у теленка значимое количество иммуноглобулинов обнаруживается в циркуляции только после получения их из молозива матери, причем период переноса иммуноглобулинов из молозива ограничен первыми 24 часами жизни (В.М. Чекишев, 1983). Уровень иммуноглобулинов в фетальной сыворотке крови крупного рогатого скота представлен лишь следовыми количествами, сто связано с наличием у коров плаценты эпителиохориального типа, препятствующей переносу белков от матери к плоду. Таким образом, у крупного рогатого скота передача пассивного иммунитета происходит в послеродовой период, в отличие от человека, для которого характерен предродовой период передачи материнских антител (П.А. Емельяненко, 1987).

В дальнейшем, по мере созревания лимфоидной системы, происходит аутосинтез антител. Решающую роль в развитии этого процесса играет антигенный стимул окружающей среды. При недостаточности такового лимфоидная система животного недоразвита, что проявляется в малом количестве плазматических клеток в органах иммунокомпетентной системы (селезенка, костный мозг, лимфатические узлы) и пониженном синтезе иммуноглобулинов. При этом уровень пассивно приобретенных из молозива иммуноглобулинов быстро падает (В.М. Чекишев, 1983).

Существенное ухудшение экологической ситуации во многих регионах мира, в том числе и в России, явилось предпосылкой развития новой научной дисциплины - экологической иммунологии в медицине и ветеринарии.

Иммунная система, выполняющая основную роль в поддержании физиологического и структурного гомеостаза организма, в первую очередь подвержена воздействию неблагоприятных экологических факторов. При этом нарушения иммунитета проявляются, прежде всего, развитием иммунодефицитных состояний в клеточном и/или гуморальном звеньях ИКС, чаще всего вторичной природы, возникающих под воздействием физических, химических, биологических и других факторов.

Основу экологической иммунологии составляет оценка иммунного статуса человека и животных на фоне действия неблагоприятных факторов внешней среды, позволяющая проводить донозологическую диагностику заболеваний (до появления клинических признаков), связанных с нарушениями иммунокомпетентной системы и проявляющихся в виде иммунопатологических синдромов (инфекционный, аллергический и другие) (P.M. Хаитов и соавт., 1995).

2.2. ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ГО "ПЕРВОМАЙСКИЙ" НОВОСИБИРСКОЙ ОБЛАСТИ С РАЗНОЙ СТЕПЕНЬЮ КОМПРОМЕТАЦИИ В ОТНОШЕНИИ ЛЕЙКОЗА

Активная голштинизация крупного рогатого скота, проводимая в

Сибири в последние 15-20 лет, с целью повышения продуктивных качеств у помесей, одновременно вызвала и определенные негативные последствия, в части ветеринарных проблем. Так, по данным А.Г.Незавитина (1997), помеси голштинского скота с долей кровности остфризов (до 50%) менее устойчивы к лейкозу и ВЛКРС-инфекции. С повышением доли кровности голштинов до 50% и более помеси реже инфицируются вирусом лейкоза (Смирнов П.Н., 1997).

Исследования проводили в ПЗ «Первомайский» Новосибирской области, который является базовым хозяйством по созданию нового типа голштинизированного черно-пестрого скота. Стадо коров племзавода имеет неоднородную генетическую структуру. Оно представлено особями, происходящими от животных различного экогенеза, а также чистопородными черно-пестрыми коровами и голштинскими помесями. В конце 70-х годов был начат ввоз в племзавод импортного черно-пестрого скота из Голландии, Дании и Германии (Б.Л.Панов, В.Л.Петухов и соавт., 1997).

В ПЗ «Первомайский» используются быки-производители четырех основных голштинских линий: У ее Идеал, Силлинг Трайджун Рокит, Рефлекшн Соверинг, Монтвик Чифтейн.

Одновременно перед нами стояла задача сравнительного изучения естественной резистентности крупного рогатого скота разной линейной принадлежности.

Отечественный и зарубежный опыты свидетельствуют о том, что в искоренении болезней исключительное значение имеют методы направленной селекции скота (Б.Л. Панов, В.Л. Петухов и др., 1998).

Племенные хозяйства, в большинстве своем, представляют собой генетические изоляторы, где животных разводят, главным образом, «в себе» и поскольку такие хозяйства оказывают значительное влияние на породу в целом, скомпрометированных по лейкозу животных следует выбраковывать в два этапа (В.В. Федоров, И.Г. Беспалько, 1972; В.М. Нахмансон, В.М. Беляров, Н.И. Петров, 1981). На первом этапе методом клинико-гематологических и генеалогических исследований выявляют взрослых больных животных и их потомков. Первых сдают на убой, а их потомство в молодом возрасте переводят в группы откорма. Взрослых продуктивных животных - потомков больных, при условии их фенотипического благополучия по лейкозу, временно допускают к использованию, но только в производственных целях (для производства молока и мяса). На втором, более длительном, этапе осуществляют ветеринарно -зоотехнический контроль за проведением селекционно-племенной работы по выведению лейкозоустойчивых групп животных с постепенной заменой скомпрометированной к лейкозу части стада отселекционированными по этому признаку животными (Г.Ф. Коромыслов, И.М. Климов и др., 1979).

2.2.1. РЕТРОСПЕКТИВНЫЙ АНАЛИЗ ДИНАМИКИ ЛЕЙКОЗНОГО ПРОЦЕССА

Наиболее объективные данные о динамике гемобластозов крупного рогатого скота в Новосибирской области, в частности по Татарскому району, отражены А.Г. Незавитиным (1990). При комиссионном обследовании поголовья ПЗ «Первомайский» совместно с учеными СибНИВИ, Новосибирской НИВС, ВИЭВ, 19 июня 1967 г. был впервые проведен диагностический убой коровы (инв.№1492). При этом выявили изменения, характерные для лейкоза: увеличение лимфатических узлов (коленной складки, предлопаточных, глубоких паховых). Стенка сычуга была утолщена, скелетная мускулатура бледного цвета с инфильтратами. Кроме того, был обнаружен односторонний экзофтальм. На основании перечисленных признаков комиссия поставила диагноз - лейкоз (лимфосаркоматоз).

Более подробный ретроспективный анализ эпизоотической ситуации по данному хозяйству показал, что первый случай выделения больной лейкозом коровы с клиническими признаками заболевания был зарегистрирован в 1964 году (корова № 4338, возраст 6 лет). В последующие 2 года выявлено еще 7 случаев заболевания коров лейкозом, причем диагноз подтверждался как патологоанатомически, так и гистологически. Итак, комиссионно было сделано заключение о том, что лейкоз крупного рогатого скота в ПЗ «Первомайский» имеет стационарный характер (А.Г. Незавитин, 1990). еОССИИСЯА» toc*.^ ■'Ab.

Чрезвычайно ценными для практики оказались эпизоотологические данные (в отношении BJIKPC - инфекции) по импортному стаду в ПЗ «Первомайский» Новосибирской области.

В октябре 1984 года в племзавод было завезено из ФРГ 150 нетелей голштино-фризской породы. При исследовании животных в РИД, с целью исключения у них ВЛКРС - инфекции, проведенном сотрудниками ИЭВСиДВ СО ВАСХНИЛ, был получен отрицательный результат.

По условиям карантина животные содержались на изолированной ферме в течение года. Осенью 1985 года на эту же ферму, на свободные скотомеета, было переведено две группы нетелей (60 голов), среди которых, как оказалось позднее, было 36 инфицированных ВЛКРС животных. Через 6 месяцев среди импортных животных было выделено 4 серопозитивных (к ВЛКРС) коровы. Через год (январь 1987 г.) из импортного поголовья выявлено еще 16 инфицированных вирусом лейкоза животных. В последующем был отмечен прогрессирующий рост числа положительно реагирующего в РИД животных. В августе 1989 года зарегистрировали 90.5% животных, зараженных ВЛКРС.

В работах многих исследователей доказана генетическая обусловленность устойчивости - восприимчивости крупного рогатого скота к лейкозу (Ф. Хатт, 1963; П.В. Филатов, Е.А. Дун, Л.А. Князева, 1970; Л.К. Эрнст, A.A. Цалитис, 1970; A.M. Лактионов, В.М. Нахмансон, 1972; Э.Я. Яунслейнис, P.O. Гринберг, 1973; Д.В. Карликов, 1980, 1984; С.М. Федорова, 1982; С.М. Федорова, Т.М. Виль, Т.П. Сторожилова, 1982;). Острота проблемы в настоящее время не уменьшилась. Более того, с расширением межхозяйственных связей в масштабе районов, областей, краев, республик и страны в целом, наиболее остро встает задача обеспечения стойкого благополучия ввозимого племенного поголовья по лейкозу и онковирусной инфекции.

В своей работе А.Г. Незавитин (1990) привел данные о частоте инфицированности и заболеваемости лейкозом помесей с разной долей кровности голштинов. В ПЗ «Первомайский» среди голландского, датского и западногерманского скота были животные разной кровности по голштинской породе, а также частоте зараженности вирусом лейкоза и заболеваемости лейкозом животных разных линий.

Мы же приводим материалы проведенного исследования животных по естественной резистентности с учетом линейной принадлежности и кровности по голштинам.

2.2.2. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ФАГОЦИТОЗА У КОРОВ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ИХ ЛИНЕЙНОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ

Целью данной работы служило сравнительное изучение резистентности коров племзавода «Первомайский» Новосибирской области в зависимости от их генетического происхождения. В племзаводе популяция дойного стада представлена потомками линий: Уес Идеал, Монтвик Чифтейн, Рефлекшн Соверинг и Силлинг Трайджун Рокит, которых мы выбрали в качестве объекта исследований.

В каждую группу было подобрано по 6 коров примерно одного возраста и одинаковой продуктивности.

В качестве тест-системы использовали опсоно-фагоцитарную реакцию (ОФР), поставленную по методике П.Н.Смирнова и соавт. (1988).