Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.01) на тему:Оценка кроветворной функции красного костного мозга у цыплят раннего постнатального периода онтогенеза в условиях нормального и измененного эритропоэза

На правах рукописи

Кондратьев Роман Борисович

Оценка кроветворной функции красного костного мозга у цыплят раннего постнатального периода онтогенеза в условиях нормального и измененного эритропоэза

16 00 01 - диагностика болезней и терапия животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Екатеринбург, 2007

003060Б2Э

003060629

Диссертация выполнена на кафедре фшиологии и биохимии животных ФГОУ ВПО «Уральская государственная сельскохозяйственная академия», г Екатеринбург и кафедре фшиологии человека и животных ГОУ ВПО «Уральский государственный университет имени А М Горького», г Екатеринбург

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор Садовников Николай Васильевич

Официальные оппоненты — доктор ветеринарных наук, профессор

Хазимухаметова Идалья Фуатовна - доктор ветеринарных наук, профессор Ибишов Джаланр Фейруз-оглы

Ведущая организация - Институт иммунологии и физиологии Уральского отделения Российской Академии наук (г.Екатеринбург)

Защита диссертации состоится «19» июня 2007г в «15» часов на заседании диссертационного совета Д 220 067 02 при ФГОУ ВПО «Уральская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу 620075, г Екатеринбург, ул Белинского, 112а

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Уральская государственная сельскохозяйственная академия», г Екатеринбург

Автореферат разослан «18» мая 2007г

Ученый секретарь диссертационного совета — Кандаков Н В

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Изучение изменений гетерогенной системы гемоглобина крови цыплят, как в норме, так и при действии на организм экстремальных факторов приобретает в настоящее время особую актуальность в связи с распространением гематотропных влияний на организм, ростом числа гематологических заболеваний у цыплят

В связи с тем, что многие заболевания связаны с изменением кислородного режима в тканях, особое место в обеспечении адаптивных и компенсаторных процессов занимает газотранспортная функция крови

Познание основных закономерностей гетерогенной системы гемоглобина в крови молодняка кур в раннем постнатальном периоде онтогенеза позволяет целенаправленно воздействовать на их рост и развитие, на продуктивные способности

Одна из важнейших функций организма, определяющая характер и уровень энергетических процессов - дыхание или обеспечение его кислородом У более развитых представителей животного мира обеспечение организма кислородом осуществляется при помощи дыхательных пигментов крови В настоящее время известно четыре типа дыхательных пигментов животных гемоглобин, гемоцианин, хлорокруорин, гемерит-рин Наиболее распространенным дыхательным пигментом является гемоглобин [С И Рябов - 1971, А И Воробьев - 1985]

Исследования многих лет характеризуются значительным прогрессом в понимании процессов гетерогенности гемоглобина в крови млекопитающих [JIИ Иржак, Э В Кочмарчик - 1970, Н Ф Старод} б, А Н Грицаак - 1979, JIИ Иржак, Н А Моисеенко -1980] и некоторых видов гггиц [П А Коржуев - 1964, К Hashimoto. F Н Wilt - 1966, Е Reischl, A L Dafre - 1992] на разных стадиях онтогенеза В крови большинства живых организмов можно выявить несколько типов гемоглобина, которые принято называть изоформами, что дает определенные преимущества организму в процессе приспособления к условиям среды [JIИ Иржак - 1975, Н Ф Стародуб, В И Назаренко -1987] Так, у пгиц в крови циркулирует две изоформы гемоглобина [R. Baumami с со-авт - 1984, G Braunitzer, J Godovac - 1982], у крысы - шесть [Н Ф Стародуб, А Н Грицаак - 1979, М Н Сумин - 2002], у взрослого человека - три изоформы гемоглобина [JIИ Иржак - 1975], различающиеся по молекулярной структуре Эти факты легли в основу представлений о гетерогенной системе гемоглобина [Н Ф Стародуб, В И Назаренко - 1987]

В данный период времени о механизмах синтеза гемоглобина, смене его типов в процессе онтогенеза у человека и многих видов животных имеется достаточно сведений [Т Umemura с соавт - 1988] В то время как вопрос о состоянии системы гемоглобина крови птиц, в частности кур в ранние постнатальные периоды онтогенеза в литературе не достаточно освещен, но от этого он не становится менее актуальным

С помощью физико-химических методов исследования ученым удалось установить неоднородность гемоглобина в крови кур [К Hashimoto, F Н Wilt - 1966, R. Baumann с соавт - 1984, G Braumtzer, J Godovac - 1982, Е Reischl, A L Dafre - 1992, J E Knapp с соавт - 1999] В настоящее время известны 3 формы нормального гемоглобина птиц Эмбриональный гемоглобин - характеризуется высокой кислого- и ще-лочеустойч ив остью и малой электрофоретической подвижностью [R Baumann с соавт, - 1984], представляющий основную массу гемоглобина в эмбриональный период и первую неделю жизни после вылупления [К Hashimoto, F Н Wilt - 1966, R Baumann с

соавт - 1984, Е Reischl, A L Dafre - 1992] Гемоглобины А и D - гемоглобины взрослого организма птицы [R- Baumann с соавт -1984, J Е Кпарр с соавт - 1999]

С переходом кроветворения из желточного мешка к печеночному и селезенке в крови появляются взрослые гемоглобины У зародышей проду цирj ется преимущественно эмбриональный гемоглобин, у взрослых кур — гемоглобины А и D, что и послужило основанием для соответствующего их обозначения [К Hashimoto, F Н Wilt -1966, R. Baumann с соавт - 1984, J Е Кпарр с соавт - 1999] В эригроидных элементах печени и костного мозга гемоглобины находятся одновременно [И А Болотников, Ю В Соловьев - 1980, R. Baumann с соавт - 1984, В Рокуэл - 1993, JIВ Кривохижи-на- 1997]

Кпарр J Е и соавторы [J Е Кпарр с соавт - 1999] установили, что гемоглобин D цыпленка является генетически детерминированным эквивалентом гемоглобина А человека

В научной литературе многими авторами описаны изменения гемоглобинового профиля при действии экстремальных факторов и в частности гипоксической гипоксии у человека и некоторых видов животных [Э Ван Лир, К Стикней - 1967, В А Хапугин - 1972, А К Герман, Б П Ли - 1974, М М Миррахимов с соавт - 1978, Н Ф Стародуб, А Н Грицаак - 1979, Н Ф Стародуб, В И, Назаренко - 1987, Б Г Юшков с соавт, -1997, М Н Сумин - 2002] Так, у человека в гипоксических ситуациях происходит возрастание содержания фетального гемоглобина, свойственного плодному периоду развития [М Н Сумин - 2002], а у животных - фракций, эквивалентных этому типу гемоглобина [П А , Коржуев - 1976, М Н Сумин - 2002] У птиц же это явление практически не изучено Однако, свойства отдельных фракций, формирование гемоглобинового профиля в процессе онтогенеза, его изменения в экстремальных условиях, а так же механизмы, регулирующие соотношение между фракциями гемопобина имеют огромное значение в адаптации организма цыплят при стрессовых ситуациях

Роль крови в газотранспортной функции при меняющихся условиях тканевой среды, как при физиологических стрессах, так и в гипоксических условиях имеет большое значение [В П Дударев - 1979, АП Ястребов с соавт - 1988, Н Scholz с соавт, -1990, Б Г Юшков с соавт, - 1997] Что ставит вопрос о физиологическом смысле различий физико-химических свойств изоформ гемоглобина и их месте в адаптации организма цыплят к экстремальным воздействиям Тем более, что с помощью метода мес-сбауэровской спектроскопии, показана зависимость электронной структуры железа и стереохимии активного центра от молекулярной структуры глобина [М И Опгграх -2000]

Вышеизложенное свидетельствует о том, что физиологическое значение гетерогенности гемоглобина, а также роли изоформ в адаптации организма цыплят к стрессовым воздействиям требует специальных, целенаправленных исследований

Цель исследования:

Изучить качественные и количественные изменения красной крови цыплят промышленных кроссов в раннем постнатальном периоде онтогенеза в условиях нормального и измененного эритропоэза

Задачи исследования:

1 Изучить влияние возрастных физиологических и породных особенностей на изменение гемоглобинового профиля и гематологических показателей у цыплят 4-х

линейных гибридов кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза

2 Изучить качественные изменения красной крови у цыплят 4-х линейных гибридов кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни при действии на организм хронической гипоксической гипоксии

3 Определить скорость адаптивных реакций при действии на организм гипоксической гипоксии у цыплят 4-х линейных гибридов кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни

Научная новизна исследования:

1 Впервые установлено у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза наличие гетерогенных форм гемоглобина

2 Впервые изучено и доказано влияние возрастных физиологических и породных особенностей на качественные изменения красной крови у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза

3 Установлено, что при адаптации к гипоксическому воздействию, большую роль играет изменение соотношения между изоформами гемоглобина А и О, а так же качественная перестройка эритропоэза

Теоретическая значимость работы

Результаты нашего исследования расширяют современные представления об участии эритропоэза в адаптации организма к стрессовым воздействиям у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза Перестройка эритропоэза направлена на изменение числа клеток, в большем количестве содержащих адаптивно значимые фракции гемоглобина Полученные данные показывают, что, наряду с изменениями интенсивности эритропоэза, значительную роль в адаптации к стрессовым воздействиям играет и соотношение между фракциями гемоглобина, отличающимися по своим физико-химическим свойствам Их содержание в крови во многом зависит от породных и возрастных физиологических особенностей птиц

Практическая значимость работы

Полученные данные позволяют использовать гемоглобиновый профиль для оценки качественных изменений эритропоэза и адаптации организма при стрессовых состояниях, могут служить основой для разработки методов повышения резистентности организма цыплят к действию стрессовых факторов и новых подходов к обеспечению условий содержания и ухода молодняка в промышленном птицеводстве, в диагностике гематологических заболеваний

Положения, выносимые на защиту

1 Влияние возрастных физиологических и породных особенностей на качественные изменения красной крови у цыплят 4-х линейных гибридов кроссов «Родонит» и «Смена 2» в раннем постнатальном периоде онтогенеза

2 Изменения гемоглобинового профиля и гематологических показателей при действии на организм гипоксической гипоксии у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни обусловлены качественной перестройкой эритропоэза

3 Скорость адаптивных реакций при действии на организм гипоксической гипоксии у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни При действии

на организм гипоксической гипоксии происходит изменение гематологических показателей и гемоглобинового профиля на 4 - 5-е сутки опыта

Апробация работы

Материалы диссертационной работы предоставлены и обсуждены

1 На заседании кафедры физиологии и биохимии УрГСХА (Екатеринбург 2002г)

2 Заседании ученого совета факультета ветеринарной медицины УрГСХА (Екатеринбург 2003г)

3 Студенческой научной конференции по физиологии (Екатеринбург 2005г)

4 I Съезде физиологов стран СНГ (Сочи, Дагомыс 2005г)

5 Научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых-аграрников «Молодежь и наука - 2006» (Екатеринбург 2006г)

6 Международной конференции по патофизиологии животных (Санкт-Петербург 2006г)

7 Всероссийском координационном совещании и научно-практическом семинаре «Ветеринарная профилактика в промышленном птицеводстве» (Екатеринбург 2006г)

8 Научно-практической конференции «Особенности физиологических функций животных в связи с возрастом, составом рациона, продуктивностью, экологией и этологией» (Казань 2006г)

Публикации результатов исследований

По материалам диссертации в трудах, журналах, сборниках и материалах научных конференций опубликовано 6 печатных работ

Внедрение

Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедре физиологии и биохимии животных Уральской государственной сельскохозяйственной академии

Обьем и структура диссертации

Диссертация изложена на 200 страницах текста компьютерного набора Включает следующие разделы введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические рекомендации, список литературы, включающий 346 источников, в том числе 130 на иностранном языке Работа иллюстрирована 25 таблицами, 3 рисунками и

9 гистограммами

II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в 2001 - 2006 гг на кафедре физиологии и биохимии животных Уральской государственной сельскохозяйственной академии, кафедре физиологии человека и животных Уральского государственного университета имени А М Горького, ФГУП ППЗ «Свердловский», ОГУП «Птицефабрика Срсднеуральская»

Объектом исследования служили цыплята 4-х линейных гибридов кроссов «Родонит» - ФГУП ППЗ «Свердловский» и «Смена 2» - ОГУП «Птицефабрика Средне-уральская» Отбирали клинически здоровых цыплят по принципу аналогов, учитывая живую массу, возраст и породные особенности

Для исследований было сформировано 10 породно-возрастных групп цыплят 1, 7, 15, 30, 60 - дней жизни по 10 голов в каждой Для опыта гипоксии - 48 породно-возрастных групп, по 10 голов в каждой Всего в эксперименте исследовано 580 голов птиц

Исходя из поставленных выше целей и задач, было проведено экспериментальное исследование по изучению влияния породных и возрастных физиологических особенностей на изменение гематологических показателей и гемоглобинового профиля цыплят 4-х линейных гибридов кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза и определению скорости адаптивных реакций при действии на организм хронической гипоксической гипоксии у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни В процессе работы автор изучал гематологические показатели, гемоглобиновый профиль и изменение интенсивности гемопоэза у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни в условиях нормального и измененного эритропоэза

Гипоксическую гипоксию проводили в импульсном режиме путем помещения цыплят в барокамеру с приточно-вытяжной вентиляцией при разряжении 40,98 кПа (что соответствует подъему на 7000 метров над уровнем моря) [Гипоксия, 2000] на 6 часов ежедневно (с 9 часов до 15 часов) в течение 6 суток [Ван Лир Э, Стикней К, 1967] Оценка показателей красной крови проводилась перед воздействием и сразу после каждого сеанса гипоксии

Для исследования гетерогенной системы гемоглобина был применен метод электрофореза в полиакриламидном геле [Г Маурер - 1971, Э Галь с соавт - 1982] Работа выполнена на оборудовании и реактивах фирмы "Reanal" (Венгрия) Для электрофореза гемоглобина была использована система гелей по Г Мауреру [Г Маурер - 1971, Методы практической биохимии - 1978]

Для анализа периферической крови забор крови производили двумя способами у 1, 7 и 15-ти дневных цыплят путем декапитации под эфирным наркозом, а у 30 и 60-ти дневных птиц из крыловой вены Полученную кровь помещали в стеклянные пробирки, предварительно обработанные трилоном Б [И А Болотников, Ю В Соловьев -1980] Гематологические показатели определяли общепринятыми методами [И А Болотников, Ю В Соловьев - 1980] подсчет количества эритроцитов производили в камере Горяева. содержание гемоглобина - гемометром Сали, подсчет гематокритного показателя - в градуированных пробирках (после центрифугирования), средний объем эритроцита вычисляли путем деления гематокрита (в мкм3) на общее число эритроцитов в 1 мкл, расчет цветного показателя - по формуле частное от деления найденного содержания гемоглобина (г/л) к найденному количеству эритроцитов в 1 мкл крови [И А Болотников, Ю В Соловьев - 1980]

Исследования костномозгового пунктата осуществляли на цыплятах 30 и 60 дней жизни в контроле и после каждого 6-ти часового сеанса гипоксии Определяли общее количество миелокариоцитов во всём костном мозге Окраску определяли по Нохту [Д И Гольдберг, Е Д Гольдберг - 1971] после предварительной фиксации метиловым спиртом Подсчет миелограммы осуществляли на 500 клеток При этом использовали номенклатуру клеток, соответствующую современной схеме кроветворения [И А Болотников, Ю В Соловьев - 1980, Д И Гольдберг. Е Д Гольдберг - 1971, И M Карпуть - 1986]

Полученные цифровые данные подвергали статистической обработке с использованием компьютерной программы "Microsoft Excel" Вычислялась средняя арифметическая величина (М), стандартное отклонение (5), ошибка средней арифметической

величины (т) Для оценки достоверности различий между двумя средними арифметическими использовали дисперсионный анализ и затем находили вероятность ошибки (р) При р<0,05 различия между средними арифметическими величинами считались достоверными [И Г Переяслова с соавт, - 2005]

III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Возрастные физиологические особенности изменения гемоглобинового профиля цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза

Анализ результатов исследования фракционного состава гемоглобина показал, что у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза в крови циркулирует два типа взрослого гемоглобина - НЬ А и НЬ Б При чем у цыплят кросса «Родонит» имеет место диссоциация НЬ А на 2 подфракции в возрасте 15, 60 дней жизни, а у цыплят кросса «Смена 2» — в возрасте 15, 30 и 60 дней жизни В возрасте 1 и 7 суток жизни, а у цыплят кросса «Родонит» и 30-ти, диссоциации НЬ А не наблюдалось (таблица 1)

Таблица 1

Гемоглобиновый профиль цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 1, 7,15,30,60

дней жизни (%) (М±т)

фр. п/ ФР Кросс «Родонит» Кросс «Смена 2»

Возраст, дн Возраст, дн

1 7 15 30 60 1 7 15 30 60

НЬ о - ЗЗД6±1,2 36,17±1,6 37,54±1,1* 33,46±1,6 35,24±1,4 37,90±1,8~ 36,22±1,4 34,6Ш:1,8- 32,10±1,4* 30,04±2,б*

НЬ А 66,74±1,2 63,83±1,6 62,46±1,1* 66,54±1,6 64,76±1,4 62,10±1,8. 63,79±1,4 65,40±1,8- 67,90±1,4* 69,96±2,6»

1 - - 28Д9±0,9 - 38,08±0,8 - - 45,28±1,7- 35,40±1,7 27Д8±1,8-

2 - - 34Д7±0,7 - 26,68±1,7 - - 20,12±1,1- 32,50±1,9 42,68±1,4-

*- различия достоверны по отношению к суточному возрасту (р < 0,05) различия достоверны по отношению к кроссу «Родонит» (р < 0,05)

В суточном возрасте у цыплят кросса «Родонит» мы обнаружили фракцию 1 (гемоглобин Б), на которую приходилось содержание гемоглобина 33,26 ± 1,2% и фракцию 2 (гемоглобин А), с содержанием гемоглобина 66,74 ± 1,2% У цыплят кросса «Смена 2» мы обнаружили две аналогичных фракции 1 и 2, при этом 1 фракция была несколько выше (37,90 ± 1,8%, р<0,05), чем у цыплят кросса «Родонит», того же возраста, а 2 фракция ниже (62,10 ± 1,8%, р<0,05)

К 7-ми суточному возрасту различия в 1 и 2 фракциях гемоглобина крови между кроссами «Родонит» и «Смена 2» незначительны

Таким образом, стабильные показатели содержания гемоглобина молодняка первой недели жизни обусловлены сравнительно равноценной реакцией организма цыплят на возрастные изменения

К 15 суткам жизни в крови цыплят кросса «Родонит» содержание НЬ Б в первой фракции увеличилось до 37,54 ± 1.1%, против 33,26 ± 1,2% - в суточном возрасте, р < 0,05, а в крови цыплят кросса «Смена 2», напротив, наблюдается тенденция снижения НЬ Б 34,60 ± 1,8%, против 37,90 ± 1,8% - в суточном возрасте, р < 0,05 Содержание НЬ А в крови цыплят кросса «Родонит» уменьшается до 62,46 ± 1,1%, против 66,74 ±

1,2% - в суточном возрасте, р < 0,05, а в крови цыплят кросса «Смена 2», напротив, увеличивается до 65,40 ± 1,8%, против 62,10 ± 1,8% - в суточном возрасте, р < 0,05 (таблица 1)

Различия между фракциями гемоглобина в крови цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» наблюдаются не значительные Уровень 1-й подфракции НЬ А в крови цыплят кросса «Родонит» в 1,6 раза меньше, чем у цыплят кросса «Смена 2» Уровень 2-й подфракции НЬ А в крови цыплят кросса «Родонит», напротив, в 1,7 раза больше, чем у цыплят кросса «Смена 2»

В возрасте 30-ти суток в крови цыплят кросса «Родонит» диссоциации НЬ А не происходит, что, по-видимому, связано с породными особенностями данного кросса При этом, происходит снижение доли НЬ Б и, соответственно, увеличение доли НЬ А У цыплят кросса «Смена 2» НЬ А по-прежнему диссоциирует на 2 подфракции, что так же, по-видимому, связано с породными особенностями данного кросса Доля НЬ Б продолжает статистически достоверно снижаться

В крови цыплят кросса «Родонит» 60 дней жизни мы вновь наблюдаем диссоциацию НЬ А на 2 подфракции, так же как и в крови цыплят бройлеров кросса «Смена 2», причем, содержание их значительно отличается от таковых у цыплят яичной породы кросса «Родонит» (таблица 1)

Таким образом, по результатам проведённых исследований можно утверждать о влиянии возрастных физиологических и породных особенностей на количество и соотношение выделяемых фракций Известно, что цыплята кроссов «Родонит» и «Смена 2» отличаются высокой продуктивностью (яичной и мясной, соответственно) В связи с этим, данным кроссам присущи такие породные и физиологические особенности, как скороспелость яичных пород и интенсивный рост цыплят бройлеров

3.2. Возрастные физиологические особенности гематологических показателей в крови цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» в раннем постнатальном периоде онтогенеза

Анализ результатов исследования двух промышленных кроссов выявил ряд породных различий При сопоставлении возраста, массы тела и гематологических показателей у цыплят яичного и мясного направлений прослеживаются вполне определенные закономерности

У цыплят мясного направления темпы прироста массы значительно превышают таковые показатели цыплят яичного направления (таблица 2)

Таблица 2

Живая масса цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 1,7,15,30,60 дней жизни (г)

(М±т)

Возраст, дн Кол-во проб Кросс «Родонит» Кросс «Смена 2»

1 10 38,0±0,9 40,0±1,1

7 10 86,0±1,1* 90,0±1,3*

15 10 171,0±7,1* 232,0±8,5*~

30 10 293,0±8,0* 1050,0±17,6»..

60 10 727,0±13,9* 1982,0±38,5*..

*- различия достоверны по отношению к суточному возрасту (р < 0,05) различия достоверны по отношению к кроссу «Родонит» (р < 0,05)

В связи с несоответствием биологического развития организма в аналогичном возрасте яичных и мясных цыплят наблюдается вариабельность гематологических по-

казателей крови молодняка, при прогрессивном возрастании концентрации эритроцитов, общего количества гемоглобина, гематокритной величины и цветного показателя с возрастом с первых суток до 60 дней жизни (таблицы 2, 3)

С первых дней развития цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» наблюдаются значительные отличия в показателях красной крови

Концентрация эритроцитов в периферической крови у цыплят кросса «Родонит» в 1,5 раза, а гематокритный показатель в 1,2 раза выше, чем у цыплят кросса «Смена 2» Общее количество гемоглобина у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» отличаются незначительно А средний объем эритроцитов, напротив, в 1,2 раза, а цветной показатель, почти, в 1,5 раза меньше в крови цыплят яичного направления, чем у цыплят мясного (таблица 3)

На 7-е сутки жизни концентрация эритроцитов в периферической крови у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» увеличивается, почти, в 1,5 раза Общее количество гемоглобина и гематокритный показатель у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» повышаются незначительно, средний объем эритроцитов, напротив, у цыплят обоих кроссов резко снижается, цветной показатель у цыплят яичного кросса изменениям не повергался, а у цыплят мясной направленности, напротив, снизился в 1,2 раза

В возрасте 15 дней жизни гематологические показатели и живая масса продолжают статистически достоверно увеличиваться в крови цыплят промышленных кроссов, за исключением, среднего объема эритроцитов, который у цыплят кросса «Родонит» остается неизменным, а у цыплят кросса «Смена 2» продолжает статистически достоверно снижаться

В 30-ти дневном возрасте у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» резко снижается концентрация эритроцитов и общее количество гемоглобина Гематокритный показатель у цыплят кросса «Смена 2», так же, резко снижается, а у цыплят кросса «Родонит», напротив, продолжает статистически достоверно увеличиваться Цветной показатель у цыплят обоих кроссов изменениям практически не повергался (таблица 3)

Таблица 3

Гематологические показатели цыплят кроссов «Родонит» _и «Смена 2» 1,7,15,30,60 дней жизни (М±т)_

Показат Кросс «Родонит» Кросс «Смена 2»

Возраст (дн ) Возраст (дн )

1 7 15 30 60 1 7 15 30 60

Э млн/ мкл 2,3±0,1 2,8±0,1* 3,0±0,1* 2,5±0,1 2,7±0 1* 1,6*0,2.. 2,1±0,1 3,3±0,1* 2,8±0,1» 3,0*0,1-

№,% 31,3 ±0,8 32,8±1,3 343±1,2* 32,6±1,0 33,8±1,3 25,3±1,0 29,4±и~ ?8,2±1,0»., 35,5±1,1».. 36,8±1,2»..

МСУ, мкм3 139,3±5,5 119,5±5,1* 118,5±5,4* 135,3=6,8 127,6±5,1 161,3*9,9 141,6±8,2* 119Д±5,7« 128,8±5,8«.. 123,1±4,7»

НЪ,г% 9,8±0,8 11,4±0,5 15,7±0,3* 12,4.10,3 13,8±0,5« 8,5±0,5 9,7±0,6 14,5±0,9« 12,710,3* 13,7Я>,5»

ЦП 1,3±0,05 1,2±0,01 1,6±0,02* 1,5±0,07 1,6±0,04* 1,7±0,14- 1,4±0,14 1,3±0,07«„ 1,4±0,07 1,4±0,08

*- различия достоверны по отношению к суточному возрасту (р < 0,05) <•- различия достоверны по отношению к кроссу «Родонит» (р < 0,05)

Живая масса цыплят кросса «Смена 2» 30-ти дневного возраста почти в 4 раза превышает живую массу цыплят кросса «Родонит» аналогичного возраста (таблица 2)

В 2-х месячном возрасте концентрация эритроцитов, общее количество гемоглобина и гематокритный показатель в периферической крови у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» увеличиваются незначительно, цветной показатель изменениям не повергался

Живая масса цыплят кросса «Смена 2» 60-ти дневного возраста в 3 раза превышает живую массу цыплят кросса «Родонит» аналогичного возраста (таблица 2)

Таким образом, по всем гематологическим показателям цыплята кросса «Смена 2» реагируют на возрастные физиологические изменения значительно сильнее, чем цыплята кросса «Родонит», что связано с породными особенностями данных кроссов Известно, что цыплята кроссов «Родонит» и «Смена 2» отличаются высокой продуктивностью (яичной и мясной, соответственно) В связи с этим, данным кроссам присущи такие породные и физиологические особенности, как скороспелость яичных пород и интенсивный рост цыплят бройлеров

3.3. Динамика гемоглобинового профиля, гематологических показателей и изменение интенсивности гемопоэза цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 дней жизни при действии на организм хронической гипоксической гипоксии

Анализ результатов исследования фракционного состава гемоглобина в крови цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 дней жизни показал, что в результате воздействия на организм хронической гипоксической гипоксии, наиболее ярко выраженные изменения в соотношении изоформ гемоглобина наблюдаются на 4-е сутки

Но значительные изменения в соотношении фракций происходят уже после 2 сеанса гипоксии, показатель НЬ Б статистически достоверно увеличивается, а НЬ А, соответственно, уменьшается При этом мы обнаруживаем и различия между двумя кроссами У цыплят кросса «Смена 2» выявляется диссоциация НЬ А на две подфракции (таблица 4)

После 3-го сеанса гипоксии, наблюдаемые нами изменения, прогрессируют

Таблица 4

Гемоглобиновый профиль цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 дней жизни

в условиях хронической гипоксической гипоксии за 6 сеансов (%) (М±ш)

Кросс фракция п/фр № Сеанса

1 2 3 4 5 6

Ё Конт НЬБ - 33,46±1,6 34,08±1,7 32,67±1,2 33,76± 1,0 33,46±1,0 34,58±1,2

В Опыт - 34,52±1,4 37,09±1,6 46,38±1,8* 58,18±1,6* 47,85±1,9* 41,65±1,4*

§ о Конт НЬ А - 66,54*1,6 65,92±1,7 67,33±1,2 66,24±1,0 66,54±1,0 65,42±1,2

Рч Опыт - 65,48±1,4 62,91 ±1,6 53,62±1,8* 41,82±1,6* 52,15±1,9* 58,35±1,4»

Конт НЬО - 32,10±1,4 31,89±1,7 33,20±1,8 31,69±1,7 32,28±2,4 31,41 ±2,2

Опыт - 32 37±1,5 37,89±2,1 44,73±1,7* 57,02±1,5* 46,80±1,5* 38,04±0,8»

Г-) 67,90±1,4 68,12±1,7 66,81±1,8 68,31 ±1,7 67,72±2,4 68,54±2,2

Конт НЬ А 1 45,40±1,7 46,46±1,4 45,44±2,1 46,27±1,9 47,34±2,6 47,68±2,7

2 22,50±1,9 21,66±2,4 21,37±2,7 22,04±3,0 20,38±2,1 20,92±2,8

О 67,63±1,5 62,11 ±2,1 55,27±1,7* 42,98±1,5* 53,20±1,5* 61,96±0,8*

Опыт НЪ А 1 45,88±1,8 39,70±1,6* 32,09±1,8* 17,51±1,3* 29,02±0,8* 38,73±2,0*

2 21,75±2,1 22,41 ±1,9 23,18±1,9 25,47±2,2 24,19±2,2 23ДЗ±1,8

*- различия достоверны по отношению к контролю (р < 0,05)

На 4-е сутки опыта содержание в крови НЬ Б увеличивается, по сравнению с контролем, у цыплят кросса «Родонит» в 1,7 раза до 58,18 ± 1,6%, против 33,76 ± 1,0% - в контроле, р < 0,05, а содержание НЬ А, соответственно, уменьшается до 41,82 ± 1,6%, против 66,24 ± 1,0% - в контроле, р < 0,05, у цыплят кросса «Смена 2» уровень НЬ Э увеличивается в 1,8 раза до 57,02 ± 1,5%, против 31,69 ± 1,7% — в контроле, р < 0,05, а содержание НЬ А, напротив, уменьшается до 42,98 ± 1,5%, против 68,31 ± 1,7% - в

контроле, р < 0,05 1 п/фр НЬ А снижается до 17,51 ± 1,3%, против 46,27 ± 1,9% - в контроле, р < 0,05, 2 п/фр гемоглобина А, соответственно, увеличивается до 25,47 ± 2,2%, против 22,04 ± 3,0% - в контроле, р < 0,05 (таблица 4)

На 5-е сутки опыта происходит постепенное возвращение данных показателей к исходному состоянию содержание в крови НЬ О уменьшается, а НЬ А, соответственно, увеличивается

После 6-ю сеанса гипоксии соотношения изоформ гемоглобина приближается к допустимой норме у кур (20 - 30% - НЬ Б, 70 - 80% - НЬ А), что указывает на адаптацию молодняка к измененной газовой среде

Таким образом, у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30-ти дней жизни в крови циркулирует два типа взрослого гемоглобина - НЬ А и НЬ Б, причем, у цыплят кросса «Смена 2» имеет место диссоциация НЬ А на 2 подфракции, что, по-видимому, связано с породными особенностями данных кроссов Во время эксперимента происходят изменения в соотношении не только между фракциями гемоглобина, но и между подфракциями Следовательно, данная особенность является одним из генотипических признаков, отличающих эти кроссы К тому же, по всем гематологическим показателям цыплята кросса «Смена 2» реагируют на гипоксическое воздействие значительно сильнее, чем цыплята кросса «Родонит» Отсюда, можно сделать вывод, что бройлеры более чувствительны к технологическим воздействиям, по сравнению с цыплятами яичного кросса

Анализ результатов исследования гематологических показателей цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» ЗО-ти дневного возраста показал, что в результате воздействия на организм хронической гипоксической гипоксии, наиболее ярко выраженные изменения происходят на 4-е сутки (таблица 5)

В крови опытных цыплят значительно увеличивается концентрация эритроцитов -у цыплят кросса «Родонит» до 10,6±0,4млн/мкл, в сравнении с контролем 2,7 ±0,1 млн/мкл, р<0,05, у цыплят кросса «Смена 2» до 12,0±0,5 млн/мкл, в сравнении с контролем 2,7±0,1млн/мкл, р<0,05 Общее количество гемоглобина у цыплят кросса «Родонит» увеличивается до 123,4±2,2г/л, против 79,3±3,5г/л - в контроле, р<0,05, у цыплят кросса «Смена 2» до 128,1±2,9г/л, против 78,1±2,6г/л - в контроле, р<0,05 Так же повышается уровень гематокрита у цыплят кросса «Родонит» до 53,9±1,7%, против 37,5±1,0% - в контроле, р<0,05, у цыплят кросса «Смена 2» до 53,7±1,8%, против 33,9±0,9% - в контроле, р<0,05 При этом, резко снижаются средний объем эритроцита у цыплят кросса «Родонит» до 51,5±2,7мкм3, против 138,0±3,3мкм3 - в контроле, р<0,05, и цветной показатель до 0,6±0,02, против 1,4±0,06 - в контроле, р < 0,05. у цыплят кросса «Смена 2» средний объем эритроцита снижается до 45,0±1,2мкм3, против 128,5±4,2мкм3 - в контроле, р<0,05, а цветной показатель до 0,5±0,03, против 1,5±0,1 -в контроле, р<0,05 (таблица 5)

Концентрация циркулирующих эритроцитов и общее количество гемоглобина в крови экспериментальных птиц статистически достоверно увеличивается уже после 2 сеанса гипоксии, а цветной показатель начинает снижаться Уровень гематокрита и средний объем эритроцита повышается сразу же после первого сеанса, что связано с потерей жидкости организмом при гипоксии Практически на протяжении всего опыта гипоксии при извлечении цыплят из барокамеры наблюдается их сильное угнетение, проявляющееся взъерошенным оперением, сонливостью, неподвижностью, отсутствием рефлекса приема корма, анемичностью сережек и слизистых оболочек

После 3-го сеанса гипоксии, наблюдаемые нами изменения, прогрессируют, за исключением среднего объема эритроцита, который стремительно снижается

С 5-х суток наблюдается эффект адаптации организма молодняка к гипоксии, происходит постепенное снижение концентрации эритроцитов, общего количества гемоглобина, гематокригного показателя, и повышение среднего объема эритроцитов и уровня цветного показателя При извлечении цыплят из барокамеры их состояние значительно лучше, чем после 4-го сеанса гипоксии (таблица 5)

На 6-е сутки - адаптационный процесс у цыплят 30 дней жизни кроссов «Родонит» и «Смена 2» продолжается Концентрация эритроцитов, общее количество гемоглобина, гематокритный показатель постепенно снижаются, приближаясь к исходному состоянию Средний объем эритроцита и уровень цветного показателя напротив, поднимаются, приближаясь к допустимой норме у кур (Э - 3,0-4,0млн/мкл , НЬ - 60-72г/л, Ш - 30-40%, МСУ = 127 мкм3, ЦП - 1-3 [Болотников И А , Соловьев Ю В, 1980, Ко-томцев В В , 2006]) В течение 6-го сеанса гипоксии из барокамеры доносились звуки, издаваемые цыплятами, что свидетельствует об их неплохом самочувствии При извлечении цыплят из барокамеры угнетения практически не наблюдалось, цыплята были подвижные, появился рефлекс приема корма, что говорит о высокой устойчивости цыплят к стрессовым ситуациям, и способности адаптироваться в таких условиях

Таблица 5

Гематологические показатели цыплят месячного возраста кроссов «Родонит» и «Смена 2» в условиях хронической гипоксической гипоксии за 6 дней опыта

(М±т)

Кр Показатели № Сеанса

1 2 3 4 5 6

Э млн/ Контр 2,5±0,1 2,7±0,1 2,6±0,1 2,7±0,1 2,6±0,1 2,8±0,1

мкл Опыт 2,5±0,1 3,0±0,1 3,4±0,1* 10,640,4* 6,6±0,2* 4,0±0,1»

Ht,% Контр 32,6±1,0 36,7±1,1 36,ОУ),9 37,5±1,0 36,5±0,9 37,6±U

р Опыт 38,7* 43,6±1Д* 4б,4±1,3* 53,9±1,7* 48,5±1,0* 42,5±1,1»

й MCV, Контр 135,3±6,8 134,3±3,3 137,3±4,8 138,0±3,3 139,4±4,0 136,6±4,3

й о мкм3 Опыт 157,3±3,8* 145,7±2,1* 138Д±4,0 51,5±2,7* 74,1±2,3* 105,7±3,8*

Он Hb, г/л Контр 74,5±1,8 72,2±2,2 77,2±3,4 79,3±3,5 73,7±2,1 76,1±3,1

Опыт 74,2±2,4 82,3±2,3* 85,0±2,6* 123,4±2,2* 104,4±2,5* 93,5±2,2*

ЦП Komp 1,5±0,07 1,4±0,06 1,5±0,06 1,4±0,06 1,4±0,07 1,4±0,07

Опыт 1,5±0,08 1,4±0,04 1,3±0,06 0,6±0,02* 0,8±0,02* 1,1±0,03

Э млн/ Контр 2,8±0,1 2,8±0,1 2,9±0,1« 2,7±0,1 3,0±0,1- 2,9±0,1

мкл Опыт 2,7±0Д 3,2±0Д* 3,7±0,1*~ 12,0±0,5*.< 7,6±0Д*~ 4,3±0Д*

Ht,% Контр 35,5*1,1« 34,9±1,0 35,9±1,0 33,9±0,9~ 35,6±1,1 34,9tl,0«

(N Опыт 41,0±1,1* 44,3±1,3» 47,9±1,6* 53,7±1,8* 48,1±1Д* 42,7±1,9*

5 MCV, Контр 128,8±5,8» 128,4±9,6.. 123,8±6,3-. 128,5±4Д.. 120,7±4,6.< 122Д±6,8..

s мкм3 Опыт 150Д±3,0*.. 138,8±4Д*« 131,0±2,8* 45,0±1,2*.. 63,5±2,2*.. 100,6±4,0*

и Hb, г/л Контр 76,3±1,7 76Д±2,1.. 73,5±2,6.. 78,1±2,6 82,6±2,5~ 78,9±2,6

Опыт 76,7±3,0 84,3±3,0* 87,3±3,3* 128,1±2,9* 108,4±3,2* 91,4±3,7*

ЦП Контр 1,4±0,05 1,4±0,1 1Д±0,06.. 1,5±0,04 1,4±0,06 1,3±0,05

Опыт 1,4±0,05 1,3±0,07 1,2±0,06 0,5±0,02* 0,7±0,03* 1,1±0,07

*- различия достоверны по отношению к контролю (р < 0,05)

различия достоверны по отношению к кроссу «Родонит» (р < 0,05)

Таким образом, при действии на организм хронической гипоксической гипоксии происходит изменение гематологических показателей (увеличение общего количества эритроцитов, гемоглобина и гематокритной величины при значительном снижении среднего объема эритроцитов и цветного показателя) А при адаптации организма цы-

плят к недостатку кислорода происходит постепенное возвращение данных показателей к исходному состоянию

Общая клеточность костномозгового пунктата после первого сеанса гипоксии у 30-ти дневных цыплят сокращается от 36,5±1,3млн в контроле до 30,3±2,3млн, р<0,05 - у цыплят кросса «Родонит», 43,1±1,8млн в контроле до 36,5±1,1млн, р<0,05 -у цыплят кросса «Смена 2», а после пятого сеанса до 24,8±2,5млн , р<0,05 - у цыплят кросса «Родонит», до 22,8± 1,4млн, р<0,05 - у цыплят кросса «Смена 2» (таблица 6)

Таблица 6

Миелограмма цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 дней жизни в условиях

хронической гипоксической гипоксии млн/1 ООг живой массы (М±т)

Клеточный элемент Кросс «Родонит» 30 дн Кросс «Смена 2» 30 дн

контроль 1 сеанс 5 сеанс контроль 1 сеанс 5 сеанс

Миэлобласты 1,3±0,04 0,3±0,1* 0,2±0,04* 1,040,1 0,840,1« 0,740,1..

Промиэлоцигы 2,340,1 0,7±0,1* 0,6±0,1* 2,2±0,1 1,940,1« 0,9±0,1*

Миэл-ы псевдоэоз-е 3,040,05 1,6±0,05* 1,940,1* 2,840,1 1,8±0,1* 1,940,1*

эозинофильные 3,840,1 2,940,1 1,740,1* 1,840,1« 1,640,1« 1,440,1

Метамиэл псевдоэ 4,1±0,6 2,440,2* 1,5±0,1* 4,540,1 2,840,2* 0,840Д*..

эозинофильные 6,1±0,4 3,040,3* 1,240,3* 5,7±0,3 2,840,3* 1,940,3*..

базофильные 0,6±0,1 0,3±0,1 0,340,1 0,8±0Д 0,740,2.. 0,5±0,1

Пал-е псевдоэоз-ы 3,3±0,1 2,940,1 3,240,2 3,640,1 1,940,2*« 3,340,2

эозинофилы з,о±и 1,741,2* 1,240,1* 2,340,2« 1,1±0,1*~ 1,040,1*

базофилы 0,3±0,1 0,240,04 - 0,4±0,1 0,2±0,1 -

Сегм-е псевдоэоз-ы 3,2±0,1 6,3±0,6* 6,240,8* 2,7±0,5 5,640,6* 2,440,3«

эозинофилы 2,8±0,3 1,540,3* 0,740,2* 4,140,2« 2,040,2*« 0,540,1*

базофилы 0,1±0,04 0,03±0,01 - 0,2±0,05 0,1+0,03» -

Всего гранулоцитов 33,9±0,5 23,740,5* 18,7±0,5* 32,140,5 23,3±0,4* 15,340,3*

Проэритр и пронор 2,940,2 5,7±0,3* 3,940,2 3,840,2« 6,5±0,4*.. 4,440,3*

Эригробл инормобл 48,0±4,2 85,843,3* 66,0±2,3* 40,041,6« 87,643,6* 62,043,5*

Кл лимфоиднойгр 3,3±0Д 7,040,9* 4,1±0,3* 4,740,4« 9,140,8*.. 7,7±0,6*~

Моноцитарной гр 4,240,7 3,6±0,5* 2,8±0,5* 5,040,6« 2,8±0,4*>. 1,940,2*.»

Мегакариоцигар гр 1,0±0,3 0,03±0,01* 0,03±0,01* 1,540,3« 0,8±0,2*« -

Гистиоцигарные кл 0,5±0,1 0,240,1 0,0140,01* 0,6±0Д 0,340,1 0,140,03«

Плазматические кл 0,1±0,03 0,03±0,01 0,0140,00* 0,940,2« 0,440,1.. 0,0440,01*

Ретикулоэндот кл 2,040,5 4,940,5* 1,5±0,4 1,640,4 3,640,51*.. 1,440,3

Кл в стадиях митоза 1,940,3 0,240,05* 0,0540,01* 3,040,4« 1,0±0,4*.. 0,2±0,1-

Общ кл кост мозга 36,541,3 30,3±2,3 24,842,5* 43,141,8« 36,541,1*.. 22,8±1,4*

*- различия достоверны по отношению к контролю (р < 0,05)

•«- различия достоверны по отношению к кроссу «Родонит» (р < 0,05)

Миелограмма свидетельствует, что после одного сеанса гипоксии выявляется увеличение в костном мозге доли молодых форм эритроидных клеток - число проэрит-робластов и пронормоцитов увеличивается, практически, в 2 раза, так же как и число эритробластов и нормобластов После пятого сеанса гипоксии доля молодых форм эритроидных клеток приближается к допустимой норме у цыплят

После одного сеанса гипоксии число ретикулоэндотелиальных клеток увеличивается более чем вдвое Их выход связан с повышением ретикулоэндотелиального барьера костного мозга, который имеет большое значение в поддержании клеточного постоянства крови и клеточного состава мозга

Эти данные свидетельствуют о том, что в костном мозге цыплят месячного возраста, в условиях хронической гипоксической гипоксии, происходит усиление эритро-поэза в костном мозге

Гипоксическая гипоксия оказывает влияние на количество молодых форм грану-лоцитов После первого сеанса гипоксии наблюдается уменьшение метамиэлоцитов псевдоэозинофильных и псевдоэозинофильных миелоцитов Так же, наблюдается тенденция уменьшения клеток гранулоцитарного ряда в 1,5 раза На этом фоне выявляется увеличение сегментоядерных псевдоэозинофилов

После одного сеанса гипоксии выявляется лимфоцитоз С увеличением в крови зрелых форм лимфоцитов защитная функция белой крови усиливается При продолжении воздействия гипоксии уровень клеток лимфоидной группы приближается к норме, что обусловлено снижением выброса молодых форм в периферическую кровь При адаптации к гипоксическому состоянию, после пяти сеансов происходит формирование специфического иммунитета в организме цыплят

Следовательно, анализ результатов исследования костномозгового пунктата выявляет закономерность показателей у птиц 30-ти дней жизни кроссов «Родонит» и «Смена 2» действие на организм цыплят хронической гипоксической гипоксии в течение б сеансов приводит к изменениям клеточного состава костного мозга В пределах миело-идного ряда наблюдается уменьшение пролиферативного гранулоцитарного пула, за счет снижения количества молодых форм Относительное содержание зрелых грануло-цитов, напротив, повышается Миелограмма отражает увеличение количества ретику-лоэндотелиальных клеток и клеток лимфоидной группы больше, чем в 2 раза, проэрит-робластов и пронормоцитов, примерно, в 2 раза, также, как и эритробластов и нормоб-ластов, что говорит об усиление эритропоэза и защитной функции белой крови

Именно в этот период у цыплят отмечаются выраженные изменения гематологических показателей и гемоглобинового профиля, заключающиеся в возрастании гематологических показателей и доли гемоглобина О при сокращении НЬА, это не противоречит теории Болотникова И А и Соловьева ЮВ (1980), утверждавших, что при стрессовых ситуациях происходит мобилизация и выход зрелых клеток в кровь из костного мозга

Таким образом, при моделировании хронической гипоксической гипоксии происходит усиление эритропоэза в красном костном мозге, что приводит к 4-х кратному увеличению количества эритроцитов в периферической крови к 4-му сеансу за счет эмиссии их из красного костного мозга в общий кровоток, существенному повышению в крови общего количества гемоглобина, гематокрита, существенным изменениям в соотношении изоформ гемоглобина в сторону увеличения содержания МЛ) А при адаптации организма цыплят к недостатку кислорода на 5-е сутки после воздействия происходит постепенное возвращение данных показателей к исходному состоянию Отсюда, можно сделать вывод, что технологические стрессы будут отражаться на организме цыплят 30-ти дней жизни на 4-е сутки, а изменение в соотношении изоформ гемоглобинов А и О, в этом случае, можно использовать, как маркер для определения этих изменений

3.4. Динамика гемоглобинового профиля, гематологических показателей и изменение интенсивности гемопоэза цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 60 дней жизни при действии на организм хронической гипоксической гипоксии

Анализ результатов исследования фракционного состава гемоглобина в крови цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 60 дней жизни показал, что в результате воздействия на организм хронической гипоксической гипоксии, наиболее ярко выраженные изменения в соотношении изоформ гемоглобина происходят на 5-е сутки При этом мы наблюдаем диссоциацию НЬА на две подфракции (таблица 7)

Содержание в крови НЬБ увеличивается, по сравнению с контролем, у цыплят кросса «Родонит» в 1,6 раза до 57,30 ± 1,3%, против 36,53 ± 1,4% - в контроле, а содержание НЬА, соответственно, уменьшается до 42,70 ± 1,3%, против 63,47 ± 1,4% - в контроле 1 п/фр уменьшается до 15,31 ± 1,2%, против 38,13 ± 2,2% - в контроле, 2 п/фр гемоглобина А после пятого сеанса гипоксии изменениям практически не повергалась, у цыплят кросса «Смена 2» уровень НЬБ увеличивается в 2,1 раза до 60,0 ± 2,5%, против 28,9 ± 3,3% - в контроле, а содержание НЬА напротив уменьшается до 40,0 ± 2,5%, против 71,1 ± 3,3% - в контроле 1 п/фр уменьшается до 12,83 ± 0,7%, против 29,02 ± 0,8% - в контроле, 2 п/фр так же уменьшается до 27,17 ± 2,9%, против 42,09 ± 3,6% - в контроле (таблица 7)

Но значительные изменения в соотношении фракций, как видно в таблице 7, происходят уже после 2 сеанса гипоксии, показатель НЬБ статистически достоверно увеличивается, а НЬА, соответственно, уменьшается

После 3-го и 4-го сеанса гипоксии, наблюдаемые нами изменения, прогрессируют

Таблица 7

Гемоглобиновый профиль цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 60 дней жизни

в условиях хронической гипоксической гипоксии за 6 сеансов (%) (М±т)

фракция п/фр № Сеанса

Кросс 1 2 3 4 5 6

Конт НЬЭ 35,24*1,4 35,95*1,9 36,87*1,6 37,40*1,2 36,53*1,4 36,05*1,7

Опыт 35,48*1,6 37,19*1,5 44,04*1,7* 46,17*1,6* 57,30*1,3* 43,50*1,2*

64,76*1,4 64,05*1,9 63,13*1,5 62,60*1,2 63,47*1,4 63,95*1,7

Кот- 1 38,08*0,8 37,92*2,0 37,47*2,2 37,89*2,0 38,13*2,2 38,00*1,9

« о НЬА 2 26,68*1,9 26,13*2,2 25,65*2,8 24,71*1,8 25,34*2,1 25,95*1,8

р* 64,52*1,6 62,81*1,5 55,96*1,7* 53,83*1,6* 42,70*1,3* 56,50*1,2*

Опыт 1 37,46*1,8 35,18*1,8 27,73*1,3* 24,82*1,8* 15,31*1,2* 26,67*1,3*

2 27,06*3,0 27,63*1,8 28,24*2,1 29,01*3,0* 27,39*1,6 29,83*1,8

Кош- НТО 30,04*2,6 31,28*1,8 28,72*2,7« 30,43*2,8« 28,90*3,3« 29,00*2,2«

Опыт 30,16*2,0 35,80*1,5 44,02*1,6* 49,17*2,0* 60,00*2,5* 51,80*1,6*..

69,96*2,6« 68,72*1,8 71,28*2,7« 69,57*2,8« 71,10*3,3« 71,00*2,2«

8 § Кот- 1 27,28*1,8« 26,71=1,4« 27,09*0,9« 28,41*0,7« 29,02*0,8« 28,13*1,2«

НЬА 2 42,68*1,4" 42,01*2,5" 44,19*2,7" 41,16*3,0" 42,09*3,6" 42,87*2,0~

О 69,84*2,0« 64,20*1,5 55,98*1,6* 50,83*2,0* 40,00*2,5* 48,20*1,6*«

Опыт 1 29,37*1,5« 25,93=1,1« 20,72*1,5*« 17,35*0,9*« 12,83*0,7*« 20,04*1,2

2 40,48*2,5« 38,27=2,0« 35,25*2,0*-. 33,49*1,4* 27,17*2,9* 28,16*1,5*

*- различия достоверны по отношению к контролю (р < 0,05) «- различия достоверны по отношению к кроссу «Родонит» (р < 0,05)

После 6-го сеанса гипоксии соотношение изоформ гемоглобина приближается к допустимой норме у кур (20 - 30% - НЬО, 70 - 80% - НЬА), что указывает на адаптацию молодняка к измененной газовой среде

Таким образом, у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 60 дней жизни, так же как и у 30-ти дневных цыплят, в крови циркулирует два типа взрослого гемоглобина -НЬА и НЬО При этом, наблюдается диссоциация НЬА на две подфракции, в отличие от цыплят кросса «Родонит» 30 дней жизни, что, по-видимому, связано с породными и морфогенетическими особенностями данных кроссов Во время эксперимента одновременно происходят изменения в соотношении не только между фракциями гемоглобина, но и между подфракциями, кроме того, у цыплят мясного и яичного кроссов эти изменения имеют свои особенности Следовательно, по данным интерьерным показателям можно отличить мясной кросс от яичного и от других видов птиц, соответственно

К тому же, по всем гематологическим показателям цыплята кросса «Смена 2» реагируют на гипоксическое воздействие значительно сильнее, чем цыплята кросса «Родонит» Отсюда, можно сделать вывод, что бройлеры более чувствительны к технологическим воздействиям, по сравнению с цыплятами яичного кросса

Анализ результатов исследования гематологических показателей цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 60-ти дневного возраста показал, что в результате воздействия на организм хронической гипоксической гипоксии, наиболее ярко выраженные изменения происходят на 5-е сутки Увеличивается концентрация эритроцитов - у цыплят кросса «Родонит» до 11,4±0,6млн/мкл, в сравнении с контролем 2,8±0,1млн/мкл, р < 0,05, у цыплят кросса «Смена 2» до 12,5±0,6млн/мкл, в сравнении с контролем 3,2±0,1млн/мкл, р < 0,05 Общее количество гемоглобина у цыплят кросса «Родонит» увеличивается до 127,9±6,6г/л, против 8б,2±6,3г/л - в контроле, р < 0,05, у цыплят кросса «Смена 2» до 137,1±8,8г/л. против 82,4±6,6г/л - в контроле, р < 0,05 Так же повышается уровень гематокрита у цыплят кросса «Родонит» до 53,6±1,9%, против 38,6±1,3% - в контроле. р<0,05, у цыплят кросса «Смена 2» до 58.9±1,6%, против 38,8±1,0% - в контроле, р<0,05 При этом резко снижаются средний объем эритроцита у цыплят кросса «Родонит» до 48,2±3,4мкм3, против 129,3±3,9мкм3 - в контроле, р<0,05, и цветной показатель до 0,6±0,1, против 1,6±0,1 - в контроле, р<0,05, у цыплят кросса «Смена 2» средний объем эритроцита снижается до 47,9±2,3мкм , против 121,0±4,5мкм3- в контроле, р<0,05, и цветной показатель до 0,6±0,1, против 1,3±0,1 - в контроле, р<0,05 (таблица 8)

Уже после 2 сеанса гипоксии концентрация циркулирующих эритроцитов и общее количество гемоглобина в крови экспериментальных птиц статистически достоверно увеличивается, а цветной показатель начинает снижаться Уровень гематокрита и средний объем эритроцита увеличиваются сразу же после первого сеанса, что связано с потерей жидкости организмом при гипоксии (табтица 8)

После 3-го и 4-го сеанса гипоксии, наблюдаемые нами изменения, прогрессируют, за исключением среднего объема эритроцита, который стремительно снижается

На 6-е сутки эксперимента наблюдается эффект адаптации организма молодняка к гипоксии, происходит постепенное снижение концентрации эритроцитов, общего количества гемоглобина, гематокритного показателя, и повышение уровня среднего объема эритроцитов и цветного показателя

Таким образом, при действии на организм хронической гипоксической гипоксии происходит изменение гематологических показателей (увеличение общего количества эритроцитов, гемоглобина и гематокритной величины при значительном снижении среднего объема эритроцита и цветного показателя) А при адаптации организма цыплят к недостатку кислорода происходит постепенное возвращение данных показателей к исходному состоянию

Таблица 8

Гематологические показатели цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 2-хмесячного возраста в условиях хронической гипоксической гипоксии за 6 дней __опыта (М±ш)_

Кр Показатели № Сеанса

1 2 3 4 5 6

Родонит Эмлн/ мкл Контр 2,7±0,1 2,9±0Д 2,8±0,1 2,7±0Д 2,8±0Д 2,7*0,2

Опыт 2,8±0Д 3,1±0Д 3,4±0,1 * 4,2*0,2» 11,4*0,6* 6,1*0,5*

Ht,% Контр 33,8±1,3 36,5±1Д 36,1±1,1 34,2±0,9 35,9*1,4 33,7±1,3

Опыт 40,9±1,5* 44,5±1,4* 47,6±1,4* 50,7±1,6* 53,6*1,9* 48,6±1,7

MCV, мкм3 Контр 127,6±5,1 130,7±5,9 128,9±4,8 126,6*3,2 129,3±3,9 127,0±4,6

Опыт 148,9±4,7* 143Д±4Д* 140,7±5,7* 122,9±4,3 48,2*3,4* 83,7*6,9*

Hb, г/л Контр 83,0±6,9 84,7±4,4 81,7±5,5 84,8±5,7 86,2±6,3 83,5±7,0

Опыт 83,5±5,6 89,8±6,7* 95,1±6Д* 98,б±7,2* 127,9±6,6* 102,3*8,3*

ЦП Контр 1,5±0Д 1,5±0Д 1,5±0Д 1,6±0Д 1,6*0,1 1,6*0,2

Опыт 1,5±0,1 1,4±0Д 1,4±0,1 1,2*0,1* 0,6*0,1* 0,9±0Д *

Смена 2 Эмлн/ мкл Контр з,о±од 3,2±0,1 3,0±0Д 3,3*0,1- 3,2*0,1« 2,9*0,1

Опыт ЗД±0Д 4,0±0д*- 4,8±0Д*.. 5,4*0,2».. 11,2*0,5* 6,8*0,5*«

Ht,% Контр 36,8±1,2 37,5±0,7 Зб,5±1Д 39,1*0,6« 38,8*1,0 36,1*1,1

Опьгт 44,5±1,5* 49,8±1,4*.. 53Д±1,5*~ 56,0*1,6*» 58,9*1,6*« 54,1*2,1*

MCV, мкм3 Komp 123,1±4,7 119,8±5,3« 122,2±5,б 119,3*2,7« 121,0*4,5 125,7*4,4

Опыт 146,3±5,4* 125,8±6,2*« 112,6±6,3*.. 105,3*3,7*« 47,9±2,3* 82,5*5,7*

Hb, г/л Контр 82,0±7,5 85,8±6,1 84,2±6,9 84,9*7,0 82,4±6,6 85,5±6,7

Опыт 81,4±6,2 90,7±7,0 99,4±7,0* 105,2*7,3*« 137,1*8,8*« 101,2*5,0*

ЦП Контр 1,4±0,1 1,4±0Д 1,4±0Д 1,3*0,1.. 1,3*0,1« 1,5*0,1

Опыт 1,3±0,1 1Д±0Д*.. 1,0*0,1 1,0*0,1* 0,6*0,1* 0,8±0,1»

*- различия достоверны по отношению к контролю (р < 0,05)

<•- различия достоверны по отношению к кроссу «Родонит» (р < 0,05)

Общая клеточность костномозгового пунктата после первого сеанса гипоксии у 60-ти дневных цыплят сокращается от 34,7±1,9млн в контроле, до 31,2±2,1млн, р<0,05 - у цыплят кросса «Родонит», от 46,4±1,5млн в контроле, до 39,9±1,6млн, р<0,05 - у цыплят кросса «Смена 2», и более существенно после пятого сеанса до 26,9±2,2млн., р<0,05 - у цыплят кросса «Родонит», до 32,9±1,4млн, р<0,05 - у цыплят кросса «Смена 2» (таблица 9)

Миелограмма свидетельствует, что после одного сеанса гипоксии выявляется увеличение в костном мозге доли молодых форм эритроидных клеток - число проэрит-робластов и пронормоцитов увеличивается, практически, в 2 раза, так же как и число эритробластов и нормобластов После пяти сеансов гипоксии доля молодых форм эритроидных клеток приближается к допустимой норме у цыплят

После одного сеанса гипоксии число ретикулоэндотелиальных клеток увеличивается более, чем вдвое Их выход связан с повышением ретикулоэндотелиального барьера костного мозга, который имеет большое значение в поддержании клеточного постоянства крови и клеточного состава мозга

Эти данные свидетельствуют о том, что в костном мозге цыплят 60-ти дней жизни, как и у 30-ти дневных, в условиях хронической гипоксической гипоксии, происходит усиление эритропоэза в костном мозге

Хроническая гипоксическая гипоксия оказывает влияние на количество молодых форм гранулоцитов После первого сеанса гипоксии наблюдается уменьшение метами-элоцигов псевдоэозинофильных и псевдоэозинофильных миелоцитов Так же наблюда-

ется тенденция уменьшения клеток гранулоцитарного ряда в 1,5 раза На этом фоне выявляется увеличение сегментоядерных псевдоэозинофилов

После одного сеанса гипоксии выявляется лимфоцитоз С увеличением в крови зрелых форм лимфоцитов защитная функция белой крови усиливается При продолжении воздействия гипоксии уровень клеток лимфоидной группы приближается к норме, что обусловлено снижением выброса молодых форм в периферическую кровь При адаптации к гипоксическому состоянию после пяти сеансов происходит формирование специфического иммунитета в организме цыплят

Таблица 9

Миелограмма цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 60 дней жизни в условиях

хронической гипоксической гипоксии млн/100г живой массы (М±т)

Клеточный элемент Кросс «Родонит» 60 дн Кросс «Смена 2» 60 дн

контроль 1 сеанс 5 сеанс контроль 1 сеанс 5 сеанс

Миэлобласты 2,1±0,05 1,9*0,05 0,9*0,1* 1,0*0,1.. 0,9*0,1«. 0,8*0,1

Промиэлоциты 3,6*0,1 0,8*0,1* 0,7*0,1* 2,0*0,1« 1,4*0,1« 0,7*0,05*

Миэл псевдоэоз 4,2*0,03 2,7±0,05» 2,8±0,1* 2,5*0,1« 1,8*0,1*.. 2,4*0,1

эозинофильные 5,0*0,2 4,5±0,1 2,3*0,1* 0,6*0,1« 0,5*0,1.. 0,2*0,1*..

Метамиэл псевдэоз 4,3*0,1 2,8*0,1* 0,6*0,1* 4,0±0,1 2,8*0,1* 0,7*0,1*

эозинофильные 7,0*0,7 3,8*0,2* 1,9*0,3* 5,4*0,3« 2,7*0,2*.. 1,8*0,2*

базофильные 0,5±0,1 0,3*0,1 0,2*0,05 0,6*0,2 0,5*0,2 0,3*0,1

Пал-е псевдоэоз-ы 3,640,1 3,1*0,2 3,5*0,1 3,3*0,2 1,7*0,1*- 3,0*0,1..

эозинофилы 3,2*0,2 1,5±0,1* 1,3*0,1* 1,3*0,1« 1,1*0,1 0,9*0,1

базофилы 1,2*0,1 0,7*0,2* - 0,4*0,1« 0,2*0,05.. -

Сегм-е псевдоэоз 3,6*0,3 6,2*0,7* 3,5*0,8 2,9*0,4« 6,2*1,1* 2,8*0,4

эозинофилы 3,7*0,4 1,8±0,3* 0,8*0,2* 3,6*0,2 1,8*0,3* 0,3*0,1*

базофилы 0,5*0,2 0,1±0,03 - 0,1*0,03 0,04*0,02« -

Всего гранулоц 42,5*0,5 30,1*0,5* 18,5±0,3* 27,7*0,5.. 22,6*0,4*« 13,9*0,3

Проэритр и пронор 3,8*0,3 6,1*0,6* 4,7±0,4 3,9*0,3 6,8*0,4* 4,6*0,3

Эритробл и нормобл 59,0±3,0 91,3±3,5» 70,3*4,3* 29,0*2,5« 67,5*4,4*« 42,0*3,7*«

Кл лимфоидной гр 3,1*0,2 5,040,4* 4,5*0,3* 4,6*0,5«. 8,4*0,6*» 8,0*0,8*..

Моноцигарной гр 5,040,7 4,5±0,7 3,8±0,7* 4,7*0,6 2,7*0,4*.. 1,2*0,3*«

Мегакариоцитар гр 1,3±0,4 0,7*0,2 - 1,2*0,4 0,6*0,2* -

Гистиоцигарные кл 1,6±0,4 0,8±0,3* 0,1±0,03 0,2*0,1« 0,1*0,04» 0,01*0,00«

Плазматические кл 0,7*0,2 0,2*0,1 0,01*0,01* 0,1*0,04.. 0,01*0,01« -

Ретикулоэнд-е кл 0,9*0,2 1,8*0,3* 0,7*0,2 0,9*0,2 2,7*0,5*.. 1,4*0,3*«

Кл в стадиях митоза 0,8*0,2 0,1*0,03 0,04*0,01 2,2*0,4«. 1,1*0,4*.. 0,3*0,1*«

Общкл косг мозга 34,7*1,9 31,3*2,1 26,9*2,2* 46,4*1,5» 39,9*1,6* 32,6*1,4*«

*- различия достоверны по отношению к контролю (р < 0,05)

различия достоверны по отношению к кроссу «Родонит» (р < 0,05)

Таким образом, анализ результатов исследования костномозгового пунктата выявляет закономерность показателей у птиц 60-ти дней жизни кроссов «Родонит» и «Смена 2», действие на организм цыплят хронической гипоксической гипоксии в течение 6 сеансов приводит к изменениям клеточного состава костного мозга В пределах миело-идного ряда наблюдается уменьшение пролиферативного гранулоцитарного пула, за счет снижения количества молодых форм Относительное содержание зрелых грануло-цитов напротив повышается Миелограмма отражает увеличение количества ретикуло-эндотелиальных клеток и клеток лимфоидной группы больше, чем в 2 раза, проэрит-робластов и пронормоцитов примерно в 2 раза, также как и эритробластов и нормобла-стов, что говорит об усиление эритропоэза и защитной функции белой крови

Именно в этот период у цыплят отмечается выраженное изменение гематологических показателей и гемоглобинового профиля, заключающееся в возрастании гематологических показателей и доли гемоглобина Б при сокращении НЬА, это не противоречит теории Болотникова И А и Соловьева ЮВ (1980), утверждавших, что при стрессовых ситуациях происходит мобилизация и выход зрелых клеток в кровь из костного мозга

Таким образом, при моделировании хронической гипоксической гипоксии происходит усиление эритропоэза в красном костном мозге, что приводит к 4-х кратному увеличению количества эритроцитов в периферической крови к 5-му сеансу за счет эмиссии их из красного костного мозга в общий кровоток, существенному повышению в крови общего количества гемоглобина, гематокрига, существенным изменениям в соотношении изоформ гемоглобина в сторону увеличения содержания НЬБ А при адаптации организма цыплят к недостатку кислорода на 6-е сутки после воздействия происходит постепенное возвращение данных показателей к исходному состоянию Отсюда можно сделать вывод, что технологические стрессы будут отражаться на организме цыплят 60-ти дней жизни на 5-е сутки, а изменение в соотношении изоформ гемоглобинов А и Б, в этом случае, можно использовать как маркер для определения этих изменений

Заключение

На основании полученных результатов изучения механизмов, изменения соотношения между изоформами гемоглобина крови у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза в индивидуальном развитии и при действии на организм гипоксической гипоксии можно сделать следующие выводы

1 Изменения соотношения между изоформами гемоглобина в крови цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза коренным образом взаимосвязаны с возрастными физиологическими и индивидуальными породными особенностями данных кроссов Это подтверждается тем, что в возрасте 15 и 60 дней жизни имеет место диссоциация НЬ А на 2 подфракции, и этот же возрастной период соответствует высоким гематологическим показателям А в возрасте 30-ти дней жизни диссоциация НЬ А происходит только в крови цыплят кросса «Смена 2», в то время как у цыплят кросса «Родонит» подобной диссоциации не наблюдается Эти изменения по времени совпадают с периодом интенсивного роста и развития цыплят, структурно-функциональными изменениями кожного покрова (формирование юве-нального оперения, развитие мышечного аппарата перьевых фолликулов, образование микроскладок кожного покрова и последующая замена ювенального оперения дефинитивным) и установлением адаптации к температурным колебаниям внешней среды Так же, наблюдаются существенные различия в соотношении подфракций НЬ А между цыплятами кроссов «Родонит» и «Смена 2» Следовательно, по данным интерьерным показателям можно отличить мясной кросс от яичного, и от других видов птиц соответственно

2 При действии на организм хронической гипоксической гипоксии, наиболее ярко выраженные изменения наблюдаются на 4 - 5-е сутки опыта Происходит увеличение концентрации эритроцитов, общего количества гемоглобина, гематокритной величины в периферической крови и усиление костномозгового эритропоэза при значительном снижении среднего объема эритроцитов и цветного показателя, и изменение в соотношении изоформ гемоглобина в сторону увеличения содержания НЬ Б и соответственно

уменьшения НЪ А А при адаптации организма цыплят к недостатку кислорода на 6-е сутки после воздействия происходит постепенное возвращение данных показателей к исходному состоянию Следовательно, технологические стрессы будут отражаться на организме цыплят на 4 - 5-е сутки, а изменение в соотношении изоформ гемоглобина, в этом случае, можно использовать как маркер д ля определения этих изменений

IV. ВЫВОДЫ

1 Электрофоретически в крови цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» можно выделить два типа взрослого гемоглобина - НЬ А и НЬ Б Под влиянием возрастных физиологических изменений и породных особенностей молекула гемоглобина А может диссоциировать на 2 подфракции, у цыплят кросса «Родонит» в возрасте 15, 60 дней жизни, а у цыплят кросса «Смена 2» - в возрасте 15,30 и 60 дней жизни

2 Соотношение между отдельными фракциями гемоглобина цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» непостоянно на протяжении жизни и коренным образом зависит от возрастных физиологических изменений организма, породных особенностей и действия различных неблагоприятных факторов

3 При моделировании хронической гипоксической гипоксии у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни происходит усиление эршропоэза, что приводит к 4-х кратному увеличению количества эритроцитов в периферической крови к 4 -5-му сеансу за счет эмиссии их из красного костного мозга в общий кровоток, а также существенному изменению остальных показателей красной крови

4 Действие хронической гипоксической гипоксии на организм цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни приводит к изменению соотношения изоформ гемоглобина в сторону увеличения содержания НЬБ

5 Цыплята кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни адаптируются к условиям хронической гипоксической гипоксии на 6-е сутки после воздействия

V. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

В настоящее время решение проблемы адаптации птиц в условиях промышленного птицеводства к действию различных технологических стрессовых факторов, оказывающих огромное влияние на здоровье, функциональные и продуктивные способности птиц, является одной из основных задач птицеводства и ветеринарии, в связи с чем, считаем целесообразным, рекомендовать следующее

1 Повышать устойчивость организма цыплят к действию повреждающих стрессовых факторов, формированием комплекса адаптационных реакций начиная с суточного возраста

2 Полученные данные позволяют использовать гемоглобиновый профиль для оценки качественных изменений эршропоэза и адаптации организма при стрессовых состояниях, могут служить основой для разработки методов повышения резистентности организма цыплят к действию стрессовых факторов и новых подходов к обеспечению условий содержания и ухода молодняка в промышленном птицеводстве, в диагностике гематологических заболеваний

3 Любые изменения в технологическом процессе будут отражаться на организме цыплят на 4 - 5-е сутки, а изменения в соотношении между изоформами гемоглобина А и Б можно использовать как маркер при определении реакции организма на стресс-воздействие

4 Рекомендуем для репродукторов 1, 2 порядка и госплемптицезаводов осуществлять контроль за интенсивностью эритропоэза и контрольное определение гемоглоби-нового профиля у цыплят в раннем посгаатальном периоде онтогенеза

5 Рекомендуем использовать в селекционной работе моделирование гипоксической гипоксии для отбора наиболее устойчивых к стрессовому воздействию цыплят

6 Теоретические разработки диссертации рекомендуется использовать для внедрения в учебный процесс, при чтении лекций, написании специальной литературы

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Кондратьев Р Б Влияние возраста на гетерогенность гемоглобина в крови кур /Р Б Кондратьев, H В Садовников // Журнал для специалистов птицеводческих и животноводческих хозяйств «Био» №7 [22] Екатеринбург, 2002 С 20

2 Кондратьев Р Б Предварительная идентификация гетерогенных форм гемоглобина в крови кур /Р Б Кондратьев, H В Садовников // Журнал для специалистов птицеводческих и животноводческих хозяйств «Био» №8 [23] Екатеринбург, 2002 С 9

3 Кондратьев Р Б Влияние породы на гетерогенность гемоглобина в крови кур /Р Б Кондратьев, H В Садовников // Журнал для специалистов птицеводческих и животноводческих хозяйств «Био» №3 [30] Екатеринбург, 2003 С 23

4 Кондратьев Р Б Гетерогенные фракции гемоглобина у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» в раннем посгаатальном периоде развития /Р Б Кондратьев, H В Садовников // Научные труды I съезда физиологов СНГ, Сб статей, т 2, Москва, 2005 -№768 С 268

5 Кондратьев Р Б Адаптация организма цыплят в условиях гипоксической гипоксии /Р Б Кондратьев, H В Садовников // Материалы международной научной конференции по патологии животных Санкт-Петербург, 2006 С 116

6 Кондратьев Р Б Адаптация организма цыплят 60 дней жизни в условиях гипоксической гипоксии /Р Б Кондратьев, H В Садовников // Особенности физиологических функций животных в связи с возрастом, составом рациона, продуктивностью, экологией и этологией Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им НЭ Баумана, т 185 Казань, 2006 С 154-160

Автореферат диссертации

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Кондратьев Роман Борисович

Оценка кроветворной функции красного костного мозга у цыплят раннего постнатального периода онтогенеза в условиях нормального и измененного эритропоэза

Лицензия на издательскую деятельность ИД № 00069, выдана 10 09 99 г Подписано в печать 01 05 2007 г Бумага ВХИ Формат 60x84 '/|6

Печать офсетная Уел печ л-1,25 Учиздл 1,5 Тираж 100 экз ООО «Уральское издательство», 620017, г Екатеринбург, а/я 822 e-mail uralizdat@mail ru

Отпечатано в ООО «ИРА УТК»

620075, г Екатеринбург, ул К Либкнехта, 42

Актуальность исследования. Изучение изменений гетерогенной системы гемоглобина крови цыплят, как в норме, так и при действии на организм экстремальных факторов приобретает в настоящее время особую актуальность в связи с распространением гематотропных влияний на организм, ростом числа гематологических заболеваний у цыплят.

В связи с тем, что многие заболевания связаны с изменением кислородного режима в тканях, особое место в обеспечении адаптивных и компенсаторных процессов занимает газотранспортная функция крови.

Познание основных закономерностей гетерогенной системы гемоглобина в крови молодняка кур в раннем постнатальном периоде онтогенеза позволяет целенаправленно воздействовать на их рост и развитие, на продуктивные способности.

Одна из важнейших функций организма, определяющая характер и уровень энергетических процессов - дыхание или обеспечение его кислородом. У более развитых представителей животного мира обеспечение организма кислородом осуществляется при помощи дыхательных пигментов крови. В настоящее время известно четыре типа дыхательных пигментов животных: гемоглобин, гемоцианин, хлорокруорин, гемеритрин. Наиболее распространенным дыхательным пигментом является гемоглобин [94, 95, 96].

Исследования многих лет характеризуются значительным прогрессом в понимании процессов гетерогенности гемоглобина в крови млекопитающих [75, 78, 79, 163, 164, 165, 168, 175] и некоторых видов птиц [94, 263, 317] на разных стадиях онтогенеза. В крови большинства живых организмов можно выявить несколько типов гемоглобина, которые принято называть изоформами, что дает определенные преимущества организму в процессе приспособления к условиям среды [75, 108]. Так, у птиц в крови циркулирует две изоформы гемоглобина [231, 232, 236, 276], у крысы шесть [180, 186], у взрослого человека - три изоформы гемоглобина [75, 186], различающиеся по молекулярной структуре. Эти факты легли в основу представлений о гетерогенной системе гемоглобина [181,186].

В данный период времени о механизмах синтеза гемоглобина, смене его типов в процессе онтогенеза у человека и многих видов животных имеется достаточно сведений [336]. В то время как вопрос о состоянии системы гемоглобина крови птиц, в частости кур в ранние постнатальные периоды онтогенеза в литературе не достаточно освещен, но от этого он не становится менее актуальным.

С помощью физико-химических методов исследования ученым удалось установить неоднородность гемоглобина в крови кур [66, 227, 233, 237,264, 277, 300, 318]. Гемоглобины могут обладать множеством различных форм, но кроме этого соотношение изоформ гемоглобина может изменяться на различных стадиях развития и цикла жизни кур [263]. В настоящее время известны 3 формы нормального гемоглобина птиц. Эмбриональный гемоглобин - характеризуется высокой кислото- и щелочеустой-чивостью и малой электрофоретической подвижностью [233], представляющий основную массу гемоглобина в эмбриональный период и первую неделю жизни после вылупления [221, 265, 318]. Гемоглобины А и D - гемоглобины постнатального периода онтогенеза птиц, при этом НЬА является доминирующим [233,276, 300].

С переходом кроветворения из желточного мешка к печеночному и селезенке в крови появляются взрослые гемоглобины. У зародышей продуцируется преимущественно эмбриональный гемоглобин, у взрослых кур — гемоглобины А и D [232,263, 276]. В эритроидных элементах печени и костного мозга гемоглобины находятся одновременно [27, 103, 108, 111, 143, 147,149].

Согласно литературным данным гемоглобин D цыпленка является генетически детерминированным эквивалентом гемоглобина А человека [276].

В научной литературе многими авторами описаны изменения гемо-глобинового профиля при действии экстремальных факторов и в частности гипоксической гипоксии у человека и некоторых видов животных [2, 16, 32, 58,127,175,181,186, 206, 213]. Так, у человека в гипоксических ситуациях происходит возрастание содержания фетального гемоглобина, свойственного плодному периоду развития [186], а у животных - фракций, эквивалентных этому типу гемоглобина [98, 186]. У птиц же это явление практически не изучено. Однако, свойства отдельных фракций, формирование гемоглобинового профиля в процессе онтогенеза, его изменения в экстремальных условиях, а так же механизмы, регулирующие соотношение между фракциями гемоглобина имеют огромное значение в адаптации организма цыплят при стрессовых ситуациях.

Роль крови в газотранспортной функции при меняющихся условиях тканевой среды, как при физиологических стрессах, так и в гипоксических условиях имеет большое значение [61, 186, 214, 215, 217, 327]. Что ставит вопрос о физиологическом смысле различий физико-химических свойств изоформ гемоглобина и их месте в адаптации организма цыплят к экстремальным воздействиям. Тем более, что с помощью метода мессбауэров-ской спектроскопии, показана зависимость электронной структуры железа и стереохимии активного центра от молекулярной структуры глобина [138].

Вышеизложенное свидетельствует о том, что физиологическое значение гетерогенности гемоглобина, а также роли изоформ в адаптации организма цыплят к стрессовым воздействиям требует специальных, целенаправленных исследований.

Цель исследования:

Изучить качественные и количественные изменения красной крови цыплят промышленных кроссов в раннем постнатальном периоде онтогенеза в условиях нормального и измененного эритропоэза.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние возрастных физиологических и породных особенностей на изменение гемоглобинового профиля и гематологических показателей у цыплят 4-х линейных гибридов кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза.

2. Изучить качественные изменения красной крови у цыплят 4-х линейных гибридов кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни при действии на организм хронической гипоксической гипоксии.

3. Определить скорость адаптивных реакций при действии на организм гипоксической гипоксии у цыплят 4-х линейных гибридов кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни.

Научная новизна исследования:

1. Впервые установлено у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза наличие гетерогенных форм гемоглобина.

2. Впервые изучено и доказано влияние возрастных физиологических и породных особенностей на качественные изменения красной крови у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза.

3. Установлено, что при адаптации к гипоксическому воздействию, большую роль играет изменение соотношения между изоформами гемоглобина А и D, а так же качественная перестройка эритропоэза.

Теоретическая значимость работы

Результаты нашего исследования расширяют современные представления об участии эритропоэза в адаптации организма к стрессовым воздействиям у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза. Перестройка эритропоэза направлена на изменение числа клеток, в большем количестве содержащих адаптивно значимые фракции гемоглобина. Полученные данные показывают, что, наряду с изменениями интенсивности эритропоэза, значительную роль в адаптации к стрессовым воздействиям играет и соотношение между фракциями гемоглобина, отличающимися по своим физико-химическим свойствам. Их содержание в крови во многом зависит от породных и возрастных физиологических особенностей птиц.

Практическая значимость работы

Полученные данные позволяют использовать гемоглобиновый профиль для оценки качественных изменений эритропоэза и адаптации организма при стрессовых состояниях, могут служить основой для разработки методов повышения резистентности организма цыплят к действию стрессовых факторов и новых подходов к обеспечению условий содержания и ухода молодняка в промышленном птицеводстве, в диагностике гематологических заболеваний.

Положения, выносимые на защиту

1. Влияние возрастных физиологических и породных особенностей на качественные изменения красной крови у цыплят 4-х линейных гибридов кроссов «Родонит» и «Смена 2» в раннем постнатальном периоде онтогенеза.

2. Изменения гемоглобинового профиля и гематологических показателей при действии на организм гипоксической гипоксии у цыплят кроссов

Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни обусловлены качественной перестройкой эритропоэза.

3. Скорость адаптивных реакций при действии на организм гипоксиче-ской гипоксии у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни. При действии на организм гипоксической гипоксии происходит изменение гематологических показателей и гемоглобинового профиля на 4 - 5-е сутки опыта.

Апробация работы

Материалы диссертационной работы предоставлены и обсуждены:

1. На заседании кафедры физиологии и биохимии УрГСХА (Екатеринбург 2002г).

2. Заседании ученого совета факультета ветеринарной медицины УрГСХА (Екатеринбург 2003г).

3. Студенческой научной конференции по физиологии (Екатеринбург 2005г).

4. I Съезде физиологов стран СНГ (Сочи, Дагомыс 2005г).

5. Научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых-аграрников «Молодежь и наука - 2006» (Екатеринбург 2006г).

6. Международной конференции по патофизиологии животных (Санкт-Петербург 2006г.)

7. Всероссийском координационном совещании и научно-практическом семинаре «Ветеринарная профилактика в промышленном птицеводстве» (Екатеринбург 2006г).

8. Научно-практической конференции «Особенности физиологических функций животных в связи с возрастом, составом рациона, продуктивностью, экологией и этологией» (Казань 2006г.)

9. Расширенном заседании кафедры физиологии и биохимии УрГСХА (Екатеринбург 2007г).

Публикации результатов исследований

По материалам диссертации в трудах, журналах и материалах научных конференций опубликовано 6 печатных работ:

1. Кондратьев Р.Б. Влияние возраста на гетерогенность гемоглобина в крови кур /Р.Б. Кондратьев, Н.В. Садовников // Журнал для специалистов птицеводческих и животноводческих хозяйств «Био» №7 [22]. Екатеринбург, 2002. С. 20.

2. Кондратьев Р.Б. Предварительная идентификация гетерогенных форм гемоглобина в крови кур /Р.Б. Кондратьев, Н.В. Садовников // Журнал для специалистов птицеводческих и животноводческих хозяйств «Био» №8 [23]. Екатеринбург, 2002. С. 9.

3. Кондратьев Р.Б. Влияние породы на гетерогенность гемоглобина в крови кур /Р.Б. Кондратьев, Н.В. Садовников // Журнал для специалистов птицеводческих и животноводческих хозяйств «Био» №3 [30]. Екатеринбург, 2003. С. 23.

4. Кондратьев Р.Б. Гетерогенные фракции гемоглобина у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» в раннем постнатальном периоде развития /Р.Б. Кондратьев, Н.В. Садовников // Научные труды I съезда физиологов СНГ, Сб. статей, т. 2; Москва, 2005 - №768 С. 268.

5. Кондратьев Р.Б. Адаптация организма цыплят в условиях гипоксиче-ской гипоксии /Р.Б. Кондратьев, Н.В. Садовников // Материалы международной научной конференции по патологии животных. Санкт-Петербург, 2006. С. 116.

6. Кондратьев Р.Б. Адаптация организма цыплят 60 дней жизни в условиях гипоксической гипоксии /Р.Б. Кондратьев, Н.В. Садовников // Особенности физиологических функций животных в связи с возрастом, составом рациона, продуктивностью, экологией и этологией. Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана, т. 185. Казань, 2006. С. 154-160.

Внедрение

Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедре физиологии и биохимии животных Уральской государственной сельскохозяйственной академии.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Одна из важнейших функций организма, определяющая характер и уровень энергетических процессов - дыхание или обеспечение его кислородом.

В процессе эволюции сформировались специфические газотранспортные белки - гемоглобины. Гемоглобин имеет важнейшее биологическое значение, как наиболее широко распространенный среди современных животных дыхательный пигмент, относящийся к сложным белкам - хро-мопротеидам, обладающий уникальными свойствами, связанными с транспортом кислорода и углекислоты [94].

Данные сравнительных физиолого-биохимических исследований ге-моглобинов крови различных животных выявили не только межвидовые, но и внутривидовые различия гемоглобинов [94].

Установление гетерогенной природы гемоглобинов стало возможным благодаря применению целого комплекса точнейших методов исследования, характеризующих их физико-химические свойства - таких, как электрофорез, хроматография, щелочная денатурация, кристаллизация, спектрометрия, сродство к кислороду и др. При помощи этих методов исследования было показано наличие нескольких разновидностей гемоглобина в крови большинства видов животных [94, 163, 165, 175, 176, 181, 218, 227,236,261,264,273,316,343].

Среди птиц только у цесарки обнаружен гомогенный гемоглобин. Гемоглобин всех остальных обследованных птиц (кур, уток, гусей, голубей, воробьев) содержит два компонента [94,226,233,264,276,317].

Типы птичьего гемоглобина, как и гемоглобина других животных, могут изменяться на различных стадиях развития и цикла жизни и обладать множеством различных форм [263]. У многих животных некоторые изо-формы гемоглобина отличаются друг от друга по функциональным свойствам [94,236, 261, 345]. Гемоглобин является единственным путём доставки кислорода к тканям, а следовательно, изменение его свойств играет адаптивную роль в меняющихся условиях среды обитания. В связи с этим встает вопрос о приспособительной значимости изменения соотношения изо-форм гемоглобина в условиях жизнедеятельности организма. В доступной научной литературе показано, что такие сдвиги имеют место при ряде функциональных и патологических состояний организма. Однако, до сих пор остаются невыясненными механизмы этих изменений.

7. ВЫВОДЫ

1. Электрофоретически в крови цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» можно выделить два типа взрослого гемоглобина - НЬ А и Hb D. Под влиянием возрастных физиологических изменений и породных особенностей молекула гемоглобина А может диссоциировать на 2 подфракции, у цыплят кросса «Родонит» в возрасте 15, 60 дней жизни, а у цыплят кросса «Смена 2» - в возрасте 15,30 и 60 дней.

2. Соотношение между отдельными фракциями гемоглобина цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» непостоянно на протяжении жизни и, коренным образом, зависит от возрастных физиологических изменений организма, породных особенностей и действия различных неблагоприятных факторов.

3. При моделировании хронической гипоксической гипоксии у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни происходит усиление эритропоэза, что приводит к 4-х кратному увеличению количества эритроцитов в периферической крови к 4 - 5-му сеансу за счет эмиссии их из красного костного мозга в общий кровоток, а также существенному изменению остальных показателей красной крови.

4. Действие хронической гипоксической гипоксии на организм цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни приводит к изменению соотношения изоформ гемоглобина в сторону увеличения содержания HbD.

5. Цыплята кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни адаптируются к условиям хронической гипоксической гипоксии на 6-е сутки после воздействия.

8. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДА a a s ■ s

В настоящее время решение проблемы адаптации птиц в условиях промышленного птицеводства к действию различных технологических стрессовых факторов, оказывающих огромное влияние на здоровье, функциональные и продуктивные способности птиц, является одной из основных задач птицеводства и ветеринарии, в связи с чем, считаем целесообразным, рекомендовать следующее:

1. Повышать устойчивость организма цыплят к действию повреждающих стрессовых факторов, формированием комплекса адаптационных реакций начиная с суточного возраста.

2. Полученные данные позволяют использовать гемоглобнновый профиль для оценки качественных изменений эритропоэза и адаптации организма при стрессовых состояниях, могут служить основой для разработки методов повышения резистентности организма цыплят к действию стрессовых факторов и новых подходов к обеспечению условий содержания и ухода молодняка в промышленном птицеводстве, в диагностике гематологических заболеваний.

3. Любые изменения в технологическом процессе будут отражаться на организме цыплят на 4 - 5-е сутки, а изменения в соотношении между изоформами гемоглобина А и D можно использовать, как маркер при определении реакции организма на стресс-воздействие.

4. Рекомендуем для репродукторов 1, 2 порядка и госплемптицезаводов осуществлять контроль за интенсивностью эритропоэза и контрольное определение гемоглобинового профиля у цыплят в раннем постнатальном периоде онтогенеза.

5. Рекомендуем использовать в селекционной работе моделирование гипоксической гипоксии для отбора наиболее устойчивых к стрессовому воздействию цыплят.

6. Теоретические разработки диссертации рекомендуется использовать для внедрения в учебный процесс, при чтении лекций, написании специальной литературы.

Заключение

Изменения соотношения между изоформами гемоглобина в крови цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза коренным образом взаимосвязаны с возрастными физиологическими и индивидуальными породными особенностями данных кроссов. Это подтверждается тем, что в возрасте 15 и 60 дней жизни имеет место диссоциация НЬ А на 2 подфракции, и этот же возрастной период соответствует высоким гематологическим показателям. А в возрасте 30-ти дней жизни диссоциация НЬ А происходит только в крови цыплят кросса «Смена 2», в то время как у цыплят кросса «Родонит» подобной диссоциации не наблюдается. Эти изменения по времени совпадают с периодом интенсивного роста и развития цыплят, структурно-функциональными изменениями кожного покрова (формирование ювенального оперения, развитие мышечного аппарата перьевых фолликулов, образование микроскладок кожного покрова и последующая замена ювенального оперения дефинитивным) и установлением адаптации к температурным колебаниям внешней среды. Также, наблюдаются существенные различия в соотношении подфракций НЬ А между цыплятами кроссов «Родонит» и «Смена 2». Следовательно, по данным интерьерным показателям можно отличить мясной кросс от яичного и от других видов птиц, соответственно.

При действии на организм хронической гипоксической гипоксии, наиболее ярко выраженные изменения наблюдаются на 4-е, 5-е сутки опыта. Происходит увеличение концентрации эритроцитов, общего количества гемоглобина, гематокригной величины в периферической крови и усиление костномозгового эритропоэза при значительном снижении среднего объема эритроцитов и цветного показателя. Изменение в соотношении изоформ гемоглобина в сторону увеличения содержания Hb D и, соответственно, уменьшения НЬ А. А при адаптации организма цыплят к недостатку кислорода на 6-е сутки после воздействия происходит постепенное возвращение данных показателей к исходному состоянию. Следовательно, технологические стрессы будут отражаться на организме цыплят на 4 - 5-е сутки, а изменение в соотношении изоформ гемоглобина, в этом случае, можно использовать, как маркер для определения этих изменений.

6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Функциональная активность системы крови имеет огромное значение в комплексе механизмов адаптации организма птиц к стрессовым факторам. Одним из важнейших механизмов является изменение системы красной крови, через которую осуществляется газотранспортная функция.

В настоящее время доказана роль стресса как главного или вспомогательного этиологического фактора многих заболеваний. По существу это означает, что при определенных условиях, стресс-синдром из общего неспецифического звена адаптации организма к различным факторам среды превращается в общее неспецифическое звено патогенеза заболеваний, ограничивающих функциональные и продуктивные способности кур. Механизмы компенсации, возникающие в этих случаях в здоровом организме, по-видимому, генетически запрограммированы и имеют определенное приспособительное значение в формировании комплекса адаптационных реакций, направленных на повышение устойчивости организма к экстремальным факторам. Так, предварительная адаптация к стрессам активирует процесс фиксации временных связей, меняет поведение кур в конфликтных ситуациях в выгодном для организма направлении, увеличивает резистентность организма, активизирует деятельность жизненно важных систем и тормозит развитие многих заболеваний и связанных с ними им-мунодефицитных состояний.

В последние годы (1981 - 1987) широкое признание получила концепция Ф.З. Меерсона о стресс-лимитирующих системах организма, основанная на многолетнем изучении автором адаптации к стрессорным ситуациям [120,122, 123, 185].

По данным Ф.З. Меерсона (1986) [120,122,123], общая адаптационная стресс-реакция не только предшествует развитию устойчивой адаптации, но и играет важную роль в ее формировании. Это обеспечивается, во-первых, путем мобилизации энергетических и структурных ресурсов организма и направленности их перераспределения в сторону преимущественного обеспечения систем, ответственных за адаптацию к данному фактору, в которых формируется системный структурный след; во-вторых, путем прямого влияния стрессорных гормонов и медиаторов на метаболизм и функцию клеток системы, где формируется системный структурный след; в-третьих, многообразным прямым действием стрессорных гормонов на систему, ответственную за адаптацию, - липотропный эффект стресса, постстрессорная активация синтеза белка, стрессорное повышение резистентности, антиоксидантный эффект.

По мере формирования системного структурного следа и устойчивой адаптации нарушения гомеостаза, составляющие стимул стресс-реакции постепенно исчезают и сама стресс-реакция, сыграв свою роль в становлении адаптации, постепенно ликвидируется. Это представление автора определяет соотношение между стрессом и адаптацией и позволяет говорить ему, что стресс-реакция сложилась в процессе эволюции как необходимое, неспецифическое звено более сложного целостного механизма адаптации [120,122,123,185].

Среди множества экстремальных факторов гипоксия занимает особое место. Состояние напряжения различных физиологических механизмов, наблюдаемое в условиях высокогорной адаптации, при резких колебаниях температуры окружающей среды и т.д. приводит к нарушению кислородного режима в организме. Способность организма переносить различные степени кислородного голодания относится к числу эволюционно древних и наиболее совершенных средств адаптации организма [6]. Согласно этой концепции, Н.А. Агаджанян и соавт. (1987) [6] пришли к заключению, что особенности реакции на гипоксию в значительной мере характеризуют резервные приспособительные возможности организма при действии различных неблагоприятных факторов.

Для оценки резервов адаптации организма к экстремальным условиям внешней среды, в частности к гипоксии, важно найти критерии этой адаптации. Н.А. Агаджанян и соавт. (1987) предложили следующие критерии адаптации организма, связанные с недостатком кислорода [6]:

1. Стабилизация физиологических реакций организма, ответственных за доставку и обмен газов в тканях. Новый экономический уровень гомеостаза, адекватный среде обитания.

2. Максимальное потребление кислорода, являющееся устойчивой индивидуальной константой, характеризующей завершенность адаптации и уровень окислительных процессов, идущих внутри клеток. Чем выше уровень максимального потребления кислорода, тем выше продуктивность и стабильнее адаптация.

3. Устойчивый уровень оптимальной нейрогуморальной регуляции, адекватной среде обитания.

4. Повышение чувствительности дыхательного центра к углекислоте и снижение - к недостатку кислорода.

5. Восстановление функциональных и продуктивных способностей.

6. Повышение устойчивости к суперэкстремальным воздействиям, например, к острой гипоксии при разрежении атмосферы в барокамере.

7. Хронорезистенгность, устранение десинхроноза.

8. Компенсация снижения специфической иммунобиологической резистентности повышением неспецифической резистентности организма к инфекционным заболеваниям.

9. Повышение осмотической резистентности эритроцитов. Повышение содержания гемоглобина крови относительно массы тела и высоты местности над уровнем моря.

Ю.Воспроизведение здорового потомства.

В итоге перечисленные критерии адаптации сводятся к более экономичному уровню функционирования организма не только на системном, органном, но и на клеточном, субклеточном и молекулярном уровнях [6,185].

Критерии адаптации организма, связанные с недостатком кислорода, предложенные Н.А. Агаджаняном и соавт. (1987) [6] легли в основу нашей работы.

Одним из важнейших качественных показателей красной крови является её гемоглобиновый профиль, то есть соотношение между отдельными изоформами гемоглобина. До настоящего времени полностью не расшифрована ни адаптивная значимость явления гетерогенности, ни механизмы изменений соотношения между отдельными изоформами.

Гетерогенность гемоглобина является общебиологическим явлением, присущим большинству позвоночных животных. При этом количество изоформ гемоглобина и соотношение между ними во многом определяется уровнем эволюционного развития животного, его видовой принадлежностью, а также используемым методом. Так, с помощью электрофореза в полиакриламидном геле у птиц в крови циркулирует две изоформы гемоглобина [232, 238], у крысы - шесть [164,170,175,186], у взрослого человека - три изоформы гемоглобина [75, 94, 186], различающиеся по молекулярной структуре. Эти факты легли в основу представлений о гетерогенной системе гемоглобина [181,186].

Гемоглобиновый профиль кур претерпевает в течение онтогенеза существенные изменения. Так, известно, что у цыплят в онтогенезе происходит смена двух гемоглобиновых систем. В эмбриональный период в крови доминирует эмбриональный гемоглобин, тогда как в постнатальный период онтогенеза преобладает гемоглобин А, но имеется также гемоглобин D. Особенностью изоформ гемоглобина кур является неравномерное распределение их в онтогенезе [232]. Соотношение изоформ взрослого гемоглобина цыплят коренным образом зависит от возрастных физиологических изменений организма, породных особенностей и действия различных неблагоприятных факторов. Кроме того, при некоторых условиях молекула гемоглобина может диссоциировать на две части, каждая из которых содержит две а- или две З-цепи [94,328].

Нами были исследованы изменения гемоглобинового профиля и гематологических показателей цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» раннего постнатального периода онтогенеза в индивидуальном развитии и при действии на организм гипоксической гипоксии. Было установлено, что наиболее ярко выраженные изменения гематологических показателей и соотношения изоформ гемоглобина происходят, в индивидуальном развитии, в возрасте 15, 30 и 60 дней жизни, что связано с возрастными физиологическими изменениями (периодом интенсивного роста и развития цыплят, структурно-функциональными изменениями кожного покрова (формирование ювенального оперения, развитие мышечного аппарата перьевых фолликулов, образование микроскладок кожного покрова и последующая замена ювенального оперения дефинитивным) и установлением адаптации к температурным колебаниям внешней среды), и породными особенностями. Известно, что цыплята кроссов «Родонит» и «Смена 2» отличаются высокой продуктивностью (яичной и мясной, соответственно). В связи с этим, данным кроссам присущи такие породные и физиологические особенности, как скороспелость яичных пород и интенсивный рост цыплят бройлеров. И как следствие более высокий обмен веществ, более интенсивные биохимические процессы у цыплят мясной направленности.

А при действии на организм гипоксической гипоксии, наиболее ярко выраженные изменения гематологических показателей и соотношения изоформ гемоглобина происходят на 4 - 5 сутки опыта.

Так, у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» в возрасте суток (масса от 38 до 40 грамм) мы обнаружили 2 фракции взрослого гемоглобина - НЬ А и Hb D; и значительные отличия в показателях красной крови.

В возрасте 7 дней (масса от 86 до 90 грамм) соотношение фракций и количество гемоглобинов не подвергалось существенным изменениям. Но при этом, наблюдается статистически достоверное увеличение гематологических показателей.

К 15 суткам жизни в крови цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» (масса от 171 до 232 грамм) было обнаружено разделение НЬ А на две подфракции, причем, у цыплят кросса «Родонит» наблюдается изменение соотношения изоформ в сторону увеличения Hb D, а у цыплят кросса «Смена 2», напротив, - в сторону уменьшения Hb D. 1 п/фр у цыплят яичного направления значительно ниже 2 п/фр, в то время как у цыплят бройлеров наоборот. Также, наблюдаются наиболее высокие гематологические показатели, за исключением среднего объема эритроцитов.

В возрасте 30-ти суток (масса от 293 до 1050 грамм) мы обнаруживаем у цыплят кросса «Родонит» только две фракции, диссоциации Hb А на две подфракции не наблюдается, но происходит значительное увеличение НЬ А, что, по-видимому, связано с породными и физиологическими особенностями данного кросса. У цыплят кросса «Смена 2» НЬ А, напротив, по-прежнему продолжает разделяться на две подфракции. При этом, происходит резкое снижение гематологических показателей, за исключением среднего объема эритроцитов, который у цыплят кросса «Родонит» резко повышается и достигает своего пика. Максимальная степень гемо-глобинизации эритроцитов у цыплят кросса «Родонит» соответствует максимальному процентному значению НЬ А, что также можно связать с возрастными физиологическими и породными особенностями кроссов.

В дальнейшем, с ростом и развитием, в возрасте 60 суток (масса от 727 до 1982 грамм) мы определили в крови цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» диссоциацию НЬ А на две подфракции. При этом, наблюдается статистически достоверное увеличение гематологических показателей, за исключением среднего объема эритроцитов.

В результате наших исследований электрофоретически было выделено в крови цыплят мясного и яичного направлений два типа взрослого гемоглобина - НЬ А и Hb D. Причем, наблюдается диссоциация НЬ А на 2 подфракции, у цыплят кросса «Родонит» в возрасте 15, 60 дней жизни, а у цыплят кросса «Смена 2» - в возрасте 15, 30 и 60 дней жизни. В возрасте 1 и 7 суток жизни, а у цыплят кросса «Родонит» и 30-ти, диссоциации НЬ А не наблюдалось. Что связано с возрастными физиологическими и породными особенностями кроссов.

Таким образом, проведённые исследования свидетельствуют о наличии вполне определённых закономерностей распределения изоформ гемоглобина в эритроцитах крови обоих кроссов «Родонит» и «Смена 2». При этом на количество и соотношение выделяемых фракций оказывают влияние возрастные физиологические и породные особенности. Очевидно, что модификации гемоглобина могут быть разнообразными по природе и глубине структурных перестроек, а, следовательно, существует широкий диапазон изменений генетически обусловленной неоднородности гемоглобина. Поэтому, необходим учет всех факторов, способствующих проявлению гетерогенности данного бежа.

Общепризнанно, что изменения гемоглобинового профиля в процессе онтогенеза отражают адаптацию организма к условиям развития.

Вместе с тем, этот факт ставит вопрос о роли соотношения мезвду отдельными изоформами в процессе адаптации к ограниченному по времени действию экстремальных факторов. На такую возможность указывает возрастание концентрации гемоглобина D при моделировании высокогорной гипоксии.

Для изучения этой проблемы нами было проведено исследование гемоглобинового профиля в условиях экстремального состояния.

В качестве экстремального состояния нами была выбрана гипокси-ческая гипоксия, характеризующаяся изменениями газотранспортной функции.

Установлено, что при действии на организм гипоксической гипоксии, наиболее ярко выраженные изменения гемоглобинового профиля, у цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни, происходят на 4 - 5 сутки.

Уже после одного 6 часового сеанса гипоксии выявляется увеличение в костном мозге доли молодых форм эритроидных клеток практически в 2 раза

Значительные изменения в соотношении фракций и гематологических показателях происходят уже после 2 сеанса гипоксии, показатель НЬ D статистически достоверно увеличивается, а НЬ А, соответственно, уменьшается. При этом мы обнаруживаем и различия между двумя кроссами. В 30-ти дневном возрасте диссоциация НЬ А на две подфракции наблюдается только у цыплят кросса «Смена 2», в то время как у 60-ти дневных цыплят диссоциация НЬ А наблюдается у обоих кроссов, что, по-видимому, связано с породными и морфогенетическими особенностями данных кроссов.

Концентрация циркулирующих эритроцитов и общее количество гемоглобина в крови экспериментальных птиц статистически достоверно увеличивается, а цветной показатель начинает снижаться. Уровень гематокрита и средний объем эритроцита увеличивается сразу же после первого сеанса, что связано с потерей жидкости организмом при гипоксии, после второго сеанса средний эритроцитарный объем начинает снижаться, при одновременном увеличении числа эритроцитов и гемотокритного показателя. На основании этого, можно утверждать о выбросе молодых эритроцитов в периферическую кровь из костного мозга, что подтверждается усилением эритропоэза в костном мозге.

Практически на протяжении всего опыта гипоксии при извлечении цыплят из барокамеры наблюдается их сильное угнетение, проявляющееся взъерошенным оперением, сонливостью, неподвижностью, отсутствием рефлекса приема корма, анемичностью сережек и слизистых оболочек.

После 3-го сеанса гипоксии, наблюдаемые нами изменения прогрессируют.

У 30-ти дневных цыплят мы обнаруживаем существенные изменения в соотношении изоформ, в сторону увеличения Hb D, на 4-е сутки опыта. У 60-ти дневных цыплят существенные изменения в соотношении изоформ мы обнаруживаем только на 5-е сутки опыта. Гематологические показатели также достигают своего пика на 4 - 5 сутки, соответственно. Следовательно, цыплята месячного возраста быстрее реагируют на гипок-сическое воздействие, чем 60-ти дневные. Отсюда можно сделать вывод, что цыплята в возрасте 30-ти дней жизни быстрее и легче адаптируются в экстремальных ситуациях, чем цыплята 60-ти дней жизни. Кроме того, значительно сильнее реагируют на гипоксическое воздействие цыплята кросса «Смена 2», чем цыплята кросса «Родонит». Следовательно, бройлеры более чувствительны к технологическим воздействиям, по сравнению с цыплятами яичного кросса.

После 6-го сеанса гипоксии соотношения изоформ гемоглобина приближается к допустимой норме у кур (30% - Hb D, 70% - НЬ А), гематологические показатели также постепенно возвращаются к исходному состоянию, что указывает на адаптацию молодняка к измененной газовой среде.

Таким образом, описанные качественные изменения красной крови, при действии на организм гипоксической гипоксии, позволяют утверждать, что при адаптации организма цыплят к недостатку кислорода, любые технологические стрессы будут отражаться на организме цыплят на 4 - 5-е сутки, а изменение в соотношении изоформ гемоглобина, в этом случае, можно использовать, как маркер для определения этих изменений.

Изменения гемоглобинового профиля цыплят при моделировании гипоксической гипоксии сопровождаются выраженными изменениями в системе гемопоэза в первые часы опыта. Они характеризуются усилением эритропоэз а, проявляющегося резким увеличением ретикулоэндотелиаль-ных клеток и молодых форм эритроидных клеток в костном мозге, что может быть расценено, как ускоренное созревание клеток, приводящее к выходу в кровоток ретикулоцитов, что приводит к увеличению концентрации эритроцитов в периферической крови. Это совпадает с мнением И. А. Болотникова и Ю.В. Соловьева (1980), утверждавших, что при стрессовых состояниях происходит мобилизация и выход зрелых клеток в кровь из костного мозга. По своим размерам эритробласты крупнее зрелых эритроцитов, в них происходят метаболические превращения, связанные с приобретением специализированной функции, которую выполняет гемоглобин - транспорт кислорода. Интенсивность синтеза гемоглобина в клетках эритроидного ряда зависит от степени их дифференцировки. Установлено, что синтез гема и глобина происходит на различных стадиях созревания эритробластов: молодые клетки более интенсивно синтезируют глобин, более зрелые - гем. На более поздних стадиях созревания клеток происходит соединение гема с глобином [27].

Одновременно с описанными изменениями происходят реакции системы гемоглобина. Уже в эти сроки наблюдается возрастание уровня гемоглобин D и сокращение содержания Hb А. Эти изменения согласуются с описанными перераспределительными реакциями. По-видимому, выходящие в кровоток молодые крупные эритроциты характеризуются более высоким содержанием гемоглобина D, в то время как зрелые мелкие эритроциты характеризуются более высоким содержанием Hb А.

После пяти сеансов гипоксии отмечается постепенное возвращение показателей к исходному состоянию: доля молодых форм эритроидных клеток приближается к допустимой норме у цыплят. В периферической крови отмечается некоторое снижение концентрации эритроцитов. Изменения гемоглобинового профиля характеризуются снижением уровня гемоглобина D при возрастании - Hb А.

Таким образом, при действии на организм цыплят кроссов «Родонит» и «Смена 2» 30 и 60 дней жизни хронической гипоксической гипоксии прослеживается взаимосвязь поступления из костного мозга в кровоток ретикулоцитов с изменениями гемоглобинового профиля в сторону возрастания содержания гемоглобина D.

На основании проведённых исследований можно прийти к заключению, что гетерогенность гемоглобина цыплят представляет собой важный элемент механизма адаптации организма к действию стрессовых факторов различной этиологии. Роль отдельных изоформ гемоглобина в адаптивных реакциях определяется их физико-химическими свойствами и газотранспортной способностью. В основе сдвига соотношения между отдельными фракциями лежат не только изменения интенсивности эритропоэза, но и качественная его перестройка, направленная на образование клеток с содержанием различных изоформ.