Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Оценка иммунокорригирующего действия фракции тимуса, иммобилизованной на цеолите, при вторичном иммунодефицитном состоянии

БУРЯТСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ л -

СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ Г 0 ОД ни. В.Р. ФИЛИППОВА

1 8 Д£К 2000

На правах рукописи

УДК 636.087.7: 612.017.1

ДЫРДУЕВА Наталья Балдановна

ОЦЕНКА ИММУНОКОРРИГИРУЮЩЕГО

ДЕЙСТВИЯ ФРАКЦИИ ТИМУСА, ИММОБИЛИЗОВАННОЙ НА ЦЕОЛИТЕ, ПРИ ВТОРИЧНОМ ИММУНОДЕФИЦИТНОМ СОСТОЯНИИ

16.00.02. - Патология, онкология и морфология животных

Автореферат на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Улан-Удэ, 2000

Работа выполнена в Проблемной научно-исследовательской лаборатории иммунохимии ВосточноСибирского государственного технологического университета.

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Жамсаранова С.Д,

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Л.Н.Шантанова,

кандидат ветеринарных наук Цыремпилов П.Б.

Ведущая организация:

Бурятский научно-исследовательский институт сельского хозяйства СО РАСХН

, ср

Зашита состоится "<£" декабря 2000 г. в ' "_часов

на заседании диссертационного совета Д-120.79.01 в Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. проф. В.Р. Филиппова (670024, г.Улан-Удэ, ул. Пушкина, 8)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Бурятской сельскохозяйственной академии им. проф. В.Р. Филиппова

Автореферат разослан " 6 "ноября 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук, доцент Г.А. Игумнов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Актуальность развития исследований в области изучения проблем иммуностимуляции в ветеринарии объясняется тем, что при современной системе ведения животноводства животные нередко находятся в состоянии иммунной недостаточности и вследствие этого неустойчивы к различного рода заболеваниям, что ведет к снижению продуктивности. Известно немало случаев появления вторичных иммунодефицитов из-за неполноценного белкового, витаминного и минерального питания животных [Плященко С.И.,1991; Апатенко В.М., 1995; Петров A.M., Серых М.М.,1998].

Восстановление функциональной активности иммунной системы является непременным условием успеха комплексной терапии различных патологических состояний.В связи с этим оправдан значительный интерес исследователей к использованию различных средств, способных предупреждать и корригировать иммунологичесие сдвиги в организме [Иванова Л.А., Павлова М.Н.,1986; Першин Б.Б.1989; Лазарева Д.П., Алехин Е.К,1991; Пинегин Б.В,1995; Земсков В.М., 1996;Караулов A.B., 1999]. Арсенал современных иммуномодуляторов достаточно обширен, причем, в основном, это синтетические лекарственные средства. В то же время значительное место среди них стали занимать средства природного происхождения.

Одним из перспективных и дешевых источников биологически активных веществ являются органы иммунной системы убойных животных (тимус, селезенка, костный мозг), которые, следует отметить, относятся к отходам основною производства.

На сегодняшний день го тимуса (или вилочковой железы) - центрального органа иммунной системы - выделено большое количество биологически активных веществ, на основе которых созданы лекарственные препараты, такие как Т-акгивин, тималин, тимоген и другие [Арион В.Я., 1974; Морозов В.Г., Хавинсои В.Х., 1982-1985; Кузник Б.И., Цыбиков H.H., 1979-1996]. Интерес к иммyiiOMодулируюIцим препаратам из тимуса не угасает, что потверждается многочисленными публикациями.

В последнее время пристальное внимание ученых привлекают природные цеолиты. Благодаря своим уникальным сорбционным, ионообменным, молекулярно-ситовым, каталитическим свойствам, они оказывают положительное влияние на физиологическое состояние организма человека, животных и птиц. В силу своей структуры и природы поверхности природные цеолиты могут использоваться как носители ферментов, витаминов, биологически активных веществ, выступая в роли праяонгаторов.

Анализ литературы по изучению природных цеолитов свидетельствует о необходимости более широких исследований цеолитов как носителей и пролонгаторов, разработки новых лекарственных средств на основе цеолитовых туфов для лечения различных заболеваний и комплексной оценки их лечебно-профилактических свойств [Кузнецов C.B., 1994; Савченко» М.Ф., 1998; Шадрин

А.М., 1998].

Исхода из вышесказанного представлялось чрезвычайно интересным сеодинить биологические свойства фракций из органов иммунной системы сельскохозяйственных животных со свойствами природных минералов и изучить их совокупную эффективность. Для исследования были взяты тимус молодняка крупного рогатого скота и природный цеолит Холинского месторождения*.

Цели и задачи исследования. Цепью настоящих исследований явилось изучение иммунобиологического действия активной фракции тимуса молодняка крупного рогатого скота (КРС), иммобилизованной на цеолите Холинского месторождения, при проявлении вторичного иммунодефицитного состояния животных.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие основные

задачи:

1. выделение биологически активных фракций из тимуса молодняка КРС и сравнительная оценка их и м м у ном одул и ру ю щей активности;

2. оптимизация условий получения нового биостимулятора, получившего название "Цеохол-Т", путем адсорбции биологически активной фракции тимуса на цеолите Холинского месторождения;

3. изучение иммунокорригирукмцего действия "Цеохола-Т" на функциональное состояние клеточного, гуморального и макрофагал ьного звеньев иммунитета, а также на микроанатомию центрального органа иммунной системы - тимуса лабораторных животных при экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии;

4. исследование нейрогропной активности "Цеохола-Т";

5. оценка влияния "Цеохола-Т" на показатели иммунологического статуса больных телят.

Научная новизна. Выделена биологически активная фракция из тимуса молодняка КРС по модифицированной нами схеме В.Я.Ариона [1974].

Впервые показана возможность адсорбции активной фракции тимуса на цеолите Холинского месторождения. Получено новое полифункциональное лекарственное средство, названное "Цеохол-Т". Оценены его иммунокорригирующие свойства в экспериментальных и клинических исследованиях, а также обнаружено его влияние на функциональную активность нервной системы.

Впервые исследовано комплексное действие цеолита Холинского месторождения на показатели иммунной системы организма животных на модели иммунодефицитного состояния.

Практическая ценность работы. Основные результаты работы нашли практическое воплощение в разработке биологически активной кормовой добавки

* - Автор выражает благодарность коллективу Бурятского филиала РТЦ, любезно предоставившему цеолит для исследовательских работ и ветеринарным врачам СПК "Закалтус'ТСабанского района РБ, учебного хозяйства "Байкал" БГСХА, принявшим участие в экспериментах.

4

"Цеохол-Т" (технические условия утверждены за номером ТУ 2163-00512763074-99). Производство препарата "Цеохол-Т" освоено в научно-исследовательской лаборатории Восточно-Сибирского государственного технологического университета.

"Цеохол-Т" внедрен в учебном хозяйстве "Байкал" Бурятской государственной сельскохозяйственной академии и CII1C "Закалтус" Кабанского района Республики Бурятия. Эффективность разработанной кормовой добавки отражена в соответствующих актах внедрения.

Данная работа выполнена в соответствии с заданием "Разработка способов получения и использования вторичных источников местного сырья животного и растительного происхождения в качестве иммунспротекторов" 19962000 гг. по программе "Бурятия. Наука и техника 2000".

Положения, выносимые на защиту:

1. Биологически активная фракция тимуса молодняка КРС, выделенная по модифицированной нами схеме В.Я.Ариона [1974], обладает высокой иммунокорригирукпцей активностью.

2. Получен новый биостимулятор "Цеохол-Т" путем адсорбции активной фракции тимуса молодняка КРС на цеолите Халинского месторождения.

3. При экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии "Цескол-Т" восстанавливает показатели клеточноопосредованных реакции иммунной системы, гуморального и макрофагального звеньев иммунитета, величины структурных компонентов тимуса, атакже функции нервной системы до уровня соответствующих показателей у интактных животных,

4."Цеохол-Т" при комплексной терапии телят, больных бронхопневмонией, вызывает восстановление иммунологических показателей организма и общего состояния в целом.

Апробация работы: Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:

- ежегодных научных сессиях Восточно-Сибирскою государственного технологического университета по секции "Химия биологически активных веществ" (Улан-Удэ, 1998-2000);

- республиканской научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Биология на пороге XXI века" (Улан-Удэ, 1998);

- научно-практической конференции с международным участием "Природные минералы на службе здоровья человека (Минеральная Среда и жизнь)" (Новосибирск, 1999)

- 9-th Annual meeting of SETAC-Europe "Quality of life and environment in cultured landscapes" (Leipzig, 1999);

- Ill региональном симпозиуме "Новые научные технологии в Дальневосточном регионе" (Благовещенск, 1999);

- 6-й международной научно-практической конференции "Природные и интеллектуальные ресурсы Сибири" (СИБРЕСУРС-6-2000) (Тюмень, 2000).

- международной выставке "Индустрия образования" в г. Орле (1-3 декабря 1999 г.).

По материалам диссертационной работы опубликовано 4 научные работы; на биологически активную кормовую добавку "Цеохол-Т" утверждена нормативная документация.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 120 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 5 глав, включающих обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы и список литературы, а также приложение. Диссертация иллюстрирована 10 рисунками и 13 таблицами. Список литературы включает 200 источников, из них 151 из отечественной литературы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для проведения экспериментальных исследований использовали 250 половозрелых мышей самцов линии СВА, 380 гибридов F, (СВАхС57В1/6) массой 20-22 г., попученых из питомника РАН "Столбовая", самцов морских свинок массой 150-250 г.

Цеолит Холинекого месторождения любезно был предоставлен Бурятским филиалом Российского технологического центра.

Выделение биологически активных фракции тимуса молодняка крупного рогатого скота осуществляли по модифицированному нами методу В.Я.Ариона [1974]. Определение их иммунобиологической активности проводили in vitro в реакции "активного розеткообразования" тимоцитов морской свинки с эритроцитами кролика (Временная фармакопейная статья orrl8.ll.85 г.).

Кормовую добавку "Цеохол-Т" получали путем иммобилизации активной фракции тимуса (АФТ) на цеолите Холинекого месторождения. Исследование адсорбционной емкости цеолита в отношении АФТ проводили относительно содержания белка до и после внесения цеолита. Содержание белка определяли методом Лоури. Микробиологические исследования "Цеохола-Т" проводили согласно ГОСТ 25311-82 , предъявляемому к кормам животного происхождения (ГОСТ 17536-82). Исследование включало определение общего числа микробов, определение присутствия бактерий групп кишечной палочки, бактерий рода сальмонелл, бактерий анаэробов.

Исследуемый препарат "Цеохол-Т" вводили перорально ежедневно в дозе 5 мг/кг веса (по белку) в течении 7 дней на фоне иммунодепрессивного состояния, вызванного введением классического иммуносупрессора азатиоприна в концентрации 50 мг/кг (Московское производственное химфарм. объединение им. Н.А.Семашко).

Экспериментальную оценку клеточного звена иммунитета проводили в реакциях "трансплантат против хозяина" (РТПХ) по В.Тессеневу (1979) и гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) по стандартной методике

локальной ГЗТ (Петров Р.В. и др., 1987). Активность антигенспецифических Т-супрессоров антителообразования определяли в соответствии с Методическими рекомендациями...,[1989].

Состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых по модифицированному (Cunningham A J, 1965) методу, предложенному Jerne N., Nordin А. (1963), и титру гемагглютининов (Зигль 3., 1979).

Действие исследуемого препарата на функции клеток системы мононуклеарных фагоцитов оценивали в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов в отношении Staph, aureus in vivo по методике И.С.Фрейдлин (1976). О степени поглогительной способности судили по двум показателям - активности (процент фагоцитирующих клеток от общего числа подсчитанных клеток) и интенсивности фагоцитоза (среднее количество микробов, поглощенное одной клеткой).

Структурно-функциональное состояние тимуса мышей изучали с помощью морфометричесмого анализа функциональных зон органа. Измерения, проведенные на гистологических срезах, сводились к определению ширины капсулы, коркового слоя; область мозгового вещества оценивали по длине (при продольном срезе тимуса) и ширине (при поперечном срезе тимуса). Данные параметры определяли в нескольких точках органа с учетом юс минимальных и максимальных показателей. Измерения проводили при помощи микроскопа МБИ-3 при увеличении объектива-10, окушра-10 с использованием окуляр-микрометра (Аптандилов Г. Г., 1990).

При оценке влияния "Цеохола-Т" на показатели иммунологического статуса больных телят использовали следующие тесты: определение числа Т- и В-лимфоцитов (А.М.Цымбал, 1983), фагоцитарная активность лейкоцитов в периферической крови (Методические рекомендации ЦОЛИУВ, 1988), бактерицидная активность сыворотки крови по Бухарину (1979), также

определяли лейкоцитарную формулу крови. Во время проведения эксперимента телята подвергались тщательному осмотру и взвешиванию.

Нейрогропная активность препаратов оценивалась в тесте "открытое поле"(Я.Буреш и соавт.,1991).

Полученные данные подвергались статистической обработке с использованием компьютерной программы "Jandel, Sigma Plot". Вычисляли среднеарифметическое значение и стандартную ошибку среднего значения, критерии Стьюдента и достоверность различий. Различие считали достоверным при вероятности 95 % (Р < 0,05) (Беленышй M.JL, 1963).

РЕЗУЛБТАТЫ.ИССЛЕДОВАНИЙ Выделение и сравнительная оценка фракций тимуса

В процессе фракционирования тимуса молодняка крупного рогатого скота были получены следующие фракции: пептидная фракция АФТ-5,

ГТЛП»Я>Л1111ПЯ П1\ гкигпал 11 О '. г. ."т-1 (II«1Ч-Ч Л .<■ Ч'ГЧ "II, Л I Л ч и ."М1

но ъльтс й.У1.гхупип<1у ак1Ш>нси фралцил 1 пму^а у, тлнучеппан

по модифицированной нами схеме В.Я.Ариона в различных вариациях: а) без процесса аутолиза, б) без процесса ауголиза и после удаления термолабильных белков, в) после аутолиза и удаления термолабильных белков.

Все выделенные фракции тимуса оказывали стимулирующее действие на регенерацию и экспрессию Е-рецепторов тимоцитов морской свинки, обработанных трипсином. Наибольшее количество розеткообразующих клеток (РОК) образовалось после введения в культуральную среду АФТ5, что составило 80% от общего числа подсчитанных тимоцитов.

Среди фракции, выделенных по модифицированной схеме, наибольшей активностью, сравнимой с пептидной фракцией АФТ5, обладала фракция, полученная после аутолиза и осаждения термолабильных белков, которая в дальнейшем использовалась в экспериментах.

Получение препарата "Цеохол-Т"

Путем адсорбции полученной биологически активной фракции тимуса на цеолите Холинского месторождения был получен новый препарат, названный "Цеохол-Т".

Исследование адсорбционной емкости цеолита (помола 0-0,5 мм) в зависимости от времени (через 1,3, 5,7 и 24 часа) показало, что максимальная адсорбция АФТ, при её смешивании с цеолитом в соотношении 1:1, наблюдается через 1 час и значительно не изменяется в течении исследуемого времени. Наибольшая степень наполнения поверхности цеолита наблюдается при концентрации белка во фракции 4,8-5,4 мг/мл. Цеолит адсорбирует в среднем 94,0+0,85% фракции, что составляет 4,0-4,5 мг белка в расчете на 1 г цеолита.

Согласно гигиеническим нормативам качества и безопасности, предъявляемым к кормам животного происхождения (ГОСТ 17536-82), проведен бактериологический анализ ( по ГОСТ 25311-82) препарата "Цеохол-Т", хранившегося при I = 18°С и при 1=-4°С в течении 1,2,3,4,5,8 и 12 месяцев со дня изготовления.

Общее количество микробных клеток сразу после изготовления препарата составило 4180 в 1 г продукта. Дальнейшее исследование показало рост числа микроорганимов, но их содержание во всех исследуемых образцах не превышало норматив 5х105 КОЕ/гр. Бактерии кишечной палочки, сальмонелл и анаэробов не были обнаружены. Значимой разницы между микробиологическими показателями препаратов, хранившихся при разных температурных режимах, не обнаружено.

Исследование иммунокорригирующих свойств "Цеохала-Т" на модели иммунодефицитного состояния, вызванного азатиоприном.

В настоящее время для воспроизведения иммунодефицита ого состояния в условиях эксперимента наибольшее внимание уделяется классическому иммунодепрессанту - азатиоприну. Азатиоприн вызывает нарушения в иммунной системе, наиболее приближенные к иммунодефицитному состоянию человека

и животных.

При оценке специфической активности иммуномодулягоров необходимо исследовать их действие на основные звенья иммунной системы.

В защите организма от чужеродных агентов огромное значение имеют клетки способные к фагоцитозу. Определение фагоцитарной активности макрофагов является классическим тестом в научных исследованиях при исследовании иммуномодулирующих свойств лекарственных средств.

На рис.1 представлены данные по влиянию "Цеохша-'Г" в разных дозах на фагоцитарную функцию перитонеальных макрофагов мышей, находящихся в состоянии иммуносупрессии, вызванной азатмоприном.

щщ» активность фагоцитоза, % —интенсивность фагоцитоза

Рис. 1. Влияние "Цеохола-Т" на функциональную активность перитонеальных макрофагов мышей in vivo на фоне воздействия азатиоприна Группы животных: 1 - контроль; 2 - азатиоприн (аз) (50 мг/кг); 3 -аз+"Цеохол-Т"(5 мг/кг); 4- аз+"Цеохол-Т"(Ю мг/кг); 5 - аз+"Цеохол-Т"(20 мг/ кг);

Из рис.1 видно, что азатиоприн вызывал снижение активности и интенсивности фагоцитоза на 18,3 % и 29,6% соответственно. Введение "Цеохола-Т" в дозах 5, 10 и 20 мг/кг веса выводит организм из иммунодепрессивного состояния, повышая функциональную активность макрофагов в среднем на 16%, а интенсивность фагоцитоза в среднем на 27%. Таким образом данные, полученные при изучении действия "Цеохола-Т" на функции перитонеальных макрофагов in vivo, свидетельствуют о том, что введение "Цеохола-Т" приводит к инициации в клетках процессов, усиливающих фагоцитарную функцию этих клеток. При этом четкого дозозависимого эффекта

обнаружено не было.

Как показали экспериментальные исследования, применение "Цеохола-Т" позволило достоверно увеличить массу и клеточность иммунных органов экспериментальных животных на фоне иммунодепрессии, вызванной

азатиоприном (см. табл.1).

Таблица 1

Изменение массы имму нных органов мышей под влиянием "Цеохола-Т" на фоне азатиоприновой супрессии

Группы животных Огносиг. масса (в % от массы тела)

тимус селезенка пахов. лимфоузел

1.Контроль 0,12+012 0,26 ±0,013 0,04 ± 0,002

2. Азатиоприн (аз) 50 мг/кг 0,06 ± 0,005***' 0,23 ± 0,009 0,03 ± 0,002*'

3. Аз + "Цеохол-Т" 5 мг/кг 0,07 ± 0,004 0,29 ± 0,012**2 0,04 + 0,001*2

4. Аз + "Цеохол-Т" Юмг/кг 0,09 ± 0,007*2 0,27 ± 0,009*2 0,04 +0,002*2

5. Аз + "Цеохол-Т" 20 мг/кг 0,09 ± 0,021 *2 0,30 ± 0,030*2 0,04 ± 0,002*-

Примечание: * - здесь и далее различие достоверно, Р< 0,05; или *2 - достоверно относительно группы №1 или №2; ** - Р< 0,01; *** -Р< 0,001.

Общепризнанными методами, используемыми при оценке функциональной активности клеточного звена иммунного ответа, являются реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и "трансплантат против хозяина" (РТПХ). В качестве модели ГЗТ использовали стандартный тест оценки изменения массы стопы у мышей, сенсибилизированных эритроцитами барана (ЭБ). Результаты приведены в таблице 2.

Как видно из табл.2, "Цеохол-Т" стимулирует клеточно-опосредованную реакцию иммунитета ГЗТ. Под влиянием данного средства местная реакция, возникающая у мышей в месте повторного контакта с антигеном, усиливается в среднем в 1,8 раза по сравнению с реакцией у мышей, получавших только азатиоприн. Следует заметить, что изучаемые показатели у животных, находящихся в иммунодепрессивном состоянии и получавших "Цеохад-Т", были достоверно выше контрольных на 19; 17,5 и 16,6 % соответственно дозам 5, 10,20 мг/кг веса. Согласно полученным данным действие препарата "Цеохол-Т" на выраженность реакции ГЗТ не зависит от дозы. Об этом же свидетельствуют данные функциональной активности макрофагов при введении

"Цеохола-Т". Поэтому в дальнейших экспериментах нами использовалась минимальная активная доза препарата"Цеохол-Т", равная 5 мг/кг. 10

Таблица 2

Степень развития реакции ГЗТ при воздействии "Цеохола-Т" у мышей на фоне воздействия азатиоприна

Группы животных Индекс реакции ГЗТ, % Кол-во клеток в паховом лимфоузле (х106)

1 .Контроль 24,1 ±2,53 32,0+ 1,42

2. Азатиоприн (аз) 16,3 + 2,60*' 23,4 + 1,33*'

3. Аз + "Цеохол-Т' 5 мг/кг веса 29,8 ± 4,20*2 34,2+ 1,51 *2

4. Аз + "Цеохол-Т" Юмг/кг веса 29,2 + 4, ЗЗ*2 30,8 + 0,60*2

5. Аз + "Цеохол-Т" 20 мг/кг веса 28,9 + 4,01 *2 30,6+ 1,45*2

Подсчет количества клеток в паховых лимфоузлах представлен в табл.2. Результаты подтверждают иммуностимулирующий эффекг"Цеохола-Т".

Состояние клеточного иммунитета оценивали и по локальной РТПХ.

РТПХ воспроизводили на модели гибридов мышей первого поколения Р1(СВАхС57В1/6). Донорами клеток служили мыши линии СВА.

В качестве критерия для количественной оценки РТПХ была использована гипертрофия подколенных лимфатических узлов при локальном введении аллогенных клеток.. Реакцию оценивали по индексу увеличения лимфоузлов, равному отношению числа клеток в опытной и контрольной конечности. При индексе выше 1.2 отличие от контроля считалось достоверным. Результаты приведены на рис. 2.

Как следует из рис. 2, "Цеохол-Т" способствует достоверному увеличению индекса РТПХ в 2,7 раза (Р<0,001), сниженного воздействием азатиоприна. При введении активной фракции тимуса (АФТ) также происходит достоверное увеличение регионарных лимфатических узлов, развивающееся при введении родительских спленоцитов. Однако индекс: реакции был ниже на 10%, чем у животных, получавших "Цеохол-Т", и составил 6,38, что, в свою очередь, превышает соответствующий уровень интактных животных (контроль).

В ранних исследованиях было установлено, что цеолит у интактных животных не вызывает значительных изменений в иммунном статусе, что свидетельствует о безопасности его применения. У животных с иммунологической недостаточностью цеолит вызывал увеличение (в 2 раза) клеточности лимфатических узлов в РТПХ, по сравнению с группой, получавшей только азатиоприн, но не приводил к отмене супрессивного действия последнего.

Иммунный ответ, как и любой другой комплексный биологический процесс, может регулироваться рядом усиливающих или ослабляющих факторов,

(О в

Рис 2. Влияние "Цеохола-Т", АФТ и цеолита на выраженность реакции "трансплантат против хозяина" при азатиоприновой иммуносупрессии

причем Т-супрессоры выступают в роли основного отрицательного регулирующего звена.

Результаты опытов свидетельствуют о том, что в селезенках мышей, иммунизированных внутрибрюшинным введением ЭБ в дозе 4x109 клеток на мышь, накапливались Т-лимфоциты с супрессорной активностью. Об эффективности указанной субпопупяции судили по угнетению антителогенезау мышей-реципиентов после адоптивного переноса суспензий селезеночных клеток гипериммунизированных сингенных животных, что выражалось в уменьшении абсолютного и относительного числа АОК в 1,7 и 1,5 раза, соответственно, по отношению к контролю (табл.3).

При введении "Цеохола-Т" происходило увеличение количества АОК

в селезенке мышей-реципиентов как при расчете на весь орган (в 1,9 раза), так и при расчете на 106 спленоцитов (в 1,3 раза), по сравнению с контролем супрессии. Число антителообразующих клеток в данной группе было выше, чем в группе с неиндуцированными Т-супрессорами (контроль).

Использование АФТ в эксперименте, как видно из табл.3, полностью отменяло супрессорный эффект и увеличивало количество АОК до уровня контроля.Цеолит восстанавливал подавленный иммунный ответ лишь на 75% по данным АОК на селезенку и на 79 % - на 106 спленоцитов.

Таким образом, на основании изложенного можно сделать вывод о том,

Таблица 3

Влияние "Цеохояа-Т", АФТ и цеолита на активность антигенспецифических Т-супрессоров антителообразования

Вариант опыта Доза, мг/кг Количество АОК

на селезенку на 106 спленоцитов

1 .Контроль - 164 240 + 21424 11862+ 1473

2.Контроль супрессии - 92320 + 3979*' 7866 + 1502*'

3."Цеохот-Г 5 178150 + 47440***1 10072 + 2221

4. АФТ 5 166990 + 5830***2 13323 ± 1988*2

5.Цеолит 500 123940 + 7466***2 9469 + 741

что "Цеохол-Т' активизирует работу клеточного зиена иммунитета. Причем показатели у животных, получавших "Цеохол-Т" на фоне иммунодефицитного состояния, вызванного азатиоприном не только восстанавливались, но и превышали таковые у интактных животных, что свидетельствует о стимулирующей активности исследуемою препарата. Используемые в качестве препаратов сравнения, активная фракция тимуса и цеолит, обладали определенным стимулирующим эффектом, но при их комбинированном действии происходило усиление иммунобиологической активности.

Одними из важнейших показателей состояния функциональной активности В-системы являются величины титров антител в сыворотке крови и число антителообразующих клеток в селезенке.

В результате антигенной стимуляции эритроцитами барана происходил усиленный синтез антител В-клетками. Титр антител или гемагглютининоз определяли в реакции прямой гемагглютинации. Полученные данные показывают, что при воздействии азатиоприна происходило угнетение антителообразования на 29% (Р<0,05). Введение "Цеохола-Т" способствует восстановлению антителообразования до уровня титров гемагглютининоз в крови интактных мышей.

Как показали экспериментальные исследования, введение "Цеохола-Т" мышам с индуцированной иммунологической недостаточностью обеспечивает статистически достоверную стимуляцию антителообразующей функции В-лимфоцитов (рис.3). "Цеохол-Т" в 2,7 раза увеличивал как абсолютное количество, так и в 2,6 раза относительное количество АОК в селезенке мышей получавших азатиоприн (Р< 0,001). Показатели АОК у здоровых животных при введении "Цеохопа-Т" значительно не изменялись.

Результаты исследования влияния АФТ и цеолита на антителообразование указывают на иммунокорригирующий эффект изучаемых средств в отношении показателей гуморального иммунитета. У животных на фоне иммуносупрессии, вызванной азатиоприном, под действием АФТ количество АОК (как абсолютно«;, так и относительное) восстанавливалось до уровня показателей контрольных животных, получавших воду в эквивалентном объеме. Однако абсолютное и относительное числа АОК были ниже на 15 % и 19%, соответственно, чем у животных, получавших "Цеохол-Т" после

иммуносупрессии. У интактных животных АФТ оказывала маловыраженное стимулирующее действие на синтез антител, в этом случае количество АОК превышало их содержание у контрольных животных на 9 и 13 % (абсолютное и относительное соответственно).

Цеолит в чистом виде в 2 раза (Р<0,001) усиливал формирование антителообразующих клеток в селезенке у мышей с иммунодепрессивным состоянием, но полного восстановления данного показателя не происходило.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об

50000 ^ 45000

О 40000 <

О 35000 ¡? 30000 § 25000 § 20000 Ю 15000 ** 10000 5000 -

ь е к. * §1

< г з- ю

5 ю

1абсол. кол-во АОК —♦—относит, кол-во АОК

Рис.3. Антителообразующая активность клеток селезенки мышей при воздействии "Цеохола-Т", АФТ и цеолита на фоне иммунодефицктного состояния, вызванного азатиприном.

иммумомодулирующем эффекте "Цеохола-Т" на показатели гуморального иммунного ответа.

Известно, что основными процессами, происходящими в тимусе, являются пролиферация, дйфференцировка, гибель и миграция тимоцитов. Размножение их осуществляется главным образом в субкапсулярной зоне коры, откуда созревающие тимоциты движутся в мозговое вещество, приобретая в процессе контакта с клетками стромы фенотипические признаки основных субпопуляции периферических Т-клеток. Исследование микроанатомии тимуса позволяет судить о состоянии указанных процессов, и, следовательно, о реактивности иммунной системы как на органном уровне, так и в целом.

Одним из морфологических показателей является соотношение струклурных компонентов тимуса. По мнению М.Р.Сапина [1988] эти данные позволяют лучше понять строение иммунных структур, оценить функциональные характеристики и их удобно использовать при сравнении воздействия на тимус, различных, например, фармакологических препаратов.

Введение мышам азатиоприна в дозе 50 мг/кг в течении 5 дней вызывало значительное изменение структуры тимуса. Если в контроле наблюдалось четкое разделение коркового и мозгового слоя, мозговой слой преобладал над корковым, то в группе животных, которым вводили азатиоприн, в большинстве случаев встречались дольки тимуса, где деление на слои отсутствовало. Стирание границ объясняется, по-видимому, как миграцией тимоцитов, так и их массовым распадом. На рис.4 представлены показатели изменения размеров (в %) структурных компонентов тимуса мышей, подвергнутых азатиоприну, по сравнению с соответствующими величинами у интактных животных.

При воздействии азатиоприна корково-медуллярная зона тимуса характеризовалась слабой выраженностью. Наблюдалось уменьшение толщины коркового слоя по сравнению с контролем в 1,4 раза. Содинителыютканная капсула тимуса у большинства животных, получавших азатиоприн, неравномерно покрывала дольку тимуса, большей частью она была рыхлая, утолщенная. Толщина капсулы составила - 7,39 мкм, что существенно (в 2,8 раза) превосходит тот же показатель в контрольной группе. Диаметр телец Гассаля в данной группе уменьшался в 1,5-2 раза по сравнению с диаметром телец в интактной группе. В дольках, где отсутствовало деление на слои, тельца Гассаля обнаруживались как в центральных отделах, так и в периферических, иногда почти под капсулой.

Наряду с расширенными сосудами мозгового вещества отмечалось расширение мелких сосудов в коре, особенно в участках, прилежащих к мозговому веществу. В просветах сосудов наблюдались деструктивно измененные клетки.

При введении "Цеохола-Т" в течении 7 дней » дозе 5 мг/кг мышам на фоне иммуносупрессии отмечалась тенденция к восстановлению структуры этого

органа. Но не во всех случаях морфологические показатели приближались к таковым у контрольных жиасггных.

Так у животных, получавших "Цеохол-Т" после иммуносупрессии, толщина соединительнотканной капсулы уменьшалась в 2,3 раза по сравнению с соответствующим показателем у живогных, получавших азатиоприн, но была больше в 1,3 раза соответствующих контрольных показателей. В большей части капсула была тонкая, равномерная, но в некоторых местах рыхлая, плотно прилегающая к паренхиме. Замечено усиление плотности клеток в субкапсулярнойзоке, но плотность распределения неравномерная, встречаются зоны с низкой и высокой плотностью.

В тимусе животных этой группы наблюдалось разграничение мозгового и коркового слоя. Но следует отметить, что в некоторых дольках не наблюдалось четкой границы, и мозговое вещество было представлено островками. Толщина коры была несколько уменьшенной по сравнению с таковой у интактных мышей, величина составила 26,73 мкм. Ширина мозгового слоя равнялась 23,64 мкм, а её длина - 63,71 мкм. В коре и мозговом веществе наблюдалось много мелких сосудов, в просвете которых видны единичные лимфоидные клетки. Вокруг некоторых сосудов наблюдались плотные скопления лимфоидных клеток, что свидетельствует о высокой миграции клеток и повышении проницаемости

300 т % 250 200 150 100 50

Капсула

Корковый слой

Мозг, вещество, длина

I

Мозг, вещество, ширина

- Азатаоприн —Интаклная группа

-Аз+"Цеохол-Т'

Рис.4. Относительные показатели (в %) структурных компонентов тимуса мышей при азатиоприновой иммуносупрессии и ее коррекции "Цеохолом-Т"

ф

9

_______//^----- 1П01 1 noi\

си^удии ^C|JUB, 1.1(11, AJM, I ?OJy.

В мозговом веществе количество (3-5) и диаметр (3-8 мкм) тимических телец приближались к таковым в контрольной группе. На многих гистологических срезах они состояли в основном из нескольких, эпителиальных клеток.

Таким образом, морфометрические исследования показали, что при воздействии иммунодепрессанта азатиоприна наблюдаются значительные нарушения микроанатомии тимуса мышей. Последующее введение "Цеохола-Т" приводило к развитию процессов, направленных на восстановление структурных компонентов и, следовательно, функциональной активности данного органа.

Исследование нейротропиой активности "Цеохола-Т" у мышей с индуцированной иммунологической недостаточностью

При действии стрессовых факторов различной этиологии увеличился риск развития нервно-психической патологии. В современной научной литературе появилось огромное количество данных о взаимодействии иммунной и нервной систем [Абрамов В.В.,1988; Корнева Е.А.,1999]. В основе этого взаимодействия лежит способность одних и тех же факторов выступать в качестве иммунорегулятора, так и вещества, способного воздействовать на функциональную активность определенных структур нервной системы.

В настоящей работе мы провели изучение суммарной двигательной активности и ориентировочно-исследовательского поведения, эмоциональности мышей линии F1 (СВАхС57В16) в тесте "открытое поле" при введении "Цеохола-Т", АФТ в дозах 5 мг/кг и цеолита в дозе 0,5 г/кг веса. Исследование проводилось на фоне иммунодепрессивного состояния, вызванного азатиоприном.

По полученным данным, двигательная активность мышей по группам имела следующее распределение: "Цеохсш-Т"(300 баллов) < интактная группа (289) < аз+АФТ (266) < аз+"Цеохол-Т" (261) < аз+цеолит (254) < азатиоприн (аз)(234). "Цеохол-Т" активизировал логамоторику гак у здоровых животных (показатель был выше такового в иитактной группе), так и у животных, находящихся в состоянии иммунодепрессии.

Исходя из данных по общей исследовательской активности, распределение нейромодулирующей активности исследуемых средств установилось в следующей последовательности: "Цеохсш-Т"(343 балла) < интактная группа (333) < аз+АФТ (311) < аз+"Цеохол-Т" (301) < аз+цеояит (296) < азатиоприн (аз) (272). Наиболее эмоциональной оказалась группа животных, получавших "Цеохсш-Т".Таким образом, при изучении поведения экспериментальных животных в тесте "открытое ноле" установлено, что "Цеохол-Т" усиливал суммарную двигательную активность, эмоциональность и ориентировочногисследовательское поведение мышей на фоне иммуносупрессии, вызванной азатиоприном, что свидетельствует об усилении

общей адаптационной реакции организма.

Исследование эффективности препарата "Цеохол-Т" в

комплексной терлини телят, больных бронхопневмонией.

Заболевания желудочно-кишечного тракта и дыхательной системы, в частности бронхопневмония., занимают ведущие места по частоте, массовости и величине экономического ущерба. Основным направлением в профилактике и лечении животных при инфекциях остается применение антибиотиков, однако это связано с опасностью развития осложнений, нарушением обмена веществ, развитием гиповитаминозов, дисбакгериоза, снижением иммунологической реактивности организма и развитию вторичных иммунодефицитных состояний.

В этой связи актуальным является создание и внедрение средств, корригирующих как состояние иммунной системы, так и общую резистентность организма.

В настоящей работе проводилось изучение воздействия препарата "Цеохол-Т" на показатели иммунологического статуса телят 2-3-х месячного возраста, больных бронхопневмонией. Контролем служили здоровые телята того же возраста.

"Цеохол-Т" давали животным в дозе 0,3 г/кг веса ежедневно в течении 30 дней. Введение препарата проводилось на фоне антибиогикотерапии и введения общеукрепляющих препаратов (глюкозы и хлорида кальция).

Пробы крови у животных брали на 1, 7, 14 и 30 день и определяли количество Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарную активность нейтрофилов по отношению к Staph, aureus, бактерицидную активность сыворотки крови. Во время проведения эксперимента телята подвергались тщательному осмотру и взвешиванию.

Обследование животных до начала эксперимента показало, что содержание В-лифоцитов в крови опытных животных было меньше, чем в контрольной. Данные представлены на рис.5.

Как видно из рис.5, введение "Цесхола-Т" в течение 30 дней обеспечило значительный рост числа ЕАС-РОК в крови больных телят. В результате количество клеток составило 36,7+2,71%, что превышает данный показатель в группе телят, не получавшей "Цеохол-Т" (22,6+2,90%).

При исследовании содержания Т-лимфоцитов в периферической крови телят отмечали незначительное уменьшение количества ЕА-РОК на фоне применения "Цеохопа-Т": в начале эксперимента число Т-лимфоцитов составило 58,2+4,68%, а в конце - 55,7+4,88%. Данные представлены в таблице 4.

Следует отметить, что уровень Т-лимфоцитов до начала эксперимента у опытных и контрольных групп животных был одинаковый (58,2+4,68% и 58,0+2,69%, соответственно). Анализ результатов последующие сроки наблюдений показал, что количество ЕА-РОК в подопытной группе увеличивалось на 14 день эксперимента (63,5+7,07%), однако к концу опыта снизилось (55,7+4,88%), холя достоверных изменений не наблюдалось.

О 7 14 30

день день день день

Сроки исследований

0 контроль HI опыт

Рис.5. Количество В-лимфоцитов в периферической крови телят

Таблица 4

Влияние "Цеохола-Т" на количественное содержание Т-лимфоцитов в периферической крови телят

Группы 0 день 7 день 14 день 30 день

Опыт 58,2 ±4,68 55,4 ±2,30 63,5 + 7,07 55,7 ±4,88

Контроль 58,0 + 2,69 48,0 + 3,23 54,4+2,69 52,0 ± 3,90

Ведущая роль, особенно при инфекционных болезнях, принадлежит полиморфноядерным лейкоцитам. При тестировании фагоцитарной активности фагоцитирующих клеток учитывалась активность фагоцитоза (процент клеток с поглощенными бактериями от общего числа нейтрофллов), интенсивность фагоцитоза или фагоцитарное число ( среднее число микробов, поглощенное одной клеткой).

Нами проводилось исследование фагоцитарной активности полиморфноядерных нейтрофилов по отношению к Staph, aureus.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что применение "Цеохола-Т" в течении 30 дней оказывает отчетливое стимулирующее влияние на фагоцитарную активность нейтрофилов больных телят. На рис.6 представлены результаты исследования фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови по отношению Staph, aureus.

Введение "Цеохола-Т" в течение 7 дн ей выявило позитивный эффект как в отношении процента фагоцитоза (67,4 + 4,62% против 57,6+3,46% в

контроле), так и фагоцитарного числа (1349,8+ 178,4 против 941,4+63,6 микробов, р<0.01). К концу эксперимента количество фагоцитирующих нейтрофилов крови опытных животных возросло в 1,7 раза (р<0.001) и практически сравнялось с контролем.

Таким образом, "Цеохол-Т" стимулировал функциональную активность нейтрофилов периферической крови. Функция данных

га «

о ь

=Г

2 «в ■в-

80-, '5

70- Л

60

50-

40

30 >

20.

10-

0

14 30 день день

Сроки исследования

Е1 контрол ь ■ опыт

Рис.6. Влияние "Цеохола-Т" на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови телят

фагоцитирующих клеток восстанавливалась уже через 7 дней после приема "Цеохола-Т".

Бактерицидная активность сыворотки крови является одним из показателей неспецифической реактивности организма. Реакция основана на способности сыворотки крови подавлять рост микроорганизмов, что зависит от уровня нормальных антител, пропердина, комплемента, лизоцима и др.

Исследования сыворотки крови больных телят на ее бактерицидное действие показали, что при применении "Цеохша-Т" в дозе 0,3 г/кг веса происходит статистически достосговерное повышение литической активности сыворотки по отношению к тест-микробу Е.соП°ш

До начала эксперимента бактерицидная активность сыворотки крови опытных животных была ниже контрольной - 39,5+4,71% против 45,0+3,82%. Но в течение эксперимента наблюдалось постепенное увеличение соответствующего показателя.

Как следует из данных таблицы 5, через 14 дней после приема

"Цеохола-Т" бактерицидная активность сыворотки крови становится практически сравнимой с соответствующей активностью в контрольной группе, что свидетельствует об усилении неспецифической защиты организма. К концу эксперимента активность сыворотки крови была выше по сравнению с аналогами из контрольной группы - 52,0+6,01% против 48,8+5,11% в контроле.

Таблица 5

Показатели бакгерицвдой активности сыворотки крови телят (%) Анализ лейкоцитарной формулы периферической крови животных при применении "Цеохсша-Т" регистрирует увеличение числа лейкоцитов (на

Группы 0 день 7 день 14 день 30 день

Контроль 45,1 ±3,8 43,5 ±3,77 46,8 + 4,50 48,8 + 5,11

Опыт 39,5 ±4,7 40,7 ±3,22 47,6 ± 5,11 52,0 ±6,01*

28%), лимфоцитов ( на 4%) и моноцитов (в 1,7 раза), уменьшение в 1,6 раза числа сегментоядерных нейтрофилов по сравнению с показателями в контрольной группе. .

Результаты наблюдений показали, что телята, получавшие "Цеохол-Т", обладали более живым темпераментом, имели хороший аппетит, среднесуточные привесы опытной группы превышали показатели контрольной группы (0,448 кг против 0,388 кг в контроле).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что "Цеохол-Т" в дозе 0,3 мг/кг стимулирует фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови телят, больных бронхопневмонией, восстанавливает показатели специфической и неснецифической резистентности организма.

В более ранних экспериментах, результаты исследований которых не вошли в данную работу, было показано, что введение "Цеохола-Т" здоровым телятам не вызывает существенных изменений и иммунологических и биохимических показателях крови, что свидетельствует о безопасности применения данного препарата.

Суммируя результаты исследований, можно заключить, что "Цеохсл-Т", полученный путем иммобилизации активного фактора тимуса на природном цеолите, обладает и м м у ном одул и рующи м действием и оказывает положительное влияние на все звенья иммунитета. Применение "Цеохола-Т" способствует восстановлению иммунного статуса животных, характеризующихся иммунодефицитным состоянием. Наряду с указанными свойствами у "Цеохола-Т" обнаружена нейромодучирутощая активность. Это свойство особенно важно для повышения устойчивости организма животных к стрессам, ведущим к понижению продуктивности.

выводы

1. Установлена иммунокорригирующая активность фракции тимуса молодняка крупного рогатого скота, выделенной по модифицированной нами схеме В.Я.Ариона (1974).

2. Разработан новый биостимулятор "Цеохол-Т" методом адсорбции активной фракции тимуса на цеолите Холинского месторождения, иммунобиологическая активность которого выше по сравнению с эффективностью составляющих его компонентов.

3. "Цеохол-Т" при экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии восстанавливает показатели клеточного, гуморального и фагоцитарного звеньев имммунитета, а также величины структурных компонентов тимуса до соответствующих показателей в контрольной группе.

4. При использовании "Цеохола-Т" в комплексной терапии телят, больных бронхопневмонией, установлено восстановление иммунологических показателей организма и общего состояния в целом по сравнению с контролем.

5. "Цеохол-Т" обладает нейромодулирующим действием, выражающимся в возрастании доли ориентировочно-исследовательского поведения и суммарной двигательной активности лабораторных животных, что свидетельствует об усилении общей адаптационной возможности организма.

6. Разработана и утверждена нормативная документация на полифункциональную биологически активную кормовую добавку "Цеохол-Т'(ТУ 2163-005-12763074-99).

Практические предложения

"Цеохол-Т" рекомендуется для широкого внедрения в практику ветеринарии в качестве поли функциональной биологически активной кормовой добавки для профилактики вторичных иммунодефицитных состоянии животных.

Материалы диссертационной работы могут быть использованы в учебном процессе при изучении разделов патологии иммунодефицитных состоянии и их коррекции.

Список работ, опубликованных по геме диссертации

1. Влияние препарата "Цеофракт" на иммунобиологическую активность телят // Сб. науч. трудов ВСГТУ. - Улан-Удэ, 1998,- С. 81-82. (Дырдуева Н.Б., Булытова З.Д., Лебедева С.Н., Лумбунов Б.Ч., Струганов В.Н.)

2. Использование цеолитов в качестве основы для получения лечебно-профилактических препаратов // Материалы 111 Дальневосточной региональной конференции "Новые научные технологии в Дальневосточном регионе".-Благовещенск, 1999. - С. 41-42. (Дырдуева Н.Б., Булытова 3.Д.,Струганов В.Н., Лумбунов Б.Ч., Гончикова С.Д., Жамсаранова С.Д.)

3. Использование препарата "Цеофракт" в комплексной терапии телят, больных бронхопневмонией // Тез. II Междунар. научно-практич. конф. "Природные минералы на службе человека. Минеральная среда и жизнь",-Новосибирск, 1999. - С. 182-184. (Дырдуева Н.Б., Булытова З.Д., Жамсаранова С.Д., Струганов В.Н.).

4. Кормовые добавки с иммуномодулирующим действием // Доклады 6-й Междунар. научно-практич. конф. "Природные и интеллектуальные ресурсы Сибири"(СИБРЕСУРС-2000), 2-4 октября 2000 г.- Тюмень, 2000.- С. 128-129. (Дырдуева Н.Б., Булытова З.Д., Жамсаранова С.Д., Струганов В.Н.).

1

Необходимость развития исследований в области изучения проблем имммуностимуляции в ветеринарии объясняется тем, что при современной системе ведения животноводства животные нередко находятся в состоянии иммунной недостаточности и, вследствие этого, неустойчивы к различного рода заболеваниям, что ведет к снижению продуктивности. Известно немало случаев появления вторичных иммунодефицитов из-за неполноценного белкового, витаминного и минерального питания животных [5,103,111]. Весьма интересным является аспект регулирования иммунного ответа животных с различными патологиями в ранний постнатальный период. Восстановление функциональной активности иммунной системы является непременным условием успеха комплексной терапии различных патологических состояний [33,36,49,57,59,65,80,84,114,125,126,174,185]. В связи с этим оправдан значительный интерес исследователей к использованию различных средств, способных предупреждать и корригировать иммунологические сдвиги в организме. Арсенал современных иммуномодуляторов достаточно обширен, причем, в основном, это синтетические лекарственные средства [85,178]. В тоже время значительное место среди них стали занимать средства природного происхождения.

Одним из перспективных и дешевых источников биологически активных веществ являются органы иммунной системы убойных животных (тимус, селезенка, костный мозг), которые, следует отметить, относят к отходам производства.

На сегодняшний день из тимуса (или вилочковой железы) - центрального органа иммунитета - выделено большое количество биологически активных веществ, на основе которых созданы лекарственные препараты, такие как Т-активин, тималин, тимоген и другие [8,9,35,82,91,122,189]. Тимические препараты используются в основном при лечении заболеваний, сопровождающихся нарушениями Т-системы иммунитета.

35,38,82,133,154,179]. Интерес к иммуномодулирующим препаратам из тимуса не угасает, что потверждается многочисленными публикациями.

Среди большого разнообразия адаптогенов и иммуномодуляторов искусственного и природного происхождения в последнее время активно разрабатывается возможность использования природных минералов.

Природные цеолиты, представляя собой минералы вулканического происхождения, обладают уникальными сорбционными, ионообменными, молекулярно-ситовыми, каталитическими свойствами, что обуславливает их положительное влияние на физиологическое состояние организма человека, животных и птиц. Благодаря своим физико-химическим свойствам, они стабилизируют кишечную физиологию, нормализуют внутреннюю среду. Химический состав цеолитов богат целым комплексом необходимых микро- и макроэлементов. В силу своей структуры и природы поверхности, природные цеолиты могут использоваться как носители ферментов, витаминов, биологически активных веществ, выступая в роли пролонгаторов [13,69,70].

Анализ литературы по изучению природных цеолитов свидетельствует о необходимости более широких исследований цеолитов как носителей и пролонгаторов, разработки новых лекарственных средств на основе цеолитовых туфов для лечения различных заболеваний и комплексной оценки их лечебно-профилактических свойств.

Исходя из вышесказанного представлялось чрезвычайно интересным соединить биологические свойства фракций из органов иммунной системы сельскохозяйственных животных со свойствами природных минералов и изучить их совокупную эффективность. Для исследования были взяты тимус молодняка крупного рогатого скота и природный цеолит Холинского месторождения

Цели и задачи исследования. Целью настоящих исследований явилось изучение иммунобиологического действия активной фракции тимуса молодняка крупного рогатого скота (КРС), иммобилизованной на цеолите

Холинского месторождения, при проявлении вторичного иммунодефицитного состояния животных.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие основные задачи:

1. выделение биологически активных фракций из тимуса молодняка КРС и сравнительная оценка их иммуномодулирующей активности;

2. оптимизация условий получения нового биостимулятора, получившего название "Цеохол-Т", путем адсорбции биологически активной фракции тимуса на цеолите Холинского месторождения;

3. изучение иммунокорригирующего действия "Цеохола-Т" на функциональное состояние клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунитета, а также на микроанатомию центрального органа иммунной системы - тимуса лабораторных животных при экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии;

4. исследование нейротропной активности "Цеохола-Т";

5. оценка влияния "Цеохола-Т" на показатели иммунологического статуса больных телят.

Научная новизна. Выделена биологически активная фракция из тимуса молодняка крупного рогатого скота по модифицированной нами схеме В.Я.Ариона [1974].

Впервые показана возможность адсорбции активной фракции тимуса на цеолите Холинского месторождения. Получено новое полифункциональное лекарственное средство, названное "Цеохол-Т". Оценены его иммунокорригирующие свойства в экспериментальных и клинических исследованиях, а также обнаружено его влияние на функциональную активность нервной системы.

Впервые исследовано комплексное действие цеолита Холинского месторождения на показатели иммунной системы организма животных на модели иммунодефицитного состояния.

Практическая ценность работы. Основные результаты работы нашли практическое воплощение в разработке биологически активной кормовой добавки "Цеохол-Т" (технические условия утверждены за номером ТУ 2163005-12763074-99). Производство препарата "Цеохол-Т" освоено в научно-исследовательской лаборатории Восточно-Сибирского государственного технологического университета.

Цеохол-Т" внедрен в учебном хозяйстве "Байкал" Бурятской государственной сельскохозяйственной академии Эффективность разработанной кормовой добавки отражена в акте внедрения (см. приложение).

Данная работа выполнена в соответствии с заданием "Разработка способов получения и использования вторичных источников местного сырья животного и растительного происхождения в качестве иммунопротекторов" 1996-2000 гг. по программе "Бурятия. Наука и техника 2000".

Положения, выносимые на защиту:

1. Биологически активная фракция тимуса молодняка КРС, выделенная по модифицированной нами схеме В.Я.Ариона [1974], обладает высокой иммунокорригирующей активностью.

2. Получен новый биостимулятор "Цеохол-Т" путем адсорбции активной фракции тимуса молодняка КРС на цеолите Холинского месторождения.

3. При экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии "Цеохол-Т" восстанавливает показатели клеточноопосредованных реакции иммунной системы, гуморального и макрофагального звеньев иммунитета, величины структурных компонентов тимуса, а также функции нервной системы до уровня соответствующих показателей у интактных животных.

4."Цеохол-Т" при комплексной терапии телят, больных бронхопневмонией, вызывает восстановление иммунологических показателей организма и общего состояния в целом.

Апробация работы: Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:

- ежегодных научных сессиях Восточно-Сибирского Государственного технологического университета по секции "Химия биологически активных веществ" (Улан-Удэ, 1998-2000);

- республиканской научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Биология на пороге XXI века" (Улан-Удэ, 1998);

- научно-практической конференции с международным участием "Природные минералы на службе здоровья человека (Минеральная Среда и жизнь)" (Новосибирск, 1999)

- 9-th Annual meeting of SETAC-Europe "Quality of life and environment in cultured landscapes" (Leipzig, 1999);

- Ill региональном симпозиуме "Новые научные технологии в Дальневосточном регионе" (Благовещенск, 1999);

- 6-й международной научно-практической конференции "Природные и интеллектуальные ресурсы Сибири" (СИБРЕСУРС-6-2000) (Тюмень, 2000).

выводы

1. Установлена иммунокорригирующая активность фракции тимуса молодняка крупного рогатого скота, выделенной по модифицированной нами схеме В.Я. Ариона (1974).

2. Разработан новый биостимулятор "Цеохол-Т" методом адсорбции активной фракции тимуса на цеолите Холинского месторождения, иммунобиологическая активность которого выше по сравнению с эффективностью составляющих его компонентов.

3."Цеохол-Т" при экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии восстанавливает показатели клеточного, гуморального и фагоцитарного звеньев иммунитета, а также величины структурных компонентов тимуса до соответствующих показателей в контрольной группе.

4. При использовании "Цеохола-Т" в комплексной терапии телят, больных бронхопневмонией, установлено восстановление иммунологических показателей организма и общего состояния в целом по сравнению с контролем.

5. "Цеохол-Т" обладает нейромодулирующим действием, выражающимся в возрастании доли ориентировочно-исследовательского поведения и суммарной двигательной активности лабораторных животных, находящихся в состоянии иммунодепрессии, что свидетельствует об усилении общей адаптационной возможности организма.

6. Разработана и утверждена нормативная документация на полифункциональную биологически активную кормовую добавку "Цеохол-Т" (ТУ 2163-005-12763074-99).