Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Оптимизация схемы применения вакцины против сальмонеллеза молодняка

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ 4ВДЕРАЦИИ

ГЛАВНОЕ УПРАВЛЕНИЕ ВЕТЕРИНАРИИ

ВСЕРОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ . КОНТРОЛЯ, СТАЦЦАРТИЗАЦШ1 И СЕРТИ<ШШ|ИИ ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ

(ВПШ)

На правах рукописи ЛЕБЕДЕВ Олег Аркадьевич

УДК: 619:616.981.49-084:вЯп„1

ОПТИМИЗАЦИЯ СХЕМЫ ПРИМЕНЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ САЛЫВДНЕЛЛЕЗА

МОЛОДНЯКА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ваторинарных наук

Москва - 1993

Работа выполнена в лаборатории контроля и стандартизации препаратов против сальмонеллеза, лептоспироза и эшерихиоза Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и.сертификации ветеринарных препаратов ГУВ МСХ Российской Федерации.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук

Б.Ю.Шустер

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор К.В.Щумилов,

кандидат ветеринарных наук» доцент И.А. Логинов (ЫГАПБ)

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленк

Защита состоится "J?" ¿/¿¿rtJlSjrJSi 1993 г. 'в час.

на заседании Специализированного совета Д. 120.85.01 при Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) Главного управления ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации по адресу: 123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5, ВГНКИ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВГНКИ. Автореферат разослан "iV " cesOtnjbSfiJL 1993 г.

Ученый секретарь Оиециализированного совета

кандидат ветеринарных наук Ю.А.Козырев

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. РАБОТЫ

Актуальность темы. Сальмонеллеэ относится к числу убикьи-гщ.-гах инфекционных болезней, поражающих животных различных видок> " также человека.

Во многих странах мира в последние годы отмечается рост забо гсеваемости животных сальмонеллезом, что связано,'в первую очередь, : новыми условиями ведения животноводства, высокой концентрацией поголовья в крупных хозяйствах, расширением международной торговли мясом, животными, кормами животного происхождения. Также ire уменьшается-количество вспышек пищевых токсикоинфекций у людей.

В основе борьбы с сальмонеллезом животных, помимо общих вв-теринарно-санитарных мероприятий,'лежит специфическая профилакти-на.

До недавнего времени для активной- иммунизации животных в Российской Федерации и странах СНГ применяли только ин-чктивироын ■ ные вакцины, которые характеризуются невысокой иммуногенностью и значительной реактогенностыо.

Сравнительное изучение иммуногенной активности, проведанное на высокочувствительных к сальмонеллезной инфекции лабораторных животных и в производственных условиях позволило винвить ан&чи тельное преимущество живых вакцин перед инактивированными i ъа1-to et al., 1962; slants et al, , 1965; Б.А.Матвиенко, 1969;с. lins , 1974; пае г , 1980; . Linda at al,I980).

Более высокая иммуногенность живых сальмонеллезных вакцин связана, прежде всего, с активацией факторов клеточного иммунитета, вызываемой лишь живыми бактериями. Иммунитет, формирующийся в ответ на введение живых вакцин, наступает быстрее и характеризуется большей напряженностью и продолжительностью.

г

На основе селекционированных в лаборатории контроля и стандартизации препаратов против сальмонеллеза, лептоспироза и ouiepi хноаа ВГШСИ ветпрепаратов супрессорных ревертантов s. dublin J и s . yphimurium № 3 разработана живая вакцина против

сальмонеллеза молодняка (Ю.А.Малахов, Б.Ю.Шустер и соавт., 1984! Ва1сцину использовали телятам перорально двукратно в дозе 100 и 100 млрд микробных клеток с интервалом 2 дня. Однако, значителы расход препарата и высокая трудоемкость при перораль|юй вакцина! неизученность иммунного ответа при других способах введения вага ны, а также характера взаимоотношений вакцинных штаммов, требаbe дальнейшего исследования этой проблемы.

Цель исследований. Разработать оптимальную схему примененш вакцины против сальмонеллеза молодняка для иммунизации телят, bi чап дозу, кратность и способ введения вакцины. ,

Задачи исследований.

1. Изучить совместимость штаммов s. dublin № б и s . typ murium № 3 в вакцине против сальмонеллеза молодняка.

2. Определить напряженность перекрестного иммунитета у морских СВИНОК, иммунизированных S. dublin J? 6 и S.typhirouriu

№ 3.

3. Определить напряженность иммунитета у лабораторных живо1: пых и телят в зависимости от дозы и кратности перорального вгче ния вакцины против сальмонеллеза молодняка.

4. Установить оптимальные дозы и кратность парэнтерального применения вакцины.

5. Оценить эффективность вакцины в производственных уеловш

6. Внести необходимые дополнения в нормативную документами» на препарат.

Научная новизна. Установлено, что вакцина против сальмонеллеза молодняка обветривает у телят иммунитет высокой наирижен-■юсти посла однократного подкожного или перорального введения. И 1ряженность иммунитета у перорально однократно иммунизировании* гелят не уступает напряженности иммунитета у телят, иммуниэировм: 1ых двух- и трехкратно.

Не подтверждены данные Smith (1965), Paiimanabas (19795, мвуаг (1900) и др. о высокой напряженности иммунитета у вакци-итрованных животных к сероварам сальмонелл, гетеродигичьым к нчк-шнннм штаммам.

Вакцинный штамм s , dublin $ 6.защищает от гибели 83,3$ сивотных, зараженных вирулентным штаммом з. dublin 373 и толь-со 36,4%, зараженных s . typhimurtum 371. Вакцинный штамм s. typhimurium № 3 защищает соответственно 86г1% и 26,7Й сраженных животных.

Обоснована возможность оценки напряженности иммунитета у пари )ально иммунизированных телят по нарастанию титра копроантител и юказателям кожной реакции гиперчувствительности замедленного ти-ia.

Практическая значимость работы. Разработан и внедрен в практику способ однократной парэнтеральной и пероральной иммунизации 'елят вакциной против сальмонеллеза молодняка, установлены опта-¡альные иммунизирующие дозы: соответственно I и 200 млрд микроб-па: клеток.

Утверждены 1УВ СССР нормативные документы:

- ТУ - вакцина против сальмонеллеза молодняка (10-07-215-91};

- Наставление по применен™ вакцины против сальмонеллеза ио~ юдняка (II.II.91);

Апробация работа. Материалы диссертации доложены и обсуждены на сл<;,ц.Г'4их конференциях:

- научних конференциях молодых ученых БГНКИ взтпрепаратов Шаокьи, 1907, 1988, 1989 и 1990 г.г.);

- Всесоозной конференции "Эпизоотология, эпидемиология, сред ства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных" (Львов, 1988);

- Всесовэной научной конференции "Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов" (Москва, 1991)

- Всесоозной научной конференции, посвященной 140-летию Харь ковского зооветеринарного института (Харьков, 1991);

- Научно-практической конференции "Профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями молодняка животных Шосква, 1993).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликованы 6 статей, отчет о научно-исследовательской работе (# гос. реги рации 0186010428, Косква, 1992).

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литератора, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.

Работа иллюстрирована 25 таблицами. Список использованной литературы включает 214 источников, из них-110 иностранных г-ров.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛВДОВЛШШ 2.1. Материалы и методы.

Работа выполнена в лаборатории контроля и стандартизации препаратов против сальмонелле за, лептоспироза и эшзрихио'за Всарос с» :--кого государственного научно-исслвдовательского института кон

50яя, стандартизации и сертификации ветер пиарных лреп&рчтов, тнтно-проиэведствемиоихозяйстве "Нашкинл'", в хозяйств..-: Носко ь-:мой и Тамбсвской ссм-летвй в ссответспшн с плане« научных иееле-[овешнй института по эадашт 03.03.il. "Сеяекциогшровать и еиеяр.т исокоэф|ектиБные атажы сальмонелл ддя производства биопрепарАТов*

В работе использованы:

А-Ттенуирашшш шашш э- <1иЫ1п Рок 5. гу|/М«ииг1„щ

* 3, вирулентные штампы з . 4иЫ1« Ш £?3 к з . 1уры«иг1ая.

* 371.

Питательные ияса-твкашиВ %льсн |НПБ); квсо-ааа?ок-

ий агар ШЛА); агар и бужьая Хоттодаара; шсо-петвшшй кеченоч-ий бульон под вазелиновым кастам с нфсвепсшн печени СШИБ); поиу-одкий мясо-иелтомшй агар с О,25-0,Зрэ-вдм содержанием агар-агара; ■редн: Сабура, Эвдо, Шгоскярева, Пасса; абззжиренксв мояого; мяла« »втснкый жеагатш; пшюсга <$вшлрвваашов бумаги, щртстаитп утг-■усно-кислым свинцом и реактивам Эрлкжа.

Еивотнт: Йедвз шш массой 14-16 г - 2200, морские еекняи :ассой 350-400 г - ТОО, кралажв породи швяишз массой кг

0, телята 15-30-даешага возраста - 165 голов.

Вакцина против еадьмонедшаза молодняка кз еунресеорны* рй педантов 3 . ¿'цЬИп » 6 й 3 . 1урЬ£да»г1ыл» № 3, альные, кагатсвдаиныв в лабс^раторня, и прсйзвадгтвенкна с^ик, аа-©токвзкнне Ставропольской бйю^&^рлик&й,; концентрированная фзрчил-васцовая вакцина против ст^мвиавдаэа. телят. производства &деко~ <о бшзкомбината.

Оборудование и иагерягиш: мЕЕЕроетогг КШ-3; оса^ител-о гглютиноскоц; лупа бинокулярная МБС-1; стандарта мутности с «антрацие® 0„&-2 гард кякрсбггох клеток ш I см3; центрифуЪа марка '-23 и Т-24; торзионные веси тяпЬ В~802;г аннл&тядаеш» ама* ШЬк-ййа;

о .

холодильники марки "ЗИЛ"; термостаты с температурой 37-38°С; фарфоровые ступки с'пестик&ми; стеклянные флаконы вместимостью 0,1, 0,2, 0,5 литра; стекла предметные; пипетки мерные стеклянные I, 2, 5 и 10 см3; пипетки пастеровские; чашки Петри; ампулы стеклянные; колбы 0,5-, 1-, 3-литровые; плашки полистироловые; стерилизаторы;^ шприцы; иглы и др.

'¿.1.1. Вирулентность контрольных штаммов сальмонелл определяли по величине 50^£-ной летальной дозы (ДЦдд) для белых мышей, выраженной в микробных клетках.

Иммуногенную активность вакцинных штаммов оценивали по величи не 50$~ной иммунизирующей дозы (ЕДзд) для белых мышей и морских свинок, выраженной также в микробных клетках.

Остаточную вирулентность вакцинных штаммов сальмонелл оценивали по величине переносимой дозы для белых мышей.

ЕЛ.2. Превентивную активность сыворотки крови иммунизированных телят и морских свинок (ВД^) определяли для белых мышей массой 14-16 г, которым вводили сыйоротку подкожно в дозах 0,5, 0,1, 0,02 и 0,004 см3, по 5 мышей на дозу. Через 24 часа опытных и кот рольных мышей заражали вирулентными штаммами б . с*иЫ1п 373 и 5 . 1урИ1тиг1ит 371 В Д036 5 ДД§(}.

ДЦзд и ВДзд штаммов, ЦЦдр сыворотки' расчитывали по методу Цербера, в модификации Ашмарина (А.М.Ашмарин, А.А.Воробьев, Ко2). ^ 2.1*3. Титр антител в сыворотке крови и копрофильтратах определяли в пластиночной реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с О- с а.п ь ыонеллезныж эритроцит арными" диагностикумами групп В и Д производства МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского.

Для получения копрофильтратов к свежей фекальной массе добавляли равное по объему количество физиологического раствора, полученную 5СУ£~ную взвесь гомогенизировали и,центрифугировали при 1^-15 тыс сб,';ин в течение 30 мин.

РПГА при определении титра копроантител ставили 9 разведениях 1:2, 1:4 и т.д.

Средний геометрический титр антител в РПГА определяли по методу Ф.С.Сайдулина (1961).

2.1.4. Реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЭГ) оценивали у морских.свинок по феномену отека лапки, у телят - по величине инфильтрата на месте введения антигена. ■

Сальмонеллезные антигены, полученные по методу Буавена, вводили .внутрикожно морским свинкам - в подушечку задней лапки, телятам в область средней трети шеи. Реакцию ГЗТ оценивали по 4-бальной системе, в зависимости от величины гиперемии и инфильтрата.

2.1.5. Методы оценки антигенной совместимости .'вакцинных штаммов и напряженности перекрестного иммунитета изложены в соответствующих главах.

2.1.6. Статистическую обработку результатов опытов, проводили по Г.Ф.Лакину (1980), А.Й.Венчикову и В.А.Венчикову (1974) с вычислением средней арифметической по группе (М) и средней ошибки средней арифметической (м). Достоверность разницы показателей (Р) определяли по таблице Стьюдента, сравнивая коэффициент достоверности вычислений "(td ) с табличным значением для данного уровня Р и числа" степеней свободы гт .

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3,1. Изучение совместимости сальмонеллезных антигенов в бивалентной вакцине

Вакцина против сальыбнеллеза молодняка, далее обозначаемая как "бивалентная вакцина", содержит два серовара сальмонелл: s . dublin № б и s . typhimuriui* № 3, взаимное влияние которых ln vivo не изучено.

Ыы поставили задачу изучить характэр взаимоотношений между вакцинными штаммами в бивалентной вакцине. Оценку взаимоотношений между вакцинными штаммами проводили по следующим показателям:

- количеству микробных клеток вакцинных штаммов в гомогенатаз печени и селезенки иммунизированных белых мышей; |

- титру сывороточных и копроантител;

- показаниям кожной реакции гиперчувствительности замедленного типа;

- иммуногенности бивалентной в сравнении с моновалентными вш цинами по величине ЕД^.

3.1.1. Совместимость вакцинных штаммов э . ¿иЬПп № б и ' в . гурЬ1тигйиш № 3 изучали на белых мышах. Мышам вводили подкожно по I млн, или пероральНо по 5 млрд микробных■клеток смешанных в равных частях упомянутых вакцинных штаммов. Через 2, 4, 8, 12, 16 и 20 дней мышей умерщвляли эфиром, вскрывали, извлекали

у

печень и селезенку, брали навеску и растирали в стерильных ступках с равным количеством физиологического раствора. Из гомогената готовили десятичные разведения в физиологическом растворе и по 0,1 см3 из каждого разведения высевали в чашки на поверхность плотной питательной среды. Через 24 часа культивирования при температуре 37°С учитывали количество выросших колоний каждого серов ра. —- •■

Вакцинные штаммы в . аиЫГп № 6 и э . 1урЫтиг1шп № 3, -введенные белым мышам в равных количествах,не проявляли конкурент ных взаимоотношений. Они высевались из печени и селезенки после подкожного и перорального введения примерно в равных количествах.

Различие в количестве микробных клеток вакцинных штаммов э . с!иЫ1п кби 5. гурЫииг1ит № 3 в органах были статиотически не достоверны (Р>0,05).

После подкожного введения количество микробов обоих штаммов увеличивалось как в лг чони, так и в селезенке со 2 по 8 день с j-9 до 21-30 тыс микробных клеток на I г, затем юс концентрация з органах сокращалась к 16 дню до 2-3 тыс, а к 20 дню наступала юлная элиминация.

После перорального заражения количество микробов было Í'ОКО и -лальным через 2 суток (36-42 в печени; 32-40 тыс в селезенке), удерживалось на таком уровне до 8 дня, а затем снижалось, и так «е.как при подкожном введении на 20 день сальмонеллы в органах не обнаруживались.

3.1.2. Титр антител в сыворотке крови и копрофильтратах иммунизированных мышей к антигенам S . dublln И S i typblmurluffl находился примерно на одинаковом уровне. В первые 8 суток после иммунизации в сыворотке не были выявлены антитела, а своего максимума титр антител достигал на 20 сутки после введения вакцины. Максимальный титр сывороточных антител с антигеном s . dublln составил 1:16,4+0,6 при подкожной и I:II,3¿j2,4 при пероральной иммунизации, а с антигеном s . typhimúrium соответственно 1:15,5+0,8 и 1:10,8+2,2.

Копроантитвла у. подкожно вакцинированных мышей выявлялись с 8 по 16 сутки после иммунизации и имели титр к обоим антигенам 1:5-1:10. После пероральной вакцинации максимальный титр копра-антител 1:40 выявлен на 4 день и был одинаковым к обоим штаммам.

3.1.3. Кожная реакция гиперчувствительности замедленного типа у белых мышей, иммунизированных бивалентной вакциной также подтвердила отсутствие конкурентны* взаимоотношений между вакцинными штаммами. Реакция ГЗТ была положительной на 15 день у УС$ вакцинированных мышей как с антигеном s . dublln , так й о.антигеном

S. iyfyh-Jmuríüin ,

3.1.4. Сравнение иммуногенности бивалентной и моновалентной вакцин из штаммов s , dublin № 6 и s . typhimurium № 3 выполнено на 160 мышах, разделенных на 4 группы, из которых - первая была иммунизирована вакциной из штамма s, typhimurium № 3 и заражена вирулентным штаммом s . typhimurium 371; вторая - вакцинирована! s . dublin № 6 и заражена s . dublin 373; третья - вакцинирована бивалентной вакциной и заражена s . typhimurium 371; четвертая вакцинирована бивалентной вакциной и заражена s . dublin 373.

Установлено, что ВД50 бивалентной вакцины к штамму s . typhimurium составила 2,5 • 10^, а моновакцины - 3,1 • 10^; против штамма; s , dublin соответственно - 3,1 •• I04 и 3,9 • I04.

Таким образом, каждый штамм в бивалентной вакцине проявляет несколько большую иммуногенность' по сравнению с моновалентными вакцинами, что свидетельствует о синергизме между штаммами в составе вак-цщ :.

3.2. Изучение напряженности перекрестного иммунитета у животных К вакцинным штаммам s . dublin № 6 И s . typhimurium 3.

Необходимость изучения этого вопроса обусловлена данными smith .1965), Collins (1966) , Padmanabas (1979) , Meyer et.al,(I980) О наличии напряженного гетерологичного иммунитета при сальмонеллезе и, р частности, у животных, иммунизированных s . dublin, к заражению S . typhimurium .

Работа выполнена на 4 группах'Морских свинок (300 голов), из которых иммунизировали подкожно две группы штаммом s . dublin № 6 И две группы - s . typhimurium № 3.

0 налйчин и напряженности,иммунитета судили по трем тестам: тит ру антител в сыворотке крови, кожной реакции ГЗТ и выживаемости имму визированных животных после заражения.

.п

Напряженность перекрестного иммунитета к вакцинным штаммам »ценивали по процентному соотношению перечисленных показателей юсле иммунизации и заражения гомологичными и гетерологичнши ттяммами.

Максимальный титр антител в сыворотке крови выявлен на 16 1ень после вакцинации, У морских свинок, вакцинированных штаммом з . с1иЫ1п Г3 б, титр антител к гомологичному штамму был ятшс . ía 30-4СЙ по сравнению с титром к гетерологичному штаммуЭ . гурЫ-

шиг1иш . У животных, вакцинированных штаммом э . ти[1ит 3, титр антител к гомологи чнсму штамму был выше на гитра антител к гетерологичному штамму э . аиЫ1п ,

У морских свинок, иммунизированных э , аиЬНп № б и 3 .

1урЫтиг1ит № 3, количество положительно реагирующих животных в реакции ГЗТ с гомологичными антигенами составило соответственно 100 и 93,3%, а с гетерологичными антигенами' соответственно 46 и 423.

В остром опыте сохранность морских свинок, иммунизированных штаммом з. . с)иЫ1п 6 и зараженных гомологичным штаммом составила 83,3$, при заражении гетерологичным штампом э , 1урнл~ тиг-з.ит ГЙ71- 36,1%, т.е. была меньше в 2,3 раза.

У морских СВИНОК, иммунизированных Э. гурШ.тиг1иго № 3 соответствующие показатели составили 86,7 и 26,7%.

Таким образом, можно заключить, что штаммы э . ¿иЫ.т № 6 и э. гурН1шиг1ит № 3 формируют перекрестный иммунитет, напряженность которого уступает напряженности гомологичного иммунитета в 2-3 раза, что свидетельствует о необходимости введения в вакцину двух упомянутых сероваров сальмонелл.

3,3. Определение напряженности иммунитета у морских свинок и телят в зависимости от дозы и кратности перорального и парэнте-рального введения бивалентной вакцины.

Следующим этапом наших исследований было изучение иммуноген-ности бивалентной вакцины в зависимости от кратности перорального введения.

С этой целью иммунизировали морских свинок перорально бивалентной вакциной одно-, двух-, трех и четырехкратно в суммарной дозе 10 млрд микробных клеток. Телят иммунизировали этой же вак. циной перорально одно-, двух- и трехкратно в суммарной дозе 200 млр, микробных клеток. Контролем служили животные, иммунизированные подкожно концентрированной формолквасцовой вакциной против сальмонел-леза телят. У иммунизированных животных через 5, 10, 15, 20, 25, 30 и 35 дней после введения вакцины определяли титр антител в сыворотке крови и копрофильтратах, превентивные свойства сыворотки крови иммунизированных животных для белых мышей, формирование кожной реакции ГЗТ, выживаемость вакцинированных животных в остром опыте.

У перорально иммунизиррванных морских свинок титр"сывороточных антител нарастал с 10 по 25 день после иммунизации и составил после однократного введения вакцины I:18,6+0,9, двукратного -1:33,3+1,5, трехкратного - 1:39,8+1,2, у четырехкратно иммунизиро-. ванных бивалентной вакциной и иммунизированных однократно подкожно формолквасцовой вакциной - I:50,Lk3,3.

• У перорально иммунизированных телят максимальный титр сывороточных антител выявляли на 20 день после вакцинации, при этом его величина существенна не зависила от кратности введения вакцины (38,72+3,75 у одно- и двукратно иммунизированных, 35,95+3,99 у трех кратно иммунизированных).

У животных контрольных групп, иммунизированных подкожно фор-0 молквасцовой вакциной, титр сывороточных антител был в 2 раза выше,

чем у перорально иммунизированных бивалентной вакциной телят.-

Копроантитела у телят и морских свинок в наибольших титрах (соответственно .1:226,2 и 1:80) выявляли на 5 сутки после одно-фатной иммунизации животных бивалентной вакциной. У животных, 1ммунизированшх с большей кратностью, титр копроантител был'в 3,7-4 раза ниже, чем у однократно иммунизированных.

В контрольных группах, где морских свинок и телят иммунизи- • ровали подкожно формолквасцовой вакциной, титр копроантител был соответственно 1:5 и 1:16,8.

Превентивная активность сыворотки нрови однократно иммунизированных морских свинок была наибольшей'на 15 день после иммунизации и защищала белых мышей от гибели в дозе 0,055 см3, двухт и трехкратно иммунизированных' - 0,05 см3, четырехкратно иммунизированных - 0,048 см3, в контрольной группе - 0,062 см3.-

Сыворотка крови иммунизированных с разной кратностью телят зачищала мышей от гибели в дозе 0,034-0,046 см3.

Корреляция между титром антител, выявляемых в РПГА, и превентивной активностью сыворотки крови не отмечена.

Реакция ГЗТ была положительна у 83,3-88,9® морских свинок на 15-20 день после иммунизации бивалентной вакциной, независимо от кратности ее введения. В эти сроки.реакция ГЗТ была положительной у 90-10(% вакцинированных телят.

В группах животных, вакцинированных подкожно формолквтсцовой вакциной, реакция ГЗТ была положительна у морских свинок в 44t и у телят в Ъ% случаев.

Влияние дозы и кратности перорального введения бивалентной вакцины на напряженность иммунитета изучено на 330 морских свинках, из которых по 60 голов были иммунизированы одно-, двух-, трех-, и четырехкратно, из них 60 свинск вакцинировали формолквас-

цовой вакциной и 30 оставили невакцинированными.

Через 5, 10, 15, 20, 25, 30 дней свинок заражали смертельной дозой смешанной культуры сальмонелл по 10 млрд микробных клеток на голову.

Установлено, что сроки формирования иммунитета не зависили от кратности перорального введения вакцины.

■ Так, по группам, морских свинок выжило после однократной иммунизации - 38 (63,3$), двукратной - 35 (58,3$), трехкратной -38 (63,3), четырехкратной - 32 (53,3$),

Из 60 свинок, иммунизированных подкожно формолквасцовой вакциной выжило 18 (ЗС$). В контроле выжило 2 свинки (6,06%) из 30 гс лов.

Пероральная иммунизация вызывала довольно быстрое формирование иммунитета: на 5 день после иммунизации выжили 18 свинок (4Ъ%] на 10 день - 23 (57,5%), на 15 и 20 дни - по 31 (77,5$), на 25 -- 29 (72ДО.

Влияние на напряженность иммунитета кратности перорального введения бивалентной вакцины изучали на 45 телятах, разделенных на 5 групп.

Бивалентной вакциной иммунизировали одно-, двух- и трехкратно по 10 телят, формолквасцовой вакциной двукратно подкожно - 10. телят, 5 телят составили контрольную группу (невакцинированные).

На 20-й день после иммунизации телят заразили перорально сме; тельной дозой сальмонелл, количество выживших животных по группам составило 8, 7, 8, 4, в контроле выжил I теленок.

• Таким образом, в опытах по определению динамики накопления сывороточных антител и копроантител, превентивным свойствам сыворотки крови, кожной реакции ГЗТ и выживаемости вакцинированных жи вотных после заражения установлено, что однократная пероральная и

Г5

(унизация телят бивалентной вакциной не уступает по степени защита двух- и трехкратной иммунизации, и эффективнее подкожной,дву-сратной иммунизации гтнактивироранной вакциной.

Оптимальную иммунизирующую дозу бивалентной вакцины для под- . №ной иммунизации определяли на 4 группах телят 21-25-дневного юзраста, по 5 голов в группе. Телят иммунизировали подкожно бив? гентной вакциной в дозах 4, 2, I и 0,5 млрд микробных клеток.

Через 20 дней вакцинированных и контрольных животных заразит шутрибрюшиннр смертельной дозой смешанной культуры вирулент-ШХ штаммов S . dublin 373 И S. typhimurium 371,

Количество выживших телят по группа?,t составило 5, 4, 4, 2, i, íto позволило дозу I млрд микробных клеток считать достаточной для формирования иммунитета при подкожной иммунизации. •

3.4. Эффективность бивалентной вакцины в производственных условиях

Работу начали с лабораторного испытания вакцины.

Телят в возрасте 12-15 дней иммунизировали бивалентной вакци--юн пероряльно однократно в дозе 200 млрд или подкожно однократно в дозе I млрд микробных клеток.

В качестве контроля использовали невакцинированных животкы:-i вакцинированных концентрированной формолквасцовой вакциной против сальмонеллеэа телят подкожно двукратно в дозе 6+8 млрд, а танке живой вакциной "Бовисальораль" (ГДР) перорально однократно з позе 5 млрд микробных клеток.

После Енутрибрюшинного заражения вирулентной культурой штамма s • dublin 373 в дозе 90 млрд микробных клеток, из 5 телят, вакцинированных бивалентной вакциной выжило 4, из иммунизированных фор-лолквасцовсй вакциной выжило 3 из 5. Среди телят, иммунизированиях вакциной "Гювисальораль" пало 4 из 5, я не вакциниро ванной групп*"

гьиш нее хагьонзш.

Результаты лабор&торааго мстагашш гюка-чаяи, что наиболее ¡^««твй была нюрюшря (Ькипнпи)! «кцда&й как подкожно, так и пе^орально.

Прсггаводстеешят» испытания вакцин йртьеян в 1С животноводческих хозяйствах Тамбовской области и в д»ух х^зчГстьах Московской области.

Ктмчсгией баги отобрали хоаяйсткз как \'сл5«ша бкатополучше, так 1( е-тациина^о иебдгаготог^учнна из с-акыгсн^ляр'ау.

Всего шнкшшрошя 8021 пееш, из шве ^шрняюй вакциной вердрально - 400, гмдоеджв© — 434, ши^ечий "Витеальораль" -1161, форрянздгцэьой а&ифщэй - 1125. гелм.

Тстшовкяа безвредность и низкая бивалентной

и&щана.

В уелаш© Йтатодалцрчнш; по «аоьмямегшгзу змжгйствах пэдажа шшшш» ввф№ш{пшба бпштшР шркЛ телят не била. В кдагфсяьних газетах пьля иш сш^т^екз* убити о* 5,2 до 9,< В егацишарзл вейлштотояучнои вг оалгьшиеляедау хозяйстве, ва »¿«.»¿я ьйетгки бовеаш сохр&икэатгь тег, взюдеш^ваниых бивалент-н©3 вяй?е№й педкеино» сосгадаыга 9К, вак^марвшдаыкх шрорально одго®]рашэ - 'КЙ и шрораяшо дщщачиз -

В Есетрйашшс г^шгах сажрашгоста телят ссетавала 64 Сйюх^тпкзсть пдад/ченягя: резухьютге тавозала. кш внести не-и&»даиив догатазнкй ш измааэния в кгст&вление г© применению ваищ ыа кртгив сагьмЕнаяжвэа модцдкяв» к б чехкичэсккз условия на преп, к». '

В К В 0 Д. и

I. Вяле^йш измят» сшшюнелжза. ы.ало.рьяка абестчаазет форы» у тедет югаадатет высота® кздрязенноета посла однократна

введений иар-пггерально (педкс.тно) г. дозе I иярд или п-?ро|«лы!й -200 млрд микробных кдчтор.

2. Иммунитет у тйярг, и'Р'указирсттнга кипчакС о?1.«» моиеллеэа молодняка порорп.чьно сг.яокрятнз, ь'» уетуь кс и-и?| л-ч« ноети ишуннте-'у у гелпт» получииэтх ту до тччйцчшу н^рарааыю друх-и трехкратно.

В>эгигаемосгь п?роралнго гагтунпзировшпшх имя», рарякенннх

смертельной дгчсР сальмонелл состдьилн юдоишгою оч нршшетп введении в*«ц!шц 80% от числа зарвдепннх.

3. 1&шуниы? у тс^лт, учитыи>м»иИ» по тчгрз- сиодмтдешмх антител и копроантител в РИГА, превентивной активности сыворотки крови для бедвх мышей (см3) н реакции ГЗТ, характеризуется следум-пими показателями после иммуниззции соответственно:'

однократной - 1:30,7+3,8; 1:226,2+14,5; 0,034; 90«;

двукратной - 1:30,7+3,0; 1:56,6+3,6; 0,046; 10(#;

трехкратная - 1:35,?чЗ,4; 1:61,7^3,5; 0,027; 100Г-.

4. Тсст-в,".:'., чез »о"йг-'.ц'!И наиболее полно оценить напря*пдаг,е.ть иммунитетч у телят после пероральиой «умунизяции , пемкмо

мости жипстнш поело заражения смертельной дозой саяьиопедл, якпя-ется титр -чнтитея в ксп} с^ьчьтратах и кстнал реакция г.*ше| чувствительности аш-'едленного типа.

5. Аттенуировалнне штамчы б- ¿иЬИп Р 6 йэ • сурМпиг!ии

№ 3, входящие в состав ввкцгош против сальмсне.пеза мою;у|;п л, н--проявляют конкурент)«« РзакчодеРетпиИ, чте !н.>дтрер«;»ас'гея 1~й»о-значным гезлунныч ответом на введение в организм обоих штаммов, отсутствием статистически достоверных различий в их №севаечостп' ил органе.- : -. ¡^игир&клнкх »иргтш.х, титр:*« •штат"л «• г ндк | .п - к> и кош / :хх.,. 1иь.^а'1ч*ямии ГЗТ и вшппптпг. №'••1!"" и—--;:«"'-

мщей дозы для лабораторных животных.

6. Изготовление вакцины против сальмонеллеэа молодняка из двух сероваров в . аиЬИп , № 6 и б. 1урЫтиг1иш № 3 является целесообразным в связи с тем, что напряженность перекрестного иммунитета недостаточна для защиты животных от сальмонелл гете-рологичных сероваров. Сохранность животных, вакцинированных штаммом э . 1урЫтиг1ит № 3 и зараженных вирулентным штаммом этого же серовара составила 86,7%, при заражении э . ¿иЫ1п 373 26,7%, При вакцинации животных э . аиЬИп № 6 соответствующш показатели составили 36,7? и 83,3$.

7. Вакцина против сальмонеллеэа молодняка имеет низкую реак-тогенность. У телят, вакцинированных перорально одно- или двукратно в дозе 200 млрд микробных клеток, поствакцинальные осложнения отсутствуют. После подкожного однократного, введения вакцины в дозе I млрд микробных клеток кратковременное повышение температуры тела на1-1,5°С в течение 3-6 часов наблюдали у 3,Щ, а после введения формолквасцовой вакцины - у 12,4% вакцинированных животных.

8. В условно благополучных хозяйствах среди телят, иммунизированных вакциной против сальмонеллеэа молодняка однократно подкожно или через рот, случаев сальмонеллеэа не было, среди вакцини-рованньгх концентрированной формолквасцовой вакциной пали или выну: дейо убиты по группам от 5,2 до 9,6$.

В эпизоотическом сальмонеллеэном очаге отход по группам составил соответственно 9, 20 и 35%

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для специфической профилактики сальмонеллеэа телят, вызываемого э . аиЬПп из. 1урЫтиг1ит , применять вакцину против сальмснеллеза молодчяка.

В условно благополучных по сальмонеллеэу хозяйствах импонировать телят подкожно однократно в дозе I млрд, или перорально некратно' в дозе 200 млрд микробных клеток."

В неблагополучных по сальмонеллезу хозяйствах вакцинировать лят подкожно однократно дозой I млрд или перорально двукратно зеши 100 + 100 млрд,микробных клеток.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБМШШШЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Лебедев O.A. Иммуногенность препаратов против сальмонел- • за сельскохозяйственных животных // Контроль качества биологи-ских ветеринарных препаратов: Сб. научн. тр. - М: ВГНКИ, 1987. -

105-107.

2. Лебедев.O.A. Иммунный ответ у телят на перордльную имму-зацию живой сухой вакциной против сальмонеллеза молодняка /Д1е-ды государственного контроля ветеринарных препаратов: Сб. науч; |. - I«: ВГНКИ, 1988. - С. 48-53.

3. Лебедев O.A. Особенности иммунного ответа у телят, имму-:зированных живой вакциной против сальмонеллеза // Эпизоотология, шдемиология, средства диагностики, терапии и специфической про-[лактики инфекционных болезней, общих для человека и животных:

iT. Всесоюзн. конф. - Львов, 1988. - С. 289-290.

4. Лебедев O.A.. Рациональная схема иммунизации молодняка жи~ >й сухой вакциной против сальмонеллеза // Совершенствование mûto->в государственного контроля ветеринарных препаратов: Тез. докл. ¡есогозн. научн. конф. - M., 1991. - С." II3-II5.

5. Тетерникова Е.В., Кириллова В.В., Лебедев O.A. Восприимчи-)сть цыплят к сальмонелле энтнритидис при' экспериментальном зара-тш // Совершенствование методов государственного контроля поте-

ринарных препаратов: Тез. докл. Всесоюз. научн. конф. - М., 199: С. 175-177.

6. Лебедев О.А, Методы оценки иммунного ответа у телят при пероральной иммунизации против сальмонеллеза // Мат. Всесоюзн. конф., поев. 140-летию Харьковского зоовет. инст. - Харьков, 19^ С. 127-128.

По дпиеайо в печать 2C-.07.I993 г. Зак. 798 ,-Зормат 60x84/16. Тир. 100

Москва. Т ипография РАСШ