Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Мыт лошадей в Казахстане (распространение, свойства возбудителя, разработка средств специфической профилактики и лечения)

Р ^!&россШкий НАУЧЙО-ИСС.ВДОВАТЕКККИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ им. Я. Р. КОВАЛЕНКО (ЬИЭВ) РОСШЙСИЙ'ЖЭДШИИ СЕЛЫЗКОДОЗЯЙСТВШНЫХ НАУК

На праьах рукописи

САНСЫЗЕАЕВ АБДАЙ РЬСЕАЕВИЧ кандидат ветеринарных наук

МЫТ ЛОШАДЕЙ В КАЗАХСТАНЕ (распространение,свойства возбудителя,. разработка средств специфике" чй про-• фялактики и лечения)

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология,эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени дсдегора ветеринарных наук

Москва -1993

Работа выполнено во Есеросонйском научно-исследовательском институте экспериментальной вотеряна пик ш.Я.Р.Коваленко и в Казахском научно-исследовательском ветеринарном инстигутэ,.

Научный консультант: доктор ветеринарных наук,

1 профессор К.П.Юров

Официальные оппонент доктор ветеринарных науу,

профессор Лучко М.А (ЕИЭВ)

заслуженный деятель неукк

Казахской ССР

доктор ветеринарных наук

профоссор Архангельский И.И (Университет Друибы народов)

доктор ветеринарных наук Панин А.Н. (НГНКй)

Еедущее учреждение - Всероссийский научно-ясслэдова-тельскьй и технологический институт биологической промышленности (г.Щальково)

Защита диссертации состоится 1993 года

б и|У^~часов на заседании специализированного созата Д 020,20.01 по защите диссертации на соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии та.Я.Р.Коваленко (100172, Москва, Кузьминки, БИЭВ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан "" 1523 года.

Ученый секретарь специализированного совета,

кандидат ветеринарных наук Ф.Г.Терешков

I. ВЩДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Многолетняя практика ведения хозяйств-Казахстана, расположенных в пустынной и полупустынной зонах, показывает, что наиболее полное и рациональное использование естественных кормовых угодий с наименьшими затратами возможно при развитии табунного коневодства.

В современных условиях коневодство отличается многогранностью, а даенно: рабочие лошади, опортшша,лошади на экспорт и для биологической прсмышленноста. Конина обладает высокой пищевой ценностью, а кумыс по праву завоевал себе славу "богатырского напитка, обладающего ценными диетическими.и лечебными свойствами. Кроме того, из крови'лошадей медицинская и биологическая промышленность получает лечебные сыворотки и другие уникальные биологические активные препараты: СКК, ацетнлхолшег стеразу, сорбенты, иммуноглобулины и пр.

Развитие современного коневодства сдерживает ряд инфек-.;. циошшх болезней, среди которых наибольший экономический ущерб наносит мыт. При анализе отчётности Главного управления ветеринарии республики Казахстан за период с 1981 по 1990 годы, . и по результатам проведенных нами исследований установлено,что большинство хозяйств республики стационарно неблагополучны по указанному заболеванию.

Мыт лошадей вызывает значительна отход жеребят.Тем не менее ветеринарная ирзятика до сих пор не располагает эффективными препаратами,предназначенными для профилактики и терапии этой болезни. Существующие методы профилактики и терапии мыта лошадей вэ дада желаемого эффекта. В этой связи разработка новых »${*жташшх методов, средств лечения и специфической профилактика

представляет собой научный интерес и отвечает запросам практики.

Цель и задачи исследований» Целью настоящей работы является изучение некоторых вопросов эпизоотологии мыта лошадей в республике Казахстан и разработка средств и методов борьбы с этой инфекцией. Поставленная задача обусловила формулировку следующих конкретных вопросов:

1. Изучить некоторые вопросы эпизоотологии мыта лошадей в республике Казахстан и их зональные особенности.

2. йзработать эффективные методы лечения к профилактики мыта лошадей.

3. Изыскать новые средства специфической профилактики мыта и испытать их в экспериментальных и производственных условиях.

- выделить и отобрать наиболее иммуногбнные штампы мытного стрептококка йз числа выделенных в различных регионах республики, с целью их использования в качестве производственных;

- разработать НТД на применение к изготовление новых средств химиопрофилактики и лечения мыта лошадей;

- в опытах на лабораторных в восприимчивых к мыту животных изучить напряженность поствакцинального иммунитета и провести апробацию препаратов в производственных условиях;

- разработать технологию изготовления инэктивированной субъодиничноа вакцины против мыта лошадей и подготовить нормативно-техническую документацию на изготовление опытно-про-мышленнол партии вакцины.

Научная новизна работы, Изучено распространение мыта лошадей и охарактеризована эпизоотическая ситуация по этой гн$екдйк в различных зонах Казахстана в период 1981-1990 гг.

Составлена коллекция штаммов Streptococcus equi .находившихся в активной циркуляции в течение последних десяти лет, ззучзны ах основные свойства (культуральные, морфологические, ферментативные, вирулентные а антигенные). Из числа выделенных штампов отобран наиболее вирулентный, селекционированный. кммуио-гэнный* референтный штамп Streptococcus equJ -ЮС-15,который депонирован в коллекция микроорганизмов НГИКИ натнрипара тов.

Шделеы а охарактеризован М-балок мытного стрептококка, ответственный за иммуногенн_~—-ные а вирулентные свойства еоз-будзтэля. Полученные результаты послужили основанием для последующей разработка субъединичной вакцины протиэ мыта лошадей.

Установлено, что антибактериальная активность антибиотиков пенициллинового ряда (бициллш-3,бициллин-5) значительно возрастает при сочетании с поверхностно-активным веществом катион-ного соединения 1-2-этилен-<5ис ( N - диметилкарбдецилоксзшетил)-аммония дахлорид - э тони ем в отношении fheploccccHj гс^и L На этой основе разработан препарат этобиц для лочония мыта лошадей. Эффективная терапия мыта у лооадей обеспечивается при интраназальном, внутримышечном и лимфотрогшом применении разработанного препарата.'

Научная новизна работы подтверздена авторскими свидетельствами и положительными решениями ВНИИГПЭ на выдачу патента:

A.c. I38I767 "Способ лечения больных мытом лошадей", 1987 г.;

A.c. й 1537258 "Способ лечения болышх мытом лошадей",1309 г.;

A.c. Л 1543603 "Способ профилактики мыта лошадей",1989 г.;

A.c. № 15323Э4 "Способ получения вакцины против мыта лп-ладап", 1990 г.;

А.о. ¡1 1755436 "Способ лечения больных мытом лощадай",1992 г.;

Патент të 4920587 "Способ лечения больных мытом лоиадой",1992 г.; Патент № 4940485 "Средства для профилактики и лечения суставоломг жеребят", 1992 г.;

Патент Ш 503II26 "Вакцина для профилактики мыта лошадей",1993 г.

Практическая ценность работы. Разработан эффективная препарат для лечения и химиоирофилактики мыта лошадей- этобиц, который одобрен решением президиума Ветеринарного фармакологические совота (протокол !'t 29 от 13 декабря 1988 г.).

ГУВ Госагропрома СССР 15 декабря 1988 года утвервдено "Еременное наставление по применению этония в сочетании с бициллином -3,-5 для лечения мыта лошадей", НТС Госагропром республики Казахстан 19 апреля 1989 года утвердил рекомендации "Профилактики и терапии мыта лошадей".

Взамен циркулярного письма Вотуправления Главживупра MGX ССС № 233634 от 20 января 1950 года "О мероприятиях по борьбе с мытом лошадей" ГУВ при Государственной комиссии Сов.Шном"СССР по продовольствию и закупкам утверждены "Рекомендации о мероприятиях по' борьбе зз ликвидации мыта лошадей" 6 декабря 1989 г. JS 044-3.

Рассмотрено и утверждено ГУВ МСХ СССР "Наставление и •ТУ 10.07.12-90 по применению этобица для профилактики и лечения мыта лошадей" и издан приказ о внедрении препарата этобица в ветеринарную практику СССР № 23 от 2 марта 1990 года и приказ по республике Казахстан Л 4 от 3 сентября 1990 года.

Разработана кнактивированная (субъединичная) вакцина против мыта лошадей. Вакцина на стадии опытно-промышленной партии используется в ряде хозяйств Казахстана с положительным результатом.

ГУВ МСХ СССР утверждены НТД на опытно-промышленную партию и вре-манное наставление по примаионшо знактивироганной вакцины нро-тэз мыта лошадей от 14 ноября 1391 года.

■ Анпобаиия работа. Основные положения диссертационной работы доложзнн на научно-практической конференции молодых ушных и специалистов в г.Чккменто (Чикмант, 15-17 ноября 1986 г.), научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов Казахского НИВ1 (1986-1990 гг.), научно-практической конференции .молодух ученых и специалистов в г.Фрунзе (Фрунзе,29-30 октября 198? г.), научно-практической конференции в г.Оренбург (Оренбург, 6-7 апреля 1988 г.), научной конференции молодых ученых ВИЭВ (Москва, 12 мая 1391 г.), Ш Всесоюзной конференции по эпизоотологии в г.Новосибирске (Новосибирск. 24-26 сентября 1991 г.), "Всесоюзной научно-технической конференции "Профилактика и лечение болезни молодняка сельскохозяйственных животных в г.Воронежа (Воронеж, 9-10 сентября 1991 г.), фармакологическом Совете 1988, в 1990-1992 гг. на совещаниях специалистов в ГУВ МСХ республики Казахстан и СНГ, на заседаниях Учёного Совета ШЗВ в 1990-1992 гг.

Материалы, диссертационной работы демонстрировались на ВДНХ СНГ и были удостоены золотой медали, автор награжден серебрянной медалью (Постановление от 28.10=91 г., удостоверение 12212) и демонстрировались, на ВДНХ республики Казахстан, автор награжден дипломом П степени.

Публикации результатов исследований. По тема диссертации опубликовано 22 работы, в том числа'работа, которая вошла в книгу "Болезни сельскохозяйственных животных" (Кайнар,Аяма-Ата, 1991 г. - (на казахском языке).Брошюра "Инфекционные болезни

лошадей" (Kafluap, Алма-Ата, 1989 г. - на казахском языке).Приняты в зарегистрированы 3 отчета по ГОСТу (IS85-I520 гг.), получены 5 авторских свидетельств и 3 положительных рзления на выдачу патента. Утверждены технические условия (ТУ 10.07.12-SQ, ТУ 10.07.2S0-SI, 2 наставления и 2 рекомендации.

Основные положения диосартациртаоВ работы, рыдд-вгаемыэ

1. Эпизоотическая ситуация мыта лошадей и условиях табунного конзводотва.

2. Зараитористина основных биологических свойств шхаммоь

мыта, выделяемых от больных лошадей.

3. Л'дчебко-црофшиктичйское действие этобвца при мнте ло-гадоа (внутримышечном, интраназальном и ввдолиифзпиюском) способах введения при мыте лошадей.

4. Бта:,и я-treptococcuo equi -ЮС-15 возбудитель кита лсиадзй.

5. Натерсалы по разработке и испытания вакцины против кита лошадей.

Материалы днссортацкм нз~ .ло.м'лд; на 3x9 страницах машинописного текста к состоят из гвэ» дйнь;», хьгадов, практических предложений, списка лнтарзгурк п

Работа щызжетркрошка 28 таблвцвмв, 20 рисунками, Свясок .•¡cumicrsikeii лктзратури ндояаег 370 еоточкеков, из кстарыг. cKoctf/au-jr. азгоуоз, 3 прзлокснии прэдетавлоны доку1«<ш'.гк;

розудх-тити отдолышх этапов рзбо-ш» их- над оду« ;■, :♦ <; >'■; - ¡лчиоегь.

.2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2Л. Материалы я методы исследований.

Диссертационная работа выполнена в лаборатория по изучению инфекционных болезней лошадей и верблюдов Казахском научно--всследовательскпм ветеринарном институте Казахской академии сельскохозяйственных нарт, в лаборатории вирусных болезной лошадей овдола вирусология во Всероссийском научно-исследовательском института экспериментальной ветеринарии им .Я. Р. Коваленко, на опытной базе Вышневолоцкого отдела ШЭВ, в лаборатории регуляции иммунитета Всероссийском наушо-иослодонатольском институте эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалэя Российской академии медицинских наук и в коноводпосних хозяйствах республик Казахстан и Кыргызстан с 1385 по 1993 гг.

В процессе проведения работы использовали:

1. Первичные документы, статистические данные, отчета ветеринарной службы Министерства сельского хозяйства республики Казахстан за 1381-1930 гг.

2. 224 штамма возбудителя мыта лошадей, выделенные от больных,, павших и вынужденно убитых лошадей.

3. Опытные животные (820 белых мышей массой 16-20 г; 18 кроликов породы шиншилла 2-3 кг: 151 коробят со сродной живой массой 90-120 кг,

4. 15086 лошадей в опытах по производственной апробации препарата этобиц для лечения и профилактики а инактивироБашоц вакцины для профилактики мыта лошадей.

Эпизоотическую ситуацию мыта лошадей в республике изучали путем анализа ветеринаркой отчётности Главного увравдоиад зато-

ринарии Министерства сельского хозяйства республики Казахстан за период 1980-1590 гг.,а такяе по результатам собственных исследований при выездах в неблагополучные но мыту лошадей коневодческие хозяйства. В работе применяли методические рекомендация., разработанные С.И.Джушшой и В.А.ВедэркЕковш (1981).

Ввделенаа стрептококка из зсслздуемых материалйв дроеодвлй общепринятым бактериологическим методом, путем высева из гноя подчелюстного лимфатического узла, слизистой носовой полости и паренхиматозных органов на жвдкие и плотные питательные среды-

Сиизь из верхних дыхательных путей получали от лошадэй с помощью стерильных ватных тампонов, которые затем погружали в пробирки с 5 мл стерильного физиологического раствора с рй 7, 2-7, 4. Полученную суспензию высеезди на чашки с кровяным или сывороточными агаром; биоцробу ставили па белых мышей.

От клинически больных, павших и здоровых лошадей е неблагополучных и благополучных коневодческих хозяйствах республики Казахстан выделено 224 изолята стрептококка, у которых в лабораторных условиях изучали морфологические , культуральные,ферментативные, вирулентные, антигенные и пммуногенше свойства,о такяе' чувствительность выделенных строктоккоков к различным антибиотикам, атонию и их сочетаниям.

Концентрацию пенициллина в сыворотке крови жеребят при внутримышечном и эндолиыфатическом введении этобица определяли методом Флеминга в модификации З.В.Ермолъевод и Е.А.Бэдылиной (1952) и методом диффузии в агаре С.М.Навашин и И,П.Фомина (1982). '

Стандартные растворы пенициллина и культура золотистого стафилококка,итамм 209 Р, были получены из лаборатории антибиотиков ГКИ им.Тарасовича.

То па по ь'л; чо скую активность и профилактическое действие

лекарственных веществ испытывали на (Зольных мытом жеребятах. Результаты оценивали по влиянию препаратов на клиническую выраженность болезни после их применения, продолжительность и исход болезни.

При выборе лекарственных препаратов для лечения больных мытом лошадей учитывали не только чувствительность,но и особенности фармак о-динамики препаратов в сыворотке крови. Реакцию преципитации в агаровом гэле проводили по методу Oyxterliny (1948) в микромодификации А.И.Гусев,В.С.Цветков (1961).

Результаты РДП учитывали через 24-S8 часов.По образованию линии преципитации в системе антиген-антитело судили о принадлежности штамма к стрептококку группы С и его антигенном родстве. Горизонтальный электрофорез белков в ПААГ-ДСН проводили в прибора ДЛЯ электрофореза " Phast System " фирмы " Pharmacia " с использованием фирменных пластин с готовыми градиентными полиакриламвдными гэлями, содержащими 8-2или 10-15$ акриламид-кых мономеров.

После электрофоретического разделения в ПААГ, белки нерано-оили из пластин геля на нитроцаллюлозныв' фильтры методом элвктропвреноса в "полусухой" буферной система.

Для постановки реакции радиальной иммунодиффузии по Манчини (1965) (РИД) попользовали 0,8$ агарозу, приготовленную на 0,01 М боратом 'буфере, рН 8,6 содержащим Ъ% полиотиленгликоля (м.ы.6000).

Экономический эффект проводимых лечебно-профилактических мероприятий рассчитывали совместно о ведущим экономистом

Казахского ШЭД Ш.Е.Жильгельдиевым согласно "Методической рекомендации, одобренной научно-техническим советом МОХ СССР и бюро отделения ветеринарии ВАСХШЛ от 9 ишя 1932 г.

Достоверность разницы средних величин двух совокупностей '..!') определяли по таблице (t-критериев) Стъвдонта. Результат считали достоверными при Р 0,05, т.е. в тех случаях, когда вероятность результатов равна или больше 95.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Эпизоотическая ситуация мыта лошадей в условиях табунного коневодства

Результаты наших исследований,проведенных в течение 1985-1993 гг. и анализ ветеринарной отчётности по заболеванию лошадей мытом за период 1981-1990 гг.свидетельствует о том,что араал болезни охватывает 9 областей республика.

Однако эти данные не соответствуют фактическому положению дела,так как мыт также регистрировали в хозяйствах других облас тей, что установлено нами клиническим обследованием лошадей 15 областей Казахстана.

Одним из показателей интенсивности эпизоотического процесса мыта табунных лошадей являются:заболеваемость,которая в последние Ю лет составила 20-30$, летальность 16-20$ в расчёте 1:10000 голоз. Уделышй вес шта в инфекционной патологии лошадей, по данным республики, по числу неблагополучных пунктов составляет 39,3$, заболевших животных 43,9$ и по падежу конепоголовья 30,6$ (рис. ). Наибольшее распространение мыта отмочено в Северной зоне - 50,2$, затем в Восточной зоне~33,3$ и в Центральной зоне-33,1$Более благоприятными в отношении за-с-5.жшт'ос?к штом оказались хозяйства Кдой зош-25,8$ и

ч.иг:«ны процент :<аболоьаомости лошадей штом бил зарегистриро--••»: и ю^л.'.стлах Западно.; золы Кизахстзпа-Ш,3$.

01 22,3 И

□ 2,?

И 0.62

гп 2,3

а 0.15

0 33,3

ш и

Ш 3,3

Ш 1,7

ЕЗ 0.4

□ 15.5

Ш 2,3

2 -Бруцеллез 5 -Ботулизм

^ -Дрплококковая инфекция

д -Лепт ос пи роз

5-Контагиозная ч плевропневмония

I - Мыт

о-Салмонеллезный абор^ 5--Сибирская язва

$ -Столбняк

II -Паратуберкулезный (? энтерит

¡8 -Пастереллез У -Эпизоотический лимфонгоит

Рис. Удельный вес мыта в инфекционной патологии 1980 - 1990 гг.

Следует отметать,что число выявленных больных кввотных постоянно повышается, начиная с сентября-октября и достигает ыаноЕмума и марте, а затем снижается в маа-июне, после чего наблюдается новый пик повышения в авгуоте-сентябрееТйнвя сезонность выявления больных животных,по нашему мнению,имеет пряму» связь с .отъемом молодняка.

Лэтне-осенняя сезонность мыта в хозяйствах является следствием резких колебаний температуры воздуха,которые сменяются заслушливыми периодами, приводящими к выгоранию пастбищ, приводит к существенному снижению естественной резистетности организма лошадей.Перечисленные факторы активизируют эпизоотический процесс, особенно жеребят, способствуют более широкому распространению болезни.' В республике лошади,в основном, находятся в условиях.круглогодичного табунко-пастбищного содержания и только в непогоду (снег, доздь, сильные морозы) размещаются в помещениях. В условиях пастбищного содержания еще некрепкий организм жеребят с трудом переносит резкие колебания температуры: в молоке кобыл,содержащихся на подножном корме, отмечается,как правило, дефицит микрсэлементоз и минеральных солей.

Как показали наблюдения, длительные перегоны табунов о летних на зимние пастбища Значительно снижают устойчивость • жеребят, что приводит к вспышкам стрептококковой инфекции. Наличие в маточных табунах разновозрастных жеребят обуславливает заболевание сначала слабых, затем и более крепких жеребят, происходит постоянное пассирование микроорганизма, что приводит к усилению его вирулентности.Отрицательно влияют на резистентность лошадей пастьба табунов в степи с тинчаково-

-полынной растительностью, поение их водой из болот.В этих условиях жеребые и подсосные конематки испытывают постоянный дефицит белково-витаминных компонентов. Не случайно поэтому заболевание чаще наблюдается ранней весной, осложняющим мыт фактором является также неустойчивая чисто холодная весенняя погода. Приведенные выше факторы способствуют возникновению,а затем распространению мыта среди жеребят.

Осложненные формы мыта, в основном, встречаются у новорожденных жеребят.Это,по нашему мнению, следствие недостаточного функционирования защитных механизмов и особенно барьерной функции подчелюстных лимфоузлов и эпителиальных покровов носоглотки и легких. .

Подтверждением тому является образование мытных абсцессов в различных органах и лимфоузлах, а также вовлечение в патологический процесс легких. С увеличением возраста жеребят совершенствуются механизмы и переболевание мытом становится более легким. По-видимому, указанное связано с постоянно иммунизацией лошадей в течение дизни незначительными дозами стрептококка.

3.2. Выделение возбудителя и биологические свойства эпизоотических штаммов.

Исследованием патологического материала от больных мытом и павших лошадей были выделены 224 культуры streptococcus qqui .

В опытах на мышах, иммунизированных инактивированными культурами с последующим контрольным заражением и наблюдением в течение 20 дней, были отобраны 10 наиболее иммуноганных штаммов, в том числе streptococcus equl J0G-I5, который в последующем использовался в качестве производственного штамма.

3.3. Фарыакокйвотака пенщшгаша при внугримыаачнои введении бицшиюш-6 в сочотакип с »гонгом в сы вороте крови керабят .

Для разработки научно-обоснованного,рационального и Цфскайваого метода лечения больных китом лошдей кзкд проводил; ъкоиор»шй¥ол!»Ш1д всслздоьанкя по кввошга»» эффекгасяих лочьсгда средств. С учётом пашет опыга,а таксе литературных Дс:шшх ироголп дабораторкко исследования по оценка авгзби&глкой лани-циа'.чйьоеого рота в сочотаки; с охокяом, а ка частое лапзбкого ¡-редс-ли»

Г< ошто использовали 5 >;»роблт и хшэой массой 90-100 кг» Бккдлчян-б в дозе 15 у^с.ЕД распорота в 10 ря 1%:-ного раствопь

й ьмодшш кс ребята;., шутрюя&шчко,. одиокра-гас»Было ¿сслк-ъ^оп^что црк внутротшэ'лгоы пзединйк бицилтана-Ь и со-чекшиз с зхзшым йвробязом взнголуаши з сыщрожо коох^« сох-Шшэюк в торановтзчеокой концонтраци!) (О- ГО ЕД/пл) до одного

3,3.ХЛоуЗЕад.^^кэтшооть бишдатвя -Д.-5 в сочэганзг.

£_•:.?онвем щ>в лечепви башшу мы^ом .те/геб^т,

I'';. того ¡как шмз была одрэделюю коадэв^хчгея леняовлзяш: г; сиьороак^- 1-.роак копсбдт, кц приступили к лвч&шго Оольшо: маш глрсйа? иасфодотсш шутрчмшещого способа вв?Д9йия щ>ешг«в%

Срлмндо прика&у Казахского ШЕ1 5 43 от 26 ноября Хс-СЗ г, :ю!*и с II. декабря 11*85 г» ро '? января 1986 г. а коне— ■ зш:одо "Е-зсчяйскнй1' &>рбулакского района ^дды-К^рганской облета провидена коиисоионюп проверки лечебной й&туьтвзкостй бшныишш в оо да танин с этониоы при ныто лошдвд.

С цтои цель» были подобрали 4 группы жеребят в возрасте 6-Ю :;осянеь, но 5 юшотшх в каждой, с клинической формой :.•!., та - лихораде.а с попиленном таыкоратури 'гели до 39-40,7° С,

угно тонна, уменьшение аппетита,при пальпации области глотав ойвчадя исстяоо повышение температуры, плотную болезненную прнпухдоотл з области подчелюошш: лшмфатачэшмх узлов.

В гз влэргнента льгах условиях иаын была првдварахалшс оцрздоА'аяа терапевтическая доаа атония н кратность введения при лочотгаз болышх мытом жеребят.При этом установлена лочэбкая п профилактическая дозы препарата - I мг/кг, 0,5 ыг/'нг массы жзг.отноро.Пзр9Д применением атония готовила 1$-ный раствор,для чего I грамм этовия растворяли в 100 мл дисталированной воды или па фюлюлоги часком растворе.Для полного растворения препарата нообходшо раствор подогревать при температуре 35-40° в течение 5-10 минут. Этоний в.дозе ОД мг 1^-ного раствора и бщиллнн-3, в доза 10-12 тыс.ЕД на кг массы животного,смешивали и вводили внутримышечно, двукратно, с интервалом 7-10 дной.

В качестве контрольных животных было использовано 5 болкшх мытом жеребят, лечение которых проводили препаратами,используе-зшз в хозяйства (пенициллин, бициллин и стрептомицин).

Иски таняе лэ чобно-ирофшшн таче ск о Я оффек тивно сти препара то в проводили!раздельно я в сочетании при появлении ранних клинических признаков заболевания. Лечебную эффективность препаратов щенивали по быстрота и полноте устранения клинических сшпто-50э заболевания, обращая особое внимание на основной сиццром а юлноту выздоровления животных.

При испытании лечебно-профилактической эффективности репарата в конезаводе проводили комплекс протияоопшоотячоских санитарпо-гиггениче ск их моропрляти 3.

Нарвой груспо жеребят применяли бициллин-3 в сочетании с ТОНКОМ (этобиц),внутримышечно в дозе 5 мл.Вторую грушу этоннй (I мг/кг МО оси животного, внутримышечно) .В третью рушу - бициллин-3 (10 тыс.ЕЛ/кг массы тела животного.).

Четвертую группу (контроль) жеребят о клинической картиной мыта не подвергали лечению.

При оценке результатов опыта учитывали клиническое состояние жеребят, число больных, выздоровевших и температуру тела.

В группах I и 2 жеребята оставались- клинически здоровы температура тела у жеребят в течение опыта приходила в норму, животные выздоровели; в третьей груше один жеребенок (№ 13) боле (наблюдали клинические признаки болезни, температуру тела -39,6°С), а в четвертой группе (контрольная) все животные болели с симптомами мыта.

Этот способ лечения больных мытом лошадей был'рассмотрен и одобрен Ветеринарным фармакологическим Советом при ГУВ Госагропрома СССР от 13.Ж.1988 г.

На основании производственных экспериментальных работ в лабораторных и производственных условиях по определению терапевтической эффективности бициллина-3,т5 в сочетании с етонием при мыте лошадей оформлена заявка, на которую получено авторское свидетельство й 1381787 от 15 ноября 1987 года. По результатам проведенных работ разработаю; л утнерэдеш ГУВ ЫСХ СССР "Наставление по применению этобица для профилактики и лечении ' мыта лошадей", Технические условия 10.07.12-90.

3.3.2. Иктраназалышй способ лечония больных мытом лошадей.

Для опыта по испытанию терапевтической эффективности бициллина-5 в сочетании с этонием, при интраназальном применении на Алгабасском конном заводе Алма-Атинской области, неблагополучным в течение' ряда лет по мыту были подобраны по принципу аналогов 5 групп .теребят в возрасте 6-Ю месяцев,в каждой группе по 10 ."..еребят с характерными симптоьатикой мыта.

Диагноз ставила на основании эпизоотолоипеских данных, клинических признаков болезни и результатов лабораторных иоследогаиая.Пропарат применяли путем ра спь'лэшш интраназалыю справа а слеш по 5 мл.

Лечебную эффективность бициллина-5 в сочетании с втонивм при мытэ оценивала по терапевтическому эффекту, времени и полноте устранения клинических симптомов болезни, общему состоянии аивотных»снижению температуры тола.

Заработанный препарат бициллкн-5 в дозе 15 тис.Е.Д/кг в сочетании с 1% зтониег.:, соотвзхсвенно 0,03-0,05 мг/кг массы животного при интрана зальном способе введения, обладает шра-.чонной хими о терапевтической эффективностью, обеспечивающей сокращение сроков лечения на 5 сутки, температура тела снизилась до нормы, животные выздоровела. Тогда как жеребята 4 группы, прй»ятыо с указанными препаратами хяутршыгоню в дозе 5 мл, нлинлчоски выздоровели только на 10-а сутки.

При уитрана зальном применении бициллина-5 а со-йтаниа с этонком из расчёта соответственно 0,03-0,№ г«' и 10-15 тыс.ЕД/кг массы животного. После однократной апшшкацви наблюдали,что препарат способствует разжижению и удалению гноя и некротических масо Яй дыхательных путей жеребят,больных. мытом,Оплачено урямашзо учащенного дыхания, улучшения общего состояния больных жеребят.

3.3,3. Фармакоквиотшщ пенициллина при зндолимфатической тора пни мыта.

Задавшись целью проверить »•¡й.вктиыгость лвчашм путам шщолкфтаческого вводоняя утобица,ПрОЕОЛИ нсс/едошши но фахшкоккнвтикв.Прч этом усТЙШШЮИО, что -ЧОИЦиитрвика шшкшшиш'

при эодолимфатическом введении повышена в 2-3 раза на Т~5 сутки по сравнению с другими методами введения.

Изучив фармакокинетику пенициллина при ондслш^втичойчом введении у больных мытом жеребят, мы сочли возможным болев широко использовать данный метод при лечении лошадей больных мыто«.

3,3.4. ЗндолимфатячоскиН способ лечения больных мытом лонадей»

Для опыта брали 4 груша жаребят по 5 яивоишзс в тядоВ, ю ад граете 8-10 месяцев с признаками мыта (лихорадка с п&шие-ввем гашедатда; тела до 39-40»5°с, угнетение, понижение ашеизта, ысеядо изишкснпе температуры шла,в облоста глотке платная бедаззсягая щялухлост* 2 -ойваога подчелюстных ле^йтечзс&ех узлсь и слизЕсго-гнойвое ястеченго из носовой полости.

Гаробятаы первой опытней группы вводили зтонкй з ззвде 1% рзсхЕора - 0,03 мг, бщидлша - 3,10 тыс.ЕД/кг на I кг массы ¡¿азотного. Кэребятам второй опытной группы вводили этоний к доза 0,С5 ;/г, бициллина-3,12 тыс.ЕД ка I кг массы кмвогного. & ребятам третьей подопытной груши; вводили атоний в дозе 0,03 мг, йщшшдаа-З - 10 тые.ЕД на I кг массы газетного, шт^изкаягдшо.йзроблтам четвертой группы препараты не вводили,

сду;::илк контролем.

3 результате 7-ДН9ЕН0Г0 наблюдения за контрольной и опытной группами было установлено, что у жеребят контрольной грутши игбягдаяась характернее симптомы заболевания, в то время у кзриблт первой подогои'иоз группы температура тела Снизилась до 32-28,5иС, улучшился аппетит,прекратились истечения из косоьоз полости,а на 7-е сутки абсцессы рогаонарнах ликфати-

чэскнх узлов постепенно рассосались. У жеребят второй подопытной группы температура тела снизилась до 37,5-37°С, прекратились гнойные выделения из носовой полости, улучшился аппетит, полностью рассосались абсцессы подчелюстных лимфатических узлов. У жеребят третьей подопытной группы темпе 1X5тура тела снизилась до 38,5-38°С,улучшился аппетит. В контрольной группа жеребят регистрировали характерные клинические признаки заболевания: олвзясто-гнойнае истечения,повышенна температуры до 40-42° С,вялость, снижение аппетита, увеличение подчелюстных лимфатических узлов с постепенным их уплотнением.

Эндолжфатяческая антибиотикоторапия при лечении'больных мытом лошадей позволила значительно сократить сроки исчезновения лимфоденита, что еще раз подтверждает эффективность лечения воспалительных процессов, локализирующихся в лимфатическом узле. Обобщая результаты исследований, следует отметить,что ¡линическая оценка эндолимфатичаокой антибиотикотерапии при мыте лошадей позволила убедиться, что способ введения бициллина ъ сочетании с этонием имеет определенное преимущество перед другими вышеуказанными методами лечения мыта. Он обеспечивает попадание э лимфу более высоких концентраций препарата,тем самим способствует обезвреживанию митшх стрептококков в лимфатических узлах. Эндолимфатическое введение сравнительно небольшого количества бициллина (1,5 мл ЕД характеризовалось полным купированием в течение 3-5 суток острых воспалительных процессов.

На данный способ лочония больных мытом ловадеД получено Авторское свидетельство й 4772309.

Использование эвдолкгфгачвекого способа лочонал больных: китом лошадей позволило значительно улучаигь уазультлш лачануя я у.мзнт.щять количество тяжелых ослозшония мыта.

Не один из вышеуказанных методов введения антибиотиков на способен создавать специальные (не говоря ужа о бактерицидны;;} концентрации препаратов в лимфагичэскоА системе. Примона-нио прямой звдолимфа тича си ой антнбиомкоюрагсю дает созмох-ность создания высоких и продолжительно удерживавшихся конаонт-радзй различных антибактериальных препаратов в лдаиатзчискоЯ ейстемо.

3.4, Хкмкопрофнлактика мыта лошадей.

Проведенп опиты по определению лрофадактячвекоя эффективности бициллина-5 в сочетании с этониом в виде водно-мг,сдяно;1 омульст; на. вазелиновом масло при мыто лошадей. Парод щшмеьв-нзшм 1$-ный раствор атония на вазелиновом масле <шшиваля с бвютшыом-5 из расчета дозпрг<ш^ на I кг кассы аивотяого. Дяя полного растворения препарата смесь тщательно взбалтивалз а хвдеряивахв при темпа па зда 30-37°С и тачонге 20-33 ышут.

Для изучения профилактической эфХ'вятнвыости бицшипяал-5 ь сочетании с этонием в виде масляной виулхсии нами били про-зздаяы опыты на 85 «ерзбятах 6-8 ыеоячпого возраста в условиях неблагополучного по мыту хозяйства Куланджгекого конезавода К51!л-Срд»н0й02 области» Еоребят разделила на три груши, в 'каадой по 3 аорэбенка. Изробят первой группы иммунизировали бзцяллввом-5 в сочетании с этонием, внутримышечно, разведенным в диотилмрованноЯ воде; жеребятам второй группы вводили бицвллак--5 в сочетании о этонном в вазелиновом масле пода окно; третья груша 25 голов, служила контролем.

Препарат вводили нодкомю в область верхней трети шеи, в дозе бициллина-5 12-15 тыо.ЕД и этония 0,03-0,08 мл па I кг кивоЯ массы животного,Животные содержались шесте с остальными нопривитими жеребятами.

В результата проведенных исследоваикЛ установлено, что аоолэ цршвкянвя указанного препарата б першЗ группе лгар'абят заболело 20£, во второй груяпэ не регистрировали заболевание, тогда кок в контрольной группе заболело мытом 60$ керзбят с клиникой

Клияйчоскна наблюдения проводила в тэченво 30 дноа (срок нябдтавдшая).

Таким образом было установлено, что водноч.гаояяная эмульсия этония к сочетании с бициллышм-5 яьлястсл црофзлактяческим средством при ныте у лошадей,тогда как использование тех яе средств с целью хвмяопрофвлйктшя заболевания баз пролонгатора требует большое количество препарата и числа инъекций.

Дредиояднпый' катод профилаягжи акта лояздей' позволю? предохранять от зарзжешш 60-00$ .нивотгых.Прэлопгяровачиое дэЗот.039 лрмюрэта з кесколыш раз созрелое? воличество уаявпу-лйцг,5. Па длпшд способ промялая?ш уита лсзад&й получэко Аятсрскоч сзвдотельсг^о Л 4207575.

йэлуч^кныэ П0ЛЮЕЗИЛ1Ш9 результаты дз'пжзл а Д50#глзктжад мыта заалужш еонзтинпзм для рзгвстрзяяя прэдяожэн-

кого препзрага, который з дзлькеЯзсм пргнештся пгд условным нязеякеои "отобац'".

3.5.5, ПроазводотБЭНше ясиытанзя эффективности разработанного метода профилактики и 'тарапза мыта лошадей

Д>лиаеЗжвм этапом паодпс нсоладозаниЧ явились ютрокге произ-Еодотвэшша испытания препарата "отоблц", ззложшшх схем его пршевэяия. Эти схемы эирзкз апробвровзна с положительным эффектом внедрены во многих коневодческих хозяйствах республики-

По согласованию с ветеринартными отделами Алма-Атинской, Таоды-Цурганской, Джамбул*ской, ДюзказганскоЕ,Семипалатинской, Кзыл-Ордшской, Восточно-Казахстанской, Куста па йской областей "этобиц" был испытан в производственных условиях в 25 хозяйствах,' где получены положительные результаты при лечении и профилактике мыта лоиадей.

Согласно приказу от 2 марта Т.ЭЭО года, за й 23 Главного управления вотеринарии при Государственной Комиссии Совета Министров СССР-rio продовольствию и закупкам и по приказу ГУВ МСХ республики Казахстан за К 4 от 3 сентября 1920 года разработанные методы лечения и профилактики мыта лошадей применяются ежегодно, на поголовье с 15 тыс.лошадей до 35 тыс.голов. В результате было достигнуто снижение заболеваемости лошадей ми там, которая сокращена в этих хозяйствах в 19Э1 году на 85-30$, а падеж от этой инфекции на 80-85$ по сравнению с исходным годом до начала внедрения этобица.Этобиц выпускается Республиканской ветеринарно-производственной лабораторией и в производственном отделе Казахского НИШ.

В ряде случаев применение этобица с профилактической и 'лечебной целью при мыте лошадей позволило обрывать эпизоотический процесс в табуна и обеспечивать выздоровление больных И профилактику болезни. С профилактической целью препарат целесообразно применять в тех хозяйствах, где ежегодно регистрируют ноше случаи заболевания.

В результате проьодошых исследований по разработке эффективного метода профилактики и тодешш мыта лошадей подготовлена нормативно-тахнпчоскс я документация на шпуск эюбкоа.

4. (ШЕЩШГЧЕСШ ПГОЗШКТИКА МЫТА ЛЗШАДЕЙ 4Л. Подбор з селекция производственного штамма Глалным фактором обеспечивающим создание эффективного препарата для специфической профилактики является выбор иммувогенного штамма.

Основываясь на анализе литературных данных и собственных исследований мы пришли к выводу, что иммуногонность штаммов мьшного стрептококка связана ,в основном, с биологическими свойствами культур: образование шероховатых колоний в агаре, вирулентность, высокий титр специфических антител при иммунизации.

Оцаквьая по указанным эпизоотически показателям 15 штаммов, мы пркзлн к сызоду, что наиболее перспективным для указанной работы является штамм Btr, equi JQC-I5, наделенный в'

IS90 году от больного мытом жеребенка в одном из неблагополучных хозяйств республика Казахстан» Данная культура имела характерные для мытного стрептококка культурно-морфологические свойства.

Особенности данного атагаеа были следующие: при посеве на агар с добавлен»»».» лозшдииоЗ крови он образует шероховатые { matt ) колонии» 3 то же время Ц-культуры образует на этой л;е среде в основном гладим ( е10Езу ) колонии»

Вирулентность стрэятококкев козе? быть повышена путем пассажа streptococci equi культур в нормальной нрови лошадя. При этом происходит отбор Ы+ - вариантов стрептококка,так как М~ - варианты $агоцятзруйтоя м гибнут, 5 некоторых случаях для повышения вирулентности ого проводили шссак ка мышах.

С целью закрепления и vсклонив указанных свойств црзйззвли селекцию указанного шташд.

Совместно с сотрудкгаака И.М.Дяидарт, Е.Н.Семеновой и З.В Саниной эпидоккологяа и макробиологии им.Н.Ф.Гамалея ГАШ

было проведано многократное субкультивирование штамма на ai'ape и бульоне,в процессе которого каждый раз для посева использовали только отдельные колонии ( matt ) формы.

После проверки биологических свойств штаммы лиофилизироь^л^. Полученному таким образом штамму было присвоено новее название streptococcus equi -XG-I5» От родоначальной культуры он от-

личается гомологичностью.

При электронномикроскопическом исследовании совместно кандидатом биологических наук Г.А.Надтсчой штаммаstreptoçocous equi - ЮС-15 было отмечено,что бактериальные клегки имеют многочисленные ворсинки ну поверхности, в которых,согласно литературным данным, локализуется М-белок, ответственный sa вирулентность и кммун-ногенностъ.

ï-имбрии отсутствует у родсначэльного штамма, тогда ка у М+ выявляется. Шиш streptococcus с qui -ЮС-15 был комиссионно проверен с участием ВГНКИ вотпропаратов. В настоящее время штамм streptococcic equi -KC-I5 используется как производственный для изготовления инактваирошнно8 вакцины против мыты лошадей.

4.2. Виделийио М-белка из клеточной оболочки мытного стрептококка

Очистку Ы-бэлии проводили по методу J.B.Wooloock (1974) совместно со стауиим научным сотрудником В.Ю. Саниной в научным сотрудник«: В.Н.&аэноиоВ SfLiU эпидемиологии и микробиологии кч,Гй№Шш. Еила приготовлены лабораторные серии Ы-болка из

UTCiKHJ ц trc otococeuB equi -ЮС-IG.

Выделит^ Ы-оолка it ого концоитрироьанид и частичнуы очистку

проводили 002-цом оериэккслим ашояиш: с ноиладущш дкишзок

против заверенного фортом солевого рьстюра в течение 18'часов при 4°С.

Концентрация бежа определяли по Лоури,используя в качестве стандарта кристаллический альбумин бычьей сыворотки.

4.3. Физико-химическое и антигенное свойство М-белка

Исследователи;занимающиеся разработкой средств я мз годов спвццрофилаягакой мыта лошадей» в результата серий работ, проведенных в различных странах, пришли к выводу, что янфекционностъ и иымуногенность зЪ:ер1:осос.сив ёаи! в основном определяется поверх-. ностнымв белками, которые удаётся выявлять хроматографическим и иммунологическим методами в кислотных экстрактах или над сад очной жидкости культуры мытного стрептококка.

Методика выдвления этих белков, которые получили название М-белон основывается.на рабочих к.с.Ьапсе£1е1<1 по стрептококку группы А (1928, 1933), установлено,что М-бёло'к представляет собой комплекс протеинов с различным молекулярным' весом от 97 до 16-10 к,! .

.Над функциональной характеристики этих белков отдельные . авторы использовали различные методики. Так,например,,1.в.\Уоо1соск (1974) характеризовал полученный М-яротеин на основании нескольких свойстз. Исследование его со специфическими сыворотками методом двойной иммунодиффузии по Оис]^ег1о11у , чувствительности к трипсину, способности адсорбировать специфические антитела,способности индуцировать-антитела после вакцинации.Защитные действия определяются а опытах на мышах.

С учётом литературных данных мы поставили задачу охарактеризовать с помощью современных иммунологических методов М-белок а'Ьгер^соссиэ equl .

Исследования, изложенные в этом разделе,характеризуют физико-химические свойства М-балка и в известной ег^ стегани антигенную структуру. г'

Для этих целей нами .были получены сыворотки реконвалесцонтов (жаребят), переболевших с типичной клинической картиной мыта. Сыворотки получали поело выздоровления иеребят»

11а следующем этапо прошли тестирование этих проб.на наличие И количество антител К otreptococcus equi

Пробы сыворотки,, с которыми получали четкие 1-3 линии преципитации, отбирали для последующих исследований.

В реакцию радиальной ишунодвффузии по Манчини использовали четко положительные сыворотки, которые разводили 1:5 ;1изиологичэски> раствором и смешивали в соотношении 1:5 в расплавленном агаровом геле.

Исследование 51 пробы сыворотки крови реионвалесцонтов показали, что все сыворотки положительно реагируют в РДП о препаратом М-белка. Однако четкие резко ограниченные линии преципитации (1-3) образовывали примерно 40$ исследованных проб сыворотки, в других, пробах линии преципитации были несколько размытыми.

Результаты РДП в агаровом геле с различными лабораторными образцами М-белка, получанными нами, подтвердили в целом известные данные о неоднородности КИСЛОТНЫХ 3KCTpaKT0B£!treptoCOCCUS. equi

Используя в наших опытах методику электрофореза в полиакри-лаыздпом гало выявляли белки о молекулярным весом примерно от 114 до. 9,5 к d 4 из ¡шх. 3 ма&врных бежа с молекулярным весом 97-49, 44-45, 27-28 к d . '

Кроме того, на элоктро^орегранмах обнаруживали более тонкие линии, образовавшие ввзкомолокулдрнши белками,а такае белок о молекулярной массой IG-IU к d .

Несмотря I'M то, что белки Btbpiocoecue qqui могут давать перекрестные реакции с ан.тихчзинши детерминантами различных* иредставаюлей втрештокохнов гиушш 0, что било отличено

- Я9 - ■

R.C,banoei*i«ld (IC-33) иоли.шптидь' с м.м„16-18 к i ,ия имеют редстязндах антигенов s соотаво других стрептококков.

В одной из серий М-белнов otreptocoocus equi tкоторый шд-вядгадоя более эзстксму реяпму кислотного гидролиза с последующей отмечала значительное расщепление белков в котором сосредоточилось в игезко молекулярной зоне«

йгяюгиоблогяг» В иммунойлотянге использовали наиболее акт№~ Iп-'е óHBi.ipoTííjí рогяонгалооаангов S ? и К 13 исследования проводки с р.-плияиыг'П логанзптрзццями М-белка -4,8 и 12 шл.Лдо этом получшш сяедувнцге ре аудь та ты.

йзибйгпе уздт&нсвтшш» линии преципитации на фореграа/ах обно-1>ужтжавтея в зола лркызряс 45-44 к* .Лалэо 3 ч-згяяе линии преципитации ккяааллп п га?,оно 23-26 ni , Кроме того сбнарузквэля с."або рцузяопш'? зоны иредапптаявс» раополрмонт'о в районе ?15 п 16-18 к d ,

Пиюркко лбкяй оп-'б'^лк так«э з 36-37 я Л Ирана га тами Ц-болх.з 1:од?..7р;л!узп лпоф'-'лнзэцун была получена од>:а :¡htp:!c;;b:?o окггъенззл согя л(чш:шй ïukeïj, naсполоа?ииая в зоне 45 к ¿ ,

Пктешздюсхь о;?рлскя этой koisj прзш'пнтацли била ¡шэчзтлдъиой, н.чс'-'otp.i в? допилш» 1дздоз количество белко,кзх0дявшгося s 30ÍI3 при ^гиктрофорезе к полпякргламиднсм голэ, Зсз няокоомолоку-ляркче оказалась зитзгеяно но шсюшздв»

Таком обрззс!«, проведенные:-: исслкдорзня.ыл показано, что ряд зкжгвшшх детзрмжант И-белна pu-cptcooc. equ^jiwiyieano" • методом кислотного гвдролэза,выявляется при электрофорезе з полкакриламид» нг-« гало п последующем ^таулоблоткшд-; о сивороть.сл'И лошадей роя0ИГ.ЗЛ8свонтсп. Bunanôiaj юажодвые антигены с кололулдриой массой 45-44. Kd » а так-:.с 16-18 к'3 .

Полученные данные несколько отличаются'от результатов опубликованных работ J.F.Timoney, J.E.Calan (1985).

Интересно при этом отметить,что в условиях кесткого гидро- . лиза и расщепдения до низкомолекулярных соединений большинство белков ужо не выявляются в иммуноблотинге со специфическими сыворотками кроме одного мажорного белка с молекулярной массой 44-45 к а» который отличается высокой устойчивостью к кислоте и сохраняет при этом в полной мере антигенную активность.

Аминокислотный состав является одним из методов,который позволяет выявить различия белков. Аминокислоты определяли на аминокислотном анализаторе Т-339 (ЧССР).

Как видно из таблицы, по аминокислотному составу белков клеточные стенки вирулентного М+ и М~ невирулентного штамма различались отсутствием цистина в а также незначительно по аспаргино-вой кислоте и валину.

По нашему мнению,из этих данных следует,что определение аминокислотного состава клеточных станок мытного стрзлгекекка позволяет различать штаммы !1+ в ЬГ.

Аминокислотный состав атамаа atr. equl -ЮС-15

Аминокислоты

Мг/50 мл

Аспаргиновая кислота Треоник Серии

Глутамииовая кислота

Пролдн

Глицин

Алании

Балип

Мети они н

Изолвйцин

Лейцин

Тирозин

0,21 0,12 0,10 0,30 0,16 0,39 0,15 0,17 0,04 0,05 0,07 0,06

фенила ланки •Гиствдин Лизин Аргинин

Суммарный белок

Незаменимые

Заменимые

0,22 0,77 2,39 0,06 5,26 3,89 1,37

. 5. ИЗУЧЕНИЕ НАПРЯЖЕННОСТИ ИММУНИТЕТА У ВАКЦИНИРОВАННЫХ ЖЕРЕБЯТ

В условиях экспериментальной базы ВИЭВ 0 "Лисий" проводили ошты на 6 жеребятах в возрасте 8-10 месяцев,которых разделили на

3 равные группы. Жикотных содержали в одинаковых условиях. Жеребят первой группы иммунизировали внутримышечно в дозе 2 мл в облаоть крупа и-интраназально путем ручного распыления.Жеребят второй группы иммунизировали только внутримышечно в дозе 2 мл. Животные 3 группы служили контролем. Всех подопытных жеребят ревакцинировали через 10 суток после первой иммунизации в вышеуказанных дозах. До иммунизации от них были получены пробы сыворотки крови и носовых оекретов, которые сохранили при -20°С и исследовали в РНГА одновременно с пробами, полученными в другие сроки.

Динамику формирования антител прослеяивали исследованием сыворотки крови и носовой слизи на 7 дней после первой и через 7 дней после второй вакцинации. Через 30 дней после повторной вакцинации, всех 6 опытных и контрольных аеребят проводили контрольное заражение. Для заражения использовали вирулентный штамм str. equi -57, который апплицировали на слизистую

оболочку носовых хйдов в дозе 5 мл.После контрольного заражения брали пробы сыворотки крови на 7,14,21 и 28 сутки.

У вакцинированных гозребят на 5 сутки обнаруживали в секретах носовой полости антитела к мыту лошадей их титр увеличивался в течение 14 суток и достигал к 21 суткам 1:64 (средний показатель по группе).После чего происходило его снижение.

У жеребят вакцинированных групп и контрольной группы перед заражением температуры тела находились в пределах физиологической нормы. Экспериментальное заражение не причинило какого-либо видимого вреда проиммунязированным жеребятам,отмечалось только незначительное повышение температуры тела.

6. ИСПЫТАНИЕ ОПЫТНЫХ СЕРИЙ ИНАКТ11ШРОВАНШЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ МЫТА В НЕБЛАГОПОЛУЧНЫХ ХОЗЯЙСТВАХ

Опыт Л Работа-была проведена в колхозе "Дружба", Большона-рынского района Восточно-Казахстанской области в период с мая 1990 по февраль 1991 г.

Доя вакцинации использовали экспериментальную серию вакцины. Всего было использовано 45 жеребят текущего года рождения.Вакцинировали двукратно в дозе I мл внутримышечно в область крупа и остадышо 82 головы оставались неиммунизированнымв, в контроле. Кроме того- в табуне имелось 15 клинически больных мытом жеребят. Наблюдение за подопытными животными проводили на 14 день, I, 1,5, -2,5 и 6 мес. после вакцинации.

Результаты опыта показали,что двукратная вакцинация в дозе I мл не создавала напряженного иммунитета у животных(Р <1 0,Сб). Различия в группах не достоверны, что возможно также было связано , с.неблагоприятными климатическими факторами. Вационированные жеребята болели легкой формой мыта и быстро выздоравливали,контрольные же болели длительно,часто с осложнениями.

Опыт 2. Опыт был проведен в совхозе им.Джамбула Моинкумского района ДжамбульскоЯ области республики Казахстан 1991 г. на конеферме !'¿ 3.

Испытание вакцины проводили на основании разрешения Главного управления ветеринарии ИСК республики Казахстан от I7.9.9I г, № 24-3/8 в связи с неблагополучием совхоза по мыту .лошадей (см.приложение).

Вакцину применили на жеребятах двух возрастных груш:

1 груша - 25 /~еребят в возрасте 1-1,5 года;

2 группа - 43 жеребенка в возрасте 2,5-6 месяцев.

Вакцинацию проводили внутримышечно в область крупа в дозе

2 мл.двунратно. До иммунизации и на 7, 14, 21, 30, 60 и 180 день брали пробы сыворотки крови. . •

Результаты опыта показали,что двукратная вакцинация в дозе 2 мл создавала напряженный иммунитет у животных. Из 68 пргвитых жеребят у Зх зарегистрировали абсцесс (2,4$). Абсцессы появились тольйо у гаребят в возрасте 2,5-6 месяцев.7 теребят старших возрастов они нерегистрировались. Абсцессы возникали преимущественно у жеребят, матери которых использовались для получения кумыса. В большинстве они были неудовлетворительной упитанности, мало двигались и плохо кормились. В связи с появлением мыта среди жеребят в количестве 118 голов были привиты вакциной против мыта ^

По нашим наблюдениям в течение I95I-I932 гг. среди привитых 106 жеребят на было ни одного случая заболевания мытом. Эти результаты дают основание считать, что инактиввровакная вакцина против мыта лошадей безвредна и шмуногенна для привитых жеребят.

7. ОПТИМИЗАЦИЯ МЕР БОРЬШ С ШТОМ ЛОШАДЁй

Меры общей профилактики и ликввдации заболевания разрабатывались на основе проведенных исследований,изложенных выше.

Мероприятия по профилактике и борьбе с мытом лошадей в настоящее время проводятся в соответствии с рекомендацией "О мероприятиях по профилактике и ликвидации мыта лошадей",утвержденной Главным управлением ветеринарии СССР при Государственной Комиссии Совета Министров СССР по продовольствию и закупкам И 044-3 от 6 декабря 1989 г. взамен циркулярного письма Взт-управления Главживуцра Министерства сельского хозяйства СССР it 233634 от 27 января 1950 г. "О мероприятиях по борьбе о мытом лошадей".

8. ВЫВОДУ

1. Ретроспективными исследованиями,проведенными в I98I-I990 гг., мыт лошадей установлен в. 15 областях республики Казахстан. Наибольшее распространение мыта отмечено в Северной зоне-50,2#, затем в Восточной - 33,3% и Центральной зоне - 33,1$. Более благополучными по мыту являются хозяйства Кшой зоны - 25,8$ и наименьший процент заболеваемости лошадей мытом зарегистрирован

в хозяйствах Западной зоны - 18,3$.

2. Культуры мытных стрептококков, выделенные от больных мытом жеребят из хозяйств,расположенных в различных климато-геог-рафичаских и экономических регионах Казахстана оказались идентичными по культурно-морфологическим, ферментативным, вирулентным, антигенным свойствам.

3. Штамм utreptocooous equi Ю(>-15 по своим вирулентным свойствам нровосходит другие штаммы, продуцирует М+-белок в большем' количестве по сравнению с ним и в кровяном агаре образует matt " колонии.

4. Штамм з-ь-ер-ьососсизефи.в лиофилязиромшом состоянии сохраняется без снижения активности в течения 12 месяцов (срсж наблюдения) при хранении -20°С до +4° С.

5. Эффективность лечебко-профилактичйского действия атобииа усиливается при звдолимфатическом методе введения препарата.

6. Этобяц в форме водно-масляной эмульсии при подкожном методе введения значительно обладает более выражрнннм лечебкзм и профилактическим действием.

7. К-бэлок эт:г. еаи! (но Лзнофйльду) представляет собой комплекс балков с молекулярной массой 97-16 к й ■>

В крови лошадей-реконвалесцзнтов присутствуют антнлета к мажорным антигенным детерминантам с молекулярной массой 40-44-к й и минорным антигена. • '

8. М-белок а-Ьг^и! может использоваться в качестве основного антигена при изготовлении субъединичной вакцины претив мы та лошадей.

9, ЕЬкцинпыв препараты, изготовленные из цельных бактериальных клеток свежезыделзнних штаммов з-Сг.еаи! оказались рэактогенными, менее эффективными по сравнению с субъединичным препаратом, приготовленным из М-балка з-Ьг. ечи! • -ВС-15.

10, Субъединичная вакцина .изготовленная из М-белка штамма с-чи! ЮСг15, безвредна,, нереактогенна, вызывает

иммунитет не мэнее чем у 802 иммунизированных лошадей.

Вакцина создаёт более длительный и напряженный иммуни^зт при одновременном двукратном интраназальном и внутримышечном введении препарата.

II. Система мероприятий по профилактике и борьбе с мытом лошадей включает комплекс мероприятий, "а правда иных на лечение больных животных, применнние инактивированной вакцины и проведение воте-рипарно-санитарных и зоогигианических мероприятий.

9. ПРАКТИЧЕСКИЕ 41РЕДЛШЕШЯ

На основы результатов проведенных исследований разработать, утворвдени Главный управлением ветеринарии СССР и республики Казахстан, а танке внедрены в ветеринарную практику:

I. Ввкомевдации о мероприятиях по борьбе и ликвидации мыта лошадей (утв.6 декабря 1339 г.) взамен циркулярного письма Вотунравленид Глшшвупра МСХ СССР ^ 233634 от 20 января 1950 г. "О мероприятиях по борьбе ч мытой лошадей".

2. Рекомендации по профилактике и терапии мыта лошадей. Утверждены ГУБ Госагропромон республики Казахстан от 19 апреля 1933 г.

3. Наставление по применению этобнца для профилактики к лечения мыта лошадей, одобрено решением президиума Ветеринарного

.фармакологического совета (протокол & 29 от 13 декабря 1986 г.) и утв.ГУВ при Гос.комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам от 2 марта 1290 г.

4. 17-10-07-12-90 Зтобиц, Утв.ГУВ при Гос.комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам от 2 марта 1990 г-.

■ 5. О внедрении в ветеринарную практику препарата этобиц'для лечения и профилактики мыта лошадей. Приказ ГУВ при Гос.комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам от 2 марта 1990 г.

6. О внедрении в ветеринарную практику препарата зтобиц для лечения и профилактики мыта лошадей.Приказ ГУВ Госагропрома республики Казахстан У* 4 от 3 сентября 1930 г.

■7, Временное наставление по применению ииактивировашюЦ вак-ЦВШ против мыта лошадей. Утв.ГУВ МСХ и II СССР от 14 ноября • 1991 г.

8« ТУ-Ю--07--200-91 шшк тивврогашмя вакцина против мщу лоиа-дои.Ута.ГУВ УС1 и К СССР от-К ноября 1231 1.

S. Инструкция по изготовлению и контролю шактивироганной вакцины против мыта лошадей. Утв.ГУВ МСХ республики Казахстан от 23 марта 1992 г. (положительное решение БПИИГПЭ на получение патента й 503II26/I3/0II327 от 26 апреля? 1993 г,

СПИСОК

работ, опубликованных по теме диссертации

1. Сансызбаев А.Р.,Бяжанов А.Б. Чувствительность мытных стрептококков я различным антибиотикам in кн.: Проблемы интенсификация животноводства в Казахской ССР. -Алма-Ата, 1986-чД, с

108-109.

2. ТулепбаоЕ.С.За., Сансызбасв.А.Р., Бпжапсв.А.Б. Определение вирулентности мытшх стрептококков для лабораторных животных (в кн.: Проблеш интепсгфзкации животноводства в Казахской ОСР-Ал:.в~А?а, 1986, чЛ, cIII-112.'

3. Саксызбаев.А.Р., Кери.«баев.УЛ., Бяхаяов.А.Б.. Эшзоото-логзя шта лсиадеЕ (В кн.: Участке молодых ученых в выполнения Продовольственной программы- Фрунзе, 1987, с.59-61.

4. Т>леЕбэев.С.Ж., Керямбаев.У.Н., Сапсызбаев.А.Р., Сабан-вяея.Н.С. Способ лечевшл больных иитш лсшадеЗ // Авторское свидетельство Й 1381767,1907г.

5. Сапсгабаев А.Р, Инфзкцготые болезпп лсшодей // Брошюра.-Адна-Ато, йзд..'%Кя2нарпг 1303г,- 33с. (ва казахсксл лйу.коЧ

S. "Зрев II,В., Сазеасбдав А.Р., Esnisa 4.Б. лз^вгая бод$-гл iSi-rofi лошадей // Автреяс-з с ¡аде то льет г,о j?I5S723C8 ,1539г.

?.Тулеш5аев С.Е. .Сансызбаев А.Р. .Бижанов А .Б. Способ профи-'

лактики мыта лошадей // Авторское свидетельство № 1543603, 1989г.

8. Салсызбаеь А.Р. Ь'ыт лошадей ( В кн.: Болезни сельскохозяйственных животных. -Алма-Ата, 1989, с. 112-114 (на казахском яз.).

9. Тулепбаев С.Ж. .Сансызбаев А.Р.,Кврвм5аев У.II. ,Бижанов А.Б. Рекомендации по профилактике и терапии мата лошадей. -Алма-Ата, 1989г. -8 с.

10.Сансызбаев А.Р. .Керимбаев У.Н. Рекомендации о мероприятиях по профилактике и ликвидации мыта лошадей. (Главветупр. ,6.12,1989) Шнсельхоз СССР, М, -3 с.

11.Сансызбаев А.Р. Способ получения вакцины против мыта лошадей // Авторское свидетельство й 1582394, 1990 г. •

12 .Бижанов А,Б.,Сансызбаев А.Р. Определение концентрация пенициллина в сыворотке крови кроликов после однократного внутримышечного введения бициллина-5 // Рукопись депонирована во КазНИМШИ. -Алма-Ата, 1989 г., Я 2941. -4 с.

13. Сансызбаев А.Р. Мыт лошадей в Казахстане // Рукопись депо нзроЕана во КазШШТИ. -Алма-Ата,1989 г. К 2941. -3 с.

14. Сансызбаев А.Р. ,Керим5аев У.Н.,Бижанов А.Б.Докеев Ш.О. Терапия мыта лошадей // Информ.листок № 45. -Алма-Ата. 1990.-Зс.

15. Сансызбаев А.Р., Юров К.П.Профилактика и лечение при ште лошадей // Ветеринария, 1991, йб.с. 7-8.,

16. Сансызбаев А.Р., Юров К.П., Сидоров И.В., Токеев Ш.О. Способ лечения больных мытом лошадей // Положительное решение ШШГПЭ на выдачу патента № 4923587/15/024286/, 1991г.

Г/. Сансызбаев А.Р,, Керимбаев У.11., Бижанов А.Б., Юров К.П. Лечение лошадей больных мытом // Коневодство и конный спорт ,1991.

й II, с. 10.

13. Сансызбаев А.Р., Юроз К.11. Профилактика и терапия шта лошадей в табунном коневодстве // Тез. доклад III Всесоюзной конференции по эпазоотологин. Новосибирск, 1991, с400-401.

19, Сакснзбаев А.Р., Юров К.П. Средство для профилактики

я леченая су ст га ал см а жеребят // Положительное решение ВШИ1ПЗ

на выдачу патента й 4940485Д5/СС5632/. 1991г.

20, Сансызбаев А.Р.,, Юров К.П. Ишуногенность даактявпро-ванных антигенов возбудителя мыта лошадей // Методы и средства диагностики, профилактики я тзрапки болезней животная// Труда института / Всесоюзный н.-л.институт экспериментальной ветеринарии.т.69,1991, с.72. ..74.

2Г. -Сансызбаев А.Р., Султапбаев Т.Ж,, Серзкбаев Б.К. Способ лечения больных мытом лошадей // Авторское свидетельство й 17 55436,1992.

22.. Сансызбаев А.Р., Юроз К.П. Вакцзна для профилактики юта лошадей // Полони тельное рзшение ВНШГПЗ на выдачу патента й 5031126/13/011327,1993г.

Подписано а печать 27.05.1993 г. Зая. 778. Формах 60x84/16. Тир. 100

Москва. Типография РАСХК