Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Меры борьбы и профилактики мыта лошадей в условиях Якутии

со

'Л! СП

•zC. uu «=£

oo cvi

На правах рукописи

НЕУСТРОЕВ Михаил Петрович

МЕРЫ БОРЬБЫ И ПРОФИЛАКТИКИ МЫТА ЛОШАДЕЙ В УСЛОВИЯХ ЯКУТИИ

16.00.03. - ветеринарная микробиология.

вирусология, эпизоотология, микология, и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Новосибирск - 1996

Работа выполнена в Якутском научно-исследовательском институте сельского хозяйства Научно - производственного объединения "Якутское" Сибирского отделения РАСХИ.

Научные консультанты: доктор ветеринарных наук, профессор, лауреат премии СМ СССР Юров Константин Павлович

доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАСХН Донченко Александр Семенович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Смирнов Павел Николаевич

доктор ветеринарных наук, профессор Ноздрин Григорий Антонович

доктор ветеринарных наук, профессор Лысков Алексей Васильевич

Ведущая организация - Алтайский ветеринарный институт Алтайской сельскохозяйственной академии

Защита состоится " " Л&ТУ?^ 199^-г. в_час.

на заседании диссертационного совета Д.020.23.01. при Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока по адресу: 633128, Новосибирская область, п.Краснообск, СО РАСХН ИЭВСиДВ, конференцзал.

С диссертацией можно ознакомиться в ШСХБ СО РАСХН. Автореферат разослан "«¿<7" 19д6 г_

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор ветеринарных наук А. А.Самоловов

- 3 -

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность проблемы

Дальнейшее увеличение поголовья и продуктивности табунного коневодства сдерживает ряд факторов, среди которых значительное место занимают инфекционные и инвазионные болезни. Из них наиболее распространенным и причиняющим ощутимый экономический ущерб является мыт лошадей. По данным отчетов Департамента ветеринарии Республики Саха (Якутия) мыт распространен почти по всей территории региона. Болезнь распространена и в других республиках и областях России и стран СНГ (Р.С.Москалик, 1971; З.Н.Чоенбаев и др., 1980; Р. В. Чысыма, 1989; А. Р. Сансызбаев, 1993).

Эпизоотология инфекционных болезней имеет свои краевые особенности, которые необходимо учитывать при планировании профилактических мероприятий. Для разработки эффективных мер лечения и борьбы с мытом лошадей, обоснования методов и сроков его профилактики необходимо прежде всего знание особенностей иммунобиологической реактивности молодняка лошадей в связи с возрастом и в различные периоды года.

Установлено, что наиболее эффективным методом профилактики мыта является иммунизация вакцинами (Н.В.Окунцов. 1976; А.Р.Сансызбаев, 1993).

В связи с этим изучение краевой эпизоотологии, с учетом природно-климатических условий и особенностей ведения табунного коневодства, и разработка адекватных научно обоснованных эффективных специфических мер профилактики мыта является актуальной проблемой ветеринарной науки. Они тем более своевременны, что подобные исследования в условиях Якутии не проводились.

1.2. Цель и задачи исследований

Целью настоящей работы является изучение особенностей эпизоотологии мыта лошадей и разработка научно обоснованных средств и методов борьбы с мытом в условиях Якутии. Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- изучить в условиях Якутии эпизоотические особенности течения мыта лошадей;

- выделить, идентифицировать и изучить различные свойства

возбудителя болезни;

- для обоснования сроков и методов профилактики мыта изыскать способы оценки естественной резистентности и изучить возрастные и сезонные изменения иммунобиологической реактивности организма молодняка лошадей;

- изыскать, разработать и апробировать эффективные средства и методы общей, а также специфической профилактики мыта;

- разработать технологию изготовления инактивированной вакцины с иммуномодулятором против мыта и подготовить научно-техническую документацию на изготовление опытно-промышленной партии;

- разработать способы обеззараживания объектов внешней среды, обсемененных мытным стрептококком.

1.3. Научная новизна

Впервые в Республике Саха (Якутия) изучена эпизоотическая ситуация по мыту лошадей и установлено значительное распространение его по всей территории Якутии. Выявлены особенности эпизоотического течения мыта - ранне-зимняя сезонность и стационарность инфекции. Выделен, идентифицирован и депонирован в коллекции микроорганизмов ВГНИИ контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов штамм "Э^^т Н-34". Установлено,что в ряде случаев мыт лошадей следует дифференцировать от вирусных респираторных инфекций (грипп и ринопневмония).

На научной базе отдела биотехнологии ИЭВС и ДВ нами получены гибридомы, синтезирующие моноклональные антитела к в и М лошади, которые использованы для определения концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови.

Получены новые данные о состоянии иммунобиологической реактивности молодняка лошадей в различные возрастные периоды и ее взаимосвязь с биохимическими компонентами (белок, макро-микроэлементы, витамины) крови. Выявлены критические периоды роста и развития молодняка лошадей и обоснованы оптимальные сроки проведения_

1]рофилактических мероприятий.

Изучена выживаемость мытного стрептококка в условиях Якутии. Отработаны режимы и способы обеззараживания объектов внешней среды при мыте лошадей.

Изучены особенности течения мыта. Установлено развитие ассоциативных инфекций, вызываемых вирусами, сальмонеллами и мытным

стрептококком.

На уровне изобретения разработана и испытана с-положительным результатом инактивированная вакцина с иммуномодулятором полири-бонатом против мыта лошадей. Представлена сравнительная характеристика показателей иммунобиологической реактивности, биосинтеза специфических и неспецифических иммуноглобулинов и содержания витаминов, минеральных веществ в крови после иммунизации молодняка якутской лошади вакциной против мыта. Разработаны и апробированы меры общей профилактики мыта с использованием иммуномодуляторов и витаминно-минеральных смесей.

Научная новизна работы подтверждена положительным решением ВНИИГПЭ о выдаче патента на изобретение "Штамм бактерий Streptococcus equi H-34-Деп. используемый для изготовления диагностических и профилактических препаратов против мыта" от 13 марта 1996 г.

1.4. Практическая значимость

Результаты научных исследований позволят давать объективную оценку состояния иммунобиологической реактивности молодняка лошадей в норме и при различных патологических состояниях. Монокло-■нальные антитела к Ig G и Ig М с высокой специфичностью и афин-ностью можно использовать для определения концентрации иммуноглобулинов в организме лошадей и разработки диагностических тест-систем. Предложены и внедрены эффективные режимы и методы обеззараживания объектов внешней среды, обсемененных мытным стрептококком. Разработана и апробирована система мер борьбы и профилактики мыта в табунном коневодстве, которую можно использовать и в других регионах России.

Разработана и предложена для ветеринарной практики инактивированная вакцина с иммуномодулятором против мытй лошадей. Результаты применения вакцины рассмотрены и одобрены Государственной межведомственной-комиссией по испытанию ветеринарных биологических препаратов (20.10.1995). Утверждено Департаментом ветеринарии МСХиП РФ и рекомендовано для широкого производственного испытания временное наставление по применению инактивированной вакцины с иммуномодулятором против мыта лошадей (15.07.1996). Материалы диссертации найдут применение в научно-исследовательской работе и могут быть использованы в лекционных и практических курсах в ветеринарных и сельскохозяйственных учебных заведениях. Материалы

работы использованы в "Системе ведения животноводства в Якутии" (1992, 1996).

1.5 Апробация работы

Материалы диссертационной работы доложены на заседаниях Ученого совета Якутского НИИСХ (1989-1995).научной экспедиции "Проблемы развития сельского хозяйства в условиях вечной мерзлоты" (Якутск, 1991), конференции "Сельское хозяйство Республики Саха (Якутия) в условиях перехода на рыночные отношения" (Якутск, 1992), Всероссийской конференции "Пути совершенствования научного обеспечения АПК районов Крайнего Севера в условиях перехода к рыночным отношениям"(Якутск, 1993), научно-практической конференции "Перспективы направления интегрирования экологических, эпидемиологических и эпизоотологических проблем в республике для совершенствования ветеринарного благополучия (Якутск,1994), научно-практической конференции "Экологические проблемы Заречья"(Якутск, 1994, 1995), международном симпозиуме по природным цеолитам (Болгария, 1995), 2-й Циркумполярной сельскохозяйственной конференции "Сельское хозяйство как фундамент для развития села в циркумполярных регионах" (Норвегия,1995). научной конференции "Якутская экспедиция АН СССР (1925-1930 гг.) и развитие науки в Республике Саха (Якутия)" (Якутск, 1995), 1-й международной конференции Академии Северного Форума "Знание-на службу нуждам Севера" (Якутск, 1996).

1.6. Публикации результатов исследований

По теме диссертации опубликованы работы в сборниках научных трудов Якутского НИИСХ, ИЭВСиДВ СО РАСХН, в журнале "Сибирский вестник сельскохозяйственной науки", материалах Международных, Всесоюзных, Республиканских научных конференций и других научных и научно-производственных изданиях, описаниях к патентам.

1.7. Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 281 странице, состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Иллюстрирована ' 34 таблицами, 4 рисунками.

Список использованной литературы включает 424 источника, в том числе 146 иностранных авторов.

1.8. Внедрение результатов исследования

В ветеринарную практику внедрена система мер борьбы и профилактики мыта лошадей, основными элементами которой является специфическая профилактика вакциной с иммуномодулятором, использование средств и методов, стимулирующих иммунобиологическую реактивность, и санация объектов внешней среды.

На основе результатов исследований подготовлены рекомендации и другие нормативно-технические документы.

1.9. Основные положения выносимые на защиту

Материалы изучения краевой эпизоотологии мыта.

Характеристика основных морфологических, культуральных, антигенных и иммуногенных свойств.штамма мытного стрептококка, циркулирующего в популяции якутской породы лошадей.

Результаты изучения иммунобиологической реактивности молодняка якутской лошади с возрастом и при мыте во взаимосвязи с механизмами минерального, витаминного обмена веществ.

Научно обоснованные общие меры профилактики мыта, предусматривающие санацию объектов внешней среды, нормирование рациона по витаминно-минеральному составу, использование иммуномодуляторов для повышения резистентности организма, коррекцию иммунологической реактивности Т-активинами.

Новый штамм бактерий "Str.equl Н-34", используемый для изготовления вакцины против мыта.

Материалы по разработке, испытанию и внедрению икактивиро-ванной вакцины с иммуномодулятором против мыта.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал и методы исследований

Диссертационная работа выполнена в 1989-1995 гг. в лаборатории по изучению болезней лошадей отдела ветеринарии Якутского НИИСХ НПО "Якутское" СО РАСХН.

Эпизоотическую ситуацию мыта изучали в 36 хозяйствах Республики Саха (Якутия) путем анализа статистических материалов Департамента ветеринарии МСХиП РС(Я) за 1986-1995 гг., а также по результатам собственных исследований. В работе применяли методические рекомендации и указания, разработанные й.А.Бакуловым с соавт. (1982) и С. И.Джупиной (1991, 1994).

Для изучения динамики метеорологических факторов и их влияния на заболеваемость жеребят использованы данные гидрометеорологического центра Якутского территориального управления по гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды в ретроспективе (1989-1994).

Выделение и изучение культурально-биохимических свойств мытных стрептококков проводили согласно "Методическим указаниям по лабораторной диагностике мыта лошадей", утвержденных ГУВ МСХ СССР (16. 02.1983).

Материалом для бактериологических исследований служили содержимое абсцессов подчелюстных и других лимфатических узлов головы, слизистой оболочки носа, паренхиматозные органы и абортированные плоды.

От клинически больных, павших, вынужденно забитых и здоровых лошадей неблагополучных , и благополучных хозяйств Республики Саха (Якутия) выделено 42 изолята мытного стрептококка. У изолятов стрептококков изучали морфологические, культуральные, ферментативные, вирулентные, антигенные и иммуногенные свойства.

Определение антигенных свойств и идентификацию выделенных изолятов мытного-стрептококка проводили реакцией кольцепреципита-ции в пробирках и диффузионной преципитации в геле агара, согласно наставлению по применению стрептококковых групповых диагностических сывороток (ГУВ ГАПК СССР 30.07.1987). Преципитирующие сыворотки к стрептококкам серологических групп А. В, С, Д и Е получали из лаборатории кокковых инфекций ВГНКИ ветеринарных препаратов. Антисыворотку к антигенам мытного стрептококка получали иммунизацией кроликов по методике А.Н.Панина (1992).

Вирусологические исследования проведены совместно с сотрудниками лаборатории по изучению болезне£лошадей-ВИЭВг-епецифичесР"~ —кие~антитела к вирусу гриппа и ринопневмонии выявляли реакцией торможения гемагглютинации (РТГА).

Изучение иммунобиологической реактивности организма молодняка лошадей во взаимосвязи с динамикой белкового, минерального и

витаминного состава крови, испытание иммуномодуляторов, методов и средств профилактики мыта проводили в ОПХ "Покровское" и "Красная звезда" НПО "Якутское" и конезаводе им. Героя Попова.

Фагоцитарную активность лейкоцитов, бактерицидную и лизоцим-ную активность сыворотки крови определяли с использованием методик П. А. Емельяненко с соавт. (1980); П.Н.Никанорова (1979); С. И. Плященко с соавт. (1985); П.Н.Смирнова с соавт. (1989). При определении фагоцитарной способности крови в качестве тест-микроба был использован депонированный штамм "Str.equi Н-34".

Моноклональные антитела к иммуноглобулинам Ig М и Ig G лошади получены совместно с сотрудниками отдела биотехнологии ИЭВСиДВ. Концентрацию иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли радиальной иммунодиффузией по Манчини (1964).

Биохимические исследования выполнены в отделах биохимии Якутского НИИСХ и СибНИПТиЖ. Микроэлементы определяли атомно-аб-сорбционным методом на спектрофотометре AAS-3, а витамины-на инфракрасном анализаторе ИКС-3.

Терапевтическую и профилактическую эффективность лекарственных веществ и стимулирующих средств испытывали на больных мытом жеребятах. При этом учитывали клиническую выраженность, продолжительность и исход болезни, а также среднесуточные привесы. Для профилактики и лечения мыта бициллин с этонием использовали согласно "Наставлению по применению этобица для профилактики и лечения мыта лошадей", утвержденного ГУВ при Гос. комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам (2.03.1990).

Изучение выживаемости мытного стрептококка и испытания режимов обеззараживания объектов внешней среды проводили по общепринятым методикам, применяемым в ветеринарной санитарии, совместно с кандидатом ветеринарных наук Н.П. Тарабукиной.

Вакцину против мыта лошадей изготавливали из депонированного штамма "Str. equi Н-34". Антигенность, безвредность и иммуноген-ность вакцины с иммуномодулятором испытывали на белых мышах и жеребятах согласно основным требованиям к производственным и контрольным штаммам микроорганизмов (А.Н.Панин, Н.Т.Татаринцев, 1993) и "Положения о- порядке испытания и регистрации отечественных фармакологических препаратов" (Приказ N 14 от 2.06.1992,ГУВ МСХ РФ).

В качестве иммуномодулятора использовали полирибонат (поли-ведрим), разработанный и предложенный Научно - исследовательским конструкторско - технологическим институтом биологически активных

веществ НПО "Вектор" и ИЭВСиДВ СО РАСХН. Препарат использовали согласно "Временному наставлению по применению полирибоната в ветеринарии в порядке широкого производственного опыта" (1994).

Специфические антитела к мытным стрептококкам выявляли реакцией радиальной иммунодиффузки (ГИД).

Методики отдельных научных исследований и опытов более подробно изложены в соответствующих разделах диссертации.

В экспериментальной работе использовали 160 белых мышей с живой массой 18-20 г.. 46 кроликов породы шиншилла, 554 голов молодняка лошадей с рождения до 24 месячного возраста. Проведено свыше 3600 гематологических, серологических, биохимических и иммунологических исследований.

Производственное испытание мер профилактики мыта лошадей проводили на 598 голова^ молодняка лошадей трех улусов Республики Саха (Якутия).

Цифровой материал результатов исследований обрабатывали по стандартным методикам с использованием таблицы Стыодента. Вероятность различий считалось существенной при Р < 0,05.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Эпизоотическая ситуация по мыту лошадей

Анализ данных о заболеваемости мытом среди табунных лошадей Департамента ветеринарии МСХиП Республики Саха (Якутия) и результаты собственных исследований за 1985-1995 гг. показывают, что мыт регистрируется почти во всех улусах, включая северные - Верхоянский. Среднеколымский, Абыйский и Оймяконский. Необходимо отметить, что данные ветеринарной службы не отражают фактическую эпизоотическую ситуацию по мыту. Занижению показателей распространения и уровня заболеваемости лошадей мытом способтсвует плохой учет ввиду особенностей ведения табунного коневодства, а также затруднения в диагностике атипичной формы течения болезни.

Результаты исследований показали, что мыт наиболее распрос-^ранен^жМштвзх^е^—окшго~8 (Г% поголовья лошадей. Заболеваемость в хозяйствах Намского, Хангалас-ского, Мегино-Кангаласского и Усть-Алданского улусов в 1989-1991 гг. составила 57,8-62,7 %, а летальность-4,0-5,6 %. Самая высокая заболеваемость отмечена в 1989 г. (62,7 %). Из 4 улусов наиболее

неблагополучным является Хангаласский. Эпизоотии мыта в 1989-1995 гг. также отмечены и в хозяйствах Чурапчинского, Алексеевского, Амгинского, Томпонского.Нюрбинского, Сунтарского,Вилюйского, Абый-ского,Верхоянского,Оймяконского и Среднеколымского улусов республики. Результаты эпизоотологических исследований дополняют имеющиеся данные по изучению эпизоотической ситуации мыта в России и СНГ и впервые указывают на значительное распространение инфекции, вызываемой мытным стрептококком, в условиях Якутии.

При изучении эпизоотических особенностей распространения мыта среди табунных лошадей в зависимости от возраста в ОПХ "Пок-ровское" установлено, что болезнь чаще проявляется у молодняка 612-месячного возраста. Однако болезнь может встречаться и у жеребят-сосунов (1,4 %) и молодняка 13-24-месячного возраста (2,2 %).

Таким образом, у жеребят, переболевших в возрасте 6-12 месяцев, формируется иммунитет достаточно высокой напряженности, который обусловливает низкий процент заболеваемости в последующие сроки роста и развития.

Известно, что характерной особенностью мыта лошадей во всех регионах России и СНГ является стационарность и сезонность (Р.С. Москалик, 1971; Б.К.Алиев, 1976; Р.Б.Чысыма, .1988; А.Р.Сансызба-ев, 1993).

Проведенные исследования подтвердили стационарность мыта в неблагополучных пунктах в условиях Якутии. Так, в хозяйствах Хан-галасского, Мегино-Кангаласского, Усть-Алданского и Намекого улусов Центральной Якутии мыт регистрируется ежегодно. Изменяются только показатели заболеваемости и летальности. В некоторых хозяйствах вспышки заболевания могут отмечаться 2-3 раза в течение одного года. Практически в эпизоотический процесс вовлекается каждое новое поколение лошадей 6-12 месячного возраста.

Мыт может регистрироваться в течение всего периода года. Однако максимальное количество больных жеребят отмечалось в ноябре-декабре месяцах, то есть в период после их отьема. В этот период заболеваемость в 3,1 раза выше по сравнению с остальными месяцами. Следовательно в условиях Крайнего Севера характерна выраженная ранне-зимняя сезонность мыта лошадей в отличие от других регионов России и стран СНГ. Выраженная сезонность и стационарность мыта определяется природно-климатическими и хозяйственными факторами, основными из них являются:

- содержание во время отъема жеребят в огороженных участках

значительного поголовья лошадей разных возрастов, в том числе и носителей мытного стрептококка»вместе с молодняком текущего года рождения;

- несвоевременный отъем, скудное и неполноценное кормление жеребят в холодный зимний период;

- запоздалая диагностика и несвоевременная изоляция больных животных, приводящие к перезаражению жеребят;

- резкие перепады температуры воздуха и ветры в ноябре месяце;

- отсутствие эффективных мер специфической профилактики мыта лошадей.

Таким образом, результаты исследований о влиянии природно-климатических и хозяйственно-экономических факторов на интенсивность и экстенсивность' проявления эпизоотического процесса при мыте во многом дополняют данные других авторов (Ж. А. Аточкин, 1974; С.И.Иванов, В.Т.Половников, 1974; Р.С.Москалик, 1975; Б.К.Алиев, 1976; З.Н.Чоенбаев, Ш.К.Коспаков, 1980; П. И. Притулин, 1981; Р. Б. Чысыма, 1988; А.Р.Сансызбаев, 1993).

В условиях Якутии среди лошадей табунного содержания встречаются атипичная, типичная и метастатические формы течения мыта. Атипичная форма регистрируется в хозяйствах, где проводятся регулярный осмотр молодняка, своевременная изоляция и лечение больных, подкормка ослабленных 'животных. В хозяйствах, где не выполняются эти мероприятия, мыт часто протекает в осложненной форме. В частности мыт может осложняться, вторичной инфекцией, вызываемой Sal.typhi murium и Sal.abortus equl. В таких случаях летальность достигает 22,2 %. Впервые в условиях Якутии доказана циркуляция вирусов гриппа и ринопневмонии среди молодняка и кобыл якутской породы лошадей. Установлено, что мыт осложняет вирусные инфекции (грипп и ринопневмония) или может протекать в виде смешанной бактериальной инфекции, совместно с сальмонеллезом.

2.2.2. Выделение эпизоотического штамма Str. equi, циркулирующего в популяции якутских лошадей, и изучение его биологическихсвойств___

В процессе работы исследовано 95 проб биоматериала и 105 смывов из носовых полостей больных и здоровых лошадей, доставленных из 25 хозяйств 7 улусов Республики Саха (Якутия). Выделено 42

изолята мытного стрептококка. Морфологические и культуральные свойства изолятов были характерными для возбудителя мыта.

Установлено, что "местный" штамм мытного стрептококка обладает более выраженной антигенной активностью, чем штамм N 25 (производственный, ВИЭВ). Титр антител антисыворотки после иммунизации антигеном из штамма "Str.equi Н-34" составил 1:32 - 1:64. Преципитирующая сыворотка использована для типирования выделенных штаммов.

При бактериологическом исследовании 15 абортированных плодов в 4 случаях выделен возбудитель мыта - мытный стрептококк с характерными морфологическими, культуральными и патогенными свойствами. Наличие возбудителей других инфекционных болезней исключено бактериологическими и вирусологическими исследованиями. Следовательно, мытную инфекцию необходимо учитывать при изучении причин абортов кобыл.

Из выделенных 42 изолятов мытного стрептококка отобраны четыре, которые обладали наиболее стабильными морфологическими, культуральными, ферментативными и антигенными свойствами, характерными для Str. equi. Из них штамм Str. equi Н-34 депонирован в ВГНИИ контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и использован для изготовления диагностических и профилактических препаратов против мыта лошадей.

2.2.3. Разработка эффективных методов и средств терапии и химиопрофилактики мыта

Для сравнительного испытания двух методов лечения мыта проведен опыт на 25 головах молодняка 10-11 месячного возраста. Животным первой группы вводили бициллин-3 с этонием. Молодняку второй группы делали инъекцию фильтрата бульонной культуры, изготовленного из "местного" штамма мытного стрептококка. Животным третьей группы препараты не вводили.

Результаты исследований показали, что введение бициллина с этонием и мытного антивируса сокращает сроки выздоровления и снижает тяжесть заболевания, то есть эти препараты эффективны при терапии мыта. Однако применение мытного антивируса в условиях Якутии нецелесообразно вследствие трудоемкости его приготовления и введения, неудобств при обработке (жидкий препарат часто замер-

зает в холодные дни), а также невысокой эффективности по сравнению с антибиотиками.

У больных мытом жеребят выявлены антитела в высоких титрах к вирусу ринопневмонии и гриппа, что подтверждают результаты предыдущих исследований.

Для испытания средств ранней химиопрофилактики мыта было подобрано 70 жеребят после отъема от матерей (ОПХ "Покров-ское"). Жеребятам подопытной группы (50 голов) вводили бицил-лин-3 в сочетании с этонием двухкратно с интервалом в 10 дней. Доза бициллина - 10 тыс.ЕД/кг , а этония - 0,5 мг на 1 кг живой массы.

В течение 3 месяцев после введения препарата (ноябрь, декабрь. январь) клинических признаков мыта не отмечали. В конце февраля и начале марта отмечены первые признаки инфекции. В течение марта заболели 40 голов подопытной и все жеребята контрольной группы.

Таким образом, предлагаемое согласно наставлению, дробное введение бициллина с этонием после отъема жеребят не предохраняет от возникновения мыта в течении зимнего и весеннего содержания.

Для разработки методов химиопрофилактики бициллином в сочетании с этонием проведен опыт на 174 жеребятах. После отъема от матерей сформирована группа из 86 клинически здоровых жеребят. Животным вводили бициллин-5 в сочетании с этонием в следующие сроки: 13 ноября, 27 ноября (14-й день), И января (2-й месяц), 17 февраля (3-й месяц), 15 марта (4 месяц).

В ноябре проводили дегельминтизацию препаратом мебенвет и вводили дважды тетравит (витамины А, Д и Е). Следует отметить, что в предыдущие годы (1988-1990) отмечали стационарность мыта в этом звене. В качестве контроля отобрали 88 жеребят, которым в ноябре дважды вводили бициллин с этонием в указанных выше дозах.

В период с ноября по май производили клинический осмотр подопытных животных. При этом во все сроки наблюдения среди жеребят опытной группы клинические признаки мыта не обнаружены. В контрольной группе молодняка в феврале - марте заболело И голов, а в апреле - 2.3 животныг. _

Следовательно, наиболее эффективным способом профилактики мыта является 4-кратное введение бициллина с этонием в сочетании с дегельминтизацией и инъекцией витаминных препаратов.

- 15 -

2.2.4. Разработка средств и методов, стимулирующих иммунобиологическую реактивность

2.2.4.1. Получение гибридом, синтезирующих' моноклональные антитела к иммуноглобулинам лошади

Для достоверного определения концентрации иммуноглобулинов в биологических жидкостях организма проведена работа по получению гибридом, синтезирующих моноклональные антитела к разным классам иммуноглобулинов лошади.

Предварительную концентрацию и очистку фракции иммуноглобулинов проводили с помощью солевого осаждения (25 мМ гп304 и (Ш4)г304 до 30 %-ного насыщения) с последующим диализом против дистиллированной воды. Эуглобулиновую фракцию, содержащую Ig М, подвергали гель-фильтрации на колонке АсА-34 и хроматографировали на колонке с сефарозой 4В-С (Швеция). Собирали фракции, составляющие вершину первого пика.

Иммуноглобулиновую фракцию,содержащую ^ диализовали ультрафильтрацией против 0,01 М фосфатного буфера рН 8,0 и наносили на колонку с ДЭАЭ-сефацелем, уравновешенную этим же буфером. Препарат с преимущественным содержанием ^а и подвергали дальнейшей очистке на колонке с АсА-34.

Гомогенность полученных препаратов М и й контролировали иммуноэлектрофорезом в геле агара и ЗОБ-электрофорезом по методу и. К. ЬаеттИ (1970).

Для иммунизации брали самок мышей линии Ва1Ь/с в возрасте 1-2 месяца. Клетки культивировались в среде ЕРМ1-1640 (НПО "Вектор") с добавлением сыворотки плодов крупного рогатого скота, 5 мл 3 % раствора Ь-глутамина,антибиотика, 1 % 2-меркаптоэтанола, 1 % 2-аминоэтанола и 0,0001 % селенита натрия в С02 - инкубаторе с содержанием 5,5 % С02 при 37°С.

Гибридизацию клеток проводили по методике С. баИге и С. М11-зге1п (1981). Специфическую продукцию выявляли в непрямом варианте ИФА на полистироловых планшетах. Связавшиеся мышиные антитела выявляли меченными пероксидазой иммуноглобулинами.

Клетки из лунок с положительным сигналом клонировали на фидерный слой перитонеальных макрофагов методом лимитирующих разведений (Дж.келер, 1983). Асцитные опухоли получали на мышах линии

Ва1Ь/с старше 3 месяцев.

Специфическую активность выявляли, в реакции иммунодиффузии по Оухтерлонй (1959). При отсутствии преципитации специфическую активность контролировали в ИФА. В ходе .работы .было получено множество гибридом, синтезирующих моноклональные антитела к в и ^ М лошади. Отбор клонов производили по следующим признакам: хороший рост клеток, стабильная антителопродукция,.максимальный положительный' сигнал в ИФА, .способность преципитировать антиген. Были отобраны по шесть клонов к ^ в и к,1й М.лошади, наиболее отвечающие этим требованиям.

Для количественного определения содержания иммуноглобулинов 1В М и V классов в пробах сыворотки крови лошадей в реакции простой радиальной иммунодиффузии в геле агара по .Манчини (1965) были выбраны клоны ЗЬ8М и ЗЬС. Наилучшая чувствительность 'и наименьший - расход моноклональных антител были при постановке реакции ■ в 1 % агарозе с добавлением 4 % полиэтиленгшколя с молекулярной массой-6000, приготовленного на фосфатно солевом буфере с добавлением азида натрия. ■ :

Асцит клона 311ЭМ вносили в агарозу в разведении 1.:200, исследуемые сыворотки по 33,3 мкл в. разведении 1:10. Данные реакции считывали на третьи сутки. При разведении асцита клона ЗЬС в 25 раз исследуемую сыворотку разводили. также 1:10, но пробы вносили в лунки по 10 мкл. .--.о

Таким образом, получены клоны обладающие высокой специфической активностью к ^ й и М лошади (не дающие перекрестные- реакции) и высокой аффинностью (способностью преципитировать антиген). Клоны устойчиво сохраняют продукцию антител на высоком уровне и-пригодны для практической работы. Клоны депонированы в гибридомном банке ИЭВСиДВ (1996).

2.2.4.2. Изучение иммунобиологической реактивности молодняка лошадей

Для изучения возрастных и сезонных особенностей факторов естественной резистентности молодняка якутской породы лошадей во взаимосвязи с динамикой белкового., витаминного и минерального состава крови в первой декаде мая месяца 1992 г. были подобраны по принципу аналогов 10 новорожденных жеребят. От них для исследований брали кровь на 3-5 и 10-15 дни после рождения и в 2, 5,

6, 7, 8, 9, 12, 19 и 24-месячном возрасте. В ней определяли количество лейкоцитов, общего белка и его фракций, фагоцитарную способность лейкоцитов, лизоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови, концентрации иммуноглобулинов ^ й и ^ М, витаминов, макро- и микроэлементов.

В крови новорожденных жеребят отмечено повышенное содержание общего белка и его гамма-глобулиновой фракции, иммуноглобулинов ^ в и М и относительно высокое содержание витамина Е, которое обусловлено пассивной передачей иммунных тел и других биологически активных веществ из молозива матери через желудочно-кишечный тракт в первые дни жизни. В этот период отмечали наиболее низкое содержание лейкоцитов, витаминов А и С, наименьшую бактерицидную активность сыворотки крови и низкую фагоцитарную активность лейкоцитов.

К.2-х месячному возрасту установлено достоверное снижение уровня общего белка и его альбуминовой и глобулиновой фракций. К этому сроку значительно повышалась фагоцитарная активность лейкоцитов и бактерицидная активность сыворотки крови, а также содержание витаминов А и Е.

Рассматривая защитные механизмы жеребят в ранний постнаталь-ный период, следует отметить, что особое место в повышении их устойчивости к заболеваниям занимает гуморальный иммунитет, обусловленный колостральными иммунными телами. В этом аспекте относительную устойчивость жеребят-сосунов к мыту можно объяснить ко-лостральным иммунитетом.

Снижение в крови содержания белка и его фракций в 2-х месячном возрасте связано с разрушением колостральных и недостаточностью биосинтеза "собственных" иммуноглобулинов в период относительной незрелости иммунной системы.

Низкий уровень показателей гуморального иммунитета в 2-х месячном возрасте, вероятно , компенсируется высокой активностью клеточных факторов иммунитета (лейкоциты и фагоцитоз) и бактерицидной способностью сыворотки крови.

В последующем, до 5-6 месячного возраста, наблюдались дальнейшее повышение содержания общего белка и его фракций, лейкоцитов, иммуноглобулинов ^ с и ^ М, фосфора, магния и достаточно зысокий уровень бактерицидной активности сыворотки крови, которые являются показателями структурного и функционального созревания шмунной системы и организма в целом.

Результаты исследований клеточных и гуморальных факторов иммунобиологической реактивности, биохимических компонентов крови у жеребят с первых дней жизни до 24-месячного возраста и кобыл в разные сезоны года показали, что в возрасте 7-8 месяцев они у молодняка существенно не отличаются от данных, полученных у взрослых лошадей. Следовательно, к 7-8-месячному возрасту завершается становление иммунной системы молодняка лошадей якутской породы.

В последующие после отъема жеребят сроки, то есть в раннезимний период, отмечено значительное снижение бактерицидной активности сыворотки крови, фагоцитарной способности лейкоцитов, содержания витаминов А, Е и С, минеральных веществ-фосфора, кальция, магния, марганца и цинка. Снижение уровня иммунобиологической реактивности и дефицит в организме витаминов и минеральных веществ являются следствием влияния стрессовых факторов таких как отъем жеребят, резкая смена типа кормления и низкая температура. К снижению уровня естественной резистентности в этот период способствуют сильная пораженность жеребят паразитарными болезнями (параскаридоз, гастрофилез и другие), а также заболевание рино-пневмонией и гриппом.

Следовательно, в результате снижения уровня. иммунобиологической реактивности создается потенциальная возможность развития инфекционного процесса , вызываемого возбудителем мыта. Как показывают результаты изучения эпизоотической ситуации мыта и иммунобиологической реактивности молодняка с возрастом наиболее высокая заболеваемость зарегистрирована в ноябре - декабре месяцах.

В последующие сроки (зимний и весенний периоды) как следствие недостаточного поступления белковых, минеральных и витаминных веществ с кормом отмечены низкие уровни общего белка и его фракций, активности лизоцима, фагоцитирующих клеток, кальция, фосфора, магния, меди, кобальта, витаминов А, С и Е.

-Таким—образом_факторы_иммунобиологической реактивности у

жеребят имеют возрастные и сезонные особенности. Сезонные колебания показателей естественной резистентности демонстрируют зависимость ее от климатических факторов и способов содержания и кормления.

Наиболее критическими периодами развития жеребят в иммунологическом и физиологическом отношении, являются 2-х месячный и

весь зимний период, особенно первые два месяца после отъема. Эти сроки необходимо учитывать при разработке средств и методов профилактики мыта.

2.2.4.3. Изучение действия Т-активина

С целью испытания препаратов тимуса были отобраны однородные по полу, возрасту, упитанности и живой массе три группы по 5 голов молодняка лошадей 10-месячного возраста. Жеребята подопытных групп в декабре 1992 г. и январе 1993 г. переболели мытом, были ослабленными и отставали в росте и развитии по сравнению со здоровыми. Животным первой группы вводили Т-активин, изготовленный из тимуса лошадей якутской породы, второй группы - Т-активин из тимуса крупного рогатого скота, молодняк третьей группы оставили в качестве контроля. Т-активин вводили в дозе 0,03 мл/кг в течение 3-х дней подряд согласно "Наставлению по применению Т-активина в ветеринарии" (ГУВ Госагропрома СССР, 1989). Работа проведена совместно с доктором биологических наук И.С.Решетниковым.

Результаты исследований показали, что на 30 день после введения препаратов тимуса отмечено повышение содержания общего белка (1 группа - 8,66+0,59 г %. Р < 0,05, 2 группа - 7,57+0,16) и его гамма глобулиновой фракции (1 группа - 1,87+0,10 г %, 2 группа - 1,40+0,19 г %) по сравнению с контрольной группой (общий белок - 7,26+0.74 г %, гамма-глобулины - 1,15+0,13 г %). которое наиболее выражено в первой группе животных. В этот период наблюдалось увеличение уровня бактерицидной (1 группа - 48,2+2.0 %. 2 группа - 44,5+2,40 % , 3 группа - 42,0+1,82 %) и лизоцимной (1 группа - 26,5+2.11 % , 2 группа - 24.3±1,43 % , 3 группа -20,1+2,20 %) активности сыворотки крови.

Живая масса молодняка опытных групп была больше на 9.2-9,5 кг (Р < 0,05), чем у животных контрольной группы.

2.2.4.4. Изучение влияния стимулирующих веществ на естественную резистентность, рост и развитие молодняка лошадей

Для испытания стимулирующего препарата на основе цеолита были сформированы по принципу аналогов две группы по 10 голов мо-

лодняка лошадей ю-месячного возраста.

В качестве носителя препаратов применяли цеолит Хонгу-ринского месторождения Фракции мука в дозе 0,1 г на 1 кг живого веса. Доза иммуномодулятора ридостина 0,1 мг/кг, витамина А — 30000 МЕ, Д - 40000 МЕ , Е- - 20 мг на 1 голову. Комплексный препарат, давали через рот 2 раза с интервалом в 12 дней - жеребятам подопытной группы. Вторая группа - контроль. ...

Установлено,. что введение иммуномодулятора ридостина и витаминов А, Д и Е на основе хонгурина стимулирует иммунобиологи- -ческую реактивность организма, которая выражается в повышении содержания общего белка и его глобулиновой фракции, уровня лизоцим-ной, бактерицидной активности сыворотки крови, фагоцитарной способности лейкоцитов. .

Для разработки общих мер профилактики мыта проведен производственный опыт совместно с кандидатом сельскохозяйственных наук Р.В.Ивановым. Молодняку лошадей опытной группы {30 голов) вводили бициллин с этонием в профилактических дозах, антгельминтный препарат "Ивомек", в рацион добавляли витаминно-минеральную смесь, в который входил иммуномодулятор-полирибонат. В витаминно-минеральную смесь, составленную на основании расчетов потребности в минеральных веществах и. собственных.исследований,"-включали концентраты витаминов А, Е, С и Д, монокальцийфосфат, хлористый натрий'и' соли железа, кобальта, калия.

В конце, эксперимента заболеваемость в опытной группе составила 6,7 %,. а в контрольной - 32 %. Продолжительность болезни в группах соответственно равнялась - 15 и 25 дней. В сыворотке крови жеребят опытной группы отмечено повышение уровня лизоцимной активности, содержания гамма-глобулиновой фракции белка, витаминов А, С и Е, повышение в два раза среднесуточных привесов и абсолютного прироста живой массы по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе.

_Таким образом, неспецифическая мера профилактики мыта, предусматривающая введение бициллина с этонием . дегельминтизацию препаратом "Ивомек", включение в рацион витаминно - минеральной смеси с иммуномодулятором в зимний период способствует повышению уровня естественной резистентности , стимулирует рост и развитие , снижает заболеваемость мытом и продолжительность его течения.

- 21 -

2.2.5. Разработка и испытание средств и методов, специфической профилактики мыта

2.2.5.1. Изготовление и изучение безвредности ■ вакцины против мыта -

Из депонированного штамма Str.equi Н-34 изготовлена вакцина против, мыта лошадей. Бактериальную массу получали в среде Хоттин-гера с добавлением сыворотки телят. Для накопления протективного М-белка.мытного стрептококка производственный штамм" пассажиро-вали в гемокультурах и лабораторных животных. Культуры мытного стрептококка инактивировали формалином. В качестве адъюванта использовали гидроокись алюминия. Полирибонат добавляли в вакцину из расчета 0,5 мг/кг живой массы. '

. Вакцину с иммуномодулятором вводили подкожно 10 белым мышам в дозе 1,0 мл. В течение 10 дней, наблюдения не отметили ни одного случая заболевания и гибели животных^

Молодняку лошадей (20 голов) 6-7 месячного возраста вакцину вводили внутримышечно в область бедра в нарастающих дозах до 10-кратного превышения иммуногенной дозы. Было взято 5 доз - 1, 2, 3, 5 и 10 мл. На каждую дозу вакцины брали по 4 жеребят. Затем за животными вели клиническое наблюдение в течение 1 месяца.

Результаты наблюдения показали, что в течение 5-7 дней отмечается припухлость тестоватой консистенции в месте введения 'препарата. Повышение местной и общей температуры не отмечено. За весь период наблюдения не отмечено отказа от корма, признаков угнетенности и проявления каких-либо клинических симптомов заболевания.

2.2.5.2. Изучение напряженности иммунитета у вакцинированных животных

Для определения иммуногенной активности вакцину с иммуномодулятором вводили 20-ти белым мышам подкожно в дозе 0,5 мл. Через 14 дней после иммунизации 20 вакцинированных и 20 контрольных мышей аналогичной массы заражали подкожно в область спины подтитро-ванной летальной дозой контрольного штамма Str.equi Н-34 (0,1 мл. суспензии, содержащая 2 млрд. микробных тел в 1 мл.) В течение 10

дней наблюдения за животными из 20 иммунизированных мышей заболели к погибли 2 мыши. В контрольной группе заболели и погибли 18 белых мышей.

Для испытания вакцины были взяты 73 жеребенка 6-7 месячного возраста. Животных первой группы (27 гол.) иммунизировали вакциной с иммуномодулятором, второй группы (21 гол.)-обработали инак-тивированной вакциной без иммуномодулятора, третьей группы (25 гол.) неиммунизировали (контроль).

Вакцину вводили внутримышечно в дозе 2 мл. на 1 голову двукратно с' интервалом в 10 дней. Животных предварительно дегель-минтизировали ивомеком. Через 30 дней после повторной вакцинации по 5 животных из каждой группы были заражены оттитрованной 'дозой вирулентной культуры мытного стрептококка путем нанесения на слизистую оболочку носовой полости.

У жеребят обоих групп иммунизированных вакциной против мыта не наблюдали угнетение и отказа от корма. Температура тела находилась в пределах физиологической нормы в течение 30 дней после вакцинации. После заражения на 10-15 день у всех 5 невакциниро-ванных жеребят отмечали клинические признаки мыта (увеличение подчелюстных лимфатических узлов, гиперемия слизистой оболочки носа, слизисто - гнойное истечение из носа). У жеребят, привитых вакциной с иммуномодулятором, случаи заболевания мытом не отмечено. Среди животных, привитых только одной вакциной (2 группа) на 15 день у 1 головы наблюдали клинические признаки мыта. При бактериологическом исследовании смыва из носовой полости выделен и идентифицирован возбудитель мыта.

В течение периода наблюдения (6 месяцев) в различные сроки зимнего и весеннего содержания мытом заболели в 1 группе - 1 голова, во 2 группе - 2, а в контрольной группе - 18 голов.

Результаты испытания показали более высокую эффективность вакцины с иммуномодулятором по сравнению с вакциной без иммуномодулятора при мыте лошадей.

Максимальный титр преципитируюцдоГантител установлен—на~30— день после вакцинации (1:35). В последующие сроки антитела в низких титрах у некоторых животных сохранялись до 117 дней наблюдения. Следует отметить, что титры антител у животных привитых вакциной с иммуномодулятором, были выше,чем у жеребят, вакцинированных препаратом без последнего.

Введение вакцины с иммуномодулятором вызывало повышение фа-

гоцитарной активности лейкоцитов, содержания общего белка и его глобулиновой фракции, иммуноглобулинов Ig G и Ig М, которое совпадало с периодом максимального синтеза гуморальных антител. Фагоцитарная способность лейкоцитов крови оставалась высокой на 88 и 152-й день после иммунизации (Р < 0,05). Повышение уровня бактерицидной и лизоцимной активности крови установлено на 62 и 88-й дни исследования (Р < 0,05).

2.2.5.3. Испытание вакцины против мыта в производственных условиях

В 1994-1996 гг. согласно решению Ученого совета Якутского НИИСХ и приказу Управления ветеринарии при МСХ Республики Саха (Якутия) от 1.10.1994 г. N 248 проведено производственное испытание вакцины с иммуномодулятором в 3-х неблагополучных по мыту Намеком, Хангаласском и Мегино-Кангаласском улусах. Как показывают результаты наблюдений с 1989 г. мыт в коневодческих звеньях этих улусов регистрируется ежегодно и заболеваемость в среднем составляет 50-60 %. Летальность в зависимости от климатических условий, технологии содержания и кормления, а также от проведения профилактических и лечебных мероприятий колеблется от 2 до 10%.

Вакцинацию проводили на 2-3 день после отъема от матерей в первой и второй декаде ноября. Вакцину вводили внутримышечно в область верхней трети шеи двукратно с интервалом в 2 недели в дозе 2 мл. Дегельминтизацию проводили препаратами аверсект (АС-1) и ивомек.

Всего иммунизировано 598 голов молодняка 6-7 месячного возраста. Из них в разные периоды наблюдения заболели 29 голов. Эффективность вакцинации составила 95,2 %. Наиболее ее высокая эффективность (100 %) отмечена в Намеком улусе. В ранее неблагополучных звеньях "Тасычча" и "Дарагана" ОПХ "Покровское" в течение 2-х лет после внедрения специфической профилактики не выявлено больных мытом жеребят.

В 1994-1996 гг. в других звеньях коллективных предприятий Намского, Хангаласского и Мегино-Кангаласского улусов где вакцину не применяли мыт среди жеребят был отмечен в декабре, январе и феврале месяцах зимнего периода содержания. Заболеваемость в среднем составила 45-50 %.

Таким образом, результаты производственных испытаний вакцины

с иммуномодулятором также показали ее высокую эффективность для профилактики мыта лошадей в табунном коневодстве.

Расчеты показали, что при внедрении специфической профилактики экономический эффект на 1 голову составит 69,6 тыс.рублей, на 1 рубль затрат - 6,96 рублей.

Следовательно, разработанный способ профилактики мыта лошадей является не только противоэпизоотическим, но и экономически целесообразным и его следует рекомендовать для внедрения в производство.

2.2.6. Санация объектов внешней среды при мыте лошадей

Результаты изучения выживаемости Str.equi показали, что мытный стрептококк в зимний и весенний периоды в почве, навозе, сене и зерне может сохранить жизнеспособность и патогенность в течение четырех месяцев, а в летний период в конском навозе - три месяца, то есть весь летний период. Полученные результаты показывают возможность заражения жеребят мытом в течение года через объекты внешней среды. Следует отметить, что штамм Str. equi Н-34 более устойчив к действию внешних факторов, чем производственный штамм N 25 (ВИЭВ).

Результаты исследований показали, что полное обеззараживание деревянных, бетонных и металлических поверхностей, обсемененных Str. equi, достигается при применении 3 %-ного (по активному хлору) раствора кальция гипохлорида нейтральной марки "А" (КГН"А"), расходе 1 л/м2 или 4 %-го раствора (0,5 л/м2), при экспозиции 3 часа, а также при применении 2 %-го (по действующему веществу) раствора НУК, (200 мл/м1), при экспозиции 1 ч. При отрицательных температурах эффективно применение 4 %-ного раствора КГН"А" с антифризом (10 %-й NaCl) 1 л/м2 и экспозиции 3 ч. или 3 %-ного раствора НУК (200 мл/м2) и экспозиции 1 час.

ли,шесть вариантов компостирования конского навоза с навозом крупного рогатого скота и соломой. Компостирование проводили на площадках в летний период в течение трех месяцев. Размеры буртов: высота - 1,5-2 м, ширина - 3-4 м, длина произвольная. В качестве тест культур использовали штаммы Str.equi Н-34, Sal.typhi murium, E. coll 1257 и St. aureus 209 P. тест-объекты закладывали на глу-

бине 0.5 и 1 метр.

В 5-х и 6-х вариантах компостов для изучения обеззараживания навоза добавляли 1 млрд.взвесь Bac.subtilis ТНП-3.

Результаты исследований показали, что в конском навозе Е.coli, St. aureus. Str.equl и Sal.typhi murium не погибают в течение всего летнего периода. Так как температура в навозе в самые теплые дни лета (в июле) достигала всего лишь +23°С. Это свидетельствует, что в условиях Якутии в конском навозе биотермический процесс не происходит и мытный стрептококк может сохраняться в навозе в течение лета, являясь потенциальньм источником возбудителя инфекции.

При компостировании же конского навоза и навоза крупного рогатого скота, (соотношение 1:1 и 1:2) обеззараживание компоста, обсемененного возбудителями кокковых инфекций (Str.equl, St.aureus), происходит на 60-й'день. Возбудители сальмонеллеза и коли-бактериоза сохраняли жизнеспособность за период компостирования (90 дней).

В компостах конского навоза с соломой (соотношение 1:1), содержащих 0,5 %-ую суспензию микроба-антагониста надежное обеззараживание тестов, обсемененных Е. coli, St. aureus и Str. equi происходит на 60 день, а возбудитель сальмонеллеза выделяется и на 60 день наблюдения. В конском навозе с суспензией Bac.subtilis возбудитель мыта остается жизнеспособным в течение не более 30 дней.

Сильные и продолжительные холода в зимний период обусловливают высокую жизнеспособность мытного стрептококка на объектах внешней среды. В теплое время года в почве, навозе , на сене и зерне в естественных условиях основную санирующую роль играют почвенный микроб Вас. subtilis. Благодаря этому микроорганизму и воздействии других факторов таких как высокая солнечная инсоляция, положительная температура воздуха объекты внешней среды, обсемененные мытным стрептококком,обеззараживаются в летний период естественным образом, за исключением буртов навоза.

2.2.7. Система мер борьбы с мытом

На основании полученных результатов разработана система мер профилактики и борьбы с мытом, целью которого является повышение резистентности организма, особенно молодняка 6-7-месячного воз-

раста.

Меры борьбы предусматривают:

- дегельминтизацию жеребят в ноябре месяце;

- введение в рацион (зимний период) витаминно - минеральной смеси, содержащей минеральные вещества, витамины А, Е и С и имму-номодуляторы;

- использование Т-активина и биологически активных препаратов на основе хонгурина для стимуляции иммунобиологической реактивности и коррекции вторичных иммунодефицитов;

- четырехкратное ежемесячное введение в течение зимнего содержания бициллина с этонием в профилактических дозах;

- дезинфекцию деревянных и бетонных поверхностей 3-4 %-ным раствором гипохлорида натрия нейтральной марки "А". Обеззараживание предметов ухода 2-3 %-ным раствором надуксусной кислоты;

- биотермическое обеззараживание навоза компостированием;

- иммунизацию вакциной с иммуномодулятором дважды с интервалом 14 дней.

Комплекс мер борьбы и профилактики мыта лошадей в 1989-1995 гг. апробирован в хозяйствах Мегино - Кангаласского, Намского, Усть-Алданского, Хангаласского улусов Республики Саха (Якутия) на 21,2 тыс.гол. лошадей. В результате было достигнуто снижение заболеваемости мытом на 60-80 %.

3. ВЫВОДЫ

1. Эпизоотическими исследованиями, проведенными в 1985-1996 гг., установлено распространение мыта во всех улусах Республики Саха (Якутия), занимающихся разведением якутской породы лошадей. Мыт наиболее распространен в Центральной Якутии, где размещено около 80 % лошадей. В отдельных улусах этой зоны заболеваемость составила 57,8-62,7 %, а летальность - 4,0-5,6 %. Ранне - зимняя сезонность и стационарность мыта определяются экстремальными природно-климатическими -условиями -и -особенностями-ведения—табунного— коневодства.

2. Культуры мытного стрептококка, выделенные от больных жеребят, относятся к серологической группе С стрептококков, обладают характерными для Str. equi морфологическими, культуральными, ферментативными, патогенными и антигенными свойствами. Депонированный штамм Str. equi Н-34 по своим вирулентным, антигенными и

иммуногенными свойствами превосходит другие изоляты и штаммы мытного стрептококка.

3. Мыт проявляется в атипичной, типичной и метастатической формах. В ряде случаев установлено осложнение болезни вторичной инфекцией, вызываемой Sal. abortus equi или Sal. typhi murium. Мыт следует дифференцировать от вирусных инфекций (грипп и рино-пневмония). При таких смешанных инфекциях летальность жеребят может достигать 22,2 %.

4. Обработка жеребят после отъема, согласно действующему наставлению, путем дробного введения бициллина в сочетании с это-нием не предохраняет их от заболевания мытом в период зимнего и весеннего содержания. Предложенная четырехкратная ежемесячная инъекция бициллина с этонием в сочетании с ранней дегельминтизацией и витаминизацией обладает выраженным профилактическим действием. Комплекс неспецифических мер профилактики, предусматривающий введение бициллина с этонием, дегельминтизацию, включение в рацион витаминно-минеральной смеси с иммуномодулятором на основе цеолита в зимний период способствует повышению уровня естественной резистентности, стимулирует рост и развитие, снижает заболеваемость мытом и сокращает продолжительность его течения.

5. Иммунобиологическая реактивность организма молодняка лошадей имеет возрастные и сезонные особенности и взаимосвязана с динамикой содержания белковых, минеральных и витаминных компонентов в крови. Наиболее критическими периодами развития жеребят в иммунологическом и физиологическом отношении, обусловленные действием стрессовых факторов (отъем, резкая смена типа и неполноценное кормление, сильные холода и пораженность гельминтами), являются 2-х месячный возраст, а также весь зимний период, особенно первые два месяца после отъема. Содержание и уровень клеточных и гуморальных факторов иммунитета, биохимических компонентов крови у молодняка 7-8-месячного возраста достигает показателей взрослых животных, что связано с созреванием к этому моменту иммунной системы лошадей якутской породы.

6. Полученные моноклональные антитела к Ig G и Ig М, обладающие высокой специфичностью,рекомендуется использовать для определения концентрации иммуноглобулинов, оценки иммунобиологической реактивности лошадей и для разработки диагностических тест-систем.

7. Введение препаратов тимуса стимулирует иммунобиологическую реактивность и обеспечивает нормальный рост и развитие ослаб-

ленных и больных жеребят. Т-активин, изготовленный из тимуса молодняка якутской породы лошадей, обладает более высокой биологической активностью, по сравнению с препаратом аналогично приготовленным из вилочковой железы крупного рогатого скота.

8. Инактивированная вакцина, изготовленная из штамма Str. equi Н-34. с иммуномодулятором полирибонатом безвредна и нереак-тогенна. При двухкратном с интервалом в 14 дней внутримышечном введении препарата иммунитет высокой напряженности (до 6 месяцев) индуцируется не менее чем у 90 % иммунизированных лошадей. Иммунизация вакциной с иммуномодулятором вызывает повышение фагоцитарной способности лейкоцитов, лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови, индуцирует синтез преципитирующих антител и повышение концентрации иммуноглобулинов Ig G и Ig М, что указывает на стимуляцию клеточных и гуморальных факторов иммунитета, обеспечивающую высокую его напряженность.

9. Результаты производственных испытаний показали выЮку® эффективность специфической профилактики мыта вакциной с иммуномодулятором.

10. Штамм Str. equi Н-34 обладает значительной устойчивостью к воздействиям факторов внешней среды. В зимний и весенний периоды в почве, навозе, сене и зерне штамм сохраняет жизнеспособность и патогенность в течении - 4-х месяцев, а в летний период ь донском навозе - 3 месяца. Следовательно, объекты внешней среды, обсемененные возбудителем мыта, являются источником возбудителя инфекции в течение года.

11. Для дезинфекции раскольных станков в коневодческих базах рекомендуются 3-4 %-ные растворы гипохлорида кальция марки "А", а для обеззараживания предметов ухода - препарат надуксусной кислоты 2 %-й концентрации по действующему веществу. Навоз лошадей обеззараживают компостированием с навозом крупного рогатого скота в соотношении 1:1 или 1:2 и соломой (1:1) при добавлении 0,5 %-ной суспензии микроба-антагониста Вас, subtllis ТНП-3._

12. Разработанная и апробированная система мер борьбы с мытом, включающая качественную диагностику болезни, лечение эффективными препаратами, повышение иммунобиологической реактивности, рациональные эффективные схемы введения антибактериальных средств, способы и режимы обеззараживания объектов внешней среды, специфическую профилактику вакциной с иммуномодулятором позволила снизить заболеваемость и исключить падеж жеребят от мыта в ряде

хозяйств Якутии.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Научные разработки вошли в следующие нормативно-технические документы, внедренных и предлагаемых для внедрения в ветеринарную практику:

1. Профилактика и лечение инфекционных' болезней лошадей в Якутии. Методическое пособие. Утв. учеными советами Якутского НИИ сельского хозяйства СО РАСХН (11.12.1990) и Якутского сельскохозяйственного института (24.01.1991).

2. Оценка естественной резистентности лошадей. Методические рекомендации. Утв. ученым советом ЯНИИСХ (01.08.1994).

3. Дезинфекция объектов животноводства. Рекомендации. Утв. ждены ученым советом ЯНИИСХ СО РАСХН (29.11.1991) и НТС МСХ.Республики Саха (Якутия) (22.01.1992).

4. Комплекс мероприятий по биологическому обеззараживанию навоза и птичьего помета в условиях Якутии. Методические рекомендации. Утв. ученым советом ЯНИИСХ СО РАСХН (25.02.1996).

5. Штамм бактерий streptococcus equi Н-34-ДЕП. используемый для изготовления диагностических и профилактических препаратов против мыта. Решение ВНИИГПЭ о выдаче патента на изобретение (13.03.1996).

6. Профилактика и лечение мыта в табунном коневодстве. Рекомендации. Утв. ученым советом ЯНИИСХ СО РАСХН (13.04.1995) и подсекцией "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока отделения ветеринарной медицины РАСХН (12.06.1995).

7. Временное наставление по применению инактивированной вакцины с иммуномодулятором против мыта лошадей. Утв. Департаментом ветеринарии МСХиП РФ (15.07.1996).

8. Инактивированная вакцина с иммуномодулятором против мыта лошадей ТУ 9384-046-0000-80-64-96. Утв. Департаментом ветеринарии МСХиП РФ (15.07. 1996).

- 30 -

5. СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Профилактика и лечение инфекционных болезней лошадей в Якутии: Метод, пособие. Якут. НИИСХ; Подгот.: В.Ф.Бутковский, М.П. Неустроев. - Якутск, 1991,- 27 с.

2. Неустроев М. П Мыт лошадей// Система ведения агропромышленного производства Республики Саха (Якутия). Производство и переработка продуктов животноводства/ РАСХН. Сиб. отд-ние. НПО "Якутское". - Новосибирск, 1992. - С. 92.

3. Дезинфекция объектов животноводства в Якутии: Рекомендации Якут. НИИСХ; Подгот.: Н.П.Тарабукина, М.П.Неустроев.- Новосибирск, 1992.- 16 с.

4. Неустроев М.П.Эпизоотологические особенности мыта у якутских лошадей// Селекция, разведение и болезни сельскохозяйственных животных в Якутии: Сб. науч. тр. / РАСХН. Сиб. отд-ние. НПО "Якутское". Якут. НИИСХ. - Новосибирск. 1993,- С. 100-103.

5. Неустроев М.П. Выживаемость мытного стрептококка во внешней среде в условиях Якутии // Сиб. вест. с.-х. науки. - 1993.-N4,- С. 54-56.

6. Неустроев М.П., Тарабукина Н.П. Режимы дезинфекции при мыте лошадей// Материалы наунчой конф., посвященной 60-летию высшей школы Якутии. - Якутск, 1994. Вып. 1,- С. 98-100.

7. Неустроев М.П., Павленко Г.И. Изучение мутагенных свойств хонгурина // Перспективы применения цеолитовых пород месторождения Хонгуруу: Сб. науч. тр. / РАН ЯНЦ. - Якутск, 1993,- С. 76-82.

8. Павленко Г.И., Неустроев М.П. Изучение эмбриотропного и тератогенного действия хонгурина // Перспективы применения цеолитовых пород месторождения Хонгуруу:Сб.науч.тр./ РАН ЯНЦ,- Якутск, 1993,- С. 82-85.

9. Неустроев М.П. Проблемы ветеринарного благополучия коневодства в Якутии // Проблемы развития сельского хозяйства в условиях вечной мерзлоты: Сб. матералов^аучнТ^"спедиции^Т1овоси~ бирск, 1993. Том 1,- С. 162.

10. Неустроев М.П. Инфекционные болезни лошадей // Проблемы развития сельского хозяйства в условиях вечной мерзлоты: Сб. материалов научной экспедиции. - Новосибирск , 1993. Том 2. -С. 188-192.

11. Неустроев М.П. Результаты изучения мыта лошадей в уело-

виях Якутии // Сельское хозяйство Республики Саха (Якутия) в условиях перехода на рыночные отношения: Материалы научн. конф.-Новосибирск, 1993,- С. 138-139.

12. Неустроев М. П. Проблемы профилактики инфекционных болезней лошадей // Пути совершенствования научного обеспечения АПК районов Крайнего Севера в условиях перехода к рыночным отношениям: Доклады Всерос.конф.- Новосибирск, 1994.- С. 152-156.

13. Неустроев М.П. Культурально-биохимические свойства мытного стрептококка // Эпизоотология и профилактика болезней животных в условиях Якутии: Сб. науч. тр. / РАСХН. Сиб. отд-ние. НПО "Якутское". Якут. НИИСХ. - Новосибирск, 1994. - С. 19-23.

14. Неустроев М.П. Вопросы профилактики и лечения мыта лошадей // Эпизоотология и профилактика болезней животных в условиях Якутии: Сб. науч. тр. / РАСХН. Сиб.отд-ние. НПО "Якутское". Якут. НИИСХ, - Новосибирск, 1994.- С. 23-28.

15. Тарабукина Н.П., Неустроев М.П. Режимы дезинфекции животноводческих помещений в условиях Якутии// Эпизоотология и профилактика болезней животных в условиях Якутии: Сб. науч. тр. / РАСХН. Сиб. отд-ние. НПО "Якутское". Якут. НИИСХ.- Новосибирск, 1994.- С. 34-37.

16. Неустроев М.П., Иванов Р.В. Меры профилактики мыта жеребят // Сиб. вестник с.-х. науки.- 1995. N 3-4.- С. 84-87.

17. Неустроев М. П. Неспецифическая профилактика мыта жеребят // Информационный листок ДНТИ. - Якутск, 1995. К 9-95.

18. Неустроев М.П., Тарабукина Н.П. Санация объектов внешней среды при мыте лошадей // Методология мероприятий по профилактике и ликвидации болезней сельскохозяйственных животных: Сб. науч.тр. / РАСХН. Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 1995,- С. 285-288.

19. Оценка естественной резистентности лошадей: Метод, рекомендации / РАСХН. Сиб. отд-ние. НПО "Якутское". Якут. НИИСХ: Состав.: М.П.Неустроев, В.И.Малышева. - Новосибирск, 1995.- 16 с.

20. Неустроев М.П. Штамм бактерий Str. equi Н-34-ДЕП, используемый для изготовления диагностических" и профилактических препаратов против мыта лошадей // Положительное решение ВНИИГПЭ на выдачу патента (13.03.1996).

21. Неустроев М.П. Метастатическая форма мыта у молодняка лошадей // Инфекционные и инвазионные болезни животных в условиях Якутии: Научн.-техн. бюлл./РАСХН. Сиб. отд-ние. НПО "Якутское". Якут. НИИСХ, - Новосибирск, 1996.- С. 18-21.

22. Неустроев М.П., Решетников И.С. Испытание препаратов из тимуса на жеребятах// Инфекционные и инвазионные болезни животных в условиях Якутии: Научн. - техн. бюлл. / РАСХН. Сиб. отд-ние. НПО "Якутское". Якут. НИИСХ.- Новосибирск, 1996. - С. 21-23.

23. Исаков С.И., Неустроев М.П., Андреев A.M. Эффективность применения ивомека при паразитарных болезнях лошадей в условиях Якутии.// Инфекционные и инвазионные болезни животных в условиях Якутии: Научн.-техн. бюлл. / РАСХН. Сиб. отд-ние. НПО "Якутское". Якут. НИИСХ. - Новосибирск, 1996.- С. 24-26.

24. Неустроев М.П., Юров К.П. Изучение безвредности инакти-вированной вакцины против мыта // Инфекционные и инвазионные болезни животных в условиях Якутии: Научн.-техн. бюлл./ РАСХН. Сиб. отд-ние. НПО "Якутское".Якут.НИИСХ.- Новосибирск, 1996,- С.26-28.

25. Профилактика и лечение мыта в табунном коневодстве: Рекомендации / РАСХН. Сиб. отд-ние. НПО "Якутское". Якут. НИИСХ; Подгот.: М. П. Неустроев. - Новосибирск, 1996.- 16 с.

26. Неустроев М. П., Ордахов И. А., Баишев A.A. Вакцина против мыта лошадей // Информационный листок ДНТИ. Серия Р. 68.41.53. -Якутск, 1996. - N 31-96.

27. Неустроев М.П., Решетников И.С. .Ордахов И. А. .Баишев A.A. Применение Т-актив'ина при мыте лошадей // Информационный листок ЦНТИ. Серия Р. 67.29.55. - Якутск, 1996.- N 27-96.

28. Неустроев М.П., Т^рабукина Н.П. Эффективность обеззараживания помета и навоза от патогенной микрофлоры методом компостирования // Биоконверсия органических отходов и охрана окружающей среда: Тез. докл. 4 Международного конгресса.- Киев, 1996. -С. 107.

29. Неустроев М.П. Эпизоотология, специфическая профилактика и меры борьбы с мытом лошадей в Якутии // Якутская экспедиция АН СССР 1925-1930 гг.и развитие науки в PC(Я): Материалы научн.конф. - Якутск. 1996. (В печати)

30. Неустроев М.П. Влияние препаратов на основе хонгурина на ^стёственную~резистентность-жеребят~/-/-Эпизоо1ология,_дтагности-

ка, меры профилактики и борьбы с болезнями животных: Сб.научн. тр. // РАСХН. Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ.- Новосибирск, 1996 (В печати).

31. Неустроев М.П.. Ордахов И. А., Кычкин A.A., Баишев А. А. Результаты производственного испытания вакцины против мыта лошадей // Эпизоотология, диагностика, меры профилактики и борьбы с болезнями животных: Сб. научн. тр.// РАСХН. Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ.-

Новосибирск, 1996 (В печати).

32. Neustroyev М.Р., Tarabukina N. P. Perspective of zeolite use in veterinary medicine // International slmposium and Exhibition on Natural Zeolites. Sofia.- Bulgaria. 1995.- P. 138-139.

33. Neustroyev M.P. The infections diseases of horses in Yakutia conditions (epizootology, prophylaxis, struggle measures)// Agriculture as a Fundament for Rural Development in Circumpolar Areas. 2-nd Circumpolar Agricultural Conference.- Tromso, Norway. 1995.- P. L 3.9.

34. Neustroyev M.P. The infections diseases of the horses of Yakut breed and their connection with environment Northern knowledge serves northern nuds // The First international conference. The Northern Forum Academy.- Yakutsk, 1996.- P. 43.