Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональное состояние органов лимфоидной системы у поросят при иммунодефиците и его фармакокоррекции селедантом

,На правах рукописи

МИХАЙЛОВ Евгений Владимирович 003054934

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ОРГАНОВ

ЛИМФОИДНОЙ СИСТЕМЫ У ПОРОСЯТ ПРИ ИММУНОДЕФИЦИТЕ И ЕГО ФАРМАКОКОРРЕКЦИИ СЕЛЕДАНТОМ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных 16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж -2007

003054934

Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии»

Научный руководители: Заслуженный деятель науки РФ, доктор

ветеринарных наук, профессор СУЛЕЙМАНОВ Сулейман Мухитдинович доктор биологических наук, профессор БЕЛЯЕВ Василий Иванович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Торгуй Петр Макарович

кандидат ветеринарных наук Бузлама Сергей Витальевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Донской государственный

аграрный университет»

Защита состоится 29 марта 2007 года в 1500 часов на заседании совета Д 220.010.05 при ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К.Д. Глинки»: 394087, г. Воронеж, ул. Мичурина, 1, тел. (4732) 53 - 71 -66.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К. Д. Глинки». Автореферат разослан года.

Ученый секретарь /

диссертационного совета ^ Хромова Л.Г.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. По официальной статистике («Эпизоотическая ситуация в мире и в Российской федерации в 20002001 гг.», Москва, 2001) в 2000 году только незаразными болезнями заболело 7526,4 тыс. поросят, что составило к приплоду 55,48%, пало 14%. Из общего количества павших свиней на долю поросят приходилось 89,9%, в том числе падёж от желудочно-кишечных болезней составил 57,5%, а от респираторной патологии - 29%.

Это связано с тем, что, как считает Шахов А.Г. (2002), незаразные болезни на фоне неблагоприятного воздействия на животных различных предрасполагающих факторов, снижающих общую неспецифическую резистентность организма, имеют инфекционную природу. Поэтому в системе ветеринарных мероприятий, направленных на повышение, общей и неспецифической резистентности организма животных необходимо применение иммуномодуляторов для предупреждения первичных иммунодефицитов, пробиотиков для борьбы с условно-патогенной микрофлорой, гипериммунных сывороток и иммуноглобулинов для повышения уровня иммунной защиты. При этом, по мнению Рецкого М.И. с соавт. (2002), одной из причин, приводящих к супрессии факторов неспецифической иммунологической резистентности организма, является накопление в организме высокоактивных продуктов свободно-радикального окисления липидов, практически всегда сопровождающее развитие стрессового состояния, проявляющееся в угнетении как факторов клеточного, так и гуморального иммунитета.

Учитывая разный иммунный фон вакцинируемых животных клонально-селекционную теорию иммунитета, возможную интерференцию между возбудителями болезней и конкуренцией между антигенами, наличие стрессовых явлений, вызывающих снижение показателей неспецифической резистентности, влекущей за собой появление вторичных (временных) иммунодефицитов, можно полагать, что различия в иммунном статусе и иммунологической реактивности животных одного пула являются закономерными, а иммунокорректоры и иммуномодуляторы специфичными для каждого антигена (Ануфриев А.И. с соавт., 2002).

Современные представления о параметрах иммунокомпетентности организма свиней в возрастном аспекте и с учетом филогенетической принадлежности носят фрагментарный характер, поэтому до сих пор не существует целостного представления об иммунном статусе животных этого вида. Чаще всего определялась возрастная динамика общего числа Т- и В-лимфоцитов и основных классов иммуноглобулинов (Анисимова Н.В., 1988; Горский Б.В., 1982; Заика Л.А., 1989; Фесенко И.Д., 1980; McCauleu I., Hartmann Р.Е., 1984). Количественный состав Т-хелперов и Т-киллеров-супрессоров изучен только у 4-6-недельных поросят (Пивовар JI.M. и Карпуть И.М., 1982), супоросных свиней (Georgieva R., 1984) и молодых животных в условиях высокогорья (Бердиев Н.Б. и др., 1990). Особенности дифференцировки Т-клеток, содержание В-лимфоцитов и иммуноглобулинов

у свиней разных пород и двухпородных помесей в онтогенезе и сравнительном аспекте не определялись вообще. Другой стороной этой проблемы является разработка методов и средств, направленной на иммуностимуляцию и иммунокоррекцию в ветеринарной медицине. Это объясняется тем, что в условиях промышленного свиноводства у животных, как правило, регистрируют низкий иммунный статус и, соответственно, восприимчивость к заболеваниям, в том числе бактериальной и вирусной природы. Одной из причин проявления вторичных иммунодефицитов у свиней любого возраста является несбалансированное кормление и издержки в технологии содержания. Наряду с этим отсутствие жесткой селекции на устойчивость к болезням и использование в воспроизводстве животных с низким уровнем функциональной активности иммунной системы приводит к наследственному закреплению признака иммунологической недостаточности и, в конечном итоге, рождению потомства с первичными иммунодефицитами (Пустовар А.Я., Гайдамака A.B., 1989).

Следовательно, разработка средств, методов и технологий, обеспечивающих высокую резистентность свиней и, соответственно, устойчивость к болезням, в том числе инфекционной природы, возможна лишь на основе знаний об особенностях формирования иммунной системы животных в разные возрастные периоды (Чекишев В.М., 1976; Федоров Ю.Н., 1981; Горский Б.В., Полуянов В.И., Юсупов Р.Х. и др., 1981; Ракова Т.Н., 1985; Смирнов П.Н. и др., 1985; Жмуров Н.Г., 1990; Прудников С.И., 1996). В этом плане необходимо и знание структурной организации органов лимфоидной системы, обеспечивающей иммунологическую резистентность независимо от конкуренции между антигенами и наличие стрессовых явлений, влекущих к развитию иммунодефицитов.

Промышленная технология выращивания животных выдвигает необходимость поиска экологически безопасных иммуномодуляторов, активизирующих поствакцинальный иммунитет и нормализующих гомеостаз животных. Для этой цели наиболее широко применяются низкомолекулярные пептиды - Т- и В-активины, тимоген (Беляев В.И. и др., 1992; Манжурина O.A., 1997; Танеева Г.М., 1998), тиосульфат натрия, препараты нуклеиновых кислот, аллогенная иммунная сыворотка, неспецифические иммуноглобулины, микроэлементы, в том числе селенсодержащие и т.п. (Шахов А.Г. и др., 1991, 1999; Артемов Б.Т. и др., 1991; Андросик H.H. и др., 1997; Гафаров Х.З. и др., 1997; Карпуть И.М. и др., 1997; Прудников С.И., 2002; Мельникова Т.Е., 2004).

Из селенсодержащих иммуностимуляторов наиболее перспективны органические соединения селена, так как они обладают высокой биодоступностью и низкой токсичности. Одним из таких препаратов является селекор (Кальницкий Б.Д., 1980; Боряев Г.И., 2000; Зубаревич J1.A., 2000; Головина И.В., 2001; Мельникова Т.Е., 2004), он же - селедант. Однако до настоящего времени недостаточно изучено структурно -функциональное состояние органов лимфоидной системы у молодняка свиней при иммунодефицитах и их фармакокоррекции селедантом.

1.2. Цели и задачи. Целью настоящей работы являлось изучение структурной организации органов лимфоидной системы у молодняка свиней при иммунодефиците и его фармакокоррекшш селедантом.

В связи с этим на разрешение были поставлены следующие задачи:

1. Изучение структурной организации органов лимфоидной системы у клинически здоровых поросят;

2. Изучение структурной организации органов лимфоидной системы у поросят при иммунодефиците;

3. Оценка фармакологических свойств селеданга при использовании его для фармакокоррекции иммунодефицитов у поросят,

4. Влияние селеданта на структурную организацию органов лимфоидной системы у поросят при иммунодефиците;

5. Определение морфологических критериев оценки структурной организации органов лимфоидной системы у поросят в норме и при иммунодефицитах.

1.3. Научная новизна. Впервые изучена клинико-морфологическая характеристика органов лимфоидной системы у поросят в норме и при иммунодефиците. Впервые выяснен патогенез иммунодефицита в лимфоидных органах у поросят на клеточном и субклеточном уровнях. Впервые изучена функциональная морфология тимуса, селезенки и лимфатических узлов у поросят при профилактике иммунодефицита селедантом и научно обоснована целесообразность его применения.

1.4. Практическая значимость и внедрение. Знание морфофункциональных особенностей тимуса, селезенки и лимфатических узлов у поросят в норме и при иммунодефиците позволяет создать научно-обоснованные меры борьбы с ним. Результаты исследований вошли в «Временное наставление по применении селеданта для сельскохозяйственных животных» (Утверждено ветеринарным отделом Воронежского областного управления сельского хозяйства 15.02.2005 года и методические рекомендации «Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантотеновой кислоты и карнитина» (Одобрены секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 03.05.2006 г., протокол № 1). Результаты исследований используются в учебном процессе и в работе научно-исследовательских учреждений.

1.5. Апробация. Материалы диссертации представлены, обсуждены и одобрены на: научных конференциях Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии (2003 - 2006 годы); международной конференции молодых ученых (Воронеж, 2006); международной конференции, посвященной 75-летию Белоцерковского ГАУ (Белая Церковь, 2006); международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора А.А. Авророва (Воронеж, 2006).

1.6. Публикация. Основные материалы по диссертации опубликованы в 9 научных трудах, в том числе в одной статье, опубликованной в журнале «Ветеринарная патология» за № 3 в 2005 году.

1.7. Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 167 странице текста компьютерного исполнения и включают введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований и их обсуждение, выводы, практические предложения и список использованной литературы, содержащий 246 источника, в том числе 70 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 11таблицами и 53 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Клинико - морфологическая характеристика иммунодефицита у поросят;

2. Функциональная морфология органов лимфоидной системы у поросят в норме и при иммунодефиците;

3. Оценка фармакологических свойств селеданта при использовании его для фармакокоррекции иммунодефицитов у поросят;

4. Влияние селеданта на морфофункциональное состояние тимуса, селезенки и лимфатических узлов при профилактике иммунодефицита у поросят.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 2003-2007 годы в отделе патологической морфологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии Российской академии сельскохозяйственных наук (ВНИВИПФиТ РАСХН) в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ГНУ «Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии» РАСХН по заданию 04 Программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК РФ (№ госрегистрации: 01.9.90001257; 01.200.117018).

Для проведения опытов поросят подбирали по принципу парных аналогов по возрасту, массе тела и интенсивности роста. Оценку адаптивных способностей и состояния здоровья поросят-отъемышей проводили по продуктивности, морфологических и биохимических показателей крови животных.

Производственные опыты проводилось в МХП «Николаевское» Аннинского района и ООО «Вишневское» Верхнехавского района Воронежской области, где на 80-90 дни супоросности одни свиноматки вакцинировались поливалентной формолвакциной против колибактериоза сельскохозяйственных животных (Колизак К-88, К99, 987Р, F41, ТЛ-ТС-анатоксины) и ассоциированной инактивированной вакциной против сальмонеллеза, пастереллеза и стрептококкоза (ППС) в комплексе с селедантом (селекором) в дозе 20 мкг/кг массы тела, а другие - без

иммуномодулятора. Через 10-12 дней иммунизацию и введение препарата повторяли.

После опороса, от свиноматок обеих групп, поросята в возрасте 3-5 дней подвергались убою. Остальные поросята по той же схеме, как синоматки, в возрасте 20-25 дней иммунизировались дважды с интервалом 10-12 дней в сочетании с препаратом селедантом в дозе 20 мкг/кг массы тела. В течение опыта за поросятами велось клиническое наблюдение. В 45-47 дневном возрасте от каждой группы по 3-4 поросенка подвергались убою.

В ООО «Вишневское» от 36 свиней в период супоросности отбирались пробы крови до введения препаратов и спустя месяц после вакцинации для цитологического исследования. Образцы окрашивали по методу Павловского, затем изучали морфологический состав периферической крови и выводили лейкоцитарные индексы: лимфоцитарно-нейтрофильный индекс (ЛНИ), лимфоцитарный индекс интоксикации Кальф-Калифа (ЛИИ,,), лимфоцитарный индекс интоксикации Кальф-Калифа модифицированный (ЛИИкм), лимфоцитарно-гранулоцитарный индекс (ИЛГ), индекс сдвига лейкоцитов (ИСЛ), индекс соотношения лейкоцитов и СОЭ (ИЛСОЭ), индекс соотношения нейтрофилов и лимфоцитов (ИСНЛ), индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов (ИСНМ), индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов (ИСЛМ), индекс соотношения лимфоцитов и эозинофилов (ИСЛЭ), ИЛСОЭ + ИЛГ (ОИ), индекс соотношения лимфоциты + моноциты и эозинофилы (ИСЛМЭ), индекс соотношения зрелых и суммы незрелых нейтрофилов (НИ) (Кальф-Калифа Я.Я., 1941; Е.А. Маринин с соавт., 1998; Жухоров Л.С. с соавт., 2002; Островский В.К. с соавт., 2003г.).

Кровь для исследований брали у поросят из хвостовых сосудов. В крови и ее сыворотке определяли содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, гематокрита, общего белка и др. В общей "сложности для проведения экспериментальных исследований было использовано 54 голов молодняка свиней, из них было убито 18 поросят.

Образцы лимфатических узлов (подчелюстные, брыжеечные), тимуса, селезенки и костного мозга фиксировались в 10-12% растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа, заливались по общепринятой методике в парафин и с парафиновых блоков готовились серийные срезы толщиной 7-9 мкм. Для изучения общей морфологической структуры органов и тканей парафиновые срезы окрашивались гематоксилин-эозином и на ДНК для подсчета суммарной митотической активности лимфоидных клеток с реактивом Шиффа по методу Фельгена и окрашивали метиловым зелёным -пиронина по Унна - Паппенгейму (выявление ДНК и РНК - метод Браше).

Фиксацию материала для электронной микроскопии проводили в 2,5 % - ном глютаровом альдегиде на 0,114 М коллидновом буфере на холоде с постфиксацией в 1 % - ном растворе тетраокси осмия на том же буфере. Осмомолярность 360 моем достигали введением во второй фиксатор 0,05 М железосинеродистого калия и раствора Рингера. Материал заключали в эпон-812. Готовились полутонкие срезы, которые окрашивались азур-2 в

сочетании фуксином основным и просматривались в световом микроскопе «Leica». Ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме Ultracut (Leica), контрастировали цитратом свинца и уранилацетатом и просматривали в электронном микроскопе ЕМ-208 (Philips).

При гисто-цитологическом анализе материала на уровне светового микроскопа в каждой из зон тимуса, лимфоузлов и селезенки подсчитывали клетки в 20-40 полях зрения. При этом учитывали клетки, имеющие отчетливые морфологические признаки лимфоцита, лимфобласта, плазмоцита, плазмобласта, ретикулярной и метотически делящихся клеток. Для подсчета количества клеток на единицу площади и их процентного соотношения использовали окулярную измерительную сетку с известной площадью (0,0114 мм2) при увеличении объектива 90 под иммерсией. Количество морфометрических измерений, необходимых для объективного определения исходной величины было установлено по формуле: Х=400*(100-м)/М (Г. Г, Автандилов и др., 1981). Оптическая плотность гистохимических реакций на срезах измеряли на цитофотометре «Люмам И-3».

С помощью окуляра-микрометра в дольках тимуса измеряли ширину и учитывали соотношение коркового и мозгового слоев, а также количество эпителиальных телец (Гассаля). В лимфатических узлах и селезенке учитывали размеры лимфоидных фолликулов. Данные по морфометрии обрабатывали с помощью морфологической программы Meta Vision 1,2.

Результаты исследований были подвергнуты статистической обработке на персональном компьютере IBM (программа Микрософт Эксель 2003).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Структурная организация органов лимфоидной системы у клинических здоровых поросят

В тимусе у поросят паренхима четко разграничивалась на корковое и мозговое вещество. В 5-ти дневном возрасте у клинически здоровых поросят тимус обладал дифинитивным анатомическим строением. В нем было дифференцировано дольчатое строение, которое состояло из одинаковой толщины слоев и содержало соответствующие клеточные элементы с плотностью 15120 ± 1511,2 n/мм2 в корковом и 13850 ± 1385,1 п/мм2 - в мозговом слоях (Таб. 1).

В центре мозгового слоя тельца Гассаля насчитывались в единицах и их размеры варьировали в пределах 50,12 ± 2,3 мкм.

В 45-ти дневном возрасте количество телец Гассаля увеличивалось и они приобретали слоистое строение.

В корковом слое тимуса увеличивалось количество зрелых электронноплотных тиммоцитов и протиммоцитов с выраженной гранулярной эндоплазматической сетью.

При этом плотность клеток тимуса достигала до 20157 ± 1923,1 n/мм2 в корковом и 19859 ±1871,4 n/мм2 - в мозговом слоях (Рис. 1).

Рис. 1. Структурная организации тимуса у клинически здоровых

поросят: а) Формирование долек тимуса; б) Клеточный состав вокруг юного тельца Гассаля, в) Тиммоциты а различной стадии дифференциации; г) Тиммоциты зрелые.

Лимфатические узлы у клинически здоровых поросят имели более темное периферическое корковое вещество и более светлое мозговое вещество посередине. Снаружи узел был покрыт соединительно-тканной капсулой, без резкой границы переходяшей в окружающую рыхлую соединительную ткань. От капсулы в глубь узла отходили трабекулы, образующие опорный каркас узла. В корковом веществе, б центре фолликула, находились бурсозависимые зоны (В-зоны) со скоплением большого количества больших и средних лимфоцитов, В пар а кортикальной зоне (Т-зоне) находилось довольно плотное диффузное скопление лимфоцитов.

В лимфатическом узле у 5-ти дневных клинически здоровых поросят формирование лимфоидных фолликулов наблюдалось в близи мозгового слоя с диаметром 113-, 19 ± !2,9 мкм и плотностью клеток до 13396=: 1334,4 ц/мм . Соотношение слоев узла находилось в пределах 39.83=; 2,81 И 21,98± 5.71 в пользу коркового (Таб. 1). В 45-ти дневном возрасте это соотношение составляло 54,83 ± 5,48 и 39,83 ± 3,9 соответственно. Плотность клеток увеличивалось до 15730 ± 1572,9 П/ММ и улучшалось ~ :> рм^^р- ¡ы:: лимфоидных клеток С10. ^

Рис, 2, Структурная организации лимфатического узла у клинически здоровых поросят: о) Формирование множества фолликулов в мозговом слое; б) Клеточный состав герминативного центра в лимфоидном фолликуле; в) Различные стадии клеточной дифференциации лимфоидной ткани узла; г)Лимфоциты и аро лимфоциты в г; ери капилляр ной зоне.

В селезенке у поросят паренхима делилась па красную и белую пульпу, находящуюся »между трабекулами. Белая пульпа, в свою очередь, представлена лимфоидными узелками, пер и артер и а ль н ы м и и макрофагально-лимфоидными муфтами. Между венозными синусоидами располагалась красная пульпа, которая состояла из ретикулярной стромы, в петлях которой находились эритроциты, лимфоциты, макрофаги,

В селезенке у 5-ти дневного клинически здорового поросенка преобладала красная пульпа и ее объем составлял 86,8 ± 0,8 % . В белой пульпе диаметр лимфоядных фолликулов составлял 71*73 ± 18.7 мкм, а плотность клеток - 8450 ± 350,4 плчлг (Таб. \), В 45-ти дневном возрасте плотность клеток в белой пульпе селезенки увеличивалось до 10459± 1046,5 п/мм!, а в ультраструктурной организации появилось единичные клетки плазматического ряда (Рис. 3).

Рис. 3. Структурная организации лимфатического узла у клинически здоровых поросят: а) Общая архитектоника стромы и паренхимы селезенки; б) Фрагмент клеток белой пульпы; в) Клетки перикистичковой артериальной зоны; г) Моноцитс-лимфоидные клетки. Таблица 1. Морфометрнческие показатели лимфоидных органов у клинически здоровых поросят

X. показатели органы Объемная доля {%} Плотность клеток п'мм3 Диаметр дольки МКМ Диаметр Размер телеи . ■ | _ | фолликулов Гаесаля мкм МКМ 1

Корковое в-во Мозговое в-во Корковое в-во Мозговое в-во

Ткмус у 5-ти дн. 1 ¡оросят 28,4+0,9 27,^2.6 15120=1345 !3850±1269 !74.3±19,4 50,15=2,3

| у 45-ти лн. поросят 37,5±2.9 20157±^$? 1 : 268Н294 \ 72,8 5 ±10.85

1 Лимфаузел у 5-ти дн. просекк!! 39.83l2.Sl 21.98±5Л7 14396-1312 13845^1¡45 - - 113,19 ±12,9 \

1 у 45-ти дн. лросенка 42.89=2,81 24.93±5.!7 18345^1736 !73УУ=1521 276.8/±2".й

Показатели хселезгнки ; Группы N. поросят Объемная доля пульпы (%) Плотность клеток в белой пу.тыге л/мм1 Диаметр фолликулов (мкм)

к Белая Красная

1. Клинически здоровый а)-5-ти дн. 13,2±0,09 8450=789 1 71,73 + 18,7

б) - 45-ти дн. 15.2-0.09. 79.8±5,8 1 10459^965 ! 83,71 ±6.2 |

В костном мозге у 45-ти дневного клинически здорового поросенка наблюдались различные стадии дифференциации клеток гемопоетического ряда, а а уяьтрасгруктуре выделялись промиелоциты, про лимфоциты, промоноциты и прозри гроб ласты (Рис. 4).

Рис. 4. Структурная организация костного мозга у клинически здоровых поросят а) Островки кроветворения на фоне крупных ади попито в,

б) Островки созревающих белых и красных кровяных клеток;

в) Промоноциты; г) Прозри гроб ласт плазматической ориентации.

3.2. Структурная организация органов лимфондной системы у поросят при иммунодефицита* В тимусе у поросят при иммунодефиците в первую очередь происходило уменьшение в размере долек тимуса. Междольксшая ткань долек тимуса во всех случаях подвергалась склерозу и липоматозу, причем у некоторых животных изменения носили более выраженный и глубокий характер. Следует отметить, что у поросят характерным изменением в тимусе, являлось уравнивание количества лимфоцитов* как в корковом, так и в мозговом веществах. Такой процесс создавал типичную картину (^звёздного неба» (равномерное распределение клеток по всей площади дольки тимуса) и являлся информативным показателем.

В тимусе у 5-ти дневных поросят при иммунодефиците наблюдались маленькие гипопластичные полиморфные дольки с диаметром 116,3 ± 10,7 мкм. В них соотношение коркового и мозгового слоев составило 19,4 ±-1,8 и 17,5 ± 1,6, а плотность клеток была низкой и составила 11130 ± 1108,3 п/мм2 и 10860 ±970,5 гУмм2 соответственно (Таб. 2).

В 45-ти дневном возрасте в тимусе поросят диаметр дольки незначительно увеличивался и составлял 238,9 = 19,4 мкм при соотношении коркового 44,8 ± 0,3 и мозгового 56,5 ± 0,9 % слоев. Плотность клеток тимуса в 45-ти дневном возрасте у иммуно дефицитных поросят незначительно возрастала и составляла 17357 ±1523,7 п/млги 15853 ± 1271,8 п/.мм2 соответственно. При этом тельца Гассаля имели не большие ядра со светлой кариоплазмой и цитоплазмой. В тиммоцитах наблюдалось развитая агранулярная эндоплазматическая сеть (Рис. 5).

Рис. 5. Структурная организации тимуса при иммунодефиците поросят: а) Полиморфной* долек разной величины; 6} Рельефность тиммоцитов в корковом слое; в) Гиперплазия клеток мозгового слоя дольки; г) Формирование клетки Гассаля.

В лимфатических узлах обнаруживали изменения, характерные как для повышенной функциональной активности, гак и для недостаточности Иммунного ответа вследствие перенапряжения органа. При этом гистологически обнаруживали истощение Т-зависимых зон различной степени выраженности. В некоторых случаях выявляли отсутствие фолликулов и делимфатизацию в корковом слое лимфатических узлов, незначительное число плазматических клеток. При исследовании лимфатических узлов, обращало на себя внимание также отсутствие четкой границы между корковым и мозговым веществом. Количество лимфоцитов в корковом веществе значительно снижалось до уровня мозгового вещества, что создавало эффект "звездного неба".

В лимфатическом узле у 5-ти дневных поросят при иммунодефиците гипоплазия и мономорфность личфоидпой ткани в корковом слос, где плотность клеток составляла !2397± 1321,4 п/.мм2. Лимфоидные фолликулы едва были заметны и в них не выявлялись герминативные центры. Корковый слой занимал 29.43 ± 2,81 %, а мозговой - ¡7,68 ± 5,7] % площади узла (Таб. 2).

У 45-ти дневных поросят при иммунодефиците □ лимфатическом узде проявлялись лимфоидкые фолликулы с диаметром 206,87 ± 76 мкм и плотность клеток 18345 ± 1639 n/MM". При этом объемная доля коркового слоя 32,19 ± 2,8 %, мозгового - 21.53 ± 5,17 %. Гипоплазия лимфоидных клеток сопровождалось с наличием в ультраструктуре лимфатического узла иктердигитирующих клеток, потерявшие способность к фагоцитозу (Рис, 6).

Рис. 6. Структурная организации лимфатического узла при иммунодефиците поросят: а) Гипоплазия лимфоидной ткани з периферическом фолликуле; б) Гипоплазия лимфоидных клеток; в) Интердигитиругоище клетки, потерявшие способность к фагоцитозу; г) Пролимфоииты.

В селезенке у поросят отмечали следующую картину: граница между белой и красной пульпой становилась стертой, белая пульпа казалась "разряженной", за счет уменьшения количества клеточных элементов, Краевой синус тоже подвергался изменениям: в нем обнаруживались участки с пустотами, связанные с уменьшением количества лимфоцитов. Лимфоидный фолликул "разрыхлялся"» в нем отмечали скопление мегакариоцитов Многие клетки подвергались деструктивным процессам,

В селезенке при иммунодефиците у 5-ти дневных поросят наблюдалось гипоплазия лимфоидных клеток как в белой пульпе, так и в переартериальной зоне, которая превалировала в лимфатическом узле и у 45-ти дневных поросят при иммунодефиците. Плотность клеток в белой пульпе селезенки при иммунодефиците поросят в 5-ти дневном возрасте 6450 ± 546 п/мм2 , г в 45-ти -10547 ± 1045 п/мм2, а диаметр фолликулов - 51,47 ± 1,87 мкм и 79,7] ± 6,2 мкм соответственно (Таб, 2). Гипоплазия лимфоидных клеток а селезенки при иммунодефиците частично компенсировалось гиперплазией ретикулярных клеток, которые превалировали в ультраструктуре органа (Рис. 7).

Рис. 7. Структурная организации селезенки при иммунодефиците поросят: а) Гипоплазия лимфоидных клеток белой пульпы; б) Гипоплазия лимфоид ной ткани в пернтрабехуляряой зоне; в) Полщюрфность клеток лимфоидной ткани: г) Ретикулярные клетки в окружении красных кровяных телец.

Таблица 2. Морф омет рические показатели лимфоидных органов у поросят

при иммунодефиците

\шкаит с.11! органы X Объемная доля (Щ Плотность клеток п'мм5 Диаметр дольки мкм Диаметр телец Гасеаля к км Размер фолликулов мкм

Корковое л-во Мозговое в-во Корковое ; Мозговое 11-110 11-во

Тимус у 5-ти дк. поросят П,5±2,6 15130*967 ! 10860=965 г 1 116,3+9,4 40,15+2,3 -

у 45-т и дн. ] ¡оросят ] 44,8,±0.9 56,5x2,9 17357^1578 !5853=1469 238,9±9,4 52,85^:8.5

Лимфоузел 1 у 5-ти ли. просенка Г. 1 1 у 45-ти лн, ! просенка 29,43^=2,8! 17.68.5,17 12397=)102 11845±965 -

32,'.9±2,81 21,53±5,17 Ш45*!639 17399=1632 206.87±76

Показатели х.селезенки Группы"" поросят \ Объемная доля пульпы (%) —г -| Белая | Красная Плотность клеток в белой пульпе п'мм2 Диаметр фолликулов (мкм)

З.иммунодефииит а) -5-ти ли. 2,2 ±0,05 6450^546 5[,74 ± (.87 1

б) - 45-ти ди 3.2+0,09 97,8+7,4 10547*1045 79,71+6,2

В костном мозге у 45-ти дневных поросят при иммунодефиците гипоплазия клеток гемопоетичес кого ряда сопровождалось увеличением объема и количества мегекариоб ластов с соответствующей ультраструктурной их организацией (Рис. 8).

Рис.8. Структурная организации костного мозга при иммунодефиците поросят; а) Гипоплазия клеток гемопоетического ряда; б) Гипоплазия нромиелобластов; в) Пролимфоциты и промоноциты; г) Клетки проэритробластического ряда.

3.3. Оценка фармакологических свойств селедантв при использовании его для фармакокоррекции иммунодефицитюв у поросят

Изучение основных гематологических показателей сыворотки крови поросят показало, что поросята, матери которых получали селекор рождались, при сравнении с животными контрольной группы, с более высоким уровнем гемоглобина (на 10,08%) при незначительной разнице в содержании эритроцитов между группами, что указывает на лучшее обеспечение кислородом органов и тканей новорожденных животных из опытной группы. Количеств^ лейкоцитоз из протяжении опыта у породят постепенно увеличивалось, но в опытной группе - это увеличение было более заметное и разница между группами составляла - при рождении - 6,57%, в 3-5 дней -8,26%.

Применение селекора не влияло на активность трансфера! и щелочной фосфатазы 55-60дневных поросят. Коэффициент де Ритиса в обеих группах был одинаков. Содержание и про вин оградной кислоты в сыворотке крови опытных поросят было на 4,96% больше, чем у контрольных.

Содержание глюкозы, общих липидов и холестерина в крови поросят опытной группы не отличались существенно от такового у поросят контрольной группы. Стимуляция АОЗ организма свиноматок, посредством Применения селекора ограничила чрезмерную активацию процессов пероксидации липидов в организме их потомства. Введение селекора свиноматкам способствовало повышению уровня фосфора у поросят.

В опытной группе этот показатель был на 2,9 % выше, чем в контрольной, а следовательно и выше процессы окислительного фосфорилирования, связанные с интенсивным ростом животных.

При фармакокоррекции введение селекора (селеданта) в дозе 20мкг/кг дважды в дозе с интервалом 10-12 дней свиноматкам на 80-90 дни супоросности и поросятам в 20-25 дневном возрасте способствовало:

- повышению уровня и продолжительности колострального иммунитета у поросят. При этом гаммаглобулиновая фракция в крови поросят составляла 10,50 ± 0,80 % против 8,70 ± 0,80 % в контроле;

- улучшению микроэлементной обеспеченности поросят медью 12,9 %, марганца на 10,9 %, железом на 17,4 % и магнием на 8,9 %, что обеспечивало боле выраженную ферментативную активность и уровень протекания окислительно - восстановительных процессов у поросят;

- нормализацию процессов перекисного окисления липидов, фосфорно-кальциевого соотношения, а также уменьшению в сыворотки крови мочевины на 7 % - снижению катоболических процессов у поросят.

При этом введение селекора (селеданта) свиноматкам и поросятам по той же схеме способствовало улучшению неспецифической иммунологической реактивности организма свиноматок и поросят в виде лейкоцитарных индексов. В частности, у свиноматок ИЛН увеличился на 190%, ЛИИК увеличился на 175%, ЛИИКЧ увеличился на 40%, ИЛГ увеличился на 86,3%, ИЛСОЭ увеличился на 85,6%, ИСНЛ увеличился на 93,5%, ИСЛЭ увеличился на 162%, ОИ на 85,8%, ИСЛМЭ на 136% и НИ на 165%, а у поросят -ЛИИК увеличился на 181 %, ЛИИКМ увеличился на 39%, ИЛГ увеличился на 80,3%, ИСНЛ увеличился на 89,8%, ИСЛЭ увеличился на 161%, ИСЛМЭ на 129% и НИ на 161%, что расширило возможности получения информации о состоянии неспецифической иммунологической реактивности организма животных вообще и при применении препаратов в частности.

Кроме того, при профилактике иммунодефицита селедантом у поросят в лимфоидных органах улучшалось:

- митотическая активность лимфоидных клеток в тимусе составляла 52,35 ±3,61 е.о.п. х 102 против 44,4 ± 0,81 е.о.п, х 102, в лимфатическом узле -65,45 ± 5,51 е.о.п. х 102 против 43,67 ± 1,13 е.о.п. х 102 в контролен в селезенке-51,34± 2,86е.о.п. х 102 против 48,71 ± 0,91 е.о.п. х 102 в контроле;

- оптическая плотность РНК в тимусе составила 80,32 ± 2,80 е.о.п. х 102 против 76,71 ± 1,29 е.о.п. х 102 в контроле, в лимфатическом узле - 51,5 ± 7,18 е.о.п. х 102 против 48,18 ± 0,62 е.о.п. х 102 в контроле и в селезенке -74,07 ± 2,81 е.о.п. х 102 против 56,03 ± 0,67 е.о.п. х 102 в контроле.

Следовательно, введение свиноматкам в последний период супоросности селекора на фоне вакцинации против сальмонеллеза и колибактериоза положительно влияло и на уровень резистентности у полученных от них поросят, что нашло отражение в динамике биохимических процессов.

ЗЛВлияние селеданта на структурную организацию органов л им фонд ной системы у поросят при иммунодефиците Тимус, В структурной организации тимуса у 5-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селекором наблюдалось насыщение паренхимы тиммоидкыми клетками, увеличение телец Гассаля и гиперплазия лимфоидной ткани. Объемная доля коркового слоя составила 41 ±1,8 %, мозгового — 38.4 ^ 1,8 %, а плотность клеток - 15485 ± ¡412 п/ммг и 14143 ± 1345 пУмм2 соответственно (Та5, 3).

У 45-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селедантом в тимусе значительно увеличивалось объемная доля коркового слоя и составила 54,9= 5.! % против 35,7 ±6,2 % в мозговом слое при плотности клеток - 25589 ± 2498 п/мм2 и 23843 ± 2236 п/мм2 соответственно. Гиперплазия лимфоидной ткани в ультратонких срезах проявлялась увеличением количества тиммоцитов и проплазмоцитов с мембран гранулярной эндоплазматической сети (Рис. 9). _

Рис.9, Структурная организации тимуса при профилактики иммунодефицита у поросят селекором (селедантом): я) Гипертрофия коркового слоя дольки; б) Очаговая гиперплазия гиперхромных клеток в мозговом слое дольки; в) Гиперплазия Т-лимфоцитов; г) Активизация протиммошттов.

Лимфатический узел. В структурной организации Лимфатических узлов у 5-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селекором наблюдалось гиперплазия лимфоидной ткани в корковом слое с развитием вторичных фолликулов в пер им о з го во м слое с диаметром 139,15 ± 58 мкм. Увеличивалось объемная доля коркового слоя до 43,43 ± 2,05 % против 25,7 1 4,12 % в мозговом, а плотность клеток в этих слоях составила 14396 =■= 1254 п/мм2 и 13845 ± 1147 п/мм2 соответственно (Таб. 3).

У 45-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селедантом в лимфатическом узле гипертрофировался корковый слой с соответствующей гиперплазией лимфоидных клеток и образованием множественных вторичных лимфоидных фолликулов в перимозговом слое. Диаметр их увеличивался до 387,73 = 52,3 мкм. Объемная доля коркового слоя составляла 54,83 ± 2,02 % против 20,76 = 4,12 % в мозговом, а плотность клеток в них составила 23747 - 2271 п/мм3 и 22832 ± 2065 п/мм3 соответственно. В герминативных центрах наблюдалось гиперплазия

пролимфоцитов, в ультраструктуре которых электронноплотные ядра сочетались с наличием митохондрий и а гранулярной эндоплазм ати ческой сети в цитоплазме (Рис. 10).

Рис.10. Структурная организации лимфатического узла при профилактики

иммунодефицита у поросят селекором (селедактом): а) Образование крупных лимфоидных фолликулов в перимозговом слое; 6) Гиперплазия лимфоидных клеток в герминативном центре фолликула; в) Гиперплазия пролимфоцитов в герментативном центре фолликула; г)Дифференциация клеток герментативного центра фолликула.

Селезенка, В структурной организации селезенки у 5-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селекором наблюдалось гиперплазия лимфоидной ткани в белой пульпе и периартериально й зоне с плотностью клеток 11743 ± ] 098 п/мм- (Таб. 3).

В 45-ти дневном возрасте поросят при профилактике иммунодефицита селедантом в селезенке гиперплазия лимфоидной ткани принимала диффузный характер, а плотность клеток в белой пульпе увеличивалось до 15749 ± 1561 п/мм2. Увеличивалось количество пролимфоцитов и маргинальной зоне, а электронномякроскопически увеличивалось количество

Рис. 11. Структурная организации селезенки при профилактики иммунодефицита у поросят селекором (селедантом):

а) Гиперплазия ретикулярных клеток в перитрабекулярной зоне;

б) Шаровидное скопление лимфоидной ткани в адвентиции артерий;

в) Лимфоидные клетки маргинальной зоны; г) Гранулярная эндоплазматическая сеть в пролимфобласте.

Таблица 3. Морфометрические показатели лимфоидных органов у поросят при профилактике селекором (селедантом)

\показатели органы х. Объемная доля (%) Плотность клеток п/мм2 Диаметр дольки мкм Диаметр телец Гассаля мкм Размер фолли кулов мкм

Корковое в-во Мозговое в-во Корковое в-во Мозговое в-во

Тимус у 5-ти дн поросят 41+1,8* 38,4±1,В* 15485*1412 14143±1345 221,1±10,1* 59,31+6,4 -

у 45-ти дн. поросят 54,9±5,1 * 46,7+6,2 * 25589+2498 23843±2236 456,08±42,9* 85.35±10,05 -

Лимфаузел у 5-ти дн. просенка 43,43+2,05 25,70+4,12 14396±1254 13845±1147 - - 139,15+ 58,

у 45-ти дн. просенка 54,83±2,05 20,76±4,12 23747±2271 22832±2065 - 387,73± 52,3

Показатели \хелезенки ГруплыХ. поросят Объемная доля пульпы (%) Плотность клеток в белой пульпе п/мм2 Диаметр фолликулов (мкм)

Белая Красная

3.селекор -5-ти дн. 19,6±0,95 80,4±3,6 11743±1098 176,84 ±32

4.селедант -45-ти дн. 2б,3±0,95 72,5±4,4 15749±1561 196,74±5,1

В костном мозге у 45-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селедантом гиперплазировались гранулобласты, мегакариобласты и клетки гемопоетического ряда. В ультраструктуре костного мозга доминировало наличие пролимфоцитов, поромоноцитов и проплазмоцитов (Рис. 12.).

Рис.12. Структурная организации костного мозга при профилактики иммунодефицита у поросят селедантом; а) Мег а к ар иоб даст в окружении ретикулобластов и клеток миелоИДНого ряда;

б) Мегакар иоб ласт в гуще миелоидкого кроветворения;

в) Скопление пролимфоцитов и промоноцитов; г) Проплазмоциты с развитой цитоплазмой.

4. ВЫВОДЫ

1. В 5-ти дневном возрасте у клинически здоровых поросят тимус обладал дйфинйтивным анатомическим строением. В нем было дифференцировано дольчатое строение, которое состояло из одинаковой толщены слоев и содержало соответствующие клеточные элементы с плотностью ] 5120 ± 1511,2 п/мм2 вкорковомй 13850 ± 5 335.1 п/мм2-в мозговом слоях. Тельца Гассаля насчитывались в единицах и их размеры варьировали в пределах 50,12 ± 2,3 мкм. В 45-ти дневном возрасте количество телец Гассаля увеличивалось и они приобретали слоистое строение. В корковом слое увеличивалось количество зрелых электрон но плотных тиммоцитов и протиммоцитов с выраженной гранулярной эндоплазматической сетью. При этом плотность клеток достигала до 20157 ± 1923,1 П/ММ2 в корковом и 19859 ± 1871*4 п/мм2 - в мозговом слоях,

2. В лимфатическом узле у 5-ти дневных клинически здоровых поросят формирование лимфоидных фолликулов наблюдалось в близи мозгового слоя с диаметром 113,19 ± 12,9 мкм и плотностью клеток до !3396± 1334,4 л/мм2, Соотношение слоев узла находилось в пределах 39,83= 2,81 и 21,98+ 5,71 в пользу коркового. В 45-ти дневном возрасте это соотношение составляло 54,83 ± 5,48 и 39.83 3,9 соответственно. Плотность клеток увеличивалось до ¡5730^ 1572,9 п/мм2 и улучшалось ультраструвйурная организация лимфоидных клеток.

З.В селезенке у 5-ти дневного клинически здорового поросенка преобладала красная пульпа и ее объем составлял 86,8 ± 0,8 % . В белой пульпе диаметр лимфоидных фолликулов составлял 71.73 ± 18,7 мкм. а

плотность клеток - 8450 ± 850,4 n/мм2. В 45-ти дневном возрасте плотность клеток в белой пульпе селезенки увеличивалось до 10459 ± 1046,5 n/мм2, а в ультраструктурной организации появилось единичные клетки плазматического ряда.

4. В костном мозге у 45-ти дневного клинически здорового поросенка наблюдались различные стадии дифференциации клеток гемопоетического ряда, а в ультраструктуре выделялись промиелоциты, пролимфоциты, промоноциты и проэритробласты.

5. В тимусе у 5-ти дневных поросят при иммунодефиците наблюдались маленькие гипопластичные полиморфные дольки с диаметром 116,3 ± 10,7 мкм. В них соотношение коркового и мозгового слоев составило 19,4 ± 1,8 и 17,5 ± 1,6, а плотность клеток была низкой и составила 11130 ± 1108,3 п/мм2 и 10860 ± 970,5 n/мм2 соответственно. В 45-ти дневном возрасте в тимусе поросят диаметр дольки незначительно увеличивался и составлял 238,9 ± 19,4 мкм при соотношении коркового 44,8 ± 0,3 и мозгового 56,5 ± 0,9 % слоев. Плотность клеток тимуса в 45-ти дневном возрасте у иммунодефицитных поросят незначительно возрастала и составляла 17357 ± 1521,7 П/ММ2 и 15853 ± 1271,8 n/мм2 соответственно. При этом тельца Гассаля имели не большие ядра со светлой кариоплазмой и цитоплазмой. В тиммоцитах наблюдалось развитая агранулярная эндоплазматическая сеть.

6. В лимфатическом узле у 5-ти дневных поросят при иммунодефиците гипоплазия и мономорфность лимфоидной ткани в корковом слое, где плотность клеток составляла 12397± 1321,4 n/мм2. Лимфоидные фолликулы едва были заметны и в них не выявлялись герминативные центры. Корковый слой занимал 29,43 ± 2,81 %, а мозговой - 17,68 ± 5,71 % площади узла. У 45-ти дневных поросят при иммунодефиците в лимфатическом узле проявлялись лимфоидные фолликулы с диаметром 206,87 ± 76 мкм и плотность клеток 18345 ± 1639 n/мм2. При этом объемная доля коркового слоя 32,19 ± 2,8 %, мозгового - 21,53 ± 5,17 %. Гипоплазия лимфоидных клеток сопровождалось с наличием в ультраструктуре лимфатического узла интердигитирующих клеток, потерявшие способность к фагоцитозу.

7. В селезенке при иммунодефиците у 5-ти дневных поросят наблюдалось гипоплазия лимфоидных клеток как в белой пульпе, так и в переартериальной зоне, которая превалировала в лимфатическом узле и у 45-ти дневных поросят при иммунодефиците. Плотность клеток в белой пульпе селезенки при иммунодефиците поросят в 5-ти дневном возрасте 6450 ± 546 n/MM2, а в 45-ти -10547 ± 1045 n/мм2, а диаметр фолликулов - 51,47 ± 1,87 мкм и 79,71 ± 6,2 мкм соответственно. Гипоплазия лимфоидных клеток в селезенки при иммунодефиците частично компенсировалось гиперплазией ретикулярных клеток, которые превалировали в ультраструктуре органа.

. 8. В костном мозге у 45-ти дневных поросят при иммунодефиците гипоплазия, клеток гемопоетического ряда сопровождалось увеличением объема и количества мегакариобластов с соответствующей ультраструктурной их организацией.

9. При фармакокоррекции введение селекора (селеданта) в дозе 20мкг/кг дважды в дозе с интервалом 10-12 дней свиноматкам на 80-90 дни супоросности и поросятам в 20-25 дневном возрасте способствовало:

- повышению уровня и продолжительности колострального иммунитета у поросят. При этом гаммаглобулиновая фракция в крови поросят составляла 10,50 ± 0,80 % против 8,70 ± 0,80 % в контроле;

- улучшению микроэлементной обеспеченности поросят медью 12,9 %, марганца на 10,9 %, железом на 17,4 % и магнием на 8,9 %, что обеспечивало боле выраженную ферментативную активность и уровень протекания окислительно - восстановительных процессов у поросят;

- нормализацию процессов перекисного окисления липидов, фосфорно-кальциевого соотношения, а также уменьшению в сыворотки крови мочевины на 7 % - снижению катоболических процессов у поросят.

10. Введение селекора (селеданта) свиноматкам и поросятам по той же схеме способствовало улучшению неспецифической иммунологической реактивности организма свиноматок и поросят в виде лейкоцитарных индексов. В частности у свиноматок ИЛН увеличился на 190%, ЛИИК увеличился на 175%, ЛИИКМ увеличился на 40%, ИЛГ увеличился на 86,3%, ИЛСОЭ увеличился на 85,6%, ИСНЛ увеличился на 93,5%, ИСЛЭ увеличился на 162%, ОИ на 85,8%, ИСЛМЭ на 136% и НИ на 165%, а у поросят ЛИИК увеличился на 181%, ЛИИШ увеличился на 39%, ИЛГ увеличился на 80,3%, ИСНЛ увеличился на 89,8%, ИСЛЭ увеличился на 161%, ИСЛМЭ на 129% и НИ на 161%, что расширило возможности получения информации о состоянии неспецифической иммунологической реактивности организма животных вообще и при применении препаратов в частности.

11. При профилактике иммунодефицита селедантом у поросят в лимфоидных органах улучшалось:

- Митотическая активность лимфоидных клеток в тимусе составляла 52,35 ± 3,61 е.о.п. х 102 против 44,4 ± 0,81 е.о.п. х 102, в лимфатическом узле -65,45 ± 5,51 е.о.п. х 102 против 43,67 ±1,13 е.о.п. хЮ2 в контроле и в селезенке - 51,34 ± 2,86 е.о.п. х 102 против 48,71 ± 0,91 е.о.п. х 102 в контроле;

> - Оптическая плотность РНК в тимусе составила 80,32 ± 2,80 е.о.п. х 102 против 76,71 ± 1,29 е.о.п. х 102 в контроле, в лимфатическом узле - 51,5 ± 7,1§ е.о.п. х 102 против 48,18 ± 0,62 е.о.п. х 102 в контроле и в селезенке -74,07 ± 2,81 е.о.п. х 102 против 56,03 ± 0,67 е.о.п. х 102 в контроле.

12. В структурной организации тимуса у 5-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селекором наблюдалось насыщение паренхимы тиммоидными клетками, увеличение телец Гассаля и гиперплазия лимфоидной ткани. Объемная доля коркового слоя составила 41 ± 1,8 %, мозгового - 38,4 ± 1,8 %, а плотность клеток - 15485 ± 1412 п/мм2 и 14143 ± 1345 п/мм2 соответственно. У 45-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селедантом в тимусе значительно увеличивалось объемная доля коркового слоя и составила 54,9 ± 5,1 % против 35,7 ± 6,2 % в мозговом слое при плотности клеток - 25589 ± 2498 п/мм2 и 23843 ± 2236 п/мм2 соответственно. Гиперплазия лимфоидной ткани в ультратонких срезах проявлялась увеличением количества тиммоцитов и проплазмоцитов с мембран гранулярной эндоплазматической сети.

13. В структурной организации лимфатических узлов у 5-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селекором наблюдалось гиперплазия лимфоидной ткани в корковом слое с развитием вторичных фолликулов в перимозговом слое с диаметром 139,15 ±58 мкм. Увеличивалось объемная доля коркового слоя до 43,43 ± 2,05 % против 25,7 ± 4,12 % в мозговом, а плотность клеток в этих слоях составила 14396 ± 1254 п/мм2 и 13845 ± 1147 п/мм2 соответственно. У 45-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селедантом в лимфатическом узле гипертрофировался корковый слой с соответствующей гиперплазией лимфоидных клеток и образованием множественных вторичных лимфоидных фолликулов в перимозговом слое. Диаметр их увеличивался до 387,73 ± 52,3 мкм. Объемная доля коркового слоя составляла 54,83 ± 2,02 % против 20,76 ± 4,12 % в мозговом, а плотность клеток в них составила 23747 ± 2271 п/мм2 и 22832 ± 2065 п/мм2 соответственно. В герминативных центрах наблюдалось гиперплазия пролимфоцитов, в ультраструктуре которых электронноплотные ядра сочетались с наличием митохондрий и агранулярной эндоплазматической сети в цитоплазме.

14. В структурной организации селезенки у 5-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селекором наблюдалось гиперплазия лимфоидной ткани в белой пульпе и периартериальной зоне с плотностью клеток 11743 ± 1098 п/мм2. В 45-ти дневном возрасте поросят при профилактике иммунодефицита селедантом в селезенке гиперплазия лимфоидной ткани принимала диффузный характер, а плотность клеток в белой пульпе увеличивалось до 15749 ±1561 п/мм2. Увеличивалось количество пролимфоцитов в маргинальной зоне, а

электронномикроскопически увеличивалось количество макрофагальных, моноцитарных и плазматических клеток.

15. В костном мозге у 45-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селедантом гиперплазировались гранулобласты,

мегакариобласты и клетки гемопоетического ряда. В ультраструктуре костного мозга доминировало наличие пролимфоцитов, поромоноцитов и проплазмоцитов.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты исследований вошли в «Временное наставление по применении селеданта для сельскохозяйственных животных» (Утверждено ветеринарным отделом Воронежского областного управления сельского хозяйства 15.02.2005 года и методические рекомендации «Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантотеновой кислоты и карнитина» (Одобрены секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 03.05.2006 г., протокол № 1).

2. Для профилактики иммунодефицита у поросят селедант следует применять в дозе 20 мкг/кг дважды свиноматкам на 80-90 дни супоросности и поросятам в возрасте 20-25 дней с интервалом 10-12 дней.

3. Результаты исследований могут быть использованы в учебном процессе и в работе научно-исследовательских учреждений.

1. Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Сулейманов С.М. Роль антиаксидантного статуса в структурной организации лимфоидной ткани молодняка животных / С.М. Сулейманов, Е.В.Михайлов, Ю.В.Шапошнокова, А.В.Гребенщиков // Мат. конференции «Свободные радикалы, антиаксиданты и здоровье животных».- Воронеж: ВГУ, 2004 С.313-315.

2. Морфология органов лимфоидной и пищеварительной системы у молодняка животных при коррекции иммунного статуса / С.М.Сулейманов, В.С.Слободяник, П.А. Паршин, Е.В.Михайлов, и др. //Международный научно-практический журнал по фундаментальным и прикладным вопросам ветеринарии Ветеринарная Патология. № 3(14)-М;, 2005,-С. 75-80.

3. Интегральные показатели лейкограммы периферической крови коров в оценке неспецифической иммунологической реактивности при введении препарата лигфол/ Е.В.Михайлов, Ю.В.Шапошникова, Г.Л. Асоян, A.B. Гребенщиков, и др.// Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактике болезней животных. Первая международная научно-практическая конференция молодых ученых,- Воронеж, 2006.- С. 96-98.

4. Морфофункциональные изменения в печени у новорожденных поросят при применении селеданта/ В.В. Сафонов, С.М. Сулейманов, В.В. Авдеев, Е.В.Михайлов, и др. //Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактике болезней животных. Первая международная научно-практическая конференция молодых ученых.-Воронеж, 2006.- С. 32-33.

5. Сулейманов С.М. Возрастная морфология и нммунокоррекция тимуса у поросят лигфолом и селедантом /С.М.Сулейманов, Г.Л. Асоян, Е.В.Михайлов // Вестник Белоцерковского Аграрного Университета.- 2006,-Вып. 39.- С. 207-212.

6. Михайлов Е.В. Влияние селеданта на функциональную морфологию лимфоидной системы поросят/ Е.В.Михайлов // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных» посвященная 100-летию со дня рождения профессора Авророва А.А: Сб. науч.тр,- Воронеж, 2006.-С.166-168.

7. Влияние лигфола и лигавирина на размеры ядер гепатоцитов поросят / В.В. Авдеев, Г.Л. Асоян, A.B. Гребенщиков, Е.В. Михайлов, и др.// Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактике болезней животных. Первая международная научно-практическая конференция молодых ученых,- Воронеж, 2006,- С.7-10.

8. Влияние иммуномодулятора лигфола на структурную организацию лимфатических узлов у поросят/ Г.Л. Асоян, В.В. Авдеев, A.B. Гребенщиков, Е.В. Михайлов, и др.// Актуа льные проблемы диагностики, терапии и профилактике болезней животных. Первая международная научно-практическая конференция молодых ученых.- Воронеж, 2006.- С. 15-17.

9. Методические рекомендации: / Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантотеновои кислоты и карнитина. // СМ. Сулейманов, B.C. Слободяник,..., Е.В. Михайлов, и др. Воронеж - 2006.

Отпечатано в типографии ФГУ «Воронежский ЦНТИ» 394730, г. Воронеж, пр. Революции, 30

Бумага офсетная Ризография Формат 60x84 1/16 Усл. п.л. 1,45 Тираж 100 экз. Заказ 2702

1.1. Актуальность темы. По официальной статистике («Эпизоотическая ситуация в мире и в Российской федерации в 2000-2001 гг», Москва, 2001) в 2000 году только незаразными болезнями заболело 7526,4 Iыс поросят, что составило к приплоду 55,48%, пало 14%. Из общего количества павших свиней на долю поросят приходилось 89,9%, в том числе падёж от желудочно-кишечных болезней составил 57,5%, а от респираторныхпатологии - 29%.

Это связано с тем, что, как счшает Шахов А.Г. (2002), незаразные болезни на фоне неблагоприятного воздействия на животных различных предрасполагающих факторов, снижающих общую неспецифическую резистентность организма, имеют инфекционную природу. Поэтому в системе ветеринарных мероприятий, направленных на повышение общей и неспецифической резистентности организма животных необходимо применение иммуномодуляторов для предупреждения первичных иммунодефиците, пробиотиков для борьбы с условно-патогенной микрофлорой, гипериммунных сывороток и иммуноглобулинов для повышения уровня иммунной защиты. При этом, по мнению Рецкого М.И. с соавт. (2002), одной из причин, приводящих к супрессии факторов неспецифической иммунологичоской резистентности организма, является накопление в организме высокоактивных продуктов свободно-радикального окисления липидов, практически всегда сопровождающее развитие стрессового состояния, проявляющееся в угнетении как факторов клеточного, так и гуморального иммунитета.

Учитывая разный иммунный фон вакцинируемых животных клонально-селекционн>ю теорию иммунитета, возможную интерференцию между возбудителями болезней и конкуренцией между антигенами, наличие стрессовых явлений, вызывающих снижение показателей неспецифической резистентности, влекущей за собой появление вторичных (временных) иммунодефицитов, можно полагать, что различия в иммунном статусе и иммунологической реактивности животных одного пула являю!ся закономерными, а иммунокорректоры и иммуномодуляторы специфичными для каждою антигена (Ануфриев А.И. с соавт., 2002).

Современные представления о параметрах иммунокомпетентности организма свиней в возрааном аспекте и с учетом филогенетической принадлежности носят фра1 ментарный характер, поэтому до сих пор не существует целостного представления об иммунном статусе животных этого вида. Чаще всего определялась возрастная динамика общего числа Ти В-лимфоцитов и основных классов иммуноглобулинов (Анисимова Н.В., 1988; Горский Б.В., 1982; Заика Л.А., 1989; Фесенко И.Д., 1980; McCauleu I., Hartmann Р.Е., 1984). Количественный состав Т-хелперов и Т-киллеров-супрессоров изучен только у 4-6-недельных поросят (Пивовар Л.М. и Kapn>ib И.М., 1982), супоросных свиней (Georgieva R., 1984) и молодых животных в условиях высокогорья (Бердиев Н.Б. и др., 1990). Особенности дифференцировки Т-клеток, содержание В-лимфоцитов и иммуноглобулинов у свиней разных пород и двухпородных помесей в онтогенезе и сравнительном аспекте не определялись вообще. Другой стороной этой проблемы является разработка методов и средств, направленной на иммуностимуляцию и иммунокоррекцию в ветеринарной медицине. Это объясняется тем, что в условиях промышленною свиноводства у животных, как правило, регистрируют низкий иммунный статус и, соответственно, восприимчивость к заболеваниям, в том числе бактериальной и вирусной природы. Одной из причин проявления вторичных иммунодефицитов у свиней любого возраста является несбалансированное кормление и издержки в технологии содержания. Наряду с этим отсутствие жесткой селекции на устойчивость к болезням и использование в воспроизводстве животных с низким уровнем функциональной активности иммунной системы приводит к наследственному закреплению признака иммунологической недостаточности и, в конечном итоге, рождению потомства с первичными иммунодефицитами (Пустовар А.Я., Гайдамака А.В., 1989).

Следова!ельно, разрабо!ка средств, методов и технологий, обеспечивающих высокую резистентность свиней и, соответственно, устойчивость к болезням, в том числе инфекционной природы, возможна лишь на основе знаний об особенностях формирования иммунной системы животных в разные возрастные периоды (Чекишев В.М., 1976; Федоров Ю.Н., 1981; Горский Б.В., Полуянов В.И., Юсупов Р.Х. и др., 1981; Ракова Т.Н., 1985; Смирнов П.Н. и др., 1985; Жмуров Н.Г., 1990; Прудников С.И., 1996). В этом плане необходимо и знание структурной организации органов лимфоидной сис1емы, обеспечивающей иммунологическую резистентность независимо от конкуренции между антигенами и наличие стрессовых явлений, влекущих к развитию иммунодефицитов.

Промышленная технология выращивания животных выдвигает необходимость поиска экологически безопасных иммуномодуляторов, активизирующих поствакцинальный иммунитет и нормализующих гомеостаз животных. Для этой цели наиболее широко применяются низкомолекулярные пептиды -1-й В-активины, тимоген (Беляев В.И. и др., 1992; Манжурина О.А., 1997; Танеева Г.М., 1998), тиосульфат натрия, препараты нуклеиновых кислот, аллогенная иммунная сыворотка, неспецифические иммунолобулины, микроэлементы, в том числе селенсодержащие и т.п. (Шахов А.Г. и др., 1991, 1999; Артемов Б.Т. и др., 1991; Андросик Н.Н. и др., 1997; Гафаров Х.З. и др., 1997; Карпуть И.М. и др., 1997; Прудников С.И., 2002; Мельникова Т.Е., 2004).

Из селенсодержащих иммуностимуляторов наиболее перспективны органические соединения селена, 1ак как они обладают высокой биодоступносгью и низкой токсичности. Одним из таких препаратов является селекор (Кальницкий Б.Д., 1980; Боряев Г.И., 2000; Зубаревич Л.А., 2000; Головина И.В., 2001; Мельникова Т.Е., 2004), он же - селедант. Однако до настоящего времени недостаточно изучено структурно - функциональное состояние органов лимфоидной системы у молодняка свиней при иммунодефицитах и их фармакокоррекции селедантом.

1.2. Цели и задачи. Целью насюящей работы являлось изучение структурной организации ор!анов лимфоидной системы у молодняка свиней при иммунодефиците и его фармакокоррекции селеданюм.

В связи с этим на разрешение были поставлены следующие задачи:

1.Изучение структурной организации органов лимфоидной системы у клинически здоровых поросят;

2. Изучение структурной организации органов лимфоидной системы у поросят при иммунодефиците;

3. Оценка фармакологических свойств селедапга при использовании его для фармакокоррекции иммунодефициюву поросят;

4. Влияние селеданта на сгрукгурную организацию органов лимфоидной системы у поросят при иммунодефиците;

5. Определение морфолопических критериев оценки структурной организации органов лимфоидной системы у поросят в норме и при иммунодефицитах.

1.3. Научная новизна. Впервые изучена клинико-морфологическая характеристика органов лимфоидной системы у поросят в норме и при иммунодефиците. Впервые выяснен патогенез иммунодефицита в лимфоидных органах у поросят на клеточном и субклеточном уровнях. Впервые изучена функциональная морфология тимуса, селезенки и лимфатических узлов у поросят при профилактике иммунодефицита селедангом и научно обоснована целесообразность его применения.

5. ВЫВОДЫ

1. В 5-ти дневном возрасте у клинически здоровых поросят тимус обладал дефинитивным анатомическим строением. В нем было дифференцировано дольчатое строение, которое состояло из одинаковой толщины слоев и содержало соответствующие клеточные элементы с плотностью 15120 ± 1511,2 n/мм2 в корковом и 13850 ± 1385,1 п/мм2 - в мозговом слоях. Тельца Гассаля насчитывались в единицах и их размеры варьировали в пределах 50,12 ± 2,3 мкм. В 45-ти дневном возрасте количество телец Гассаля увеличивалось и они приобретали слоистое строение. В корковом слое увеличивалось количество зрелых электронно-плотных тиммоцитов и протиммоцитов с выраженной гранулярной эндоплазматической сетью. При этом плотность клеток достигала до 20157 ± 1923,1 n/мм2 в корковом и 19859 ± 1871,4 п/мм2 - в мозговом слоях.

2. В лимфатическом узле у 5-ти дневных клинически здоровых поросят формирование лимфоидных фолликулов наблюдалось в близи мозгового слоя с диаметром 113,19 ± 12,9 мкм и плотностью клеток до 13396± 1334,4 п/мм2 . Соотношение слоев узла находилось в пределах 39,83± 2,81% и 21,98± 5,71% в пользу коркового. В 45-ти дневном возрасте это соотношение составляло 54,83 ± 5,48 и 39,83 ±3,9 соответственно. Плотность клеток увеличивалась до 15730 ± 1572,9 n/мм2 и улучшалась ультраструктурная организация лимфоидных клеток.

3. В селезенке у 5-ти дневного клинически здорового поросенка преобладала красная пульпа и ее объем составлял 86,8 ± 0,8 % . В белой пульпе диаметр лимфоидных фолликулов составлял 71,73 ± 18,7 мкм, а плотность клеток - 8450 ± 850,4 n/мм2. В 45-ти дневном возрасте плотность клеток в белой пульпе селезенки увеличивалась до 10459 ± 1046,5 n/мм2, а в ультраструктурной организации появлялись единичные клетки плазматического ряда.

4. В костном мозге у 45-ти дневного клинически здорового поросенка наблюдались различные стадии дифференциации клеток гемопоэтического ряда, а в ультраструктуре выделялись промиелоциты, пролимфоциты, промоноциты и проэритробласты.

5. В тимусе у 5-ти дневных поросят при иммунодефиците наблюдались маленькие гипопластические полиморфные дольки с диаметром 116,3 ± 10,7 мкм. В них соотношение коркового и мозгового слоев составило 19,4 ± 1,8 и 17,5 ± 1,6, а плотность клеток была низкой и составила 11130 ± 1108,3 п/мм2 и 10860 ± 970,5 п/мм2 соответственно. В 45-ти дневном возрасте в тимусе поросят диаметр дольки незначительно увеличивался и составлял 238,9 ± 19,4 мкм при соотношении коркового 44,8 ± 0,3 и мозгового 56,5 ± 0,9 % слоев. Плотность клеток тимуса в 45-ти дневном возрасте у иммунодефицитных поросят незначительно возрастала и составляла 17357 ± 1521,7 n/мм2 и 15853 ± 1271,8 п/мм2 соответственно. При этом тельца Гассаля имели не большие ядра со светлой кариоплазмой и цитоплазмой. В тиммоцитах наблюдалась развитая агранулярная эндоплазматическая сеть.

6. В лимфатическом узле у 5-ти дневных поросят при иммунодефиците наблюдалось гипоплазия и мономорфность лимфоидной ткани в корковом слое, где плотности клеток составляла 12397± 1321,4 n/мм2. Лимфоидные фолликулы едва были заметны и в них не выявлялись герминативные центры. Корковый слой занимал 29,43 ± 2,81 %, а мозговой - 17,68 ± 5,71 % площади узла. У 45-ти дневных поросят при иммунодефиците в лимфатическом узле проявлялись лимфоидные фолликулы с диаметром 206,87 ± 76 мкм и плотность клеток 18345 ± 1639 n/мм2. При этом объемная доля коркового слоя составляла 32,19 ± 2,8 %, мозгового - 21,53 ± 5,17 %. Гипоплазия лимфоидных клеток сопровождалась с наличием в ультраструктуре лимфатического узла интердигитирующих клеток, неспособных к фагоцитозу.

7. В селезенке при иммунодефиците у 5-ти дневных поросят наблюдалась гипоплазия лимфоидных клеток как в белой пульпе, так и в периартериальной зоне, которая превалировала в лимфатическом узле и у 45-ти дневных поросят при иммунодефиците. Плотность клеток в белой пульпе селезенки при иммунодефиците поросят в 5-ти дневном возрасте составляла 6450 ± 546 п/мм2 , а в 45-ти -10547 ± 1045 п/мм2, а диаметр фолликулов - 51,47 ± 1,87 мкм и 79,71 ± 6,2 мкм соответственно. Гипоплазия лимфоидных клеток в селезенки при иммунодефиците частично компенсировалась гиперплазией ретикулярных клеток, которые превалировали в ультраструктуре органа.

8. В костном мозге у 45-ти дневных поросят при иммунодефиците гипоплазия клеток гемопоэтического ряда сопровождалась увеличением объема и количества мегакариобластов с соответствующей ультраструктурной их организацией.

9. При фармакологической коррекции введение селекора (селеданта) в дозе 20мкг/кг дважды в дозе с интервалом 10-12 дней свиноматкам на 80-90 дни супоросности и поросятам в 20-25 дневном возрасте способствовало:

- повышению уровня и продолжительности колострального иммунитета у поросят. При этом гамма-глобулиновая фракция в крови поросят составляла 10,50 ± 0,80 % против 8,70 ± 0,80 % в контроле;

- улучшению микроэлементной обеспеченности поросят медью на 12,9 %, марганца на 10,9 %, железом на 17,4 % и магнием на 8,9 %, что обеспечивало более выраженную ферментативную активность и уровень протекания окислительно-восстановительных процессов у поросят;

- нормализацию процессов перекисного окисления липидов, фосфорно-кальциевого соотношения, а также уменьшению в сыворотки крови мочевины на 7 % - снижению катаболических процессов у поросят.

10. Введение селекора (селеданта) свиноматкам и поросятам по той же схеме способствовало улучшению неспецифической иммунологической реактивности организма свиноматок и поросят в виде лейкоцитарных индексов. В частности у свиноматок ИЛИ увеличился на 190%, ЛИИК увеличился на 175%, ЛИИШ увеличился на 40%, ИЛГ увеличился на 86,3%, ИЛСОЭ увеличился на 85,6%, ИСНЛ увеличился на 93,5%, ИСЛЭ увеличился на 162%, ОИ на 85,8%, ИСЛМЭ на 136% и НИ на 165%, а у поросят ЛИИК увеличился на 181%, ЛИИШ увеличился на 39%, ИЛГ увеличился на 80,3%, ИСНЛ увеличился на 89,8%, ИСЛЭ увеличился на 161%, ИСЛМЭ на 129% и НИ на 161%), что расширяло возможности получения информации о состоянии неспецифической иммунологической реактивности организма животных вообще и при применении препаратов в частности.

11. При профилактике иммунодефицита селедантом у поросят в лимфоидных органах улучшалась митотическая активность лимфоидных клеток в тимусе, которая составляла 52,35 ± 3,61 е.о.п. х 10 против 44,4 ±

2 2 0,81 е.о.п. х 10 , в лимфатическом узле - 65,45 ± 5,51 е.о.п. х 10 против

43,67 ± 1,13 е.о.п. х 102 в контроле и в селезенке - 51,34 ± 2,86 е.о.п. х 102 против 48,71 ± 0,91 е.о.п. х 10 в контроле. Оптическая плотность РНК в тимусе составила 80,32 ± 2,80 е.о.п. х 102 против 76,71 ± 1,29 е.о.п. х 102 в контроле, в лимфатическом узле - 51,5 ± 7,18 е.о.п. х 102 против 48,18 ± 0,62 е.о.п. х 102 в контроле и в селезенке - 74,07 ± 2,81 е.о.п. х 102 против 56,03 ± 0,67 е.о.п. х 102 в контроле.

12. В структурной организации тимуса у 5-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селекором наблюдалось насыщение паренхимы тиммоидными клетками, увеличение телец Гассаля и гиперплазия лимфоидной ткани. Объемная доля коркового слоя составила 41 ± 1,8 %, мозгового - 38,4 ± 1,8 %, а плотность клеток - 15485 ± 1412 n/мм2 и 14143 ± 1345 п/мм2 соответственно. У 45-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селедантом в тимусе значительно увеличивалась объемная доля коркового слоя и составила 54,9 ± 5,1 % против 35,7 ± 6,2 % в мозговом слое при плотности клеток - 25589 ± 2498 n/мм2 и 23843 ± 2236 п/мм2 соответственно. Гиперплазия лимфоидной ткани в ультратонких срезах проявлялась увеличением количества тиммоцитов и проплазмоцитов с активизацией мембран гранулярной эндоплазматической сети.

13. В структурной организации лимфатических узлов у 5-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селекором наблюдалась гиперплазия лимфоидной ткани в корковом слое с развитием вторичных фолликулов в перимозговом слое с диаметром 139,15 ± 58 мкм. Увеличивалась объемная доля коркового слоя до 43,43 ± 2,05 % против 25,7 ± 4,12 % в мозговом, а плотность клеток в этих слоях составила 14396 ± 1254 n/мм2 и 13845 ± 1147 п/мм2 соответственно. У 45-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селедантом в лимфатическом узле гипертрофировался корковый слой с соответствующей гиперплазией лимфоидных клеток и образованием множественных вторичных лимфоидных фолликулов в перимозговом слое. Диаметр их увеличивался до 387,73 ± 52,3 мкм. Объемная доля коркового слоя составляла 54,83 ± 2,02 % против 20,76 ± 4,12 % в мозговом, а плотность клеток в них составила 23747 ± 2271 n/мм2 и 22832 ± 2065 п/мм2 соответственно. В герминативных центрах наблюдалась гиперплазия пролимфоцитов, в ультраструктуре которых электронноплотные ядра сочетались с наличием темных митохондрий и агранулярной эндоплазматической сети в цитоплазме.

14. В структурной организации селезенки у 5-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селекором наблюдалась гиперплазия лимфоидной ткани в белой пульпе и периартериальной зоне с плотностью клеток 11743 ± 1098 n/мм2. В 45-ти дневном возрасте поросят при профилактике иммунодефицита селедантом в селезенке гиперплазия лимфоидной ткани принимала диффузный характер, а плотность клеток в белой пульпе увеличивалось до 15749 ± 1561 n/мм2. Увеличивалось количество пролимфоцитов в маргинальной зоне, а электронномикроскопически увеличивалось количество макрофагальных, моноцитарных и плазматических клеток.

15. В костном мозге у 45-ти дневных поросят при профилактике иммунодефицита селедантом гиперплазировались гранулобласты, мегакариобласты и клетки гемопоэтического ряда. В ультраструктуре костного мозга доминировало наличие пролимфоцитов, промоноцитов и проплазмоцитов.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты исследований вошли во «Временное наставление по применении селеданта для сельскохозяйственных животных» (Утверждено ветеринарным отделом Воронежского областного управления сельского хозяйства 15.02.2005 года j и методические рекомендации «Морфофункциональная характеристика гепатодистрофии молодняка свиней, лечение и профилактика препаратами пантотеновой кислоты и карнитина» (Одобрены секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 03.05.2006 г., протокол № 1).

2. Для профилактики иммунодефицита у поросят селедант следует применять в дозе 20 mkiVki дважды с интервалом 10-12 дней свиноматкам на 80-90 дни супоросности и поросятам в возрасте 20-25 дней.

3. Результаты исследований могут быть использованы в учебном процессе и в работе научно-исследовательских учреждений.

2.6. Заключение

Таким образом, современная наука рассматривает иммунитет как способ защиты организма от всего генетически чужеродного. Эту защиту выполняет иммунная сиаема, представляющая систему органов, тканей и клеток, деятельность которых обеспечивает сохранение генетического (антигенного) постоянства внутренней, среда организма - иммунного гомеостаза. Установлено, что важным условием для полноценного иммунного ответа является взаимное кооперирование макрофагов, Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов. В механизме иммуногенеза различают индуктивную и продуктивную фазы развития. В индуктивной фазе фагоцитоз является начальным, пусковым этапом иммунной перестройки организма, а в продуктивной фазе иммуногенеза осуществляется выдача иммунного ответа в виде трансформации I-лимфоцитов в иммунные Т-лимфоциты (киллеры) и В-лимфоцигов в плазматические клетки.

Иммунная система построена из лимфоидной ткани, имеет весьма своеобразную возрастную динамику (ранняя закладка, достаточная морфологическая зрелость к моменту рождения, максимальное развитие размеров и дифференцировка в молодом возрасте и ранняя возрастная инволюция лимфоидной ткани с замещением соединительной и жировой тканями) и подразделяется на центральные (тимус, костный мозг, фабрициева сумка) и периферические (селезенка, лимфоузлы, лимфоидная ткань пищеварительной и других систем, кровь, лимфа) органы.

Нарушение нормального иммунологического статуса, обусловленное дефектом одного или нескольких механизмов иммунного ответа, принято рассматривать как иммунную недостаточность или иммунодефицит. Различают первичную и вторичную иммунную недостаточность. Под первичным иммунодефицитом принято понимать генетически обусловленную неспособность организма продуцировать какое-либо звено иммунного ответа. Он имеет четко выраженный наследственный характер, проявляющийся сразу после рождения. Приобретенный (вторичный) иммунодефицит возникает при влиянии на организм практически любого фактора, как инфекционной, так и не инфекционной природы (действие вирусов, бактерий, паразитов, различных стресс-факторов, ионизирующей радиации, нарушения обмена веществ, нарушения передачи материнских антител или передачи потомству с молозивом аутоантител и т.д.).

Диагностировать иммунодефициты можно иммуноморфологическими меюдами, которые позволяют определять состояние иммунокомпетентной системы. Иммуноморфологические исследования позволяют судить о степени выраженности иммунодефицитов по морфофункциональным показателям центральных и периферических лимфоидных органов, формирующих основу комплекса иммунокомпетентной системы. Определение иммунного статуса проводится с применением различных иммуноморфологических методов на уровне макро- и микроскопических исследований. Наиболее доступными являются макроскопические методы, которые можно применять в условиях хозяйства. На иммунную недостаточность указывают морфологические параметры лимфатических узлов, селезенки, тимуса, бурсы Фабрициуса. Признаками иммунодефицита является уменьшение и приплюснутость лимфоузлов, уменьшение селезенки и сморщенность капсулы.

Иммуномодуляторы - вещества различной природы и находят применение в системе профилактики разных заболеваний у многих видов животных, в том числе в такой интенсивной отрасли животноводства как свиноводство. Однако в последнее время исследователи все чаще обращаются к препаратам микроэлементов, как наиболее дешевым и эффективным, среди которых не последнее место занимает селен, обладающий антиоксидантной, антикахектической и иммуномодулируюгцей способностью.

Из селенсодержащих иммуностимуляторов наиболее перспективны органические соединения селена, так как они обладают высокой биодоступностью и низкой токсичности. Одним из таких препаратов является селекор (селедант). Однако до настоящего времени недостаточно изучено структурно -функциональное состояние органов лимфоидной системы у молодняка свиней при иммунодефицитах и их фармакокоррекции селедангом.

В связи с этим целью насюящей работы являлось изучение структурной ор1анизации органов лимфоидной системы у молодняка свиней при иммунодефиците и ею фармакокоррекции селедантом.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1 Материал и методика исследования

Работа выполнена в 2003-2007 годы в отделе патологической морфоло1 ии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и 1ерапии Российской академии сельскохозяйственных наук (ВНИВИПФиТ РАСХН) в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ГНУ «Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и герапии» РАСХН по заданию 04 Программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК РФ ( № госрегистрации: 01.9.90001257; 01.200.117018).

Для проведения опытов поросят подбирали по принципу парных аналогов по возрасту, массе тела и интенсивности роста. Оценку адаптивных способностей и состояния здоровья ггоросят-отъемышей проводили по продуктивности, морфологических и биохимических показателей крови животных.

Производственные опыты проводилось в МХП «Николаевское» Аннинского района и ООО «Вишневское» Верхнехавского района Воронежской области, где на J0-90 дни супоросности одни свиноматки вакцинировались поливалентной формолвакциной против колибактериоза сельскохозяйственных животных (Коливак К-88, К99, 987Р, F41, TJ1-TC-анатоксины) и ассоциированной инактивированной вакциной против сальмонеллеза, пастереллеза и стрептококкоза (ППС) в комплексе с селедантом (селекором) в дозе 20 мкг/кг массы тела, а другие - без иммуномодулятора. Через 10-12 дней иммунизацию и введение препарата повторяли.

После опороса, от свиноматок обеих групп, поросята в возрасте 3-5 дней подвергались убою. Остальные поросята по той же схеме, как синоматки, в возрасте 20-25 дней иммунизировались дважды с интервалом 10

12 дней в сочетании с препаратом селедантом в дозе 20 мкг/кг массы тела. В течение опьпа за поросятами велось клиническое наблюдение. В 45-47 дневном возрасте oi каждой группы по 3-4 поросенка подвергались убою.

В ООО «Вишневское» от 36 свиней в период супоросности отбирались пробы крови до введения препаратов и спустя месяц после вакцинации для цитоло1 ического исследования. Образцы окрашивали по методу Павловского, затем изучали морфологический состав периферической крови и выводили лейкоцитарные индексы: лимфоцитарно-нейтрофильный индекс (ЛНИ), лимфоци гарный индекс интоксикации Кальф-Калифа (ЛИИК), лимфоцитарный индекс интоксикации Кальф-Калифа модифицированный (ЛИИКМ), лимфоцитарно-гранулоцитарный индекс (ИЛГ), индекс сдвига лейкоцитов (ИСЛ), индекс соотношения лейкоцитов и СОЭ (ИЛСОЭ), индекс соотношения нейтрофилов и лимфоцитов (ИСНЛ), индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов (ИСНМ), индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов (ИСЛМ), индекс соотношения лимфоцитов и эозинофилов (ИСЛЭ), ИЛСОЭ + ИЛГ (ОИ), индекс соотношения лимфоциты + моноциты и эозинофилы (ИСЛМЭ), индекс соотношения зрелых и суммы незрелых нейтрофилов (НИ) (Кальф-Калифа Я.Я., 1941; Е.А. Маринин с соавт., 1998; Жухоров Л.С. с соавг., 2002; Островский В К. с соавт., 2003г.).

Кровь для исследований брали у порося г из хвостовых сосудов. В крови и ее сыворотке определяли содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, гематокрита, общего белка и др. В общей сложности для проведения экспериментальных исследований было использовано 54 голов молодняка свиней, из них было убито 18 поросят.

Образцы лимфатических узлов (подчелюстные, брыжеечные), тимуса, селезенки и костного мозга фиксировались в 10-12% растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа, заливались по общепринятой методике в парафин и с парафиновых блоков готовились серийные срезы толщиной 7-9 мкм. Для изучения общей морфологической структуры органов и тканей парафиновые срезы окрашивались гематоксилин-эозином и на ДНК для подсчет суммарной ми готической активности лимфоидных клеток с реактивом Шиффа по методу Фелыена и окрашивали метиловым зелёным -пиронина по Унна - Наппеигейму (выявление ДНК и РНК - метод Браше).

Фиксацию материала для электронной микроскопии проводили в 2,5 % - ном глютаровом альдегиде на 0,114 М коллидновом буфере на холоде с постфиксацией в 1 % - ном растворе тетраокси осмия на том же буфере. Осмомолярность 360 моем достигали введением во второй фиксатор 0,05 М железосинеродисгого калия и раствора Рипгера. Материал заключали в эпон-812. Готовились полутонкие срезы, которые окрашивались азур-2 в сочетании фуксином основным и просматривались в световом микроскопе «Leica». Ультратонкие срезы готовили на ульграмикрогоме Ultracut (Leica), контрастировали цитратом свинца и уранилацетатом и просматривали в электронном микроскопе ЕМ-208 (Philips).

При г исто-цитологическом анализе материала на уровне светового микроскопа в каждой из зон тимуса, лимфоузлов и селезенки подсчитывали клетки в 20-40 полях зрения. При этом учитывали клетки, имеющие отчетливые морфологические признаки лимфоцита, лимфобласта, плазмоцита, плазмобласта, ретикулярной и метотически делящихся клеток. Для подсчета количества клеток на единицу площади и их процентного соотношения использовали окулярную измерительную сегку с известной площадью (0,0114 мм2) при увеличении объектива 90 под иммерсией. Количество морфометрических измерений, необходимых для объективного определения исходной величины было установлено по формуле: Х=400*(100-м)/М (Г. Г. Автандилов и др., 1981). Оптическая плотность гистохимических реакций на срезах измеряли на цитофотометре «Люмам И-3».

С помощью окуляра-микрометра в дольках тимуса измеряли ширину и учитывали соотношение коркового и мозгового слоев, а также количество эпителиальных телец (Гассаля). В лимфатических узлах и селезенке учитывали размеры лимфоидных фолликулов. Данные по морфометрии обрабатывали с помощью морфологической программы Meta Vision 1.2.

Результаты исследований были подвергнуты статистической обработке на персональном компьютере IBM (программа Микрософт Эксель 2003).

3.2. Структурная организация органов лимфоидной системы у клинических здоровых поросят

3.2.1. Тимус

У поросят 3-5-ти дневного возраста выявляли формирование долек тимуса. Отростки эпителиальных клеток образововали ячейки, которые заполнялись преимущественно Т-лимфоцитами, находящимися на разной стадии дифференцировки. Лимфоциты в корковом веществе распологались компактно, придавая ем) темную окраску. Цежр долек занимало мозговое вещество, коюрое представлено более крупными эпителиальными клетками. В отростках эпителиальных клеток находится незначительное количество макрофагов, лимфоцитов и др. клеток. В связи с этим мозговое вещество кажется более разряженным, светлым. Тимус содержал дольки малого размера, процентная доля корковою вещества была в пределах 28,4±0,9,а процентная доля мозгового 27,5+2,6, с небольшим содержанием тимоцитов (Т-лимфоцитов). Тельца Гассаля в уменьшенном количестве. Размер их колеблелся в пределах 59,31 ±6,4. Плотность распределения тимоциюв в коре находилась в пределах 15120(п/мм2). Плотность мозтовых тимоцитов была существенно снижена и равнялась 13850 (п/мм").

У 45- ти дневных клинических здоровых поросят тимус представлял полностью сформированыый орган. Относительно широкий и компактный корковый слой заполнен тимоцитами. Объем коркового слоя составлял 40,8,±0,9% Особенностью было то, что в нем имелось значительное количество тимоцитов с более высоким содержанием хроматина в ядре. В небольших количествах выявлялись молодые разбросанные полиморфные клетки разного размера. Мозговой слой практически был равен корковому слою, объемная доля которого состовляла 37,5±2,9 с молодыми и зрелыми клетками. В связи с этим границы слоев была практически стерта. Плотность клеток достигала до 20157 ± 1923,1 n/мм2 в корковом и 19859 ±

1871,4 п/mvT - в мозговом слоях. Размеры темических телец варьировал в пределах 72,85± 10,85, (табл.1).

Рис, 1. Структурная организация тимуса у 5-ти дневного клинически здорового поросенка: а) Формирование долек тимуса; б) Клеточный состав коркового слоя; в) Клеточный состав мозгового слоя; г) Формирование гигантского тельца Гассаля. Окр. гем.-эозин. Ув. ок. 7, об. 10(a), 40(0,6,4

Рис. 2. Структурная организация тимуса у 45-ти дневного клинически здорового поросенка: а) Множество телец Гассаля различной величины в мозговом слое; б) Клеточный состав вокруг юного тельца Гассаля; в) Прорежение тиммоцитов в промежуточной зоне дольки; г) Слоистость структуры тельца Гассаля. Окр. гем.-эозин. Ув. ок. 7, об. 10 (л), 40 (б, в, г).

• м а* л, л ■■ г ' ' >

JQ

Рис. 3. Структурная организация тимуса у 45 дневного клинически здорового поросенка (полутонкие срезы): а) Клеточный состав мозгового слоя; б) Зрелые лимфоциты в промежуточной зоне дольки; в) Тиммоциты в различной стадии дифференциации; г) Периваскуляррное расположение клеток тиммогенного ряда.Окр. Азур-2 в сочетании фуксином основным. Ув.ок.10, об.20(a), 40(в), 100(6, г).

Рис. 4. Ультраструктура клеток тимуса у 45 дневного клинически здорового поросенка: а) Тиммоциты зрелые; б) Протиммоциты; в)Мембраны гранулярной эндоплазмаической сети в цитоплазме плазматической клетки; г) Ультраструктура цитоплазмы и ядерной мембраны тиммоцита. Ув.х 1400(a), ><3500 (б), х 7100 (в, г).

Рис. 5. Морфометрические показатели тимуса у клинически здоровых поросят а) Размер (мкм), доля (%). диаметр долки тамуса у 5ти дн. поросенка диаметр долки тимуса у 45-ти дн. поросенка доля мозгового в-ва у 5-тм дн. поросенка доля мозгового в-ва у 45-ти дн. поросенка доля коркового в-ва у 5-ти дн. поросенка доля коркового в-ва у 45-tvi дн. поросенка б) Плотность клеток(п/мм2).

20157

15120

19859

13850 в корковом в-ве у 45-ти дн. поросят в корковом в-ве у 5-ти дн. порсят в мозговом в-ве у 45-ти дн. поросят

О в мозговом в-ве у 5-ти дн. поросят

О 5000 10000 15000 20000 25000

3.2.2. Лимфатические узлы

При гистологическом исследовании лимфоузлов у 3-5 дневных клинически здоровых поросят было установлено, деление на более темное периферическое корковое вещество узла и более светлое мозговое вещество посередине. Объемная доля коркового вещества состовляла 39,83±2,81, а процентная доля мгзювого вещества 21,98±5,17%. Лимфоузлы обедневали лимфоидными элементами. Лимфоидные фолликулы малочисленны, мелкие, практически не содержали светлых центров. Диаметр этих образований равнялся 113,19± 1,29 мкм, плотность клеточных элементов в корковом веществе состовлял 13396(п/мм2)., а в мозговом веществе 12845(п/мм2).

У 45- ти дневных клинических здоровых поросят лимфоузлы показали, что общая структура коркового и мозгового слоев была четко выражена. Объем коркового слоя составлял 42,89±2,81%. Клеточный состав его л неоднороден. Плотность клеток в коре равнялась 18345±1736(п/мм ), Обнаруживаемые лимфоциты, лимфоицные клетки и клетки ретикулоэндотелиальной системы местами скучены, местами были разрежены. Количество и уровень развития лимфофолликулов различны, размер их был равен 276,87±27,6 мкм. Лимфофолликулы с высокой реактивностью зародышевых центров обнаруживали в единичных случаях. Объемная доля мозгового слоя состовляла 24,93±5,17%. Мякотные тяжи различной конфигурации, ориентированы в направлении ворот. Плотность клеток в мозговом слое не привышала 17399±1521(п/мм2), (табл.1).