Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональное обоснование применения лазера при гепатозе собак

На правах рукописи

Шиляева Татьяна Игоревна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ЛАЗЕРА

ПРИ ГЕПАТОЗЕ СОБАК

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

I 1 )

Екатеринбург, 2003

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Работа выполнена на кафедрах внутренних незаразных болезней и анатомии и гистологии Уральской государственной сельскохозяйственной академии.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Шкуратова И.А. Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Садовников Н.В.; доктор ветеринарных наук, профессор Стрижиков В.К.

Ведущая организация - Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана

Защита диссертации состоится «Л/» // 2003г. в /(? час. на заседании диссертационного совета Д.220.067.03 при Уральской государственной сельскохозяйственной академии.

Адрес академии: 620219, г. Екатеринбург, ул. Карла Либкнехта, 42

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уральской государственной сельскохозяйственной академии.

Автореферат разослан « 2-Оу, _2003г.

Ученый секретарь

доцент

диссертационного совета,

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Заболевания печени занимают существенное место среди тяжело протекающих болезней животных. Анализ результатов биохимических показателей сыворотки крови показывает, что значительно чаще у мелких домашних животных стали регистрироваться заболевания, имеющие в своем генезе токсические поражения печени (Б.В. Уша, Т.Б. Горовая, С.Э. Жавнис, 2002).

В настоящее время в диагностике болезней печени все большее распространение получает метод аспирационной биопсии с последующим гистологическим исследованием материала и оценкой морфологического состояния содержащихся в биоптате тканей. Биопсия печени дает возможность более точно по сравнению с другими методами диагностики оценить функциональное состояние органа. Это связано с высоким совершенством компенсаторных механизмов паренхимы печени, которые нивелируют ограниченные изменения ткани, то есть повреждение даже большой массы гепатоцитов может не сопровождаться клиническими и биохимическими изменениями (З.А. Бондарь, 1970; В.И. Фомичев, 1988; O.A. Дунаевский, 1985; П.Ф. Сутер, 2000; К.Ф. Сэне, Д. Фриц, 1999).

Однако метод прицельной биопсии печени при всей его относительной безопасности и малой травматичное™ (Б.В. Уша, 2002) является хотя и эффективным, но достаточно сложным и дорогостоящим методом диагностики, требующим наличия специального оборудования и длительной подготовки животного. Исходя из этого, актуальным становится поиск более простого и доступного для выполнения метода получения клеточного материала печени для экспресс-диагностики ее заболеваний.

Сегодня в большинстве стран мира наблюдается интенсивное внедрение лазерного излучения в биологических исследованиях и в практической медицине. Установлено, что лазерная энергия оказывает стимулирующее воздействие на

синтез пигмента меланина в красном костном мозге у овец после облучения звездчатых узлов. Это свидетельствует о том, что энергия красного света лазера активирует окислительно-восстановительные процессы и повышает уровень обмена веществ в организме животного (А.Н. Михайлов, 2001). Воздействие низкоинтенсивных лазеров приводит к быстрому стиханию острых воспалительных явлений, стимулирует репаративные процессы, улучшает микроциркуляцию тканей, нормализует общий иммунитет, повышает резистентность (устойчивость) организма. В настоящее время доказано, что низкоинтенсивное лазерное излучение обладает выраженным терапевтическим действием (A.A. Городецкий, 1996; С.Б. Брискин, 1996; Г.А. Послов, 2002; В.П. Иноземцев, А.Г. Нежданов, 1999). Анализ результатов ряда исследований, проведенных за последние годы, показывает, что интенсивность восстановительных процессов при воздействии низкоэнергетического лазерного излучения повышается не только в облучаемых участках кожи, но и в подлежащих внутренних органах (И.В. Стряпунина, 1998; 2001). Тем не менее, эффективность применения чрезкожного проекционного облучения печени низкоинтенсивным лазером при гепатозе плотоядных остается малоосвещенным вопросом, требующим дальнейшего изучения возможности использования этого метода терапии как альтернативы медикаментозному лечению.

Цель исследования. Целью настоящей работы явилось изучение влияния низкоинтенсивного лазерного излучения на морфофункциональные показатели печени при гепатозе собак.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

- изучить распространенность гепатоза собак в условиях промышленного города и дать их клинико-биохимическую характеристику;

- разработать методику чрезкожной цитопункции печени, не требующую использования специального оборудования и длительной подготовки животного;

- дать клинико-биохимическую характеристику влияния низкоинтенсивного

лазерного излучения на организм собак при гепатозе;

.1 / > ) ■

- определить характер морфологических изменений печени при гепатозе собак под воздействием на орган низкоэнергетического лазерного излучения.

Научная новизна. Выявлена степень распространенности гепатоза собак в различных возрастных группах животных, содержащихся в условиях промышленного города.

Разработан и внедрен в практику метод чрезкожной цитопункции, позволяющий проводить прижизненную диагностику заболеваний печени.

Проведены исследования, позволяющие установить взаимосвязь между морфологическими и клинико-биохимическими изменениями, характерными для гепатоза собак.

Дана характеристика гистологических изменений в тканях печени после воздействия низкоэнергетического лазерного излучения, свидетельствующих о развитии компенсаторно-восстановительных процессов в органе.

Практическое значение. Выполненные исследования и полученные результаты позволяют считать чрезкожную цитопункцию печени легковыполнимым, безопасным для животного и достаточно информативным методом экспресс-диагностики заболеваний этого органа, который может быть рекомендован для широкого применения.

С помощью экспериментальных исследований определена эффективная и рациональная схема применения низкоэнергетического лазера при гепатозе собак.

Использование низкоинтенсивного лазерного излучения в качестве эффективного физиотерапевтического метода лечения гепатоза собак можно считать альтернативой другим известным методам лечения данной патологии.

Результаты научно-исследовательской работы используются в учебном процессе, при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по курсам: «Внутренние незаразные болезни» и «Болезни мелких домашних животных» в Уральской государственной сельскохозяйственной академии и Уральской государственной академии ветеринарной медицины.

Основные положения, выносимые на защиту:

диагностическое значение метода чрезкожной цитопункции печени у собак.

морфологическая характеристика печени собак при гепатозе. оценка совокупности клинико-биохимических и морфологических изменений при гепатозе собак.

влияние чрезкожного проекционного облучения печени низкоэнергетическим лазером на гистологическую структуру печени и на клинико-биохимический статус животных.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены и обсуждены на региональной научно-практической конференции «Экологический мониторинг сельскохозяйственных производств в рыночных условиях» (Екатеринбург, 1998); на ежегодных научно-практических конференциях «Актуальные вопросы ветеринарной медицины домашних животных» (Екатеринбург, 1997, 1999, 2001); на Восьмом международном конгрессе по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных (Москва, 2000); на Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2001); на Российской научно-практической конференции, г. Новосибирск, 13 - 14 февраля 2003г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ в трудах, сборниках и материалах научных конференций.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, предложений и библиографического списка.

Работа изложена на 114 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 11 таблицами и 15 рисунками. Библиографический список включает в себя 160 источников, в том числе 52 зарубежных.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Настоящая работа выполнена на кафедрах внутренних незаразных болезней и анатомии и гистологи Уральской государственной сельскохозяйственной академии в период с1999 по 2002 годы.

Объектом исследований служили собаки различных пород в возрасте от 3 до 10 лет, содержащиеся на территории крупного индустриального города. Подбор животных производили с учетом данных анамнеза, которые позволяли предположить у них нарушение функции печени.

На первом этапе работы проводили клиническое и лабораторное исследование животных, прижизненную морфологическую оценку клеток паренхиматозной ткани печени и определение характера патологии.

На втором этапе было изучено действие низкоэнергетического лазера на основные клинико-лабораторные и морфологические показатели состояния печени собак с диагнозом гепатоз при чрезкожном проекционном облучении органа.

Клиническое обследование проводили по общепринятой схеме, обращая особое внимание на состояние пищеварительной системы и печени животных. Обследование прошли 1520 собак, из них 748 животных в возрасте от 3 до 6 лет (младшая возрастная группа) и 772 животных в возрасте от 6 до 10 лет (старшая возрастная группа).

Кровь для лабораторного исследования брали натощак. Определяли скорость оседания эритроцитов по унифицированному методу Панченкова; количество гемоглобина унифицированным гемиглобинцианидным методом; проводили подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева. Мазок крови для морфологического исследования окрашивали по методу Романовского - Гимзе.

Для проведения биохимического исследования использовали сыворотку крови без признаков гемолиза. В сыворотке крови определяли: содержание

глюкозы унифицированным глюкозооксидазным методом (1974); количество общего белка по биуретовой реакции (1972); содержание аминотрансфераз унифицированным методом Райтмана - Френкеля (1976); уровень щелочной фосфатазы унифицированным методом Бессея - Лоури - Брока по гидролизу п-нитрофенилфосфата (1972); количество мочевины с помощью унифицированного метода Ферона (1972); уровень общего билирубина унифицированным методом Ендрассика - Клеггорна - Грофа по диазореакции (1972); содержание холестерина унифицированным холестеролоксидазным методом (1972); тимоловую пробу с применением тимолово-вероналового буфера по методу Маклагана, модифицированному Хуэрго и Поппер (1972). Все биохимические исследования сыворотки крови осуществляли с использованием фотоэлектрокалориметра КФК-2.

Исследование мочи проводили с помощью тест - полосок «Гексафан» («Лахема»). Определяли рН мочи, качественное содержание глюкозы, кетоновых тел, уробилина, гемоглобина, количественное содержание белка. Для обнаружения в моче билирубина применяли унифицированную пробу Розина с 1%-ным спиртовым раствором йода. Кроме этого проводили микроскопическое исследование мочевого осадка.

С помощью чрезкожной цитопункции печени получали клеточный материал для цитологического исследования. Животное фиксировали либо в стоячем, либо в левом боковом лежачем положении, в зависимости от его темперамента и от выбранной методики доступа. При нормальных размерах печени или при ее уменьшении применяли различные трансторакальные доступы, при осуществлении которых иглу вводили справа по заднему краю последнего или 2-х предпоследних ребер на расстоянии 1-4 см от мечевидного отростка (в зависимости от размера животного) перпендикулярно поверхности кожи на глубину 2 - 4 см в дорсальном направлении. При увеличении размеров печени иглу вводили непосредственно позади мечевидного отростка или слева между мечевидным отростком и реберной дугой на ту же глубину в дорсальном или

дорсо-каудальном направлении. Одновременно с прокалыванием паренхимы печени с помощью шприца создавалось пониженное давление, что позволяло удержать в игле, при ее быстром извлечении наружу, захваченные клетки. Полученный клеточный материал с помощью малого объема физиологического раствора вымывали на предметное стекло, мазок подсушивали, фиксировали 70%-ным раствором спирта и окрашивали по методу Романовского-Гимзе.

Для проведения гистологического исследования осуществляли краевую биопсию печени под визуальным контролем. Полученный образец печени фиксировали в 10%-ном водном растворе нейтрального формалина при комнатной температуре в течение 48 часов. По окончании фиксации кусочки органа обезвоживали в смеси спирта и эфира 1 : 1 в течение 24 часов, затем заключали в целлоидин по Апати и наклеивали на деревянные кубики. Срезы получали на санном микротоме толщиной 7-8 мкм. окрашивали гематоксилином по Эрлиху с докраской 0,5%-ным раствором эозина, а также по ШИК-реакции и заключали в канадский бальзам по Г. Масону. Полученные гистологические и цитологические препараты анализировали под бинокулярным световым микроскопом при увеличении 40 х 12,5. Гистологические исследования печени проведены на кафедре анатомии и гистологии УрГСХА под руководством профессора Л.И. Дроздовой.

Для проведения опыта по облучению по результатам клинико-лабораторных и морфологических исследований отобрали 14 собак с диагнозом - гепатоз. Облучение проводили контактным методом с использованием импульсного низкоинтенсивного инфракрасного лазера «AGNIS LOI» в проекции печени справа по трем точкам, образующим равнобедренный треугольник. Курс лазеротерапии составил 7 сеансов при следующих параметрах: А (мощность) - 5 Вт, M (модуляция) - 70 Гц, F (частота) - 1200 Гц, время облучения в каждой точке - 1 минута (время сеанса - 3 минуты).

Полученные количественные показатели обработаны математически на PC Pentium с помощью прикладной программы «Статистика», для оценки

достоверности полученных результатов использовали критерии Стьюдента и Фишера.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИСЛЕДОВАНИЙ

3.1. Результаты клинического исследования животных. Клиническое обследование животных проводили по общепринятой схеме, обращая особенное внимание на цвет слизистых оболочек, прежде всего склеры, изменение размеров и характера поверхности печени, болезненность при пальпации брюшной стенки, склонность к кровотечению, наличие асцита.

У большинства животных (520 голов) выявляли прямые и косвенные симптомы, свидетельствующие о нарушении функции печени. Специфические для гепатопатии признаки обнаруживали главным образом у животных старшей возрастной группы. Данные клинического обследования представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты клинического обследования собак, содержащихся на территории

промышленного города.

I группа (от 3 до 6 лет) II группа (от 6 до 10 лет)

Всего голов 748 722

Период 2000 г. 2001 г. 2002 г. Всего 2000 г. 2001 г. 2002 г. Всего

Нарушение 105 178 180 463 118 325 185 628

аппетита 14% 23% 25% 62% 16% 45% 26% 87%

Нарушение 31 89 94 214 94 121 69 284

дефекации 4% 12% 13% 29% 13% 17% 9% 39%

Рвота 30 44 30 104 45 56 28 129

4% 6% 4% 14% 6% 8% 4% 18%

Увеличение 6 8 8 22 57 72 29 158

печени 1% 1% 1% 3% 8% 10% 4% 22%

Удовднк печми - 18 3% 28 4% 15 2% 61 9%

Боланенвэсть ГЕЧЗШ 9 1% 16 3% 11 1% 36 5% 29 4% 41 6% 31 4% 101 14%

Асцит 16 2% 18 2% 12 2% 46

Ивднеяие цвета слизклых обгаючзс - - - - 21 3% 64 9% 16 2% 101 14%

Кркяявюь ивоспалзме двоен 7 1% 8 1% 15 2% 29 4% 43 6% 14 2% 86 12%

Гипергер^шя 7 1% 16 2% 7 1% 30 4% 14 2% 44 6% 7 1% 65 9%

Нарушение важного покрова 64 9% 122 16% 36 5% 222 30% 113 15% 131 18% 80 11% 324 44%

3.2. Результаты гематологического и биохимического исследования.

Для проведения гематологического исследования было отобрано 190 проб крови от собак младшей и 170 проб крови от собак старшей возрастных групп. Наиболее часто встречающимися изменениями гематологических показателей, характерными для животных обеих групп, является увеличение скорости оседания эритроцитов, а также снижение уровня гемоглобина крови с одновременным уменьшением количества эритроцитов. Данные гематологического исследования представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты гематологического исследования собак с нарушением функций

печени.

Гематологические показатели Группы Нормы гематологических показателей *

ЦотЗдоб лег) п=170 П (or 6 до 10 лег) п=190

Скорость оседания эритроцитов, мм/час 4,24+0,91 6,83+0,99 1-2

Гемоглобин г/л, 97,5+9,64 95,4 + 9,13 100- 150

Эритроциты, млн/мкл 5,05+0,26 4,72+0,34 5,2-8,4

Лейкоциты, тыс/мкл 9,6±0,43 10,5+0,47 8,5-10,5

Эозинофилы, % 6,12+0,11 6,66+0,23 2-9

Палочкоядерные нейтрофилы, % 3,41+0,09 4,15+0,15 1-6

Сешентоядерные нейтрофилы, % 58,54+0,04 63,0+0,05 43-72

Моноциты, % 1,54 + 0,03 2,13+0,05 1-5

Лимфоциты, % 30,39+0,21 24,0+0,34 21-40

* - нормы гематологических показателей по данным А.А. Кудрявцева, Л.А. Кудрявцевой, И.П. Кондрахина и др. (1991).

Для проведения биохимического исследования сыворотки крови было отобрано 78 проб крови от животных младшей и 55 проб крови от животных старшей возрастных групп. Наиболее характерными изменениями в биохимическом составе сыворотки крови при проявлении клинических признаков нарушения функции печени для собак обеих групп является повышение уровня общего билирубина, щелочной фосфатазы, глюкозы, холестерина, значений

тимоловой пробы, а также снижение уровня общего белка и мочевины. Данные биохимического исследования сыворотки крови представлены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты биохимического исследования сыворотки крови собак с нарушением функций печени.

Биохимические показатели Группы Нормы биохимических показателей *

ЦогЗдоблет) п = 78 П (от 6 до 10 лег) п = 55

Глюкоза, ммоль/л 6,49+0,72 6,53±0,78 3,2-6,0

Холестерин, ммоль/л 6,64+0,24 7,62+0,81 3,2-6,5

Мочевина, ммоль/л 3,32+0,17 3,14+0,18 3,5 - 8,3

Общий белок, г/л 54,04+1,04 52,82±1,02 55-75

Общий билирубин, мкмоль/л 9,77 ±2,1 10,38 ±2,4 0-7,0

Тимоловая проба, ЕД 5,18 ±0,94 5,63 ±0,99 0-4

Ал АТ, мкмоль/ (ч' мл). 0,451+0,03 0,468±0,04 0-0,44

АсАТ, мкмоль/ (ч * мл). 0,256±0,04 0,257±0,04 0-0,25

ЩФ, Е/л 181,52+0,27 190,03±0,3 4 30-160

* - нормы биохимических показателей сыворотки кровы по А.Н. Голикову, Г.В. Паршутину и др. (1990).

3.3. Результаты исследования мочи. Для исследования было отобрано 170 проб мочи от собак младшей и 190 проб мочи от собак старшей возрастных групп. Исследование мочи выявило, что наиболее часто встречающимися изменениями являются: сдвиг рН мочи в щелочную сторону, появление в моче следов белка и наличие в моче значительного количества жировых капель. У животных старшей

группы, кроме этого, обнаружены положительные качественные реакции на содержание в моче кетоновых тел и сахара, а также обильное содержание в моче капель жира.

Исходя из данных клинико-лабораторного обследования животных установлено, что все перечисленные изменения в клиническом состоянии животных, а также в составе крови и мочи в большей степени выражены у собак старшей возрастной группы. Это свидетельствует об ослаблении у большинства из них защитно-компенсаторных процессов организма и предполагает накопление так называемой «критической» массы гепатоцитов.

Изменения состояния и состава крови и мочи свидетельствуют о нарастающей интоксикации организма, нарушении белкового, углеводного и пигментного обмена, и развитии холестатического и цитолитического процессов в печени.

3.4. Результаты цитологического исследования печени и сочетание их с результатами клинико-лабораторных исследований. Для проведения цитологического исследования печени было отобрано 45 собак (20 животных из I группы и 25 животных из П группы). Группы были сформированы из животных, обследование которых показало наличие характерных для гепатоза клинических признаков, а также характерных изменений в биохимическом составе сыворотки крови и мочи.

Цитопункцией установлено, что появление признаков зернистой дистрофии различной степени выраженности в клетках печени характерно для 50% животных I группы и для 20% животных II группы; признаки жировой дистрофии гепатоцитов обнаружены у 5% животных I группы и 34% животных II группы. Сочетанное нарушение жирового и белкового обмена в клетках печени отмечено у 45% животных I группы и у 38% II группы. У 8% животных II группы присутствие в цитологическом препарате значительного количества лимфоцитов может свидетельствовать о хроническом воспалении органа. Морфологические

изменения гепатоцитов у животных с клинико-биохимическими признаками гепатоза приведены в таблице 5.

Таблица 5

Морфологические изменения гепатоцитов у собак с клинико-биохимическими признаками гепатоза.

Морфологические изменения Младшая группа п = 20 Старшая группа п = 25

Зернистая дистрофия гепатоцитов 15% 20%

Зернистая дистрофия гепатоцитов с явлениями кариолизиса 35%

Зернисто — жировая дистрофия 45% 38%

Жировая дистрофия с явлениями кариолизиса 5% 30%

Жировая дистрофия с явлениями кариолизиса и цитолиза - 4%

Зернистая дистрофия гепатоцитов и скопление в пунктате лимфоцитов - 8%

Характерно, что признаки ярко выраженной зернисто-жировой дистрофии гепатоцитов, свидетельствующие о сочетанном нарушении белкового и жирового обмена в клетках печени, обнаружены у большинства животных обеих групп; отдельно друг от друга признаки зернистой дистрофии чаще встречаются у

животных младшей группы, а признаки жировой дистрофии у собак старшей возрастной группы.

Проведенное цитологическое исследование показало, что степень проявления клинико-биохимических признаков гепатоза напрямую зависит от степени и характера повреждения гепатоцитов. Ярко выраженная зернистая дистрофия клеток печени сопровождается умеренно проявляющимися клинико-лабораторными признаками нарушения функциональной активности печени. Морфологические признаки жировой и смешанной дистрофии гепатоцитов сопровождаются более глубокими изменениями клинического состояния животных (стойкое нарушение аппетита, нарушение дефекации, ахолия; увеличение и болезненность печени; ухудшение состояния кожного покрова). Биохимические изменения состава сыворотки крови и мочи у этих собак подтверждают нарушение жирового и белкового обмена, развитие холестатических и цитолитических явлений, снижение активности процессов гликогенеза.

3.5. Результаты применения низкоэнергетического лазерного излучения при гепатозе собак. Для проведения чрезкожного проекционного облучения печени было отобрано 14 собак в возрасте от 3 до 8 лет с диагнозом гепатоз. Животных отбирали на основании совокупности данных анамнеза, клинического, биохимического и цитологического обследования. По данным цитологического исследования у всех отобранных животных имелись признаки выраженной зернисто-жировой дистрофии гепатоцитов.

После проведения курса лазеротерапии о повышении функциональной активности печени позволяют судить изменения в биохимическом составе сыворотки крови, которые свидетельствуют об активации процессов гликогенеза, восстановлении белоксинтезирующей и мочевинообразующей функций печени, уменьшении признаков холестаза и улучшении жирового и пигментного обмена.

Изменения гематологического состава крови свидетельствуют об активизации процессов кроветворения, снижении интоксикации и

сенсибилизации организма. Динамика изменения гематологических и биохимических показателей представлена в таблице 6.

Таблица 6

Динамика изменения гематологических и биохимических показателей крови

собак.

До курса облучения После курса облучения

Глюкоза, ммоль/л 6,94 + 0,31 5,72 ±0,28

Холестерин, ммоль/л 9,01 ±0,99 6,16 + 0,43

Мочевина, ммоль/л 2,77 ±0,17 3,34 ±0,22

Общий белок, г/л 52,6 ±1,53 58,7 ±2,58

Общий билирубин, мкмоль/л 9,36 ± 0,61 6,88 ±0,18

Щелочная фосфатаза, Е/л 190,03 ±6,34 146,1 ±8,4

Аланинаминотрансфераза, мкмоль/(ч' мл) 0,468 ±0,04 0,345 ±0,06

Аспартатаминотрансфераза, мкмоль/(ч' мл) 0,257 + 0,04 0,223 ± 0,05

Тимоловая проба, Ед 6,57 ±0,87 4,71 ±0,63

Скорость оседания эритроцитов, мм/час 10,71 ±0,89 7, 57 ±0,98

Гемоглобин, г/л 86,4 ± 4,28 90,7 ±3,15

Эритроциты, млн/мкл 3,86 ±0,19 4,5 ±0,32

Лейкоциты, тыс/мкл 9,82 ±0,51 10,85 ±0,92

Эозинофилы, % 9,28 ±1,61 7,78 ±1,07

Лимфоциты, % 20,28 ±2,04 25,0 ±2,5

Таким образом, результаты сравнительного анализа данных клинико-лабораторного обследования животных, проведенного до и после их облучения

лазером, позволяют говорить о наличии положительных изменений в метаболических процессах организма при использовании низкоэнергетической лазеротерапии для лечения гепатоза собак.

При гистологическом исследовании биоптатов печени, окрашенных гематоксилином и эозином, были выявлены аналогичные изменения в ее тканях, просматриваемые в большинстве изученных препаратов.

Ядра большинства гепатоцитов резко базофильны, в некоторых клетках видны ядра, имеющие неправильную форму. Также обнаруживаются клетки, ядра которых находятся в состоянии кариолизиса и безъядерные клетки с нечётко выраженными контурами.

Некоторые погибшие клетки сливаются между собой, образуя поля некроза гепатоцитов (до 3-5 клеток в одном поле).

Изменения в цитоплазме гепатоцитов представлены главным образом развитием в ней выраженной зернистой дистрофии или же появлением признаков жировой декомпозиции с образованием в цитоплазме клеток мелких жировых капель, что свидетельствует о нарушении белкового и липидного обмена. Отмечается отложение в цитоплазме клеток липофусцина.

Имеют место также явления общего цитолиза клеток печени с разрушением клеточных мембран (периферический цитолиз) и полным исчезновением ядер гепатоцитов.

В препаратах, окрашенных по ШИК - реакции вокруг островков микронекроза наблюдается повышенное насыщение цитоплазмы неповрежденных гепатоцитов гликогеном; в остальных участках гликоген содержится в незначительном количестве и зачастую располагается неравномерно.

Полученные патоморфологические данные, подтверждают клинико-биохимическую картину гепатоза у опытных животных. Под влиянием

лазерного излучения в печеночной ткани происходят трофические и морфофункциональные изменения, свидетельствующие о улучшении

метаболических процессов и сопровождающиеся изменением клинико-лабораторных показателей у облученных животных.

Наблюдается усиление фагоцитарной активности в тканях печени, которое проявляется в положительном таксисе эозинофильных лейкоцитов и мононуклеарных фагоцитов к некротизированным участкам паренхимы. Кроме того, активизируются клетки, расположенные в перисинусоидальных пространствах (эндотелиоциты и звездчатые ретикулоэндотелиоциты).

Ядра клеток печени четко просматриваются, имеют умеренно выраженную базофильность. Происходит активное размножение гепатоцитов вокруг некротических очагов, появляются отдельные двуядерные клетки. Отмечается практически полное восстановление трабекулярного и дольчатого строения печени, что свидетельствует об усилении ее функциональной активности.

Регистрируется уменьшение количества липидных капель и снижение зернистости цитоплазмы вплоть до полного их исчезновения. Морфологически усиление метаболических процессов проявляется в снижении явлений жировой и белковой дистрофии.

При микроскопии срезов, окрашенных по ШИК - реакции, наблюдается зачастую незначительное, но тем не менее равномерное отложение гликогена. В некоторых гистологических срезах отмечается тотальное накопление и равномерное распределение гликогена.

¿ВЫВОДЫ.

1. В условиях промышленного города гепатозы собак регистрируются у 29% животных младше 6-летнего и у 42% животных старше 6-летнего возраста.

2. Цитопункция печени является достоверным методом ранней диагностики болезней печени у собак.

3. Гепатозы собак характеризуются наличием в пунктате гепатоцитов в состоянии зернистой и мелкокапельной жировой дистрофии с кариолизисом ядер и отложением липофусцина.

4. Клиническими проявлениями гепатоза собак являются: увеличение печени, диарея, кожный зуд, истеричность слизистых оболочек, асцит. Изменения биохимических показателей крови свидетельствуют о развитии холестатического и цитолитического синдромов, что проявляется повышением уровня холестерина до 9,01 + 0,99 ммоль/л, общего билирубина до 9,36 + 0,61 мкмоль/л, щелочной фосфатазы до 190,03 + 6,34 Е/л, аланинаминотрансферазы до 0,468 + 0,04 мкмоль/ (ч ' мл), аспартатаминотрансферазы до 0,257 + 0,04 мкмоль/ (ч ' мл), глюкозы до 6,94 + 0,31 ммоль/л, а также снижением уровня общего белка до 52,6 + 1,53 г/л и мочевины до 2,77 + 0,17 ммоль/л.

5. Проекционное чрезкожное облучение печени собак аппаратом низкоэнергетического лазерного излучения «АвМв Ь 01» в течение 3 минут при амплитуде 5 Вт, частоте 1200 Гц и модуляции 70 Гц способствует улучшению клинического состояния животных и нормализации гематологических и биохимических показателей.

6. Гистологически установлено, что для гепатоза собак характерно появление в паренхиме печени очагов микронекроза. Структура органа подчеркнута обнажившимся синцитием. ШИК - реакцией выявлено незначительное содержание и неравномерное распределение гликогена в гепатоцитах.

7. Под влиянием низкоэнергетического лазерного излучения в печени уменьшаются признаки зернисто-жировой дистрофии, наблюдается активизация звездчатых ретикулоэндотелиоцитов, усиливаются регенерационные процессы; ШИК - реакцией выявлено повышение содержания гликогена и равномерное его распределение в паренхиме печени.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Метод чрезкожной цитопункции печени рекомендуется как информативный, безопасный для животного и простой в исполнении способ экспресс-диагностики заболеваний печени, не требующий специального дорогостоящего оборудования и заблаговременной подготовки животного. Данный метод внедрен в работу в лечебно-диагностическом центре УрГСХА, в ветеринарной клинике «Неовиг» г. Екатеринбурга, на станции по борьбе с болезнями животных г. Новоуральска и ряде других ветучреждений.

2. В качестве эффективного немедикаментозного способа лечения гепатоза собак рекомендуется применение низкоэнергетического импульсного лазерного излучения при следующих параметрах: мощность излучения 5 Вт, частота импульса 1200 Гц, модуляция 70 Гц. Облучение рекомендуется проводить контактным способом по нескольким точкам в проекции облучаемого органа на поверхность кожи; время одного сеанса 3 минуты, продолжительность курса лазеротерапии - не менее 7 сеансов.

3. Материалы диссертации рекомендуется использовать в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по курсам «Внутренние незаразные болезни» и «Болезни мелких домашних животных» при подготовке специалистов ветеринарного профиля.

& СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Ченчубаева Т.И., Котомцев В.В. Использование лазерной терапии при лечении экзем // Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных: Сб. ст. - Вып. 2. - УрГСХА. - Екатеринбург, 1997. - С. 14 - 16.

2. Ченчубаева Т.И., Котомцев В.В., Шкуратова И.А. Применение магнитолазерной установки «Терус» при лечении экзем // Экологический мониторинг сельскохозяйственных производств в рыночных условиях: Тез. студ. науч. конф. - УрГСХА. - Екатеринбург, 1998. - С. 14 - 15.

3. Ченчубаева Т.И. Использование низкоэнергетического лазера при лечении экзем // Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных: Сб. ст. - Вып. 3. - УрГСХА. - Екатеринбург, 1999. - С. 79 - 80.

4. Ченчубаева Т.И. Применение лазерной терапии при лечении экзем // Материалы 8-го международного конгресса по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных (6-8 апреля 2000 г): Сб. ст. - Москва, 2000.-С. 89-90.

5. Ченчубаева Т.И. Применение лазерного излучения при гепатозах мелких домашних животных // Материалы Второй международной конференции (25 -26 января 2001г): Сб. ст. - Уфа, 2001. - С. 127 - 128.

6. Ченчубаева Т.И. Клиническое и диагностическое значение пункционной биопсии печени при гепатозах плотоядных // Материалы научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии: Сб. ст. - Часть 1. - Казань, 2001. - 233 - 234.

7. Ченчубаева Т.И. Определение структурно-функциональных особенностей печени при гепатозах плотоядных с помощью цитопункции // Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных: Сб. ст. - Вып. 4. -УрГСХА. - Екатеринбург, 2001. - С. 178 - 179.

8. Ченчубаева Т.И. Определение структурно-функциональных особенностей печени при гепатозах собак с помощью цитопункции // Материалы Российской научно-практической конференции: Сб. ст. - Новосибирск, 2003. - С. 91 - 92.

* 17 0 6

Огкопировано ООО "Таймер КЦ" Екатеринбург, ул.Луначарского, 136 тел.: (3432) 503-903, 569-363

1.1. Актуальность темы. Заболевания печени занимают существенное место среди тяжело протекающих болезней животных. Анализ результатов биохимических показателей сыворотки крови показывает, что значительно чаще у мелких домашних животных стали регистрироваться заболевания, имеющие в своем генезе токсические поражения печени (Б.В. Уша, Т.Б. Горовая, С.Э. Жавнис, 2002).

В настоящее время в диагностике болезней печени все большее распространение получает метод аспирационной биопсии с последующим гистологическим исследованием материала и оценкой морфологического состояния содержащихся в биоптате тканей. Биопсия печени дает возможность более точно, по сравнению с другими методами диагностики, оценить функциональное состояние органа. Это связано с высоким совершенством компенсаторных механизмов паренхимы печени, которые нивелируют ограниченные изменения ткани, то есть повреждение даже большой массы гепатоцитов может не сопровождаться клиническими и биохимическими изменениями (З.А. Бондарь, 1970; В.И. Фомичев, 1988; O.A. Дунаевский, 1985; П.Ф. Сутер, 2000; К.Ф. Сэне, Д. Фриц, 1999).

Однако метод прицельной биопсии печени при всей его относительной безопасности и малой травматичности (Б.В. Уша, 2002) является хотя и эффективным, но достаточно сложным и дорогостоящим методом диагностики, требующим наличия специального оборудования и длительной подготовки животного. Исходя из этого, актуальным становится поиск более простого и доступного для выполнения метода получения клеточного материала печени для экспресс-диагностики ее заболеваний.

Сегодня в большинстве стран мира наблюдается интенсивное внедрение лазерного излучения в биологических исследованиях и в практической медицине. Установлено, что лазерная энергия оказывает стимулирующее воздействие на синтез пигмента меланина в красном костном мозге у овец после облучения звездчатых узлов. Это свидетельствует о том, что энергия красного света лазера активирует окислительно-восстановительные процессы и повышает уровень обмена веществ в организме животного (А.Н. Михайлов, 2001). Воздействие низкоинтенсивных лазеров приводит к быстрому стиханию острых воспалительных явлений, стимулирует репаративные процессы, улучшает микроциркуляцию тканей, нормализует общий иммунитет, повышает резистентность организма. В настоящее время доказано, что низкоинтенсивное лазерное излучение обладает выраженным терапевтическим действием (A.A. Городецкий, 1996; С.Б. Брискин, 1996; Г.А. Послов, 2002; В.П. Иноземцев, А.Г. Нежданов, 1999). Анализ результатов ряда исследований, проведенных за последние годы, показывает, что интенсивность восстановительных процессов при воздействии низкоэнергетического лазерного излучения повышается не только в облучаемых участках кожи, но и в подлежащих внутренних органах (И.В. Стряпунина, 1998; 2001). Тем не менее, эффективность применения чрезкожного проекционного облучения печени низкоинтенсивным лазером при гепатозе плотоядных остается малоосвещенным вопросом, требующим дальнейшего изучения возможности использования этого метода терапии как альтернативы медикаментозному лечению.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение влияния низкоинтенсивного лазерного излучения на морфофункциональные показатели печени при гепатозе собак.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

- изучить распространенность гепатоза собак в условиях промышленного города и дать их клинико-биохимическую характеристику; разработать методику чрезкожной цитопункции печени, не требующую использования специального оборудования и длительной подготовки животного; дать клинико-биохимическую характеристику влияния низкоинтенсивного лазерного излучения на организм собак при гепатозе;

- определить характер морфологических изменений печени при гепатозе собак под воздействием на орган низкоэнергетического лазерного излучения.

1.3. Научная новизна исследований. Выявлена степень распространенности гепатоза собак в различных возрастных группах животных, содержащихся в условиях промышленного города.

Разработан и внедрен в практику метод чрезкожной цитопункции, позволяющий проводить прижизненную диагностику заболеваний печени.

Проведены исследования, позволяющие установить взаимосвязь между морфологическими и клинико-биохимическими изменениями, характерными для гепатоза собак.

Дана характеристика гистологических изменений в тканях печени после воздействия низкоэнергетического лазерного излучения, свидетельствующих о развитии компенсаторно-восстановительных процессов в органе.

1.4. Практическая значимость. Выполненные исследования и полученные результаты позволяют считать чрезкожную цитопункцию печени легковыполнимым, безопасным для животного и достаточно информативным методом экспресс-диагностики заболеваний этого органа, который может быть рекомендован для широкого применения.

С помощью экспериментальных исследований определена эффективная и рациональная схема применения низкоэнергетического лазера при гепатозе собак.

Использование низкоинтенсивного лазерного излучения в качестве эффективного физиотерапевтического метода лечения гепатоза собак можно считать альтернативой другим известным методам лечения данной патологии.

Материалы научно-исследовательской работы используются в учебном процессе, при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по курсам: «Внутренние незаразные болезни» и «Болезни мелких домашних животных» в Уральской государственной сельскохозяйственной академии и Уральской государственной академии ветеринарной медицины.

Результаты исследований вошли в методическое пособие «Практические рекомендации по применению низкоинтенсивного импульсного лазерного излучения для проекционного облучения печени при гепатозе собак» (Екатеринбург, 2003), утвержденное МСХ Свердловской области.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Диагностическое значение метода чрезкожной цитопункции печени у собак.

2. Морфологическая характеристика печени собак при гепатозе.

3. Оценка совокупности клинико-биохимических и морфологических изменений при гепатозе собак.

4. Влияние чрезкожного проекционного облучения печени низкоэнергетическим лазером на гистологическую структуру печени и на клинико-биохимический статус животных.

1.6. Апробация работы. Материалы диссертации были представлены и обсуждены на региональной научно-практической конференции «Экологический мониторинг сельскохозяйственных производств в рыночных условиях» (Екатеринбург, 1998); на ежегодных научно-практических конференциях «Актуальные вопросы ветеринарной медицины домашних животных» (Екатеринбург, 1997, 1999, 2001); на Восьмом международном конгрессе по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных (Москва, 2000); на Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2001); на Российской научно-практической конференции, (Новосибирск, 2003).

1.7. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ в трудах, сборниках и материалах научных конференций.

1.8. Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, предложений и библиографического списка.

ВЫВОДЫ.

1. В условиях промышленного города гепатозы собак регистрируются у 29% животных младше 6-летнего и у 42% животных старше 6-летнего возраста.

2. Цитопункция печени является достоверным методом ранней диагностики болезней печени у собак.

3. Гепатозы собак характеризуются наличием в пунктате гепатоцитов в состоянии зернистой и мелкокапельной жировой дистрофии с кариолизисом ядер и отложением липофусцина.

4. Клиническими проявлениями гепатоза собак являются: увеличение печени, диарея, кожный зуд, иктеричность слизистых оболочек, асцит. Изменения биохимических показателей крови свидетельствуют о развитии холестатического и цитолитического синдромов, что проявляется повышением уровня холестерина до 9,01 + 0,99 ммоль/л, общего билирубина до 9,36 + 0,61 мкмоль/л, щелочной фосфатазы до 190,03 + 6,34 Е/л, аланинаминотрансферазы до 0,468 + 0,04 мкмоль / (ч ' мл), аспартатаминотрансферазы до 0,257 + 0,04 мкмоль / (ч ' мл), глюкозы до 6,94 + 0,31 ммоль/л, а также снижением уровня общего белка до 52,6 + 1,53 г/л и мочевины до 2,77 + 0,17 ммоль/л.

5. Проекционное чрезкожное облучение печени собак аппаратом низкоэнергетического лазерного излучения «АвЫ^ Ь 01» в течение 3 минут при амплитуде 5 Вт, частоте 1200 Гц и модуляции 70 Гц способствует улучшению клинического состояния животных и нормализации гематологических и биохимических показателей.

6. Гистологически установлено, что для гепатоза собак характерно появление в паренхиме печени очагов микронекроза. Структура органа подчеркнута обнажившимся синцитием. ШИК — реакцией выявлено незначительное содержание и неравномерное распределение гликогена в гепатоцитах.

7. Под влиянием низкоэнергетического лазерного излучения в печени уменьшаются признаки зернисто-жировой дистрофии, наблюдается активизация звездчатых ретикулоэндотелиоцитов, усиливаются регенерационные процессы; ШИК - реакцией выявлено повышение содержания гликогена и равномерное его распределение в гепатоцитах.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Метод чрезкожной цитопункции печени рекомендуется как информативный, безопасный для животного, простой в исполнении способ экспресс-диагностики заболеваний печени, не требующий специального дорогостоящего оборудования и заблаговременной подготовки животного. Данный метод внедрен в работу в лечебно-диагностическом центре УрГСХА, в ветеринарной клинике «Неовит» г. Екатеринбурга, на станции по борьбе с болезнями животных г. Новоуральска и ряде других ветучреждений.

2. В качестве эффективного немедикаментозного способа лечения гепатоза собак рекомендуется применение низкоэнергетического импульсного лазерного излучения при следующих параметрах: мощность излучения 5 Вт, частота импульса 1200 Гц, модуляция 70 Гц. Облучение рекомендуется проводить контактным способом по нескольким точкам в проекции облучаемого органа на поверхность кожи; время одного сеанса 3 минуты, продолжительность курса лазеротерапии — не менее 7 сеансов.

3. Материалы диссертации рекомендуется использовать в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по курсам «Внутренние незаразные болезни» и «Болезни мелких домашних животных» при подготовке специалистов ветеринарного профиля.