Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональная характеристика иммунной системы, микробиоценоза кишечника при воздействии на организм необработанного янтаря

РАПИЕВ Разиф Абулкарамович

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

ИММУННОЙ СИСТЕМЫ, МИКРОБИОЦЕНОЗА КИШЕЧНИКА ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ НА ОРГАНИЗМ НЕОБРАБОТАННОГО ЯНТАРЯ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени гегпцдивахр^биолоических наук

Уфа-2005

Работа выполнена в лабораториях иммунологии и микробиологии ФГОУ ВПО «Башкирский государственный агарный университет» и в Центре янтарного оздоровления объединения «Мелисса» (г.Уфа)

Научный руководитель - доктор биологических наук, профессор Маннапова Рамзия Тимергалеевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Лобанов Сергей Александрович, доктор биологических наук, профессор Янгуразова Земфира Ахметовна

Ведущая организация - Всероссийский центр глазной и пластической

хирургии (г.Уфа)

Защита состоится «23» декабря 2005 года в 12 часов на заседании диссертационного совета Д. 220.003.02 при ФГОУ ВПО «Башкирский государствен-_дай аграрный университет» (4 корпус, 19 ауд.) (450001, г.Уфа, ул. 50 лет Октября, 34) „

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке БГАУ.

Автореферат разослан «22» ноября 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук

Каримов Ф.А.

2егсН

Llbüölb

' 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние десятилетия возник интерес к изучению состава и физико-химических свойств янтаря. На промышленную основу (благодаря открытию Янтарного комбината в Калининградской области, где добывается до 90% мирового запаса янтаря) было поставлено производство янтарного масла, лака, янтарной кислоты и её солей. Нашли применение различные медикаменты на их основе: витамин D3, кортизон-ацетат, янтарно-кислая ртуть, антисептик иодоль, суксилен, суксимед, предион и др. Значительный интерес в последние годы проявляется к изучению механизмов действия и лечебным свойствам янтарной кислоты и ее солей (Б.й. Сребродольский с соавт., 1971, 1984, 1988; В.Б. Акопян, 2000; И.П. Неумывакин, Я.С. Неумыва-кина, 2000; А. Сличная, 2001; А.Киреев, 2001; С.МБланк, 2003).

Янтарную кислоту используют как биологически активную добавку. Янтарь применяют при иглорефлексотерапии, в виде янтарных ванн, посредством биолокации, путем воздействия на биологически активные точки, для активации энергетического обмена (С.С.Савкевич, 1970, 1076; В.В.Юноев,1977, 1996, 1997; М.Н.Кондрашова, 1979, 1997; ВЖИванов, 1991; Г.П. Малахов, 1997; А.П.Бабич, 1998; Ю.И.Бобко, В.П.Удалов, 1999; О.НГлотова, Н.И. Тимофеева, 2000; Э.И.Гоникман, 2000; ТЛитвинова, 2000, 2002; Л.Г.Пучко, 2001; А.Н.Семенова, О.П.Шувалова, 2001; Н.Н.Мошков, 2002, 2003, 2004; В.А.Хазатов, 2002; Ю.С.Бут, 2003). Однако, до настоящего времени не изученными остаются вопросы влияния легких отрицательных ионов, фитонцидов янтаря и янтарной кислоты выделяемых необработанным янтарем на состояние иммунной системы и микробиоценоза кишечника.

В этой связи целью работы явилось - изучить влияние необработанного янтаря на иммуногенез, иммуноморфологические реакции и естественный микробиоценоз кишечника в организме крыс.

Задачи исследований:

1) Установить влияние необработанного янтаря на показатели крови (динамику гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов) крыс. 2) Изучить влияние необработанного янтаря на показатели иммунного статуса крыс, со сравнительной оценкой: а) естественной резистентности (бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови), б) активности фагоцитарных реакций, в) динамики Т-Е-РОК-лиМфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-ЕАС-лимфоцитов в крови, лимфатических узлах, селезенке и Т-Е-РОК-лимфоцитов в тимусе. 3) Изучить влияние необработанного янтаря на пролиферацию и дифференциацию клеток костного мозга с учетом: а) динамики клеток зернистого ростка лейкоцитов, б) динамики клеток эритроидного ростка, в) динамики лимфоид-ных клеток. 4) Определить влияние необработанного янтаря на иммуномор-фологическую реактивность лимфоидных органов с оценкой: а) иммуномор-фологических перестроек структурных компонентов лимфатических узлов, б) иммуноморфологических перестроек структурных компонентов селезенки, в) иммуноморфологических перестроек структурных

компонентов тимуса. 5) Установить в идо^еянтаря на со-

БИБЛИОТЕКА {

fftt&Z

I пг - ----■ на гГ"

стояние микробиоценоза кишечника с учетом: а) динамики изменения содержания нормофлоры (бифидобактерий и лактобацилл), б) динамики изменения содержания условно-патогенных микроорганизмов.

Научная новизна исследований состоит в том, что впервые проведено исследование влияния необработанного янтаря на показатели крови, естественной резистентности, фагоцитоза, Т- и В-систем иммунитета, иммуноморфоло-гические реакции в центральных и периферических органах иммуногенеза (костном мозге, тимусе, лимфатических узлах и селезенке). Впервые установлено влияние необработанного янтаря на состояние микробиоценоза кишечника крыс.

Теоретическая и практическая значимость работы. На основании полученных результатов, а также сравнительного изучения влияния необработанного янтаря в форме аэроионов, фитонцидов янтаря и янтарной кислоты на показатели крови, естественной резистентности, фагоцитоза, Т- и В-систем иммунитета, иммуноморфологическую реактивность костного мозга, тимуса, поверхностного пахового лимфатического узла, селезенки, колонизационную резистентность кишечника, с учетом механизма влияния на организм легких отрицательных ионов, фитонцидов и янтарной кислоты, обобщены биологические закономерности изменения иммуногенеза, иммуноморфологических перестроек в лимфоидных органах, микробиоценоза кишечника, способствующие повышению иммунного статуса, восстановлению естественного микробиоценоза кишечника.

Теоретически и практически обоснованы высокие иммуностимулирующие и иммунокоррегирующие свойства необработанного янтаря, способствующие созданию в организме прочного иммунного баланса, профилактике вторичных иммунодефицитов и дисбактериозов. Полученные данные позволяют рекомендовать всесторонние исследования необработанного янтаря для применения в медицине и ветеринарной медицине.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Влияние разных форм применения необработанного янтаря (в виде легких отрицательных ионов и фитонцидов янтаря в янтарных комнатах и в виде янтарной кислоты в янтарном порошке) на повышение гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов крови, активизацию естественной резистентности и фагоцитоза.

2. Активизация необработанным янтарем показателей Т- и В-систем иммунитета (Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, В-ЕАС-лимфоцитов), а также восстановление реакции Т-супрессоров в крови, лимфатических узлах, селезенке и тимусе.

3. Иммуноморфологические реакции в костном мозге, тимусе, лимфатических узлах и селезенке под влиянием разных форм применения необработанного янтаря.

4. Активизация нормофлоры (бифидобактерий и лактобацилл) и затормаживание размножения до уровня физиологических норм условно-патогенных микроорганизмов под влиянием разных форм применения необработанного янтаря.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на Всероссийской научно-практической конференции «Экология. Труд. Здоровье. Взгляд в XXI век» (Уфа, 1999); Международной научной конференции «Современные проблемы истории естествознания в области химии, химиче-

ских технологий и нефтяного дела» (Уфа, 2004); на конференциях профессорско-преподавательского состава БГАУ (1999-2004); на российском научном форуме «РеаСпоМед, 2005» «Современные технологии в реабилитации и спортивной медицине» (Москва, 2005).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 12 работах. По результатам исследований изданы методические рекомендации «Применение продуктов натурального янтаря в условиях «янтарной комнаты» в комплексе восстановительного лечения больных», утвержденные Зам. министра здравоохранения РБ С.Ш. Мурза-баевой и ректором БГМУ, чл.-корр. РАМН, профессором В.М. Тимербулато-вым. - Уфа, 2003. - 18 с. По материалам диссертации получены два патента: 1. Рапиев P.A., Рапиев P.A., Рапиев Р.А Патент РФ № 2246330 от 07.05.2003 «Терапевтический кабинет - аэроионизатор». 2. Рапиев P.A., Рапиев P.A., Рапиев P.A. Патент РФ № 2246328 от 07.05.2003 «Способ и устройство Рапиевых P.A. «Защита человека от излучений электрических приборов».

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 157 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Работа иллюстрирована 36 таблицами 20 рисунками в виде гистограмм, графиков и микрофотографий. Список литературы включает 200 работ, в том числе 56 иностранных авторов.

2.0 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнялась с 2001 года на базе лаборатории микробиологии, иммунологии Башкирского госагроуниверситета и в Центре янтарного оздоровления объединения «Мелисса» (г.Уфа). В двух сериях опытов по изучению влияния необработанного янтаря на гематологические показатели, иммунологическую реактивность и состояние естественного микробиоценоза кишечника было использовано 108 животных - белые лабораторные крысы с 1-месячного возраста весом 55,0-60,0 г, полученные из питомника лабораторных животных ФГОУ ВПО «Микроген» - Иммунопрепарат. Крысы 1-Й группы были контрольные. Они находились в одинаковых условиях кормления и содержания с животными 2-й и 3-й групп. Крысы 2-й и 3-й групп - опытные. Животные 2 группы 2 часа в сутки в течение 10 дней содержались в фанерном ящике, выстланным янтарем, размером 60x60x60 см., т.е. находились под влиянием лёгких отрицательных ионов, фитонцидов необработанного янтаря и аэрозолей янтарной кислоты. Крысам 3 группы в рацион вносили янтарный порошок в дозе 0,5 г на голову, 1 раз в день. Взятие крови и фекалий проводили до начала опытов, а затем через 3, 7, 15, 30 и 50 дней от начала опытов. Иммуноморфологические исследования проводили до начала опытов, а затем через 15 и 50 дней.

Бактерицидную активность сыворотки крови крыс определяли фотоэлек-

троколориметрическим методом, лизоцимную активность - по В. Г. Дорофей-чуку (1983). Для получения лимфоцитов пробы крови брали в пробирки с предварительным добавлением гепарина из расчета 25 ЕД на 1 мл крови. Лимфоциты выделяли разделением в градиенте плотности фиколл-верогра-фин (плотность 1,007 г/мл). Выделение Т- и В-лимфоцитов проводили в реакции розеткообразования. Оценку субпопуляций Т-лимфоцитов проводили в реакции розеткообразования с теофиллином (Г.Фримель, 1987). Для приготовления клеточной суспензии из лимфоидных органов после убоя животных тотчас брали брыжеечный лимфатический узел, селезенку и тимус, взвешивали и из средней части их извлекали небольшой кусочек. Его помещали в стеклянный гомогенизатор и добавляли среду №199 из расчёта 1 мл на 20 мг органа (что важно для последующего пересчета клеток на целый орган). Кусочек растирали осторожно в гомогенизаторе. В полученной суспензии выявляли с помощью 0,1% раствора трипанового синего, число жизнеспособных клеток. Затем определяли число лейкоцитов, содержащихся во всем лимфоидном органе. Для определения фагоцитарной активности нейтрофилов использовали гепаринизированную кровь. Объектом фагоцитоза служили суточные культуры Staphylococcus aureus, выращенные на агаре Хоттингера.

Кусочки органов для гистологических исследований фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилин-эозином, азур П-эозином. Площадь зон лимфоидных органов определяли с помощью окуляр-сетки по Г. Г. Автандилову.

Для выделения анаэробных бифидобактерий в пробирки с 13-15 мл регенерированной в течение 45 минут среды Блаурокка засевали 1 мл фекалий в разведении до 10"9. Посевы инкубировали при 37°С в течение 24 часов. Лакто-бактерии выращивали на среде МРС (Мозера-Рогоза-Шарпа). Кислотообразующую активность популяций лактобацилл определяли на стандартных пластиковых чашках Петри, глубинным посевом разведений на агар МРС, с 1% мела, после 16-часового культивирования при температуре 39°С, по зонам просветления агара. Клостридии культивировали на мясо-пептонном-печеночном бульоне (МППБ) Китта-Тароцци, плотной среде Вильсона-Блера, глюкозо-кровяном агаре Цейслера. Для выделения стафилококков использовали элективные среды - солевой кровяной МПА (с 8-10% NaCl, 5% дефибри-нированной крови), кровяной МПА. Из чистой культуры, выращенной на МПА, ставили реакции на плазмокоагуляцию, фибринолизин, лецитиназу, ДНК-азу и скрытую гемолитическую активность. Из биохимических свойств определяли разжижение желатины, коагуляцию молока, ставили реакции на маннит, лактозу, сахарозу, аммиак, сероводород. Выделение и дифференциацию псевдомонов проводили на питательных средах при 40°С с маннитолой, гераниолой, азелатом, а- аргинином и а- гистидином.

Полученные цифровые данные обрабатывали статистически с использованием программ Statistica v.5.5 по Стьюденту (Г.Ф.Лакин, 1980).

2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1 Влияние необработанного янтаря на гематологические показатели крыс

Фоновый уровень содержания эритроцитов в крови крыс и его значение у животных 1 контрольной группы, за период опытов, не превышало 3,2-3,6 млн/мкл. Содержание эритроцитов в крови животных 2 и 3 групп увеличивалось по срокам исследований и было выше показателей контрольных крыс: к 3 дню опыта - в 1,15 и 1,27 раза, к 7 дню-в 1,46 и 1,56 раза, к 15 дню - в 1,47 и 1,55 раза, к 30 дню-в 1,6 и 1,54 раза, к 50 дню - в 1.58 и 1,52 раза.

Подобным образом изменялась в крови крыс динамика гемоглобина (табл. 1).

Фоновое значение и показатель лейкоцитов в крови крыс 1 контрольной группы колебалось на уровне от 7,7 до 8,5 тыс./мкл. Показатель уровня лейкоцитов в крови животных 2 и 3 опытных групп имел тенденцию к повышению. К 3 дню от начала опыта содержание лейкоцитов в крови крыс описы-

Табл. 1 Влияние необработанного янтаря на динамику изменения содержания гемоглобина в крови крыс (в г/л)

Группы животных Стат показатель Фон Сроки исследования в днях от начала опытов

з 7 15 | 30 50

1 М 10,90 11,50 11,40 11,70 10,80 11,60

Контроль ±ш 0,59 0,53 0,43 0,50 0,63 0Д6

СУ, % 12,06 10,27 8,39 9,47 13,09 4,97

2. М 11,20 12,70 13,80 15,00 15,30 15,00

Легкие ±П1 0,37 0,58 0,58 0,55 0,58 1,14

отрицательные Су, % 7,47 10,26 9,44 8,16 8,52 16,99

ионы янтаря Р * ** ** »*

3. М 11,30 13,00 14,30 15,20 15,00 14,80

Янтарный ±ш 0,54 1,05 0,30 0,80 0,45 0,58

порошок СУ, % 10,66 18,04 4,69 11,77 6,67 8,81

с кормом Р ** * ** **

Примечание Здесь и далее в таблицах * - Р>0,95, ** - Р>0,99, *** - Р>0,999 по сравнению с контролем

ваемых групп было выше, чем в контроле, в 1,12 и 1,17 раза. Эта тенденция повышения количества лейкоцитов нарастала и к 7 дню исследований уровень лейкоцитов в крови крыс 2 и 3 групп был выше, чем в контроле в 1,15 и 1,17 раза, к 15 дню - в 1,32 и 1,27 раза, к 30 дню - в 1,36 и 1,29 раза, к 50 дню - в 1,2 и 1,16 раза.

2.2.2 Коррекция необработанным янтарем иммунологической и иммуноморфологической реактивности организма 2.2.2.1 Влияние необработанного янтаря на состояние естественной резистентности крыс Бактерицидная активность сыворотки крови животных 1 контрольной группы и ее фоновое значение у крыс 2-3 групп, за период наших опытов, колебалась на уровне от 30,4 до 33,6% Показатель бактерицидной активности сыворотки крови крыс 2 и 3 групп, в процессе опыта, имел тенденцию к

выраженному повышению.

Значение бактерицидной активности сыворотки крови крыс 2 группы, подвергнутых воздействию легких отрицательных ионов янтаря, вследствие ежедневного содержания в янтарном ящике в течение 10 дней по 2 часа увеличилось, по сравнению с контрольным показателем, через 3 дня от начала опыта в 1,33 раза (на 10,3%), через 7 дней - в 1,46 раза (на 14,9%), через 15 дней - в 1,62 раза (на 21,0%), через 30 дней - в 1,84 раза (на 27,6%), через 50 дней - в 1,56 раза (на 18,2%). Подобным образом изменялась динамика бактерицидной активности сыворотки крови животных 3 группы, которым в рацион вводили с кормом янтарный порошок.

Уровень бактерицидной активности сыворотки крови крыс 3 группы превышал контрольные цифры животных 1 группы к 3 дню исследования в 1,24 раза, к 7 дню в 1,38 раза, к 14 дню в 1,55 раза, к 30 дню в 1,77 раза, к 50 дню в 1,46 раза. При этом показатели бактерицидной активности сыворотки крови крыс 2 группы, на эти же сроки опыта, незначительно были выше его уровня у животных 3 группы: в 1,07, в 1,05, в 1,04, в 1,03 и 1,06 раза.

Активность лизоцима в сыворотке крови крыс 1 контрольной группы, за период опытов, колебалась в пределах от 13,9 до 14,9%. Описываемый показатель в сыворотке крови животных 2 и 3 опытных групп имел тенденцию к существенному повышению по срокам опыта. Так, по 2 группе он превышал контрольную цифру на 3 день опыта в 1,27 раза, на 7 день в 1,46 раза, на 15 день в 1,94 раза, на 30 день в 1,82 раза, на 50 день в 1,91 раза. Уровень лизо-цимной активности сыворотки крови крыс 3 группы был выше его значений у животных в контрольной группе к 3 дню опыта в 1,22 раза, к 7 дню в 1,43 раза), к 15 дню в 1,85 раза, к 30 дню в 1,76 раза, к 50 дню в 1,83 раза.

Значение лизоцимной активности сыворотки крови крыс 3 группы было несколько выше показателей животных 2 группы: на 3 день опыта в 1,03 раза (на 0,7%), на 7 день в 1,02 раза (на 0,4%), на 15 день в 1,04 раза (на 1,3%), на 30 день в 1,03 раза (на 0,9%), на 50 день в 1,04 раза (на 1,2%).

2.2.2.2 Коррекция необработанным янтарём фагоцитарных реакций в организме крыс

Данные, полученные при исследовании динамики изменения фагоцитарной активности лейкоцитов крови крыс преде гавлены в табл. 2.

Фагоцитарный индекс лейкоцитов контрольных животных находился на уровне от 1,87 до 2,16 ед. Данный показатель имел существенные отличия у крыс 2 и 3 опытных групп. Индекс фагоцитов крови крыс 2 группы увеличился, по сравнению с его значением в контроле, к 3 дню опыта в 2,25 раза (на 2,71 ед.), к 7 дню в 2,99 раза £на 4,09 ед.), к 15 дню* в 3,72 раза (на 5,09 ед.), к 30 дню в 2,88 раза (на 3,59 ед.), к 50 дню в 2,52 раза (на 3,24 ед.).

В крови крыс 3 группы фагоцитарный индекс превысил контрольный уровень на 3 день опыта в 1,68 раза (на 1,48 ед.), на 7 день в 2,86 раза (на 3,82 ед.), на 15 день в 3,3 раза (на 4,31 ед.), на 30 день в 2,43 раза (на 2,73 ед.), на 50 день в 1,94 раза (на 2,0 ед.) Показатель фагоцитарного индекса крови крыс 2 группы также незначительно превышал аналогичные данные животных 3

группы на эти сроки опыта: в 1,33 раза (на 1,23 ед.), в 1,04 раза (на 0,27 ед.), в 1,12 раза (на 0,78 ед.), в 1,18 раза (на 0,86 ед.), в 1,3 раза (на 1,24 ед.).

Табл. 2 Влияние необработанного янтаря на динамику изменения фагоци-

Группы Стат Фон Сроки исследования в днях от начала опытов

животных показат 3 | 7 | 15 | 30 | 50

1. М 26,90 27,30 26,20 27,40 26,90 27,60

Контроль ±т 0,67 1,15 1,03 1,32 0,86 1,10

СУ, % 5,55 9,38 8,82 10,74 7,18 8,88

2 М 27,40 45,30 58,60 50,70 48,70 46,50

Легкие ±т 0,87 1,45 1,21 0,83 0,80 1,10

отрицательные Су, % 7,11 7,14 4,61 3,66 3,67 5,27

ионы янтаря Р *** *** *** *** ***

3 М 26,50 44,90 56,90 48,00 47,30 46,20

Янтарный ±т 0,81 1,14 0,64 1,52 0,86 0,80

порошок СУ, % 6,80 5,70 2,52 7,06 4,07 3,87

с кормом Р *** *** *** *** ***

Завершенность фагоцитоза в крови животных 1 контрольной группы составила, за период исследований, 1Д2 - 1,31 ед. В процессе опыта описываемый показатель у животных 2 и 3 групп имел тенденцию к увеличению. По 2 группе его повышение составило к 3, 4, 15, 30 и 50 дням опыта, соответственно, в 1,65 раза, в 2,09 раза, в 3,05 раза, в 2,7 раза, в 2,38 раза.

Фагоцитарный индекс лейкоцитов крови крыс 3 группы превысил контрольные цифры животных 1 группы к 3 дню опыта в 1,76 раза (на 0,14 ед ), к 7 дню в 1,96 раза (на 1,21 ед.), к 15 дню в 2,93 раза (на 2,17 ед.), к 30 дню, в 2,46 раза (на 1,87 ед.), к 50 дню в 2,09 раза (на 1,43 ед.).

2.2.2.3 Влияние необработанного янтаря на показатели Т- и В-систем иммунитета

2.2.2.3.1 Динамика изменения содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-ЕАС-лимфоцитов в крови

Т-Е-РОК-лимфоциты в крови крыс 1 контрольной группы находились, за период опытов, на уровне от 3,84 до 4,42-109/л. Легкие отрицательные ионы и фитонциды янтаря (2 группа) значительно активизировали Т-клетки в организме крыс. Их уровень в крови увеличился, по сравнению с показателем контроля к 3, 7, 15, 30 и 50 дням опыта в 1,16, в 1,24, в 1,85, в 1,34 и 1,35 раза (на 0,71109/л, на 1,09 109/л, на 3,21109/л, на 1,52 109/л и 1,42 109/л).

Подобным образом изменялась динамика Т-Е-РОК-лимфоцитов в крови крыс 3 группы. Здесь показатель Т-Е-РОК-клеток был выше, чем у контрольных животных на 3 день опыта в 1,08 раза (на 0,37 109/л), на 7 день в 1,28 раза (на 1,25-109/л), на 15 день в 1,73 раза (на 2,78 109/л), на 30 день в 1,39 раза (на 1,74-109/л), на 50 день в 1,3 раза (на 1,21109/л) Динамичной последовательности в повышении числа Т-Е-РОК-клеток в крови крыс 2 и 3 групп не наблюдалось, ибо в разные сроки в этих группах степень повышения количества Т-Е-РОК-лимфоцитов был выражен не одинаково.

Данные по исследованию динамики изменения содержания Т-хелперов и Т-супрессоров в крови крыс представлены на рис. 1 А, Б.

Результаты, исследования изменения содержания В-ЕАС-лимфоцитов в крови крыс приведены в табл. 3.

4

3,5 3 2,5 2 1,5 ■ 1

0.5 1.15

I1

1,<К 1

0,95 Й.З 0^5 ЙЯ

Фон

Табл.

1Д

3 I 7 I 15 | 30 I 50 Сроки исследования в днях от начала опытов

Рис. 1 Влияние необработанного янтаря на динамику изменения содержания в крови крыс Т-хелперов (А) и Т-супрессоров (Б) в (М*109/л)

Ы Контрольная (здоровые) □ Легкие отрицательные ионы янтаря В Янтарный порошок с кормой

3 Влияние необработанного янтаря на динамику изменения содер-

жания в крови крыс В-ЕАС-лимфоцитов (М*109/л)

Группы Стат Фон Сроки исследования днях от начала опытов

животных показат 3|7| 15 I 30 | 50

1 М 2,46 2,59 2,84 2,93 3,12 2,96

Контроль ±ш 0,06 0,04 0,06 0,04 0,07 0,04

СУ, % 5,12 3,15 4,55 2,79 4,81 3,24

2 М 2,44 2,96 3,27 3,94 3,87 3,57

Легкие ±ш 0,05 0,05 0,04 0,05 0,04 0,05

отрицательные СУ, % 4,67 3,85 2,56 2,89 2,52 3,37

ионы янтаря Р *»» *** *** •** ***

3. М 2,48 2,79 3,16 3,72 3,61 3,26

Янтарный ±т 0,04 0,04 0,05 0,04 0,08 0,04

порошок Су, % 3,37 3,21 3,61 2,25 4,84 2,74

с кормом Р *• *»» «»» *** *♦*

2.2.2.3.2 Динамика изменения содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-ЕАС-лимфоцитов в поверхностном паховом лимфатическом узле крыс

Содержание Т-Е-РОК-лимфоцитов в поверхностном паховом лимфатическом узле крыс 1 контрольной группы, за период опытов, колебалось на уровне от 29,4 до 32,3%. Описываемый показатель в лимфатическом узле животных 2 и 3 опытных групп, в процессе опытов, имел тенденцию к активизации Его содержание повысилось, по сравнению с фоновым и контрольным значением в лимфоузле животных 2 группы к 7 дню опыта в 1,15 и 1,07 раза, к 15 дню в 1,18 и 1,19 раза, к 30 дню в 1,25 и 1,14 раза, к 50 дню в 1,21 и 1,19 раза .

Уровень Т-Е-РОК-лимфоцитов в поверхностном паховом лимфатическом узле животных 3 группы увеличился, по сравнению с первоначальным фоновым значением и показателем контрольных животных, через 7 дней опыта в 1,05 и 1,02 раза (на 1,8 и 0,9%), через 15 дней в 1,09 и 1,15 раза (3,0 и 4,7%),

через 30 дней в 1,14 и 1,15 раза (на 4,6 и 4,8%), через 50 дней в 1,13 и 1,16 раза (на 4,1 и 4,9%).

При этом, во все эти сроки опыта, показатель Т-Е-РОК-лимфоцитов в лимфоузле крыс 2 группы был выше значения его у животных 3 группы: в 1,04 раза, в 1,03 раза, в 1,05 раза и 1,03 раза.

Содержание Т-хелперов в лимфатическом узле крыс 1 контрольной группы, за период наших опытов, выделялось на уровне от 14,8 до 16,4%.

Янтарь активизировал хелперные реакции в организме животных. Так, в лимфоузле крыс 2 группы уровень Т-хелперов повысился, по сравнению с фоновым и контрольном показателем, к 7 дню опыта в 1,15 и 1,23 раза (на 2,4 и 3,5%), к 15 дню в 1,35 и 1,37 раза (на 5,7 и 5,9%), к 30 дню в 1,28 и 1,36 раза (на 4,6 и 5,5%), к 50 дню в 1,37 и 1,32 раза (на 5,9 и 5,4%).

Подобным образом изменялось содержание Т-хелперов в лимфоузле крыс 3 группы.

Показатель Т-супрессоров в крови крыс 2 и 3 опытных групп имел тенденцию к некоторому понижению, по сравнению с контрольными цифрами животных 1 группы: к 7 дню опыта в 1,14 и 1,17 раза, к 15 дню в 1,16 и 1,22 раза, к 30 дню в 1,26 и 1,24 раза, к 50 дню в 1,25 и 1,26 раза.

Значительная активизация наблюдалась в лимфоузле крыс 2 и 3 групп со стороны В-ЕАС-лимфоцитов. Содержание В-ЕАС-клеток в лимфатическом узле животных 2 и 3 групп повысилось, по сравнению с показателем животных 1 контрольной группы к 7 дню опыта в 1,19 и 1,12 раза, к 15 дню в 1,24 и 1,16 раза, к 30 дню в 1,19 и 1,12 раза, к 50 дню в 1,27 и 1,2 раза.

2.2.2.3.3 Динамика изменения содержания Т-Е-РОК и В-ЕАС-лимфоцитов в селезенке

Данные по изучению динамики изменения содержания Т-Е-РОК и В-ЕАС-лимфоцитов в селезенке крыс представлены в таблице 4.

Табл. 4 Влияние необработанного янтаря на динамику изменения содер-

жания Т-Е-РОК-лимфоцитов в селезенке крыс (%)

Группы I ЖИВОТНЫХ 1 Стат показатель Фон Сроки исследования в днях от начала опытов

7 >5 30 50

1. М 27,80 28,20 27,80 26,90 27,30

Контроль ±т 0,86 1,28 0,58 0,37 1,02

СУ, % 6,89 10,19 4,64 3,04 8,38

2 М 28,00 31,40 32,20 33,40 33,00

Легкие ±т 0,84 0,51 1,02 0,81 0,89

отрицательные Су, % 6,68 3,63 7,08 5,44 6,06

ионы янтаря Р <0,95 * *** **

3 М 27,60 30,50 31,70 34,00 33,20

Янтарный ±т 0,93 1,00 0,62 1,00 1,24

порошок СУ, % 7,51 7,33 4,41 6,58 8,36

с кормом Р <0,95 *# *» *

Параллельно с активизацией клеточного звена иммунитета в селезенке крыс 2 и 3 групп активизировалось и гуморальное звено иммунных реакций. Так, уровень В-ЕАС-лимфоцитов в селезенке животных 1 группы не превышал значения от 32,6 до 34,3%. Показатель содержания В-ЕАС-лимфоцитов в

селезенке животных 2 и 3 групп повысился, по сравнению с его уровнем в контроле к 7 дню опыта в 1,12 и 1,08 раза (на 4,0 и 2,8%), к 15 дню в 1,16 и 1,09 раза (на 5,7 и 3,3%), к 30 дню в 1,12 и 1,05 раза (на 4,3 и 1,9%), к 50 дню в 1,15 и 1,05 раза (на 5,1 и 1,8%).

Т-Е-РОК-лимфоциты в тимусе крыс 1 контрольной группы, за период опытов, выделялись на уровне от 386,5 до 427,6 млн./на орган. Показатель Т-клеток в тимусе повышался по срокам исследований. К 7 дню опыта содержание Т-Е-РОК-лимфоцитов в тимусе крыс 2 и 3 групп увеличилось, по сравнению с его показателем в контроле, в 1,12 и 1,08 раза. К 15 дню исследований эта разница в сторону превышения Т-Е-РОК-клеток в тимусе увеличилось в 1,23 и 1,16раза, к 30 дню в 1,5 и 1,31 раза, к 50 дню в 1,39 и 1,31 раза.

2.2.2.4 Влияние необработанного янтаря на пролиферацию и дифференциацию клеток костного мозга крыс Результаты, полученные при определении в миелограмме динамики изменения содержания клеток зернистого ростка лейкоцитов, представлены в табл. 5. Клетки эритроидного ростка в миелограмме крыс 1 контрольной группы, за период опыта, выделялись в пределах от 26,9 до 28,0%.

Их значение в костном мозге крыс 2 и 3 групп в процессе опыта повышалось. Уровень клеток эритроидного ростка в костном мозге крыс 2 группы увеличился к 3 дню от начала опыта в 1,32 раза (на 9,0%), к 7 дню в 1,5 раза (на 13,5%), к 15 дню в 1,73 раза (на 19,9%), к 30 дню в 1,87 раза (на 24,6%), к 50 дню в 1,85 раза (на 23,3%).

Табл. 5 Влияние необработанного янтаря на динамику изменения содержания клеток зернистого ростка лейкоцитов в миелограмме крыс (%)

Группы Стат. Фон Сроки исследования в днях от начала опытов

животных показат. 3 | 7 | 15 | 30 | 50

1. М 36,40 35,70 36,00 34,90 36,20 35,30

Контроль ±ш 0,37 0,74 1,23 0,72 0,67 1,52

Cv, % 2,24 4,63 7,65 4,59 4,14 9,63

2. М 35,60 42,70 47,60 58,70 60,20 58,70

Легкие ±ш 0,51 0,97 0,81 1,02 0,80 1,24

отрицательные Cv, % ЗДО 5,08 3,82 3,89 2,97 4,73

ионы янтаря Р ** **» *** *•* ***

3. М 36,10 40,50 44,90 54,80 57,60 54,20

Янтарный ±ш 1,17 1,10 0,75 1,46 1,69 1,66

порошок Cv, % 7,223 6,048 3,727 5,969 6,565 6,829

с кормом Р * *** *** *** »»*

Несколько меньшими темпами, отмечалось повышения числа клеток

эритроидного ростка в костном мозге крыс 3 группы. Их уровень превышал показатели животных 1 контрольной группы на 3 день опыта в 1,25 раза (на 7,1%), на 7 день в 1,44 раза (на 12,1%), на 15 день в 1,63 раза (на 17,2%), на 30 день в 1,78 раза (на 22,1%), на 50 день в 1,82 раза (на 22,4%).

Содержание лимфоидных клеток в костном мозге крыс 1 контрольной группы, за период наших исследований, выделялось на уровне от 4,96 до 5,34%. Уровень клеток лимфоидного ряда в костном мозге крыс 2 и 3 групп, в

процессе опытов, имел тенденцию к активному повышению. Их значения превышали показатели животных 1 группы к 3 дню опыта соответственно, в 1,54 и 1,41 раза, к 7 дню в 1,94 и 1,7 раза, к 15 дню в 2,66 и 2,33 раза, к 30 дшо в 2,54 и 2,18 раза, к 50 дню в 2,23 и 1,76 раза.

При этом содержание лимфоидных клеток, во все сроки опыта, в костном мозге крыс 2 группы было выше, чем у животных 3 группы.

2.2.2.5 Влияние необработанного янтаря на иммуноморфологическую реактивность лимфоидных органов 2.2.2.5.1 Иммуноморфологические перестройки структурных компонентов

поверхностного пахового лимфатического узла В связи с тем, что в предыдущих наших исследованиях янтарь способствовал активизации Т- и В-лимфоцитов в организме животных мы сочли необходимым изучить изменения в структурах лимфоидных органов, имеющих непосредственное отношение к дозреванию и участию этих клеток в иммунном ответе. В поверхностном паховом лимфатическом узле крыс в качестве В-зависимой зоны мы измеряли площадь лимфатических узелков без светлых и со светлыми центрами и мякотных тяжей, а в качестве Т-зависимой зоны -площадь паракортикальной зоны. Для более полного суждения об иммуно-морфологической перестройке узла мы также измеряли площадь коркового плато органа. Иммуноморфологические исследования мы проводили до начала опыта, а затем через 15 и 50 дней от начала опыта (рис. 2).

В лимфатическом узле крыс 1 контрольной группы на долю лимфатических узелков без светлых центров приходилось от 7,86 до 8,05%, со светлыми центрами - от 2,94 до 3,31%, мякотных тяжей - от 10,9 до 11,4%, паракортикальной зоны - от 8,7 до 9,6% площади (рис. 2).

70 60 50 40 30 20 10 о

70 60 ■ 50 • 40 ■ 30 ■ 20 10 • о •

70 60 50 40 30 20 10 0

ЕЙЙЗГТТТГ

I , ЕЕМУЛ I

I_шзШГ

р в □ Контроль - здоровью В Легкие отрицательные ионы янтаря □ Янтарный порошок с коршэм

«да Ш

^шп —1 РМУ/Л 1 ч&яЮХЛ 1

Корковое плато

Мякотные тяжи

Паракортикальна я зона

Лимфатические узелки Лимфатические узелги бег светлых центров со светлыми центрами

Рис 2. Динамика соотношения структурных компонентов в лимфатическом узле крыс по вариантам опыта А- фон, Б - через 15 дней: В - через 50 дней, %

В лимфатическом узле крыс 2 и 3 опытных групп отмечались выраженные позитивные иммуноморфологические перестройки. К 15 дню от начала опыта в лимфоузле крыс 2 и 3 групп площадь, занимаемая лимфатическими узелками без светлых центров, увеличилась, по сравнению с контрольным и фоновым значением, по 2 группе в 1,66 и 1,75 раза (на 5,35 и 5,70%), по 3 группе в 1,51 и 1,5 раза (на 4,15 и 4,08%). Эта тенденция нарастала и к концу исследований (50 дней) площадь лимфатических узелков без светлых центров в лимфатическом узле животных 2 группы превышала контрольный показатель, на этот срок опыта, в 2,36 раза (на 10,74%), фоновый в 2,43 раза (на 10,96%). Показатель площади лимфатических узелков без светлых центров в лимфоузле крыс 3 группы к 45 дню опыта был выше контрольной цифры в 2,15 раза (на 9,04%), фонового значения - в 2,08 раза (на 8,78%).

Площадь лимфатических узелков со светлыми центрами в лимфатическими узле животных 2 группы к 15 дню опыта увеличилась, по сравнению с контрольным и фоновым показателем, соответственно, в 2,57 и 2,69 раза (на 5,15 и 5,29%). К концу опыта (50 день) эта разница имела тенденцию к дальнейшему повышению и составила с контролем в 3,53 раза (на 8,39%), с фоном в 3,75 раза (на 8,58%). Площадь, занимаемая лимфатическими узелками со светлыми центрами в лимфоузле крыс 3 группы увеличилась к 15 дню исследований, по сравнению с контрольным значением, в 1,95 раза (на 3,12%), с фоновым - в 1,96 раза (на 3,14%). К концу опыта разница с контрольным и фоновым показателем повысилась и составила в 2,76 и 2,82 раза (на 5,83 и 5,9%). Площадь мякотных тяжей тоже имела тенденцию к расширению. Эти изменения по срокам опыта представлены на рис. 2

Площадь паракортикальной Т-зависимой зоны в лимфоузле опытных животных также значительно активизировалась под влиянием необработанного янтаря. По 2 группе данный показатель увеличился к 15 дню опыта, по сравнению с фоновым и контрольным значением, 1,32 и 1,29 раза (на 3,0 и 2,8%), к 50 дню - в 1,53 и 1,5 раза (на 4,9 и 4,7%). При этом показатель 50 дня исследования превышал значение предыдущего срока опыта в 1,15 раза (на 1,9%).

Площадь паракортикальной зоны поверхностного пахового лимфатического узла крыс 3 группы увеличилась к 15 дню Ошлта, по сравнению с контрольным показателем, в 1,23 раза (на 2,2%), с фоновым в 1,26 раза (на 2,4%). В последующем эта тенденция нарастала и к 50 дню опыта площадь паракортикальной зоны лимфоузла крыс 3 группы превышала контрольную цифру в 1,42 раза (на 3,9%), фоновый показатель в 1,45 раза (на 4,1%), значение предыдущего срока исследования (15 день) в 1,14 раза (на 1,7%).

Параллельно с активизацией и расширением площади иммунокомпетентных структур поверхностного пахового лимфатического узла крыс 2 и 3 опытных групп наблюдалось уменьшение площади, занимаемой корковым плато органа.

Площадь коркового плато лимфатического узла крыс 2 группы к 15 дню опыта уступала контрольной цифре в 1,35 раза (на 17,4%), фоновому значению в 1,34 раза (на 17,1%). К 50 дню опыта эта разница, в сторону понижения, была с контролем в 1,85 раза (на 31,1%), с фоном в 1,84 раза (на 30,5%), с показателем предыдущего

срока исследования в 1,37 раза (на 13,4%). Площадь коркового плато в лимфатическом узле крыс 3 группы к 15 дню опыта уменьшилась, по сравнению с контрольным и фоновым значением, в 1,24 раза (на 13,3%). К концу опыта (50 день) этот процесс был выражен еще более значительнее. Площадь коркового плато лимфоузла крыс 3 группы, к этому сроку исследования, уступала показателю контроля в 1,49 раза (на 21,9%), значению предыдущего срока опыта в 1,21 раза (на 9,4%).

2.2.2.5.2 Иммуноморфологические перестройки структурных компонентов селезенки

В качестве В-зависимой зоны в селезенке измеряли площадь лимфатических узелков без светлых и со светлыми центрами, в качестве Т-зависимой зоны - площадь периваскулярных лимфоидных муфт.

В селезенке животных 1 контрольной группы на долю красной пульпы органа приходилось от 68,9 до 70,1%, лимфатических узелков без светлых центров от 12,7 до 13,15%, со светлыми центрами от 3,87 до 4,02%, периваскулярных лимфоидных муфт от 6,31 до 6,93% от площади гистосреза.

Селезенка крыс 2 и 3 опытных групп реагировала высокой иммуноморфо-логической реактивностью на влияние аэрозоля легких отрицательных ионов создающихся из электронов янтаря и янтарной кислоты. Это проявлялось в виде расширения площадей В- и Т-зависимых зон.

В селезенке животных 2 группы регистрировалось расширение площади лимфатических узелков без светлых центров. К 15 дню опыта они превышали контрольный уровень в 1,39 раза (на 5,1%), фоновый в 1,47 раза (на 5,8%). Этот процесс прогрессировал и к концу опытов (50 день) площадь лимфатических узелков без светлых центров в селезенке крыс 2 группы превышала контрольную цифру в 1,63 раза (на 8,3%), фоновый показатель в 1,75 раза (на 9,2%), значение предыдущего срока опыта в 1,18 раза (на 3,4%).

Показатель площади лимфатических узелков без светлых центров в селезенке крыс 3 группы увеличился к 15 дню опыта, по сравнению с контрольным значением, в 1,27 раза (на 3,6%), к 50 дню - в 1,54 раза (на 7,2%).

Площадь лимфатических узелков со светлыми центрами в селезенке животных 2 группы на 15 день эксперимента расширилась, по сравнению с контрольным уровнем, в 1,81 раза (на 3,19%), с фоновым - в 1,89 раза (на 3,36%). Этот процесс прогрессировал и к концу опытов (50 день) описываемый показатель был выше контрольной цифры в 2,58 раза (на 6,38%), фонового значения в 2,76 раза (на 6,64%), показателя предыдущего срока исследования в 1,46 раза (на 3,28%). Подобным образом, но менее выраженнее, реагировали лимфатические узелки со светлыми центрами в селезенке крыс 3 группы.

Площадь Т-зависимой периваскулярной лимфоидной муфты в селезенке крыс 2 группы расширилась, превысив к 15 дню контрольный показатель в 1,17 раза (на 1,19%), фоновый в 1,28 раза (на 1,78%). К 50 дню опыта эта разница, в сторону превышения, с контролем и фоном, составила в 1,48 и 1,62 раза (на 3,37 и 3,96%). При этом показатель 50 дня был выше значения предыдущего срока исследования (15 день) в 1,26 раза (на 2,18%). Показатель площади периваскулярных лимфоидных муфт селезенки крыс 3 группы увели-

чился к 15 дню опыта в 1,12 и 1,26 раза (на 0,81 и 1,04%), к 50 дню - в 1,31 и 1,44 раза (на 2,21 и 2,83%).

2.2.2.5.3 Иммуноморфологические перестройки структурных компонентов тимуса и тимический индекс

В тимусе мы измеряли площадь коркового вещества органа, непосредственно ответственного за дозревание под действием гормонов тимуса Т-лим-фоцитов и площадь мозгового вещества. Площадь коркового вещества тимуса крыс 1 группы занимала в среднем 58,4 - 59,7%, мозгового - 40,3 -41,6%.

В тимусе крыс 2 и 3 опытных групп отмечали расширение площади коркового вещества органа. Так, по 2 группе данный' показатель превышал к 15 дню опыта значение его в контроле в 1,09 раза (на 5,6%), фоновый показатель в 1,11 раза (на 6,5%). Этот процесс прогрессировал по срокам опыта и к 50 дню корковое вещество тимуса крыс по площади превышало контрольную цифру в 1,21 раза (на 12,7%), фоновое значение в 1,24 раза (на 14,1%), показатель предыдущего срока исследования (15 дней) в 1,11 раза (на 7,6%). Параллельно с расширением площади коркового вещества тимуса регистрировалось уменьшение площади мозгового вещества органа.

Подобные иммуноморфологические перестройки отмечались и в тимусе животных 3 группы. Здесь площадь коркового вещества тимуса к 15 дню опыта увеличилась, по сравнению с контрольным показателем, в 1,05 раза (на 3,0%), с фоновым - также в 1,05 раза (на 3,25%). Этот процесс прогрессировал по срокам Опыта и к 50 дню описываемый показатель был выше его значения в контроле в 1,16 раза (на 9,6%), фонового уровня в 1,17 раза (на 10,3%), параметра предыдущего срока исследования (15 день) - в 1,11 раза (на 7,1%). Тимический индекс крыс 1 контрольной группы, составивший 0,15-0,17 свидетельствовал о соответствии его значению нижнего уровня иммунологической реактивности организма животных.

Показатели тимического индекса крыс 2 и 3 групп, регистрируемые на 15 день эксперимента, равные 0,20 и 0,18 указывали на хороший иммунный баланс в организме крыс. Индексы тимуса животных 2 и 3 групп, составившие к концу опыта 0,24 и 0,22 свидетельствовали о высокой иммунной реактивности в организме крыс на этбт период исследований.

2.2.3 Влияние необработанного янтаря на состояние микробиоценоза

кишечника крыс

Результаты исследования динамики изменения содержания в кишечнике крыс бифидобактерий, под влиянием необработанного янтаря, представлены в табл. 6.

Содержание лактобацилл в кишечнике животных 1 контрольной группы, за период опытов, колебалось на уровне от 6,69 до 7,84 ^ КОЕ/г. Данный показатель также имел тенденцию к выраженному повышению в кишечнике животных 2 группы к 7 дню опыта в 1,53 раза (на 3,73 ^ КОЕ/г), к 15 дню в 1,7 раза (на 5,56 ^ КОЕ/г), к 30 дню в 2,52 раза (на 10,2 ^ КОЕ/г), к 50 дню в 2,07 раза (на 7,77 ^ КОЕ/г).

Табл. 6 Влияние янтаря на динамику изменения содержания бифидобактерий в кишечнике крыс КОЕ/г)_

Группы Стат Сроки исследования в днях от начала опытов

животных показат 7 | 15 | 30 | 50

1. М 8,96 9,86 9,47 9,12 8,74

Контроль ±т 0,28 0,60 0,22 0,27 0,37

СУ, % 7,00 13,69 5,14 6,55 9,50

2 М 9,40 12,30 16,20 18,60 18,40

Легкие ±т 0,24 0,44 0,58 0,68 0,81

отрицательные СУ, % 5,827 7,924 8,048 8,154 9,873

ионы янтаря Р ** *** *** ***

3. М 8,76 14,70 19,90 21,60 20,30

Янтарный ±т 0,37 0,70 0,75 0,81 0,70

порошок СУ, % 9,47 10,65 8,41 8,41 7,71

с кормом Р ** *** »** ***

Более высокое повышение уровня лактобацилл регистрировалось в кишечнике животных 3 группы. Здесь описываемый показатель превысил контрольный уровень и значения их у животных 2 группы на 7 день опыта в 1,83 и 1,19 раза (на 5,83 и 2,1 КОЕ/г), на 15 день в 2,15 и 1,26 раза (на 9,06 и 3,5 1§ КОЕ/г), на 30 день в 2,73 и 1,08 раза (на 11,6 и 1,4 ^ КОЕ/г), на 50 день в 2,6 и 1,25 раза (на 7,77 и 3,8 ^ КОЕ/г).

Клостридии в кишечнике крыс 1 контрольной группы, за период опытов, колебались на уровне от 5,82 до 6,26 ^ КОЕ/г, что было несколько выше физиологических значений. В кишечнике крыс 2 и 3 опытных групп уровень клостридий имел тенденцию к значительному понижению в сторону физиологических норм (рис. 3 А). Содержание клостридий в кишечнике животных 2 группы понизилось, по сравнению с контрольными значениями его у животных 1 группы, к 7 дню в исследований в 1,17 раза (на 0,87 ^ КОЕ/г), к 15 дню в 1,27 раза (на 1,34 КОЕ/г), к 30 дню в 1,39 раза (на 1,66 ^ КОЕ/г), к 50 дню в 1,47 раза (на 1,95 КОЕ/г).

Более интенсивный процесс понижения числа клостридий регистрировался в кишечнике животных 3 группы. Здесь уровень клостридий уступал его значению в кишечнике крыс 1 и 2 групп на 7 день опыта в 1,25 и 1,07 раза (на 1,21 и 0,34 ^ КОЕ/г), на 15 день в 1,38 и 1,08 раза (на 1,73 и 0,39 1§ КОЕ/г). на 30 день в 1,73 и 1,23 раза (на 2,46 и 0,8 ^ КОЕ/г), на 50 день в 1,47 и 1,17 раза (на 2,55 и 0,6 ^ КОЕ/г).

7 | 15 | X I 50 Фен ] Сроки исследования в дню: от начала

Рис 3 Влияние

необработанного янтаря на

динамику изменения содержания клостридиев (А),

стафилококхов (Б) и

пссвдомонов (В) в кишечнике крыс КОЕ/г).

—•— Контрольная (здоровые)

—■—Легкие отрицательные ионы янтаря

— -А— Янтарный порошок с кормом

Данные по изучению динамики изменения содержания в кишечнике стафилококков и псевдомонов под влиянием разных форм необработанного янтаря представлены на рис. 3.

ВЫВОДЫ

1. Легкие отрицательные ионы, фитонциды янтаря и янтарная кислота, выделяемые необработанным янтарем стимулирует гемо- и эритропоэз и повышение уровня лейкоцитов в крови.

2. Разные формы введения необработанного янтаря в виде аэрозоли легких отрицательных ионов и фитонцидов в янтарной камере, выстланном янтарем, и внутрь в виде порошка (янтарная кислота), способствуют значительному повышению факторов естественной резистентности и фагоцитоза, максимально:

а) бактерицидной активности сыворотки крови в 1,84 и 1,77 раза (на 27,6 и 25,4%), б) лизоцимной активности сыворотки крови в 1,94 и 1,85 раза (на 13,4 и 12,1%), в) фагоцитарной активности лейкоцитов крови в 1,85 и 1,75 раза (на 23,3 и 20,6%), фагоцитарного индекса в 3,72 и 3,3 раза (на 5,09 и 4,31 ед), завершенности фагоцитоза в 3,05 и 2,93 раза (на 2,3 и 2,17 ед.).

3. Необработанный янтарь в «янтарном ящике» (аэрозоли легких отрицательных ионов и фитонцидов янтаря)и при приёме внутрь в виде порошка (янтарная кислота) способствует повышению иммунокомпетентных клеток:

а) в крови Т-Е-РОК-лимфоцитов в 1,85 и 1,73 раза (на 3,21 и 2,78x10%), Т-хелперов - в 2,64 и 2,79 раза (на 2,34 и 2,55х109/л), В-ЕАС-лимфоцитов - в 1,34 и 1,26 раза (на 1,01 и 0,79x10%),

б) в поверхностном паховом лимфатическом узле Т-Е-РОК-лимфоцитов - в 1,21 и 1,15 раза (на 6,6 и 4,8 х10%), Т-хелперов - в 1,37 и 1,29 раза (на 5,9 и 4,6x10%), В-ЕАС-лимфоцитов - в 1,24 и 1,16 раза (на 4,6 и 3,1x10%),

в) в селезенке Т-Е-РОК-лимфоцитов - в 1,24 и 1,26 раза (на 6,5 и 7,1x10%), В-ЕАС-лимфоцитов - в 1,16 и 1,09 раза (на 5,7 и 3,3 х10%),

г) в тимусе - Т-Е-РОК-лимфоцитов - в 1,5 и 1,42 раза (на 195,5 и 163,0 млн).

4. В костном мозге необработанный янтарь повышает пролиферацию клеток зернистого ростка лейкоцитов в 1,6 и 1,59 раза (на 24,0 и 21,4 %), эритро-идного ростка - в 1,87 и 1,78 раза (на 24,6 и 22,1 %), лимфоидных клеток - в 2,66 и 2,33 раза (на 8,56 и 6,86 %).

5. Необработанный янтарь активизирует иммунокомпетентные структуры лимфоидных органов, способствуя расширению площадей В- и Т-зависимых зон: а) в лимфатических узлах - в виде увеличения площади лимфатических узелков без светлых центров в 2,36 и 2,15 раза (на 10,7 и 9,04 %), со светлыми центрами - в 3,53 и 2,76 раза (на 8,39 и 5,83 %), мякотных тяжей - в 1,63 и 1,41 раза (на 6,9 и 4,5 %), паракортикальной зоны - в 1,53 и 1,42 раза (на 4,9 и 3,9 %),

б) в селезенке - в виде расширения площади лимфатических узелков без

светлых центров в 1,63 и 1,54 раза (на 8,3 и 7,2 %), со светлыми центрами - в 2,58 и 2,09 раза (на 6,38 и 4,42%), периваскулярных лимфоидных муфт - в 1,48 и 1,31 раза (на 3,37 и 2,21 %),

в) в тимусе - в виде расширения площади коркового вещества в 1,21 и 1,16 раза (на 12,7 и 9,6%) и повышения тимического индекса до 0,24 и 0,22.

6. Необработанный янтарь восстанавливает естественный микробиоценоз кишечника крыс, активизируя бактерии-пробионты (бифидобактерии - в 2,03 и 2,36 раза (на 9,48 и 12,48 lg КОЕ/г), лактобациллы - в 2,52 и 2,73 раза (на 10,2 и 11,6 lg КОЕ/г), затормаживая рост условно-патогенных микроорганизмов (клостридий - в 1,47 и 1,72 раза (на 1,95 и 2,55 lg КОЕ/г), псевдомонов - в 1,71 и 2,98 раза (на 2,81 и 4,49 lg КОЕ/г), стафилококков в 1,81 и 2,05 раза (на 4,27 и 4,88 lg КОЕ/г).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Учитывая высокую биологическую активность необработанного янтаря, его гемостимулирующие, иммуностимулирующие, иммунокоррегирующие свойства, способность восстанавливать естественный микробиоценоз кишечника, считаем целесообразным его глубокие всесторонние исследования для широкого применения в фармацевтической, медицинской, пищевой и ветеринарной промышленности, как безвредный биостимулятор с широким спектром действия.

2. Диссертационный материал рекомендуется использовать при написании монографий, учебников и учебных пособий, рекомендаций, а также при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий со студентами фармацевтических, биологических, медицинских, пищевых, ветеринарных вузов и факультетов и в научно-исследовательских институтах и лабораториях соответствующего профиля.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1.Терегулова З.С. Гигиенические и практические аспекты профессионального риска на предприятиях нефтехимии Республики Башкортостан/ Терегу-лова З.С., Бакиров А.Б., Волгарева А.Д., Рапиев P.A.// Материалы I Всероссийского съезда профпатологов. -Тольятти, 2000. -С.338.

2. Гильмутдинова Л.Т. Применение продуктов натурального янтаря в условиях «янтарной комнаты» в комплексе восстановительного лечения больных. / Гильмутдинова Л.Т., Рапиев P.A., Ахмадуллин Р.В. Рекомендации, утвержденные зам. министра здравоохранения Республики Башкортостан С.Ш.Мурзабаевой и ректором БГМУ В.М.Тимербулатовым 23 апреля 2003 года.-Уфа, 2003.-18 с.

3. Рапиев P.A., Рапиев P.A., Рапиев P.A. Патент РФ № 2246330 от 07.05.2003 «Терапевтический кабинет-аэроионизатор».

4. Рапиев P.A., Рапиев P.A., Рапиев P.A. Патент РФ № 2246328 от 07.05.2003 «Способ и устройство Рапиевых P.A. «Защита человека от излучений электрических приборов».

5. Гильмутдинова JI.T. Опыт использования метода электропунктурной диагностики по Фоллю в оценке эффективности лечения больных в «янтарной комнате» / Гильмутдинова JI.T., Рапиев P.A., Цыганова О.М., Ахмадуллин Р.В. // Биологические, технологические аспекты изучения и использования продуктов пчеловодства. - Уфа, 2004. - С. 38-40.

6. Рапиев P.A. Происхождение и биофизические свойства природного целительного янтаря / Рапиев P.A., Рапиев P.A. // Биологические, технологические аспекты изучения и использования продуктов пчеловодства. - Уфа, 2004. -С. 104-107.

7. Рапиев P.A. Медико-биологические свойства и методы применения янтаря в народном врачевании и медицинской практике/ Рапиев P.A., Рапиев P.A. // Биологические, технологические аспекты изучения и использования продуктов пчеловодства. - Уфа, 2004. - С. 107-111.

8. Рапиев P.A. Морфофункциональные механизмы лечебного действия янтаря/ Рапиев P.A., Рапиев P.A., Маннапов А.Г. // Биологические, технологические аспекты изучения и использования продуктов пчеловодства. - Уфа, 2004. -С. 111-116.

9. Рапиев P.A. Эффективная защита от электрических излучений различного происхождения пластинами из природного янтаря /Рапиев P.A., Рапиев P.A.// Биологические, технологические аспекты изучения и использования продуктов пчеловодства. - Уфа, 2004. - С. 116-121.

Ю.Рапиев P.A. Биофизические свойства терапевтического кабинета-аэроионизатора / Рапиев P.A., Рапиев P.A. // Биологические, технологические аспекты изучения и использования продуктов пчеловодства. - Уфа, 2004. - С. 121-126.

11. Рапиев P.A. История янтарной комнаты в Республике Башкортостан/ Рапиев P.A., Киньябулатов А.У. // Современные проблемы истории естествознания в области химии, химической технологии и нефтяного дела. - Уфа, 2004.-С. 97-98.

12. Рапиев Р.А.Опыт лечения больных дисциркуляторной энцефалопатией продуктами натурального янтаря/ Рапиев P.A., Шайгарданова Е.М., Галимул-лина E.H. // Материалы Российского научного форума «РеаСпоМед 2005» Современные технологии в реабилитации и спортивной медицине. - М., 2005.

-С. 140-141. f

I

I

Подписано в печать 21.11.2005 г. Формат 60X84 1/16. Заказ № 54. Бумага офсетная. Печать на ризографе. Тираж 100 экз. Отпечатано ООО ПКП «Дар». 450106, г. Уфа, ул. Ст. Кувыкина, 94.

18 24 5 60

РНБ Русский фонд

2006-4 27635

В последние десятилетия возник интерес к изучению состава и физико-химических свойств янтаря. На промышленную основу (благодаря открытию Янтарного комбината в Калининградской области, где добывается до 90% мирового запаса янтаря) было поставлено производство янтарного масла, лака, янтарной кислоты и её солей. Нашли применение различные медикаменты на их основе: витамин БЗ, кортизон-ацетат, янтарно-кислая ртуть, антисептик иодоль, суксилен, сук-симед, предион и др. Значительный интерес в последние годы проявляется к изучению механизмов действия и лечебным свойствам янтарной кислоты и ее солей (Б.И. Сребродольский с соавт., 1971, 1984, 1988; В.Б. Акопян, 2000; И.П. Неумывакин, Я.С. Неумывакина, 2000; А. Сличная, 2001; А.Киреев, 2001; С.М.Бланк, 2003).

В литературе имеются сведения о результатах применения янтарной кислоты при патологии легких, сердца и сердечно-сосудистой системы, нервных центров, возрастных нарушений, при интенсивной мышечной работе, головных болях, экссу-дативном диатезе, мастопатии, бесплодии, при действии на организм токсических веществ, в первую очередь лекарств, болезнях щитовидной железы, остеохондрозе, аллергии и др.

Янтарную кислоту используют как биологически активную добавку. Янтарь применяют при иглорефлексотерапии, в виде янтарных ванн, посредством биолокации (радиэстезии), путем воздействия на биологически активные точки, для активации энергетического обмена (С.С.Савкевич, 1970, 1076; Б.В.Клюев, 1977, 1996, 1997; М.Н.Кондрашова, 1979, 1997; В.И. Иванов, 1991; Г.П.Малахов, 1997; А.П. Бабич, 1998; Ю.И.Бобко, В.П. Удалов, 1999; О.Н.Глотова, Н.И.Тимофеева, 2000; Э.И. Гоникман, 2000; Т. Литвинова, 2000, 2002; Л.Г.Пучко, 2001; А.Н.Семенова, О.П. Шувалова, 2001; Н.Н.Мошков, 2002, 2003, 2004; В.А.Хазатов, 2002; Ю.С.Бут, 2003).

Однако, до настоящего времени не изученными остаются вопросы влияния легких отрицательных ионов, фитонцидов янтаря и янтарной кислоты выделяемых необработанным янтарем на состояние иммунной системы и микробиоценоз кишечника.

В этой связи целью работы явилось - изучить влияние необработанного янтаря на иммуногенез, иммуноморфологические реакции и естественный микробиоценоз кишечника в организме крыс.

В задачи исследований входило:

1) Установить влияние необработанного янтаря на показатели крови (динамику гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов) крыс.

2) Изучить влияние необработанного янтаря на показатели иммунного статуса крыс, со сравнительной оценкой: а) естественной резистентности (бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови), б) активности фагоцитарных реакций, в) динамики Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-ЕАС-лимфоцитов в крови, лимфатических узлах, селезенке и Т-Е-РОК-лимфоцитов в тимусе.

3) Изучить влияние необработанного янтаря на пролиферацию и дифференциацию клеток костного мозга с учетом: а) динамики клеток зернистого ростка лейкоцитов, б) динамики клеток эритроидного ростка, в) динамики лимфоидных клеток.

4) Определить влияние необработанного янтаря на иммуноморфологическую реактивность лимфоидных органов с оценкой: а) иммуноморфологических перестроек структурных компонентов лимфатических узлов, б) иммуноморфологических перестроек структурных компонентов селезенки, в) иммуноморфологических перестроек структурных компонентов тимуса.

6) Установить влияние необработанного янтаря на состояние микр о биоценоз а кишечника с учетом: а) динамики изменения содержания нормофлоры (бифидобактерий и лактобацилл), б) динамики изменения содержания условно-патогенных микроорганизмов.

Научная новизна исследований состоит в том, что впервые впервые проведено исследование влияния необработанного янтаря на показатели крови, естественной резистентности, фагоцитоза, Т- и В-систем иммунитета, иммуноморфологи-ческие реакции в центральных и периферических органах иммуногенеза (костном мозге, тимусе, лимфатических узлах и селезенке). Впервые установлено влияние необработанного янтаря на состояние микробиоценоза кишечника крыс.

Теоретическая и практическая значимость работы. На основании полученных результате, а также сравнительного изучения влияния необработанного янтаря в форме аэроионов , фитонцидов янтаря и янтарной кислоты при применении в виде янтарного порошка на показатели крови, естественной резистентности, фагоцитоза, Т- и В-систем иммунитета, иммуноморфологическую реактивность костного мозга, тимуса, поверхностного пахового лимфатического узла, селезенки, колонизационную резистентность кишечника, с учетом механизма влияния на организм легких отрицательных ионов, фитонцидов и янтарной кислоты, обобщены биологические закономерности изменения иммуногенеза, иммуноморфологических перестроек в лим-фоидных органах, микробиоценоза кишечника, способствующие повышению иммунного статуса, восстановлению естественного микробиоценоза кишечника.

Теоретически и практически обоснованы высокие иммуностимулирующие и иммунокоррегирующие свойства необработанного янтаря, способствующие созданию в организме прочного иммунного баланса, профилактике вторичных иммуно-дефицитов и дисбактериозов. Полученные данные позволяют рекомендовать всесторонние исследования необработанного янтаря для применения в медицине и ветеринарной медицине.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Влияние разных форм применения необработанного янтаря (в виде легких отрицательных ионов и фитонцидов янтаря в янтарных комнатах и в виде янтарной кислоты в янтарном порошке) на повышение гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов крови, активизацию естественной резистентности и фагоцитоза.

2. Активизация необработанным янтарем показателей Т- и В-систем иммунитета (Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, В-ЕАС-лимфоцитов), а также восстановление реакции Т-супрессоров в крови, лимфатических узлах, селезенке и тимусе.

3. Иммуноморфологические реакции в костном мозге, тимусе, лимфатических узлах и селезенке под влиянием разных форм применения необработанного янтаря.

4. Активизация нормофлоры (бифидобакгерий и лактобацилл) и затормаживание размножения до уровня физиологических норм условно-патогенных микроорганизмов под влиянием разных форм применения необработанного янтаря.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на Всероссийской научно-практической конференции «Экология. Труд. Здоровье. Взгляд в XXI век» (Уфа, 1999); Международной научной конференции «Современные проблемы истории естествознания в области химии, химических технологий и нефтяного дела» (Уфа, 2004); на конференциях профессорско-преподавательского состава БГАУ (1999-2004); на российском научном форуме «РеаСпоМед, 2005» «Современные технологии в реабилитации и спортивной медицине» (Москва, 2005).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 12 работах.

По результатам исследований изданы методические рекомендации «Применение продуктов натурального янтаря в условиях «янтарной комнаты» в комплексе восстановительного лечения больных», утвержденные Зам. министра здравоохранения РБ С.Ш.Мурзабаевой и ректором БГМУ, профессором В.М.Тимербулатовым. -Уфа, 2003.- 18 с.

По материалам диссертации имеются два патента:

1. Рапиев P.A., Рапиев P.A., Рапиев Р.А Патент РФ № 2246330 от 07.05.2003 «Терапевтический кабинет - аэроионизатор».

2. Рапиев P.A., Рапиев P.A., Рапиев P.A. Патент РФ № 2246328 от 07.05.2003 «Способ и устройство Рапиевых P.A. «Защита человека от излучений электрических приборов»».

Изобретение внесено в «Книгу рекордов планеты» и в «Книгу рекордов Ги-несса» (18 января 2003).

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 157 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Работа иллюстрирована 36 таблицами 36 рисунками в виде гистограмм, графиков и 24 микрофотографиями. Список литературы включает 409 работ, в том числе 151 иностранных авторов.

ВЫВОДЫ

1. Легкие отрицательные ионы, фитонциды янтаря и янтарная кислота, выделяемые необработанным янтарем стимулирует гемо- и эритропоэз и повышение уровня лейкоцитов в крови.

2. Разные формы введения необработанного янтаря в виде аэрозоли легких отрицательных ионов и фитонцидов в фанерном ящике, выстланном янтарем, и внутрь в виде порошка (янтарная кислота), способствуют значительному повышению факторов естественной резистентности и фагоцитоза, максимально: а) бактерицидной активности сыворотки крови в 1,84 и 1,77 раза (на 27,6 и 25,4%), б) лизоцимной активности сыворотки крови в 1,94 и 1,85 раза (на 13,4 и 12,1%), в) фагоцитарной активности лейкоцитов крови в 1,85 и 1,75 раза (на 23,3 и 20,6%>), фагоцитарного индекса в 3,72 и 3,3 раза (на 5,09 и 4,31 ед), завершенности фагоцитоза в 3,05 и 2,93 раза (на 2,3 и 2,17 ед.).

3. Необработанный янтарь в «янтарном ящике» (аэрозоли легких отрицательных ионов и фитонцидов янтаря)и при приёме внутрь в виде порошка (янтарная кислота) способствует повышению иммунокомпетентных клеток: а) в крови Т-Е-РОК-лимфоцитов в 1,85 и 1,73 раза (на 3,21 и 2,78x109/л), Т-хелперов - в 2,64 и 2,79 раза (на 2,34 и 2,55х109/л), В-ЕАС-лимфоцитов - в 1,34 и 1,26 раза (на 1,01 и 0,79x10%), б) в поверхностном паховом лимфатическом узле Т-Е-РОК-лимфоцитов - в 1,21 и 1,15 раза (на 6,6 и 4,8 х109/л), Т-хелперов - в 1,37 и 1,29 раза (на 5,9 и 4,6x10%), В-ЕАС-лимфоцитов - в 1,24 и 1,16 раза (на 4,6 и 3,1х 10%), в) в селезенке Т-Е-РОК-лимфоцитов - в 1,24 и 1,26 раза (на 6,5 и 7,1x10%), В-ЕАС-лимфоцитов - в 1,16 и 1,09 раза (на 5,7 и 3,3 х 10%), г) в тимусе - Т-Е-РОК-лимфоцитов - в 1,5 и 1,42 раза (на 195,5 и 163,0 млн).

4. В костном мозге необработанный янтарь повышает пролиферацию клеток зернистого ростка лейкоцитов в 1,6 и 1,59 раза (на 24,0 и 21,4 %), эритроидного ростка - в 1,87 и 1,78 раза (на 24,6 и 22,1 %), лимфоидных клеток - в 2,66 и 2,33 раза (на 8,56 и 6,86 %).

5. Необработанный янтарь активизирует иммунокомпетентные структуры лимфоидных органов, способствуя расширению площадей В- и Т-зависимых зон: а) в лимфатических узлах - в виде увеличения площади лимфатических узелков без светлых центров в 2,36 и 2,15 раза (на 10,7 и 9,04 %), со светлыми центрами - в 3,53 и 2,76 раза (на 8,39 и 5,83 %), мякотных тяжей - в 1,63 и 1,41 раза (на 6,9 и 4,5 %), паракортикальной зоны - в 1,53 и 1,42 раза (на 4,9 и 3,9 %), б) в селезенке - в виде расширения площади лимфатических узелков без светлых центров в 1,63 и 1,54 раза (на 8,3 и 7,2 %), со светлыми центрами - в 2,58 и 2,09 раза (на 6,38 и 4,42%), периваскулярных лимфоидных муфт - в 1,48 и 1,31 раза (на 3,37 и 2,21 %), в) в тимусе - в виде расширения площади коркового вещества в 1,21 и 1,16 раза (на 12,7 и 9,6%) и повышения тимического индекса до 0,24 и 0,22.

6. Необработанный янтарь восстанавливает естественный микробиоценоз кишечника крыс, активизируя бактерии-пробионты (бифидобактерии - в 2,03 и 2,36 раза (на 9,48 и 12,48 ^ КОЕ/г), лактобациллы - в 2,52 и 2,73 раза (на 10,2 и 11,6 ^ КОЕ/г), затормаживая рост условно-патогенных микроорганизмов (клостридий - в 1,47 и 1,72 раза (на 1,95 и 2,55 КОЕ/г), псевдомонов - в 1,71 и 2,98 раза (на 2,81 и 4,49 КОЕ/г), стафилококков в 1,81 и 2,05 раза (на 4,27 и 4,88 ^ КОЕ/г).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Учитывая высокую биологическую активность необработанного янтаря, его ге-мостимулирующие, иммуностимулирующие, иммунокоррегирующие свойства, способность восстанавливать естественный микробиоценоз кишечника, считаем целесообразным его глубокие всесторонние исследования для широкого применения в фармацевтической, медицинской, пищевой и ветеринарной промышленности, как безвредный биостимулятор с широким спектром действия.

2. Диссертационный материал рекомендуется использовать при написании монографий, учебников и учебных пособий, рекомендаций, а также при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий со студентами фармацевтических, биологических, медицинских, пищевых, ветеринарных вузов и факультетов и в научно-исследовательских институтах и лабораториях соответствующего профиля.