Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Метод контроля инактивированных вакцин против болезни Ауески и его использование при усовершенствовании технологии производства

Р Г Б 0 ДунРА I НСЬКиЧ АКАДЕШЯ АГРАРИЯХ НАУК

1 6 вив ш

Ш'.ШУ? ШГл-РИШГ- .'.'ЛКЛ I КЛ1ШЧШ1 _____________________________ВЕГЕРИНАРКО!.. ЙЕДЩИШ______________________

Ил и^льл;:

МЕТОД КОНТРОЛЮ 1НАКТИБ0ВА1ШХ ЕЩИН ПРОТМ ХЮРОЕИ ЛУь'СШ ЙОГО В1ГЛ0РЙСТАШ5Я ПРИ УДОСКОНАЛШП ТЕХНОЛОГИ ЙИРОШЩТБА

Л ]) I I) г г ■!■ К I к т дисертащ 1 на здобуття наукосого ступени

К'ЧТГПТЛ'-Тл Г^'ГсрИМЧр!!'!.'?

Дисертащею е рукопис

Роботу виконано у лаСораторп ешзоотологП, д!агност1' та проф1лактики в1русних захвсрювань свиней В1ЕВ.

Науковий кер!вник -доктор (Молопчних наук,

професор В. О. Сергеев

0ф1Ц1йн1 опоненти -доктор ветеринарних наук,

старший науковий сп!вро01тник К. С. Кояаржевський -доктор ветеринарних наук, старший науковий сшвроб1тник О. Я. М1 ланко

Пров1дна оргашзащя Харьювський зооветеринарний

шетитут

Захист дисертацп в1дбудеться " " С/ ¿"Уу 1994 на зас1данн1 спещал1зовано1 вчено! ради Д. 020.68.81 при 1нс: тут1 експериментально'1 та кл!н!чно1 ветеринарно! медицини-

3 дисертащею можна ознайомитись в бЮлютеЩ IEKBM за i ре сою: 310023, Харк1в-23, вул. Пушк'1нська, 83, IEKBM.

i7

Автореферат роз1слано "У-у" yJ^ífw 1994 р.

Вчений секретар спещал1зовано1 вчено! ради О

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

АНТУАЛЬШСТЬ ПРОЕЛЕШ ТА СТУШКЬ ДОСЛ1ДЖЕННОСТ1 ТЕМАТИКИ ДИСЕРТДЦП. Незваяаючи на 2С1;.7дч1 засоби та споссби специфично! профилактики хвороби Аусскл (ХА), вена залишаегься в перелшу найб1льш-небезпечних_а1русни2_1к4скц1й, яю завдзють вс-личезних 3CÜTK1B твариництву багатьох Kpa'iH CEiTy (Сврпн В. Н. , 1991, lùndars S. L. ,1988, Popovic M ,1904, Vannier P. , löSi, Wittmars G. ,1986, та îh.).

Ря'-'мпни, HKi виксриетсвуктьея на цей час, не в1дггав1дають у кевнсыу сбеяз! вимогаы ветеринарнох практики. Бапссигакчи появлений клшчних ознак i пом'якшуючи nepeöir захворювання вони не стримують репродукцио вi руса в îw.yиному органisui i яого видглення у оточуюче середовшде (Кодсшцев A.A., 1990, Сгап-dell R. А., 1979, Leeuw Р. ,1985, uirsenot J Т. , ГЗс !.. та ih. ). 1снуючг вакцини проти ХА «элоаСлксивы аг: хут;- ' dbifib та крол1в (Ceprses В. к. УсСьнтл ÜC. Д9?3, Р".Л';агсгук S.,

V375. та ih. ).

1' '-v-.'p; ' : '■ .■'..■■ ; :*•> sc aaitee

контр".".;, прег.араг iii, нключаючи -ici.""! сп-= ч'жтивнiсть ; Ньыглдл;:в;ст1, як; зд:йсншгьсл на свиня;с та згвцзх (Какарлгвс-кий К. L., 1991, та и;. ). Пзшдемдеиня про викорнетання для цих лабораториях тварин не ¡¡¿суть вичерпно; гнфермат! i не дають мсяливсст! отримувати стандарты; результат;;. псг/к л.->и;-е;л моде л i б юлог очного контролю, яка б дозволила оцыювати чи.ельн: зрзгки вакцинн в npc-n<?ci иошуксво! рсбстн по тех-

нологи вирсСництва, являогься актуален.:ю проб nii-zи.

Наша робста с продовження комплексных дослхджань, ¡до прово-дплпея СП".кроб¡тнпкамп BIEE i Ставрстльси-го! 6ic,î.a5;i;;ui по створеншс. шзки1всй:шо"1 ьакшши.::; i.r.i 7; i к:м£ ! и.: i:.;»-": i .;-:::ни ...;:;:: рсб ездим a ксипзНчЦ-. :ь л,'^. с •

ген в 1 рус у ХА.

МЕТА I ЗАЕДАНИЯ ДОСЯГДЖНЬ. Метою дано} робсти являет! розробка методу контролю ш^ногенностг тагегивованих вакцин щ ти ХА сыьськогосподарських тварин 1 хутрових гв!р1в та ' удос^ налення технологи виробкицтва цих вакцин.

Для п досягнення Оули поставлен! сл1дувч! завдання:

- довести могшшсть викорис'тання морських свинок для кон1! ролю 1муногеннсст; гнактивованних вакцин проти ХА;

- оптим! зувати метод контролю шуногекност! знактивован] вакцин проти ХА на морських свинках;

- вквчихн.. вплив ад'вванта 1 кьтькост! антигену в доз1 на активность ¿нактивованш: вакцин проти ХА;.

- П0р1вняти ефективи1гс'1 эастосування е!тчйзняних та 1ноз1 них препарат!в проти ХА на хутрсвих евIрях;

- визначити 1мунсгенй1сть експерименталько! 1 дссл1дн0-пр| мяслрво! серЦ вакцини БАК на хутрових зверях;

- пор1вкяти ¿муногешпетъ емульговаккх ?з люф^изовани шактмозаяих препаратов проти ХА;

- визначити ефективн1сть ЕН}тр:аньоск1рчн:.гс та внутр*шнь м'язсвого способа щеплення вакцинами прети ХА.

ТЕОРЕТИЧНА ТА ПРАКТИЧНА ШНН1С7Ь Д0СЛ1ЛЖЕНК5 ТА Я'ТО ВАУ ВА НОВИЗНА. В рсбст1 вивчека чутлпв1сть марськпх свинок до В! лэнтнэге зтзму "К" В1русу ХА. гиг;ш«ка пгук-.реактизнютъ тзарпь. ; и и^лл-НпЯ 1кактивоБЯН1и.и1 вакцинами г.г_ ттл^.

:; г;-' сптимал^п"!'! £ .епь кспЦ^нт^ыи I хнактивова*

акткг^ь"' и руг у ХА ' ВХА? у емулъгсяашп: взкцинах.

С1; ','лу^Х 'г^—ктпзН'.!гт 1 резких гп^.Си'Г.^ парсНТь^алы

- 3 -

ведения шактивсчаних вакцин г-..эти ХА.

Рззроблений 1 впроваджения в виробництво метод контролю муны^нност йнактивсваних- вакцин-прсти-ХА-на морських_ свинках.,

Досл1ДЖ8ннкй в прсмислоЕих умовах 1 запропснсвакий до вико-истаннй метод ультрафиштращ! на порожих волокнах при концен-руванн1 антигену ЕХА для виросництва шактпвованих вакцин.

ЗапропогоЕзний перспективний ад'ввант на основ! ПЕС-З 1 взводного ланолхну для поеилення игуногекних аластивостей 1нак-иноеаного антигена ЕХА у склздт моно- та аоощйованих вакцин.

Установлена ефективнють 1нактнвовашл концентрованс: вак-ини БАК для профилактики ХА у хутрових зв1р1в.

Показана ефективнють адэплешч ?упоресчп5г •г::-'- - ¡с вагада-ою ПЛАХ.

Р1ЕЕНЬ РЕШЯАЦП *.'«, ' ^ОБАДЙНКЯ РЕЗУЛЬТАТ"я.-:: ЩЙНННЯ. ¡'.с::-'?.1-' • •• л.-.,гт" ^■■••.■ог.т аорма-

.. .... ■ :г: . .' .„пцентр".-

ованно;1, ____пчрьсвирусвс.й оол&рйп, .-.■гптоспкрсза, ьс-

езкн Ауег;ки и свиней" (затвтрд.^н." ГУБ при Дерл-

омюГ! Ради ¡.'ин 12Тр;в СРСР по продовол^-тву та закатиВЛ1 12 ервкя 19'30 р. ), "Временно- наставление по применению нная'.цт-нро-аннг-й концентрированной эмульгированной вакцины против болезни У£СК1! взктиь; ЕАК'" : здтВ'Зрд.ЧсНи ГУБ при ; Га.;;:

1нхстр;в СРСР по продовольству та закут ВЛ1 2* травка р.).

АПРОБАЦ1Я ТА ПУРЛ1КАЦ1Я РЕЗУЛЬТАТ ¡В ДОСЛ1ДгЕНЬ. Оснсвт г.О-олг-нкл дисвртзл.'. >.-:. : на четвертой Бсесс-

зн:й ; " * г -"' - *--■ ■ :■ гхн; "сг::.; . про-

введет;.з ветерин^рних ск-л. гпчел-:;:': г.р-п-к ат;г." (!.'.:сквз,

1991 р.); ка засгданн! Бчеио!. Ра^и HIEB (Москва, 1991 р.); а такс» на ыжабораторнсму аасзда'.ш IEKEM (XapKiE, 1994 р.).

За матер!алаш дисертатйних дослхджэнь опубликована 3 нау-кових працк

СТРУКТУРА ТА ОБСЯГ ДИЗЕРТАЦ! I. Матерхали дксерташйноТ ро-боти викладеш на 115 сторхнках машинописного тексту i склада-ютъся 1з введения, огляду лиератури, власнях дослхджзнь, обго-ворення результаив досл1джець, висновкзв, практкчних пропо? зицШ, б1бЛ1ограф1чного списку Л1?ератури. Бобота ыюстрована 2С таблицами. Bi6aiorpa$i4HKfl список ли^ратури ьпстить 204 найменування, з них 142 тоземних.

ОСОБИСТИЙ ЕНЕСОК ДИСЕР'ЧНТА В ВИЙЗНАННЯ FCEQTJ1 ТА ОС-HOBHI ПОЛОЖЕНИЯ, ЩО ЕЙЙОСЯГЬСЯ НА ЗАХИСТ. Сссбистий внесск ди-сертанта в виконання роботк пслягае в повшстю самоспйному ви-конанш всього сбсягу экспериментально i роботк, статистичнъЧ об-poöyi отриманих даних, анал131 результат!в експерименив т; ствставленн! ix з данный лтратури.

На захпст виноситься метод контролю iMyHoreHHccTi 1нактивс B3H0'i вакцини прети хвороби Аугск; на мзрськях свинках та удое ксналекня технологи п виготовлення шляхом ченцектрувзння антк гену 1 эамши ад'вванта.

МЕТОДОЛОГ 1Я, МЕТОДР1 ДОСЛ1ДЖЕННЯ ПРЕДМЕТУ I ОЕ'СКТУ.

Fof-ста викскувалась в 198S... 1992 рр. в гзбогатср-Л ешзос тслогИ, диагностики та прсф: .тактики z:tyc~A>;.i xscpoS евин? BIEE, Отаврспкиськлй бюфабриц;, BEipcpsrr" "Родник:;" Мое кс в с I. к. i ¡.'"л., .'¿боратор i i В1руссл;.п; 7ES HJ3I. м. НовоЧтркзсьн

У Д02Л-.ДАгНКЯХ виксркстс ЬУЕ&ЛЙ ВПрС^КП-Г.ГЛ К1 py.Tr KTHKit ЗК "К" Bipycy хвсрсби Ауеск: г 1н£~кцгйн:!: а?~.:2Кгс7Ю 6,0... 8,5 3

ТЦДэо/мл. Ei рус Ei'poínysajc: к а i-ультурах клхтин кирки ембр.она свит в стацюнарних i ролерних умовах (СПЗЕ, ЛПС), та в сус-

пенз! Г"(пггак-культури-ППЭС). ________________________

Активность вирусу визкачали пс 1НфакщйН1й дг; з с.атистич-но сщнеким йфектом 2 гсмолопчтй культур! шнтин i виралали у ткашткпх цктопатичннх дозах í, ГЦДъ'.^'МЛ/, а лстз.льност'ь Оцхнкзвалп

- - itl." г 11 *>г тчптмип\г . т^ пиг.пип Itt» rr il (it-.-,-, Pm

rico j i DajjiinaA l nupivijv a. a coi¿jco.mci...iti у .'оД- • iudpai ^ nrurl

вели за методом Р1да та Менча.

1а впрс^нзгс nipycy готували зраэки ¿нактивовано! концен-трсвано'1 ьмульгсвано'1 вакцини.

В i рус ХА шактнвували формалином у канцевьТ концентрат i О, ¿5.. « 0,2л. при TcMHcpSTypi 20» « » 0 прс т ь г с • * /«с » ¿^кл.

1нактивованкй Bipyc конц5нгу:п?г,-п;1 оеадхэ*--. ' ii&'-SCOû та NaCl у кшцевпх ка- v-hív-Ui;« iOÂ- та 2,32, ¡ид:- л5о мето-

"см уp?4iату.:., л гч ff>rn«Hi? волокнах ? es* :.">>;. ¿'лшням уста-

rCTGljI:L':.: - ! V J'. ; . . i: U3i Г G MC Г ir H i ¿ciTGp : cí£}ü . í ¡ ..ío ". _ - I; . Y. ьакууыНi Л

усташрц;.

Д' J] i KjBcíHTK i 3 Л El ¡2 T i'ÜGOT i } 1Д-.ДС1 c¿;í 1 ílTo НУ ВлА,

cjii rC'îii.c biJ-GtrJi тз. ад квант i bi mi HtPcUîlKc í.íHijji.} дл1: ь..- . i нллхьз емульгованих вакцин г антигенib (ТУ 38101307-72) з ланелгноы у сп1ьв-.д1пшэнн» 4:1, ызслдний ад' ¡снакт ЕНДЛ1, ад' к.:; ;.•{.• з

сорбентом ВНДШ, водно-шсляний ад'яьанг, суши u:.üít/..з-лово ï Р1ДИНИ (ПЕС-'З, ГОСТ 13.00.4-77) х ланолп:у у ствв1ДНО-Щ.гНН i -Í:

lí'í'I i: i.iil jJiLb^-Ijl ¡ij G Г' -ÍÍL H . Gl Ь ,

нс-лй-пд5.1Е-К1! чг шьшфчн; ыггпгтеть.

Антигенну активность ощнювали по piBHfi антител у сиворот-ках кров! вакцшюванйх тварин, який виэначали 1муноферментним методом.

¡муногенну активнють ощнювали по захисту вакцинованих тварин при экспериментальному заражение В1рулентним штамом ВХА.

Для пор!вняння з експериментальними з разками вакцини проти ХА використовували (ш;:уюч1 комерцзйН1 препарата:

- ГОА-вакцина - 1нгктивована культуральна ГОА-вакцина проти ХА свиней, овець та хутрових seipib виробництва Ставрсшлъсько! бюфабрики;

- "Geskypur" - суб'единична вакцина проти ХА виробництва ф1рш! "Rhone Meriun", Франц; я.

В дося!дах викоркстали: 718 гол!в могських свинок масою 25С. ..300 г, 20 гол!в крол1в масою 2,0...2,5 кг, 92 песця та 127 норок bikcm 3...6 Micauiu, 24 BiBqi bikom 1,5...2,0 роки, 16 свиноматок, 117 тдсисних поросят та 16 шдсвинклв.

Отриман! результата буди отатистично о5рсблен1 за методами, як1 omicaHi Г. Ф. Лак i ним (19S0 р.).

р е 3 у л Ь т а т И е л а с н и л д о с л i д Я Е н ь

1. ЕКСПЕтЕНТАЛЪНЕ ОЕГРУНТУВАННЯ М0ЖЛЖ:СТ I ЕЖОПКТАНКЯ UCFCtFJE CEJIH0K, ЯК ЕЮЛ0Г1ЧН01 МОДЕ Л1 ДЛЯ КОНТРОЛЮ [МУНОГЕННОСТ I вакцин проти ха. Каж 2уло остановлено, кр п: ;лл введения мсрськиы свинкам

bV'JlLTV'pciJTL НОГ О шТаМУ "К' ЫрУ^'З г 2 Hi* Г 3*'* В ~; - гч Ь 3 .iapSKT-ipKII-

ми рсзчухамп та летальким клкцем, а пеглс-г-:-. итпл-нкя »нактиво-ваноь вакциною гапоб:гае захЕогивакки, ча:-тнкп :;:гських свинок.

Щ спостерелення стали тдсгавою для вивчення можливост: вико-

ристзн.гя мсрськнх свинок як бюлогхчнот кодел: для визначення _1мунсгинких;_ алаетпвоетей взк^. проти ХА 1 оптикпэацп умов зд;йснення контролю. Прлкладна значимють р!1кшя"1ди;Гзавдань~ очевидна

Дослгнення поставлено! мети передбачалс пор!Вняльну ощнку чутливост! до цього вирусу р!зни:с видгв тварин 1 ыорських СВИНГ к; ._'П1ЕВ1ДН0ИгННЯ 1 ь'уНОРсЗКТПВНСиТI С 1 ЛЬ^-ЬКОГОСПОДарСЬКИХ тва-рия, хутрових зв1р1а, для яких виготовляеться вакцина, та морсь-свинок; виэначення оптимальних умов вккорнстання оетанни для титрувакня шунагенност1 вакцини, а таксж вивчення можли-воег 1 Бпливу на 1муксгекн1 властивост! цих вакцин таких факторов як вид ад'юванта, к1льк1сть антигена, терьин збэр1гання та дея-

ких 1нших.

Яорзвнядна рцткз. чуттзегг. :ззрин до :■•..• ¿а. На почат-

LHHÍ

;ci(5 1нфжування

л свинок в .: SBipatci,

Л"Ь.* Bipyoy.

В1'ираЛП БИХОДЯЧИ 3

злзен'-^г-; д:-^св!ду та данпх лхтерзтурп, - цсл cncciC даь мож-ливють точного дозування Bipycy (,б пор^внянн: е ¡нтраназзльним способ'.м), а п;дшк1рянг ¡н'скцП' виявилкся найб.лыи прийнятш ПрП pouOTi с Í.ÍJpCbKI'l.'n свинка;,я:. Вотанов; ит. шр <\;орськ. сышкл менше шших чутливх до штаму "К" i поступаиться песцям i вхецяы на ni втора порядка. Так 1,0 мл культурального Bipycy

( i п^с КЦ ¡ йп ICTL У КуЛi Тур 1 riJI.i Г л 1л С, С. . . . L ¿¿ а ii.j. ■ ...лJ

mí с? ит ь 1000 лят.г» для морських еълкок api; ^-рскхера:;:. н'лг

дэнн!. Цього впйвилося достьтий для ощнки ¿муногенних власти-востей вакцини проти ХА.

Таблица 1

Чутливгсть piSKJix тварин до аггаму "К" Bipycy XA

Вид тварин Клльк1сть тварин Титр летальное?i (гол..) aipycy (ЛД<5с>)

MopCbKi свинки 40 3,0

Норки 24 С f С XU

ШсЦ1 16 .1 С } •-!

EiB4i 16 4,5

Крол i 20 с да {J 1 UU

1мунореакгивыстъ юрсъювс свинок кз прети xscpoGí.

AyecKi. 1мунна в0дпов1дь кз щеялення у лаборатории;-: тварин, щ: BiiSpaHi моделлкз, мае Сути адекватней, ¡црдо ím'/khcí еодпсеод! i Kj'rix гаарик > для яких розро5ллют^ с л дан i препзгзтп.

1мунореактивн1сть мсрськи;-: свинок на ззкцинзцхю проти Хй шдтвбрдили в експериментах г використанням комершйни;-: препаратов, п?рев1рених на ycix ступеннях д*ржаЕн:г: контроле. 1муно-г9нй1сть t,'ja""23;1iií-ik*j п-эрсеiр"?hii кз еibll-.. .

ъt'jh-сзкцннй, до2т£17к i í! для :í'_ пзкнл к лпрухэког'и ' l.'YH* T-sTj,' У М"<> - i 'rVtYÁ. СВИНОК М-ЗГГ/С Т-. - . . . Jг'ЛЗДх',2 1 « w MJ] п с »' п \ [уп rjz»~" в»¿k- р »1г т г. i '. ^ . . к с*, ■ ¿ г-..i!"1 пр »i 2 зр -11 * ¡

■ 10 " • 1Z '* •

Таблица 2

Змунсгеннзсть ГОА-ьак:^»"»! на визцях та залежязсть - м 1 ^ - дозою. вакцини_1 дапружэшст» :мутте-ту у шрсыадх свинок

ь,:д твсрин Доза ГОА-вакцини (мл) Результат» зарз^кня*

I, О

контроль

0/3

2/2

.¡орськ;

1винки

0,1 0,5 1,0

5/5 4/5

г 111; (•„

1'Л; зна-

^■^УНиШи . 1 доли щруиг ¿.и ы:нт£слк; гщ'но-

•.¿¿¡'■у:I .ч^тц И-* гвш£,&. П^ртшлал'

еннасть трьох вакпин: ГОД-вакцина, вакцин»» "окурит" 1

^ * в <<-;л<:- -мю^Г" цоан.

Аналхзуючи рмульха^а, арь-дсгзалгн: ъ ч Л ?., - с-руч:: о увзги, щр два пера» препарати е зрззкаып комерЦ1Пньх вакцин, ;; г'-::::;: л" рггп'тк.г. вр для Псрёвгркл на мсрськпх свш-

а.; -.•:. '..л.:: >1а : г^хх;;;;;;' йз и

С,' с1;:; ;. и сгнтролг.ному эараденш ьикириагсиуь . п

"К" Blpyca XA в дез i 10... 50 4J№':i (для морських свинок). Цих ре-комендац1й ми дотрииувалися у посглдуючих экспериментах.

Таблица 3

1муногенн1сть р»зних вакцин проти ХА в залежност1 В1д доги вакцини i взрусу в дослздах на мзрських свинках

Доза Результати контрольного заражения *

Вакцина вакцини ---------------------------------------

Сия) 10 ДцГ'О ICO

ОД 4/10 (60*) 9/9 (07.)

ГОА- вакцина 0,3 3/10 (70%) 5/10 (50?.)

0,9 0/10 (100?.) 1/10 (90?.)

ОД 0/10 (100?.) 4/8 (50?.)

•Geskypur" 0,3 0,10 (1CCS: 3/10 г. 70-*.)

0,9 0/10 (100?.) 2/ 1С (80?.)

Екс [Ifr p#íiVí8 "" г. 1 0/10 Г Л \ -i W U <* / O'S ( 100?.)

талька П и/, О смо •Г 1 % i- - -в; í зо?:)

П 9 О-'Ю ' »ГГ-Л -1 t о ли» (£32)

ЬОКТрСЛ! " А^^

* - чкгглша-: - к;льк;?п ?г;.р::к. чк: г;гг-7дп В1Д ХА; гш м-5кк;:к - клльк-.сть твари«. :.ч$1ксззнп:: РХД: í дуясга: наган:

- IX,-

2. ШйРЖШЧЯ ШРСЬШ СВШЖ ДЛЯ 0Ц1НКИ 1МУШГЕНШСП

е: сперхалентальних зразкш ihaktíibobahqi бакцини проти ха.

__ В Ц1й серп flaejiiflia вивчалн ¡мунсгент властивост; експе-риментальких зраэк!В гнай^овано'гвакцгош-в- залежност1-В1Д_виду__ ад'юванта i вхд kiílkocti антигена а д031 вакцини, а таксж вплив процесу сушки s тершну эбер1ганкя на клуногетпсть вакцини. Робота викснувалась на морських свинках з метою тдтвердженнл придатн":?т1 запропоновано'! модели

¡муногенысть вакцини в залежноеrj b¡a виду ад* вазытэ. Пор1Ьндння ад'ювантних влаетивоетей у З1днсв?нн1 антигена ВХА ряда масел та експеримзнтальних ад'ввантгв ВНДЯ1 у склад! еыуль-гованих moho- 1 асоцхйованих вакцин показало, ¡до ¿муногеннють препарат ib, виготовлених i з одн1й'1 ярусно! сирог-ж;. гтнвгться в залежносп В1Д використаного ад'кванта (т?~* 7 досЛ1дах на морських свинка.: гараяэну ¡мунсге-. -у зь-.-ж'чють вия-

\ иасзг.н:'^ г,гчит ВНДЯ1,

_¿ í,.-.-. / . :.;. JÍOOJI: :-¡ли ¡идстзъ;

гикори. :.ьтг&ти Г£'>2 у вирсбниат проыислзв:'i cepii еащшв ялах.

wi.; також ыдгначити висску ад'ввантну акгизн«ст1, ¿•кгиери ментального зд' вванха-роечинника БВДД1: суха вакцина up.-:¡i ¿a^iwc-bu;.-: ? цкм зл'ювантом, створювала у вакцин;ваних морських

евин, i' ьз:;ру s.ckíí;'; ;мун:тет : до аахпгту) --й .■■ - ° :. м збер1гання (строк спостережень).

EiiSiiB Kiлъксcti аят;;гек2 в_цсг: ¿.уеллення ил ¡муь::-

s.-ii^-ií -!'•'-'■■'■, о;::'"i:, i ; fj зс-

лежить В1Д Cei dibuA p , y пу ч;:. ; й;д ...

Таблица 4

Шуногенн1сть емулыойанси вакцини проти ХА в залейност1 шд виду ад'юванта

Сп1вв1дношен- Доза Результат заражения

Ад'ювант на АГ 1 ад* (о- вакцини -----------'-------------

ванта (мл) захвсрио заглнуло

т! неральне масло з лано~ Л1ном (4:1) Мхнер. каоло ЕНДЯ1 з лако-лшом. (4:1) ПЕС-2 г лано-лхном (4:1).

1:1

1:1

1,0

0,7

8/10

-10

.-'10

е/ю

0/10

Маоляний ад'квант з сорбентом Еодно-маслиний ад'газнт

1:1

1:1

0.7

0,7

9/10

0/10

3/10

Контре;

10/10

10/10

т.^ельник - кхльпеть тга;.;н, як: захворали на ХА

К1 гэггкулк В1Д 7А: знамеккик - Л1льк:сть тзария, :н$:ко

гена у ьзкцпк;. Ряд дссл!дкик1в вказують ка прямий зв'язок м1ж

_____цими_ дзот пеказникаж ( А. А. Поздняков. В. О. Сергеев,

В. iL .Тест?реэ. 12?3). Проведен!-нэга-яоел!ди.ка__марсгккх свинках свхдчать, шр кснцтНтрсЕзк.'гп у ICO раз is знт.'тен 2ÄÄ внявнвся мгнв -.»сгн-геййш у пт.рi bîîhhk i г антигеном »-"ндантрсванкм у 1С Г?з-;г ср < 0,05). Десятирзго?е г"е.-:-;:еккя оТ?лгу BipycHcï ciipo-?;;кн '' ",'¿±C,2 TI7! г; д? "-гися сит гага ль ним для

1нает;гв&ванкх вакцин.

.тзc-.r.su^zzx:::;;'? i скулазз&зякя: гзкция прети ХА s прсцес; вбер:ганяя. Епвчалп гплпг суп:;: ;

терм;ку эбер:гакня нэ 1муног?нн1 властпвост: гнактивовано1! вакцина. Меток дссл-;джеяь 5ув впС:р кзйбьтва стаСИльнсго препарату. Зразкн iнактивевано'! концзнтрованох менс-вэкцинк проти XA i вак-цпки ИГАХ булл зм1шан; з сахзрозс-хелатичсвим середовкз&м у с ni в в iдhzненi î:i i л1сф1л1?саан!. В одн!й з cepiñ залиики фор-:.:ал;ку ч~'Лтрал:гували мегз5гсу.пьф1Т0М нзхрие. В доелгдах на btc-p-Tt-CEKBKSK тлгчал;: :;;ys-r?KHic:rb un" :-çpin в пор:ЕКянк1 з r.vy зркгу п-елт ;;;гстсзлеккя х?< '«pea 5, 12. 12

nzcvj г гСер i г i-чнл прл ; С. Вг-тзяггкли, 20 hi

сук;;--., "¡1 MüT3í;27.ibíiT язтгхх негативке не гт-гагвавть на влэеги-BGCTi антигена БлА (ЮОппЛ гз::::ст гакцинсзаччи:: тззрпн на про. 1° m-'яг.; г). 1?<учогэян:сть е;луль~овакнх грззшв цнх вакцин Cy:ii. пр:тяР1 12 v:rr.ms, i ч^рез 15 ;.потц;? гн.зк-

лэоь до ЗОГ..

РЕЗУЛЬТАТ" ЗАСТСОУВАНЕЯ КА STPOEIX ?В1РЯХ iFAKÎ!ECBAH3iX Í .уу.?:. HC:I;5JÍ;TV тт: 2-:ТАН:ВД2КД Р ЛОО.илах KA

Останнхм часом значно збхлышшась кыькхсть вкпадкхв ХА серед м'ясо1дних тварик, у тому числх х хутрових ЗВ1Р1Е, цр ввсу-нудо на перщий цдзн проблему "хх вэкцавдтл. 1скувч1 вакцини про-ти ХА в ряД1 випадкхв виявилися малоефективккыи для сстанн1Х.

¡иуногеншсть такгиваваиих дакцик рхаяого еиробшщтзв яа морсъю!х свинках г хутровях звгрях. Наш дссдхдження подтвердили неоднородность хмунного фону серед хутрових зворхв, шр створиться щэпленнам онактивованими та суб' одикичнкма вакцинами проти ХА. Одна й та ж вакцина обумовлювала утаорення р1зного по напруженостх иг/штату у песщв 1 норок.

Переворка експерииентальнао концентрованно* вакцини БАК, комерц!йш!Х "Еезкуриг" 1 ГОА-вакцинн на морських свинках, песцах та норках у дозах 0,5, 1,0 та.2,О мл, показала, ар усх вакцини мали схожу хмунсгенкхсть як на хутрових звхрях, так х на морсь-ких свинках (80 - 100% захист;-), п вмгёплгт тзэрини затянули на 3...7 доСу тела . : *--,кнд £ сз;;а;-зыи 28 (збужденна, с уде ми, парзл:*' г—г,!/,-.к у тещ введ-::;ня трус/, у порск - слюн-*теча). Результат« евхпчать прс омунсгенность вкпрсСуваних вакцин, а такс к про ыожливхеть вико-ристання морських свинок для оцхнки 1муногекностх вакцин прот1 }.А ХуТрОЕПХ ЗЕ 1рОВ.

Пор 1 внкхчп оыуногенность цих вакцин через £ х через ; 1. пхеля цепленил, ветаковили, ¡до непхддатливиыи до збудник ¿иаилися песщ та норки, шэпленх "Везкуриг" г деэах 1,0 т; 0,5 мл, вхдяевхдно, та песц1, щепленх ГСА-вакиико» в дозх 2,0 и (80... 10С?.-ш;й захист), пш часом як, ц; взкцкнк, заетсссьзн: ; хнших дозах, внявидиея не здзгнпж захиетити тгар;;к з:д эаги бель

Eo cTocyeTtcs SKcnepiiMSHTaniKoi BaKiinHi:, to BCHa aaöeaneqy-Bajia saxnct tbbpuk hr' b ci 0,5 kui, tbk i b jzqbi 1,0 mji, b ara--aaHi-CTpoRi_nspsBipKK. Kanpy^HiCTb iwyHiTci'y cpciarcM 3 michuib

' gtpck CnCCTepexeKKH) CyJia 20CTaTH£ÖB~IEp5"33:iHGTJmi-90_____100X

nscqip i Hope« Bis nap6HT6pasiHGrc aapa?»HH-i BipyjisHTHHM nrraMOM

i^ichirtt tpi'b tioi 1c t b -! i i^tj .

EaumtKOK) EAK y HopoK ia necuiB

Taöaiup- 5 -p9hct0

Ertt 1.1 IM So? a FT 5 yjlt- T ST i* KOKXpC .UKcrc aapaiio?HH^ *

OCirUAiinli B CTpCKit niCJlH E3gnj39HHa (MlCHUi)

( MJO o 4 c o e

Kcpr.n 0,5 0/7 ' OV l 0/7

1 n r-. ^ r fi /rf 1 /n i ' 1 0/7

fi ' — 2- 5 r: . c: c -<. c 4, 5 P ~ ,'C / u

y - t 1 "t p ' o 9 - O

' T 1 l. .Ii i - * ? ji*t Bifl XÄ, 3Ha-

»■ - . -w t - •,, T . ..........A f ■ st.-. i»-,. .' i? * TT dno _

. ,-jj xjsi ^> n,n. i c c-i _? j r^jrjhti cft». i-j/a

товлена досл1Дно-промислоЕа сер*я вакцини ЕАК. Еипробувакням шуногенност! цзез вакцини на пеоцях та норках в експеришнталь-ких угонах установлено, шр аднорз.зове едгшкккя створш капрулсе-ний хмуяхтет на протяз: 6 ьисящв спостереження (табл. 5).

Застоеуваккя вакцин ироти ХА хутрогих ssipis с перспективним напрямксц. Створенна iwymioro поголгв'я дозволить годувати тва-рин оириш ы'ясними выходами, ¡до суттево впливаг на ньпсть хут-ра.

4. УДОСКОКАЛЕННЯ ТЕХНОЛОГ1ЧЙОГО ПРОЦЕСУ ЕИГОТОЕЛЕННЯ БАКЦИКИ ПЛАХ I Ц ВИПРОЕУЕАКНЯ.

Як вгдоыо, одкюю э перспектив епецифг-дам профилактики 1нфевд1йнпх захворввань тварин с аасгссуЕання асоцхйованих та ко!.;б s нованих вакцин. Нами проводились досл;дження по подалькому вдоскокаленнв технологи вирсбющгвз i гас7с?у?знчя гнактнвова-Hoi кснаен?ровзко1 виульгавангл вакг'чп прел.-: "црвссгрусна! хва-роби, дептостроэу, Дуси/Л хглг.д:(ГИАХ;.

S то то в л- пая е копе рл-ie к г a.r-1.; ;?:_с? r.Qjfg-'D- ivjqkxl-лозин

cepiii бзкцини ПЛАХ. Ha бюфабриц! та в лаборатории;; уиовах ми вигстовили сш сйрхЯ вакцини ПЛАХ. При вигстовленн! серп US був запрсвадяйний метод ультрафьтьтрацк на порожки-: волокнах з ви-кернетанияы установки УПЕ-8 для концентрування антигенов замють методу осадження ПЕГ-ом, шр використовувався ранни. При цьоыу час, вшрачений на кокцектрувакня, скоротився до Л1чених годин, в nopiBHHHHi з тижняш при ссаджнк! ПЕГ-ом.

Порхвшжчп шуногешпеть зразьав вакцини ПЛАХ, якх ElдрЧзняються ¡.ид собою способами кенцентруьанкя, а також вста-ноы'вши вхдоутнють хмукогекно! активкост! г фхльтрат;, Е1Д1бра-

кого при кскцентрувапш ЕХА, установили, шр гкидания ¿мунсген-ксст! при ультрзф1л>.трслг1 практично не в1дбуваеться. Кр1м того, вдалс поделали недслхк перших серп! вакцин;:, пор'язакий э впео-ксв в'язкютю:" оСгруйтуЕали-замиу-ад'юванта на йена в'язкий 1 б1льа гктпвкий СПЕС-2 ? лакс-Глнсм у ства^днскекн! 4:1).

С-:р1я !!5 гакшши ПЛАХ устако прейшла дердавний контроль 1 була аизнака В1Дпсз;дкое ;:нуючкм т.р;мсгам. II; дало 'тдетаву зв^стг 21Лп;,В1ДН1 д;п:вн*нкя г и:р«зг.»не-те:стчну докумэнтащю.

Таблица 6 вакзаш ПЛАХ у вхдкеккннг ХА в дсслздах кз 31вцл:: 1 мсрськнх егкнках

Регультати контрольного заражения*

и сер II ----------------------------------------

В1ВЦ1 • морськ! свинки

о Г,/О 0'1С

С Р 1/10

'С Л 'Т 1.10

а " .? 3 '10

™ На 0/10

С. кд Ю'Ю

с' нд 1/10

А •:: ; V"". • ЧГПНУЛИ В1Д ХА, ЗНЗ-

- as -

¡иуногеншстъ емсперю&итзяьних s дослдяо-лрсуиславих cepifi вакцина ПЛАХ у в:дношенн1 ХА. УС1 експерименталььч зразю вакцини ПЛАХ дсслхджували на морських свинках, а деяк: в них -на вхвцях. Результат, представлен! у таблиц: 6, Еказувть на ви-соку ¿муногешпеть дослгдно-промислових cepift. Псровняння результат i в, отриманих в дссл1дзх на pismtx тваринах, евздчать прс можлив1сть використання морських свинок для контролю шуноген-hocti вакцин прети ХА. Серхя 6,. щр выровнялась вхд iheiix меншок кьчькютю антигена ЕХА, була не ^муногенною як в дсслхдах на В1ВЦЯХ, так i на морських свинках. .

¡иуюгенысть та антигеншеть вакцини ПЛАХ у вiднc¡L^eнн¡ ХА яз свинях. У эв' язку з тим, щр ХА завдаг збитки, головним чином, за рахунск загкбелг молодняка свиней, було важливии вивчення колострального iMyHiTeTy.

Проведен1 випробування вакцини ПЛАХ (серп 4 i 5) на свиноматках, игун1зсв'аних за тиждекь iifi-r". сгш^.гНдям абс га Q0 Д1б до опсросу, ясказ^^п, г'.с теог- - i.• *v iM/HïTe: i за-безпе'*кли надгйний захист cpwisot ' гхп зара-

жения BipyiôHTHîiM шгамзм ВХА ici поросята, В1Д невак-

цинованих свиноматок, захворали з клхничними ознаками ХА, а час-тина з них'(66...73%) загинула. Поросята, шр залишилиеь хивиш, в!дставали у pocTi та розвитку, середньодобова прирасти маеи Т1ла 1х складали лише 16...43 г.

Вгтдао, щр шеля щвплення шактивованими вакцинам! проти ХА s кмрачомц креш тварин з* являться В1русонейтрал1зуюч1 ан-ïuvijia, i хоча прямого зв'язку з захистом вхд хвороби не встанов-лено, цей показник залишаеться одтею з характеристик вакцини (Martin S. , 1987, Wittmann В. ,1985).

.Таблица 7

Колсстральний ¡муниет у гпдеиснкх поросят, отришних_В)Д_свинсматок щеплени.: вакциною ПЛАХ

Киткгсть Результат!! контрольного заражения поросят*

VI ллт'гл. ____________________________________________

;*ер 11 мзтск захворыз загинудо прирост ыаси

'.гол.) тыа(. г/доб) **

4 4 0 '31(0%) 0/31 (ЕЙ) .147*3

знтрмь 3 23/23(100%) 18/23(78?.) 18*4

5 2 0/19 (07.) 0/19(0%) 163*10

¡онтроль 1 5/6 (1007.) 4/6 (66Т.) 41*3

а - чиселыгак - К1Л5К1СТЬ тварин, як: захв:'рш! або загину-

¡и р - г-нр-ьк-ккик - клдькхсгь тварин, лфксваних в лап-

ор.о-н:н;'п Епрзг гзхЕсрнааннсгт: збо гагибел!

..сол!л;: ао супср^снно СБПН^мат'сах та поросятах П1дтзердили, г ЗХА--компонент у склздх вакцини ПЛАХ ь:ас високу антигенну у . ...... .. ■ . у 00 00' : ооо, 00000 сз Г . л1 б до опо-

су зпглпкалс псяву антия'А^ ..дгрссу е тпгрз;: 1:1250, ш

г.эна-г-лп га дс пометов метода 12А. СпецкфГ-яп антиплз У титрах : .. \Т.Т. г^.г^.г.". на пгсгл?! 10. ..15 «15 в сировстках . - !. н-о .го'.: '¡с?! оло.: поросят групп

юг.о.е:: с о:- т::г: •: огрео с телч жеплення ПЛАХ станзвив

1: 5120... 1: 7240, через'3 июящ - 1:900... 1:1110, до 7-го кпсяцл р:вень антит1Л знизився, асе рееструвався нг/нсфермаитшш методом, як позитиений.

Застосування вакцини ПЛАХ при спалаху ХА на зв1рофарки. Вакцина ПЛАХ (сер; я N5) бул а заотосована в неблагополучному гос-подаротв! 1 продемонструвала еисок1 профьтактичн! властивость Через три доби шоля и^плення припинилося розяовсюдження хвороби, тим часом як серед песц1в 1 норок, шэплених ГОА-вакцинов, випад-ки захворввання рееструвалися щэ на протяз! семи Д1б.

Лабораторн! та виробнич! випробування вакцини ПЛАХ свхдчать про високу активн1сть антигена вгруса ХА, шр входив у склад вакцини, 1 дали тдставу запропонуватк аастосування ще! вакцини в господарствах, неблагополучии^ по шому захвориванн!.

5. П0Р1ВНЯ;ШЯ ЕЖС^'Ш р:-.^,.* СПГООЕ1Е ПАРЕНТЕРАЛЬНОГО ЩЕЗЖЪпл Л?.',ГЛ Я*.

Остакнп; часом в Л1тератур1 з' явились грунтовнг пов1Доилен-ня про значну роль шкхри, як органу хмунно! спстеми (Ес1&1енопН. I., 1985, та зн.). Як доказ цього, значно зрю интерес доел!дник1В до внутршшьошкхряного щеплення, яке дозволяе п1 двищити шуногешп властивост! вакцин (гепатит В, чума свиней, сказ). Пов1домлгння про под1бЯ1 дослхдшння ирдо ХА, супереч-(Мзгеи; В, 1383 г., Уаппехг Р., 1989 г.). У випробуваннях вакцини ПЛАХ, вжито! внутр;ыньошк1рно або внутргшньом'зово на свиноматках та тдсвинках, приоритет одного з досл^шних способов введения нэ з'ясували. Вакцина була статистично одкаково антигакна 1 шуноге-нп.: незалежно тд способу П введения.

Пзр1вкяння еФ?ктнвностi cnocoöiB введения вакцин проти ХА

pisKoro Еирсбнпцтва в дсел!дах на морських свинках показало, шр внутр1Шньз1К1ргйе~ш!?п-т?иня-було- ефективним_лиша_при застссузанн! 1накти2иБано1 концентровант екульговано! вакцина прети хвороби AyecKi.

В И О Н С S К И

1. мтрпк! свинки явллЕтюя придатнею лабораторной модедшо для якюногс 1 кглькюного контролю 1 муног енностi 1нактивоваиих вакцин проти хвороби AyccKi, так як щеплення викликас в них 1мунну в1дпсв1дь здекватну так1й у смьськогосподарських тварин та хутрових 3BipiB.

2. Напружений паштет у вакцинованих морських свинок фор-муетьея на 18-21 дс5у. в гв'явку з чим контрольне заражения не-обхгдко проводитн в зазнзчен1 строки.

3. Сптпмзльнз 1н£;кувча деза Bipycy ХА ¡,етзм "К") для морських "зинск стзнсепть 10-50 ДДоо, яка виклпкзг ззгибель неаакци-K'.E'^i;;;: тезрин : и; вралзс ь^учних.

4. Ьголггоззч: ззетят прети хвсроСа Ауесы шхзтг перевагу по ¡муногёккосх; над осрбсван;м1 вакцинами.

5. :.дт~д ультрзфкитраци забезпечуе досхатнс концентруван-нл гч игокз ¡?ХД. э по техн; чяпм пг-кзгяагзм п?реверауг метод ссзд.«йккя ЕЕГ-ом i моде впксрпотсзуватись при впр-Снпитв! ез.щ:н проти XBCpoiti AysCKi.

;;о-:л;::"1 ;-.:;;ц-.но,.--;:'.к:п ггнгечч В"А у 1нзкгиесезн1й

г: . :: '.:'.±Z.2 ^ТЦЯос.'мл,

.• -у - т:" ' . .'ьлт::;:: у:-; ' г.о.:::::- г: ль кот ан-

тигена призводить до зниження Амуногенносп вакцини.

7. Иетаб^сульфи натрию, який викорисювуаться для нейтра-диэацп эалишюв формалину, не впливае на 1мунотенн1 властивсстх антигена ВХА.

8. 1нактивований антиген ВХА збер^ае ¡ыуннх властивсси протягом 12 М1сяц1в в склада емульгсваних вакцин 1 протягом 18 шсящв у л^офШэованному стан1, при умов1 з5ер1гання +(4±2)*С.

9. Вакцина БАК, застосована на песцях 1 норках у доз! 0,5 ил, перевершус В1тчизнян11 та 1нозеши аналоги по тривалостх та напруженост! створюваного нею ¿муштету (строк, спостереження б шсящв).

,10. Одноразове щеплення свиноматок вакциною ПЛАХ перед эшшднэнням, або у початковий перюд супороснсст!, забезпечуе надхйний захист тдсьсних поросят вл хворей; .'ус.'К1.

11. Внутривньовкзряне ¡цзпланкя = г .-игте:-: 1 свиней лроти хворебц 'Ауеск! с^ктг.^к- аг? • >ф;« "-¡псокоаг,-

тивних коицентровакнх лисктивовакг/ ^д^,

ПЕРЕД!К Р0Е1Т, ЯК1' БУЛИ 0БУЕЛ1К0ВАШ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦ11.

1. Измайлова Н.А., Еахарев В. Н. Культивирование вируса болезни Ауески в суспензионной культуре клеток и кммуногенкссть полученного'препарата //Тез. докл. IV Всесоюзной конф. Научные ос-

технологии прокетленного производства био когических препаратов. - М. - 1991. -с. 60. ..61.

2. Лаптев Ю. В., Данилов Ы. 0. , Измайлова Е А. Применение инактивированной концентрированной вакцини ПЛАХ при острой вспышке болезни Ауески у пушаих зверей // листок ЕК ДНТИ. - Усть-Каменогорск. - 1991.

- ОО -rf-o

2. Сергеев 8. А,, Измайлова К А., Лаптев Ю. В. Контроль имму-ногеннссти инактивпровакных вакцин против болезни Ауески. //Еете-

Пемзйлсза R А. Метод контроля икактивировакньк взкцин^протйв^ болезни Ауески и его использование при усовершенствовании технологии производства.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук по специальности 16. СО. 03 - ветеринарная микробиология, вирусологии, эпизоотология, микология и иммуноЛэгия. йнстктj т экспериментальной и клинической зетерпнарной медицины, Харьков, 1994 г.

Доказана возможность использования морских свинок для оценки им-муногенной активности инактивированных вакцин против болезни Ауески ( ЕА). Детально разработан метод контроля. Морских свинок нужно вакцинировать подкожно в дозе 1,0 мл. Через 21 с*,тки провести контрольное заражение подкожным введение;-.! вируса в дозе i?-5r Вакцину можно считать пригодной для профилактики

БД лье* .••хогяйотвтнкьс: дквстных и пушых зверей если пссле кон-г'\ v< - вакцинированных морских свинок

при гп^гси не ¡.'-нее - --- з ci-iic ;кр с с з нны;; /jc. /гнь.;;. Показано ио-пользсесыпг. метода для ре^екпл ряда г.''-i— j к;*х и прикладных яазач. Предлагается усовершенствование инактивпрозанной вакцины ссег:-? ;;у c-iM-.-mJ яд?.".'.. '-гч ^ечтр::?. антигена.

1г:паг leva N. A. Control ¡retted of an inactivated vaccines against A.'s 4«;' i Д1" an--J its uss m production technology

Doctor of Veterinary Sciences' Dissertation, speciality 16.00.03. - veterinary microbiology, virusology, epizotology, mioology and immunology. Institute of Experimental and Clinical Veterinary Medicine, Kharkov, 1994. •

The possibility of guinea-pigs to be a good laboratory's mode] to the control of vaccines against AD has been proved in this work. The method of control is done in detail. An subcutaneous vaccination of the guinea-pigs.in dose 1,0 ml must be used tc control inactivated vaccines against AD. The challenge has to be carried out in 21 days after vaccination. The dose of the virus AD must be 10. ..50 LDso. The challenged animals are observed for 14 days. The vaccins is considered suitable for prophylaxis ol AD in the livestock and fur-bearing animals if it prevents frot the disease 90% and more vaccinated guinea-pigs afte challenge with the virulent material causing no less t»:;.n 90S mortality ir non-vaccinated 'animals. Iters j'irv.,-.-; the use of this

metod for the solution of-theor^i-r,.; pr-ctscsl problems. The perfection of inactivated vaccine against AD has beei proposed there m the way or* ad'uvant and concentration of thi antlgene substitution

KJKHOBl СЛОЕА: хвороба AyecKi, ¡нактивоваш вакцинк, контроль iVMyKoreHHOCTi, удосконалення технолог il.