Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Изыскание, разработка и внедрение в производство инактивированной культуральной вакцины против болезни Ауески пушных зверей, свиней и овец

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОЮ ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНО-ЮНТРОЛЫШЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ

На правах рукописи Для служебного пользования

Экз. 9 037

ЧОБАНЯН Мартун Сурёнович

ИЗЫСКАНИЕ, РАЗРАБОТКА И ВНЕДРЕНИЕ В ПРОИЗВОДСТВО ИНАКГИВИРОВАННОЙ КУЛЬТУРАЛШОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БОЛЕЗНИ АУЕСКИ ПУШЫХ ЗВЕРЕЙ, СВИНЕЙ И ОВЕЦ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Москва - 1590

Работа выполнена в отделе по изучению инфекционных болезне: свиней и вирусологии Армянского научно-исследовательского инсти1 ветеринарии Госагроцрома Арм.ССР.

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, заслуженный деятель науки, професс

A.В.Селиванов

2. Доктор ветеринарных наук, профессор А.А.Конопаткин

3. Доктор ветеринарных наук, заслуженный ветеринарный врач РСФС

B.С.Сцугин

Ведущая организация - Украинский научно-исследовательский

ветеринарный институт

Защита диссертации состоится " 20 " декабря 1990 года

в 10 часов на заседании специализированного совета Д 120.85.01

по защите диссертации на соискание ученой степени доктора наук

Всесоюзном ордена Трудового Красного Знамени государственном ш

контрольном институте ветеринарных препаратов при Государствен!

комиссии Совета Министров СССР по продовольствию и закупкам по

ресу: 123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5, ВП1КИ.

С диссертацией моино ознакомиться в библиотеке ВП1КИ вете]

нарных препаратов.

Автореферат разослан " ¡¿) " к -О<■(<■)■!< , ^ J990 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат ветеринарных наук

Антонова И.Л

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

I.I. Актуальность проблемы."Для успешного выполнения задач, поставленных перед специалистами сельского хозяйства в деле выполнения продовольственной программы в СССР, важное значение имеют новые разработки, направленные на снижение потерь от инфекционных болезней животных. Среди инфекционных заболеваний с.х. животных и пушных зверей немаловажное место занимает болезнь Ауески (БА).

БА широко распространенное, остро протекающее инфекционное заболевание, которое наносит большой экономический ущерб животноводству и звероводству (Солсмкин П.С. , 1936,1942; Любашенко С.Я. и др., i960; Acermans j., 1965; Reuss U. et al., 1977). Б последние годы в связи с интенсификацией животноводства и организацией свиноводческих комплексов проявляется тенденция к широкому распространению данной болезни (Котов Б.Т., 1973; Селиванов A.B. и др., 1981; Lo-xam J.G., 1984; Pritzsche К., 1985; Kavanagh N.T., 1986). Во МНОГИХ странах эта болезнь стала проблемным вопросом в свиноводстве (Bas-kerville д., 1973; Szwedn W., 1982; Toma 3. et al., 1982). Поэтому более глубокое изучение данной болезни, усовершенствование мер существующей специфической профилактики, разработка новых высокоэффективных иммунобиологических препаратов против этого заболевания является Еесьма актуальной задачей и представляет большой научный л практический интерес.

Советскими и зарубежными исследователями проведена большая ра~ 5ота по- изучению БА, разработке тканевых и культуральных, живых и анактивированных вакцин против ТА сельскохозяйственных животных и тушных зверей (Андреев П.Н., 1937; Солошшн П.С., 1946,1947; Базы-иев ПЛ. , Прохорова Э..М., 1964,1965; Каналов Г.Х. , 1963,1270; Айра-:етян Б.Г. и др., 1966,1967; Сюрпн В.Н. , 1967,1968; Сергеев В.А. и

др., 1970,1976; Селиванов A.B. и др., 1970,1981; Осидзе Д.Ф. и др.

1972,1975; Barths А., 1961,1962; Bkoda R., 1963,1966; Toneva V., t . ! 1961,1981; Zuffa а., 1964,1964 и др.). В Советском Союзе для иммунизации свиней успешно применяется вирус._вакцина ВШЭД, которая, имея остаточную вирулентность, не пригодна для иммунизации пушных зверей. Предложенные инактивированные вакцины оказались слабоимму-ногенными для сельскохозяйственных животных, особенно для пушных зверей.

1.2. Цель исследований. Разработать новую культуральную высо-коиммуногенную вакцину против ЕА пушных зверей, свиней и овец, отвечающую современным требованиям, предъявляемым к цротивовирусным биологическим препаратам.

1.3. Основные задачи исследований.

- Изыскать перспективную клеточную систему для вьфаодвания вируса болезни Ауесви (BEA).

- Изыскать иммуногенный штамм BEA, цригодный для приготовления инактивированной вакцины.

- Разработать методику цриготовлёния инактивированной культ? ральной вакцины, обладающей высокой иммуногенной активностью про' ЕА пушных зверей, свиней и овец.

- Изучить иммунобиологические свойства разработанной вакцин в лабораторных и сравнительных комиссионных опытах.

- Разработать технологию промышленного (бнофабричного) приг товления инактивированной вакцины против ЕА из культурального вв руса.

«

- Проверить эффективность вакцины в широких производствеши опытах в неблагополучных и находящихся под угрозой БА звероводч( ких и овиноводческих хозяйствах.

f

- Внедрить в производство и ветеринарную практику вакцину для активной профилактики данной болезни.

- Изучить возможность получения аттенуированного штамма БА.

1.4. Научная новизна. От павших БА лисиц наш выделен иммуно-генный штамй ББА "K-I", который был использован для приготовления вакцины (авторское свидетельство Jf 849777 с приоритетом 7.09.79г.).

Изыскана перспективная клеточная система для выращивания ББА.

Разработан способ приготовления новой инактивированной культу-ральной концентрированной вакцины' против БА пушных зверей, свиней и овец (авторское свидетельство Jf 942282 с приоритетом 7.09.79г.).

Доказана возможность изготовления данной вакцины в промышленных условиях.

Б комиссионных опытах, проведенных на овцах и норках, доказано ее преимущество по иммуногенности над другими инактивированными вакцинами.

1.5. Практическая ценность. Разработана и выпущена для широкого производственного опыта инактивированная культуральная вакцина против БА свиней, овец и пушных зверей, которая была утверждена Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР от 15 декабря 1969 г.

В I975-1980 г.г. разработан и второй вариант данной вакцины -инактивированная культуральная концентрированная вакцина.

В 1968-1980 годы на Херсонской, Ставропольской, Сумской и Омской биофабриках выпущено 2860 литров опытных серий инактивированной культуральной и инактивированной культуральной концентрированной вакцины против БА. Данные вакцины успешно применялись в широком производственном опыте в неблагополучных и угрожаемых по БА звероводческих и свиноводческих хозяйствах.

' Кулътуральная инактивированная концентрированная вакцина БА пушных зверей, свиней и овец приказом Главветупра МСХ СССР If 50 от 30.09.1980г. внедрена в ветеринарную практику.

За 8 лет (I980-I9B8 г.г.) Ставропольской биофабрикой изготовлено и выпущено 3G200 литров концентрированной вакцины. Утверждена Минсельхозом СССР нормативно-техническая документация.

Кулътуральная инактивированная концентрированная вакцина полу-чшга одобрение практических ветеринарных специалистов страны.

Согласно расчету лаборатории экономики ветеринарии ВИКИ ветеринарных препаратов, предполагаемый экономический эффект от применения предложенной вакцины, при вероятности появления заболевания 0,5$, составляет 5735 рублей на 1000 голов зверей.

1.6. Апробация. Основные этапы представленной работы проверены комиссионно, результаты проверок доложены на научно-техническом совете ветеринарной секции ШХ СССР (17.06.1966г. и 18.06.1968г.), на П и У Всесоюзной вирусологической конференции (1966,1980г.г.), Х1У Всемирном ветеринарном конгрессе (I97L-), на научных конференциях Арм.НШВ (1967,1972,1973,1974,1984,1987) и на ВДНХ СССР в специализированной группе по теме "Прогрессивные методы вакцинации пушных зверей" ( 1980,).

1.7. Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 19 научных работах, нормативно-технических документах, утвержден ных 1УВ Госагропрома СССР и в двух авторских свидетельствах.

1.8. Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые ют защиты.

, - Пригодность BEA (штамм "К") дая приготовления Еысокоиммуно-генной инактивированной культуральной вакцины против ЕА пушных зве рей, свиней и овец.

- Изыскание перспективной клеточной системы дая выращивания ируса БА.

- Способ изготовления и применения данной вакцины.

- Иммунобиологические свойства вакцины для пушных зверей, сви-ей и овец,'В эксперименте и в производстве.

- Разработка и внедрение в ветеринарную практику инактивиро-.энной культуральной вакцины против БА.

- Анализ некоторых эпизоотологических данных по БА по Арм.ССР [ СССР.

1.9. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на ¡65 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, фактические предложения и список литературы. Работа иллюстрирова-т 45 таблицами и 7 рисунками. Список-использованной литературы включает 425 источников, в том числе 217 зарубежных авторов. В приложении представлено 15 документов, подтверждающих результаты отдельных этапов работы и их научную и практическую ценность.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Включает в себе подглавы: распространение болезни и экономический ущерб, культивирование ББА на культуре ткани, иммунитет, пассивный иммунитет, активный иммунитет, изменчивость ББА, лиофильная сушка ББА и заключение по обзору литературы.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материалы и методы исследования.

Работа выполнена в течение 1968-1989 г.г. по общесоюзной и отраслевой научно-техническим программам в отделе по изучению инфекционных болезней свиней и вирусологии научно-исследовательского ин-

статута ветеринарии Арм.ССР, Кироваканском зверосовхозе, Херсонск Омской, Сумской; Ставропольской биофабриках. Широкие производстве: ные опыты проведены в Рязанской и Воронежской областях и во многи звероводческих хозяйствах РСФСР, комиссионные опыты на Ставрополь ской биофабрике, экспериментальной базе научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства.

-Втоуоы. В опытах использовали пять эпизоотических штаммов ВБ из которых два были получены из В1НКИ ветеринарных препаратов, а три были выделены нами из органов павших от БА поросят, собаки, п ных зверей при вспышке ЕА в некоторых хозяйствах Арм.ССР.

Питательные среды и солевые растворы. Применяли: фосфатно-бу ферный раствор, 0,25-0,3$ раствор трипсина, 0,02% раствор версена 0,5$ раствор гидролизата лактальбумина на сбалансированном солевс растворе Хенкса, питательная среда 199. В качестве источника беда вого питания, витаминов и других факторов роста для выращивания клеток использовали сыворотку крови крупного рогатого скота.

Культуры клеток. Были использованы первичная и перевиваемая культуры клеток. Из первичных культур клеток - клетки почек 3-30-дневных крольчат (КПК), 2-3-месячных эмбрионов свиней (ПСЭ), поче крупного рогатого скота (Ш) и фибробласты 9-11-дневных куриных : брионов (ФКЭ). Из перевиваемых клеточных штаммов использованы клс ки почек эмбрионов свиней (СПЗВ), почек телят (ПТ), лимфоидных ю ток свиней (СЭЛ), раковых клеток человека (Нор-2), клетки почек I росенка (ПП), клетки почек свиней (СЭИ-1). Первичные культуры кл(

ток и перепассирование перевиваемых культур клеток приготовлены I «

проведены нами в отделе по изучению инфекционных болезней свиней вирусологии.

Еивотнне. Безвредность и иммуногенность приготовленных вакщ

итрацию вирусов провели на молодых белых мышах массой 14-16. грамм, роликах массой 2 ,5-3 кг, овцах массой 30-60 кг и на пушных зверях 6-месячного до годичного возраста.

Вакцины. Применяли опытные серии инактивированной культураль-ой и инактивированной культуральной концентрированной вакцин, из-отовленные в лабораторных условиях в Арм.НИИВ, а также производ-твенные серии, изготовленные на Херсонской, Сумской, Омской и тавропольской биофабриках.

Инактивация ВБА. Инактивация ВБА в приготовленных вакцинах роизводилась формалином, содержащим 37$ формальдегида. В некото-1ЫХ сериях вакцин дальнейшее отрицательное действие формалина ней-рализовали путем добавления 0,02 M гидроксиламина, кроме этого, як инактиватор испытали и бета-пропиолактон.

Адъюванты. В качестве адъЮвантов в приготовленных вакцинах :спользовали &% гидроокись алюминия и минеральное масло с ланоли-:ом. Гидроокись алюминия получали с Ставропольской биофабрики, ко-■орую стерилизовали путем автоклавирования при 120°С в течение I :аса. Смесь масла и ланолина стерилизовали в течение 2 часов при 20°С.

Методы исследований. В работе применяли реакцию нейтрализации ¡ЕА на культуре клеток, получение бляшек ВБА под агаровым покрыти-¡м, титрацию вирусов на белых мышах, кроликах, овцах, пушных зве-1ях и на культурах клеток.

Реакцию .нейтрализации вируса на культуре клеток применяли с [елью определения титра вируснейтрализующих антител в испытуемых ;ыворотках, что одновременно позволяет судить о степени напряжен-:ости иммунитета у животных. Метод получения бляшек под агаровым ¡окрытием использовали для изучения свойств отдельных бляшек раз-

ных размеров. Титрацшо вируса на животных и на культуре клеток вели с целью определения того наибольшего его разведения, котор вызывает у 50$ зараженных животных падеж или у 50$ зараженных к тур клеток дегенерацию. Титр вируса вычисляли по методу Рида и Менча.

Сохраняемость лиоФилизированного вируса. Высушенные ВЕА в паянных ампулах, хранящиеся при 4—6°С, проверяли ежегодно в тече II лет путем титрации по ТЦД^д на культуре ПК и ДД^ на кроликг

Статистическая обработка результатов. Полученные результат обрабатывали статистически общепринятыми методами, используемыг биологии (Г.Ф.Лакин, 1360).

Расчет предполагаемого экономического эффекта от применен] инактивированной культуральной концентрированной вакцины на пр.-ке. Произведен в соответствии с требованием "Методики определе: экономической эффективности использования в сельском хозяйстве зультатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских ра от 1978 г.

3.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.2.1. Изучение чувствительности некоторых первичных и пе ваемых клеточных культур к ВБА. В наших исследованиях мы испол вали первичные культуры клеток почек: крольчат, крупного рогат скота, свиных эмбрионов, фибробластов куриных эмбрионов, а тар штаммы перевиваемых клеток Нёр-2, СЭЛ, С311-1, ПП, СПЗВ и ПТ.

При изучении сравнительной чувствительности этих культур меняли штамм ВШКИ с титром ТЦД^ 10 » . После заражения кулк клеток учитывали сроки наступления цитопатогенного действия вз характер дегенеративных изменений клеток и интенсивность накм

вируса в культуре ткани по титру цитопатогенного действия. Из использованных культур клеток к ВБА оказались чувствительными все испытанные первичные и перевиваемые клеточные культуры. Однако среди испытанных культур мы предпочтение дали первичной культуре ПК, так как они легко растут, менее требовательны к питательным средам, хорошо растут на питательных средах Хенкса, гидролизата лактальбуми-на, Эрла, 199 и на среде Игла. Кроме этого, BEA. на данной культуре имеет достаточно высокую репродуктивность (Ю^-Ю7*®). Выбрав для дальнейшей работы первичную культуру ПК, мы учли и то обстоятельство, что источник клеток КП? — кролики, среди всех лабораторных, сельскохозяйственных животных и пушных зверей являются самыми высокочувствительным! животными к BEA.

Изучение динамики накопления вируса на зтой культуре показало, что в течение 12 часов после заражения размножение вируса идет

о с

сравнительно медленно и титр его доходит до 10 Начиная с 18 часов, интенсивность накопления вируса усиливается и к 30 часам до-7 S

стигает максимума - 10 • . Начиная с 42 часов титр вируса постепен-

4 S

но снижается, к 96 часам достигает до 10 Максимум накопления

титра вируса совпадает с наступлением полной дегенерации клеток и разрушением монослоя ткани.

3.2.2. Технология изготовления инактивированной ктаьгуральной вакцины против БА. ее контроль и испытание. Для приготовления инактивированной культуральной вакцины использовали эпизоотический штамм ББА, полученный из ВГНКИ и эпизоотический вирус штамм "K-I", выделенный нами от заболевших и павших от БА лисиц. Оба вируса в многочисленных пассажах на культуре клеток почек от 2-х до 30-ти дневных крольчат_хорошо репродуцировались и сохраняли исходную вирулентность, что служило основанием для использования этих штаммов

-10 -

при изготовлении инактивированных вакцин против БА.

Б основу изготовления инактивированной вакцины из вируса, выращенного на культуре клеток, была положена адсорбция вируса на ми неральном коллоиде-гидроокиси алюминия и последующая инактивация его формалином. Перед составлением каждой серии вакцины готовили соответствующее количество вируса, которое использовали только пос ле его проверки на стерильность.

Из вируссодержащей жидкости каждого матраса производили высевы на МПБ, МПА и МППБ под вазелиновым маслом и агар Сабуро с 1$ глюкозой для определения наличия посторонней микрофлоры. Высевы вы держивали 5 дней в термостате при 37°С, агар Сабуро при температуре 18-20°С. За это время матрасы с вирусом хранили в холодильнике.

Для изготовления вакцины использовали вируссодержащую жидкость, свободную от посторонней микрофлоры, с титром ТЦДзд не менее Ю7.

В состав вакцины входят следующие ингредиенты:

1. Культуральный вирус болезни Ауески - 33$

2. 6$-я гидроокись алюминия (гидроксал) - 22,5$

3. Фосфатно-буферный раствор - 29,5$

4. Глицерин чистый - 15$

5. Формалин, содержащий 37-40$ формальдегида - 0,05$ Первые опытные серии инактивированной культуральной вакцины

готовили из вируса 224 пассажа, выращенного на культуре Ж, а зате из 290-300 пассажей, которые служили матриевым штаммом. Первоначал

но из вируса 224-го пассажа готовили четыре опытных образца вакцш «

отличающиеся друг от друга по содержанию формалина. Это делали дл* определения оптимальной концентрации формалина, обеспечивающего безвредность и иммуногенность вакцины. 1-ый образец не содержал фс

лалина, И содержал 0,05$, Ш - 0,1$, а 1У - 0,15$. Каждый-из этих эбразцов вакцины испытывали на 10 белых мышах. Каждой вводили подкожно 0,5 мл вакцины. Наблюдение за вакцинированными мышами велось в течение 14 дней. В итоге I образец вакцины без формалина содержал вирулентный вирус и вызывал гибель шести и десяти белых \м»г шей. Остальные три образца оказались безвредными для белых мышей. Спустя 14 дней после вакцинации всех30 белых мышей, привитых вакцинами П, Ш, 1У образца вместе с 10 интактными контрольными мышами заражали вирулентным вирусом в дозе 0,2 мл (100 смертельных доз). В результате все 10 мышей, иммунизированных вакциной, содержащей 0,05$ формалина, остались живыми. Из 10 белых мышей, иммунизированных вакциной, содержащей 0,1$ формалина, 8 остались живы. Из 10 белых мышей, иммунизированных вакциной, содержащей 0,15$ формалина, пали 4. Все контрольные мыши погибли с характерными признаками БА. Проведенный на белых мышах опыт показал, что вакцина, содержащая 0,05$ формалина, обладала более выраженной иммуногенностью, поэтому последующие серии вакцины готовили с содержанием 0,05$ формалина.

Опыты по изучению иммуногенности инактивированной вакцины из культурального БЕА для сельскохозяйственных животных проверяли на овцах. Выбрав этих животных, мы исходили.из того, что овцы сравнительно легко иммунизируются и поддаются экспериментальному заражению БЕА, при этом проявляют характерные для данной болезни симптомы: зуд, паралич и др.

Первый опыт поставили на 10 овцах, из которых 4 вакцинировали однократно, 4 - двукратно, с интервалом между I-П инъекциями в 7 дней, 2 оставили непривитыми - контрольными. Бакцину вводили подкожно на внутренней поверхности бедра, в дозах 8 мл для однократной и 3 и 5 мл - дая двукратной вакцинации. Вакцинированные овцы

не проявили какой-либо реакции на введенный вирус. У контрольных' овец наблюдалось беспокойство, зуд на поверхности привитой конечности , на 5-6 день наступило коматозное состояние, закончившееся смертью животных. Проведенный опыт показал, что инактивированная культуральная вакцина, приготовленная из ББА, у привитых овец при однократной и двукратной вакцинации вызывает довольно напряженный иммунитет. Дальнейшие опыты были посвящены выяснению иммунизирующей дозы, срока наступления иммунитета данной вакцины на овцах. Под опыт была поставлена 71 овца, их вакцинировали однократно, 5 голов в дозе I мл, 21 голову в дозе 3 мл, 36 - в дозе 5 мл, 2-е дозе 8 и 2 - в дозе-10 мл и 5 голов не вакцинировались - служили контролем. Контрольное заражение провели после вакцинации через £ 20 дней. Б итоге одна овца из числа вакцинированных вакциной в дс зе по 3 мл пала, а остальные 65 овец остались в живых, пять контрольных овец пало с клиникой ЕА. Иммунитет у овец наступает не пс же, чем на 8-ой день после вакцинации. Иммуногенные свойства ина! тивированной культуральной вакцины нами изучены также на 3-4-мес^ ных поросятах. Опыт ставили на 8 поросятах, испытали две серии в; цины, каждой серией вакцинировали по 3 головы, 2 служили контрол] ными. Контрольное заражение произвели комбинированным методом через 13 дней после вакцинации. Каждому поросенку ввели по 1-1,5 м. эмульсии мозга павшего от ЕА кролика (1:5), часть ввели подкожно а остальную часть per os или в ноздри.

После заражения все вакцинированные поросята не цроявили каких-либо нежелательных признаков и не реагировали на введенный в: рус. .

У контрольных поросят на 2-4 день после заражения температу поднялась до 40,2-41,4°С. Кивотные были угнетенные, отказывались

от корма, участилось дыхание, нарушилась координация. Опыты, проведенные на овцах и поросятах, показали высокую иммуногенность испытуемой вакцины. Полученные наш данные были представлены в Главвет-управление МЗХ СССР. Из Главветуцра потребовали провести повторную комиссионную проверну данной вакцины. Комиссионное испытание, проведенное в Арм.НИИБ на 8 овцах, снова показало высокие иммуноген-ные свойства данной вакцины.

Согласно представленным материалам Главветуправление МЗХ СССР 17.06.1966г. на научно-техническом совете вынесло решение разрешить провести широкий производственный опыт предложенной вакцины в неблагополучных по БА свиноводческих хозяйствах Рязанской и Воронежской областей РСФСР.

3.2.3. Испытание культуралъной инактивированной вакцины против БА на пушных зверях в Кироваканском зверосовхозе Арм.ССР. В 1970г. в Кироваканском зверосовхозе при вспышке болезни в течение 10 дней заболело и пало 500 голов серебристо-черных лисиц и 400 голов норок. Биоцробой на кроликах наш был поставлен диагноз БА. Источником болезни являлись субпродукты свиней, чем кормили зверей. Зверосовхоз начиная с 1960 года считался стационарно неблагополучным по БА, несмотря на планомерно цроводимые црививки формол-эмбрион вакциной. После постановки диагноза поголовье норок и лисиц иммунизировали инактивированной культуральной вакциной однократно в дозе по 2 мл. После вакцинации через 5-6 дней падеж среда лисиц и норою прекратился. Б 1971-1973 годах в данном зверосовхозе применялась только предложенная нами вакцина. После вакцинации зверей кормили сырыми субпродуктами свиней, но не было зарегистрировано ни одного случая БА. Б данном зверосовхозе для определения кратности и оптимальной дозы вакцини для лисиц и норок нами был проведен ряд

опытов.

Восприимчивость лисиц к эпизоотическому ВБА штамма "Кармир". Определяли двумя методами: при первом заражение лисиц произвели десятикратным разведением эмульсии мозга павших от ЕА кроликов, а цри втором методе. путем вскармливания смесью мозга и внутренних органов павших от ЕА роликов. Под опыт было поставлено 20 голов 7-8 месячных лисиц, из них 12 голов заражали внутримышечно и 8 голов путем вскармливания. Заражение произвели эмульсией мозга кроликов, павших от заражения эпизоотическим BEA штамма "Кармир", с титром на кроликах I07. При внутримышечном заражении испытали три разведения вируса: 1:10, 1:100, 1:1000. Каждым разведением заражали 4 лисицы. На 7 день заражения из числа 12 лисиц пало только 4, зараженные разведением 1:10, а из числа 8 лисиц, зараженных вскармливанием, все переболели.

Определение шлмуногенной активности инактивированной культу-ральной вакцины против ЕА для лисиц. Под опыт поставили 20 лисиц. Испытали две дозы: 0,5 и I мл цри однократной и двукратной вакцинациях. Каждой дозой вакцинировали 4 лисиц. 4 лисицы служили контролем. Контрольное заражение цроизвели через 60 дней после однократной и через 53 дня после двукратной вакцинации (табл.1).

Однократно вакцинированные лисицы в дозе 0,5 мл не выдержали смертельную дозу вируса и все пали с клиникой ЕА, а из 4 лисиц, вакцинированных в дозе по I мл, живой осталась только одна. Из двукратно вакцинированных лисиц остались живыми 3 из 4, привитых по 0,5 мл, и все 4 лисицы, вакцинированные по I мл. Контрольные 4 лисицы пали с клиническими признаками ЕА.

Проверка напряженности иммунитета у вакцинированных против ЕА лисиц при помощи реакции нейтрализации (РН). РН ставили с сыворот-

Таблица I

Определение иммуногенности инактивированной культураль-ной вакцины против ЕА, на лисицах

Вакцинация

Заражение

Исход

лисип Жи промежуток после вак-

цинацияш

цинации в днях

пало живы

4 4 4 4

Сонтрольные 4

0,5 1,0 0,5 1,0

7 дней 7 дней

0,5 1,0

60 60 53 53

4

3 I О

4

0

1

3

4

О

сами, полученными от однократно в дозах 0,5; I и 2 мл и при двукрат-ю каждый раз по 0,5; I и 2 мл вакцинированных и невакцинированных ;онтрольных лисиц. № ставили с сыворотками, полученными от каждой К>зы вакцинированных 4 лисиц. Полученные результаты обработаны по гетодике, изложенной Г.Ф.Лакиным (1980)', для подсчета средней гео-©трической при групповых серологических исследованиях. Результаты Н показали, что сыворотки, полученные от о'днократно вакцинирован-ых в дозах 0,5 мл лисиц, не имеют нейтрализующего свойства, а сы-оротки, полученные от однократно вакцинированных лисиц в дозе I л, нейтрализовали 100 ТЦД^ вируса при разведениях 1:258. Сыворот-н, полученные от той же группы лисиц, вакцинированных в дозе 2 мл, эйтрализовали 100 ТЦД50 вируса в разведениях 1:4,7. Сыворотки, порченные от двукратно вакцинированных лисиц, обладают более высокой труснейтрализующей активностью. Тан, сгасротки, полученные от лиги, вакцинированных двукратно по 0,5 мл, нейтрализовали 100 ТЦД50

вируса при разделении 1:8, сыворотки, полученные от лисиц, вакцини рог>анн :х двукратно по I мл, нейтрализовали то же количество вируса при ps-ведении 1:16, а сыворотки, полученные от лисиц, двукратно вакцинированных в дозе по 2 мл, нейтрализовали IOi ТЦД50 вируса при разведении 1:27.

Восприимчивость норок к эпизоотическому ВБА штамма "Кармир". Определяли двумя методами: при первом заражение норок произвели Д€ сяти ратными разведениями эмульсии мозга павших от БА кроликов, а при втором методе - путем вскармливания норок смесью мозга и внутренних органов павших от БА кроликов.

При внутримышечном заражении под опыт ставили 16 норок, которых заражали разведениями вируса 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000. Ка дым разведением заражали по 4 норки. Для заражения путем вскармли вания под опыт ставили 8 норок, из них 4 вскармливали по 40 гр., 4 - по 20 гр. вируссодержащей массы. Все норки, зараженные развед ниями вируса 1:10, 1:100 и 1:1000 пали, а из числа 8 норок, зараженных методом вскармливания, только норки вскормленные вируссоде жал)ей массой 40 гр. на 2-й, 4-ый день проявили признаки беспокойс ва, отказывались от еды, а на 5-ый день заражения эти явления исчезли и норки выглядели нормально.

Определение иммуногенной активности инактивированной культу-ральной вакшны против БА для норок. Под опыт поставили 20 норок. Испытывали 2 дозы: 0,5 и I мл при однократной и двукратной вакци! вдях. Каждая доза испытывалась на 4-х норках. Контрольное заражение норок произвели через 30 дней после однократной и через 15

4

дней после двукратной вакцинаций (табл.2).

Однократно вакцинированные по 0,5 мл норки пали, а из числа норок, вакцинированных по I мл, пали 3. Из двукратно вакцинирова

Таблица 2

Определение иммуногенной активности инактиви-рованной куль тур апьной вакцины для норок

Вакцинация Заражение Исход

количество норок доза I вакцинации, мл интервал между вакцинациями, дни доза П вакцинации, мл после вакцинации в днях пало живы

4 0,5 - - 30 4 0

4 1,0 - - 30 3 I

4 0,5 15 0,5 15 3 I

4 1,0 15 1.0 15 I 3

контрольные

4 - - - -'.40

шх норок по 0,5 мл пали 3, а из 4-х норок, вакцинированных каждый раз по I мл пала одна. Все контрольные норки пали с клиникой ЕА.

3.3. Технология изготовления инактивированной культуральной концентрированной вакцины против ЕА. ее контроль и испытание. С *елью повышения иммуногенной активности инактивированной культураль-юй вакцины нами был приготовлен новый вариант данной вакцины, путем повышения в ее составе количества вируса. В новом варианте вак-даны вместо 33$ культурального вируса содержалось 62,5$. Повышение количества вируса в составе вакцины произвели за счет сокращения аз ее сЬставй буфера, при этом не и¿меняя количества других основных компонентов.

Новый усовершенствованный вариант инактивированной дультуралъ-зой вакцины имеет такой состав:

1. Культуральный вирус ЕА - 62,5$

2. 6$-я гидроокись алюминия - 22,5$

3. Глицерин -.15$

4. Формалин,, содержащий 37-40$ формальдегида - 0,05$

Согласно инструкции по изготовлению и контролю инактивирован-

ной культуральной концентрированной вакцины имеется некоторое отличие в отношении контроля инактивированной культуральной вакцины Безвредность инактивированной культуральной концентрированной вакцины проверяется на 10 кроликах вместо 3-х при инактивированной культуральной вакцине. Для определения безвредности концентрированной вакцины берется 5 флаконов с вакциной. Вакцину из каждого флакона вводили 2-м кроликам, внутримышечно по 5 мл. Кролики при наблюдении за ними в течение 10 дней должны оставаться здоровыми. В случае гибели одного или обоих кроликов вакцина испытывается по вторно. Для этого берется 5 флаконов с вакциной из той же серии и вводится из каждого флакона 4-м кроликам по 5 мл. При гибели хотя бы одного кролика вакцина бракуется.

йммуногенность концентрированной вакцины в отличие от инакти вированной культуральной вакцины проверяется на 3-х опытных и дву контрольных овцах, вместо двух опытных и одного контрольного. Бак цина считается активной, если из 3-х овец, вакцинированных однократно в дозе 3 мл, после контрольного заражения все остаются жив а из 2-х контрольных овец погибают от БА обе.

Определение иммуногенной активности инактивированной культуральной концентрированной вакцины на лисицах в Кироваканском звер совхозе. Йммуногенность и безвредность вакцины проверяли на лисицах. С этой целью 100 лисиц вакцинировали однократно по 2 мл и 1С голов двукратно по I и о 14-дневным интервалом. Лисицы вакцинаци перенесли без осложнений. Напряженность и продолжительность иммун тета у лисиц, вакцинированных концентрированной вакциной, определ

I в опыте на 8 головах. При этом в опыт взяты 3 лисицы от группы зрократно, 3 - от группы двукратно вакцинированных, а 2 невакцини-эванные служили контролем. Контрольное заражение производили че-зз 130 дней после двукратной и через 144 дня после однократной акцинации (табл.3).

Таблица 3

Определение иммуногенной активности инактивированной культуралъной концентрированной вакцины на лисицах

Вакцинация

Заражение

Исход

оличество доза I интервал доза П лисиц вакци- между вак- вакцинации , цинациями, нации, мл дни мл

после вакцинации в днях

пало живы

3 3

онтроль 2

1

2

14

130 144

0 0

одна пала, вторая переболела

3 3

Контрольное заражение, проведенное после вакцинации лисиц че-ез 130 и 144 дней показало, что лисицы вакцинированные двукратно о I мл и однократно по 2 мл, выдержали смертельную дозу вируса, .'з двух контрольных лисиц одна пала, а вторая переболела.

3.4. Пригодность белых мышей и столиков для оценки иммуноген-юсти инактивированной культуралъной вакцины против БА. Первичные 1пыты проверки йммуногенных свойств' инактивированной культуралъной !акцины проводили на белых мышах. На них проверили иммуногенность юех 7 серий (I; 2; 3; 4; 6; 7; 12) вакцин, из коих 2 и 4 серии гроверяли по два раза, 12 - три раза, а остальные - по одному разу. )пыты проводились на 167 мышах, из которых 88 вакцинировались, а

79 служили контролем. Результаты первой проверки 2-й серии вакцины показали, что из опытных мышей после контрольного заражения выжили 40$, а все контрольные пали. При повторной проверке соответственно выжили 62,5$ и пали 50$ мышей. 12-я серия вакцины проверена три раза и во всех 3-х случаях после контрольного заражения 60-80$ контрольных мышей остались в живых. Из проверенных на белых мышах семи серий вакцин четыре, а именно I; 2; 4 и 6-ую проверяли также и на овцахл Результаты опытов, проведенных на овцах, показали, что все проверенные вакцины являются иммуногенными, а разноречивость опытов, проведенных на мышах, не связана со степенью иммуногенности вакцин, с непригодностью их для проверки иммуногенности вакцин против ЕА.

При проведении опытов по определению безвредности инактивиро-ванной вакцины на кроликах, в некоторых случаях цровели заражение кроликов, вышедших из-под опыта. Б зависимости от кратности вакцинации и заражающей дозы, в некоторых случаях кролики оставались в живых. Учитывая, что кролики являются сравнительно дешевыми объектами и с ниш гораздо удобнее работать, мы провели опыты для выяснения пригодности этих животных для определения иммуногенности ин-активированной культуральной концентрированной вакцины против БА. Под опыт были взяты 50 кроликов весом 2-2,5 кг, из них 38 вакцинировались, а 12 служили контролем (табл.4). Вакцину вводили кроликам подкожно или внутримышечно однократно и двукратно, при однократном в дозах 2; 5 и 10 мл, а при двукратном каждый раз в дозах I; 2; 3 и 5 мл,с7 и 14-дневным интервалом. Контрольное заражение произвели спустя.20 и 30 дней после однократной вакцинации и через 7, 9 и 14 дней после двукратной вакцинации. Для контрольного заражения использовали эпизоотический вирус ЕА с титром ЛД50 для кроликов 10^-

Таблица.4

Результаты вакцинации кроликов

Вакцинация

Заражение Результаты

о -

е§

о и т

ш к о о

Ь* У У , о

& о о м

е<

о к а)

м р(

к

«I о;

I <

л Й :

со 2 о Я «и

СИ

РчЯ

«в

о Э

4

т м о 3 «и

ф В ч а

о к о я 1=1 И-

ё

пало живы

№ I

о I

3 3

3

4

3

4 3 6 3 6

однократно

двукратно

2,0 5,0 10,0 5,0 2,0 2,0 1,0 2,0 3,0 5,0

14 7

14 14 14 14

2,0 2,0 1,0 2,0 3,0 5,0

20 20 20 30 7 9 14 14 14 14

I I 0 0 3 3 I

о о о

2 2 3

" 4 0

1

2 6 3 6

Контроль 12

12

0

7 5

10'* в дозе по 500 ЛД^ в I мл. Опыт показал, что при однократной вакцинации стойкий.иммунитет к ВЕА приобретают кролики, получившие 10 мл вакцины (3 головы) и зараженные через 20 дней после вакцинации, а также кролики, получившие 5 мл вакцины (4 головы), но зараженные через 30 дней. Стойкий иммунитет приобретают также кролики (15 голов), вакцинированные двукратно с интервалом в 14 дней, в дозах 2; "З и 5'мл'и зараженные через 14 дней. Часть остальных, однократно и двукратно вакцинированных кроликов, приобрели слабый иммунитет и после контрольного заражения пали с клиникой БА. Контрольные кролики (12 голов) также пали с клиникой БА.

3.5. Широкие производственные опыты по внедрению инактивиро-

ванной культуральной вакцины в неблагополучных по БА свиноводческих и звероводческих хозяйствах РСФСР. Согласно указанию ГУБ МСХ СССР в АрмНИИЖиВ была комиссионно проверена иммуногенность культу-ральной инактивированной вакцины.

Положительные результаты комиссионной проверки были представлены в 1УВ МСХ СССР, где 17.06.1966г. на научно-техническом совет« проведенная нами работа была одобрена и разрешено проведение широкого производственного опыта по внедрению инактивированной культу-ральной вакцины в неблагополучных свиноводческих и звероводческих хозяйствах РСФСР. • -

Согласно указанию 1УВ МСХ СССР в 1967 году в неблагополучном по БА свиноводческом совхозе "Некрасово" Михайловского района Рязанской области была проведена вакцинация свинопоголовья против БА предложенной нами инактивированной культуралъной вакциной.

Массовое заболевание свиней БА в этом совхозе имело место в 1966 г., где поросят^прививали вакциной АрмНИИЖиВ с 2-х дневного возраста, а супоросных свиноматок не позднее чем за 15 дней до опороса. Всего в этом хозяйстве привили 4919 голов свиней и поросят. Взрослых свиней прививали в дозе 5 мл, отъемышей и откормочных по 3 мл, поросят-сосунов 1-2 мл. Новорожденным поросятам вакцину вводили двукратно: первый раз в возрасте до 2-х дней в дозе I мл и через 6 дней, повторно в дозе 2 мл. После прививки за пркш тыми животными было установлено постоянное наблюдение. Все вакцин] рованные поросята и взрослые свиньи не проявляли каких-либо нежел. тельных признаков на введение вакцины и не заболели БА в течение одного года (срок наблюдения).

Согласно указанию ГУВ МСХ СССР, с целью продолжения широких производственных опытов по испытанию инактивированной культураль-

[ой вакцины против ЕА в 1968г. в стационарно-неблагополучных хозяй-¡твах Воронежской области было привито 10960 свиней, в том числе (787 поросят в возрасте 2 месяцев, 950 голов 2-4-месячного возраста и 1223 голов глубоко супоросных свиноматок. После применения 1анной вакцины, через 7-10 дней падеж среди свиней прекратился. В течение одного года (срок наблюдения) в данных хозяйствах БА не ювторялась.

18 июля 1968 года в ГУБ МСХ СССР обсуждался ход лроизводствен-юто опыта в неблагополучных по ЕА свиноводческих хозяйствах Рязанской и Воронежской областей.

Совещание отметило положительные результаты широкого производственного испытания предложенной нами вакцины в условиях стационарно-неблагополучных хозяйств, разрешило изготовление опытных серий инактивированной культуральной вакцины на Херсонской биофабрике.

Данная вакцина,■кроме свиноводческих хозяйств, испытана в широких производственных опытах и в звероводческих хозяйствах. Согласно данным зверопрома РСФСР в 1971-1975 годах в неблагополучных по БА зверосовхозах Забайкальский, Солнцевский, Тобольский и Речной было вакцинировано инактивированной культуральной вакциной против БА 52541 голова лисиц, 488841 голова норок и 38353 голов песцов. Из всех неблагополучных хозяйств, где была применена данная вакцина, поступили только положительные отзывы.

3.6. Внедрение в производство методики приготовления культуральной- инактивированной и культуральной инактивированной концен- -трированной вакцин против БА в некоторые бибфабрики страны. С целью изучения возможности производства инактивированной культуральной и инактивированной культуральной концентрированной вакцин в биофабричных условиях, а в дальнейшем и для использования в шро-

ких цроизводственных опытах, на основании решения научно-технического Совета ГУБ'и 1У биологической промышленности МСХ СССР, в Херсонской, Ставропольской, Омской и Сумской биофабриках, совместно с местными специалистами в 1969-1980-ые годы приготовлено 478 литров опытной серии культуральной инактивированной и 2412 литров культуральной инактивированной концентрированной вакцин.

На Херсонской биофяблике, На основании решения научно-технического Совета 1УВ ШХ СССР от 18.07.68г. и указания Главного Убавления биологической промышленности МСХ СССР № 346-24 от 04.04.69г. в экспериментальном, цехе были приготовлены две серии инактивированной вакцины против ЕА, в объеме 53,5 литров. Каждой серией вакцины прививали 8 овец в дозе по 5 мл. После контрольного заражения все вакцинированные овцы не проявили какого-либо отклонения от нормы, а контрольные 4 овцы пали с ярко выраженным» признаками ЕА.

На основании проведенного опыта комиссия пришла к заключению, что инактивированная культуральная вакцина, приготовленная по методике АрмНИИЖиВ обладает выраженной иммуногенностью.

На Сумской биофабрике. В соответствии с указанием Главбиоцро-ма МСХ СССР (№ 346-20 от 29.03.1574г.) методика приготовления инактивированной культуральной вакцины против ЕА внедрялась также на Сумской биофабрике. Согласно временной инструкции по изготовлению и контролю инактивированной культуральной вакцины приготовили 4 серии вакцины в объеме 140 литров. Иммуногенность 4-х серий вакцин определяли на 10 овцах. После контрольного заражения вакцинированные 8,овец не проявили какого-либо отклонения от нормы, а контрольные 2 овцы пали с клиникой БА.

На основании проведенного опыта комиссия при Сумской биофабрике пришла к заключению, что культуральная инактивированная вакцина

С

- 25 -

однократно вакцинированных овец создала стойкий иммунитет.

На Омском биокомбинате. В соответствии с указанием Главбиопро-а МСХ СССР (за № 345 от 06.10.75г.) на Омском биокомбинате совме-¡тно с местными специалистами внедряли в производство 'Методику при-•отовления инактивированной культуральной вакцины. Были приготовле-[ы три серии инактивированной культуральной вакцины в объеме 285 штров. Каждой серией вакцинировали по две овцы. После контрольно-'о заражения вакцинированные 6 овец не проявили какого-либо откло-1ения от нормы, а контрольные две овцы пали с клиническими призна-сами БА. На основании положительных результатов опытов комиссия 1ришла к зшшочзнию, что все 3 серии культуральной инактивирован-юй вакцины против ЕА обладали выраженной иммуногенностью для овец.

На Ставропольской биофабрике. В соответствии с распоряжениями ТВ МСХ СССР за № 166-8 от 13.09.1974г., Л 122-5 от 19.02.80г. и црутих на Ставропольской биофабрике внедрили в производство методику приготовления предложенной нами инактивированной культуральной г инактивированной культуральной концентрированной вакцины против ЕА, где было приготовлено 16 серий инактивированной культуральной .. вакцины против ЕА, в объеме-2412 литров.

Приказом ГУБ МЗХ СССР {№ 50 от 30.09.1980г.) инактивированная культуральная концентрированная вакцина внедрена в ветеринарную практику СССР и серийно производится на Ставропольской биофабрике. В период с 1980 по 1988 г.г. произведено 92 серии вакцины в объеме 30200 литров.

4. КОМИССИОННЫЕ ОПЫТЫ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ИМУНОГЕННЫХ СВОЙСТВ ИН-АКТИВИРОВАННЫХ КУЛЬТГРАЛЬНЫХ ВАКПИВ ПРОТИВ БА. После проведения ши-

роких производственных опытов в Рязанской и Воронежской областях и получения положительных результатов по производству опытных серий инактивированной культуральной и инактивированной культураль-ной концентрированной вакцин против БА в Херсонской, Омской, Сумской и Ставропольской биофабриках встал вопрос о решении судьбы данных вакцин. Поэтому 1УВ МСХ СССР организовал комиссионные проверки культуральной инактивированной и культуральной инактивировав ной концентрированной вакцин в сравнительных опытах с инактивированной культуральной концентрированной вакциной, предложенной ВНИШШиМ.на овцах, затем на норках.

Ниже приводятся результаты комиссионных опытов, проведенных на Ставропольской биофабрике, на базе НШПЗК и в зверосовхозе "Ею ятинский" Бологоевского района Калининской области.

4.1. Комиссионная проверка иммуногенной активности культурал: ной инактивированной концентрат-сапонин вакцины против БА ВНИИВВи] и культуральной инактивированной вакцины против БА АрмНИИДиВ на о: цах. Согласно распоряжения ГУБ МСХ СССР (№ 166-8 от 13.09.1974г.) на Ставропольской биофабрике проведена сравнительная комиссионная проверка иммуногенной активности инактивированной культуральной концентрат-вакцины против БА ВНИИВВиМ и культуральной инактивированной вакцины против БА АрмНИИЖиВ.

Испытывали по две серии вакцин, предложенных АрмНШШиВ и ВНИИВВиМ. Подопытных овец вакцинировали однократно в дозах: 0,5; и 2 мл. Каждой дозой иммунизировали по три овцы. Через 19 дней по ле вакцинации всех вакцинированных 36 овец вместе с 4-мя невакци нированными овцами подвергли контрольному заражению вирулентным в русом (табл.5). В результате из 18 овец, вакцинированных вакциной ВНИИВВиМ, пало 10, а из 18 овец, вакцинированных вакциной Арм.

Таблица 5

Результаты испытания инактивированных вакцин против БА ВНИИВВиМ и АрмНИИЖиВ на овцах

№

Серия

Вакцинация

Результаты заражения

ш вакцина вакцины количество овец доза, мл пали живы

3 0->5 2 I

№ 5 3 1,0 3 -

концентрат [ -сапонин 3 2,0 I / 2

ВНИИВВиМ 3 0,5 2 I

й 13 3 1,0 - 3

3 2,0 2 I

3 0,5 - 3

№ I 3 1,0 _ 3

инактивиро-1 ванная 3 2,0 - 3

АрмНИИЖиВ 3 0,5 — 3

№ 4 3 3 1,0 ' 2,0 I 2 3

3 контроль - 4 - 3 I переболела

НИИЖиВ, пала одна. Комиссия пришла к заключению, что в двух исследованных сериях культуральной вакцины против ЕА, изготовленных по методу АрмНИИЖиВ, проявились более выраженные иммуногенные качества по сравнению с двумя сериями инактивированной концентрат-сапонин вакциной против БА ВНИИВВиМ.

4.2. Комиссионная проверка иммуногенной активности инактивированных культуральных вакцин против БА. предложенных АрмНИИЖиВ на норках. Согласно приказа 1УВ МСХ СССР (Я 18 от 29.03.1976г.) проведена комиссионная проверка иммуногенной активности инактивированных вакцин (культуральной инактивированной и культуральной инактивированной концентрированной) против ЕА, на базе НИИПЗК в Рамен-

ском районе Московской области. Йнактивированной культуральной вакциной АрмНШЖиВ вакцинировали 40 норок, из них 20 однократно в дозе по 2 мл и 20 двукратно по 2 мл. Концентрированной вакциной вакцинировали 30 норок, из них 10 - однократно в дозе I мл, 10 - ода« кратно в дозе 2 мл и 10 - двукратно - по 2 мл. Через 14 дней посл( второй вакцинации все подопытные норки и 10 контрольных были заражены вируссодержащей суспензией в разведении 1:500 и 1:100 (табли После контрольного заражения все иммунизированные норки остались живыми, а из 10 контрольных норок пало 5.

Комиссия пришла к выводу, что культуральные инактивированные

Таблица I

Определение иммуногенной активности инактивированных вакцин АрмНШЖиВ на норках

Вакцина

м

о Рч О К

Вакцинация

о

ей В со й

3я

^ I

311 ^

а> М - сО

н " —

со ей ом

I

-ю-!

ей

РЧ-н Но

§ и

ей о РчЧ ей а> со т

Результат:

пало живы

Культуральная инактивирован-ная, приготовленная в Омском биокомбинате

10 10 10 10

2 2 2 2

14 14

2 2

1:500 1:1000 1:500 1:1000

0 10 0 10 0 10 0 10

Культуральная концентрированная, приготовленная в АрмНШЖиВ

I

1

2 2 2 2

14 14

2 2

1:500 1:1000 1:500 1:1000 1:500 1:1000

0 0 0 0 0 0

Контроль

1:500 1:1000

3 2

2 3

вакцины против БА (концентрированная и обычная) при однократной и двукратной вакцинациях безвредны и иммуногенны для норок. Однако о степени напряженности иммунитета у вакцинированных норок трудно судить, так как после контрольного заражения из контрольной группы пало только 50$ животных.

4.3. Комиссионная проверка иммуногенной активности инактивиро-занных культуральных концентрированных вакцин против БА. предложенных БНИИБВиМ и АрмНИИЖиВ для норок. Согласно приказа 1УВ МСХ СССР (№ 64 от I.XI.76г.) проведена сравнительная комиссионная проверка напряженности и длительности иммунитета у норок, привитых инактиви-эованными культуральными концентрированными вакцинами, предложенны-яи ВНИИВВиМ и АрмНИИЖиВ. Вакциной ВНИИВВиМ прививали 92 норки, а закциной АрмНИИЖиВ - 90. Вакцинацию провели двукратно: внутримышеч-[О в области бедра, каждый раз в дозе по 2 мл. Вторая вакцинация 5ыла проведена через 21 день после первой. Контрольное заражение !акцинированных норок провели в два срока: через- 45 дней и через 3 гесяца после второй вакцинации (табл.7).

При первом заражении (через 45 дней) из числа 50 вакцинирован-:ых норок пало 13 (26$), а у вакцинированных второй группы (Арм. ИИЖиВ) - пало 5 (10$), все 10 (100$) контрольных норок пали.

Через три месяца после вакцинации норок провели второе конт-олъное заражение вакцинированных вакцинами БНИИБВиМ и АрмНИИЖиВ с 0-ю контрольными невакцинировашшми норками. В результате из 40 орок, вакцинированных вакциной БНИИБВиМ, пало 22 (55$), а из 27 орок, вакцинированных вакциной АрмНИИЖиВ, пало 5 (18,5$). Из 20 онтрольных норок пало 18 (90$). После проведения опытов комиссия ришта. к заключению, что из испытанных вакцин для норок более имму-огенными свойствами обладает вакцина АрмНИИЖиВ.

Таблица 7

Испытание инактивированных концентрированных вакцин против БА ВНИИВВиМ и АрмНИИШВ на норках

Заражение ' Заражение

через 45 дней через 3 месяца

о о

Вакцина §§ «§ 3 §*

(р - ¿а и »

е р.

й § ей й

о Й чЗ

2 2

2 2

о> о о т оэ о о

Йм оы оЙ ыо э ё й о* э ё

| «Э 1« « ^ |я « ^

к к

ВНИИВВиМ 92 2 2 50 13 74 40 22 45 АрмНИИЖиВ 90 2 2 50 5 90 2 7 5 81,5 Контроль 30 - - 10 10 0 20 18 . 10

Примечание: 2 норки (ВНИИВВиМ) и 13 норок (АрШИИЖиВ) пали от других болезней до проведения второго заражения.

4.4. Испытание инактивированной культуральной вакцины Арм. НИИЖиВ в зверосовхозе "Ильятинский" Бологоевского района Калининской области. В зверосовхозе "Ильятинский" среда пушных зверей часто отмечались вспышки ЕА, от чего хозяйство несло ощутимые убытка В июне 1976 года специалисты зверосовхоза получили из Союззоовет-снаба культуральную инактивированную вакцину против ЕА и в течение двух месяцев против БА вакцинировали 45520 норок. Из них по I мл вакцинировали 30020 норок и по 2 мл - 15500. Всех привитых зверей вскармливали свиными субпродуктами в сыром виде. Вспышек БА среди вакцинированных зверей не зарегистрировано. По инициативе специали стов зверосовхоза через 5,5 месяцев после вакцинации проведено кон трольное заражение 91 норки, из которых 41 была вакцинирована по I мл, а 50 - по 2 мл, с 20-ю невакцинированными контрольными норками

Результаты проведенного опыта показали, что из 41 головы норо

вакцинированных по I мл, пало 7 (17$), из 50 норок, вакцинированных по 2 мл, пало 8 (16$). Из 20 контрольных невакцинированных норок после контрольного заражения пало 15 голов (75$).

Специалисты зверосовхоза пришли к заключению, что инактивиро-ванная культуральная вакцина у однократно вакцинированных норок в дозах I и 2 мл создает довольно высокий титр антител, который обеспечивает у 83-84$ вакцинированных животных способность выдерживать смертельную дозу вируса после вакцинации в среднем через 5,5 месяцев.

5. РЕЗУЛЬТАТЫ ОПЫТОВ ПО ИСПЫТАНИЮ ИНАКТИВИРОВАННОЙ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ВА. ПРОВЕДЕННЫХ ДРУГИМ ИССЛЕДОВАТЕЛЯМИ.

I. В 1972 году научные сотрудники Воронежской НИВС тт.И.И.Лесных, А.Г.Шахов и Н.Д.Михайлюков изучили сравнительную активность :ухой Еирусвакцины 1НКИ, инактивированной культуральной вакцины 1рмНИИКиВ и эмбрион ГОАЛ формол-вакцины против ЕА. Под опыт поста-зили 46 свиноматок. Сузую вирусвакцину 1НКИ испытывали в разведени-IX 1:5 и 1:50, двукратно, каждый раз по 5 мл. 1-ю вакцинацию свиноматок произвели за 35-40 дней до опороса, а ревакцинацию - через 15 дней после первой.

ГОАЛ формол-вакцину испытывали также двукратной вакцинацией ) те же сроки в дозе по 5 мл, а культуральную инактивированную вак-;ину вводили однократно в дозе, предусмотренной наставлением - 5 мл.

Авторы исследования пришли к заключению, что эмбрион ГОАЛ фор-:ол-вакцина при применении с профилактической целью и в вынужденных лучаях по иммуногенным свойствам уступает вирусвакцине ГНКИ и преложенной нами инактивированной культуральной вакцине АрмНИИЖиВ.

П. Научные сотрудники нашего института (Э.Д.Степанян, Р.А.Пет-осян и др., 1979) провели опыты по сравнительному изучению иммуно-

генной активности живой вирусвакцины ВПЖИ и предложенной наш инактивированной культуральной концентрированной вакцины АрмНИШиВ против БА на белых крысах. В принципе сопоставлять активность живой вакцины с инактивированной методически неправильно, тем не менее опыт был поставлен и нужно было ожидать, что живая вирусвакци-на ВГНКИ окажется более иммуногенной, чем инактивированная. Но,вопреки ожиданиям, положительные результаты получились в пользу инактивированной вакцины. Опыт был поставлен на 135 белых крысах. Результаты проведенного опыта показали, что однократная, а особенно двукратная вакцинация крыс инактивированной культуральной концентрированной вакциной приводит к образованию напряженного иммунитета соответственно у 80 и 100$ животных. В аналогичных условиях крысы, получившие вирусвакцину ВГНКИ, оказались неиммунными и после контрольного заражения все пали.

Ш. Аспирант Ереванского зооветеринарного института Петросян К.П. изучила иммуногенность культуральной инактивированной концентрированной вакцины АрмНИИВ при внутримышечной и аэрозольной иммунизации на кроликах. Она поставила опыты на 48 кроликах по сравнительному изучению эффективности аэрозольной и внутримышечной вакцинаций. Результаты опытов показали, что двукратная аэрозольная вакцинация в дозах по 3+5 и 5+5 мл обеспечивает 100$-ую выживаемость иммунизированных кроликов после контрольного заражения, а при внутримышечной вакцинации те же дозы обеспечивают выживаемост! у 75-100$ иммунизированных кроликов, в зависимости от дозы вакцинации.

Таким образом, в опытах других исследователей на свиньях, норках, крысах и кроликах инактивированная культуральная и инактивированная культуральная концентрированная вакцины против БА проя-

вили достаточно высокую иммуногенную активность.

6. ПРЕДПОЛАГАЕМЫЙ ЭКОНОМИЧЕСКИЙ ЭМ'ЕКТ ОТ ПРИМЕНЕНИЯ ИНАКТИВИ-РСВАННОЙ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БА ПУДНЫХ ЗВЕРЕЙ.

По нашей просьбе в лаборатории экономики ветеринарии Всесоюзного государственного научно-контрольного института (ВИКИ) ветеринарных препаратов произведен расчет по предполагаемому экономическому эффекту от применения инактивированной культуральной вакцины.

Базовым препаратом для сравнения служил гамма-глобулин. Согласно проведенному расчету, предполагаемый экономический эффект от применения инактивированной культуральной концентрированной вакцины против ЕА у пушных зверей при вероятности появления заболевания 0,5$ составляет 5735 рублей на 1000 голов животных (подробный расчет приведен в приложениях диссертации).

7. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫХ ЛАБОРАТОРНЫХ ОПЫТОВ ПО УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЮ ИНАКТИВИРОВАННОЙ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ КОНЦЕНТРИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БА.

В последнее десятилетие БА во многих странах широко распространилась, а проводимые профилактические мероприятия в некоторых случаях не дают предполагаемого эффекта. Исследователи распространение ЕА связывают с интенсификацией животноводства, влиянием транспортного стресса, повышением вирулентности вируса. Учитывая эпи-зоотологическую ситуацию по ЕА в мировом масштабе, мы тоже задались целью изыскать методы по повышен™ иммуногенных свойств инактивированной культуральной концентрированной вакцины. Для достижения этой цели приготовили новые варианты вакцины с применением более щадящего кнактиватора-бета-пропиолактона (ЕПЛ), стимулятора иммуногенеза - сапонина, масляного адъюванта - минерального масла с ланолином, для неГ—-- грации остаточного формалина - гидрсксил-

ашна.

Кроме этого, с целью сравнительного изучения была приготовле на инактивированная культуральная вакцина из концентрированного вируса. Сравнительное изучение иымуногенности инактивированных культуральных вакцин, инактивированных бета-пропиолактоном и формалином, провели одновременно на овцах и кроликах. Под опыт были взяты 22 кролика и 5 овец. Кроликов вакцинировали двукратно, а овец однократно. При однократной вакцинации 5 кроликов вакцинировали в дозе по 5 мл, а при двукратной вакцинации каждый раз по 3 мл. Два кролика не были вакцинированы, служили контролем. Каждой вакциной вакцинировали по 2 овцы в дозе по 5 мл, а одна не была вакцинирована, служила контролем.

Контрольное заражение кроликов произвели через 15 дней после второй вакцинации, а овец через 15 дней после однократной вакцинации. Результаты опыта показали, что ШД вакцина в отношении кроликов оказалась более иммуногенной, чем формол-вакцина: из 10 кроликов , цривитых НИ вакциной, выжило 7, а из 10 кроликов, привитых формол-вакциной, выжило 2. В отношении овец обе вакцины оказались одинаково иммуногенными, вакцинированные овцы безболезненно перенесли контрольное заражение. Контрольные невакцинированные кролики и овцы пали с характерными для ЕА признаками.

8. ИЗУЧЕНИЕ ИЗМЕНЧИВОСТИ КУЛЬТУРАЛЬНОГО ВБА.

В последние десятилетия, после применения в вирусологии метода культур клеток, расширились экспериментальные возможности получения аттенуированных вирусных штаммов, позволяющих готовить живые вирусные вакцины.

В наших исследованиях мы также проводили работы с целью получения аттенуированного штамма ВЕА. Для достижения намеченной цели

[ провели прямые пассажи ЕБА на культуре клеток ПК при оптималь-й (37°С), пониженной (36-21°С) и повышенной (38-43°С) температу-,х. Кроме того, провели перемежающие пассажи на перевиваемых куль-рах клеток СПЗВ и через организм морских свинок. Вирус инкубиро-ли при указанных температурах не менее 24 часов и не более 5 сук. В некоторых пассажах определяли титр вируса по ТЦД^, ДД^ я кроликов и белых мышей. Определяли бляшсаобразухзщее свойство руса, отбирали бляшки разного размера, переводили на культуру еток и изучали их свойства. После заражения животных учитывали одолжительность инкубационного периода, продолжительность болез-, характер клинических признаков, особенно присутствие зуда на сте инъекции вируса и др.

8.1. Изучение изменчивости ВБА при длительном пассажировании культуре клеток ПК при 37°С. ВБА, полученный нами из ВГНКИ, пас-

жировали на культуре ПК при 37° и довели до 895-го пассажа. Кро-вируса ВШКИ на культуре ПК пассажировали и местные штаммы виру, выделенные нами от поросят и собак при вспышке БА. Каждый виз отдельно пассировали на культуре ПК по 425 пассажей.

ВБА, полученный нами из,ВГНКИ, и местные штаммы, выделенные поросят и собак, при длительном пассировании на культуре ПК при ЭС претерпели некоторые изменения. В некоторых пассажах данные русы повысили или понизили титр по ТЦДзд на 1-2 до ЗС^- По ходу зсирования данных вирусов наш изучен также их титр по ЛДзд для эликов. Титр вирулентности в некоторых пассажах также повысился I понизился, но вирус ВШКИ до 895-го пассажа, а местные вирусы, деленные от поросят и собак, - до 425-го пассажа оставались вирусными для кроликов.

8.2. Выращивание ВБА на культуре клеток при повышенной темпе-

ратуре. В опытах использован ВБА (штамм ВГНКИ), выращенный и перепассированный на культуру Ж при 37°С более чем 460 раз. Проведенс три серии опытов по выращиванию ВБА при повышенной температуре (39-43°С).

Результаты трех серий опытов показали, что вирус приспосабливается к повышенным температурам, при этом удлиняется срок наступления ЦПД, снижается или повышается титр по ВДД^д, но остается вирулентным для кроликов.

8.3. Выращивание ББА на культуре клеток при пониженной температуре. ВБА (штамм ВГНКИ), перепассированный через культуру клетор ПК 446 раз при 37°С, с титром ТЦД50 Юб и ДЦ50 для кроликов Ю7, продолжали пассировать на культуру ПК при пониженной температуре (36-24°С). Провели две серии опытов.

Проведенные опыты показали, что гшогократное пассирование ВБ^ на культуре меток ПК при пониженной температуре (до 25-24°С) удлиняет срок наступления ЦПД, однако не снижает его вирулентности для кроликов.

8.4. Опыт аттенуации ВБА методом перемежающего пассирования. Опыт аттенуации ВБА провели путем выращивания вируса перемежающим пассажами от культуры фибробластов эмбрионов кур (ФЖ) и через организм морских свинок. При этом проводились три последовательных пассажа вируса на культуре клеток куриных эмбрионов, затем три последовательных пассажа вируса через организм морских свинок. При выращивании вируса на культуре клеток учитывался срок наступления ЦПД и его титр, у заразкенных морских свинок-температура тела, сро] появления клинических признаков болезни, время падежа.

Провели две сарии опытов, в первой исхидаым вирусом служил ВБА, прошедший на культуре клеток ПК 761 пассажа при 37°С и 27

пассажей при 24°С с титром ТЦД50 Ю5- Для второй серии опытов исходным вирусом служил BEA, прошедший на культуре клеток ПК 762 пассажа при 37°С и 29 пассажей при 41°С с титром ТЦД50 Ю6.

В проведенных двух сериях опытов BEA, прошедший на культуре ткани более 760 пассажей, затем адаптированный на культуре клеток ПК при 24°С и 41 °С, при перемежающем пассировании на культуре ФЖ и на морских свинках претерпевает некоторые изменения: снижается титр ТЦДзд и вирулентность вируса для самих морских свинок; и поэтому вирус во П-ом пассаже, ослабевая, не вызывает гибели морских свинок.

9. ИЗУЧЕНИЕ МОБИЛЬНО ВЫСУШЕННОГО ВБА.

С целью длительного сохранения вирусов некоторые культураль-ные вирусы подвергли лиофильному высушиванию в аппарате чехословацкого производства "КС-6". Высушивали ВБА штамм ВПЖИ ветеринарных препаратов, прошедший на культуре ПК 293 пассата, и вирусы, выделенные наш при вспышке БА среди поросят, собак, лисиц и норок. В качестве защитной среды при высушивании вирусов применяли пептон (5%) с желатином (2%) и обезжиренное молоко (50$) с сахарозой (12%). Высушенные вирусы в запаянных ампулах хранили при 4-6°С в бытовых холодильниках. Штамм В1НКИ изучали систематически, а остальные вирусы при необходимости. Высушенный вирус ВГНКИ изучали в течение II лет, по ЩИвд на культуре ПК ежегодно, а ЛДзд для кроликов после высушивания в Ï, 2, 5, 6, 9 и 11-ые годы.

Результаты изучения высушенных вирусов показали, что ВБА штамм БГНКИ, высушенный в среде, состоящей из Ъ% пептона и 2% желатина, сохраняет цитопатогенную активность в течение 10 лет, при этом титр ЩД50 снижается от Ю7,5 до I01,5. Тот же вирус, высушенный в среде, состоящей из 50$ обезжиренного молока и 10$ сахарозы, сох-

раняет цитопатогенное действие 7 лет, при этом титр ТЦД^д снижается от I07'5 до I01'5.

Результаты проведенного опыта по определению вирулентности культурального высушенного ВБА штамм ВПЗКИ ветеринарных препаратов после высушивания через I, 2, 5, 6, 9 и II лет показали, что вирус, высушенный на среде, состоящей из 5% пептона и 2% желатина, сохраняет вирулентность для кроликов не менее 9 лет.

10. К ИЗУЧЕНИЮ ЭПИЗООТОЛОГИИ БА В АРМ.ССР.

ЕА в Арм.ССР встречается не часто, но все же наносит хозяйствам республики ощутимый экономический ущерб. Изучение эпизоотоло-гических данных ЕА по республике показало, что возникновение этой болезни в хозяйствах в основном связано с завозом племенных свиней из-за пределов республики. По нашим наблюдениям, в колхозах "Агав-натун" Эчмиадзинского района, "Джанфида" Октемберянского района, "Шнох" Туманянского района, "Кармир" района имени Камо и некоторых других хозяйствах Арм.ССР причиной возникновения БА являлись свиньи, завезенные из неблагополучных хозяйств.

В Кироваканском зверосовхозе источником ВБА для пушных зверей являются также переболевшие свиньи, но здесь их заражение происходит не прямым путем, как у свиней, а косвенно, через субпродукты переболевших свиней. Пушные звери - лисицы и норки, являясь чувствительными к ВБА, поедая субпродукты от переболевших свиней в сыром виде, заражаются.

В некоторых свиноводческих хозяйствах и в Кироваканском зверо совхозе нами проведены работы по оздоровлению их от ЕА. Из выше- ; упомянутых хозяйств на свиноферме колхоза "Джанфида", после подтверждения нами диагноза БА, проводили комплекс ветеринарно-сани-тарных мероприятий с применением предложенной наш вакцины. Всех

- ЗУ -

больных свиней изолировали, а остальных вакцинировали культуральной инактивированной вакциной против БА. По истечении 5-7 дней после вакцинации заболевание и падеж свиней и поросят в этом хозяйстве прекратились. В дальнейшем это хозяйство мы взяли под наше наблюдение и в течение 5 лет все поголовье свиней подвергали вакцинации. БА не повторялась.

В Кироваканском зверосовхозе в 1970-1971 годы; с целью оздоровления хозяйства от БА, больных лисиц и норок, проявляющих клинические признаки болезни, отделили от незараженных и цровели сопутствующую дезинфекцию.Всех условно здоровых зверей вакцинировали культуральной инактивированной вакциной цротив БА. В 1971-1973 годы продолжали вакцинацию зверей инактивированной культуральной вакциной, что позволило оздоровить хозяйство от БА.

Проведенный нами анализ ветеринарных отчетностей МОХ Арм.СОР за 1965-1988 годы показал, что за ИЗ года болезнь Ауески в Армении диагностировалась в 12 пунктах 16 раз, в том числе и в Кироваканском зверосовхозе Ь раз. Из 8 свиноводческих хозяйств, где была отмечена БА, ни в одном она повторно не диагностировалась.

П. АНАЛИЗ ВЕТЕРИНАРНОЙ ОТЧЕТНОСТИ ГООАГРОПЮМА СССР ПО БОЛЕЗНИ АУЕСКИ СВИНЕЙ И ЛУННЫХ ЗВЕРЕЙ ЗА 1961-1984 ГОДЫ_

Анализ ветеринарной отчетности Госагропрома СССР по БА свиней и пушных зверей проведен нами с целью изучения динамики распространения данной болезни по годам и для оценки ситуации в настоящее время. Анализ ветеринарной отчетности по БА свиней за 1961-1984-е годы показал, что в 1961-1965 гг. в среднем каждый год по стране возникало К28 очагов болезни и п каядсм очаге болело в среднем 146 свиней. В 1980-1984-ые годы количество очагов и больных свиней зна-

чительно сократилось, и каждый год в среднем регистрировалось 166 очагов болезни, в каждом очаге болело по 125 свиней.

Б связи с сокращением количества очагов БА среди свиней резке сократилось и количество очагов этой болезни среди пушных зверей. Так, если в 1966-1971 годах по СССР в среднем в год регистрировалось 16,6 неблагополучных пунктов по ЕА и в каждом пункте болело 245 пушных зверей, то в 1972-1977 годах количество очагов и больных зверей уменьшилось до 7,5 и 222 соответственно. В 1978-1984 годах количество очагов уменьшилось еще больше: в среднем в год регистрировалось 4,6 очагов, однако количество больных зверей в каждом очаге увеличилось до 239.

Резкое уменьшение количества очагов, а также числа больных свиней и пушных зверей в этих очагах после 1970-го года связано с внедрением в ветеринарную практику вирусвакцины ВГНКИ ветеринарны препаратов и с применением в звероводческих хозяйствах инактивиро ванной вакцины Арм.ШИВ.

ВЫВОДЫ

1. Установлено превосходство первичной культуры клеток почек крольчат по сравнению с другими использованными первичными (П2С, ФКЭ, ЕШ и перевиваемыми клеточными линиями (Нер-2, СЗЛ, СШ-1, Е СПЗВ, ПТ) по низкой требовательности к питательным средам, высоко чувствительности к ВБА и долгоживучести клеток.

2. Изыскан высокоиммуногенный штамм "К" ВБА. Разработан способ массового выращивания ВБА на культуре ПК, который обеспечивае стабильное накопление вируса в довольно высоком титре (10^-10^,5) что дает возможность приготовления инактивированной культуральной вакцины против БА.

- 41 -

3. Разработана технология приготовления высокоиммуногенной инактивированной культуральной и инактивированной культуральной концентрированной вакцин против ЕА пушных зверей, свиней и овец, позволяющая получить препарат со стабильными значениями показателей качества.

4. Определено минимальное количество формалина (0,05$), обеспечивающее надезкную инактивацию и сохранение высокой антигенно-сти ББА.

5. Разработан контроль определения иммуногенной активности инактивированной культуральной и инактивированной культуральной концентрированной вакцин на овцах.

Инактивированная культуральная и инактивированная культураль-ная концентрированная вакцины считаются активными, если они при однократном подкожном введении овцам в дозе 3 мл через 15 дней при контрольном заражении вирулентным вирусом защищают всех 3-х вакцинированных овец от заболевания, при гибели 2 контрольных овец.

6. Инактивированная культуральная вакцина после двукратной вакцинации в дозе каждый раз по I мл создает напряженный шмунитет у 75$ вакцинированных порок и у всех вакцинированных лисиц. Культуральная концентрированная вакцина после двукратной вакцинации каждый раз по 2 мл создает напряженный иммунитет у 90$ норок и после однократной вакцинации в дозе 2 мл у всех вакцинированных лисиц.

7. Культуральная концентрированная вакцина при однократной вакцинации у лгоиц вызывает образование антител против ББА в титре 1:32. Повторное введение вакцины сопровождается повышением уровня антител в титре лишь до 1:38. Титр антител в указанных уровнях у всех вакщшированных лисиц создает невосприимчивость против смертельной дезы вируса.

8. Испытание инактнвированной культуральной вакцины в "Илья-тинском" зверосовхозе Калининской области показало, что иммунитет у вакцинированных норок сохраняется в течение 5,5 месяцев более чем у 83$ вакцинированных животных.

9. Инактивированная культуральная концентрированная вакцина создает иммунитет у кроликов: при однократном введении в дозе 5 или 10 мл и при двукратном.введении в дозе .2; 3 и 5 мл с 14-дневным интервалом.

10. Применение культуральной инактивированной и культуральной инактнвированной концентрированной вакцины в широких цроизводст-венных опытах в свиноводческих хозяйствах Рязанской и Воронежской областей, во многих звероводческих хозяйствах РСФСР, комиссионных опытах и в опытах, проведенных рядом исследователей, показали, что оба варианта вакцины иммуногенны и способствуют прекращению случаев заболевания БА.

11. Длительное пассирование BEA. при различной температуре (23-43°С), а также путем перемежающихся пассажей в культуре клеток и на морских свинках не привели к аттенуации. При этом наблюдали лишь резкое снижение титра вируса (ДЦ50 и ТЦД^) t который легко восстанавливался после 1-2 пассажей на культуре клеток при 37°С.

12. ЕА в Арм.ССР среди свиней и пушных зверей не носит стационарный характер, спонтанно возникающие вспышки быстро ликвидируют^

13. Анализ ветеринарной отчетности Госагропрома СССР за 19611984 года по БА свиней и пушных зверей по СССР показывает, что начиная с 1ЭТ1 года количество очагов, больных свиней и пушных зверей резко снижалось, что объясняется применением высокоиммуноген-ных биоцрепаратов в комплексе с ветеринарно-санитарными мероприятиями.

- 43 -

14. Культуральный ВБА, высушенный лиофильно в среде, состоящей из Ъ% пептона и 2% желатина, сохраняет инфекционные свойства в течение 10 лет при температуре 4г-6°С.

15. Предполагаемый экономический эффект от применения инактивированной культуральной концентрированной вакцины против БА пушных зверей, при вероятности появления заболевания 0,5$, составляет 5735 рублей на 1000 голов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработана, ацробирована и выпущена для широкого производственного опыта инактивированная культуральная вакцина против болезни Ауески свиней, овец и пушных зверей. Приказ ГУБ Минсель-хоза СССР от 15 декабря 1969 г.

2. Разработана, апробирована и внедрена в производство и ветеринарную практику страны инактивированная культуральная концентрированная вакцина против болезни Ауески пушных зверей, свиней и овец. Приказ Минсельхоза СССР от 30 сентября 1980 г. № 50.

3. Разработана и утверждена нормативно-техническая документация:

- ТУ 46-795-72. Инактивированная вакцина против брлезни Ауески свиней, овец и пушных зверей, приготовленная из вируса, выращенного на культуре ткани, в порядке широкого производственного опыта. Утверждена Минсельхозом СССР 8 июня 1972 г.

- ТУ 46-21-795-81. Вакцина инактивированная культуральная концентрированная против болезни Ауески пушных зверей, свиней и овец. Утверждена Минсельхозом СССР 27 февраля 1981 г.

- Временное наставление по применению инактивированной вакцины против болезни Ауески свиней, овец и пушных зверей, пригого-

вленной из вируса, выращенного на культуре ткани (в порядке широкого производственного опыта), утвержденное ГУВ ЖХ СССР 15 декабря 1969 г.

- Наставление по применению инактивированной культуральной концентрированной вакцины против болезни Ауески пушных зверей, евшей и овец. Утверждено ГУВ XX СССР 26 сентября 1980 г. К 115.

4. Технология изготовления биопрепарата освоена в условиях Херсонской, Ставропольской, Сумской и Омской биофабрик Главбиопро-ыа Минсельхоза СССР. В течение 1968-1980 г.г. выпущено 2860 литров опытных серий инактивированной культуральной и инактивированной культуральной концентрированной вакцины.

После внедрения в ветеринарную практику за 8 лет (1980-1988 г.г.) изготовлено и выпущено Ставропольской биофабрикой для практи ческого применения 30200 литров инактивированной культуральной кон центрированной вакцины:

- Авторекое свидетельство (Jv Ь49777 от 19 июня 1980 г.) на штат®.! вируса болезни Ауески "K-I", используемый для приготовления вакцины против.болезни Ауески пушных зверей, свиней и овец.

- Авторское свидетельство на "Вакцина и способ профилактики против болезни Ауески пушных зверей, свиней и овец" £ 942282 от 22 марта 1982 г.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО TELE ДИССЕРТАЦИИ

1. Чобанян М.С. Инактивированная вакцина против болезни Ауески из вируса, выращенного на культуре ткани //Ветеринария. - 1965. -№ 7. - С. 19-20.

2. Об использовании культурального вируса болезни Ауески для получения вакцины и иммунной сыворотки /Айрапетян В.Г., Хачатрян

А.Б., Чобанян М.С., Абелян К.Е. //Материалы П Всесоюзн.ветерин. вирусол.конф. М., 24-27 января 1966 г. С. 63.

3. Особенности иммунитета, вызванного вирусом, выращенным на культуре ткани /Айрапетян В.Г., Хачатрян А.Б., Погосян A.A., Мартиросян Г.Г., Чобанян М.С., Каралетян Дж.К. //Проблема иммунитета с/х животных. М., 1966. С. 298-302.

4. Чобанян М.С. Инактивированная вакцина против болезни Ауески из вируса, выращенного на культуре ткани //Тез.докл.науч.Юбилейной сессии Арм.НИИЖиВ, поев.50-летию Великой Октябрьской соц.революции. Ереван, 1967. - С. 78-79.

5. Изучение динамики накопления вируса в клетках с помощью флюоресцирующих антител /Айрапетян В.Г., Абелян К.Е., Каралетян Дж.К., Чобанян ГЛ.С. //Биологический журнал Армении. - 1967. -Т. XX. - Jf I. - С. 40-44.

6. Чобанян М.С. Изучение иммунобиологических свойств вируса болезни Ауески, выращенного на культуре ткани //Автореферат кандидатской диссертации. Ереван, 1968.

7. Иммуногенность инактивированной вакцины против болезни Ауески

из вируса, выращенного на культуре ткани /Айрапетян В.Г., Хачатрян А.Б., Чобанян М.С., Абелян К.Е. //Ветеринария. - 1969. -№ I. - С. 34-36.

8. Инактивированная культуральная вакцина против болезни Ауески /Айрапетян В.Г., Хачатрян А.Б., Чобанян М.С., Абелян К.Е. //Доклады советских ученых к XIX Всемирному конгрессу. 1971. С. 65-67.

9. Айрапетян В.Г., Чобанян М.С. Сохранность культурального вируса болезни Ауески при разных температурных условиях //Материалы научной сессии АрмНИИНиВ, посвященной 50-летию образования СССР. Ереван, 1972. - С. 93-97.

10. Чобанян M.С. Изучение изменчивости вируса болезни Ауески при длительном пассировании на культурах клеток тканей //Материал!

■ научной сессии АрйШЖиВ. Ереван,' 1973. - G. I30-I3I.

11. Чобанян М.С. Гипериммунизация овец вирусом болезни Ауески //Тезисы докладов научной конференции НТО ШХ Арм.ССР. Ереван 1974. - С. 203-205.

12. Чобанян М.С., Айрапетян Н.В., Тер-Акопов С.С. Изучение напряженности иммунитета у лисиц, вакцинированных против болезни Ауески //Тезисы докладов научной конференции НТО ШХ Арм.ССР. Ереван, 1974. - С. 206-208.

13. Чобанян М.С. , Арутюнян А.Г., Саркисян Г.Г. Эффективность ваки ны из культурального вируса против болезни Ауески пушных зверей //Ветеринария. - IS75. - Jf 3. - С. 56-57.

14. Айрапетян В.Г., Хачаарян А.Б., Чобанян М.С. Иммуногенность инактивированной культуральной вакцины против болезни Ауески //Ветеринария. - 1978. - № 3. - С. 56-57.

15. Айрапетян В.Г., Чобанян М.С. Инактивированная культуральная вакцина против болезни Ауески пушных зверей //Мат.У Всесоюз. ветеринарной вирусол.конф. Казань, i960. - С. 131.

16. Изобретение на штамм вируса болезни Ауески K-I, используемый для изготовления инактивированной культуральной вакцины проп болезни Ауески пушных зверей, свиней и овец /Айрапетян В.Г., Чобанян М.С. //Авторское свидетельство JC 849777 от 23.03.81г

17. Изобретение на метод приготовления инактивированной культура ной вакцины против болезни Ауески пушных зверей, евшей и obi /Айрапетян В.Г., Чобанян'М.С. , Прохорова Э.М., Рахматулин Р.: //Авторское свидетельство të 942282 от 10.03.82г.

18. Чобанян М.С. Определение иммуногенности вакцины против болез: