Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Иммунодефицит и его коррекция при термической травме кожи животных

РГ6 од

1 о мдгиепа

ОРДЕНА ЛЕНИНА ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ ИМ. Н. Э. БАУМАНА

На правах рукописи

БАРАНОВ ВЛАДИМИР АНДРЕЕВИЧ

ИММУНОДЕФИЦИТ И ЕГО КОРРЕКЦИЯ ПРИ ТЕРМИЧЕСКОЙ ТРАВМЕ КОШ ЖИВОТНЫХ

16.00.02 - Патология, онкология и морфология животных 16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученной-степени гандидата ветеринарных наук

ЗСазань 1393

Работа выполнена на кафедре патологической физиологии Казанского ветеринарного института имени Н.Э.Баумана

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

профессор Г.11.НОВОШШОВ

Официальные оппоненты:

». Доктор ветеринарных наук, профессор Г.Г.ГОСМАНОВ

2. Доктор медицинских наук, профессор М.М.МИЫНЕБЛЕВ

Ведущая организация - Санкт-Петеро'ургский ветеринарный

институт

Защита состоится " ^993 г. в часов на

ааседаыаи специализированного Совета Д-120.22.01 в Казанском ордена Ленина ветеринарном институте им.Н.Э.Баумайа /420074, г.Казань, Ветеринарный институт /

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского ветеринарного института.

Автореферат разослан' "ЛЛ-" ¡99а г.

Ученый секретарь •вдаци&лиаировэнного Совета,

доцент 8.Е.ЧЕБОТАРЕВ

а

1.0. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Проблема термических поражений в настоящее время является актуальной не только для медицины, но и ветеринарии (Ей Караваев с соавт. ,1970; Т.ЯАръев, 1971; Б. С. Бихри-ев, Е М. Бурмистров, 1981; О. К Попов, 1984; В. В. Бигуняк и др. , 1987; Е а Мосин И др. , 1992).

Ранняя диагностика термических ожогов, тактика терапии обожженных животных - один из трудных и малоразработанных разделов ветеринарной травматологии (Г. а Коржевенко, П. Е Ивановцев, 1965; А. С. Аладышкин, 1966,1982; И. А. Калашник с соавт. , 1982; В. И. Железный и др., 1986; ад. Казанцева и др., 1986).

В отдельных публикациях последних лет показано, что в основе патогенеза ожоговой болезни лежит депрессия иммуной системы (Р. И. ЛИфшиц и др. ,1989; И. М. Беляков и др. 1992 и др.).

В последнее время в литературе приводятся данные по изучению иммунодефицитных состояний у сельскохозяйственных животных с исследованием органов иммуной системы (И. М. Карпуть, 1986; С. 11 Лютине-кий, Э. а Скрипник, 1988,1989; Т. А. Иванова, 1990; Т. X Мамитов, 1990; О. а Крячко, 1992).

Однако, вопросы иммунологической реактивности вообще, и при ожоговой травме кожи у сельскохозяйственных животных в частности, изучены крайне недостаточно, при этом во многом не ясны аспекты патогенеза болезни, не определена эффективная терапия больных животных.

Для выяснения интимных механизмов ожоговой болезни вбзникает необходимость проведения экспериментальных исследований с применением современных методов в частности, весьма информативного метода моноклональных антител (Р. Е Петров, 1982; А. Ю. Барышников и др. ,1989; а а Новиков И др. 1991).

1.2. Цель и задачи исследования. Основная цель работы - изучить характер нарушения функции имунной системы и пути ее восстановления при термической травме кожи у животных.

Задачи исследований:

1. Изучить возможность ранней клинической и инструментальной (контактная электротермометрия, жидкокристаллическая термоиндикаторная пленка, импедансометрия) диагностики степеней тяжести термического поражения кожи у животных.

2. Изучить характер изменения основных показателей неспецифической и специфической реактивности животных при различной тяжести термической травмы кожи.

3. Изучить возможность восстановления функции иммунной системы у животных, подверженных термической травме кожи, путем применения иммуномодуляторов ( тималин, тимоген).

4. Изучить влияние тимогена на характер течения противоожоговой гипериммунизации у свиней.

5. Получить и испытать антиожоговую гипериммунную сыворотку свиней при серотерапии больных животных.

1.3. Научная новизна. Впервые для выявления иммунодефицита у ^виней использованы моноклональные антитела, полученные Московским институтом клинической онкологии (ИКО).

Уточнена ранняя диагностика степеней тяжести термических ожогов кожи у животных с помощью контактной электротермометрии, применения жидкокристаллической термоиндикаторной пленки и импедан-сометрии.

Выявлено, что у пораженных животных характер изменения неспецифической и специфической реактивности прямопропорциональны тяжести ожоговой травмы кожи. Доказана возможность коррекции имму-нодепрессии у животных при ожоговой травме путем применения иммуномодуляторов: тималина и тимогена.

На свиньях с применением иммуномодулятора тимогена получена гипериммунная антиожоговая сыворотка, которая оказалась высокоэффективной при терапии ожоговой болезни у животных.

1.4. фактическая ценность работы. Рекомендуется для диагностики иммунодефицитного состояния у сйиней реакция непрямой имму-нофлуоресценции при использовании моноклокальных антител серии ИКО (ИКО-1, ИКО-12, ИКО-31, ИКО-86).

Разработана и внедрена в научно-производственный процесс Казанского химического НИИ "Мэтодика диагностики степеней термических ожогов кожных покровов у свиней".

Для терапии иммунодефицитных состояний при ожоговых травмах кожи у животных на свиньях получена высокоэффективная антиожоговая гипериммунная сыворотка.

Разработано и внедрено 3 рационализаторских предложения.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту

1. Применение данных контактной злектротермометрии, жидкокристаллической термоиндикаторной пленки (ЖКТП), импедансометрии в качестве дополнительных'методов ранней диагностики степеней тяжести термических ожогов кожи у животных.

2. Иммунологическая характеристика клинически здоровых и термически пораженных свиней.

3. Роль иммуномодуляторов (тималина и тимогена) и серотерапии в восстановлении' функции иммуной системы у животных при термическом поражении кожи.

1.6. Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-производственных конференциях сотрудников и аспирантов Казанского ветеринарного института 1989, 1990, 1991 и 1992гг.; на Всесоюзной научной конференции " Экологические' проблемы фармакологии и токсикологии" 1990; на Международном учредительном конгрессе патофизиологов, 1991 (Мэсква).

»

1.7. Реализация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ.

1.8. Объем и структура диссертации . Диссертация состоит из "Введения, Обзора литературы, Собственных исследований, Обсуждения результатов собственных исследований. Изложена на 162 страницах машинописного текста. Иллюстрирована 19 таблицами, 10 рисунками и 6 фотографиями. Список литературы включает 200 источников, в том числе Зр иностранных.

2. 0. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования выполнены с 1988 по 1992 годы в условия лаборатории кафедры патологической физиологии "Казанского ветеринарного института; свинокомплекса (на 12 тыс.логоловья) совхоза "Кибя-чинский" Сабинского района Республики-Татарстан и подсобного хозяйства завода " Точмаш" г. Казани.

Эксперименты выполняли на поросятах (128 гол.), собаках (10 гол.), белых крысах (36 гол.) и мышах (70 гол.).

Дозированный ожог кожи I-П-Ш степени, площадью от 3%, и выше вызывали у животных контактным способом по А. С. Аладышкину (1961, 1985), а также дистационно с помощью инфракрасного излучателя с интенсивностью ?.о кал.; ожог кожи белых мышей площадью 75% поверхности тела - ш- методу Г. И. Степанюк (1986).

Xapaicrep поражения и репаративный процесс в области травмы кожи изучали клинически,методами планиметрии,контактной электротермометрии, а также с применением жидкокристаллической термо-индика-торной пленки и методом импедансометрии, при котором использовали мост переменного тока Е7-11 при частоте 1 кГц,напряжением ■20 мВ. в качестве датчиков использовали электроды, которые вкалывали в пораженные участки кожи на расстоянии между собой 10,0 мм.

У пораженных животных в динамике после травмы изучали общее состояние, гематологические показатели (эритроциты, гематокрит, СОЭ, осмотическую резистентность эритроцитов, лейко формулу) по общепринятым методам. Кровь от поросят получали из орбитального венозного синуса по методу Дж. Понта (1983).

Для оценки факторов неспецифической защиты у поросят, подвергнутых термическому ожогу кожи^определяли: фагоцитарную активность нейтрофилов (ЕС. Гостев, 1950), бактерицидную (О. Е Смирнова с соавт.. 1966) и лизоцимную (Е Г. Дорофейчук, 1968) активность сыворотки крови.

У животных с термической травмой кожи определяли следующие биохимические показатели: концентрацию общего белка в сыворотке крови с помощью рефрактометра ИРФ-45 4Б; белковые фракции (альбумины, альфа, бетта, гамма - глобуллины, трансферина по методу С. А. Карпюка (1962); кислотную емкость - по Раевскому; перекисное окисление липидов - по концентрации маланового диальдегида (М. С. Гончаренко, А. М. Латыпов, 1985).

Лимфоциты из гепаринизированной крови выделяли методом центрифугирования в градиенте плотности (а = 1,077) фиколл-пак (Швеция) в течение 20 минут при 1500 об/мин с последующим отбором клеток на стадию интерфазы. Для оценки Т-системы иммунитета у поросят определяли количество Т-лимфоцитов методом спонтанного ро-зеткообразования (Е-РОК) с эритроцитами барана /Jondal М. ,et. al, 1972); количество Т-хелперов и Т-супрессоров. (Limatibul S. ,et. al., 1978); "активных" форм Т-лимфоцитов ( Кегшап et. al.,1976); коэффициент дифференцировки Т-лимфоцитов (Етр-РОК/Етч-РОК) определяли по методу Keane R. et. al. ,(1982).

С целью оценки B-системы иммунитета определяли количество В-лимфоцитов (ЕАС-РОК) в реакции розеткообразования с эритроцита-

ми быка, несущими на своей поверхности комплекс антитело-комплект (В1апсе С еЬ. а1. , 1970).

Определение иммунологического статуса у поросят изучали с помощью МКА серии ИКО (разработаные в институте клинической онкологии БОНД АМН СССР) в лаборатории моноклональных антител Нижегородского НИИЗиМ, сотрудникам которой мы благодарны за оказанную помощь в работе. Выделенные лимфоциты крови использовали в реакции непрямой иммунофдуоресценции с применением в качестве вторых антител Р(ав)2 - фрагментов антител к мыши, меченных ФИЦ. Пробы анализировали на люминисцентном микроскопе ЛЮМАМ-И2.

Суспензию клеток тимуса, селезенки, лимфоузла получали измельчением и последующей мягкой гомогенизацией иммунологической навески органов в стеклянном гомогенизаторе. Количественный состав Т-лимфоцитов и их субпопуляцией определяли методом розеткооб-

\

разования.

Введение животным иммуномодуляторов (тималин, тимоген) осуществляли в соответствии с инструкцией по их применению.

Ожоговый антиген получали от свиньи с ожогом кожи Ш степени, площадью 23% поверхности тела: кровь брат через 6 часов после ожога животного (СТ-б). Токсичность сыворотки определяли методом раститровки (Ф. А. Медетханов, 1991) с шагом 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 на белых мышах с блокадой ШС при соответствующем контроле (сыворотка крови интактных белых мышей). Иммунизацию поросят осуществляли сывороткой СТ-6 трехкратно с интервалом введения 4 дня в возрастающих дозах (2,0; 5,0; 7,0 мл). Влияние сыворотки СТ-6 на состояние клеточного иммунитета у иммунизированных поросят изучали с помощью моноклональных антител серии ИКО по выше указанному методу. Определяли при этом количество Т-хелперов, Т-суп-ресссров, В-лимфоцитов, мононуклеаров с 1а-подобными антигенами, коэффициент дифференцировки Т-лимфоцитов.

Для получения гипериымунной противоожоговой сыворотки у животных брали кровь на 7, 14 и 21 сутки после иммунизации; сыворотку получали общепринятым методом. Эффективность гипериммунной противоожоговой сыворотки оценивали на белых мышах, подвергнутых 75% ожогу кожи по Степанюк Г. И. (1986).

Статическую обработку экспериментальных данных проводили на микрокалькуляторе МК-56 (Р. X Тукшаитов, 1984). Для сравнения показателей выводили коэффициент достоверности (Р) по Стыоденту.

3. 0. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Изучение возможности ранней клинической и инструментальной (контактная электротермометрия, жидкокристаллическая термоиндикаторная пленка,импедансометрия )диагностики степеней тязести термического поражения кежи у животных.

Исследованиями показано, что экспериментальная ожоговая травма кожи мало отличалась от описанной в специальной литературе.

Клинически первая степень ожога кожи у животных характеризовалась гиперемией, небольшой отечностью и болезностыо, сохраняющихся не более трех суток. После слущивания поврежденного эпидермиса (2-4 сутки) обычно наступало полное заживление раны. Гистологически наблюдалось повреждение эпидермиса, в эпителиальных клетках - скопление транссудата с небольшим количеством лейкоцитов. Заживление шло за счет эпителия придатков кожи, а также пролиферации клеточных элементов неповрежденных участков кожи.

При ожоге П степени отек и болезность кожи были выражены более значительно (в 1,5-2,0 раза увеличилась толщина кожной складки). Заживление дефекта кожи обычно длилось до 10-15 суток. Гистологически отмечалась гибель эпидермиса дерма оголенная, однако

рельеф ее сохранен. В клетках эпителия придатков кожи развивались некробиотические процессы, полностью некротизировались лишь наружная треть волосяных фолликулов и протоков потоеых желез.

Наиболее сильные изменения претерпевала кожа при ожоге Ш степени тяжести. При коагуляционном некрозе образовался кожный струп, который постепенно формировался в плотные сухие образования (2-3 суток). После секвестрации кожного струпа образовывалась открытая раневая поверхность, сроки заживления которой зависили от площади поражения. При колликвационном некрозе мы отмечали сильный отек кожи, границы повреждения стерты.

Гистологически для ожога Ш степени характерна полная гибель эпидермиса, сосочкового и сетчатого слоя дермы, придатка кожи и отчасти повреждение подкожной жировой клетчатки.

У собак и особенно у кроликов в ране обычно наблюдался гнойно-некротический процесс. При термическом же поражении свиней (обследовано более 128 гол. животных) мы ни в одном случае не отмечали гнойного процесса, рана обычно была сухой, заживление протекало под струпом.

Мы пришли к заключению, также как и В. К. Сологуб (1986), что клинически в ранней стадии болезни зачастую трудно дифференцировать термический ожог кожи разной степени тяжести - эта задача до сих пор остается проблематичной. В этом плане учеными проводится поиск ранних методов диагностики степеней тяжести поражения кожи. Решая эту задачу мы провели исследования по применению методов контактной электротермометрии, использованию жидкокристаллической термоиндикаторной пленки и импедансометрии с конечной целью выяснения особенностей динамики развития основных процессов, происходящих в ожоговой ране I, П и Ш степеней тяжести, а также получения при этом новой информации на предмет возможного получения данных для использования их в разработке ранней диагностики сте-

п

пенля ожогового поражения кожи у животных.

Било установлено, что в течение первого часа после травмы температура --у. п участка кожи при всех трех степенях пора-

жения достоверно снижается в среднем на 1,0-2,0 °С. Это. на наш взгляд, связано со стрессовой реакцией - сужением капилляров кожи в ответ на термическую травму. Далее, по мере развития воспалительной реакции, в течение 24 часов послеожогового периода, наблюдалось постепенное повышение температуры в обоженных участках кожи, при первой степени - в среднем на 0,9 "С, при второй степени - на 1,7 °С; при третьей степени температура кожи к этому периоду времени, что характерно, достигала лишь исходного уровня. В зоне ожога I степени тяжеЬти в результате преобладания репаратив-ных процессов, температура постепенно снижалась и по истечении 23 суток приходила к исходному уровню, тогда как при ожоге П степени воспалительный процесс продолжал развиваться, что сопровождалось сохранением повышенной температуры до 3 суток. Наоборот, при третьей степени - в этот период температура кожи постоянно снижается как в следствие развития некроза поврежденной ткани, так и организации струпа

Данные, полученные с помощью импедансометрии, подтверждают вышеизложенную закономерность, а именно, в стадию развития воспалительной реакциии.и следовательно, развития отечного процесса сопротивление тканей электрическому току падает (1-П степень ожога), при организации и развитии струпа (Ш степень) сопротивление электрическому току тканей наоборот, увеличивается.

Вышеизложенное вносит новую информацию о динамике развития раневого процесса в ожоговой ране, которую можно использовать как дополнение к клинике при ранней диагностике степеней тяжести ожоговой травмы кожи у животных.

Iii

Применение жидкокристаллической термоиндикаторной пленки, как показали исследования, обеспечивает получение экспрессных дополнительных данных, в первую очередь, о площади поражения кожи, а также метод подтверждает информацию, полученную с помощью контактной электротермометрии.

Исследовав характер развития раневого процесса, диагностику степеней ожоговой травмы кожи, мы получили объективную ба^у к проведению основных запланированных опытов. Между тем, как будет показано ниже, проведение основных экспериментов было бы не возможно без предварительного определения иммунологического статуса животных. Для решения этой задачи, мы использовали моноклональные антитела серии ИКО.

3. 2. Применение МКА серии ИКО для определения иммунологического статуса поросят.

В эксперименте были использованы МКА, рекомендованные для фе-нотипирования клеток крови людей (табл.1).

Таблица 1

Характеристика МКА серии ИКО, использованных в опыте

Антитела - Выявляемый антиген (человека) Локализация антигена на клетках крови человека

ИКСЫ - Антигены П класса гист,о- В-лимфоциты,моноциты,акти-

совместимости, 1а-подоб- визированные Т-лимфоциты

ные антигены

ИКО-12 CD22 антиген В-лимфоциты

ИКО-31 CD8 антиген Т-супроссоры

ИКО-86 CD4 антиген Т-хелперы

ИКО-90 CD3 антиген Т-лимфоциты

lis

В результате проведенных исследований установлено, что для иммунофенотипирования клеток крови поросят можно использовать испытанные мышиные МКА серии ИКО: ИКО-1, ИКО-12, ИКО-31, ИКО-86. Опыты показали, что у 15 поросят из 20 взятых в опыт животных, уровень субпопуляций иммунокомпетентных клеток был в пределах физиологической нормы (табл.2). Вместе с тем моноклональные антитела ИКО-90 в опытах не давали желаемого взаимодействия с мононук-.лепрами периферической крови поросят. Это явление, вероятно, связано с тем, что антигенная детерминанта CD3 у поросят имеет несколько другое структурное строение, отличающееся от антигена расположенного на клетках человека. Исходя из вышеизложенного моноклональные антитела ИКО-90 из экспериментов были исключены.

Далее, были проведены серии исследований по изучению функционального состояния иммунной системы у клинически здоровых поросят (табл. 2). Исследованиями установлено, что 25Z клинически здоровых поросят оказались иммунодефицитными.

Таблица 2

Моноклональные антитела (ИКО) в оценке иммунологического статуса клинически здоровых поросят

Кол-во Стат. Лейкоц. Лимфоц. ИКО-86 ИКО-31 ИКО-12 ИКО-1 ктдл

жив-х показ х ю'/л (7.) (%) U) (%) (%) ед.

п=15 М 14,3 66,8 38,6 23,2 23,9 18,5 1,8

+-м 0,6 2,2 3,4 3,2 1,7 1.3 0,34

п=5 и 15,2 58,4 23,1 24,2 9,2 4,0 0,95

+-м 0,9 3,4 2,1 2,2 0,4 1,0 0,01

Эти наблюдения были для нас неожиданными , но вместе с тем они показывают необходимость глубокого изучения интерьера поголовья животных с целью диагностики у них иммунодефицита с применением. высокоспецифического метода моноклональных антител.

Из проведенных исследований следует, что для определения иммунологического статуса, фенотипирования иммунных клеток, а также с целью диагностики иммунодефицитных состояний у поросят вообще и включения животных в опыт могут быть использованы моноклональные антитела: ИКО-86, ИКО-31, ИКО-12 и ИКО-1.

3.3. Изучение характера изменения основных показателей неспецифической и специфической реактивности животных при различной тяжести термической травмы кожи.

Исследованиями установлено, что изменение реактивности организма при ожоговой травме кожи зависит от ее тяжести. При легкой тяжести травмы кожи наблюдается рост неспецифических и специфических показателей реактивности; при тяжелой - снижение фагоцитарной активности нейтрофилов, лизоцимной активности, бактери — цидности, кислотной емкости, гамма-глобулинов сыворотки крови, усиление перекисного окисления липидов.

Выявленная закономерность следует из изучения популяционного состава лимфоцитов крови и морфологического исследования иммуно-компетентных органов. Показано, что изменение иммунологической реактивности при ожоге кожи Ш степени зависит от плошдди ожоговой травмы. Так, если при ожоге кожи с плопвдыо поражения до 4% просматривается стимуляция функции иммунной системы, то при термической травме - 62 и более наблюдается тенденция к развитию иммуно-депрессии и далее, приобретению иммунодефицитного состояния (рис. 1).проявляющегося падением уровня Т-хелперов, ростом Т-суп-

рессоров, снижением КДТЛ, истощением органов тимиколимфатической системы.

|77] - Т-хелперы

клеток

34

25 20 15 10 5 1

КДТЛ-2,8

I | - Т-супрессоры

КДТЛ-0,6 КДГЛ-1,35

3 10 '21 сутки

Рис.1 СуСпопуляция. Т-лимфоцитов в крови поросят при ожоге

кожи Ш степени площадью 6% поверхности кожи Примечание: КДТЛ- коэффициент дифференцировки Т-лимфоцитов

/

3.4. Изучение возможности восстановления функции иммуной системы у животных, подверженных термической травме кожи, путем применения иммуномодуляторов (тималин, тимоген).

Опытами установлено, что тималин стимулирует иммуногенез (рис.2), увеличивая при этом в крови уровень Т-лимфоцитов, активизированных Т-лимфоцитов. Возрастает в крови содержание лимфоцитов, несущих на своей поверхности рецептор С04, а также растет коэффициент дифференцировки Т-лимфоцитов. Отмечается тенденция к

увеличению количества В-л$шфоцитов. X клеток

|//| - Т-хелперы

35 30 25 20 15 10 5 1

Г | - Т-супрессоры

КДТЛ-1,56 КДТЛ-1,05 ВДТЛ-3,25 ВДТЛ-1,16 ВДТЛ-2,46

I

П

I

П

->

До ожога 10 21 Сутки после ожога

Рис. 2 Субпопуляции Т-лимфоцитов в крови поросят при ожоге кожи Ш степени площадью поражения 8% поверхности тела; без лечения (I) и с применением тималина (П).

Иммунологические исследования иммунокомпетентных органов подтвердили вышеизложенное. При ожоговой травме происходит нарушение процессов дифференцирования клеток в органах иммуногенеза. Так, у животных, подвергнутых ожоговой травме в тимусе, селезенке и лимфоузлах снижается удельная концентрация кариоцитов. При введении тималина, а также тимогена отмечается увеличение количества Т-хелперов без существенного изменения уровня Т-супрессоров, рост коэффициента дифференцировки Т-лимфоцитов, что свидетельствует о восстановлении функции иммуной системы организма

3.5. Изучение влияния тимогена на характер течения противоожоговой гипериммунизации поросят сывороткой крови свиньи, полученной через 6 часов после ожога (Ш степень, 237. поверхности тела) , пова»»я§ увеличение уровня мононуклеаров экспрессируюцих 1а подобные антигены,что в большей степени проявляется на 7-14 сутки иммуного процесса. К 21 дню исследования количество клеток экспресирующих на своей поверхности 1а-подобные антигены несколько снижается, но остается достоверно высоким по отношению к исходным данным. Количество мононуклеаров с 1а-антигенами у гипе-риммунизированных поросят на фоне применения был выше чем у животных, подвергнутых только иммунизации. Причем максимальных значений показатели уровня клеток с 1а-антигенами достигали к 21 дню иммунного процесса. Пропорционально отмечалось увеличение и

В-лимфоцитов. Указанные изменения более выражены у животных, которым гипериммунизацию проводили на фоне предварительного введения иммуномодулятора тимогена (табл.3).

Кроме применения иммуностимулирующей терапии большой интерес представляет, на наш взгляд, изыскание методов блокирования фагового токсина в пораженном организме, и в частности, испытания при этом метода серотерапии.

3.6. Излучение и испытание антиомэговог гтаериммунной сыворотки при серотерапии больных животных.

Проведенные исследования позволили применить "ожоговый антиген" для получения на свиньях противоожоговой сыворотки, фи этом оказались наиболее эффективными антиожэговые сыворотки, полученные при иммунизации животных на фоне применения иммуномодулятора-- тимогена. Так, если сохранность опытных животных при серотерапии с применением гипериммунной антиожоговой сыворотки составляла

Таблица 3

слияние тиыогена на популяциониый состав клеток крови поросят, иммунизированных _свиной сыврроткой,получеяной череэ о часов после ожога коки__

Ьокааатели ¿.д.наме- До иммуни- Сутки после иммунизации

рения зации ? 14 ¿1

1 гр. ¿тр. 1гр. ¿гр. 1 гр. ¿гр. |

Лейкоциты х 1и*/л 14,а ¿0,6 21 ,У ¿V' 16.У* +_0,в X ±з,г ¿0,6* +0,'/ 10,г * ±и +0,7 !

Лимфоциты > бе,а а1/, ох 09,7 +6 .а 49,0* +4,'0 он,б х ±1.* 04, е* +и,й

ЙКО-вб Х-хелперы > Зъ,6 +з,4 46,5 +4,У +4,0 4<;,1 +с,6 Зн,? +<¿,9 4<;,5 +о,6 . «5,3 +г,4

МКО-31 1-еупресеоры > +3,й за, Iх + 0,6 31,3 +з,о а/, Iх +5,6 34,4 34,6х +¿,6

ИКО-12 в-лим^оциты > ло.д ¿4,1 .30,0* + 1,4 40,0 * +4,У +0,4 аб. 1 +1,6 +1,3

ИКО-1 1а-антигены % 18,5 +1 |з «8,3х +2,7 30,1 + 10,3 39,9х ¿2,0 36,2х +1,1 32,3 х +_1,7 зч, с х + 1,9

КДТЛ ед. 1,8 ±0,34 ±0.2 1,2 .±0,2 1.19 ±0.13 ±0.27 Ч3 ±0,3' 1,12 ±0,14

Примечание; 1 группа - животнье подвергнутые иммунизации; 2 группа - *квотные,поп;нергну-тые иммунизации на фоне стимуляции тимогеном; Х-. различи»-, достоверны прк Р<0,05; КДГЛ - коэффициент ди-'^еренцировки Т-лимфоцитов

1У

в среднем 607., то в группе животных - с антижоговой сывороткой,

х

полученной на фоне применения иммуномодулятора - тимогена - 80%, при 100% гибели белых мышей в контроле.

ВЫВОДЫ

1. Впервые установлено, что моноклональные антитела серии ИКО, характеризующие функциональную активность т-лимфоцитов, В-лимфоцитов и макрофагов (ИКСЫ), экспрессию антигенов на В-лимфоцитах (ИК0-12), антигены на Т-супресеорах (ИКО-31) и антигены Т-хелперов (ИКО-86) позволяют определять антигенные детерминанты, присущие только специализированным клеткам и дают возможность выявлять свиней с признаками иммунодефицита.

2. У свиней, с термическим поражением кожи, изменяется функция иммуной системы в зависимости от тяжести травмы. При термическом ожоге кожи Ш степени тяжести площадью поражения до 4% поверхности тела наблюдается стрессовая мобилизация иммунной системы с последующим быстрым выздоровлением животного; при ожоге кожи с площадью поражения 6% и более наоборот, отмечается депрессия функции иммунной системы, проявляющейся нарушением кооперирования клеток крови, выражающегося снижением коэффициента диффе-ренцировки Т-лимфоцитов, явлениями гиперпластическо-пролифератив-ных процессов, опустошением лимфоидной ткани клеточными элементами.

3. Глубс ие термические ожоги кожи с площадью поражения более 6% поверхности тела сопровождаются снижением показателей неспецифических факторов зашита При этом падают кислотная емкость сыворотки крови, усиливается перекисное окисление липидов, снижается уровень фагоцитоза, лизоЦима, гамма-глобулинов, бактерицидная активность сыворотки крови.

но

4. Иммуномодуляторы (тималин и тимоген) введенные в соответствии с инструкцией по применению в организм поросят, подвергнутых термической травме кожи, улучшают общее состояние, восстанавливают неспецифическую и иммунологическую реактивность у животных.

5. Применение тимогена при гипериммунизации свиней "ожоговым антигеном'Ч сывороткой крови обоженного животного) позволяет получить высокоактивную антиожоговую сыворотку.

6. Антиожоговая сыворотка, полученная путем гипериммунизации свиней ожоговым антигеном, с положительным результатом испытана при лечении тяжелой ожоговой травмы у животных (ожог кожи 75% поверхности кожи).

7. В качестве дополнительных методов ранней диагностики степеней тяжести термических поражений кожи у животных рекомендуется использовать контактную злектротермометрию, жидкокристаллическую пленку и импедансометрию.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью выявления у поросят иммунодефицитного состояния рекомендуется использовать моноклональные антитела серии ИКО (ИКО-1, ИКО-12, ИКО-31, ИКО-86) в реакции непрямой иммунофлуорес-ценции, а в качестве вторых антител следует брать Г(ав')г- фрагменты антител к - мыши, меченных ФИЦ в разведении 1:10.

2. Для ранней диагностики степеней и площади термических по-' ражений кожи у животных наряду с клиникой предлагается применение контактной электротермометрии, жидкокристаллической термоиндикаторной пленки и импедансометрии.

3. В качестве модели иммунодефицитного состояния в опытах можно использовать животных с термическим поражением кожи Ш сте-

пени тяжести, площадью более 6% поверхности тела.

4. Для коррекции иммунодефицитного состояния у поросят рекомендуется применять тималин или тимоген в дозах, предусмотренных инструкцией по применению препаратов.

5. В качестве серотерапии ожоговой болезни у животных рекомендуется использовать гипериммунную сыворотку свиней, иммунизированных ожоговым антигеном.

6. Материалы экспериментальных исследований, изложенные в диссертации, рекомендуется использовать при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по патологической физиологии, иммунологии, хирургии и другим дисциплинам.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Новошинов Г. П. .Берман С. А., Аладышкин А. С., Аланов Н. П. , Карандашов И. Г., Калимуллин Ф. X. , Баранов В. А., Кузнецов В. И. Применение жидкокристаллической термоиндикаторной пленки для диагностики степени ожоговой травмы. //Тез. докл. Всесоюзной конференции " Актуальные вопросы медицинского обеспечения пораженных на этапах медицинской эвакуации." - Казань, 1989-С.Н2.

2. Кузнецов В. И., Баранов Е А. .Калимуллин Ф. X., Аладыжин А. С. Влияние гексеналового наркоза на заживление термических ожогов у кроликов. // Тез. докл. Республиканской научно-производственной конференции. -Казань, 1989 -С. 119,

3. Баранов В. А., Калимуллин Ф. X. , Новошинов Г. П., Берман С. А. , Аладышкин А. С. , Малгаджаров С. М. Ранняя диагностика термического ожога кожи у животных при помощи метода импедансометрии . // Тез. докл. Республиканской научно-производственной конференции. "Казань, 1989 -С. /и.

4. Кузнецов В. И., Баранов Е А., Аладышкин А. С. Диагностика степеней тяжести термической травмы методом термометрии . // Тез.

докл. Республиканской научно-производственной конференции. -Казань, 1989.-С.7-1.

5. Аланов Е П. , Новошинов Г. Е , Баранов Е А. Картина крови у животных при термических ожогах кожи . // Тез. докл. Республиканской научно-производственной конференции . -Казань, 1990.-С. ба.

6. Баранов В. А. Вторичный иммунодефицит при термическом ожоге кожи свиней, вакцинированных против болезни ауески //Тез. докл. Республиканской конференции. -Казань, 1990.-С. VI.

7. Ситдиков Р. И., Баранов В. А. , Медетханов Ф. А. Патоморфоло,-гические изменения в органах и тканях свиней,> подвергнутых ожогу кожи .//Тез. докл. Республиканской конференции. -Казань, 1992.-С./4.

8. Novoshinov I. Р. , Aladyshkin A. S. .Schagiev А. X. , Baranov V. А. , et al. "Pathogenesis of immunodeficient state in swine suffering from Pseudorabies in case of thermal burn trauma of skin". International society for pathophysiology. Moscow, 1991. P. Оба.

9. Медетханов Ф. A., Баранов E A. , Гадеева Г. M. Изменение пе-рекисного окисления липиДов эритроцитов свиней при термической травме кожи .// Сб. научных трудов.-Казань,-С. 78-81.

10. Баранов В. А., Сандова О. М., Новошинов Г. П. , Новиков В. В. Мэноклональные антитела при оценке иммунодефицитных состояний и реакции организма на введение тимогена . // Тез. докл. Республиканской конференции. -Казань, 1992. -С. 63

\

\

' \

\

Заказ 109. Подписано в печать 09.U4.93. Формат 60 х 8^/16

Га г.ксчая. Печать офсетная. I п,л. Тирак 100 экз. }ч..сток офсетной печати КВИ. Казань-420074. Ветинститут.