Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Иммунобиологические свойства вакцины ассоциированной против ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения яйценоскости-76 инактивированной эмульгированной

На правах рукописи

УДК 619:619.98:578.831.1:578:834.11:578.826:615.371

ИРЗА Виктор Николаевич

Иммунобиологические свойства вакцины ассоциированной против нькжаслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения яйценоскости-76 инактивированной эмульгированной

16.00.03 "Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология"

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Владимир - 2000

Работа выполнена в ФГУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных : Министерства сельского хозяйства РФ

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник Борисов Александр Владимирович

Официальные оппоненты:

- доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный-деятель науки РФ Узюмов Василий Лаврентьевич

(ФГУ ВНИИЗЖ, г. Владимир)

- доктор ветеринарных наук, профессор Куриленко Анатолий Нестерович (МГАВМ и Б, г. Москва)

Ведущая организация: Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации'и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ, г. Москва).

Защита диссертации состоится " декабря 2000 г. в 11 часов на заседании диссертационного совета Д. 120.60.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте защиты животных МСХ РФ по адресу: 600900, г. Владимир, пос. Юрьевец, ФГУ ВНИИЗЖ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ ВНИИЗЖ.

Автореферат разослан" ^" ноября 2000 г.

Учёный секретарь диссертационного совета

Г. М. Семёнова

1. Общая характеристика работы

1.1. Актуальность темы. В последние годы в отечественном птицеводстве наблюдается тенденция к экономическому росту за счет использования высокопродуктивных зарубежных кроссов яичной и мясной птицы, внедрения современных технологий кормления и содержания, которые позволили значительно повысить продуктивность поголовья. Вместе с тем, импорт племенной продукции повлек за собой осложнение эпизоотической ситуации в стране по инфекционным заболеваниям птицы в связи с возможностью заноса возбудителей этих заболеваний. Возросла-опасность возникновения таких инфекционных болезней птиц, как ньюкаслская болезнь (НБ), инфекционный бронхит кур (ИБК), синдром снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76) и других.

Для борьбы с инфекционными болезнями птиц наряду с эффективными ветеринарно-санитарными мероприятиями применяется стратегия комплексной вакцинопрофилаетики с использованием инактивированных препаратов.

Мировой научный опыт показал целесообразность применения инактивированных эмульсионных вакцин в промышленном птицеводстве для прививок поголовья кур промышленных и племенных стад, раскрыл возможности комбинирования нескольких вирусных антигенов в таких препаратах (В.В. Борисов с соавт., 1997, 1999; А.С. Дубовой, П.Ю. Котляр, 1995,1998; G. Bennejean, 1981; P.Boxet al„ 1975, 1980, 1981; Brugh etal., 1979; D. Lutticken, L.Cornelius, 1981; Y. Moreau et al„ 1981; H. Stone etal., 1978).

Основным преимуществом ассоциированных эмульсионных вакцин по сравнению с сорбированными и живыми является создание у привитого поголовья более напряжённого и продолжительного иммунитета ко всем профилакти-руемым заболеваниям и продление сроков защиты потомства, полученного от вакцинированных родителей. При этом значительно снижаются воздействие на птицу стрессовых факторов и трудозатраты, связанные с проведением иммунизации моновалентными вакцинами.

Изменение эпизоотической ситуации в стране после импорта племенного материала и использование в отечественном птицеводстве ассоциированных инактивированных вакцин ведущих зарубежных фирм заставило российских исследователей приложить усилия к получению качественных и конкурентоспособных биопрепаратов.

В 1997 г. во ВНИИЗЖ была получена вакцина ассоциированная против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированная эмульгированная, которая была предложена птицеводческим предприятиям для широких производственных испытаний. Изготовление первых опытно-промышленных серий вакцины против НБ, ИБК и ССЯ-76 потребовало поиска оптимального баланса между эффективностью и безвредностью препарата и проведения сравнительных испытаний с зарубежными аналогами, а также с моно- и бивалентными эмульгированными вакцинами.

На формирование поствакцинального иммунитета и проявление местных тканевых реакций, кроме компонентного состава вакцины, может влиять ряд факторов, связанных с путями введения и дозировкой препарата, условиями и продолжительностью его хранения, состоянием прививаемого поголовья. Данные вопросы ещё недостаточно изучены, поэтому проведение исследований по изучению иммунобиологических свойств вакцины, направленных на совершенствование препарата и методов его применения было целесообразным.

1.2. Цель и задачи исследований. Главной целью исследований было изучение иммунобиологических свойств вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной и разработка рекомендаций по её эффективному применению в птицеводстве.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- сравнить эффективность вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной с зарубежным аналогами, а также с моно- и бивалентными эмульгированными препаратами;

- определить сроки наступления и продолжительность иммунитета у привитой птицы в зависимости от вводимой дозы вакцины;

изучить в сравнительном аспекте поствакцинальный иммунитет у кур родительских стад яичного и мясного кроссов и динамику угасания трансовариаль-ного иммунитета у потомства привитых птиц; проанализировать поствакцинальный иммунитет в зависимости от фонового иммунитета перед вакцинацией; изучить антигенные свойства вакцины и сохранение стабильности эмульсии в зависимости от условий и продолжительности её хранения перед применением;

- изучить иммунный ответ на вакцину у привитой птицы и характер проявления тканевых реакций в месте инъекции при разных путях введения ;

- разработать оптимальные комплексные схемы иммунизации птицы против НБ, ИБК и ССЯ-76 на основе серомониторинга и анализа эпизоотической ситуации на птицефабриках.

1.3. Научная новизна. Впервые проведены широкие исследования иммунобиологических свойств вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной в лабораторных и производственных условиях.

Проведено сравнительное изучение эффективности препарата с зарубежными аналогами, моно- и бивалентными вакцинами, определены сроки наступления иммунитета и его продолжительность у привитой птицы в зависимости от вводимой дозы вакцины. Изучены напряжённость и продолжительность поствакцинального иммунитета у кур яичного и мясного направления и динамика угасания трансовариального иммунитета у цыплят, полученных от этой птицы. Изучен иммунный ответ привитой птицы на вакцинные антигены вирусов НБ и ИБК в зависимости от фонового иммунитета перед вакцинацией. Получены данные о влиянии температурных условий и сроков хранения на антигенные свойства вакцины и сохранение стабильности эмульсии. Определён характер проявления тканевых реакций в месте инъекции вакцины и проведено сравнительное изучение иммунного ответа птицы на вакцину в зависимости от путей введения и при использовании разных масляных адъювантов.

1.4. Практическая значимость.. Подготовлен комплект НТД на вакцину ассоциированную против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированнную эмульгированную и утвержден промышленный регламент по ее изготовлению. Проведены масштабные испытания вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной в лабораторных и производственных условиях. На основании серомониторинга и анализа эпизоотической ситуации на птицефабриках разработаны рекомендации по оптимальным срокам применения вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 в составе комплексных схем иммунизации птицы против данных заболеваний. Обоснованы температурные условия и сроки хранения вакцины перед использованием.

Подобран адъювант для вакцины, обеспечивающий высокую антигенную активность при низкой реакгогенности. Определена динамика угасания трансовариального иммунитета у потомства привитой птицы, что может быть учтено при выборе оптимальных сроков иммунизации цыплят.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту:

- иммунобиологические свойства вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной в экспериментальных и производственных условиях;

- сравнительное изучение эффективности препарата с зарубежными аналогами, моно- и бивалентными эмульгированными вакцинами;

- поствакцинальный и трансовариальный иммунитет у яичной и мясной птицы;

- схемы иммунопрофилактики НБ, ИБК и ССЯ-76 при применении ассоциированной инактивированной эмульгированной вакцины.

1.6. Апробация работы. Материалы исследований доложены и обсуждены в 2000 г. на международной научно-практической конференции ветеринарных врачей птицеводства (г.Киев), международной научно-практической конференции "Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животных" (ВНИИВВиМ, г. Покров), совещании-семинаре главных технологов и главных ветврачей производственно-научной системы "Свердловск" (г.Санкт-Петербург), научно-практической конференции ветеринарных врачей птицефабрик центрального региона России (ВНИИЗЖ, г. Владимир).

1.7. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы и 3 научные работы приняты к печати.

1.8. Структура и объём работы. Диссертация изложена на 150 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы и-практические предложения, список литературы (246 источников, в том числе 197 иностранных) и дополнена 14 приложениями. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 3 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы

Подопытное поголовье. В производственных опытах было вакцинировано 25 тыс. кур мясной породы "Арбор Эйкерз" и 20 тыс. кур яичного кросса "Родонит" . Опыты проводили на ЗАО "Владимирский бройлер" и АОЗТ "Птицефабрика Ковровская" Владимирской области. До применения ассоциированной вакцины против НБ, ИБК и ССЯ-76 птица была привита живыми вакцинами против болезни Марека, НБ, ИББ и ИБК.

В лабораторных экспериментах вакцинировано более 2000 гол. птицы 90-100-суточного возраста кроссов "Родонит" и "Хайсекс белый", доставленных из АОЗТ "Птицефабрика Ковровская" и ОАО Птицеводческая агрофирма "Курс" Владимирской области. В хозяйствах птица прививалась живыми вакцинами против указанных выше заболеваний.

Вакцины. Для иммунизации птицы в производственных условиях использовали вакцину ассоциированную против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированную эмульгированную, изготовленную во ВНИИЗЖ.

В лабораторных экспериментах применяли опытные и серийные образцы моновалентных (ССЯ-76) и ассоциированных (НБ-ИБК-ССЯ-76 и ССЯ-76-ИБК) инактивированных вакцин, изготовленных во ВНИИЗЖ в период с 1998 по 2000 г.г. на основе масляных адъювантов ВНИИЗЖ, Монтанидов ИЗА-70 и ИЗА-206 (фирма СЕППИК, Франция); ассоциированные эмульсионные вакцины против НБ, ИБК и ССЯ-76 фирм "Rhone Merieux" и "Sanofi"( Франция) и "Intervet" (Голландия); эмульгированная вакцина против НБ, изготовленная фирмой "Shafit" (Израиль).

Иммунные сыворотки. Пробы крови у кур отбирали до вакцинации и в различные сроки после неё. Кровь от цыплят, выведенных из яиц вакцинированных кур, отбирали через 1, 5,10, 15 и 20 суток после вывода. Отстоявшиеся сыворотки крови хранили до исследований при температуре минус 20°С.

Серологические исследования. Уровни антител к вирусам НБ и ССЯ-76 в сыворотках крови птиц определяли в РТГА в соответствии с действующими методическими указаниями ( № 13-7-2/988 от 23.06 97 г. и ТУ 10-07-138-89, соответственно).

Специфическую активность сывороток к вирусу ИБК определяли методом ИФА с использованием диагностических наборов фирмы KPL (США), сертифи-

цированных в РФ (сертификат № РОСС 113.ФВ01 А03520) в соответствии с наставлением по применению. В производственных опытах параллельно с исследованиями в РТГА уровень антител к вирусам НБ и ССЯ-76 определяли в ИФА с помощью диагностического набора фирмы KPL (НБ) и диагностикума ВНИИЗЖ (ССЯ-76) в соответствии с наставлением по применению (№ 13-7-2/891 от 27.03.97г.). Титры антител, полученные в РТГА, выражали в логарифмах с основанием 2 (лог2).

Оценка поствакцинального иммунитета. Критерием оценки поствакцинального иммунитета, обеспечивающего защиту поголовья от гибели (НБ) и заболевания (ССЯ-76, ИБК) считали следующие уровни титров антител: к вирусу НБ: не менее 4 лог2 в РТГА и более 1:1800 в ИФА; к вирусу ССЯ-76: не менее 5 лог2в РТГА и более 1:800 в ИФА; к вирусу ИБК: не менее 1:5000 в ИФА.

Продолжительность пассивного иммунитета у цыплят оценивали в соответствии с тем, до какого возраста не менее 80% исследованных сывороток крови цыплят имели антитела к вирусу НБ и ССЯ-76 в титрах не менее 3 лог2 в РТГА. Наличие материнских антител к вирусам ИБК и ССЯ-76 у цыплят, выведенных от вакцинированных кур-несушек, рассматривали, как косвенное подтверждение эффективности вакцинации родительских стад.

В некоторых опытах активность вакцин сравнивали по индексу серокон-версии, который получали путем деления среднего геометрического титра антител по группе после иммунизации на титр антител до прививки.

Оценка местных тканевых реакций на введение вакцины. Послеубойную оценку степени поражения тканей проводили по критериям, предложенным Н. Stone.1997:

лёгкие поражения: побледнение тканей, окружающих место инъекции, на площади до 1 см в диаметре, отсутствие воспаления и инкапсулированных остатков вакцины;

- средние поражения: зона воспалительной реакции тканей, проявляющаяся их отёчностью, побледнением или гиперемией, имеет размеры от 1 до 2 см в диаметре, присутствуют остатки инкапсулированной или диффузно распределённой вакцины;

\

- сильные поражения: очаг воспаления тканей с вовлечением глубоких и поверхностных мышц и образованием гранулём составляет в диаметре от 3 до 4 см, вакцина вытекает на разрезе или присутствует в тканях в виде творожистого вещества.

Оценка стабильности эмульсии. Эмульсию считали стабильной, если она представляла собой молочно-белую гомогенную жидкость, отсутствовало расслоение масляной и водной фаз с сепарацией водной фазы на дне флакона или превращение масляной фазы в кремообразное состояние на поверхности жидкости. -

Статистическая обработка результатов исследований. Использовали общепринятые методы статистической обработки полученных данных. Определяли статистическую ошибку средних арифметических величин и критерий их достоверности, стандартное отклонение, достоверность различий между сопоставимыми количественными показателями. Значимость всех опубликованных величин была не ниже первого критериального порога (р< 0,05).

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Сравнение эффективности вакцины ассоциированной против ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения яйценоскости-76 инактивированной эмульгированной с зарубежными аналогами, моновалентными и бивалентными эмульгированными препаратами.

Группы птиц были привиты внутримышечно в область груди в дозе 0,5 мл одной из вакцин различных фирм с аналогичной комбинацией антигенов (ВНИИЗЖ и "Rhone Merieux", Франция), ассоциированной вакциной Nobi-vac IB-G-ND против НБ, ИБК и ИББ фирмы "Intervet" (Голландия), бивалентной вакциной против ИБК и ССЯ-76 производства ВНИИЗЖ и моновалентными эмульгированными вакцинами против НБ (фирма "Shafit", Израиль) и ССЯ-76 (ВНИИЗЖ).

Результаты проведенных исследований представлены в табл. 1.

Таблица 1

Иммунный ответ птицы на антигены вирусов НБ, ИБК и ССЯ-76 в составе различных инактивированных эмульсионных вакцин

Вакцина Титры антител перед вакцинацией* Степень проявления тканевых реакций

НБ ИБК ССЯ-76

7,3±0,2 3,7±0,4 0,2±0,11

Титры антител через 6 нед.

НБ ИБК ССЯ-76

Nobi-Vac IB, G, ND Intervet, serial N 69121, 02-98 10,1±0,3 18,9±2,9 - легкая

Sham ND-K Batch N 421023, Jan. 97 10,9±0,6 - - легкая

Binewaxidrop, Rhone Merieux, Batch N70 k.281; 01/98 12,4±0,6 15,5+3,1 6,4±0,5 средняя

НБ, ИБК, ССЯ-76 ВНИИЗЖ, сер. 10, 07.99 г. 11,8±0,5 18,2±2,2 9,4+0,5 средняя

ССЯ-76 ВНИИЗЖ, сер. 2, 04.99 г. - - 8,9±0,2 средняя

ССЯ-76, ИБК ВНИИЗЖ, сер. 1, 04.99г. - 16,3+2,1 10,2±0,4 средняя

•Примечание: средние татры антител в РТГА выражены через лог2, а в ИФА - средний-

титр х1 ООО

Колебания в величине иммунного ответа на антиген вируса НБ после введения 4 вакцин с компонентом вируса НБ при исследовании в РТГА составили 2,3 лог2: от 10,1+0,3 лог2 в случае применения вакцины ЫоЫл/ас 1В,С,Ш до 12,4+0,6 лог2 после применения французской вакцины. Прирост титров антител к вирусу НБ при использовании ассоциированной вакцины ВНИИЗЖ и французской вакцины был примерно одинаковым. Они обеспечили увеличение уровней антител на 4,4 и 5,1 лог2, соответственно. Иммунный ответ птиц на антиген вируса ИБК был примерно одинаковым для всех четырёх вакцин, содержащих данный компонент: от титра 1:15500+3100 после применения французской вакцины до титра 1:18900+2900 после введения голландского препарата.

Содержание в сыворотках крови антител к вирусу ИБК возросло в 4,2 - 5,2 раза. Величина иммунного ответа при применении трёхвалентной и бивалентной вакцин производства ВНИИЗЖ не отличалась от результатов, полученных

при использовании голландской вакцины (титры 1:18200+2200, 1:16300+2100 и 1:18900+2900, соответственно).

Средние титры антител к вирусу ССЯ-76 были выше после введения моновалентных и ассоциированных вакцин производства ВНИИЗЖ по сравнению с препаратом французского производства на 2,5-3,8 лог2, причём иммунный ответ на бивалентную и трёхвалентную вакцины был более выраженным, чем на моновалентную (10,2+0,4; 9,4+0,5 и 8,9+0,2 лог2, соответственно).

Через 42 суток после прививки степень патологических изменений тканей в месте инъекции вакцин голландского и израильского производства была лёгкой, а после применения французского и отечественных препаратов поражения тканей были средними. В этих случаях при незначительной воспалительной реакции тканей, проявлявшейся только их побледнением или гиперемией, отмечалось присутствие нерассосавшейся эмульсии, лежащей в виде мелких капель и в инкапсулированном виде вдоль мышечных фасций. Общее физиологическое состояние птиц после применения всех вакцин оставалось без видимых изменений в течение всего периода наблюдений.

Проявление местных тканевых реакций на внутримышечное введение вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76, приготовленной на основе адъювантов ВНИИЗЖ, Монтанид ИЗА-70 и Монтанид ИЗА-206, было изучено в сравнительном аспекте. Через 30, 60, 90 и 120 суток после вакцинации производили убой птиц и оценивали визуально места инъекции препарата. Установлено, что при использовании адъюванта Монтанид ИЗА-206 местные реакции тканей были минимальными на протяжении всего периода наблюдений. Не отмечено патологических изменений тканей в случае использования адъюванта Монтанид ИЗА-70, однако в месте инъекции обнаруживали остатки эмульсии в виде мелких капель. С увеличением сроков после иммунизации птиц происходило рассасывание эмульсии и через 120 суток следы вакцины обнаружены только у 30 % привитых кур.

При использовании адъюванта ВНИИЗЖ в течение 120-суточного поствакцинального периода отмечалось присутствие в тканях инкапсулированной вакцины в виде выраженных олеогранулём.

Поствакцинальных реакций общего характера не наблюдали ни в одной из опытных групп, все птицы выглядели клинически здоровыми.

Сравнительные испытания антигенной активности двух опытных образцов препарата, приготовленных на основе адъювантов ВНИИЗЖ и Монтанид ИЗА-70 показали, что существенных различий между образцами вакцин в величине иммунного ответа привитой птицы по отношению ко всем вирусным антигенам не было на протяжении 6 мес. исследований. Образцы вакцин, приготовленные на основе обоих адъювантов, имели высокую антигенную активность. Средние титры антител ко всем возбудителям в сыворотках крови привитых птиц значительно превышали протективные уровни и титры антител в контрольной группе птиц.

Сравнительные испытания вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76, изготовленной на основе адъювантов Монтанид ИЗА -70 и Монтанид ИЗА -206, показали неоспоримое преимущество-адъюванта Монтанид ИЗА -70 по сравнению с адъювантом Монтанид ИЗА-206* как неспецифического стимулятора иммуногенеза в составе вакцины с данной комбинацией антигенов. Близкие значения средних титров антител к вирусу НБ были получены только на 14 сутки, к вирусу ССЯ-76 - на 14 и 28 сутки, а к вирусу ИБК - до 3 месяцев после вакцинации. Позже указанных сроков уровень антител ко всем вакцинным антигенам в случае использования адъюванта Монтанид ИЗА -70 был заметно выше и через 6 месяцев после вакцинации средние титры составили: 9,2+0,2 лог2 к вирусу НБ, 10,2+0,1 лог2 к вирусу ССЯ-76 и 1:12300+600 к вирусу ИБК, что соответственно на 1,7 лог2, 3,7 лог2 и вдвое превысило аналогичные показатели, полученные при использовании адъюванта Монтанид ИЗА-206 в составе вакцины.

Поскольку применение адъюванта Монтанид ИЗА -70 в составе эмульгированных вакцин ВНИИЗЖ позволило в значительной степени уменьшить проблему местных тканевых реакций и в связи с началом широкого использования этого адъюванта при изготовлениии коммерческих препаратов, были проведены исследования по сравнению эффективности ассоциированной вакцины ВНИИЗЖ и серийных вакцин против НБ, ИБК и ССЯ-76 фирм "Sanofi" (Франция) и "Intervet" (Голландия).

Результаты исследований показали, что иммунный ответ птиц на вирусные антигены не имел значительных различий между группами птиц, привитыми разными вакцинами. Более выраженным был иммунный ответ на антиген вируса ССЯ-76 в составе вакцины ВНИИЗЖ: через 3 месяца после прививки титр антител был на 2 лог2 выше, чем после применения зарубежных вакцин. Степень

проявления местных патологических изменений тканей была лёгкой после применения всех препаратов.

Изучение сроков формирования у привитых птиц иммунитета к ССЯ-76 после применения moho-, би- и трёхвалентной вакцин производства ВНИИЗЖ, приготовленных на основе адъюванта Монтанид ИЗА-70, показало, что через 4, 7, 14, 21 и 30 суток после иммунизации по динамике антителообразования у птиц все препараты дали примерно одинаковые результаты. Максимальная разница между показателями иммунного ответа на трёхвалентную и бивалентную вакцины (2 лог2) была отмечена через 3 недели после вакцинации. Через 14 суток уровень антител к вирусу ССЯ-76, достаточный для защиты от заболевания, был достигнут во всех группах привитых птиц: 8,8+0,3, 9,8+0,3 и 9,6+0,2 лог2, соответственно после применения моно-, би- и трёхвалентной вакцин.

2.2.2. Изучение сроков наступления у птицы иммунитета к НБ, ИБК и

ССЯ-76 в зависимости от дозы вакцины

Обычно при иммунизации птицы инактивированными эмульгированными вакцинами доза препарата составляет 0,5 мл. Уменьшение дозы снижает риск проявления патологических изменений тканей в месте инъекции вакцины, но в то же время ведёт к уменьшению количества антигенов, поступающих в организм птицы. Целью исследований было определить, насколько снижается иммунный ответ птицы на вакцину ассоциированную против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированную эмульгированную и, соответственно, как изменяются сроки наступления иммунитета к заболеваниям при уменьшении дозы препарата до 0,3 мл.

При исследовании сывороток крови, отбиравшейся с интервалом 3-4 суток до 42 суток после вакцинации, установлено, что на протяжении опыта средние титры антител к вирусу НБ при дозе 0,5 мл были выше на 0,2-0,6 лог2, а к вирусу ССЯ-76 - выше на 0,4-1,3 лог2, чем при дозе 0,3 мл. Средние титры антител к вирусу ИБК в ИФА при дозе 0,5 мл были выше в 1,2-1,4 раза, чем при дозе 0,3 мл.

Максимальные уровни антител регистрировали к вирусу НБ с 18 по 35 сутки после вакцинации (11,5-12,0 лог2 при дозе 0,3 мл и 11,9-12,4 лог2 при дозе 0,5 мл), к вирусу ССЯ-76 - с 38 по 42 сутки (9,5 - 9,7 лог2 при дозе 0,3 мл и 10,210,7 лог2 при дозе 0,5 мл), к вирусу ИБК - на 21-24 день (1:12500 при дозе 0,3 мл и 1:15300 при дозе 0,5 мл).

Протективный уровень антител к вирусу ССЯ-76 (5 лог2) был достигнут в обоих случаях на 10 сутки после вакцинации (5,8+0,3 лог2при дозе 0,3 мл и 6,2+0,6 лог2 при дозе 0,5 мл).

Также, к 10 суткам после иммунизации, титры антител к вирусу ИБК превысили ориентировочный защитный порог 1:5000 и составляли 1:6500+1100 при дозе 0,3 мл и 1:9000+1200 при дозе 0,5 мл.

Уровень антигемагглютининов, коррелирующий с устойчивостью к НБ, птица уже имела до вакцинации - 6,4 лог2. Максимальный прирост титров антител к вирусу НБ через 18-35 суток после вакцинации составлял 5,1-5,6 лог2 при введении препарата в дозе 0,3 мл и 5,5-6,0 лог2 при дозе 0,5 мл.

Сравнительное изучение продолжительности и динамики поствакцинального иммунитета на протяжении 8 месяцев после применения в дозах 0,3 и 0,5 мл двух вакцин производства ВНИИЗЖ, трёхвалентной против НБ, ИБК и ССЯ-76, и бивалентной против ССЯ-76 и ИБК представлено в табл. 2, из которой видно, что при дозе 0,5 мл иммунный ответ привитых птиц на антиген вируса ССЯ-76 в составе трёхвалентной и бивалентной вакцин различался незначительно на всём протяжении опыта. Максимальные титры антител регистрировали через 2-3 месяца после вакцинации обоими препаратами -10,0-10,2 лог2.

Не отмечено существенных различий в поствакцинальных титрах антитег к вирусу ИБК, их величины после применения трёхвалентной и бивалентное вакцин на протяжении опыта колебались незначительно.

Также незначительной была разница в величине иммунного ответа на вирусные антигены трёхвалентной и бивалентной вакцин при дозе 0,3 мл.

Средние титры антител к вирусу ССЯ-76 после применения бивалентной вакцины в течение первых четырёх месяцев после иммунизации птицы постоянно были выше на 0,3-1,6 лог2, а затем постепенно снижались.

Таблица 2

Сравнение поствакцинального иммунитета у птиц, привитых трёхвалентной и двухвалентной вакцинами в разных дозах

Вакцина Доза, мл Антиген Титры антител*

До вакц. после вакцинации

14 дн. 28 дн. 60 ДН. 90 ДН. 120 дн. 150 дн. 180 ДН. 210 ДН. 240 ДН.

НБ+ИБК+ ССЯ-76 0,3 НБ 6,9±0,3 10,2±0,3 10,8±0,2 11,3±0,4 9,8±0,2 9,6±0,1 9,0±0,3 9,2±0,2 9,4±0,2 9,0±0,2

ИБК 3,6±0,3 10,0±1,5 18,4±2,2 19,3±1,9 12,2±1,6 18,8±2,1 18,4±3,0 15,5±2,4 14,3±1,7 13,0±1,9

ССЯ-76 н.о. 7,5±0,4 7,6±0,3 7,8±0,2 8,2±0,2 7,4±0,2 7,4±0,3 * 7,8±0,2 7,4±0,3 7,8±0,2

0,5 НБ 6,9±0,3 9,3±0,2 9,8±0,2 9,4±0,1 9,0±0,2 8,0±0,3 7,3±0,3 7,8±0,2 8,0±0,2 7,3±0,2

ИБК 3,6±0,3 11,2±1,7 18,7±2,2 18,8±2,3 16,2±1,5 14,4±1,9 19,1±о,а 15,3±1,2 16,4±0,9 16,2±0,8

ССЯ-76 н.о. 9,5±0,3 9,8±0,1 9,4±0,2 10,0±0,2 9,0±0,1 8,8±0,2 7,8±0,2 7,8±0,1 7,3±0,2

ИБК+ ССЯ-76 0,3 ИБК 3,6±0,3 15,3±0,9 17,2±1,2 18,2±1,3 14,8±1,5 20,7±0,8 20,8±0,9 18,7±1,0 16,3±1,3 13,4±1,9

ССЯ-76 н.о. 8,6±0,2 9,3±0,1 9,5±0,1 8,5±0,1 8,0±0,1 7,5±0,2 7,5±0,2 7,3±0,2 7,0±0,2

0,5 ИБК 3,6±0,3 7,2±1,1 16,9±0,9 20,5±0,5 17,5±0,6 20,3±0,5 21,4±0,4 16,5±0,8 17,9±1,2 14,5±1,4

ССЯ-76 н.о. 8,6±0,3 8,8±0,2 10,2±0,3 9,4±0,1 9,0±0,1 8,4±0,2 8,4±0,2 8,6±0,2 7,8±0,2

•Примечание: средние титры антител в РТГА выражены через лог2, а в ИФА - средний титр хЮОО; и.о.- не обнаружено.

Средние титры антител к вирусу ИБК при применении обеих вакцин были примерно одинаковыми, однако небольшая разница в пользу бивалентной вакцины (в 1,1-1,2 раза) сохранялась более постоянно.

При сравнении напряжённости и продолжительности поствакцинального иммунитета к заболеваниям, создаваемого каждой из вакцин в зависимости от дозы, было установлено, что после применения вакцин в дозе 0,5 мл средние титры антител к вирусу ССЯ-76 были на 1,5-2,2 лог2 выше в первые пять месяцев после иммунизации птицы трёхвалентной вакциной и на 0,7-1,3 лог2 выше в течение почти всего поствакцинального периода при использовании бивалентной вакцины по сравнению с дозой 0,3 мл.

В динамике средних титров антител к вирусу ИБК также наблюдали тенденцию к более высоким их значениям при дозе 0,5 мл для обеих вакцин, но превышение в уровнях антител по сравнению с дозой 0,3 мл было не более, чем в 1,1-1,3 раза.

В случае использования трёхвалентной вакцины иммунный ответ на антиген вируса НБ был более выражен при дозе 0,3 мл, средние титры антител к вирусу НБ постоянно были выше на 0,8-1,9 лог2, чем при дозе 0,5 мл.

Протективные уровни антител к возбудителям ИБК и ССЯ-76 удерживались в течение 8 месяцев после иммунизации птиц обеими вакцинами в дозах 0,3 и 0,5 мл. Напряжённый и продолжительный иммунитет к НБ сохранялся после применения трёхвалентной вакцины в обеих дозах.

Полученные результаты показали, что концентрация антигенов в вакцине была настолько высока, что при обеих дозах препарат обеспечивал выработку антител у птиц в протективных титрах и сроки наступления иммунитета в обоих случаях совпадали.

2.2.3. Изучение напряжённости и продолжительности поствакцинального иммунитета у кур родительских стад мясных и яичных кроссов и динамики угасания трансовариального иммунитета у потомства, полученного от привитой птицы

[ На птицефабриках яичного и мясного направлений поголовье кур иммунизировали внутримышечно в область груди вакциной ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной в дозе 0,5 мл.

Перед иммунизацией титры антител к возбудителям заболеваний составляли к вирусу НБ у мясной птицы в ИФА - 1:3900+300, в РТГА - 4,5+0,4, лог2, у яичной птицы в ИФА - 1:6600+450, в РТГА - 7,5+0,3 лог2; к вирусу ИБК у мясной птицы в ИФА - 1:2500+240 и у яичной - 1:5800+380; к вирусу ССЯ-76 у мясной птицы в ИФА - 1:150+70, в РТГА - 1,4+0,7 лог2, а у яичной в ИФА - 1:100+35, и в РТГА - 0,6 +0,3лог2. После вакцинации титры антител у взрослой птицы значительно возрастали в первые месяцы, а затем постепенно снижались.

Исследованиями установлено, что максимальная концентрация антител к возбудителям всех трех заболеваний наблюдалась в период с 1-го по 4-ый месяц после вакцинации. В течение этого времени антитела к вирусу НБ обнаруживали у мясной птицы в ИФА в титре 1:11300+640 и в РТГА - 8,2+0,4 лог2 , а у яичной птицы - 1:28700+2400 и 11,4+0,3 лог2, соответственно. Антитела к вирусу ИБК в ИФА выявляли у мясной птицы в титре 1:13200+1700, а у яичной -1:22000+2600. Антитела к вирусу ССЯ-76 регистрировали у мясной птицы в титре 1:13100+2100 в ИФА и 10,5+0,4 лог2 в РТГА, а у яичной птицы - 1:26000+2900 в ИФА и 12,0+0,3 лог2 в РТГА.

С 4-го по 8-10-й мес. отмечено постепенное снижение титров антител до следующих значений: к вирусу НБ у мясной птицы в ИФА - 1:3900+600 и в РТГА - 5,4 +0,4лог2, у яичной птицы в ИФА - 1:6000+700, в РТГА - 9,4+0,2 лог2; к вирусу ИБК у мясной птицы в ИФА - 1:8600+1500, а у яичной - 1:16000+2200; к вирусу ССЯ-76 у мясной птицы - 1:8500+900 в ИФА и 9,5+0,2 лог2 в РТГА и у яичной птицы в ИФА -1:8000+900, а в РТГА - 8,8+0,2 лог2.

При этом у птицы мясного кросса количество проб сывороток с титром антител к вирусу НБ в ИФА выше 1:1800 составило 80%, а в РТГА с титром более 4 лог2 - 92% от числа исследованных. У яичной птицы 92% проб сывороток содержали антитела к вирусу НБ в титрах выше 1:3000 в ИФА и 6 лог2 в РТГА. Антитела к вирусу ИБК в титрах > 1:5000 в ИФА обнаруживали в 80% исследованных проб сывороток от кур мясной породы и в 100% - от яичной. Антитела к вирусу ССЯ-76 в титрах выше 1:800 в ИФА и не ниже 6 лог2 в РТГА обнаруживали в 92% исследованных проб сывороток от мясной и яичной птицы. Этот факт свидетельствует об однородности поствакцинального иммунитета.

В динамике концентрации антител постоянно выявлялась тенденция к более высоким титрам у птицы яичного кросса "Родонит" по сравнению с мясной.

Титры антител у кур яичного кросса были выше в ИФА, в среднем, в 1,7 раза к вирусам ИБК и ССЯ-76 и в 2,5 раза к вирусу НБ; в РТГА, в среднем, на 3,2 лог2 к вирусу НБ и на 1,3 лог2 к вирусу ССЯ-76.

При определении уровней титров трансовариальных антител к вирусам НБ, ИБК и ССЯ-76 в сыворотках крови цыплят, полученных от вакцинированных кур, установлено, что они находились в зависимости от титров антител у взрослых кур и возраста родителей. Максимальная продолжительность циркуляции антител наблюдалась в сыворотках крови цыплят, полученных через 2-4 месяца после вакцинации родителей. В этот период цыплята обоих кроссов были защищены материнскими антителами против НБ до 20-суточного возраста, что подтверждается результатами РТГА. По результатам ИФА продолжительность иммунитета к НБ составила у бройлеров 10 суток, у цыплят яичной породы - 20 суток, а к ИБК -10 и 15суток, соответственно. Продолжительность иммунитета к ССЯ-76 по данным РТГА составила у бройлеров 15 суток, у цыплят яичной породы - 20 суток, а по результатам ИФА на 5 суток меньше для цыплят обоих кроссов.

При исследовании сывороток крови цыплят, полученных от кур родительских стад через 5-10 месяцев после применения ассоциированной вакцины, отмечали следующую продолжительность пассивного иммунитета у цыплят: к НБ у цыплят-бройлеров -10 суток по данным РТГА и 5 суток по данным ИФА, у цыплят яичного направления - 20 суток по данным РТГА и 20 суток по данным ИФА; к ИБК в ИФА у цыплят-бройлеров - 5 суток, а у цыплят кросса "Родонит" -10 суток и к ССЯ-76 у бройлеров - 5 суток по данным РТГА - и 5 суток по данным ИФА, а у цыплят яичного кросса -15 суток по данным РТГА и 5 суток по данным ИФА. Характерным было, как и у родительской птицы, отставание в уровне антител у мясной породы по сравнению с яичной.

По результатам проведенных исследований можно заключить, что однократная иммунизация птицы вакциной ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной обеспечивала выработку антител у поголовья в титрах, достаточных для защиты от всех трех заболеваний. Протектив-ные уровни антител при этом были превышены более, чем в 2 раза.

Минимальные сроки сохранения материнских антител в защитных титрах к вирусу НБ, наблюдавшиеся в период времени, отдалённый от вакцинации родителей, составили не менее 10 суток у мясных цыплят и не менее 20 суток у цыплят яичной породы.

2.2.4. Напряжённость поствакцинального иммунитета в зависимости от фонового иммунитета перед вакцинацией

Индивидуальные сыворотки крови были получены перед иммунизацией птиц вакциной асоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной и через 21 сутки после неё и исследованы одновременно на определение специфических антител к вирусам НБ в РТГА и ИБК в ИФА.

Исследованиями установлено, что чем выше фоновый иммунитет к НБ и ИБК, тем выше иммунный ответ на вакцину через 3 недели после введения. Вакцина обеспечила выработку антител в среднем титре 10,3+0,4 лог2 даже у птиц с низкой напряжённостью иммунитета к НБ перед иммунизацией, имевших антитела к вирусу НБ в титре 2 лог2. Увеличилась однородность иммунитета после вакцинации: так, если фоновый разброс титров антител к вирусу НБ был от 2 до 6 лог2 и к вирусу ИБК - от 1:1500 до 1:9600, то после вакцинации колебания этих показателей составили ог 9 до 12 лог2 для НБ и от 1:3600 до 1:13400 для ИБК.

В пробах сывороток с низким содержанием антител к вирусам НБ и ИБК прирост антител был более выражен, чем в пробах с более высокой их концентрацией. Уровень антител к вирусу НБ увеличился в среднем на 8,3 лог2 по сравнению с предвакцинальным уровнем 2 лог2, с уровня 3 лог2 вырос на 8,2 лог2, с 4 лог2 - на 7,3 лог2, с 5 лог2 - на 6,5 лог2. Уровень антител к вирусу ИБК у цыплят с фоновыми титрами антител от 1:1500 до 1:4000 вырос в среднем в 2,6 раза, в группе с титрами от 1:4000 до 1:6000 - в 1,7 раза, а в группе с титрами выше 1:6000- в 1,4 раза.

Результаты, полученные в этом опыте, показали, что протективные уровни антител к вирусам НБ и ИБК были достигнуты и заметно превышены через 21 сутки после вакцинации при всех показателях фонового иммунитета.

2.2.5. Антигенные свойства вакцины и сохранение стабильности эмульсии в зависимости от условий и продолжительности ее хранения перед применением

Хранение образцов 5 серий вакцины, изготовленных на основе адъюванта Монтанид ИЗА-70, в течение 7 месяцев при температуре 4-ИЗ°С существенно не повлияло на специфическую активность препарата по компонентам ИБК и ССЯ-76 и незначительно снизило по валентности НБ. Индекс сероконверсии свежеприготовленной вакцины по компоненту НБ был равен 21,6, а через 7 месяцев составил 17,0 (нормативный показатель - более 4). В процессе проверки некоторых серий вакцины антигенная активность по компонентам ИБК и ССЯ-76 при тестировании на курах была., несколько выше в случае применения препарата, хранившегося в течение 6 месяцев по сравнению со свежеприготовленным. Следовательно, данный интервал температур не оказывает выраженного отрицательного воздействия на антигены, входящие в состав вакцины, и может быть рекомендован для хранения.

Для моделирования ситуаций, которые могут возникнуть при доставке вакцины в отдалённые регионы страны, были проведены исследования, позволяющие установить влияние температурных факторов на иммунобиологические свойства препарата. Иммунный ответ птиц на все вакцинные антигены не имел значительных отличий на протяжении 3 месяцев (срок наблюдения) в случае использования для иммунизации птиц вакцины, промороженной в течение одних суток при температуре минус 20°С, прогретой при температуре 37°С в течение того же времени и хранившейся при температуре 4°*6°С. Увеличение экспозиции прогревания вакцины при температуре 56°С и выше приводило к постепенному снижению иммунного ответа птиц на все вакцинные антигены. Наиболее значительное уменьшение антигенной активности препарата наблюдали после прогревания при температуре 70°С. Особенно заметно это проявлялось в отношение антигена вируса ССЯ-76. Прогревание в течение 1 часа и более повлекло за собой практически полное отсутствие иммунного ответа у птиц через 2 недели после прививки и его снижение на 5 лог2 через 4 недели после иммунизации по сравнению с группой птиц, привитых вакциной, хранившейся при температуре 4°*6°С.

Тенденция к снижению антигенной активности вакцины с увеличением температуры и продолжительности её воздействия установлена также в отношение компонентов НБ и ИБК, но уменьшение иммунного ответа птиц было несколько менее выраженным по сравнению с компонентом ССЯ-76. Стабильность эмульсии была сохранена после длительного хранения (7 мес.) при температуре 4°+6°С, промораживании при температуре минус 20°С, прогревании при температуре 37°С и 56°С в течение одних суток и при температуре 70°С в течение 6 часов.

2.2.6. Иммунный ответ на вакцину у привитой птицы и проявление местных тканевых реакций при разных путях введения

Группы птиц были привиты вакциной ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76, изготовленной на основе адъюванта Монтанид ИЗА-70, в дозе 0,5 мл следующим образом: внутримышечно в область груди, бедра и крыла; подкожно в область средней трети шеи, паха и в копчик. Пробы крови для получения сывороток отбирали до вакцинации и после неё с интервалом 7 суток до 42 суток.

Результаты серологических исследований показали, что существенных различий в формировании у птиц поствакцинального иммунитета к НБ, ИБК и ССЯ-76 при разных путях введения вакцины не наблюдалось, что согласуется с данными, полученными другими исследователями (J. Glisson, 1990,1998; А. Ми-talib, С. Boil, 1994; J. Sander, 1997; Н. Stone et af., 1980). Через 6 недель после вакцинации средние титры антител к вирусу НБ составляли от 10,1+0,4 лог2 при подкожном введении в область шеи до 11,7+0,3 лог2 при инъекции в копчик, а к вирусу ССЯ-76 от 10,7+0,2 лог2 при внутримышечном введении в область груди или крыла до 11,6+0,5 лог2 при инъекции в область бедра. Титры антител к вирусу ИБК определяли в ИФА от 1:11900+2700 при внутримышечном введении в область бедра до 1:20000+1900 при инъекции в копчик. Через 3-4 недели после вакцинации максимальную величину титров антител к вирусу ИБК отмечали также при введении вакцины в копчик (1:17500+2100), а минимальную - при введении в область шеи (1:12200+1200). В динамике накопления антител ко всем вакцинным антигенам с 1 по 3 неделю после иммунизации наблюдалось некоторое опережение в сроках формирования поствакцинального иммунитета при инъекции препарата в копчик.

После убоя птиц через 42 суток после прививки какие-либо визуальные патологические изменения тканей в месте инъекции вакцины отсутствовали. Следы эмульсии в виде мелких капель диаметром 1-2 мм, находившихся вдоль мышечных фасций, обнаруживали у 20-30% птиц, привитых внутримышечно в область груди, бедра и крыла и подкожно в область паха. Степень поствакцинальных местных реакций была оценена в этих случаях, как лёгкая. Чаще остатки вакцины находили у птиц, привитых в мышцы крыла. Этот факт согласуется с сообщениями A. Mutalib et С. Boil, 1994 и J. Sander, 1997.

Таким образом, наиболее оптимальными путями введения вакцины, при которых эмульсия полностью рассасывалась в течение 42 суток, оказались инъецирование препарата подкожно в область шеи и в копчик. Последний метод получил положительную оценку в сообщениях J. 6lisson, 1998 и J. Sander, 1997 и был предложен ими, как альтернативный, в связи с незначительными проявлениями тканевых реакций и меньшими потерями при обработке тушек птицы в случае развития воспалительного процесса в месте введения вакцины. Также подтверждена умеренная реактогенность адъюванта Монтанид ИЗА-70, о перспективности применения которого в качестве неспецифического стимулятора иммуногенеза сообщали М. Yamanaka et al., 1993.

2.2.7.Разработка вариантов оптимальных схем иммунопрофилактики НБ, ИБК и ССЯ-76, включающих применение ассоциированной эмульгированной вакцины.

При проведении эпизоотологических обследований птицефабрик и анализе результатов серомониторинга особую актуальность приобрёл вопрос о своевременном применении вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной. Определяющим фактором в выборе сроков иммунизации является профилактика ССЯ-76. Многие авторы научных публикаций подчёркивают, что вакцинация против этого заболевания должна быть проведена не позднее, чем за один месяц до начала яйцекладки, чтобы птицепого-ловье, как единое целое, имело иммунитет к ССЯ-76 (Б.Ф. Бессарабов, 1996; И.К. Рождественский, 1998; W. Baxendale, 1980).

В течение 1999-2000 г.г. имело место проявление ССЯ-76 на некоторых птицефабриках в тех случаях, когда вакцинация была проведена с опозданием и на момент иммунизации птица уже начала яйцекладку.

Попытки прекратить специфическую профилактику ССЯ-76 могут привести к вспышкам заболевания с серьёзными экономическими потерями, что имело место в 1999 г. на птицефабрике "Отрадненская" Ульяновской области.

Эффективность вакцинации птицы против НБ и ИБК инактивированными препаратами связана с предыдущим применением живых вакцин. В случае неэффективного праймирования птиц живыми вакцинами не создаётся предпосылок для получения более выраженного иммунного ответа на инактивированные вакцины и возникает угроза переболевания птиц ещё до применения последних.

В отношение ньюкаслской болезни мероприятия по контролю регламентированы Ветеринарным законодательством и методическими указаниями по определению уровня антител к вирусу НБ в РТГА и обязательным для любых схем является строгое выполнение мероприятий, предписанных этими документами.

В отношение ИБК наиболее надёжна схема, включающая до применения лнактивированной вакцины 3-4 прививки птиц живой вакциной из штамма Н-120 ; интервалом от 2 до 4 недель, начиная с суточного возраста. В связи с появлением вариантных штаммов вируса ИБК в некоторых случаях требуется дополнительное применение живой вакцины из штамма Н-120 с интервалом 6-8 недель юсле применения инактивированной вакцины во время всего продуктивного дикла с целью постоянного стимулирования местного иммунитета в респиратор-юм тракте, являющимся воротами инфекции, и для обеспечения перекрёстной 1ащиты от вариантных штаммов.

ВЫВОДЫ

1. Экспериментально установлено, что вакцина ассоциированная против ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения яйценоскости - 76 инактивированная эмульгированная производства ВНИИЗЖ не уступает по эффективности зарубежным аналогам, моно- и бивалентными вакцинам.

2. Показано, что вакцина ассоциированная против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированная эмульгированная вызывала формирование у однократно привитой птицы напряжённого и продолжительного иммунитета ко всем профилакти-руемым заболеваниям.

3. Экспериментально показано, что после введения вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной в дозах 0,3 и 0,5 мл иммунитет наступает на 10 сутки после иммунизации и при этом обеспечивается его однородность.

4. Установлено, что после применения вакцины ассоциированной протиЕ НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной местные тканевые реакции слабее выражены в случае использования вакцин на основе масляногс адъюванта Монтанид ИЗА-70, чем при применении вакцин с адъювантом ВНИИЗЖ, иммунный ответ привитой птицы при этом различается незначительно. Вакцины с масляным адъювантом Монтанид ИЗА-206 обладают умеренной реактогенностью, но значительно уступают по степени неспецифической стимуляции иммуногенеза вакцинам с адъювантом Монтанид ИЗА-70 и ВНИИЗЖ.

5. Патологоанатомическими исследованиями установлено, что инъекцм вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной на основе адъюванта Монтанид ИЗА-70 подкожно в область шеи и е копчик не вызывают поствакцинальных местных реакций и через 6 недель после прививки эмульсия полностью рассасывается. Внутримышечное применение вакцины не приводит к патологическим изменениям тканей, но эмульсия у 20 30% поголовья сохраняется в месте инъекции более 6 недель (срок наблюде ния).

6. В экспериментах у .ановлено, что различные парентеральные пути ведения вакцины ассоцк данной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивирован-эй эмульгированной не влияют на величину и сроки наступления иммунного гвета у птицы.

7. Установлено, что вакцина ассоциированная против НБ, ИБК и ССЯ-76 ^активированная эмульгированная не теряет исходные иммуногенные зойства при транспортировке и хранении при температуре 4+6°С в течение месяцев (срок наблюдения), замораживании при температуре минус 20°С в

эчение суток и прогревании при температуре 37°С в течение суток. При этом эхраняются антигенная активность вакцины и стабильность эмульсии.

8. Показано, что напряжённость и продолжительность поствакцинального ммунитета после применения вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и СЯ-76 инактивированной эмульгированной у кур мясного направления есколько ниже, чем у кур яичных пород.

9. Определены минимальные сроки защиты потомства привитых одителей материнскими антителами от ньюкаслской болезни, которые оставляют у цыплят-бройлеров 10 суток, а у цыплят яичной породы -20 суток.

10. Установлено, что для защиты кур-несушек от ССЯ-76 необходимо воевременно проводить вакцинацию поголовья, не позднее, чем за один месяц о начала яйцекладки.

11. Применение инактивированной вакцины против ИБК и НБ является оставной частью схемы специфической профилактики этих заболеваний и бязательно требуется предварительная вакцинация живыми вакцинами.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты научных исследований были использованы и вошли в еле дующие нормативно-технические документы, которые внедрены в ветеринарнук практику:

1. Промышленный регламент на производство вакцины ассоциированное против ныокаслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдром; снижения яйценоскости-76 инактивированной эмульгированной, утвер жден директором ВНИИЗЖ 06.07.2000 г.

2. Технические условия (ТУ 9383-029-00495527-00) на вакцину ассоцииро ванную против ныокаслской болезни, инфекционного бронхита кур I синдрома снижения яйценоскости-76 инактивированную эмульгирован ную. Рекомендованы к регистрации в Российской Федерации без огра ничения срока действия на заседании Совета по ветеринарным препа ратам Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйств; Российской Федерации 03.10.2000 г.

3. Наставление по применению вакцины ассоциированной против нью каслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижена яйценоскости-76 инактивированной эмульгированной. Рекомендовано ! регистрации в Российской Федерации без ограничения срока действи! на заседании Совета по ветеринарным препаратам Департамента ве теринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федераци! 03.10. 2000 г.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Ирза В.Н., Борисов В.В., Борисов A.B., Старое С.К., Борисова O.A., >жаева Г.И., Волкова М.А. Иммунный ответ и местные тканевые реакции у кур и разных способах введения инактивированной ассоциированной вакцины отив ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения ценоскости-76 // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо асными, экзотическими и зооантропонозными болезнями ж-ных: Сборник атей науч.-практ. конф. - Покров, 2000. - С. 110-113. Борисов В.В., Борисов A.B., Старое С.К., Дрыгин В.В., Федотов A.A., >за B.W. Використания живих та ¡накгивированих вакцин для профтактики >усних хвороб птиц|// Вет. мед. Укражи,- 1999. - №1. - С.10-11. Борисов В.В., Борисова O.A., Борисов A.B., Хлыбова Т.В., Фролов C.B., >за В.Н., Горелов C.B., Волкова М.А. Сравнительное изучение двух сляных адъювантов в составе инактивированных вакцин против фекционного бронхита кур и синдрома снижения яйценоскости-76 // Минск, 00. - С. 68-69.

Ирза В.Н., Борисов В.В., Борисов A.B., Старое С.К., Борисова O.A., рлова Н.П., Кожаева Г.И., Мудрак Н.С. Изучение поствакцинального мунитета у кур, привитых инактивированной ассоциированной вакциной этив ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения 4еноскости-76// Ветеринария - в печати.

Ирза В.Н., Борисов В.В., Борисов A.B., Старое С.К. О применении активированной ассоциированной вакцины против ньюкаслской болезни, Секционного бронхита кур и синдрома снижения яйценоскости -76 на основе сляного адъюванта // Птицеводство - в печати.

Ирза В.Н., Борисов В.В., Борисов A.B., Старое С.К. Влияние лпературных условий хранения на антигенные свойства инактивированной ;оциированной вакцины с масляным адъювантом против ньюкаслской 1езни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения яйценоскости-76 // <ив вет. наук - в печати.

тпечатано на полиграфической базе отдела координации научных исследований, информации и международных связей ФГУ ВНИИЗЖ.

ix 100 экз.

Актуальность темы. За последние годы в отечественном птицеводстве произошли существенные изменения. После серьезного спада объемов производства в отрасли и закрытия многих птицефабрик, в настоящее время прослеживается тенденция к экономическому росту за счет повышения качественных показателей. Использование высокопродуктивных зарубежных кроссов яичной и мясной птицы , внедрение современных технологий кормления и содержания позволили значительно повысить продуктивность поголовья. Вместе с тем, импорт племенной продукции повлек за собой осложнение эпизоотической ситуации в стране по инфекционным заболеваниям птицы в связи с возможностью заноса возбудителей этих заболеваний. Возросла опасность возникновения и быстрого распространения таких инфекционных болезней птиц, как ньюкаслская болезнь, инфекционный бронхит кур, синдром снижения яйценоскости-76 и другие. Инфекционные болезни птиц регистрируются во многих странах мира и наносят значительный экономический ущерб птицеводству. Согласно данным, представленным в бюллетенях МЭБ, в течение последнего десятилетия наблюдался рост числа зарегистрированных вспышек ньюкаслской болезни в странах Европы, причём заболевание было зафиксировано и в странах, объявивших свои территории благополучными по НБ и не проводивших профилактическую вакцинацию. По количеству неблагополучных по НБ пунктов в России за этот период ситуация выглядит более стабильной и контролируемой. В европейских странах получили распространение вариантные штаммы вируса ИБК, в то время как в России превалируют штаммы, относящиеся к серотипу "Массачусетс". Зарубежное происхождение имеет заболевание синдром снижения яйценоскости-76, появившееся в РФ после завоза птицы из Голландии. Очевидно, что в начале 90-х годов появлению высоковирулентных штаммов вируса инфекционной бурсальной болезни на территории России и СНГ могла способствовать система бесконтрольного комплектования племенных птицеводческих хозяйств молодняком, закуплен6 ным у зарубежных фирм. В зарубежном птицеводстве профилактируются заболевания, которые ещё не зарегистрированы в РФ. К их числу относятся инфекционная анемия, инфекционный энцефаломиелит, ринотрахеит индеек и другие.

Для борьбы с инфекционными болезнями птиц наряду с эффективными ветеринарно-санитарными мероприятиями широко проводится стратегия комплексной вакцинопрофилактики с использованием инактивированных препаратов. Импорт племенной птицеводческой продукции повлёк за собой применение биопрепаратов зарубежного производства и заимствование схем иммунизации птицы у ведущих фирм-производителей вакцин. Неотъемлемой частью этих схем является использование ассоциированных инактивированных эмульсионных вакцин для прививок поголовья будущих кур-несушек промышленных и племенных стад. Отечественная биологическая промышленность ранее не производила препаратов такого рода для птицеводства и поэтому работа над их созданием и изучением иммуногенных свойств приобрела актуальность.

Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных, наряду с другими российскими производителями биопрепаратов, проводил активную работу по созданию эмульсионных вакцин для профилактики инфекционных болезней птицы, и в 1997 году была получена вакцина против НБ,ИБК и ССЯ-76, которая была предложена птицеводческим предприятиям для широких производственных испытаний.

Главной качественной характеристикой вакцин является высокая антигенная активность при максимально низкой реактогенности. Поиск оптимального баланса между этими показателями определяет цели работы по совершенствованию препаратов всеми фирмами-изготовителями вакцин.

На формирование поствакцинального иммунитета и проявление местных тканевых реакций, кроме компонентного состава вакцины, может влиять ряд факторов, связанных с путями введения и дозировкой вакцины, условиями и продолжительностью её хранения, состоянием прививаемого поголовья. Данные вопросы ещё недостаточно изучены, поэтому проведение исследова7 ний по изучению иммунобиологических свойств вакцины, направленных на совершенствование препарата и методов его применения, было целесообразным.

Цель работы: Главной целью исследований было изучение иммунобиологических свойств вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной и разработка рекомендаций по её эффективному применению в птицеводстве.

Основные задачи исследований:

- сравнить эффективность вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной с зарубежными аналогами, а также с моновалентными и бивалентными эмульгированными препаратами;

- определить сроки наступления и продолжительность иммунитета у привитой птицы в зависимости от вводимой дозы вакцины;

- изучить в сравнительном аспекте поствакцинальный иммунитет у кур родительских стад яичного и мясного кроссов и динамику угасания трансовариаль-ного иммунитета у потомства привитой птицы;

- проанализировать поствакцинальный иммунитет в зависимости от фонового иммунитета перед вакцинацией;

- изучить антигенные свойства вакцины и сохранение стабильности эмульсии в зависимости от температурных условий и продолжительности её хранения перед применением;

- изучить иммунный ответ на вакцину у привитой птицы и характер проявления тканевых реакций в месте инъекции при разных путях введения ;

- разработать оптимальные комплексные схемы иммунизации птицы против НБ, ИБК и ССЯ-76 на основе серомониторинга и анализа эпизоотической ситуации на птицефабриках.

Научная новизна. Впервые проведены широкие исследования иммунобиологических свойств вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной в лабораторных и производственных условиях. 8

Проведено сравнительное изучение эффективности препарата с зарубежными аналогами, моно- и бивалентными вакцинами, определены сроки наступления иммунитета и его продолжительность у привитой птицы в зависимости от вводимой дозы вакцины. Изучены напряжённость и продолжительность поствакцинального иммунитета у кур яичного и мясного направления и динамика угасания трансовариального иммунитета у цыплят, полученных от этой птицы. Изучен иммунный ответ привитой птицы на вакцинные антигены вирусов НБ и ИБК в зависимости от фонового иммунитета перед вакцинацией. Получены данные по влиянию температурных условий и сроков хранения на антигенные свойства вакцины и сохранение стабильности эмульсии. Определён характер проявления тканевых реакций в месте инъекции вакцины и проведено сравнительное изучение иммунного ответа птицы на вакцину в зависимости от путей введения и при использовании разных масляных адъювантов.

Практическая ценность. Подготовлен комплект нормативно-технической документации на вакцину ассоциированную против НБ, ИБК и ССЯ-76 инакти-вированную эмульгированную и утверждён промышленный регламент по её изготовлению. Проведены масштабные испытания вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной в лабораторных и производственных условиях. На основании серомониторинга и анализа эпизоотической ситуации на птицефабриках разработаны рекомендации по оптимальным сроками применения вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной в составе комплексных схем иммунизации птицы против данных заболеваний. Обоснованы температурные условия и сроки хранения вакцины перед использованием. Подобран адъювант для вакцины, обеспечивающий высокую антигенную активность при низкой реактогенности. Определена динамика угасания трансовариального иммунитета у потомства привитой птицы, что может быть учтено при выборе оптимальных сроков иммунизации цыплят. 9

Вопросы, выносимые на защиту:

- иммунобиологические свойства вакцины ассоциированной против нью-каслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения яй-ценоскости-76 инактивированной эмульгированной в экспериментальных и производственных условиях;

- сравнительное изучение эффективности препарата с зарубежными аналогами, моновалентными и бивалентными эмульгированными вакцинами;

- поствакцинальный и трансовариальный иммунитет у яичной и мясной птицы;

- схемы иммунопрофилактики НБ, ИБК и ССЯ-76 при применении ассоциированной инактивированной эмульгированной вакцины.

Апробация работы. Материалы исследований доложены и обсуждены в 2000 году на международной научно-практической конференции ветеринарных врачей птицеводства (г. Киев), международной научно-практической конференции "Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическим и зооантропонозными болезнями животных" (ВНИИВВиМ, г. Покров), совещании-семинаре главных технологов и главных ветврачей производственно-научной системы "Свердловск" (г.Санкт-Петербург), научно-практической конференции ветеринарных врачей птицефабрик центрального региона России (ВНИИЗЖ, г. Владимир).

Публикации .По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы и 3 научные работы приняты к печати.

Объём работы. Диссертация изложена на 150 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы и практические предложения, список литературы (246 источников, в том числе 197 иностранных) и дополнена 14 приложениями. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 3 рисунками.

4. ВЫВОДЫ

1. Экспериментально установлено, что вакцина ассоциированная против ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения яйценоскости-76 инактивированная эмульгированная производства ВНИИЗЖ не уступает по эффективности зарубежным аналогам, моно- и бивалентным вакцинам.

2. Показано, что вакцина ассоциированная против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированная эмульгированная вызывала формирование у однократно привитой птицы напряжённого и продолжительного иммунитета ко всем про-филактируемым заболеваниям.

3. Экспериментально показано, что после введения вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной в дозах 0,3 и 0,5 мл иммунитет наступает на 10 сутки после иммунизации и при этом обеспечивается его однородность.

4. Установлено, что после применения вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной местные тканевые реакции слабее выражены в случае использования вакцин на основе масляного адъюванта Монтанид ИЗА-70, чем при применении вакцин с адъювантом ВНИИЗЖ, иммунный ответ привитой птицы при этом различается незначительно. Вакцины с масляным адъювантом Монтанид ИЗА-206 обладают умеренной реактогенностью, но значительно уступают по степени неспецифической стимуляции иммуногенеза вакцинам с адъювантом Монтанид ИЗА-70 и ВНИИЗЖ.

5. Патологоанатомическими исследованиями установлено, что инъекции вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной на основе адъюванта Монтанид ИЗА-70 подкожно в область шеи и в копчик не вызывают поствакцинальных местных реакций и через 6 недель после прививки эмульсия полностью рассасывается. Внутримышечное применение вакцины не приводит к патологическим изменениям тканей, но эмульсия у 20-30% поголовья сохраняется в месте инъекции более 6 недель (срок наблюдения).

108

6. В экспериментах установлено, что различные парентеральные пути введения вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивиро-ванной эмульгированной не влияют на величину и сроки наступления иммунного ответа у птицы.

7. Установлено, что вакцина ассоциированная против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированная эмульгированная не теряет исходные иммуногенные свойства при транспортировке и хранении при температуре 4-6°С в течение 7 месяцев (срок наблюдения), замораживании при температуре минус 20°С в течение суток и прогревании при температуре 37°С в течение суток. При этом сохраняются антигенная активность вакцины и стабильность эмульсии.

8. Показано, что напряжённость и продолжительность поствакцинального иммунитета после применения вакцины ассоциированной против НБ, ИБК и ССЯ-76 инактивированной эмульгированной у кур мясного направления несколько ниже, чем у кур яичных пород.

9. Определены минимальные сроки защиты потомства привитых родителей материнскими антителами от ньюкаслской болезни, которые составляют у цыплят-бройлеров 10 суток, а у цыплят яичной породы - 20 суток .

10. Установлено, что для защиты кур-несушек от ССЯ-76 необходимо своевременно проводить вакцинацию поголовья, не позднее, чем за один месяц до начала яйцекладки.

11. Применение инактивированной вакцины против ИБК и НБ является составной частью схемы специфической профилактики этих заболеваний и обязательно требуется предварительная иммунизация живыми препаратами.

109

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты научных исследований были использованы и вошли в следующие нормативно-технические документы, которые внедрены в ветеринарную практику:

1. Промышленный регламент на производство вакцины ассоциированной против ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения яйценоскости-76 инактивированной эмульгированной, утверждён директором ВНИИЗЖ 06.07.2000 г.

2. Технические условия (ТУ 9383-029-00495527-00) на вакцину ассоциированную против ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения яйценоскости-76 инактивированную эмульгированную. Рекомендованы к регистрации в Российской Федерации без ограничения срока действия на заседании Совета по ветеринарным препаратам Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации 03.10.2000 г.

3. Наставление по применению вакцины ассоциированной против ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения яйценоскости-76 инактивированной эмульгированной. Рекомендовано к регистрации в Российской Федерации без ограничения срока действия на заседании Совета по ветеринарным препаратам Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации 03.10.2000 г.

110