Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Иммунобиологическая реактивность и пути ее коррекции в процессе роста телят

1 I. л.'-р V

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ПО ВЫСШЕМУ ОБРАЗОВАНИЮ

МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ПРИКЛАДНОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ

на правах рукописи

РЕНЕ КОНДОРИ КИСПЕ

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКАЯ РЕАКТИВНОСТЬ И ПУТИ ЕЁ КОРРЕКЦИИ В ПРОЦЕССЕ РОСТА ТЕЛЯТ

Специальность 16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1996

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте Племенного дела (ВНИИплем) и во Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени академика К.И.Скрябина (ВИГИС).

доктор ветеринарных наук, профессор Э.Х.Даугалиева доктор сельскохозяйственных наук, профессор Э.К.Бороздин

доктор ветеринарных наук, профессор М.А.Сидоров

доктор ветеринарных наук, профессор В.А.Бурлаков

Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, сертификации и стандартизации ветеринарных препаратов.

Защита диссертации состоится апреля 1996 г. в часов I

заседании диссертационного совета, К. 063.46.03 в Московской госу^

дарственной академии прикладной биотехнологии по адрессу 109316, г Москва, ул. Талалихина, 33.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГАПБ Автореферат разослан марта 1996 года.

Ученый секретарь диссертационного совеаа, Кандидат биологических наук,

доцент. И.А.Логинов

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение -

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Известно, что иммунный ответ, биологическим смысл которого состоит в зашите организма от генетически чужеродной информации, представляет собой сложный многокомпонентный процесс. Для его становления необходимо взаимодействие различных клеточных популяций, среди которых выделяют 3 основных класса клеток:Т-, В-лимфоциты и макрофаги или как их называют Т-и В- системы иммунитета (Р.В.Петров,í976).

Иммунная система животных начального периода жизни, особенно новорожденных, имеет ряд особенностей: слабый пролиферативный ответ Т-лимфоцитов на ряд антигенов, низкий уровень выработки фактора, угнетающего миграцию макрофагов. Многочисленные исследования показывают, что большую роль в формировании иммунитета у телят играют и условия содержания стельных коров в пренатальный и ранний постнатальный периоды жизни телят (Я.Р.Коваленко, М. А. Сидоров, 1972; А.И.Карелин, В.М.Емельяненко. 1974; Т.К.Волков, 1978; В.Т.Сидоров, 1979; С.И.Плященко, В.Т.Сидоров, 1979; В.И.Родин, 1986; О.Б.Глинский, 1992; T.H.Kamal, et al, 1988; I.Kiss, 1988 и

др.).

В связи с этим большую актуальность приобретают вопросы изучения формирования иммунной системы у телят и ее изменения в зависимости от возраста, различных условий содержания животных, сезона года и т.д. В последние годы очень много усилий посвящено изучению иммунодефицитов, возникающих у животных в различные периоды жизни. В связи с этим, ученые много внимания уделяют иммуностимулирующей терапии и иммунопрофилактике (J.A.Drews, 1980; В.Я.Арион, 1981 и др.). Проблема стимуляции защитных функций организма, является принципиально важной, так как формирование иммунитета у животных в более поздние сроки приводит к низкой устойчивости к различным инфекционным заболеваниям (Z.Moretta, et al, 1975; D.R.Hutcheson, 1990; И.В.Слипец, 1990 и др.).

Все больше внимания уделяется изучению препаратов иммуноре-гуляторного действия, гормонам и медиаторам иммунной системы (В.Х.Хавинсон. В.Г.Морозов, 1981; Р.В.Петров с соавт., 1981; В.Я.Арион, 1982; Б. Б.Першин, 1994; A.I.Lewis, et al, 1982; M.Rol-linghoff, 1983; Р.А.Кагакевичюс, 1984; D.Frasca, et al, 1985 и ДР- )•

Поэтому необходимо дальнейшее изучение условий оптимального

- >± ~

применения иммуностимуляторов с.учетом особенностей воздействия на отдельные ишунокомпетентные клетки и другие звенья иммунной системы (И. Г. Векслер, 1980; Р.В.Петров, 1976, 1983 и др.).

Цель работы.

Целью настоящей работы является изучение динамики формирования иммунной системы у телят холмогорской породы в процессе роста и развития и определение путей коррекции иммунореактивности.

Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:

- Определить иммунобиологическую реактивность телят в разные периоды их роста и развития;

- Изыскать пути повышения иммунного статуса телят.

Научная новизна.

В работе впервые проведено комплексное изучение состояния факторов клеточного иммунитета у телят в процессе их роста и развития. Определен возраст созревания основных популяции лимфоцитов. Изучена активность киллеров от рождения до 9 - месячного возраста. Впервые изучено влияние иммуностимуляторов Т-, В-активи-на и тимогена на процесс созревания факторов клеточного иммунитета у крупного рогатого скота.

Практическая значимость работы.

На основании данных, полученных при изучении иммунобиологической реактивности телят и их естественной резистентности, даны предложения по коррекции иммунного ответа с использованием иммуностимуляторов.

Положения, вынесенные на защиту.

Клеточные факторы иммунитета созревают у крупного рогатого скота к 3 месячному возрасту, киллерная активность в возрасте 9 месяцев.

У 30% телят имеет место запаздывание в созревании клеточных факторов иммунитета, что повышает их восприимчивость к болезням.

Введение в первые дни жизни телят иммуностимуляторов (Т- и В-активина, тимогена) обеспечивает более раннее созревание клеточного иммунитета и снижение заболеваемости молодняка.

Апробация результатов.

Материалы диссертации доложены:

- На заседаниях ученого совета Института Племенного дела-(1993Д994.1995 г.);

- На конференции молодых ученых ВИГИС (1994).

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста и состоит из: введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, рекомендаций производству.

Список использованной литературы содержит 259 источников, из них 169 отечественных и 90 иностранных авторов.

Публикации. Материалы исследований опубликованы в четырех статьях.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились с 1993 по 1995 годы на 82 телятах в ГПЗ "Лесные Поляны" Пушкинского района Московской области, с 1-4 суточного до 9 месячного возраста, от коров холмогорской породы. Телят отбирали от коров приблизительно одинаковой молочной продуктивности и упитанности. Условия кормления и содержания телят были одинаковыми. Подопытные группы формировали по принципу аналогов по возрасту и живой массе (табл.1.).

Табл.1.

Схема исследований

Группа Кол-во жив-ых, 1 1 Продолжи-1 тельность! Количество проб крови Цитратная кровь 1 Сыворотки

животных гол. опыта, 1 год 1 кол-во проб 1 кол-во 1 анализов кол-во проб кол-во анализов

Обработанная тимогеном 12 1994 1 53 1 1 318 1 53 159

Обработанная Т-активином 30 1993 1 141 1 846 1 141 423

Обработанная В-активином 14 1994 I 55 ! 330 1 55 165

Контрольная группа 26 1993-1994! 122 1 732 1 I 122 366

Итого 82 | 371 I 1 2226 371 1113

Для оценки показателей клеточного иммунитета полученную взвесь лимфоидных клеток использовали для определения киллерной активности лимфоцитов (ЕКК), количества больших гранулярных лимфоцитов (БГЛ) и характеристики функциональной активности Т- и В-лимфоцитов.

Сыворотка крови использовалась для определения бактерицидной, лизоцимной и беталитической активности. По этим показателям оценивали уровень естественной резистентности гуморального иммунитета.

Определение количества лейкоцитов и лимфоцитов в крови проводилось общепринятым методам.

Для выделения лимфоцитов из периферической крови применяли метод, предложенный A. Boyum (1986). Фракции лимфоцитов выделяли методом центрифугирования в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-верографин.

Большие гранулярные лимфоциты (БГЛ) определяли, используя метод Л.К.Добродеевой и Г.А.Суслоновой (1983); оценку естественных киллерных клеток проводили по методу Г.Ф.Железниковой (1988); содержание Т-лимфоцитов в периферической крови крупного рогатого скота определяли по методу Jondal (1984); количество В-лимфоцитов в периферической крови крупного рогатого скота определяли в реакции ЕАС-розеткообразования по N.F.Mendes (1973).

Из гуморальных факторов учитывали бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК), определяемую по методике О.В.Смирновой, Г. А. Кузминой (1966) с использованием штамма 675 Е.Coli; лизоцим-ную активность - по методу В. Г.Дорофейчука (1977) с использованием Micrococcus luteus (micrococcus lysodeikticus) штамма АТСС 4698; беталитическую активность - по методу 0.В.Бухарина и И.В.Бичеевой (1969), с использованием штамма 83 Вас.Subtilis. Все штамы получены из государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов имени Л. А. Тарасевича.

Уровень клеточных и гуморальных фактбров естественной резистентности подопытных и контрольных животных представлен характеристика.« выборки - средней величиной признака (М), средним квадратичным отклонением (б), ошибкой средней арифметической (м) и коэффициентом вариации признака (Cv%), проводили расчет достоверности разницы (Р) между группами.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Иммунобиологическая реактивность телят в динамике их роста

На протяжении всего периода исследований (9-месяцев) у телят установлены резкие колебания в количестве лейкоцитов. В первые дни после рождения (1-4 сутки) количество лейкоцитов колебалось в пределах 9750 - 13400. По всей вероятности такой большой разброс зависит от индивидуальной иммунно-реактивности матерей. Показатели среднего количества лейкоцитов составили 11655 ± 376 кл/мм3, что находится в пределах физиологической нормы новорожденных телят. Средние показатели количества лейкоцитов в 20 дневном возрасте - 11288 1 406 кл/мм3, в 3- месяца - 10314 1 456 кл/мм3 и в 6 месяцев 11750 ± 535 кл/мм3. С 6-месячного возраста количество лейкоцитов становится постоянным. Для подтверждения полученных нами данных в 1994 году провели повторные исследования на телятах той же породы и в те же сроки. Разницы в динамике лейкоцитов у телят 1993 года рождения и 1994, года, не получили.

Таким образом, количество лейкоцитов стабилизируется у телят холмогорской породы к 6 месячному возрасту.

Наблюдение за динамикой лимфоцитов, показали, что у телят абсолютное количество лимфоцитов на протяжении всего периода исследований не подвергалось резким колебаниям. Так у телят в 1-4 дневном возрасте количество лимфоцитов составляло 7720 ± 325 кл/мм0, что составляет 67% от число лейкоцитов. Дальнейшие исследования общего количества лимфоцитов соответствовали следующим показателям: 15 - 20 дней - 6710 ± 250 кл/мм6, 3-месяца - 7050 ± 308 кл/мм3, 6-месяцев - 8260 ± 297 кл/мм3, 9-месяцев - 8190 ± 354 кл/мм3 или 66%. При этом относительное число лимфоцитов в первые месяцы жизни теленка несколько снизилось, а затем вновь возросло. Исследование лимфоцитов крови, проведенные в 1994 году на телятах такого же возраста показали почти аналогичные результаты.

Анализ динамики Т-лимфоцитов у телят холмогорской породы показал, что как в количественно», так и процентном отношении оно имеет тенденцию к увеличению. Так, у телят в возрасте 1-4 дней количество Т-лимфоцитов составляло 3475 1 251 кл/мм", что составляет 46. 4% от ччс-пя лимфоцитов; V ?о дневному впчпяпту нмррт место некоторое снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов до

- а -

3267 ± 131 кл/мм3, однако относительное их количество сохранялось на прежнем уровне; к 3-х месячному возрасту количество Т-лимфоци-тов достигало 4090 ± 288 кл/mm'3 или 44,3%. В дальнейшем существенных изменений этого показателя не наблюдается.

В динамике В-лимфоцитов (ЕАС-РОК) наблюдалась аналогичная картина, т.е. отмечали постепенное увеличение В-лимфоцитов у телят с возрастом. Исследования, проведенные в первые дни рождения телят показали, что В-клеток у них было от 721 до 2275 кл/мм3, в среднем 1535 ± 68 кл/мм3. К 20 дню количество В-лимфоцитов снизилось до 1371 1 53 кл/мм3, а с 3-х месячного возраста количество В-лимфоцитов колебалось в среднем в пределах от 1941 ± 100 до 2000 1 58 кл/мм3, что в относительном их содержании составляло 22,2 - 24,5 % к общему числу лимфоцитов.

Динамика активности естественных киллеров (ЕКК) и количества больших гранулярных лимфоцитов (БГЛ) определяли на телятах 1-ого и 2-ого опытов.

Анализируя динамику количества лимфоцитов и активность ЕКК, следует отметить, что она находится в прямой зависимости, т. е. мы наблюдали одинаковую картину в количественном изменении лимфоцитов и активности ЕКК. Определив киллерную активность, мы изучили динамику БГЛ и установили прямую зависимость между факторами клеточного иммунитета, а тленно между активностью ЕКК и количеством БГЛ (табл.2.).

Табл. 2.

Динамика содержания БГЛ (кл/мм3) и ЕКК (55) в крови телят

Возраст 1 М i m 1 б ! Cv%

телят 1 1 1

1 ! 2 1 3 ! 4

Абсолютное содержание БГЛ

1-4 сут. 2270 ± 119 412 26,96

до-20 сут. 1610 ± 65 504 31,28

3 - мес. 3680 ± 135 1422 38,65

6 - мес. 3095 ± 135 608 19,63

9 - мес. 2892 - 182 576 19,91

Продолжение табл.2

<1 J. I 2 1 3 1 4

Цитотоксичэская активность ЕКК

1 - 4 сут. 16,60 s 1,40 10, 60 63,79

до-20 сут. 19,59 ± 1,48 11,46 38, 49

3 - мес. 17,44 ± 1,54 11,99 68,75

6 - мес. 22,90 ± 2,40 10,74 46,88

9 - мес. 25,60 ± 4,10 13,18 51,48

БАСК достигает максимальной величины к 6-и месячному возрасту, составляя 66,73%, что свидетельствует о полностью сформировавшихся гуморальных факторах естественной резистентности. Однако в данном возрасте отмечается еще высокое значение коэффициента вариации, что, на наш взгляд, связано с индивидуальной реактивностью организма в процессе формирования иммунной системы и физиологической адаптацией организма.

Количество лизоцима в сыворотке крови у телят холмогорской породы в первые дни жизни (1-4 сутки) составляют 2,44 мкг/мл. К 20-дневному возрасту количество лизоцима достигает 2,79 мкг/мл, что является наивысшим значением. • ■--'

У телят в 3-х месячном возрасте уровень лизоцима снижается до 1,55 мкг/мл., что, почти на 1 мкг/мл ниже по сравнению с 20-дневньш возрастом.

Количество фермента мурамидазы в 6-и месячном возрасте составляет 1,48 мкг/мл. В дальнейшем, к 9-и месячному возрасту уро-зень лизоцима составляет 1,73 мкг/мл, что практически мало отличается от показателя количества лизоцима у 3 -х и 6-и-месячных телят.

Получены данные о литической активности термостабильного фермента ß-лизина в сыворотке крови у телят холмогорской породы в отношении к микробам Bacillus Subtilis. У телят первых дней жизни (1-4-сутки) уровень ß-лизина составляет 14,50%. Это значение в данном возрасте свидетельствует о низкой активности фермента.

К 20-дневному возрасту телят имеет место его незначительное увеличение до 16,43%. К 3- х месячному показатель литической активности ß-лизина увеличивается до 2U, 71%. в данном возрасти ки-

- 1Г) -

эффициент вариации становится минимальным, что свидетельствует о стабилизации этого показателя.

В возрасте 6-и месяцев активность е-лизина сыворотки крови составляет 25,89%, а у 9-месячных телят оно составляет 20,86%.

Влияние иммуномодуляторов: тимогена, Т-активина и В-активина на иммунобиологическую реактивность телят

На протяжении 9 месяцев исследований концентрация лейкоцитов у телят, получавших иммуномодуляторы, изменялась незначительно. Введение тимогена подопытным телятам увеличило, по сравнению с контролем, количество лейкоцитов на 5-й день исследования. Через 3- месяца у телят этой группы количество лейкоцитов также было повышенным, а разброс между максимальными и минимальными показателями был от 7800 до 14900 кл/мм3.

Значительного изменения количества лейкоцитов после применения Т-активина не наблюдалось. Влияние В-активина на процесс пролиферации и дифференцировки лейкоцитов на 5-й день после введения препарата не наблюдалось.

Об влиянии тимогена на процесс формирования иммунитета клеточного типа говорит то, что после введения препарата количество лимфоцитов достигает 8472 кл/мм3, что на 1500 клеток больше, чем в первые дни жизни телят. По сравнению с контролем, этот показатель выше почти на 2000 клеток, что доказывает стимулирующее влияние тимогена на процесс пролиферации и дифференцировки лимфоцитов.

На 5-й день после введения Т-активина отмечено увеличение абсолютного количества лимфоцитов до 8450 кл/мм". К 3-х-месячному возрасту телят количество лимфоцитов достигает 10152 кл/мм3. По-видимому, Т-активин затрагивает фактор активации, пролиферации и дифференцировки лимфоцитов. В дальнейшем этот показатель снижается.

При изучении влияния В-активина на динамику количества лимфоцитов в процессе роста и развития телят, отмечено незначительное увеличение этого показателя к 20~и дневному возрасту (до 7756 кл/мм3). В дальнейшем количество лимфоцитов оставался таким же как в контроле.

Введение тимогена увеличивает как абсолютное, так и относительное количество Т-лимфоцитов. Уже на 5-й день после введения

препарата, их количество составляет 4256 кл/мм3, что почти на 1000 клеток превышает аналогичный показатель у контрольной группы, Относительное количество Т-лимфоцитов достигает 46,80%. Однако в последующие сроки исследования отмечалось некоторое снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов. В 6-и месячном возрасте средний показатель находится в пределах 3097 кл/мм3, к 9-и месячному возрасту 3492 кл/мм3.

Т-активин оказывает также значительное стимулирующее влияние на процесс пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов. К 20-дневному возрасту абсолютное количество Т-лимфоцитов достигает 5364 кл/мм3, что на 2000 клеток выше аналогичного показателя в контрольной группе. В последующем данный показатель у опытной группы телят снижается. При этом относительное количество Т-лимфоцитов в процессе роста телят повышается постепенно.

Влияние иммуностимулятора В-активина на процесс активации пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов нами не отмечено (табл. 3).

Табл.3.

Динамика количества Т-лимфоцитов (Е-Р0К) в крови телят

I Абсолютное содержание I

Возраст, .I Т-лимфоцитов в мм3 I % к числу

сутки I------------------------------1 лимфоцитов

I М-® I б I Сч% I

1 I 2 13 14 15

Т И М 0 Г Е Н

до введения 3343 + 121 569 17,02 41,5

до-20 сут. 4256 + 99 444 10,43 46,8

3 - мес. 3224 + 101 450 13,97 46,8

6 - мес. 3097 + 209 932 30,11 45,8

9 - мес 3492 £ 280 792 22,69 49,1

Продолжение табл.3

1 1 2 1 3 1 4 1 5

Т - ■ А К Т И Е 5 И Н

до введения 3325 251 740 22,26 46,4

до-20 сут. 5364 79 612 11.41 49,8

3 - мес. 4172 ± 9.6 745 17,86 47,4

6 - мес. 3946 ± 50 385 9,75 47,1

9 - мес. 4451 77 599 13,45 52,1

В - АКТИВИН ■

до введения 3073 ± 230 796 25,90 43,7

до-20 сут. 3274 + 146 988 30,18 46,2

3 - мес. 3427 + 191 854 24,91 47,9

6 - мес. 3243 + 255 881 27,16 47,9

9 - мес. 3486 + 114 397 11,39 49,8

КОНТРОЛЬ

1-4 сут. 3475 + 251 940 27,05 46,4

до-20 сут. 3267 + 131 946 28, 96 46,3

3 - мес. 4090 + 288 1413 34,55 44,3

6 - мес. 3785 + 210 939 24,81 46,1

9 - мес. 4011 ± 308 974 24,28 49,0

У телят после применения тимогена на 5-день наблюдали некоторое увеличение как абсолютного, так и относительного количества В-лимфоцитов, по сравнению с контролем. При последующих исследованиях не находили особых изменений в динамике В-лимфоцитов.

Влияние Т-активина на абсолютное и относительное количество В-лимфоцитов не отмечено. Средние показатели опытной и контрольной групп были одинаковыми (табл. 4.).

Иммуностимулятор В-активин оказывает значительное влияние на динамику абсолютного и относительного количества В-лимфоцитов уже

Табл. 4.

Динамика количества В-лимфоцитов (ЕАС-РОК) в крови телят

I Абсолютное содержание I

Возраст, I В-лимфоцитов в мм3 I % к числу

сутки I-------------------------------1 лимфоцитов

I М ± ta I б I Cv% I

Т И М О Г Е Н

до введения 1566 ± 89 437 27,91 18,7

до-20 сут. 1724 ± 104 440 25,52 22,8

3 - мес. 1921 ± 102 460 23.95 23,7

6 - мес. 1531 ± 71 302 19,70 23.3

9 - мес. 1690 ± 64 180 10,64 24,8

Т-АКТИВИН

до введения 1450 ± 42 169 11,67 17,6

до-20 сут. 1694 ± 68 333 19,67 24.2

3 - мес. 1876 ± 72 355 18,91 23,8

6 - мес. 1678 ± 125 610 36,35 25,8

9 - мес. 1774 ± 65 320 18,06 24,9

В-АКТИВИН

до введения 1458 ± 56 207 14,20 19,9

до-20 сут. 1718 ± 144 499 29,06 23,5

3 - мес. 1563 i 147 657 42,05 25,7

6 - мес. 1657 ± 178 617 37,27 24,0

9 - мес. 1675 ± 152 528 31,49 25,2

КОНТРОЛЬ

1 - 4 сут. 1535 i 131 491 31,99 20,1

до-20 сут. 1371 ± 54 386 28.14 19,5

3 - мес. 1941 i 100 491 25,30 22,2

6 - мес. 1903 ± 61 273 14,32 23,7

9 - мес. 1998 ± 58 184 9.45 24, 5

на 5-й день после введения препарата. В первые дни жизни телят, до применения В-активина абсолютное количество В-лимфоцитов составляет 1458 кл/ии . К 20-дневному возрасту, абсолютное количество В-лимфоцитов достигает 1718 кл/мм';. В последующем абсолютное количество В-лимфоцитов такое же как в контрольной группе. Однако у телят, получавших В-активин, процентное содержание В-лимфоцитов было выше, как по сравнению с группами телят, получавшими тимоген и Т-активин, так и с контрольной группой.

Введение тимогена, способствовало увеличению абсолютного и относительного количества БГЛ. На 5-й день исследования их количество составляет 2454 кл/мм°" к 3-х месячному возрасту этот показатель достигает 3649 кл/мм°, В последующие сроки исследования имеет место незначительное снижение относительного количества БГЛ.

У телят, получавших Т-активин, наблюдали резкое увеличение абсолютного и относительного количества БГЛ. В 3-х месячном возрасте этот показатель достигал 3448 кл/мм3. В дальнейшем отмечали постепенное снижение абсолютного и относительного количество БГЛ. У телят, получивших В-активин, на 5-й день отмечали также некоторое увеличение абсолютного и относительного количества БГЛ. К 3-х месячному возрасту эти показатели достигли максимальной величины; к 9-и месяцам их количество несколько увеличивалось (до 42,4%).

У подопытных телят, получавших тимоген, значительно увеличивается цитотоксическая активность киллерных клеток уже на 5-день после применения препарата. В последующие сроки исследования средний показатель остается постоянным. У телят, обработанных Т-активином, цитотоксическая активность натуральных киллеров рез-* ко увеличивается на 5-день после введения препарата. Показатель .активности киллерных клеток в первые дни после рождения составляет 18,8%, к 20-дневному возрасту зтот~пока5атстр"достигас-т-Д9;-8%т-В дальнейшем процент цитотоксической активности натуральных киллеров остается высоким до конца наблюдений. При введении В-активина у подопытных телят не отмечали активации естественной клеточной цитотоксичности.

Показатель бактерицидности сыворотки крови в раннем постна-тальном периоде жизни (1-4 сутки) у телят до введения тимогена составляет 38,52 %, что почти аналогично показателю контрольной группы в этом же возрасте. После введения тимогена у телят к 20-и дневному возрасту показатель бактерицидности возрастает до 40,98%

К 3-х месячному возрасту бактерицидность сыворотки у опытных телят увеличивается и достигает 68,63 %, что превышает аналогичный показатель у контрольной группы в этом возрасте на 9,1 %. Уровень бактерицидной активности сыворотки крови в возрасте 6-и месяцев у телят этой группы составляет 69,2 %. что практически мало отличается от аналогичного показателя у 3-х месячных телят. В 9-месячном возрасте показатель бактерицидной активности сыворотки о отношении Е. Coli остается как у 6-месячных телят, однако в сравнении с контролем он выше на 20, 5%.

Бактерицидная активность сыворотки крови до применения Т-активина у телят составляла 36,66 %, после введения препарата (к 20-дневному возрасту) уровень бактерицидности увеличился до 59,22%, что на 61,5% выше показателя в 3-4-дневном возрасте, а по сравнению с контролем в аналогичном возрасте он выше на 13%. Это доказывает стимулирующее действие Т-активина на уровень бактерицидности сыворотки крови. К 3-х месячному возрасту показатель бактерицидности сыворотки крови у этих телят, остается почти на том же уровне, что и в 20-дневном возрасте. В дальнейшем (в возрасте 6-месяцев) бактерицидность сыворотки крови увеличивается до 69,71 %, к 9-месячному возрасту этот показатель незначительно снижается, однако, остается выше аналогичного показателя контрольной группы.

Бактерицидность сыворотки в первые дни жизни телят, до введения В-активина составляет 43,18 %, к 20-дневному возрасту телят БАСК достигали 60,93%, что на 41,1% выше аналогичного показателя в первые дни жизни телят. По сравнению с контрольной группой, активность сыворотки у подопытных животных выше на 16,3%. В 3-х месячном возрасте у телят этой группы бактерицидность сыворотки крови находилась в пределах 58, 38 %, в 6-месячном - 77, 66%, что является максимальным значением и на 16,4% выше по сравнению с контролем. В 9-месячном возрасте бактерицидность сыворотки в данной группе оставалась значительно выше по сравнению с контролем (табл. 5).

У подопытных телят первой группы в возрасте 1-4 суток количество лизоцима составляет 2,66 мкг/мл. После применения тимогена этот показатель к 20-дневному возрасту, составил 2, 42 мкг/мл, что на 0,20 мкг/мл ниже чем в первые дни жизни, и мало отличался от аналогичного показателя контрольной группы. У подопытных телят в 3-х месячном возрасте активность лизоцима в сыворотке крови сни-

Табл. 5

Динамика бактерицидной активности сыворотки крови телят в (%)

Возраст. I М ± m I б I Cv% сутки I I I

Т И М О Г Е Н

до введения 38,52 + 1,74 6,02 15.63

ДО - 20 сут. 40, 98 ± 1,89 8, 88 21.68

3 - мес. 68,63 ± 1,33 6,23 9,21

6 - мес. 69, 23 ± 3,85 17,21 24,86

9 - мес. 68,98 ± 1.88 7,02 10,18

Т-АКТИВИН

ДО введения 36,66 + 3,04 10,53 28,72

ДО - 20 сут. 59,22 + 3,31 9, 92 16,35

3 - мес. 60, 50 + 5,03 15.91 26,30

6 - мес. 69,71 ± 1,30 3,45 4,95

9 - мес. 62,17 ± 2,78 9. 62 15,47

В-АКТИВИН

ДО введения 43,18 + 2,00 6, 93 16,05

ДО - 20 сут. 60, 93 + 5,50 19, 05 31,26

3 - мес. 58,38 + 2,95 15, 63 26,78

6 - мес. 77,66 + 1,83 7,77 10,01

9 - мес. 73,17 + 1,30 4,50 6,16

КОНТРОЛЬ

1 - 4 сут. 38,30 ± 2,21 7,63 19,96

ДО - 20 сут. 52,40 + 1,57 7,03 13,42

3 - мес. 62,88 + 1,67 8,20 13,04

6 - мес. 66,73 ± 2, 58 11,53 17,27

9 - мес. 57,25 ± 1,46 6,54 11,42

¡илась до 0, 97 мкг/мл, что на 1,40 мкг/мл ниже аналогичного пока-;ателя с 20-дневном возрасте. С возрастом активность фермента му-'амидазы еще более снизилась, достигнув 1,09 мкг/мл к 6-и месяч-юму возрасту. У телят в 9 месяцев данный показатель находился в [ределах 1,13 мкг/мл, что мало отличалось от показателя у 6-и ме-:ячных телят, а по сравнению с контролем, активность лизоципа ос-■ается по прежнему низкой.

При изучении влияния Т-активина на концентрацию лизоципа в :ыворотке крови телят второй группы выяснено, что до применения [ммуномодулятора (в 1-4-суточном возрасте), его уровень составил !, 46 мкг/мл, а после введения препарата, на 5-день(в 20-дневном юзрасте) литическая активность лизоцима составляло среднем 2,04 1кг/мл. Литическая активность фермента в 3-месячном возрасте у 1тих телят составляла 1,00 ± 0,86 мкг/мл, что ниже показателя в Ю-ти дневном возрасте более, чем на 1,0 мкг/мл и на 0,50 мкг/мл ю сравнению с контролем. Концентрация лизоцима в сыворотке крови •елят в возрасте 6-месяцев мало отличалась от показателя у 3-ме-:ячных телят и составляла 1,07 мкг/мл. К 9-месячному возрасту те-!ят лизоцим в этой группе имеет тенденцию к незначительному повы-[ению, достигая 1,19 мкг/мл. По сравнению с контролем, лизоцимная 1Ктивность сыворотки крови в опытной группе телят остается низ-:ой.

Исследования лизоцимной активности сыворотки крови у 1-4 |невных телят третьей группы показывают, что концентрация его гаставляет 2,44 мкг/мл. После применения В-активина уровень фер-|ента изменился незначительно и находится в пределах 2,40 мкг/мл. |днако этот показатель ниже чем в контрольной группе. С возрас-'ом, в этой группе телят, концентрация лизоцима имела тенденцию к нижению. У этих телят в возрасте 3-месяцев лизоцимная активность вставляла 0,81 мкг/мл, что на 1,69 мкг/мл ниже показателя в 0-дневном возрасте. По сравнению с контролем, этот показатель иже на 0,70 мкг/мл. У телят 6-месячного возраста показатель ли-оцимной активности сыворотки имел тенденцию к повышению, в сред-ем до 1,24 мкг/мл, что на 0,20 мкг/мл ниже по сравнению с конт-олем.

Лизоцимная активность к 9-месячному возрасту телят снижается езначительно и его уровень составляет 1,11 мкг/мл.

В-литическая активность сыворотки крови телят первой группы возрасте 1-4 дней составляет 17,58 %. После введения тимогена,

р-литическая активность резко увеличивается, достигая 25,76 %, чт на 57,1% выше аналогичного показателя в контрольной группе.

К 3-х месячному возрасту активность р-лизина составлял 32,59 %, что на 57,4% вше этого показателя у животных контроль ной группы. У телят в возрасте 6-и и 9-и месяцев, р-литическа активность остается на уровне, 3-месячных животных. Получении результаты свидетельствуют о значительном влиянии тимогена н р-литическую активность сывортки крови телят уже в первые дн; после введения. В дальнейшем активность остается неизменной.

У второй группы телят после введения Т-активина активност; фермента увеличивается незначительно, оставаясь близкой к показа телю контрольной группы. У 3-х месячных телят этой группы 0-лити-ческая активность сывортки почти удваивается и составляет 30,5' %, что на 47,1% выше показателя в контрольной группе. К 6-месячному возрасту этот показатель остается на том же уровне, что и ; трехмесячных телят. Аналогичные результаты получены и у телят ! возрасте 9-месяцев. По отношению к контрольной группе этот показатель остается выше на 37,3%.

Термостабильная литическая активность сыворотки после введения В-активина составляет 15,43 %, В 3-месячном возрасте у теля' этой группы р-литическая активность увеличивается на 61,2%, пс сравнению с показателем у 20-дневных телят и на 34,8% по сравнению с контрольной группой. К 6-месячному возрасту данный показатель достигает максимальной величины. В дальнейшем он остаетс; без изменений.

Таким образом, иммуностимуляторы (тимоген, Т-активин и В-ак-тивин) по-разному влияют на динамику различных факторов естественной резистентности гуморального типа в процессе роста и развития организма животного, но все они в определенной степени стиму-71йруюГТШм7Н0бй0Ж!ТОЧеСгСудГф5аКТКБНССТ1^ --

Проведенные исследования иммунобиологической реактивности свойств телят холмогорской породы в период их роста и развития, позволили выявить ряд общих закономерностей и различий в становлении Т-и В-систем иммунитета и факторов естественной резистентности.

При изучении коррелятивных связей Т-и В-лимфоцитов с бактерицидной, лизоцимной и р-литической активностями сыворотки крови с учетом индивидуальной реактивности телят они оказались близкими по знаку и величине. Так, в ранний период жизни телят (1-20 дней)

количество Г-и В-лимфоцитов было минимальным. Такой же низкий показатель установлен по бактерицидной и g-литической активностям сыворотки крови. К 3-месячному возрасту телят количество Т-и В-лимфоцитов увеличивается и достигает своего максимального уровня - 4090 i 288 Е-РОК/мм3 И 1941 ± 100 ЕАС-РОК/мм3.

У телят в 3-х месячном возрасте происходит созревание иммунной системы, о чем можно судит по интенсивности иммунных процессов, однако имеют место и индивидуальные особенности животных. Так даже в одной группе были животные, у которых E-РОК составляли 2574/мм3 и ЕАС-РОК 1345/мм3 а у других Е-РОК 4371/мм3 и ЕАС-РОК 2546/мм3,

Эта оценка Т-и В-систем иммунитета у телят в период их роста согласуются с данными В. Л. Солодовникова (1983); М. И. Гулюкина (1993) и А.В.Мамбетовой (1994), которые показали, что увеличение Т-и В-лимфоцитов у исследованных телят происходит в основном в течение 3-6 месяцев. Кроме того ряд авторов (Е. Fischer, 1966, L. Мо-retta,1975, D. Hutcheson, 1989) находят, что большое значение имеет индивидуальная реактивность животных и условия содержания телят в ранний постнатальный период жизни и коров-матерей в период стельности, что мы наблюдали и в наших опытах.

В дальнейшем происходит функциональнее созревание клеточного иммунитета, которое завершается у телят холмогорской породы в период с 6-го до 9-го месяца постнатальной жизни.

Анализируя данные полученные по гуморальным факторам естественной резистентности телят в динамике их роста и развития обращает ка себя внимание постепенный рост бактерицидной активности, Если в первые сутки после рождения у телят он составлял 38%, то у телят 6-месячного возраста бактерицидный эффект сыворотки крови достиг максимальной величины (66,7%). Аналогичная картина выявлена при изучении р-литической активности сыворотки крови. Активность g-лизина у новорожденных телят составляла 14,59%, а у 6-ти месячных - 25,В%. Это свидетельствует о том, что лишь к 6-месячному возрасту естественной резистентность организма телят достигла стабилизации.

Полученные данные согласуется с материалами исследований ряда авторов (Е. С. Cay, K.A.Mekay, D. Barmen, 1965; M. Sawyer (1973); S.Selle, 1972; A. Popesen, 1974; П.Павел, 1976; P.В.Петров, 1979; С. И. Плященко, Т. В. Сидоров, 1979; Р, П. Масллнко, 1985; М.З. Саидов, 1990). Которые указывают, что в период роста животных после рож-

пения и до 60-ти дневного возраота происходит повышение реактивности ишунной системы за счет возрастания числа иммунокомпетен,-

ШХТоТШ животных имеют низкие показатели клеточного и гуш-

^Л^нитета что можно рассматривать как иммунодефицита рального иммунитета, что мокь у * поставлсн вопрос

ПО тем или иным показателям. В свяои с Э1им ивы

о коооекции иммунного ответа. ■ ргатот1.

В качестве средств, повышающих шиунный статус телят примени

ли иммуномодуляторы: тимоген. Т-и В-актшины.

Результаты экспериментов свидетельствуют о том, что у всех телят которым были введены иммуномодуляторы, наблюдалось повыше-

.„»г, ии в т- так и в В-системах иммунитета. НШ ТоТа^ "вас /М Гаг^еппе (1975) под влиянием Т-активи-иа „Г количество Т-клеток как в крови молодых и старых во — и у животных с предварительно удаленным тимусом Большое количество работ посвяцено изучению действия Т-активина при различных заболеваниях (С.С.Кирзон и соавт.1982. 1983 Д Александров и соавт. 1994 и др.) и все исследователи отмечают

кие процессы в организме животных и повышает уровень иммунологи-ческой^еактивности. ^ ^^ экшершентапьнь1х ис_й и

данных^гатературы препараты Т-. В-активины и тимоген являются ы сокоэффективными ишуномодулирующими средствами. Применение этих препаратов повышает количественные и функциональные показатели Ти £ сисЙш иммунитета, восстанавливают и повышают активность нату-па^ь«^ бактРрипиША лизоцим-

Гю и 1лиГче^ю активность сыворотки крови, тем самым повышают напряженность всех звеньев иммунитета.

ВЫВОДЫ

1 у новорожденных телят количество лейкоцитов в крови составляет 9-14ТЫС/ММ3. В дальнейшем (в основном до 3 месяцев) кон-'"«п,™ Я кпови возрастает на 7-10%, но различие не достигает статистически достоверных значений. Это свидетельствует

- й! -

з пассивном лейкопоэзе уже в утробном периоде и активности этого 1роцесса в первые 3 месяцев жизни теленка.

2. Концентрация лимфоцитов в крови телят в первый месяц жиз--ш на 10-25% ниже, чем в 3-6-месячном возрасте, но в процентном (относительного числа лейкоцитов) отношении количество лимфоцитов зо все возрастные периоды сохраняется в пределах нормы, как у ззрослых животных.

3. Содержание Т-и В-лимфоцитов у телят холмогорской породы ямеет тенденцию к увеличению с возрастом, независимо от индивидуальной реактивности. К 3-месячному возрасту концентрация Т-лимфо-цитов увеличивается в среднем на 20-25%, В-лимфоцитов - на 30%, что свидетельствует об ускоренном созревании- и дифференцировке клеток этих популяций. В дальнейшем, как абсолютное, так и относительное количество" клеток (в единице объема) обоих популяций стабилизируется, что говорит об установлении межклеточных связей иммунокомпетентных клеток.

4. Активность клеток-киллеров в первые три месяца постна-тальной жизни теленка остается низкой и имеет большие идивидуаль-ные колебания (СуЗЕ доходит до 65.0). В последующие 6 месяцев активность НК значительно возрастает, достигая максимума в 9-месячном возрасте.

5. Бактерицидная активность сыворотки крови у телят к 20-дневному возрасту увеличивается в 1,5 раза. К трехмесячному возрасту БАСК достигает оптимальных показателей и стабилизируется.

6. Лизоцимная активность сыворотки крови наиболее высокая в первый месяц жизни теленка. К 20-дневному возрасту содержание ли-зоцима в сыворотке, крови составляет 2,79 мкг/мл. В последующем количество лизоцима в крови резко снижается (почти в 2 раза) и стабилизируется на уровне 1,5 - 1,75 мкг/мл.

7. Бета-литическая активность сыворотки крови при рождении теленка очень низкая и увеличивается до 6-месячного возраста на 80%. В дальнейшем имеют место довольно существенные колебания 6-литической активности сыворотки крови, о чем свидетельствует высокий коэффициент вариабельности признака (Су% = 67,0).

8. Проведенные исследования позволяют сделать вывод о том, что иммунная система крупного рогатого скота (как клеточные, так и гуморальные факторы), в основном заканчивает свое созревание (формирование) к 3-месячному возрасту. В это время стабилизирует-

ся и коррелятивные связи клеточных и гуморальных факторов естественной резистентности организма.

9. Применение иммунсмодуляторов (тимогена, Т-активина 1 В-активина) способствует более раннему созреванию иммунной системы крупного рогатого скота и снижает вариабельность показателе: естественной резистентности организма. При этом сохраняется основная динамика возрастных изменений по всем изученным показателям.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

Проведенные исследования показывают большую вариабельност! показателей по всем факторам естественной резистентности организма крупного рогатого скота в раннем возрасте. Это говорит о том. что у ряда животных уровень факторов естественной резистентност! ниже нормы и имеет место задержка в созревании иммунной системы. Применение иммуномодуляторов тимогена, Т-активина и В-активин; способствует более раннему созреванию иммунной системы крупной рогатого скота и повышает уровень факторов естественной резистентности у тех животных, у которых имеется задержка в их форми ровании. В связи с однонаправленностью фармакологического дейс твия трех изученных препаратов, рекомендуется применять один и: них в дозах и сроках, установленных соответствующими наставленя ми.

СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Чувилина Ю.И., Рене Кондори Киспе. Стимуляция Т-лимфоци -тярнпй активности у телят холмогорской породы //Тез. докл. К 6-1 межгосударственной межвузовской научно-практическои коНфершцта "Новые фармакологические средства в ветеринарии",- Санкт-Петербург.- 1994,- С. 98.

2. Рене Кондори Киспе. Становление клеточного иммунитета ; телят холмогорской породы /Доклады российской академии сельскохо зяйственных наук.- 1995.- N.6,- С.35-36/.

3. Рене Кондори Киспе.Уровень клеточного иммунитета у холмо горского скота //Улучшение хозяйственно-биологических показателе: отечественных пород скота, - Москва.- 1995,- С. 104-105.

4. Богатноу Н.П., Рене Кондори Киспе.Биолюминисцентный ана

_ по „

лиз крови у крупного рогатого скота в ГПЗ "Лесные Поляны" /Улучшение хозяйственно-биологических показателей отечественных пород скота. - Москва, - 1995,- С. 102-104.