Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Иммунный статус ягнят и пути его коррекции при парагриппе-3 и диктиокаулезе

Г 6 од

5 ДПР 1993

российская ¿академия 'даьакохозяйотвышх наук

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАЯНО-ИССЛЕДОВМЕЛЬСШЙ ИНСШТУТ ЭКСПЕРИЛЕНТАЛШОЙ ВЕТЕРИНАРИИ ИМЕНИ Я. Р. коваленко

На оравах рукописи

ГОГОТ ЭДУАРД ХАСАНОВИЧ

ИММУННЫЙ СТАТУС ЯШЯТ И ПУЗ1 ЕГО КОРРЕКЦИИ ПН1 ПАРА1ШППЕ-3 И ДИШ0КА71ЕЗЕ

16,00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

03.00.20 - гельминтология

Автореферат

диссертации на соискание ученой огэпеки кандидата ввтеранарнлх наук

Москва - 19ЭЗ

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институто экспериментальной ветеринарии имени Я. Р. Коваленко.

Научные руководители:

доктор ветеринарных наук, црофессор, член-корреспондент РАСХН Филиппов В. В.

кавдадаг ветеринарных наук Соколов М.Н. •

Официальные олпонопга: доктор ветеринарных наук, профессор Орлянкин Б.Г; (ШЭВ) доктор вегеринаргшх наук, профессор Малахова Е.И. (ВИ1ЙС)

Ведущее учреадоние - Московская ветеринарная академия имени К.Л. Скрябина

' Защите диссертации состоится ^¡^хЛ^ЬЯ 1993 г. в н часов на заседании специализированного совета

К 020.2o.0I по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук при Воороссийсгом научно-псследСвательском институте экспериментальной ветеринарии имени Я. Г. Коваленко. . Адрес: 103472, Москва, Црзьминки, ВИЭВ. •

С диссертацией можно ознакомиться в библиотек© ВИЭВ.

.-? с-

Автореферат разослан " /-/- " . Ы (л4ЬМ С! 19ЭЗ г.

Ученый секретарь специализированного совета кавдидат вегеряяаршк наук

Ф. Г. Тбреиков

~ 2 -

В В ЕД Е НИ 13

Актуальность проблемы. Ассоциативные Оолеянн кивотных, в том число овец, вызываемые несколькими возбудителями, распространены повсеместно (В.В.Шаповалов, 1973, К./агеиеа, 1974, Д.И.Панасюк, 1978-1985, В. Г. Бондарчук, 1933, А.М.Штева, 1983, М Л.Шахмурзов, 1983, Т.Р.Кораблева, 1291' п др.) и наносят значительный акопомкческий ущерб народному хозяйству.-

В последние даа десятилетия особенно болшое внимание уделяется изучению проблемы ассоциации гельминтов, вирусов, бактерий, патогенных щ>осте]Ьпих (Д.И.Панасюк, П„В,Радаонов, 1903).

При заболеваниях озац чаща всего этг.ологическоо значение ' имеют гельминто-бактериалыше и гельминто-кируенне ассоциации с участием легочных гельминтов (з основном дагкгиокаул), патогенной и условно-патогенной микрофлоры'(Д.И.Панаевк, В.В.Филиппов, 1985). Болезни органов дыхания овец часто являются одной кз причин их гибели. От пневмонии погибает 60-62 % ягнят от общего числа заболевших (М.Н.Коршсов, 1979). Прпчшпг т их могут быть как инфекционного (Э.Л.ЗЗегвдевич, М.Н.Соколов, 1978, 1980), так и неинфекционного характера.

Установлено, что поражение ортанов дыхания могу? вызывать ряд вирусов и возбудитель диктиокаулеза. Несмотря на то, что довольно часто зирусц и диктиокаулн обнаруживаются в легких одновременно, их сочетанное воздействие на организм животных, в частности, на иммунный статус, до сих пор не изучено.

Весной при выгоне на пастбища ягнята инвазируютея личинками диктиокаул, которые з легких чорез 30-35 дней достигают половозрелой стадии, К отоьу времени у ягаят после отъема уга-' сает молозивний иммунитет против парагриппа-3 и сии становятся восприимчивыми к заболеванию (М.Н.Соколов, 1973, Э.А.Шзгидевич, М.К.Соколов,. 1360). Таким образом данная инфекция и инвазия накладываются друг на друта. В связи с этим нами била избрана для изучения данная ассоциация, часто встречаемая в практике овцеводства.

Течение и исход ассоциативных болезней зависят во многом от влияния сочленов паразктоценога на ташунокошетэктше клетки. По данным Е.С.Лейкиной (1978), Э.Х.Даугаливвой, В.В.Филиппова (1991),-гельминты отрицательно влияют на состояние резистентности организма к вирусам, бактериям, проогейшл, затяги-

вая период г.ирусокоопгельства, бактерионосительства и -так далее. Лри ьируспих диареях и заболеваниях органов дцхакия уменьшается количество Т- п В^стфоцитов в крови. Любой инфекционный процесс сопровождается в той или иной степени наруше-. Ш1эм определенного звона иммунной системы. При этом необходимость сзцскакия средств н разработки методов кммунокоррегирую-щей терапии становится очевидной.

Комплексное решение этих вопросов имеет важное значение, так 1сак в последние годы появилось большое количество работ, • указывающих на итунодепрессивное действие на организм целого рада црекаратов, з том числе антгельминтеков, антибиотиков (М.Р.Кр6ткова с соавтора:.™, 1981, О.И.Мамыкова, В.В.Фдлшитсв, З.Х.Даугажева, 1984 и другие). 4

Учитывая внтаизложеяное, представляется актуальным изучение иммунобиологической реактивности ягнят при заражении виру- , сом парагршпа-З (ПГ-З) и личингтми длктиокаул, которые наиболее часто встречаются у молодняка овец.

Б связи с этим перед нами бшга поставлена задача: определить этиологическое значение сочетайного действия вируса аара-грпппа-З и возбудителя диктиокаулеза на имцукный статус ягнят 5ШН9ГО и ве сопке го окотов с целью изыскания средств и методов коррекции иммунного ответа.

Цель работы. Изучить шлмуко&тологаческую реактивность ягнят при парагриппе-3, осложнен;;; м диктгокаулезом и взыскать средства коррекция иммунного ответа.

Задачи исследований:

- изучить динамику Т->'ши$оцитое, количественные- показатели Т-супрзссоров и ?~}:едпаров, макрофагов;

- изучить динамику Б-ссилфоцитов, уровень иммуноглобулинов, специфических антител к вирусу зарагршша-3 к диктиокэулам;

- изучить влияние иммуностимулятора "ПолпоксвдонкН" и вакцины "Ларавак" на шмунобяологпческую реактивность ягяст;

- разработать в условиях производства схему применения кл>5уномо,цуляторов 'при парагриппо-3 п диктиокаулэзэ.

Научная новизна. Впервые в эксперименте изучена иммунобиологическая рэактивность ягнят пи заболевании, вызванном ассоциацией вируса парагршша-тЗ и диктиокаул. Установлена супрессия Т- и В-ллм£оцитов за счет нарушения 'субпопуляций 7~ шафэциоа. Введение вируса парагрпппа-3 ведет к незначительней стабуляции активности моноцитов к макрофагов, а при соче-

тайном зарахешш, овец вирусом и дшстиокаулами их фушцщокаль-ная активность- угнетается.' В течении болезни прослеживается прямая корреляционная зависимость между В-лим$оцитами, иммуноглобулинами п специфическими антителами. Установлено, что одновременное введение иммуностимулятора и вакцины "Паравак" повышает резистентность организма т'нят к парагриппу и диктио-каулезу.

. Практическая ценность работы.

Результаты работы вошли в "Методические рекомендации по изучению механизма иммунитета при гельмантозах и определению • иммуногбнннх свойств препаратов", которые утверждены отделением ветеринарной медицины ЕАСХНИЛ 05.09.90 г., "Временное на. ставление по применению пшшоксидопия для профилактики и лече-,ния болезней сельскохозяйственных ясивоткьгх", утвержденное главным управлением ветеринарии МСХ и продовольствия СССР 01.10.91 г. И 044-3.

Положения, выносящиеся на защиту.

■ I. Иммунобиологическая реактивность ягнят япи экспериментальном парагриппе-3 и диктиокаулезе.

2. Влияние диктиокаул на резистентность ягнят к вирусу парагриппа-3 при парагриппозной инфекции.

3. Иммунокоррагирую-дзе действие иммуностимуляторов и вакцины "Паргвак".

Аптобанкя работы. Материалы диссертации доложены:

- на Всесоюзной научно-технической конференции "Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохозяйственных животных", г. Воронеж, 9-10 октября 1991 г.;

- на Международном семинаре по проблемам моделирования патологических процессов у человека и животных и испытания био- • логически активных препаратов, Санкт-Петербург, 19-21 октября 1Э92 г. ;

- на заседаниях Ученого совета ВИЭВ 1991-1992 гг.;

- - на межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ 23.02,93.

Публикации. По теме диссертации опубликовано три статьи.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включавших разделы "Материалы и методы", "Результаты исследований", обсуждение, вывода, практических предложений, списка литературы, содержащего отечественных и иностранных источников.

5 - '

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Габота выполнялась в 1989-1992 гг. в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики болезней овец' ЕИЭВ, лаборатории иммунологии а генетики ВИ1ИС, в совхозе "Краскогор-с1шй,! Усть-Дкегутинокого района Карачаево-Черкесской автономной республики.

В основу работы положены результаты опытов, проведенных на 44 экспериментально зараженных ягнятах 4-5 месячного возраста "Калининской" породы, и производственного опыта, проведенного на 100 ягнятах породы "Советский меринос" в Ставропольском ' крае. -

Перед началом опытов по экспериментальному заражению ягнят в течение месяц? их обследовали гельминтокопрологичесгаш методом Бормана-Орлова. В опытах использовали вакцину "Пара-вак" цротив царагрипна-З крупногj рогатого скота, производства Покровского завода биологических препаратов.

Для экспориментального заражения ягнят использовалп вирус парагриппа-3, штамм "Пригородный". Вирус культивировали на первично трипсинизировонных культурах клоток почки эмбриона коро- • вы (ПЭК), почки теленка (ПТ) и их субкультурах, которые получали в лаборатории культуры клеток и питательных сред ВИЗЕ.

Вирусеодержащий материал получали путем заражения культур клеток вирусом ПГ-3 с инфекционным титром 105,оТЦД Пе-

ред заражением монослой дважды отмывали раствором Хешсса и после чого зараяали вирусом. Культуру меток с вирусом оставляли па контакте в течение 40 мин и после чего вносили'поддерживающую сроду. Инфекционный титр зируссодериаией суспензии определяли по общепринятому методу и вырастали в ТЕД 50/ш.

В качестве иммуностимулятора применяли синтетический препарат "Полкоксидоний" в дозе 20 мг/гол. в 2-х мл физиологического раствора, внутримышечно.

Культивирование ЛИЧИНОК Dictyocaulus lilaila осуществляли по методу, разработанному Ю.А.Кузнецовым и Т.Р.Корабдевой (Крымская НИВС).

Гельминтологическое обследовате легких проводили по методу К.И.Скрябина (1928). Для оценки иммунобиологической реактивности организма ягнят в крови определяли общее количество лейкоцитов, лейкоформулу, Т-лии$оцктов (E-FOK), теофиллшмувстви-тельных и теофиллшгрезистентных E-РОК, Вчликфцптов (БАС-РОК),

окисаительно-Ебсстановительную активность макрофагов. Б сыворотке крови в РТГА определяли титры специфических антител к вирусу ПГ-3, кроме этого определяли содержание иммуноглобулинов М п 6 .

Выделение мононуклеарных клеток для количественной оценки Т- и В-лищюцитов проводила по методу о.Роуит (1968). Количество Е-РОК определяли в реакция спонтанного розоткообразова-эритроцитами кролшса по методу а.гоМ&г е^.ах., (1972). Количество Е-РОК, чувствительных к воздвйствшо теофшшша - по методу А.ЙмайЪи1 е1:. и!.. ,(1978), идентификацию ЕЛС-ГОК - по методу е.моштез еЪ.аХ., (1973), ОКЛСЛИТйЛЬКО-ВОССТаНОЕНТеЛЬ-нуга активность моноцитов и гранулоцитов - по методу А-5се<г1, ,(1984). Количество имг>цщоглобулииов определяли по методу. Маи-• с1п! в модификации Ю.Н.Федорова (1901), титры специфических антител - в реакции торможения гемагглютинацнк (РТГА).

Результаты исследований обработаны статистическим методом по Стьюденту (Ю.К.Баюн, 1909), с вычисленном средних арифметических величин и их статистических ошибок (Ы+т ),' а также определена достоверная разность сравниваемо: показателей (Р).

2.2. Результаты исследований 2.2.1. Иммунобиологическая реактивность .ягнят, экспериментально зараженных вирусом парагриплэ-З и. личинками диктиокаул

В опито использовали .24 серонегативных к вирусу ПГ-3 _яг-ненка 4-5-месячного возраста, Йалкнинской мясной породы. Всех ягнят разделили на 6 групп по цринципу аналогов и заралсали по следущей схеме: первую группу животных зарагали значало личинками диктиокаул и через 35 дней вирусом ПГ-3; вторую группу одновременно заражали личинками диктиокаул и вирусом ПГ-3; третьи группу заражали вирусом ПГ-3 и через 4 сут. личшжаш . диктиокаул; четвертую группу заражали "олько личинками диктиокаул; пятую группу зараяали только вирусом ПГ-3; итстая 1руп-' па чистый контроль.

Ягнятам вирус парагрилла-3 вводили двукратно в течешю суток по 10 мл в титре Ю6'5 ТЦД 50дш утром 5 мл интратрахе-альпо и 2 мл интраназально; вечером - по 3 мл интраназалыю. Личишсаш диктиокаул заражали перорально по 5С%20 экз./гол. Подобную схему заражения взяли согласно биологическому даклу развития паразитов. Так, ягнят первой группы заразили вирусом ПГ-3 через 35 дней (время, когда доктиокаулы становятся полово-

• - 7 -

зрелыми). Во второй группе использовали одновременное заражение i.jibothka вирусом и личинками диктиокаул с целью определения влияния паразитов в биоценозе на организм хозяина. В третьей грушм животных личинками диктиокаул заражали через 4 суток пос.та введения вируса ПГ-З, т.к. на ятот период приходится проявление клинических признаков болезни. За животныш вели наблюдения в течение 60 дней.

Кдиническиэ наблюдения.' У ягнят, заракенных вирусом ПГ-З и лг.чннказгк диктиокаул, набладалк истечения из носа, серозно-слизистого характера, кашель, одышку, покос, животные отказывались от корма.

Общее количество лейкоцитов перед опытом имело значения 7,9+0,9-10,3+0,8 тыс./мкл. На 15-й день после заражения наибольшее количество лейкоцитов наблюдали у ягнят I, 3 и 5 трупп,' у которых насчитали 10,5+0,7; 10,£3+1,0 и 11,0+0,3 тыс./мкл. соответственно.

Наибольшее содержание эозинофилов в крови у ягнят было в I группе ка 11-й день ноело заражения - 11,8 % а к коту опыта у ягнят I и 4 груш - 9,2 и 10,0 % соответственно.

Количество лимфоцитов у ягнят перед опытом било 6,2+0,48,0+0,5 тыс./мкл. и после небольшого подъема на 3-й день у ягнят 4 группы и на 15-й день у ягнят 5 группы снизилось до уровня 6,5+0,8-7,1+0,7 тыс./мкл.

• В динамике Т-лгилЕоьктов во всех группах найлги.алк достоверное (Р < 0,05) снижение показателей с 0,5+0,1-1,1+0,I тыс./ мкл в начале опыта до 0,1+0,01-0,4+0,1 тыс.Дм к концу опыта. У ягнят 3 группы показатели к концу опыта составили'1,2+0,6 тыс. /мкл .

Снижение количества Tfli.4.клеток наблюдалось на 30-37-й день после заражения со значениями 0,2+0,09 тыс.Дай (Р<0,05).

Количество Т-холпоров у ягнят перед заражением составило 0,5+0,1-0,8+0,2 тыс./мкл и после небольшого повышения на 3-й день исследований снизилось к концу опыта до 0,1+0,04-0,3 тыс./ мкл (Р<с 0,05), кроме 3 группы, где наблюдали небольшое увеличение их до 0,4+0,03 тыс./мкл.

При изучении функциональной активности макрофагов наблюдали статистически незначительное снижение их во всех группах от 17,5-33,0 до IJ,5-12,5 %, а у ягнят 4 грутпш увеличение от 5,5 , до 11,8 ,<?.

В динамике В-дтагооцигов наблюдали достоверное снижение их .

. . - 8 -

количества по сравнению с .контролем с 15 дня после заражения с 0,4+0,03-0,6+0,09 до 0,03+0,01-0,3+0,2 тыс./мкл к концу опыта.

В динамике иммуноглобулина М у животных первой группы наблюдали увеличение количества с 1,4+0,3 до 2,7+0,7 мг/мл на 7 день после- заражения с последующим снижением до 1,7+0,3 мг/ мл. У животных 2 группы количество 1,-к было в пределах 1,8+0,2-2,2+0,5 мг/мл. На 7-11 дни отмечали снижение его количества до 1,1+0,3 мг/мл. К 30 дню наблвдали увеличение до 2,6+0,5 мг/мл и снижение к концу опыта. У ягнят 3 группы наблюдали увеличение на II день после заражения до 3,0^0,7 мг/ мл, затем снижете на 15-23 дни с увеличением на 30 день до • 2,2+0,4 кд'/мл и снижением к концу опыта. У ягнят 4 и 5 групп 'наблюдали два пика подъема до 2,6-2,1 - на 30 день и 2,2-2,4мг/ мл - на 45 день. У ягнят контрольной группы количество колебалось в пределах 1,1+0,3-2,2±0,5 мг/ш.

В динамике т.-- г, увеличение его наблюдали во Есех группах кроме 4 и 5 на 3-11 и 30 дни с 13,2+2,0-19,1+2,2 до 23,5+0,4-1Э,8±1,7 мг/мл и 21,2.Ю, 7-24,2+0,6 мг/мл со снижением к концу опыта до 19,4+2,6-20,8+2,9 мг/мл. У ягнят 4 и 5 групп наблюдали снижение колгичества I.- г, до 15-23 дня до 13,2+3,912,2+3,0 мг/мл, увеличение'на 30 день до 23,6+1,4-24,2±0,7 мг/ ил с после .дующим снижением к концу опыта.

СпешкТмческие антитела в РТГА у ягнят I группы появились через 7 дней после заражения вирусом в титрах 4,1+1,4 и.6,0+ 0,4 10,^2 к концу опыта. У ягнят 2 группы антитела появились на

3 день в титре 2,0+0,5п о,; ^ и к концу опыта титр составлял 7,6+0,2 1.0^2» ^ ягнят 3 группы АТ появились на II день и к концу опыта составляли 7,2+0,4 1оу2. У ягнят 5 группы титр АТ к концу опыта составлял 7,8+0.2

При патологоанатоютеском вскрытии и исследовании легких ягнят получены следующие результаты: в первой группе было собрано 183 гельминта, во второй группе - 87 гельминтов, в третьей группе - 89 экземпляров, в четвертой группе - 163 гельминта.

Проведенные исследования по изучению влияния вируса ПГ-3 и личинок диктиокаул на иммунобиологическую реактивность ягнят показывают, что заражение животных только чистыми культурами сопровоадается увеличением количества лейкоцитов, эозинофилов, лимфоцитов, снижением количества Т- и В-лимфоцитов, перераспределением Тфч и Тфр-РОК, изменением динамики иммуноглобулинов.

- 9 - '

Заражение животных вирусом ПГ-3 и личинками длктиокаул в различные сроки вызвало более глубокие изменения как в лейкоформу-ле, так и в динамике Т- и В-лимфоцитов.

Снижение Т- и В-лимвоцктов у ягнят первой, второй и третьей групп способствует более тяжелому течению болезни, что создает еще большую нагрузку на иммунологические механизмы гомео-стаза. Происходит перераспределение субпопуляций Т-лш.фоцитов, появляется большое количество Т-супрессоров, о чем свидетельствуют и изменения в приживаемости гельминтов.

Это.и послужило основанием для проведения исследований по коррекции иммунного ответа при данной ассоциации вируса и гель-манта.

2.2.2. Изыскание способа тюфилактшш патогтшша и ликт5Г".а?леза

Как отмечено в предыдущих исследованиях, совместноо заражение ягнят вирусом ПГ-3 и личинками диктиокаул приводит к резкое снижению иммунного статуса. Поэтому мы решили испытать совместное введение вакцины ".Паравак" и иммуностимулятора "По-лиоксидония". С этой целью провели опыт на 20 ягнятах 4-5 мес. возраста калининской мясной породы. Всех ягнят разделили по принципу аналогов на 5 групп по 4 головы в каздой. Испытания проводили по следующей схеме:

ш XI). Вакциниров. "Паравак" Стимулятор "Полиоксидоний" Личинки диктиокаул ПГ-3

I + - + ч-з 35 суток

2 + + + ч-з 35 суток

3 - + + ч~з 35 суток

4 - - + ч-з 35 суток

5 контр ОЛЬ -

Личинками диктиокаул заражали через 5 дней после первой вакцинации и введения стимулятора. Вторую вакцинацию и стимуляцию проводили чероз 10 дней после первой. Заражение вирусом ПГ-3 проводили через 35 дней после первой вакцинации и стимуля-■ ции.

1 Вакцину "Паравак", разведенную физиологическим раствором, вводили интраназально'- по 2 мл. Стимулятор "Полиоксддоний" разводили на физиологическом растворе и вводили внутримышечно по 20 мг/гол.

- 10 -

Вирусом ПГ-З заражали ягнят 'двукратно в течение суток: утром 18 мл: 9 мл - интраназально и' 9 мл - интратрахеалыго; вечером - 20 мл: 10 мл интраназально и 10 мл интратрахеально.

Личинками диктиокаул ягнят заражали перорально в дозе 500+20 экз./гол. За животными вели наблюдение в течение всего опыта, при этом проводили термометрию, исследование крови до вакцинации и на I, 5, 10, 15, 38, 42, 46 дни после вакцинации и ведения стимулятора.

В группе, где ягнятам вводили вакцпну и иммуностимулятор, температура тела была в пределах 39,9-40,4 °С, у ягнят контрольной группы - 39,6-40,3 °С.

В группе животных, которым вводили только вакцину, отмечали лейкоцитоз до 10,5+1,5 тыс./мкл. У животных, получавших .стимулятор и вакцину, количество лейкоцитов было в пределах 9,4+0,3 тыс./шел. У ягнят контрольной зараженной грушщ лейкоцитоз достигал 11,0+1,2 тыс./мкл, а в Группе чистого контроля - 7,5+0,6-9,3+1,0 тыс./шел.

В динамике зозинойилов наблюдали увеличение их с 5 дня после введения вакцины и иммуностимулятора и наибольшее количество было в I и 2 группе на 38-41 день - 6,3-6,5 %,

Абсолютное количество лимфоцитов у ягнят 1-й и 3-й групп с 6,7+1 и 7,8+1,1 тыс./шел понижалось к 38-42 дню до 4,8+0,55,4+0,4 тыс./мкл и к концу опыта увеличивалось до 7,5+0,96,0+0,1 тыс./мкл. У ягнят 2 грушщ количество лимроцитов с ■ 8,4+1,0'снизилось к 15 дню до 5,9+0,6 тыс./мкл и к концу опыта выросло до 6,7+0,8 тце./мкл. В четвертой группе лимфоцитов было 6,4^0,4 тыс./мкл, на 15-й день - 9,3+0,1 тыс./шел и к концу опыта - 6,7+0,3 тыс./мкл.

Количество Т-ликфэцитов у ягнят I и 4 групп в начало опыта было 0,9+0,1 тыс./мкл и к концу опыта снизилось до 0,6+0,06 -0,1+0,02 тыс./мкл. На 15 сутки наблкдрли. наибольшие показатели 1,4+0,1 и 1,3^0,2 тыс./мкл и затем снижение до 1,0+0,1 тыс./ мал- в обеих группах. ■ "

В динамике ЗДго-Т-лимТюнитов у ягнят контрольной группы количество Т-хелперов колебалось на протяжении всего периода исследований от 0,5+0,2 до 0,2+0,07 тыс./шел.

У ягнят I и 3 групп увеличение количества "Щ>р-лим|юцитов констатировали на' I, 15 и 42 дни исследования до 0,5+0,05 тыс./ мкл. У животных 2 группы увеличение Т-хелперов установлено до 42 дня. с начала опыта.

У животных контрольной зараженной группа отмечали неболь-вше колебания в количестве "Юр-клеток, с постепенным их снижением с 0,38+0,06 до 0,05+0,01 тыс./мкл.

В динамике ТФч-клеток у ягнят чистого контроля происходили изменения с небольшими колебаниями в сторону увеличения их количества с 0,3^0,03 до 0,9+0,09 тыс./шт.

У ягнят первой группы, вакцинированных "Паравак", количество Ноч-клеток не подвергалось резким колебшшям и было в пределах 0,6+0,1 до 0,5+0,08 тыс./шел.

У ягнят второй и третьей групп наблкщали аналогичные изменения, т.е. в течение всего периода исследований количество ■ 1фч-кдеток составляло от 0,4+0,02 до 0,6^0,04 тыс./мкл.

Однако, у животных четвертой-группы (контрольных зараженных) отмечали увеличение 1фч-Т-димЗгацитов с 0,53Ю,08 до зара- • жения до 0,7+0,2 тыс./мкл на 10-й день исследований. К 15-му дню наблюдений констатировали счижение Тфч-клеток до 0,3+0,1 тыс./мкл, но при исследовании крови на 42-й день после заражения опять наблюдали увеличение 1фч-клеток до 0,5+0,1 тне./мкл.

Количество макрофагов перед опытом у ягнят было в пределах 48-60 % и увеличивалось с 5 дня после введения вакцины и . стимулятора. Наибольшие значения зарегистрированы у ягнят 2 группы - до 69,2 %.

В динамике В-димФоиитов наблюдается два пика увеличения вше уровня контроля в I, 2 и 3 группе на 10-й ден. после вакцинации и стимуляции до 0,6+0,03-0,5+0,08 тыс./мкл и на 42-й день до 0,5+0,09 тыс./мкл - 0,8+0,02 тыс./шел. В 4 группе увеличение количества В-лимфоцитов наблюдали на 15-й день до 1,8+0,3 и сшжение к концу опыта до 0,3+0,03 тыс./мкл.

В .динамике Т<г М достоверное увеличение их количества на-йлвдаяи на 10-й день до 3,5+0,02 мг/мп и снижение к концу опыта до 2,8+0,3 мг/мл. У животных 2 и 3 групп увеличение Хс, наблюдали с 5 дня и к 38 дню было 3,6+0,09-2,8+0,6 мг/мл, затем снижение до 2,5+0,6-2,4+0,5 мг/мл соответственно. У животных- 4 группы наблюдали 2 пика - на 10 день после вакцинации и стимуляции и на 42 день - Л,3+0,07 и снижение к концу опыта до 1,7+0,4 тыс./шел. Количество «г у ягнят контрольной группы было в цределах 1,2+0,1-2,1+0,8 мг/мл.

В динамике Хп. Г'" у ягнят I, 3 и 4 групп наблюдали увеличение его с 8,0+1,6-11,2^3,0 ыг/мя до 20,9+0,2-21,1+0,7 мгДи, затем снижение к концу опыта до 12,2+4,0; 19,7+1,4 к 15,3+2,6

соответственно. У ягнят 2 группы увеличение о наблюдали на 5 день о 10,9+2,0 до 20,9+2,3 мгДи до 38 дня, затем сшгао-ние после заражения вирусом Ш'-З до 15,9+2,1 глг/мл и повышешга к концу опыта до 21,8+0,5 мт/мл. У ягнят контрольной группы количество о • было в пределах 9,7+2,8-14,1+2,6 мг/мя.

Динамика специфических антител к вирусу ПГ-З в РТГА. У жи-воишх первой группы, вакцинированных "Паравак", .до заражения личишсами диктиокаул антитола появились на 15-й день в титре 4,0+0,4 Зод ,, а после заражения вирусом ПГ-З.(на 35-й дет). АТ поднялись до 8,75+0,2 г<ч2.

У животных второй группы (вакцинированных и получивших стимулятор) АТ также появились на 15-й день в титре 3,25+0,4 1ос2, а после заражения зирусом ПГ-З титр антител поднялся до 6,0+0,4 1ов 2'

У животных третьей группы (получивших только стимулятор) АТ появились только, после заражения вирусом ПГ-З на 7-й день в титре 3,25+1,1 Хог 2 и несколько увеличились к концу опыта до 4,5^0,6 2.

У животных контрольной зараженной группы АТ появились только после заражения вирусом ПГ-З на 7-й день в титре 3,0+1,2 и к 46-му дню их титр составил 6,0+0,5 Ъс 2.

В. результате вскрытия опытных ягнят были получены следующие результаты. У животных первой группы, которым была взедена вакцина "Паразак", количество диктиокаул в легких составило 52 экземпляра с размерами 0,7-5,0 см.

Во второй группе животных, которым была Еведзна вакцина и иммуностимулятор, из легких было извлечено 22 гельминта с раз-. -мерами от 1,0 до 5,0 см. В группо животных, которым вводили только иммуностимулятор, количество гельминтов составило 77 экземпляров с размерами 0,5-8,0 см. группе животных, зараженных для контроля, количество гельминтов составило 160 экземпляров, а величина их достигала до 8,0 см.

В результате всщттия и подсчета гельминтов установили, что самая низкая приживаемость гельминтов в группе, где вводили совместно вакцину и гол.уностимулятор: 22 экземпляра против 160 в зараженной группе.

Таким образом, совместное введение вакцины "Паравак" и иммуностимулятора животным до заражения способствует повышению гойщгшгого статуса, увеличению титра АТ и снижает интенсивность инвазии в четыре раза.

- 13 -

Получив обнадеживающие результаты, ш провели производственные испытания препаратов на 100 ягнятах породы "Советский 'меринос"..

2.2.3. Производственные испытания вакцины "Яаравак" ' • и иммуностимулятора "Полиоксидоний" при парагригше-3 и диктиокаулезе ягнят

- Опыт проведен в совхозе "Красногорский" Усть-Дже гу ти нско -го района Карачаево-Черкесской автономной Республики на ЮОяг-нятах 4-5 ыес. возраста породы "Советский меринос". Перед началом' эксперимента животных разделили на 4 группы по 25 голов в каждой. Опыт проводили по следующей схеме: ягнятам первой группы вводила только вакцину "Паравак"; ягнятам второй группы вводили Нолиоксид окий; ягнятам третьей группы вводили одновременно вакцину и иммуностимулятор; ягнята четвертой группы служили контролем.

Вакцину и стимулятор вводили дважды с интервалом 14 дней.

При исследовании фекалий ягнят до начала эксперт,тента личинки диктиокаул не были обнаружены ни в одной группе. Через 30 дней личинки диктиокаул были обнаружены у II ягнят первой группы (вводили только вакцину), у V ягнят второй группы (вводили иммуностимулятор) и у 3 ягнят третьей группы (вакцина + иммуностимулятор), в контрольной группе личинки диктиокаул обнаружены у 12 ягнят. По ходу эксперимента из контрольной группы пало 4 ягненка. При вскрытии установлено катаральное воспаление верхушечных долей легких, которые увеличены и уплотнены. Слизистая носа, .глотки, трахеи воспалены и покрыты слизистое серозным и серозно-гнойным экссудатом. ,

В первой группе пал один ягненок, во второй - два, в третьей группе падежа но было.

С целью вышит' ния антител к вирусу парагриппа-3 наш были изуч-ны показатели антител в РТГА до начала эксперимента и в конце опыта. Установлено, что у ягнят первой группы фоновый показатель антител составил 2,9+0,1 2- Во второй группе ягнят (вводили толь-.о иммуностимулятор) титр антител к концу эксперимента достиг 7,6+0,2 У ягнят'третьей группы (введены вакцина и иммуностимулятор) фоновый показатель анвдтэл составил 3,2+0,2 1о'„2» а через месяц 8,8+0,2 В контрольной группе ягнят титр антител к концу эксперимента составил 6,9+0,1

Таким образом, одновременное введение вакцины "Паравак" и.

- 14 - ..

иммуностимулятора "Полиоксидоний" повышает иммунобиологическую реактивность животных и иммуногенность вакцины, что подтверждается снижением приживаемости гольминтов и болое высоким титром антител против вируса парагриппа-3.

Обсуждение результатов исследований Анализируя результаты исследований, полученных в ходе экспериментов, можно отметить, что клинические наблкщешш за подопытными животными показан: отсутствие температуры у животных всех подопытных групп за исключе1шем группа, зараженной вирусом ПГ-З и через 4 дня личинками диктиокаул. У этих ягнят в точение 6 дней показания температуры тола достигали 41,5 °С. По всей вероятности, сочетанное заражение животных вирусом ПГ-З и через 4 дай личинками диктиокаул способствовало более глубоко-■ ¡лу течению патологического процесса. В связи с этим проследим изменения в гемограмме крови.

Заражение животных всех групп сопровождалось лейкоцитозом. У животных, зарш-слипсс только вирусом ПГ-З пли личинками диктиокаул, количество лейкоцитов повышаюсь в первые дни и сос-. тавляло, в среднем, 3,0+0,5 - 9,8^1,6 тыс./мкл, в то время, как в группах, зараженных сочетаттем возбудителей, лейкоцитоз бил болео выражен и достигал 10,4+1,2 тыс./мкл к оставался высоким до конца найлкщениЯ (9,8+0,1 тыс./мкл).

Подобные изменения в динамике лейкоцитов отмечены к другими автораки, Так, по данным Т.Р.Корайлевой (1981), заражешю животных личишшмп диктиокаул и стафилококками также вызывает лейкоцитоз, сопровождающийся выраженной эозинофижей. М.Шах-мурзов (1980), заражая животных пастереллами и диктиокаулами,-наблюдал выраженный лейкоцитоз по сравнению с заражешюм живот--1шх чистыми культурами. Интересно обметить, что подъем лейкоцитов приходится на момент, когда улавливаются специфические антитела как при заражении вирусом ПГ-З, так и диктиокаулами. Отсюда можно констатировать, что организм борется с внедрением в Евго чужеродного агента.

Анализируя наши данные по динамике общего количества лимфоцитов, можно четко сказать, что заражение животных чистыми • культурами возбудителей вызывало'более выраженную реакцию со стороны хозяина, чем сочетаншми. Так, у ягнят, зараженных виру- . сом' ПГ-З, мы отмечали две волны подъема общего количества лимфоцитов на 11-й день до 9,5+0,7 тыс./мл и. 5,5+0,2 тыс./мл на 37-й день исследований. У животных, получивших вирус ПГ-З и че-.

роз 4 дня личинки диктиокаул, наблюдали умеренный лим$оцитоз до 8,0+0,2 тыс./мл, в то время как в первой группе (вирус ПГ-3 ' и .через 35 дней личинки диктиокаул) лттроцитоз доходил на 23 сут, до 8,0+0,2 тыс./мл и на 41-е сут. до 7,3+0,2 тыс./мл.

Мы предполагаем, что вирус ПГ-3 является в антигенном от-нотешш более сзлышм, чем личинки диктиокаул, поэтому наш и получена данная картина.

Расшифровывая иммунный статус на клеточном уровне, мы установили, что в динамике Т-лим]юцитов у ягнят, зараженных только вирусом ПГ-3, идет постепенное снижение Е-Р0К. Так, если до начала эксперимента количество Е-РОК составляло 0,9+ 0,1 тыс./та., то уже на 7-П-е дни их было 0,7+0,6 тыс./шел, а к концу эксперимента 0,38+0,1 тыс.Алел.

Получешше данные в отношении Т-Саистемы иммунитета и дана-шки Т-клеток при ПГ-3 отчетливо свидетельствуют об угнетении вирусом парагриппа-3 Т-клеточного звена иммунного ответа на разных стадиях развития болезни.

Несколько иная картина наблюдалась в группе животных, зараженных только диктиокаулами: в течение первых 7 дней количество Т-лклфоцитсв было повышенным до 1,2+1,3+0,1 тыс./мкл, в последующие дни исследований наблюдали снижение Т-клеток, которое достигло к 45-му дню 0,4+0,09 тыс./мкл. В дгагамико активности Г-системн при экспериментальном диктиокаулезе И.С.Канц-гина (1988), Т.Р.Кораблева (1989) отмечали подобное увеличение Т-лимфоцитов у зараженных штоишх, а с 20-го дня супрессию Т-системц. По всей вероятности, это евлзано с циклом развития гельминта в организме хозяина и иммунологической реактивностью последнего. Подобные работы проводились К.Л.Чемишкяном с соавт. (1974). Авторы указывают на то, что усиливающийся эффект иммунологической депрессии организма мышей при заражении их трихине л "тли , начиная с 22-х суток после заражения, достигает максимума к 42-му дшо исследований, что соответствует в первом случае окончанию периодаинтенсивной миграции личинок гельминтов, а во втором - завег'чешпо процесса инкапсуляции их в мышах.

В наших опытах в группах животных, зараженных вирусом ПГ-3 и личинками диктиокаул, отмечалось угнетение Т-системы иммунитета с начала и до конца экспериментов. Лишь в группе,"зараженной вирусом ПГ-3 и через 4 дня личинками -диктиокаул, были зафиксированы две волны подъема Т-лшифоцитов: на 23-й день опыта до 1,1±0,3 тыс./мкл и на 45-й - до 1,2±0,6 тыс./мкл.

- 16 -

Установлено, что у больных животных угнетение фунКционального состояния Т-систеш иммунитета наиболее выражено как в ранний,' так и поздний периоды болезни (Алексеева, 1988). В работах ряда исследователей (Даугалиева, Хаджиева, 1986; Лауга-лиева, Балоян/ 1989 и др.) показано, что для гельминтозом характерно увеличение количества Т-лимЬоннтов в первые дни после заражения, однако в дальнейшем авторы отмечали супрзсскв иммуно-компетентных клеток. Этим ш можем объяснить первую волну увеличения Т-лимфоцктов.

При изучении изменений Т-кле точкой популяции лимфоцитов на субпопуляционном уровне нш.гл установлено, что супрессивному состоянию иммунной системы в организме животных, зараташшх « ПГ-З и личинками диктиокаул, так и ягнят, зараженных ПГ-З и через 4 дня личинками диктиокаул, предшествует активация теофлл- • линчувствительных лимфоцитов - Т-киллеров и Т-супрессоров.

Механизмы, лежацие в основе иммунологической супрессии, изучены не полностью. Очевидно, что в процессе ее формирования принимает участив целый комплекс факторов. К ним относится и • нарушение функции макрофагов, в связи с чем они не ;,:oiyr полностью представлять антигены, а также нарушение циркуляции рас-" творимах антигенов и угнетение лимфоцитов, связанных с факто- • ром, способным агглютинировать, а затем убивать лимфовдкыв ' метки ( . PùSijVjUa. J.976; Cjjiroii, 1976; î'uubert «t ïannei» 1975 и др. ). Однако,' целым рядом учоннх установлено, что Тфч-РОК увеличиваются но только за счет супрессорной субнолуляции, но и за счет цктотаксичееких Т-яиифоциов (ЦТЕ).

В нашем эксперименте снижение абсолютного количества Т-хе-лперов в периферической крови овоц установлено у животннх, за--раженных только вирусом ПГ-З. У животных, зараженных только личинками диктиокаул, на 3-й и 7-й тл отмечали увеличение Т-хе-лперов до 0,7+0,01 тнс./мкл с последующим снижением до 0,3+' 0,1 тыс./мкл, а у. животных, зараженных сочетанием возбудителей, коли.аство. Т-хелперов увеличивалось до 1,0+0,2 .тыо./мкл и' 0,6+0,2 тыс./мкл на 3-Я и 15-й дни, болезни. Подобные изменения в динамике Т-хелперов мы можем' объяснить лишь гетерогенностью субпопуляций Т-лимфоцитов и многостадийноетыо кх развития, которые обуславливают многообразие форм проявления заболовачий.

Таким образом,, хелперно-супрзеооркые механизмы Т-лим5оци-тов являются одним из решатадах факторов в отношениях в системе "паразит-хозяин".'

- 17 -

Результаты наших исследований доказали, что заражение животных только вирусом ПГ-З и личинками диктиокаул вызаааег ' подъем макрофагов на 3-й дзкь после заражения до 35-38 %, а затем их снижение. ■

Включе;гае ^морального звена в иммунный ответ на антигены сопровождается активацией В-лии$оцитов. Следуе* отметать, что заражение животных только личинками диктиокаул сопровождается повышением количества В-лимфоцитов. Затем происходит постепенное снижение их количества. 3 динамике В-ликроцитов при заражены! животных только вирусом ПГ-З тлеются две волны увеличения их количества: в точение первых 7-и дней количество ЕЛС-РОК достигало 0,6+0,2 тыс./мкл и на 23-й день - 0,4+0,2 тыс./шел. В группах животных, заражетш личинками диктиокаул и через 35 дней вирусом ПГ-З, увеличение В-ооСлфоцитов приходилось на 15-й день после заражения. Полученные наш данные об активации В-систеш иммунитета подтверждают исследования ОзпЧггОю е<..а1, (1982).

Наши данные по динамике В-дглфоцитов отличаются от результатов исследований, получениях К.С.Балаяном (1987). Изучая кинотику Е-димфоцитов при сгронгклятозах овоц (однократное заражение), автор констатироват вначале повышенно их количества, а затем постепенное снижение ЕАС-РОК. Угнетение В-систеш иммунитета игл1 установлено при перманентном заражении ягнят стронгиля-тами, что автор объясняет образованием большого количества В-супрессоров и коррелирует с тякостыо течения патологического процесса. Мы не можем согласиться с автором, что введение большой дозы антигена угнетает ЕЛС-РОК. Кдк показано в работе

с соавт. (1984), высокая концентрация антигена стимулирует определенную субпопуляциы Т-клеток к продукции неспеци-фичоских хелперных факторов, которые активируют В-клетки -5+ (аитигенспецифична).

Изучение изменений соотношения классов иммуноглобулинов в процессе развития болез1ш показало, что разные данные по последовательности вкпчения иммуноглобулинов обусловлены, по-видимому, тем, что животные были заражены различными видами паразитов. Наиболее выраженные изменения были констатированы у ягнят, зараженных только личинками диктиокаул или сочетанием диктиокаул и вируса НГ-3. •'

Наблюдения большинства исследователей'показали, 'что изменения в концентрации иммуноглобулинов М и 6 свидетельствует о

стимуляции ашжгэннкм началом плазматических клеток, продуцирующих класс этих иммуноглобулинов.

Интересны результаты, полученные нами в динамике специфи-чесптх антител в РТГА на антиген из вируса ИГ-З. Следует подчеркнуть, что антитела к вирусу ПГ-З бе1лвились во все:: группах, которые были заражены вирусом ПГ-З с З-го-4-го дня. Наивысший титр был в группе, зараженной чистой культурой вируса ПГ-З. Аналогичная картина получена и в группе животных, зараженных личинками диктиокаул. Антитела прошв диктиокаул в РИГА появились на 7-й день и достигли максимума на 37-й день в титре 7,7 1ч,-2« в группах, зараженных сочетанием возбудителей, титры антител бшл! значительно ниже, особенно на антиген из диктиокаул. Следует указать, что факторы, угнетающие антителогелез, находятся под стропил генетическим контролем, механизм которого полностью но расшифрован.

Анализируя данные, полученные в результате патанатомичос-кого вскрытия, мы констатировали различную приживаемость гельминтов в группах животных, зараженных только личинками диктиокаул и одновременно вирусом парагриппа-З и диктиокаулами.

Интересно отметить, что в группе животных, зараженных личинками- диктиокаул и через 35 дней вирусом ПГ-З, количество гельминтов было одинаково с пятой группой животных, т.е. зараженных личинками диктиокаул. Однако, в тех группах животных, где было заражение первично вирусом ПГ-З или одновременно с гельминтами количество диктиокаул бшю несколько меньше, но размер их оил больше и патогешшй эффект усиливался.

В связи с этим в настоящее время начат поиск и совэршенст-вовашю средств и способов стимуляции иммунной системы, т.о. сочотанил специфической профилактики с иммуностимулирующим эффектом. Это направление является наиболее важным и перспективным в современной иммунологии.

Наши исследования по испытанию вакцины "Дарован" и пммуно-модул-хтора "Полиоксидонпя" при сочотайном заражении животных вирусом ПГ-З и личинками диктиокаул указывают, что одновременное введение вакцины "Паразак" и иммуномодулятора снижает прит живаемость гельминтоз в 4 раза, притом у 2-х ягнят гельминты отсутствовали, введение же одного стимулятора снижает приживаемость гельшнтов та1? же, как введение только вакцины "Паразак"', но меньше.

- 19 -

ВЫВОДЫ

' I. Иммунобиологическая реактивность ягнят при парагрип-пэ-3 и диктиокаулезе п'чазала, что выраженность иммунного ответа определяется последовательностью попадания возбудителя в организм хозяина.

2. Заражение животных только вирусом парагриппа-3 сопровождалось лейкоцитозом дс '7,5+0,2 тыс./мкл, снижением количества Т-^имфоцлтоп о 0,9+0,02 тыс./мкл до 0,4+0,03 тыс./мкл, увеличением количества Т-супрессороЕ до 0,6+0,02 тыс./мкл, снижением количества Т-хелперов', увеличенном макрофагов до

35 увеличением количества В-лшл^оцитоз до 6,0+0,2 тыс./мкл.

3. .Сочетанное заражение животных вирусом парагриппа-3 и личинками диктиокаул вызывает более выраженные сдвига в иммунной системе со стороны Т- и В-лим5оцптов, макрофагов и иммуноглобулинов.

4. Сочетанное заражение животных вызывает угнетение специфических антител как к антигенам вируса парагриппа, так и ■' диктискаулезнкм в течете всего периода наблюдений.

5. Введение иммуностимулятора "Полцоксцдошй" и закцины "Паравак" способствует стимуляции у ягнят как Т-, так и В-сис-тем иммунитета и повышает ее ншуногшяую активность.

Р. Одновременное введение иммуностимулятора "Полиоксидо-ний" и'вакцины "Паравак" снижает приживаемость гельминтов в четыре раза и повышает иммунобиологическую реактивность животных.

Практические предложения.

1. Разработанные нами предложения включены во "Временное наставление по применешпо полиоксидония дая профилактики и лечения болезней сельскохозяйственных животных", утвержденное Еаавным улраъяени, л ветеринария 01.10.91 г. й 044-3. -

2. С целью повышения общей резистентности организма и иммунных свойств вакцины против дарагрипла-З рекомендуем ее применение с одновременным введением ик^ностимулятора "Полиокси-доний".

3. При определении иммунных сеойств препаратов руководствоваться "Методическими рекомендациями по изучению механизма иммунитета при гельминтозах и определению та^упша свойств препаратов", утвержденными васхшл, 05.09.90 "г.

- 20 -

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Иммунобиологическая реактивность ягнят при экспериментальном парахриппе-3 и диктиокаулэзе. Тезисы докладов на Всесоюзной научно-технической конференции "Профилактика и леченио болезней молодняка сельскохозяйственных животных", г. Зоронелс, 9-10 октября 1991 г. •

2. Динамика иммуноглобулинов при экспериментальном парагриппе и диктиокаулезе. Тезисы докладов на Всесоюзной научно-технической конференции "Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохозяйственных животных", г. Воронеж, 9-10 октября 1991 г. •

3. Иммунокоррокция щи профилактике парагриппа-3 и дпктио-" каулеза овец. Доклад на международном семинаре "Проблем моде. лировшшя патологических процессов у человек л животных и го-

пытание биологически активных препаратов", Санкт-Петербург, 19-21 октября 1992 г.

2ак. V.) - 1.25п.л. - ГОР экз.