Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Иммунизация глубокостельных коров ассоциированной инактивированной вакциной с целью профилактики диарей новорожденных телят

м » . ••

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ . МОСКОВСКАЯ ВЕЩРИНАРНАЯ АКАДШ1Я им. К:И.СКРЯБИНА

На правах рукописи

* /

ИСМЕТШОВА ФИРДАВСЕ МАРУФОВКА

ИММУНИЗАЦИЯ ГЛУБОКОСШЬНЫХ КОРОВ АССОЦИИРОВАННОЙ ИНАКГИВИ-РОВАННОЙ ВАКЦИНОЙ" с' ЦЕЛЬЮ ПРОФИЛАКТИКИ ДИАРЕЙ НОВОРОВДЕННЫХ • • ТЕЛЯТ

^6.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

.1

диссертации на соискание ученой степени ' кандидата ветеринарных наук

МОСКВА - 1994

Работа выполнена в Московской ветеринарной академии имЗ К.И.Скрябина.

Научный руководитель: доктор биологических наук Воронин £.С.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук Бурлаков В.А.

кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник Булавина М.В.

*

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко

Защита состоится " / " С&^Р. -С-'^-' 1994 г. в часов

на заседании специализированного совета К 120.36.05 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук в Московской ветеринарной академии им.К.И.Скрябина (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23, тел. 377-93-Ъ3).

С диссертацией мохно ознакомится в библиотеке академии.

Автореферат разослан 1994 г.

, профессор

, профессор

Ученый секретарь специализированного совета

Федосеева Т.Н.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Интенсификация производства продуктов ;хи— водноводства, перевод его на промышленную основу выдвигают перед ветеринарной наукой и практикой новые проблемы по вопросам повышения эффективности специфических профилактических мероприятий в борьбе с инфекционными болезнями молодняка крупного рогатого скота, в частности, с диареей, заболеваемость которой на молочных фермах и комплексах достигает 60-85%, а падеж -15-70% от числа заболевших (Сидоров М.А. ,-19Ы; Зароза В.Г., I9B4; Кассич А.Ю., 1986; Колесниченко И.Д., 1987 и др.).

По мнению Волонец Л.К., Ковальчук Л.И.(1979), Лысенко Л.П., Андреева 0.С.(1980), Сидорова М.А.(I960) две трети потерь телят приходится'на-первую недели их жизни. Поэтому остается еще недостаточно решенной проблема изыскания эффективных и технологичных по своему применению средств профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка. Известно, что у новорожденных телят в неонатальный период основная роль в противоинфекционной защите организма играет молозиво. Колостральный иммунитет, приобретенный молодняком крупного рогатого скота от естественно переболевших или вакцинированных коров-матерей, является одним из важных механизмов, выработанных в процессе эволюции животных,и надежным средством специфической'защиты молодняка в первые дни жизни от ряда инфекций (Федоров Ю.Н., 1988; Сидоров М.А., 1967; Седов В.А., Бойко A.A., 1991 и др). Напряженность колострального иммунитета у телят зависит от иммунологического состояния матери, показателем которого является уровень сывороточных и ыолозивных антител (Коваленко Я.Р,, Федоров Ю.Н. и др., 1975; Федоров Ю.Н., 1981; Баранов O.K., 1988). Поэтому многие исследователи рекомендуют вакциниро- * вать коров в поздней стадии стельности с целью накопления высокого 'уровня антител в' молозиве, которые резорбируются у новорожденных из пищеварительного тракта в кровь в неизменном виде в первые •24-36 часов жизни (Холод' В.М., 1983).

В настоящее врёмя для создания колострального иммунитета у ' новорожденных телят в практике используют вакцины против колибак-тариоза и сальмонеллеза. Однако, эти препараты могут.быть малоэффективными, так как в практике чаще острые кишечные заболевания вызывают не отдельно взятые бактерии, а ассоциации условно-пато-*

генной микрофлоры (Воронин Е.С. и др., 1986; 19Ь9). Распростр^не-колибак'тернозной, сальмонеллезной, клебсиеллезной и протейной инфекции телят приводит к необходимости создания.нового поколения вакцин, вклюи^идих антигены возбудителей этих болезней.

Кроме того, представляет практический интерес использование '.'.ммуномодуляторов для повышения иммунного ответа организма на введение вакцин.

Цель и задачи исследований. Изучить эффективность ассоциирование" инактивированной вакцины против колибактериоза, сальмонел-леза, клебсиеллеза и протейной инфекции с целью профилактики диарей новорожденных животных.

На основании вышеизложенного нами были поставлены следующие задачи:

1. Изучит'ь защитные свойства ассоциированной инактивированной вакцины как отдельно, так и в сочетании с иммуномодуляторами (Ти Б-активином) на лабораторных животных.

2. Изучить иммуногенную и антигенную активность ассоциированной инактивированной вакцины при раздельном и сочетание;.! ее применении с Т-активином на стельных коровах.

3. Изучить эффективность вакцины и уровень колострального иммунитета у новорожденных.телят, полученных от вакцинированных корой.

4. Изучить в динамике состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта телят, полученных от вакцинированных коров-матерей.

Научная новизна. Впервые дана комплексная оценка ассоциированной инактивированной вакцины против колибактериоза, сальмонелт леза, клебсиеллеза и протейной инфекции молодняка крупного рогатого скота. Установлено повышение иммунного ответа животных на введение как экспериментальной ассоциированной инактивированной вакцины, так и вакцины совместно с Т-активином. Изучена динамика заселения кишечной микрофлорой приплода, полученного от вакцинированных коров-матерей, в первые дни жизни.

Практическая значимость работы. Полученные данные позволяют рекомендовать ассоциированную инактиаированную вакцину для двукратной иммунизации стельных коров с целью профилактики приплода от острых желудочно-кишечных болезней. Возможно'однократное применение препарата для стельных коров совместно с Т-активином.

Материалы диссертации вошли в НГД (шетрукция по изготовле-

нню, технические условия на ассоциированную инактивированную вакцину против колибактериозной, сальмонеллезной, клебсиеллезной и протейной инфекции молодняка. Разработаны дополнения к Временному наставлению по применению данной вакцины.

Апробация работы. Основные положения дийсертации доложена, обсуждены и одобрены на отчетной научной конференции Московскс:» ветеринарной академии в IS92, 1993 г.

'Публикация научных исследований. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литература'материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, рекомендаций по использованию научных'выводов, списка литературы и приложения. Список использованной литературы включает 177 источников, в том числа 47 иностранных авторов. Материалы иллюстрированы 12 таблицами, б рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЙ ИССВДОВАНЩ 2.1. Материалы и методы исследований.

Экспериментальная.часть работы выполнена на базе научно-исследовательской лаборатории болезней молодняка сельскохозяйственных животных Московской ветеринарной академии им.К.И.Скрябина и в совхозе "Ямской" Домодедовского района Московской области в- период с 1991 по 1993 гг.

Опытные серии изучаемой вакцины били изготовлены в НИЛ болезней молодняка МВД. и на базе Нижегородской НИИ эпидемиологии и мик-робирлогии МЗ PS:' »

В испытуемую.ассоциированную инактивированиую Вакцину входили следующие производственные штаммы:к.coli 09«К99; ¿¡.coli 0381 К 88; К.coli OII9» К.pneumoniae II 842» К.pneumoniae N 12} P.mira-bilie I 26; P.vulgaris Я 135; S.enteritidie H I433( S.dutlin N1976 S.typhiaurium К 2269, обладающие комплексом факторов патогенности.

Морфологические, тинкториальные, культуральные, ферментативные и вирулентные свойства культур, входящих в состав вакцины, а также бактерий, выделяемые от больных телят, изучали по стандартным -методикам. Культуральные свойства энтеробактерий изучали по'

типичности роста на дифференциально-диагностических средах: Эн-до, Пдоскирева, висмут-сульфит агар, МПА, ШШ, 5/5-ный кровяной агар, а также селективные среды ¿.IPC—2 и Ьлаурокка для выделения предегавительй анаэробной микрофлоры (лакто- и бифидобактерий).

количественный анализ микрофлоры кишечника новорожденных телят проводили согласно методике Р.В.Эпштейн-Литвак и Ф.К.Вильшан-сксй (19с9) в модификации К.Я.Соколовой (1972).

Идентификация энтеробактерий проводилась с использованием систе ■• индикаторных бумажных (СИБ) и пластин биохимических дифференцирующих энтеробактерий (ПЬДЭ), разработанных в Нижегородском ЩА эпидемиологии и микробиологии МЗ

Иммуногенную активность ассоциированной инактивированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеэа, клебсиеллёза и протейной инфекции молодняка крупного рогатого скота предварительно испытывали на лабораторных животных (белые мыши), как в сочетании с 'Г- и В-активинами, ■ так и без них. В опыте изучаемые препараты -ассоциированная инактивированная вакцина и иммуномодуляторы применялись двукратно с интервалом 12 дней. Лабораторные животные были разбиты на'8 опытнцх и 8 контрольных к ним групп. Пять опытных групп по 9 голов мышей в каждой иммунизировали ассоциированной, инактивированной вакциной против колибактериозной, сальмонеллезной, клебсиеллезной и протейной инфекции молодняка крупного рогатого скота в дозе 0,1 мл подкожно. Через 14 дней после ревакцинации животных 4-х опытных и контрольных к ним групп заражали внутри-брюшинно отдельно подтитрованными культурами Е.coli, P.mirabilie, К.pneumoniae, S.dublin каждой в дозе 8 ЛД^ в объеме 0,5 мл, а животных- пятой группы заражали смесью вышеуказанных культур в той же дозе.

Следующие 3 группы опытных животных также иммунизировали двукратно ассоциированной инактивированной вакциной. С целью изучения иммуностимулирующего действия всем мышам этих групп применяли иммуномодуляторы (Т-, ß-, Т+В-активины) в дозе 0,1 мл каждого иммуномодулятора в течение трех дней подряд после каждой вакцинации. Через 14 дней после ревакцинации подопытных животных всех 3-х групп заражали внутрибрюшинно той же смесью, что и в предыдущих группах. ■

Иммуногенность ассоциированной инактивированной вакцины изучали на глубокостельных коровах черно-пестрой породы и телятах,

полученных от них. Животных отбирали по принципу аналогов и содержали в одинаковых условиях. Было сформировано 3 группы: две опытных и одна контрольная по 10 голоа в каждой. Первую опытную группу животных прививали ассоциированной инактивированной вакциной согласно временному наставлению по применению. Вакцину вводили подкожно в области средней трети шеи в дозе 7 мл; ревакцинацию проводили через 10 дней в той же дозе.

"Вторая опытная груша коров также была привита ассоциированной инактивированной вакциной в выше указанной дозе, но в соче- латании с Т-активином из расчета 0,03 мл/кг. Животным данной груп- 1 пы препараты вводились однократно.

Контрольную группу животных иммунизировали коммерческими вакцинами против колибактериоза и сальмонеллеза в дозе 10 мл, ревакцинировали их через 10 дней в дозе 15 мл.

У всех животных пробы крови для исследования брали в динамике: до начало опыта и через каждые 10 дней после иммунизации. Пробы молозива отбирали в течение первых трех дней после отела. Кровь у телят брали из яремной вены до получения ими первой порции молозива, а затем через 24 часа и на 10-, 15-, '¿0-е сутки после рождения.

В сыворотках крови коров и телят, а также в молозиве изучали динамику накопления специфических антител с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) с применением эритроцитарных 0-диагностикумов.

Уровень иммуноглобулинов класса (г и ¡1 в тех же пробах определяли по Манчини согласно "Методическим указаниям по тестированию естественной резистентности телят", (1960).

Выделение, культивирование и идентификацию кикрофлоры кишечника телят на 3-я 5-, 7-, 10-е дни жизни проводили согласно "Методическим рекомендациям по выделению и идентификации условно-патогенных энтеробацтерий и сальмонелл при тэстрых кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных", (1990).

Статистическую обработку результатов исследований проводили согласно методике Баша Ю.К.(1989).

2-329

¿.2. Р^ЛЬГАШ И^ОадОВАНИИ -

'¿.'¿Л. Иммуногенная активность ассоциированной инактивированной вакцины в опытах на белых мышах.

На перьом этапе работы были проверены морфологические, тинк ториальные, культуральные, ферментативные свойства культур энте-робактерий, используемых в ассоциированной инактивированной вакцине.

Полученные данные свидетельствовали о типичности свойств штаммов, входящих в состав экспериментальной ассоциированной инактивированной вакцины для того или иного рода энтеробактерий: эаирихии, сальмочелл, клебсиелл, протея.

При изучении иммуногенности- экспериментальной вакцины на белых мышах было установлено, что после их заражения бактериальными монокультурами Е.со li, P.mirabilis,К.pneumoniae профилактичв! кая эффективность составила - 100%, а в группе, где мншэй заражали s.dublin - 88,9%. В группе, где животных заражали смесью вышеперечисленных культур, эффективность составила - 88,9$. В контро. них группах все животные погибли. В группах, где использовали ассоциированную инактивированную вакцину с Т-активином, а также coi местно с Т- и В-активинами, при заражении смесью культур профила1 тиче'ская эффективность составила - ЬЬ,9/ь. В группе животных, кот< рьм вводили экспериментальную вакцину в сочетании с В-активином, профилактическая эффективность составила - 77,Ь%.'

При бактериологических исследованиях патологических материалов от павших животных, зараженных как отдельными культурами, та] и их смесью, были выделены исходные штаммы: E.coli, P.mirabilis, К.pneumoniae, S.dublin.

Таким образом, двукратная иммунизация лабораторных животных ассоциированной инактивированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и протейной инфекции обеспечивает - 88,9% -JOOiÎ профилактическую эффективность. Одновременное введение ассоциированной инактивированной вакцины с иммуномодуляторами Т- и В-акти-вина не повышала ее иммуногенность.

2.2.2. Изучение антигенной и иммуногенной активности экспериментальной вакцины на стельных коровах.

Антигенную активность ассоциированной инактивированной вак-

цины определяли с помощью рэакции непрямой гемагглэтинацп/ к бактериям, входящих в созтав вакцины, в сыворотках крови привитых гсоров-матерей и их приплода, а также в .сыворотках молозива, полуденного в течение трех дней после отела. В ходе исследований бы-ю выявлено, что в сыворотке крови коров всех групп до иммунизации уровень антител к антигенам составил: E.c&i 4,50 - 0,29 -1,70 ± 0,56 (log 2), Proteus 5.50 ± 0,64 - 5,55 ± 0,24(log2 ), ileüsiella 5,40 - 0,34 - 5,44 ± 0,29(Xog2 ) .Salmonella 5,40 ± >,40 - 6,50 ± 0,3I(log2 )• На 10-й день после иммунизация в олыт-шх группах отмечали достоверное увеличение титра антител ко всем щтигенам. У животных; иммунизированных испытуемой вакциной в со-[втании с Т-активином увеличение уровня антител было более внра-:енным, чем у животных, привитых только ассоциированной икактизи-юванной вакциной, что составило: E.cdLi 6,22 £ 0,32(log2), Proeue 7,77 1 0,27(log2 ), Klebeiella 8,00 ± 0,29( log2), Salmonella 8,44 - 0,I8(log2 ^соответственно. В контрольной группе наблю-¡али незначительное повышение титра антител E.cdli 5,12 - 0,23 log2 ), Salmonella 5,87. i 0,44(log2 ) по сравнению с фоновым и опытными группами.

При исследовании, сыворотки крови коров на 20-й день наблюда-и более интенсивное увеличение уровня антител у животных, имму-изированных двукратно ассоциированной инактивированной вакциной ез иммуномодулятора по отношению к фону. При этом титры антител E.coli составило 6,70 ± 0,37(log2 ), Proteue 7,66 - 0,29(log2), lebaiella 7,44 ± 0,34( log.,), Salmonella 6,11 ± 0,3I(l?g2) оответственно.

Таким образом, двукратная юшунизаияя глубокостельных коров зучаемой вакциной обеспечивает выработку-достаточно высокого ровня специфически^ антител. Применение иммуномодулятора Т-акти-ина совместно с вакциной приводит к такому же уровню образования пёцифических антител, но при однократной иммунизации.

Уровни иммуноглобулинов в сыворотке крови коров у всех трех. рупп до вакцинации были'практически одинаковыми. При этом содер-ание иммуноглобулина (г колебалось по группам от 18,4 - 0,4 до Э,7 - 0,6 мг/мл,ig М-от 4,5 - 0,4 до 5,4 ± 0*4 мг/мл, что соот-зтствовало физиологическим показателям животных, приведенных в »боте Емельяненко П.Л.(I960), Асламова В. 11. и др.*(1990). После зрвой иммунизации в опытных группах наблюдали незначительные

)

вменения концентрации иммуноглобулинов класса О л II по сравф-ю с фоновой. В контрольной группе наблюдали увеличенче только иммуноглобулина О. После ревакцинации животных во всех группах отмечали достоверное увеличение 1& в.

Концентрация М в крови коров после двукратной иммунизации вакцинами существенно не изменялась во всех группах и составила: в первой группе 4,6 - 0,1 ыг/мл, во второй группе 5,0 ± 0,3 мг/ ыл, в третий группе-5,6 - 0,2 мг/мл. Это объясняется тем, что пробы кречи Орали на 10-й день после введения вакцины, а максимальный пик концентрации иммуноглобулинов этого класса приходится на более ранние сроки (Емельяненко П.Л., 1980; Пашнус Ю.К., 1987).

Таким образом, при вакцинации происходит постепенный рост уровня иммуноглобулинов Класса О,- наиболее выраженный при двукратном применении ассоциированной инактивированной вакцины против колиСактериоза, сальмонеллеза, клебсиеллеза и протейной инфекции молодняка крупного рогатого скота. При совместном применении ассоциированной инактивированной вакцины с иммуномодулятором не отмечали существенных изменений содержания 1е О в сыворотке крови.

В молозиве динамика содержания О и М была иной, чем в' сыворотке крови.

Максимальную концентрацию иммуноглобулинов & и М в нам во всех группах отмечали в первый день лактации: в первой опытной группе 5 32,6 - 6,3 мг/мл,15 М 11,1 - 1,6 мг/мл, во второй опытной группе 1е О 57,9 £ 5,6 мг/мл, М 12,0 ± 0,9 мг/мл, в контрольной группе 1е й 44,2 * 8,9 мг/мл, М 14,7 ± 0,8 мг/ыл . соответственно. В последующие дни наблюдали достоверное снижение' количества иммуноглобулинов обоих классов во всех группах по отношению к первому дню лактации.При сравнении показателей, характеризующих концентрацию иммуноглобулинов класса О в молозиве в опытных группах, можно отметить, что в первые три дня лактации наибольший их уровень был в группе коров, которых иммунизировали экспериментальной вакциной в сочетании с Т-актизином. Если Т-ак-тивин не оказывал существенного влияния на содэртание иммуноглобулина 0- в сыворотке крови иммунизированных коров, то в молозиве как раз и проявилось ого влияние на концентрацию З'с 0>,

Уровень иммуноглобулина М б молозиве на II и III день лактации у. первой опытной группе составил 5,4 - 3,8 ыг/мл; 3,1 - 0,9 мг/мл, во второй опытной группе - 7,7 ± 1,3 мг/мл, 4,5 ± 0,7 иг/ мл соответственно. В контрольной группе он составил во второй

день 7,2 - 2,0 мг/мл, в третий день 3,9 -1,2 мг/мл.

Таким образом, наивысшие показатели уровни иммуноглобулинов в молозиве были получены при совместном введении экспериментальной ассоциированной инактивированной вакцины с Т-актипином. Этот иммуномодулятор не только стимулировал более высокую концентрацию .иммуноглобулинов, но также поддерживал этот высокий уровень в течении трех дней после отела, что является немаловажным для телят.

Наивысший титр антител отмечен в молозиве первого дня лактации.К антигенам E.coli он составил 8,20 ¿ 0,49 - 9,17 i 0,31 ( los 2),Proteus 9,00 ± 0,26 - 9,50 ± 0,56(log2), Klebsiella 8,66 í 0,2i - 9,33 ¿ 0,33(log2), Salmonella 8,00 ± 0,45 - 9,33 ± . 0,6I(loß 2). В последующие дни лактации отмечали снижение титра антител по отношению к первому дню, причем у животных контрольной группы более интенсивное, чем в опытных группах.

Таким образом, наиболее высокий уровень антител был в молозиве коров, двукратно иммунизированных ассоциированной инактивированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза, клебси-еллеза и протейной инфекции молодняка крупного рогатого скота.

2.2.3. УроЕень колостралышх антител у новорожденных те-.' лят, полученных от иммунизированных корой.

Для характеристики колострального иммунитета новорожденных телят, полученных от иммунизированных коров-маторой, определяли титр специфических антител к антигенам ( E.coli, Frctnin, Klebsiella, Sjilnonella ) и содержание иммуноглобулинах; класса G и М.

При исследовании сыворотки крови новорожденных телят до выпойки первой порции молозива антитела к выше перечисленным антигенам не обнаружили. Через 24 часа после приема молозива у нойо-' рожденных телят установлен максимальный уровень антител. Причем у телят, полученных от коров, привитых экспериментальной ассоциированной инактивированной вакциной, уровни антител к E.coli. Proteus, Xlobsiolla были выше, чем у телятполученных от коров, шшунизированних коммерческой вакциной. Уровень колостральннх антител у тзлят II опытной и III группы (т.е. контрольной) существенно но отличался по отношении к E.coli и S'alrsopolla , хотя в' первые сутки наблюдения титр антител несколько был выше во II •

опытной группе. Снижение уровня антител отмечали на 10-е сутки у животных всех групп после рождения; у телят первой группы он сохранялся на более высоком уровне.

Параллельно определению титров специфических антител в тех же пробах в сыворотке крови телят выявляли концентрацию иммуноглобулинов класса С и Л.

В результате проведенных исследований установлено, что большая концентрация иммуноглобулинов в сыворотке крови телят была отмечена через-24 часа после рождения, так же как и титры специфических антител. Причем у приплода, полученного от коров, иммунизированных только одной ассоциированной инактивированной вакциной, уровень иммуноглобулинов был ьыше, чем в остальных группах: 1е С 23,65 - 4,14 мг/мл. С 10-х суток и в последующие периоды исследований в сыворотке крови наблюдали снижение количества иммуноглобулинов класса С. Однако в группе телят, полученных от коров, иммунизированных ассоциированной инактивированной вакциной с Т-активином высокий уровень 1в_ С сохранялся более длительное время.

• Таким образом, приведенные данные' свидетельствуют об исключительно важном значении колострального иммунитета в. профилактике диареи телят. КолостральныЙ иммунитет достигается своевременной выпойкой телятам молозива, содержащего высокий уровень иммуноглобулинов С и Ч, а также специфических антител, что подтверждается клиническими наблюдениями. Необходимо подчеркнуть значение со-четанного введения Т-активина с ассоциированной инактивированной вакциной, при котором однократное, применение их способствует не только достижению высокого уровня иммуноглобулинов, но и более длительному сохранению этого уровня у приплода..

Новорожденным животным выпаивали через ЗО-ЬО мин после рождения молозиво матерей из сосковых поилок. Телята получали молозиво и молоко матерей до Ю-дневного возраста, в дальнейшем кормление" проводилось сборным молоком.

Приплод, полученный от иммунизированных коров, до-20-дневно-го возраста подвергался ежедневному клиническому осмотру. При этом учитывали: общее состояние организма, состояние видимых слизистых оболочек, шерстного покрова, наличие или отсутствие аппетита, консистенция и цвет фекалий, при наличии диареи ее продолжительность. •

Клинические наблюдения показали, что в первой опытной группе из 10 народившихся телят, от вакцинированных испытуемо;"! вакциной коров, заболело 5 гол. заболевание характеризовался кратковременной диареей алиментарного характера. В дальнейшем клиническое состояние телят норг.'-'лизовалось и оставалось без изменений. У одного теленка заболевание носило более тяжелый характер, с выделением жидких каловых масс (профузный i.ohoc) на 4-5 День с примесью слизи и крови. Проведенное симптоматическое лечение не обеспечи- , ло улучшение общего состояния организма. На 8-1<: день отмечали сильное обезвоживание, признаки характерные для токсикоза. Геленок пал на,13 сутки. При бактериологическом исследовании были выделены непатогенние энтеробактерии и Ре. aeruginosa патогенная для лабораторных животных.

У 4 телят второй опытной группы наблюдали слабое расстройство желудочно-кишечного тракта на 5-6 сутки жизни. При этом кал был полностью не сформирован, соломенного или темного цвета. В • последующие дни отмечали улучшение клинического состояния животных. Однако, один теленок был вынужденно убит на 15 день жизни из-за получения травмы (перелом конечности). При бактериологическом исследовании не выделили патогенную кишечную микрофлору.

В контрольной группе телят (10 голов), полученных от коров вакцинированных коммерческими вакцинами, заболеваемость диареей' составила I00&, пало 4 животнкх. В данной группе животные пере-болевали в тяжелой форме. Продолжительность болезни составила 710 дней. У больных телят контрольной группы общее состояние было угнетенным, отсутствовал аппетит, видимые слизистые оболочки были бледными. Отмечали потери эластичности кожи и блеска шерстного покрова, усиление перистальтики и появление поноса, часто профуз-ного с выделением жидкого зловонного кала с пузырьками газа, примесью слизи, резкое угнетение, сонливость, мышечную дрожь.

Для изучения динамики микрофлоры кишечника у новорожденных телят опытной и контрольной групп проводили бактериологические исследования фекалий на видовой и количественный состав микрофлоры на 3, 5, 7, 10 дни жизни животных.

При бактериологическом исследовании телят I опытной группы, было установлено, что на 3 денг. их лизни в I г фекалий содзржа-лось 2.со 11 '¿,16 х Ю8кл/г, P. vii-bilis ■ Ю3кл/г.

У телят II опытной группы через 3 дня после рождения коли-

чество микроорганизмов в I г фекалий составило E.coli 2,69 х Юикл/г, К. pneumoniae 1,14 х Ю3кл/г, P. mirabilie 102кл/г. В контрольной группе телят из фекалий выделили E.coli в количестве 6,25\х 10 кл/г, P. mirabilie 104кл/г, С. freundii 6 х Ю^кл/г. При бактериологическом исследовании кишечного'содержимого У телят двух опытных групп выявляли лактобактерии в количестве Ю^кл/г, бифидобактерий - Ю^кл/г, тогда как в контрольной группе-' их количество составило 10^ - Ю^кл/г соответственно.

На 5 дэнь жизни телят I опытной группы количество E.coli' составило В,16 х 10Йкл/г, P. mirabilie . 5,7 х Ю4кл/г. У животных II опытной группы количество E.coli в I г фекалий составило 6,51 х Ю^кл/г, К. pneumoniae Ю^кл/г. В контрольной группе телят из фекалий выделили E.coli в количестве 8,0 х Ю^кл/г, С. freundii 1,33 х 106кл/г, P. mirabilie Ю7кл/г.

К 7 дню жизни телят опытных групп кишечная палочка выделялась $ количестве 7,3 - 8,4 х Ю^кл/г, тогда как в I г фекалий Proteus и citrobaoter было нёзначительным. В контрольной группе телят количество Е.со 11", С. freundii, P. mirabilie в фекалий было в пределах 10^ - Ю^кл/г. Одновременно выявлено в •I и II опытной группе повышение уровня лактобактерий до 10°кл/г и бифидобактерии 10®кл/г. В контрольной группе их количество составило 10^- 10Ькл/г соответственно.

В возраст© 10 дней в фекалиях телят опытных групп выделили . кишечную палочку в количестве 1,65 х 10®кл/г. Во*ii опытной группе кроме кишечной палочки выделили Pjuirabili* Ю^кл/г. В контрольной группе E.coli составило 2,8'х Ю^кл/г, С. freundj.! jp? кл/г. Содержание лакто- и бифидобактерий в фекалиях телят в опыт-, ных группах удерживались в пределах,10^- 10 кл/г, что способствовало восстановлению нормальной микрофлоры кишечника. В контрольной же группе количество лакто- и бифидобактерии составило - 10® кл/г, 10 кл/г соответственно.

Процесс становления кишечной микрофлоры у здоровых новорож- • денных телят завершался, к 10-12 дню жизни и характеризовался сравнительным постоянством количественных, и. качественных показателей. . У'здоровых телят не были обнаружены культуры, обладающие гемоли- ; тическими и патогенными свойствами, тогда, как от больных телят выделяли в высоких концентрациях антеропатогенную кишечную палочку, протей, цитро'бактер на, фоне полного отсутстеия или. дефицита

лакто- и бифидобактерий. ' '•

При изучении патогенных свойств на питательных средах были отмечены существенные различия патогенной и непатогенной Е.со И-; энтеропатогенные Е.со и (ЕТЕС) на 5$-ном кровяном агаре образовывали зону гемолиза, в основном преобладал В-гемолиз. На среде Эндо Е.со Ii были малинового цвета с характерным металлическим блеском. •

Таким образом, результаты клинических данных и бактериологических исследований свидетельствуют о более выраженной профилак- ' тической активности испытуемой вакцины по сравнению о коммерческими вакцинами.

• ВЫВОДЫ

1. Производственные штаммы микроорганизмов, используемых для получения ассоциированной инактивированной вакцины: В.coll (09«

К 9?f 038:К 88; 0119), P.rairabilieИ 26, P.vulgarie * 135, K.pneu- , moniae (Н 12t N 842), S.dublin H 1976, S.typbiaurium Я 226?, S. •nteritidie Я 1433 обладали адгезивными, токсигенными И'патогенн ныли.свойствами.

2. При двукратной иммунизации белых мышей ассоциированной инактивированной вакциной выявлена 100% профилактическая эффективность данного препарата при экспериментальной диареи, вызванной бактериями E.coli , P.mirabilie, К.pneumoniaeи 90$ в отношении S.dublin . При заражении лабораторных животных смесью вышеуказанных культур профилактическая эффективность экспериментальной вакцины составила - 90^.

3. Иммунизация глубокостельных коров ассоциированной инактив I вированной вакциной против колибактериозной, сальмонеллезной,

клебсиеллезной и протейной инфекции вызывает накопление специфических антител в сыворотке крови в достаточно высоких титрах против E.coli 6,70 ± 0,37(log2 ), Protaue > 7,66 ± 0,29(log2 ), Klebsiella 7,44 ±0,34( log2 ), Salmonella 8,11 - 0,3I(log2 '■) о сыворотке молозива титр антител в день отела составил 9,17 -0,3I( iog2), 9,50 ± 0,56(log2 ), 9,33 ± 0r33( log2), 9,33 ± 0Г61 ( log, ) соответственно. '

-4. Сочетанное однократное применение Экспериментальной вакцины с Т-активином приводит к такому же уровню образования специ-«фических антител, что и при двукратной иммунизации: Е.соц 6,22 ' ± 0,32( log/), Proteus 7,77 i 0,27( log2'), Klebsiella 8,00' ±'0,29( iog2 .), Salmonella '8,44 ± 0,I6( log2 ).

5. В сыворотке крови телят, полученных от коров, иммунизированных двукратно ассоциированной инактивированной вакциной через 24 часа после рождения уровень иммуноглобулинов было выше (Ю-1м; чем в остальных группах и составил ig G 23,65 - 4,14 мг/мл, Ig Ц 2,35 t 0,48 мг/мл; титр специфических антител к Е.со ц 5,00 -0,45( log2), Proteus 5,80 i 0,20(log2 ), Klebsiella 6,00-: 0,32( log2). Salmonella 5,80 - 0,20( i0g2 ).

6. Микрофлора желудочно-кишечного тракта,выделенная от ново-

• рожденных телят, полученных от коров,иммунизированных экспериментальной сакциной в течении всего периода исследований, характера валась низким содержанием условно-патогенных бактерий и высоким количеством лакто-- и бифидобактерий.

7. Иммунизация глубокостельных коров-за 1,5-2 месяца до оте ла экспериментальной вакциной против колибактериоза, сальмонелле-за,, клебсиеллеза и протейной инфекции,способствовала профилактике острых кишечных заболеваний новорожденных'животных. При этом сохранность телят в опытных группах составила - 90%, в контроль-

• ной группе телят, полученных от коров, иммунизированных коммерческими вакцинами против колибактериоза и сальмонеллеза - 60%.

СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ • .ИССЛЕДОВАНИЙ.

Ассоциированную инактивированную вакцину против колибактериоза, сальыонеллеза, клебсиеллеза и протейной инфекции молодняк; крупного рогатого скота, необходимо применять для иммунизации глубокостельных коров с целью профилактики диарей новороаденных телят. Вакцинацию животных следует проводить за 1,5-5 месяца до от ла двукратно, с интервалом 10 дней подкожно ■ дозе 7 ил или однократно в сочетании с Т-активинои из расчета 0,03 мл/кг.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

I. Исметуллова Ф.И. Микробный пейзаж здоровых телят и'с ос-5ыми кишечными болезнями // Актуальные вопросы инфекционных и ¡вазионных болезней животных: Сб.науч.тр./ Моск.вет.акад.им.К. Скрябина, 1993,- С.117-119.

'• 2. Исметуллова Ф.М. Изучение эффективности ассоциированной тктивированной вакцины против бактериальных кишечных инфекций I стельных коровах и их приплоде// Вопросы ветеринарной биоло-1и: Сб.науч.тр./Моск.вет.акад.им.К.И.Скрябина, 1993.- С.59-63.

3. Исметуллова Ф.М., Печникова Г.Н. Факторы гуморального «мунитета у коров и их приплода при иммунизации ассоциированной активированной вакциной против бактериальных кишечных инфек-1й// Вопросы ветеринарной биологии: Сб.науч.тр./ Моск.гет.акад. а, К.И.Скрябина, 1993.- С.63-57.

Ротапринт ьЯодп. В Зо.

ьгуо/уихТ 6ох9о,//& За я. 239 ОУ. {п. п.