Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Химио-специфические средства профилактики туберкулеза крупного рогатого скота

flu " ''

- 3 ШОП 1395

УЗБЕКСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ

НАУК

Ордена ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИ П ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРИИ им*?.* АКАДЕМИКА К. И. СКРЯБИНА

На правах оукописи

Л1А М А Д У Jl J1А Е 3 Гу-амурод Хгми:;пзич

УДК 619:636. 932.2 4-615.7

^ииио-сягцифаческие сргдстза профилактики туберкулеза крупного рогатого скота

16.00.03.—аетерпнар^дя мнкробколагня, вирусология, эпизоотология, МИКОЛОГИЯ и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени , кандидата, ветеринарных наук

Самарканд—1995 г.

Работа' выполнена » лаборатория туберкулеза Узбекского ордена. Трудового Красного Знамени научно-исследовательского ' института ветеринарии имени академика К. И. Скрябина и хозяйствах Самаркандской области.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ;

кандидат биологических наук НИ Г. В.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: '

Доктор ветеринарных наук,"профессор—М. П. ПАРМАНОВ. Доктор биологических наук —Р. У. БУЛХАНОВ.

-Ведущая организация — Самаркандски и Государственный медицинский институт имени Ф. ХОДЖЛЕВА.

Защита состоится « > 1995 г. в

на заседании специализиропаниого совета Д. 02G.37.2i - по защите диссертаций иа соискание ученой степени доктора иук при Узбекском научно-исследовательском »институте ветеринарии (704453, Самаркандская область, пос. Таил як, УэНИИВ). ■• ■

С диссертацией. можно ознакомиться в библиотеке института..

Автореферат разослан с -> 1995 г..

Ученый секретарь специализированного со^ доктор ветеринар»«

та».

ПУЛАТОВ Г. С.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Среди инфекционных болезней осо-бсз место занимает туберкулез, так как он причиняет значитель-шй экономический ущерб животноводству и представляет постоянную опасность для людей. Поэтому, проблема борьбы с туберкулезом всё ешё продолжает оставаться актуальной для ветеринарной науки и практики.

Эффективность борьбы с туберкулезом в значительной степени зависит от применения в практике более совершенных профилактических средств и методов, направленных на улучшение эпизоотической обстановки и ускорение оздоровления неблагополучных хозяйств от этой инфекции.

Значительная роль в осуществлении комплекса пр отив о туб ерку-лезшх мероприятия принадлежит профилактике заболевания,.поэтому на многих коордпнашот&ж совещаниях (Ct.'cic, 1988; Новочеркасск, 1989; Москва, 1992) неоднократно ставилась задача поиска надежных средств специфической профилактики туберкулеза животных.

Работы по созданию специфических средств профилактики туберкулеза начались на заре открытия возбудителя болезни Р.Кохсм (1682) и продолжатся до настоящего времени зарубезными и отечественными исследователями (AeCalastto и e-.Guarin, ig07-1923г Ю.Н,Вейсфейлер и др., 1942-1975; Т.ИДсзуллцина, 1954; G.Bucmc-miniy l^saato^adre, 1953; А.И.Тогунова и-Н.З.Куликова, 1931; Ь.Нозз1, 1974- и многие другие).

Все предложенные специфические средства профилактики туберкулеза оказались мало эффективными, если не считать вакпины БЩ, разработанную французскими учеными А.Кальметтом и С.Горе-ном (1923), которая применяется в.медицинской практике и частично для профилактики туберкулеза молодняка крупного рогатого скота.' Практически эта вакцина в животноводстве-себя не оправдала, хотя некоторые исследователи считают её сффективной (Х.Г.Гиза-туллин с соавт., 1979; М.А.Сафин, 1981, 1983; В.И.Пионтковский с соавт., 1982; Д.Д.Новак, 1984; Р.С.Сибгатуллия с соавт., 1985 и др.).

Создать эффективную иммуногеннуц противотуберкулезную вакцину для животных пока не удается.

В последние годы в нашей стране и зарубежом весьма широкое распространение в комплексе мер борьбы с туберкулезом получила химиопрофилактика (В.В.Андрущенко, 1962;.Д.Д.Новак, 1977;'А.Е. Ли, 1978; В.И.Ротов, 1982; Б.Я.Хайкин и др., .1985; М.Т.Исаков, 1986; Г.В.Ни и др., 1993 и др.). Однако и химиопрофилактика туберкулеза не дает ожидаемы* результатов.

Таким образок, проблема профилактики туберкулеза все ешё • не решена и работы по разработке новых и совершенствованию существующих средств и методов вакцино- и хкмиопрсфилактики туберкулеза, особёнко крупного рогатого скота, является актуальными для ветеринарной науки и практики.

. -Цель и задачи исследований. Исходя из вышеизложенного и в соответствии с планом НИР УзНИИВ целью настоящей работы было разработать более совершенные иммуногенный специфические препараты против туберкулеза животных всех возрастных групп.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задача:

1. Изучить сконструированный противотуберкулезный антиген-адьювант препарат СПХААП) в экспериментальных условиях, для чего:

- определить профизакяичеснув прививочную дозу. ПТААП на х>-5 ог^торных- яквотаах;

- определитьашедгногенность :1ШУШ для крупного рогатого скота с выяснением напряженности иммунитета, сроков появления и угасания аллергической реакции и её развитие в зависимости от доз вводимого ПДЦ-туберкулкна.

2. йсштат в производственных условиях метод химиопрофияак-тики тубергулезь крупнота рогатого скота с применением препарата против -туберкулеза животных СПШЕ), сконструированного в лаборатории по изучению туберкулеза УзШШ.

3. Разработать к передать в производства наставление по хишопрофилактике туберкулеза крупного рогатого скота .с применением ШПХ.

4. Провести в сравнительном аспекте производственные испытания ШД-туберхулина для "аллергической диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. .....

Научная -нови'рна. Впервые ¿конструирован и 'испытан в лабораторных условиях экологически чистай противотуберкулезный антиген-

адьювант препарат (ПТААП) и определена его оптимальная профилактическая доза для лабораторных животных при подкожном введении. В эксперименте на телятах установлено напряженность и продолжительность иммунитета при применении ПТААП. Установлено профилактическое действие сыворотки крови иммунизированного ПТААП крупного рогатого скота при экспериментальном заражении туберкулезом лабораторных животных. Доказано яйсокая эффективность в комплексе противотуберкулезных мероприятий метода химиопрофкяактики туберкулеза крупного рогатого скота с применением препарата против туберкулеза животных (ШЛЯ).

Практическая ценность работы. Противотуберкулезный антиген-адьювант препарат обладает достаточны;.! профилактическим эффектом 1 монет быть рекомендован производству в качестве нового спецк-1ического профилактического средства прот;^в туберкулеза яивотньк.

На основании результатов производственных испытаний разра-отано "Наставление по химкойрпфклактике туберкулеза крупного огатого скота с применением ШТН", рассмотренное и утвержденное ая применения в практике НТС МСХ Республики Узбекистан 21 мня 392 г. Внедрение данного метода позволило сократить до 9 меся-5в сроки оздоровления хозяйств, неблагополучных по туберкулезу >уянаго рогатого скота.

На .защиту., ввдрдмся.следующие. полоаеник:

1.Новый эффективный противотуберкулезный антигвн-адьпвант епарат (ПТААП) для специфической профилактики туберкулеза зотнкх.

2. Хикиопрофилактяка туберкулеза крупного рогатого скота 1рияенёнкем нового препарата ПШ2.

3. Усовершенствования методов аллергической диагностики ¡еркулёза лабораторных (кролики) и сельскохозяйственных гупный рогатый скот) животных.

Апробаций работы. Основные положения диссертации доложены цобрены: на 3-й Городской конференции молодых ученых (Самар*-д 1953); ка ветеринарной сезщш: НТС МСХ Республики Узбекис-(Ташкент 1532); на заседаниях Ученого Совета УэНИШ в 19303 гг.

Публикация. Основное содержаний диссертации опубликовано научных статьях. ■

исъем и структура писсептапии. Диссертация изложена на 142 страница;: машинописного текста к включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсужаение результатов исследований, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Работа иллюстрирована 12 таблицами и 2 рисун ками. Список литературы содержит 168 источника, в том числе на иностранных языках 53.

2. Материалы и методы исследований

Работа проводилась в лаборатории по изучению туберкулеза Узбекского научно-исследовательского института ветеринарии и е хозяйствах Республики Узбекистан, неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота в 1990-1993 гг. Тема диссертации являлась подразделом государственного плана научно-исследовательских работ по решению проблемы 18.3., задание 1.05. "Разработать и внедрить специфические средства профилактики и борьбы с туберкулезом сельскохозяйственных животных", номер государственной регистрации 01.92.0000269.

Для выполнения поставленной аадачи в своих исследованиях наш был использован новый противотуберкулезный антиген-адью-вант препарат (1ПААП), разработанный лабораторией по изучению туберкулеза Узбекского НИИВ. Экспериментальные исследования по определению огтимальной профилактической дозы препарата, изучению иммуногеньости ПТААП для профилактики туберкулеза крупного рогатого скота, возможности пассивной иммунизации лабораторных животных против туберкулеза были проведены на 24 телятах, 22 кроликах и 69 морских свинках.

Аллергические, серологические (РСК), патоморфологические и бактериологические исследования проводили в соответствии с действующи!/ "Наставлением по диагностике туберкулеза животных", утвержденным ГУВ МСХ СССР 25.02.1986 г. и рекомендациями по "Лабораторной диагностике туберкулеза животных", Омск, 1986 г. Для заражения "животных туберкулезом были использованы четыре штамма: два эталонных - Bovis-B'H Tfiliee и два эпизоотических штамма бычьего вида И? 109 и 149.

Состояние клеточного Иммунитета определяли тю методу М. Jondal et..al.(I972), N.F.Meudes at.al. (1975) при участии

таршего научного сотрудника лаборатории иммунологии и биотех-ологии Узбекского НИШ А.Т.Рахимова.

Бактерицидную активность сыворотки крови определяли нефе-ометрически по Н.В.Чумаченко, Д.А.Снегов:/ (1367) в модификации '.У.Булханова (1966), а лизоцимную активность по методу Трефен-а в модификации Л.В.Кузьминой и О.А.Смирновой (1966).

Патоморфологические к гистологические исследования проводить при участии сотрудников лаборатории патоморфологии УзНИИВ '.А.Исматовой и О.А.Дкураева.

Производственные испытания нового препарата для профилакти-:и туберкулеза животных (ШТН) проводили в двух хозяйствах Тай-:якского района Самаркандской области, неблагополучных по туберку-:езу крупного рогатого скота, на поголовье в 620 животных.

Для испытаний был использован ППШ, сконструированный в ла-оратории по изучении туберкулеза УгНИИВ, в ферме суспензии из ¡армокспейкых противотуберкулезных препаратов (тубазид-изониа-!ид, стрептомицина сульфат, этоний, тривит или тетравит). Препа->ат применялся в комплексе противотуберкулезных мероприятий сог-:асно действующей "Инструкции о мероприятиях по профилактике и шквидации туберкулеза животных", утвержденным ГУВ МСХ СССР 10. :1.19ёЬ г., как дополнительное средство на условно здоровом пого-ювье путем подкожного введения в дозе 5 мл на 100 кг живой мае-:ы животного, но не более 15 мл. Всего было проведено о иньекшй [первые 3 инъекции с интервалом 20 дней, а последующие с интерва-гом 30 дней).

Лабораторно-производственные исследования по изучению диаг-{остической ценности ПДЦ-туберкулина для млекопитающих в дозе 5000 ТЕ проводили согласно методики "Сравнительного производственного испытания ППД-туберкулина для млекопитающих в дозах [0000 и 5000 ТЕ при аллергической диагностике туберкулеза круп-юго рогатого скота", М., 1991 г. В опытах использовано 703 жи-зотных колхоза "Заравшан" Ургутского района Самаркандской облас-ги.

Статистическая обработка материалов научных исследований проводили по общепринятым методам в лаборатории экономики УзНКИВ :!а персональном компьютере ЕЕ-1840.

3. ."РЕЗУЛЬТАТЫ шащцовлшй

■ 3.1. Прсфилактиче скея эффективность противотуберкулезного .актиген-адьювант препарата СПТАА11) для животных

йксперкментальние исследования проводились на морских свинках, кроликах и телятах, лсторыы однократно подкожно вводился препарат в форме суспензии, содержащей в 1,0 ил 2 мг убитых микробных тел.

3.1.1. Опыты на морских свинках

В опытах ксподьэоезли 23-морские свинки живой массой 300400 г. Было создано 4 опытных группы по 5 животных; 5-я группа из 3-х животных служила контролем'.

В начале опыта всем опытным животным подкожно в область бедра был введен ЛТААП из расчета живой массы.

Через 20 дней после введения препарата по три животные из всех пяти групп были заражены трехкратной дозой вирулентной культуры микобактерий туберкулеза, а оставшиеся в каждой опытной группе по два животных заражались туберкулезом через два месяца после введения .ПХААП с целью изучения напряженности иммунитета.

Баблцлекия за подопытными животными показали, что на 18-й гг2ггь после введения ЛТААП при проведении туберкулинизаиии у всех .иммунизированных ответных отмечалась слабая аллергическая реакция в г;есте введения туберкулина в форме небольшой припухлости.

Через месяц после заражения положительная туберкулиновая : реакция отмечалась у всех подопытных животных и сохранялась до конца эксперимента в форме ..уплотнения подкожной клетчатки и сла-бовыракенной гиперемии на месте введения туберкулина. Реакция была более выражена у животных контрольной группы (разница в толщине коаной складки составляла З^ и).

Патоморфологические исследованияпроведенные через ?ри месяца после заражения, показали, что только у 3-х-животных I группы были обнаружены локальние изменения туберкулезного характера с индексом пораженности органов 0,3 %. У оставшихся двух животных каких-либо изменений туберкулезного характера во внутренних органах не обнаружено.

Во второй опытной группе изменения обнаружены только у двух животных. Они выражались в небольшом увеличении печени и налита-

rr (

ем в ней незначительного количества очатков соединительно-тканного характера размером в просяное зерно. У одного животного аналогичные изменения были установлены в селезенке. У двух морских свинок в месте заражения образовался инкапсулированный гной-, ный очажок диаметром 2-3 мм. Индекс яораиенности органов з среднем по группе составил 0,2 %.

В III и 1У группе заметных изменений туберкулезного характера не установлено. Лишь у отдельных животных в месте заражения имелись инкапсулированные гнойные очажки размером с просяное зерно.

В контрольной группе у веех животных был установлен развитой туберкулезный процесс, выражающийся в.поражении всех внутренних органов. •

Гистологические исследования легких, печени, селезенки, почек и лимфатических узлов выявили изменения туберкулезного характера только у 3-х животных I опытной группы и в контроле.

При проведении.бактериологических исследований культура микобактерий туберкулеза была-выделена лишь у трех.животных I опытной группы и в контроле.

Таким образом, проведенные исследования показали, что HTA/dl, введенный в дозе 0,02 - 0,03 мг на животное, обеспечивают достаточно напряженный иммунитет, и предохраняет морских свинок от заболевания при заражении их трехкратной дозой вирулентной культуры микобактерий туберкулеза.

3.1.2. Опыты на кроликах'

Опыты проведены на 19 кроликах породы 'шиншилла кивой массой 3,5-4,0 кг., разделенных на 5 групп (первые 4 группы по четыре животных-опытные, 5-я группа из трех кивотных-контроль).

Всем опытным кроликам в начале опыта подиояно з область 5едра был введен препарат ПТААП. Через 20 дней после введения трепарата все кролики опытных групп были, зара-зскы вирулентной сультурой МВТ бычьего вида в дозе 0,03 мг/кг.

Наблюдения за подопытными животными проводили в течение 3-х шспааз.

Одновременно с изучением профилактической эффективности ГГААП в данном опыте изучалась возможность применения ППД-тубер-улина для млекопитающих для аллергической диагностики туберку-еза у кроликов. Туберкулин вводили на наружную поверхность у

основания уха в дозе 250 ТЕ.

Проведенные исследования показали, что у кроликов как и у других видов животных интенсивность аллергической реакции на введение. ПЦЦ-туберкулина зависит от наличия в организме животных микобактерий туберкулеза. Если в начале опыта аллергическая реакция на туберкулин отсутствовала у животных всех 5 групп, то после введения IffiLiffi уже ка 18-й день была отмечена слабая реакция. После заражения кроликов туберкулезом аллергическая реакция усилилась, что наиболее ярко было выражено в контрольной группе. Полученные результаты позволяют сделать вывод, что метод внутри-колжой туберкулинизации вполне приемлим для аллергической диагностики туберкулеза у кроликов. Для этих целей можно использовать ШЩ-туберкулин для млекопитающих в дозе 250 ТЕ.

Серологические исследования, проводимие ежемесячно, показали, что после введения ПТААЛ комплементсвязываыцие антитела были обнаружены у одного животного 1У опытной, а в других группах реакция составляла 1-2 креста. После заражения интенсивность образования комплементсвязывающх антител увеличивается. Независимо от дозы ПГААП существенных различий между группами в РСК на повторное введение антигена не установлено, что является закономерным при туберкулезе.

Касаясь состояния системы Т- и B-лимфоцитов иммунитета следует отметать, что на введение ПТМП организм животных отвечал увеличением Т- и Б-лмяЬаштов. .Так у всех привитых кроликов в первый месяц уровень относительного числа Т-лимфоцитов увеличивался на 5-20 %t а абсолютное их количество возрастало на 254.0 %. По .В-лиыфацктам показатели соответственно составляли 7-14 и 44 %, причем существенных.различий в опытных группах по их уровню не установлено. Рост числа Т- и B-клеток продолжал увеличиваться и на 2-й и 3-й месяцы наблюдений, что повидимому обусловлено приобретенной устойчивостью организма привитых животных к заражению.

Совершенно другие результаты были получены у.животных контрольной группы. Здесь был отмечен не рост, а наоборот снижение к концу опыта более чем в два раза (Р<0,05) уровня Т-клеток, хот в первом месяце опыта и наблюдалось их некоторое увеличение. О'х'носительное и абсолютное число В-лтфоцитов за период наблюдений снизилось по сравнению с началом опыта на 10-20 %, что, на наш взгляд, связано с лрогрессироаанием инфекционного процесса

и угнетением защитных сил организма.

При патоморфологических исследованиях, проведенных в завершение эксперимента, у кроликов I группы только в легких были отмечены локальные, в виде точек, уплотненные образования серо-белого цвета, плотные на разрезе. У кроликов II опытной группы только в верхних дольках легких было выявлено по 1-2 мелких очажка в виде точек, плотных на разрезе. У животных III и 1У групп никаких изменений не установлено.

Изменения туберкулезного характера были отмечены у кроликов контрольной группы. Здесь легкие были сильно увеличены, диф-фузно поражены некротическими очагами с творожисто-казеознкм содержимым. На почках имелись многочисленные специфические туберкулезные очаги. Поясничные лимфатические узлы были увеличены в два раза, на поверхности имели пузыри с жидкостью размером 1,5-2,0 см.

При гистологических исследованиях изменения характерны® для туберкулеза отмечались только некоторых животных I опытной группе и в контроле.

При бактериологических исследованиях культура МБТ была выделена только у отдельных животных. I группы и в контроле.

Проведенные исследования показали, что ПТАДП, примененный на кроликах, обладают достаточными иммуногенными свойства?,та, эффективность которых обусловлена дозировкой вводимого препарата.

3.1.3. Опыты на телятах

Исследования по изучению профилактической эффективности ПТААП были проведены 24 телятах, разделенных ка 8 групп по три животных в каждой. Первые шесть, групп (опытные) прививались препаратом ПТААП, животные 7 и 8 групп служили контролем. В последующем все телята в разные сроки 'заражались вирулентной культурой МВТ в трехкратной дозе.

За весь период наблюдений после заражения у телят опытных групп признаков заболевания туберкулезом не установлено. В контроле признаки заболевания обнаруживались со второго месяца после заражения.

Изучение характера аллергических реакций на туберкулина показало, что у телят, привитых ПТААП до заражения она составля-

ла от 2,0 до 3,6 мм. После заражения интенсивность реакции^возрастала в среднем до 3,6 мм и сохранялась на зтом-уровне до-конца опыта. В контроле через месяц после заражения пояснительная реакция достигала 9,0 мм и также сохранялась до конца опыта.

У иммунизированных в область подгрудка (без заражения) животных аллергическая реакция, по нашим наблюдениям, сохраняется в течение 2,5 лет, причем интенсивность её обусловлена-кратность» введения препарата ПТДАП.'Так у двукратно иммунизированных телят сна была вкие чем у однократно привитых и-составляла в, среднем 2,5 мм.

Одновременно с аллергической пробой -проводились и -серологические исследования.-В.РСК было установлено, что после-введения-препарата ПОДШ синтеза антител в сыворотке крови иммунизированных животных не происходило. Их появлению способствовало лишь двукратное введение препарата, после чего они сохранялись в сыворотке крови в течение года. У зараженных, после введения ПТААП животных комплеыентсвязывакицие антитела обнаруживались с второго месяца. У контрольных животных они появились через два месяца после заражения и стабильно сохранялись до конца опыта. . .

Таким образом, как показали результаты исследований, прямой зависимости между аллергической и серологической (РСК) реакциями наш не установлено. Так на туберкулин, как правило, реагируют хотя и с некоторыми спадами-все животные, а -в -РСК кокплементсвя-зывдщие антитела обнаруживаются- не^всегда.

Изучение уровня Т- и В- систем иммунитета показало, что их показатели у принятых животных отличаются от таковых, установленных у здоровых животных, и в ченьпей мере от показателей больных. Так у иицушзированшх животных. (по сравнению с неиммушзирован-ными) относительное количество Т-лпмфоцитов увеличивалось на 20 а абсолютное на 13-40 Количество В-лгажроцитов возрастало соответственно ка 31,0 и 72 % (Р<0,05). Напряженность синтеза Т- и В-клеток в организме привитых животных сохраняется в течение 10 месяцев, чем, по-видимому, и объясняется устойчивость их к заражению туберкулезом .'Акалогичше результаты"'Ьыад получены и у животных, привитых ШШ1,'после йх' заражения. .Исю&гейие» являлось повдаещюе содержание" более чём" в "2 "раза' (Рё 0,05) ЙимфОЦйтов и соответственное уйёличбние в"2' раЗа (Р<0,05)'относительного и в З раза №<0,05)'¿5сояюгногч> «оятеа^'^ЩЩ.^ ч

В контроле у 'зкрайешак'йвотшх фоцитов увеличивалось "наб-ЗО а абсолютное на 7-40 В-лшфо-

циты возрастали соответственно на 22-46 у, и 40-73 Я (f-.0,05).

■ У трех интактных телят уровень Т- и В-лж.йоцитор s тсчета? всего опыта составлял 1,93 х -109/л и 0^63 х-Ю^/л, что характерно-для состава кро?и соответствующего'возраста.

•Исследования гуморальных факторов естественной'резистентности "показали, что'препарат ПТААП при ввс-денкп оказывают поло. зглтельное'Елиянйе на бактерицидную и лкзоцимчуг активность. Так"в•сравнении с контролем, у принятых ЛТЛАП телят, бактерицидная активность сыворотки крови в первые 4 месяца повышалась до -94 % ,(Р<0,05), а лизоцимная активность дс 32 % (Р<0,05); s контроле же при проявлении первых клинических признаков заболевания, бактерицидная активность снижается до 61,0 % (Р< 0,05), а лизацимная до 8,0 % СР<0,05).

Паталогоанатсмические и гистологические исследования показали, что изменения туберкулезного характера у псчеитых телят, зараженных дане через 6 месяцев, были установлены только у двух, животных в виде локальных очажков в отдельных лимфатических узлах, в то время как у контрольных телят при вскрытии была установлена генерализованная форма туберкулеза.

При бактериологических исследованиях культура микобактерий туберкулеза была выделена из'органов'всех животных контрольной группы. В опытных группах ШсЛе заражения культура КБТ была згн делена лишь у трех животных'-(у одного животного III группы в месте заражения и у двух животных 1У группы в отдельных органах).

Таким образом, исследования показали, что противотуберкулезный антиген-адьювант препарат (ПТААП) обладают июлуногешлсш . свойствами, создавая стабильный и устбйчй'зйй напряженный иммунитет на срок не менее 4-х ; месяцев..

3.2. Опыты по изучению возможности

.пассивной иммунизации •

Профилактическая эффективность сыворотки крови от привитых ИГААП животных была изучена на Морских свинках и кроликах.

Кровь для получения сывбрбтки бралась у бычка, двукратно привитого противотуберкулезным антиген-адьювант препаратом. Для контроля действия ПТААП у бычка в период взятия крови пр<5-водили аллергические и серологические исследования (PGK), котб-'"рое дали положительную реакцию. Приготовление '•¿¿ывороТ!<и 'йз полу-

ченной крови проводили общепринятыми методами.

Иммунную сыворотки подопытным животным вводили подкожно три раза с интервалом в 7 дней в дозе: морским свинкам по 1,0., а кроликам по 4,0 мл на животное. В последующем и морские свинки, и кролики были заражены вирулентной культурой микобактерий туберкулеза в дозе 0,03 мг/кг.

Наблюдения за подопытными животными показали, что признаков заражения туберкулезом б течение 3,5 месяцев после заражения у них не установлено.

Аллергические и серологические исследования, проведенные в этот период, у всех животных дали положительную реакцию.

При патологоакатомическом вскрытии у морских свинок изменения установлена только в.печени, которые характеризовались некоторым увеличением органа с наличием единичных мелкоточечных очажков беловатого цвета. На месте заражения имелись инкапсулированные гнойные очажки. Яндекс пораженности органов составлял 0,3

Гистологическими исследованиями специфических изменений, характерных.для туберкулеза, не было установлено.

3 бактериологических исследованиях проб органов морских свинок микобактерии туберкулеза не были выделены.

У кроликов видимые изменения были обнаружены только в легких: у двух животных в виде крупозного воспаления и у одного животного б форме 1-2-х мелких некротических очажков. При гистологических исследованиях изменения свойственные туберкулезу из обнаружены. Как к у морских свинок при бактериологически}: исследованиях культура МВТ практически не выделена. Лишь у кролика с некротическими очажками в легких была выделена из них культура МБТ.

В результаты проведенных исследований было установлено, что у морских свинок и кроликов, привитых сывороткой кров;"» животных, привитых ПТААП, после заражения туберкулезный процесс ке имеет места.

3.3. Производственные испытания препарата против туберкулеза животных СШТШ) для химиопрофилактики туберкулеза крупного рогатого скота

Работы проведены в колхозах им Улугбека и "Заравшан", в

которых в феврале 1991 г при диагностических исследованиях был установле. туберкулез крупного рогатого скота. Диагноз на туберкулез был подтвержден бактериологическими исследованиями убитых животных.

Для испытания разработанного нами препарата в комплексе оздоровительных противотуберкулезных мероприятий в качестве дополнительного средства была включена химиопрсфилактика молодняка крупного рогатого скота.

Применение препарата было осуществлено согласно разработанной схемы и предусматривало пятикратную инъекцию на поголовье в 620 животных. (

В результате проведенных работ после завершения полного цикла химиопрофилактнки в течение 180 дней выделение больных животных в обоих хозяйствах прекратилось, а к девятому месяцу после наложения карантина аллергические диагностические исследования оздораливаемого поголовье дважды подряд дали отрицательный результат.

Комиссионные исследования, проведенные в декабре 1991 года подтвердили оздоровление обоих хозяйств и с января 1922 года колхозы им Улугбека и "Запавшая" являются благополучными по туберкулезу крупного рогатого скота.

Таким образом, результаты производственных испытаний по--казали, что препарат против туберкулеза животных (ПГПЖ) надежно предохраняет животных от заболевания туберкулезом и обеспечивает сокращение сроков оздоровления неблагополучных хозяйств.

Полученные результаты являются обоснованием для гнедре-ния препарата против туберкулеза животных (ПШЕ) в ветеринарную практику напей республики.

3.4. Сравнительные производственные испытан!« ПДЦ-туберкулина для млекопитающих для аллергической диагностике туберкулеза крупного рогатого скота '>

Проведенные исследования осуществлялись с целью отработки оптимальной дозировки''ППД-туберкулина при аллергической диагностике туберкулеза'крупног'о-" рогатого" 'скота.

Исследования проводились "в:-два' этапа. На первом этапе в условиях лаборатории было установлено,•что диагностический

эффект ПДЦ-туберкулияа одинаков как в дозе 10000 ТЕ, так и в дозе 5000 ТЕ. Это позволило предположить, что при диагностических исследованиях дозу туберкулина можно уменьшать в два раза и довести её до 5000 ТЕ. Для. подтверждения данного положения в условиях хозяйства, неблагополучного по туберкулезу крупного рогатого скота при диагностических исследованиях в сравнительном аспеэте были испытаны дае дозы ППД-туберкулина: 10000 ТЕ и 5000 ТЕ.

Результата.испатаний показали, что диагностический эффект ППД-туберкулина как в дозе 5000 ТЕ, так и в дозе 10000 ТЕ был практически одинаков. Было установлено, что туберкулинопозитив-нуе кивотные не теряли свою реактивность на повторное введение аллергена в дозе 5С00 ТЕ. Кроме того, было выявлено, что в благополучны:-: хозяйствах ста доза далее более информативна, так как, в отлкчки от дозы в ЮСОО ТЕ, снижает возможность выявления неспеи:-.фкческих аллергических реакций.

Полученные результаты послужили основанием для снижения в два раса дозировки ПЦЦ-туберкулина при аллергической диагностике туберкулеза крупного рогатого скота.

4. зав оды.

1. Сконструированный антиген-адьввант препарат (ПТДАП) против туберкулеза животных обладает достаточным иммуног еншм свойством для зациты животных от заражения туберкулезом и не имеет аналогов.

2. Оптимальная профилактическая прививочная доза препарата для морских свинок составляет 0,02-0,03 мг икактквированной культуры микобактерий туберкулеза на I голову.

3. Оптимальная профилактическая прививочная доза препарат? для кроликов составляет 0,03 мг/кг инактивкровгниой культур;: микобактерий туберкулеза.

4. Оптимальная прививочная доза ПТААП для профилактике туберкулеза крупного рогатого скота составляет 10 ыг инактиви-рованной культуры МБТ в 5 мл суспензии на голову. Осложнение после прививки животных препаратом не наблюдается.

5. Аллергическая реакция у привитых телят появляются через I месяц и сохраняются в зависимости от места введения от 6 месяцев до 2,5 лет и разница в толщине кожной складки составляет в среднем 2,6 + 1,3 мм.

6. Синтез комплеменгсвязывающих антител в организме rrcv-витых животных происходит на 4-5 месяц после повторной иммунизации и сохраняется до 360 дней. При однократной иммунизации такие антитела образуется редко.

V. Развитие клеточного иммунитета у привитых телят по Т-- и В-лимфоцитам начинается с первого иесяца после прививки. У контрольных и в т.ч. зараженных после иммунизации животных число Т- и В-клеток.крози достоверно увеличивается (Р<0,05).

6. Бактерицидная и лизошмная активность у животных привитых ПТААП и зараженных после прививки, выше чем у контрольны:: и составляет 90-94 % по бактерицидной я 30-32 % лизоцимной активности, у контрольных соответственно 60-70 % и 8-12 Й.

9. Напряженность иммунитета у привитых ПТААП животных составляет не менее 4 месяцев.

10. При бактериологических исследованиях патаатериалов культура МВТ выделена из большинства органов контрольно эара- . женных (не привитых) животных, а от -привитых ПТААП лишь в отдельных лимфатических узлах некоторых животных.

11. Сыворотка крови от привитых ПТААП. животных обладает профилактическим эффектом против туберкулеза морских свинок и кроликов.

12. Применение ШЛИ по разработанному нами методу в хомп-' лексе с общими мероприятиями позволило оздоровить 2 неблагополучных по туберкулезу хозяйства в течение 9 месяцев.

13. Для аллергической диагностики туберкулеза крупного рогатого скота следуеть использовать ЕЦД-туберяулил для стекоаи-тащих в дозе 5000 ТЕ, вместо 10000 ТЕ.

14. ППД-тубернулин для млекопитающих можно использовать для аллергической диагностики туберкулеза кроликов.'

ПРАКШЧЕСКИЕ ПРдаОКБШЯ

1. Разработанный "Противотуберкулезный антиген-адьювант препарат - ПТААП" будет рекомендован для специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота.

2. Наставление для химиопрофилактики туберкулеза крупного рогатого скота с применением ШГШ, рассмотрено и утверждено Секшей ветеринарии Научно-технического совета МСХ Республики Узбекистан (21,05.1992). . '

О целью купирования туберкулезной инфекции и оздоровления хозяйств от туберкулеза рекомендуем применение препарат ШИК на условно здоровом поголовье в неблагополучных и угрожаемых фермах хозяйств после сдачи на убой всех реагирующих на туберкулин животных.

3. Для аллергической диагностики туберкулеза крупного рогатого скота на неблагополучных фермах хозяйств можно с успехом применять ПДЦ-туберкулин для млекопитающих в дозе 5000 ТЕ в 0,2 мл растворителе, вместо 10000 ТЕ, согласно "Методике сравнительного производственного испытания ППД-туберкулина для млекопитающих з дозах 10000 ТЕ и 5000 ТЕ при аллергической диагностике туберкулеза крупного рогатого скота", утвержденной 1УВ ЫСХ СССР (1991).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Г.Б.Ни, И.Т.Исаков, Ю.Юнусов, Г.Х.Мзмапуллаез Наставление по хилиопоофилактике туберкулеза крупного рогатого окота с применением ШГШ. - Ташкент, 1992. - 5 с.

2. М&мадуллаев Г.Х. Иммунсгенность инактивированной химической вакцины претив туберкулеза животных/'/ Тез. докл. С~й Городской конференции молодых ученых. - Самарканд, 1993.-С. 3.

3. Ни Г.Б., Исаков М.Т., Мамадуллаев Г.Х. Способ оздоровления хозяйств от туберкулеза крупного рогатого скота// Профилактика и меры борьбы с болезнями сельскохозяйственных животных. - Ташкент, 1993. - С. 51.

4. Ни Г.В., Исаков М.Т., Мамадуллаев Г.л. Противотуберкулезный антиген-адъювант Препарат (ШМП) в профилактике туберкулеза крупного рогатого скота//Сб. науч. работ УзНЙВИ, 1995. -С. 76.

"%рэм1?ллар туберкулезини махсус-кимёвк!;

всситалар ёрдамипа оляпки ол;:и" мявзуидаги дисссрташянинг кисг^ча матки

Диссертаиияда з^айвонлар туберкуле

зига Kapiü'H кратилган янги антиген-альювант препаратншг кммуногенлипши урганип, янги аим-ёэий воситалар ^уллаш ор-^али ^срамоллар туберкулезининг оллики олиш, ^оршлоллар туберкулезини аллергик услуб билан диагностика ь^клишда ППД-туберкулиннинг турли микдорларини цулл-эш ^амда цуён-ларда туберкулезни аллергик услубда ани-^лап буйича таирибалар- ' нинг натижалари ёритилган.

Аншртанииича, туберкулезга ijapmn актиген-адьпвант препарат иммуногенлик хусускятига зга. Мазкур препаратнинг эмлаш ми^дор^ денгиз чучкачалари учун 0,03 мг, ^уёнлар учун 0,03 мг/кг Еа «ptt-моллар учун 5 мл.-ни ташкил килди. Препарат билан змланган бус..:',-лар организмида аллергик сезувчанлкк пайдо булади. Комплекен-лш. бкриктирувчи антителолар фа^ат ккки карра змланган бузоклар vpü зардобида х,осил булади ва 360 кунгача са'уханади. Иммунокомпетент хужайраларнинг (Т- ва В-лиыфоцитлар) мшуюри ошади. Крн зардоби-нинг бактерицид (90-94 %) ва лиэоцим (30-32 %) фаоллкги кучаяди. Тажрибада мазкур препарат змланган корамоллар т^он зардобининг хам касалликкинг олдини олиш хусусиятига эга эканлиги аникландк. Ушб.у н^сн зардоби змланган Еа туберкулез к^узратувчилари юуктирилг^:; денгиз чучкачалари ва ^уёнларда касалланиш кузатилмади.

Иплаб чик^лган цорамоллар туберкулезини кимёвий йул билан олдини олиш усули самарали наткналар берди. Мазкур усул ёрдам;'-да туберкулез б.уйича носорлом 2 та ферма 9 ой давсмида сорлсм-лактирилди. Корамоллар туберкулезини кимёвий йул билан олдини олиш усули ишлаб чшуаршда корий этилди.

Кррамоллар туберкулезини аллергии усулда диагностика килиз-да ПЦЦ-туберкуликнинг 10000 ТЕ ва 5000 ТЕ кирорлари бир хил натижа берди. Еундан ташрри, сут змизувчи з^айвонлар учун мул-жалланган 1ЩЦ-туберкулин билан (250 ТЕ мицдсрда) 1$уёнлар туберкулезини аллергик усулда ани^аш мумнин.

сншсоаяЕстс m^.s w ржжетьша

: > ! : J ' - : : ' i

OS CSITPLB'S TUBERCULOSIS

i * : >

Resume

In the work there are given tUs naterials of testing the effectiveness of constructed "Antigen-adjuvant preparation against Tuberculosis - КЛАР", cheEicaprophylactio method of cattle's Tu-barcnlosis with ties usags of "Preparation against aninals Tuberculosis - РДДТ", the results' of U3age the different dose of РРЭ— tuberculin for naraaals during the allergic diagnosis of cattle's Tuberculosis end also the usage of tuberouliaiaation mathod oa rabbits.

It is determined, that JTAAP-preparatioa showed the sufficient iizmuaogenic quality, iho maxium prophylactic doss of preparation for seapiga is 0,02-0,03 ng/kg, for rabbits - 0,03 ¡ag/iig and ior cattle - j til of suspension per one head.

Ihs allergenic reaction on vaccinated calves laata frtaj 6 souths till 2,5 years. The production of coaplcacnt-linked anti-'-¡xLies in organise of vaccinated calvea taJces place, as a rule, .'л€сег the repeated iiKiuaization and reoaina for 360 days, 'ilia development of cell insanity (due to T- and B-iyspnocyias) bsgiba

thr. first laouth after issninisation. Bactericidal and iysozy-uic activity increase in ioaunised calves. НГДАР vaccinated cat-file's cersc possess the.prophylactic quality against Tuberculosis, Vaccinated by this aerua' seapiga and rabbits aeaonstrate ths &6n„~ fciiity during the inoculation by virulest culture of tuberculosis r.'j'c о b aete r iua.

Cbecicprophylactic preparation against aainal's Suberculoais (SLLS) serves for the reliable improvement of unfavourable points« By this aethod we fully improved 2 tuberculosis uafortunata faras ¿u.rin.2 the 9 conths.

Яае comparative trial of diagnostic effeefcivanoss of 5000 32 aad Х00С0 Щ doses of FPD-tuberculib for aacaals during the allergic dia,gnosis of cattlo'e Tuberculosis showed, that tfeeso tv/o do-ass practically gave the ввлхе rssulta. Besides, the possibility of allergic diagnosis of Tuberculosis on rabbits was determined by aeans' of the usage of FPD-tuberculin for иашаа1а in the dose of 250 Щ.

tkih